Name: Een Facile en efficiënte aanpak voor de productie van omkeerbare Disulfide Cross-linked micellen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-12-23T12:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 57 s
Description: Leer een eenvoudige methode voor de synthese van geneesmiddelgeladen disulfide-gekruiste micellen voor gerichte geneesmiddelafgifte in kankertherapie. Deze schaalbare aanpak maakt klinische toepassingen mogelijk.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De auteurs danken Mevrouw Alisha Knudson voor de redactionele hulp. Ze willen ook de financiële ondersteuning erkennen van de NIH/NCI (3R01CA115483, aan K.S.L.), de DoD PRMRP Award (W81XWH-13-1-0490, aan K.S.L.), de NIH/NCI (1R01CA199668, aan Y.L.), en de NIH/NICHD (1R01HD086195, aan Y.L.).

Ethiek statement: Vrouwelijke athymische naakt muizen (Nu / Nu-stam), 6-8 weken oud, werden gekocht en vervolgens oder pathogeen-vrije omstandigheden volgens de AAALAC richtlijnen en liet men acclimatiseren gedurende ten minste 4 dagen voorafgaand aan de experimenten. Alle dierlijke experimenten werden uitgevoerd in overeenstemming met de institutionele richtlijnen en volgens het protocol No. 07-13119 en No. 09-15584, door de Animal Gebruik en onderhoud Adviescommissie Administratieve aan de Universiteit van California, Davis goedgekeurd. 1. Synthese van TD PEG 5K Cys 4 -Ebes 8 -CA 8 <ol><li> In een rondbodemkolf, los MeO-PEG 5K -NH2 (2 g, 0,4 mmol) in 10-20 ml watervrij dimethylformamide (DMF) en te rusten op ijs. </li><li> In een glazen beker, los 3 equiv. van 1-hydroxy-6-chloor-benzotriazool (HOBt), 3 equiv. N, N &#39;-diisopropylcarbodiimide (DIC) en 3 equiv. van (Fmoc) 2 Lys-OH in watervrij DMF (10-15 ml). Roer voor 15-20 minuten op een magnetische roer plaat. </li><li> Voeg het mengsel aan de reactiekolf bevattende de MeO-PEG 5K -NH 2. Verwijder het ijsbad en nacht roeren van het reactiemengsel bij kamertemperatuur. </li><li> Bevestigt de voltooiing van de reactie met dunnelaagchromatografie (TLC) en test 16 17 Kaiser&#39;s (een gele kleur geeft de afwezigheid van vrije NH2). Precipitaat het polymere product 1 (MeO-PEG 5K Lys (NH-Fmoc) 2) Door toevoeging van ongeveer 200 ml ijskoude ether aan de reactiekolf. Scheid de geprecipiteerde polymeer via centrifugatie (6 min bij 6000 xg en 4 ° C). <ol><li> TLC voeren, ter plaatse van de monsters op silicagel beklede TLC-platen. Gebruik dichloormethaan / methanol (9: 1) als mobiele fase. Let op plekken onder een UV-lamp na het ontwikkelen van de TLC-platen. Men kan ook gebruik maken van ninhydrine kleuring reagens om amine plekken te visualiseren op een hete plaat. </li><li> voor Kai-test ser&#39;s, plaats een klein beetje van het monster in een glazen buisje met Kaiser&#39;s reagens. Verwarmen bij 100 ° C gedurende 5 minuten en zoek de kleurverandering (als de kleur van de oplossing geel blijft, dan is de reactie voltooid). </li></ol></li><li> Re-oplossen van het product in watervrij DMF (10-20 ml) en herhaal de neerslag en centrifugeren (zie stap 1.4). </li><li> Herhaal stap 1,5, en was daarna het polymeer neerslag driemaal met ijskoude ether. </li><li> Transfer van het polymeer neerslag 1 tot en met een schone reactie kolf en sluit de kolf met een hoog vacuüm bron om de resterende ether te verwijderen. </li><li> Bereiden en voeg ongeveer 20-30 ml 20% (v / v) 4-methylpiperidine in DMF polymeer intermediair 1. Roer tot volledige oplossing. Voer de reactie gedurende 3 uur. </li><li> TLC voeren 16 en test Kaiser&#39;s (een blauwe kleur, de aanwezigheid van vrije NH2) 17 (zie stap 1,4) aan de completio bevestigenn van de reactie. Als de reactie voltooid is, gaat de ether neerslaan, zoals genoemd voor product 1 (stappen 1.4-1.6). </li><li> Droog het polymere product 2 (MeO-PEG 5K -Lys (NH2) 2) onder een vacuüm. </li><li> Voer een ronde van (Fmoc) 2 Lys-OH-koppeling op tussenproduct 2 (stappen 1.1-1.7) om product 3 te genereren (MeO-PEG 5K -Lys (Lys (NH-Fmoc) 2) 2). De-bescherming (stappen 1,8-1,10) de Fmoc groepen (4, MeO-PEG 5K-Lys (Lys (NH 2) 2) 2) en koppel (stappen 1,1-1,7) de (Fmoc) Lys (Boc) -OH aan genereren van een derde vormer van dendritische polylysine (5, MeO-PEG 5k Lys-Lys 2 - ((Fmoc) Lys (Boc)) 4) getermineerd met vier Boc en Fmoc-groepen aan één uiteinde van de PEG-keten. </li><li> Het verkregen polymeer intermediair 5 een reactiekolf. in zoalseparate reactiekolf werd bereid 1: 1 (v / v) trifluorazijnzuur (TFA) in dichloormethaan (DCM). Voeg 15-20 ml van een 1: 1 TFA / DCM (v / v) mengsel het polymeer intermediair 5. Roer het mengsel tot het polymeer volledig is opgelost. Roer nog eens 3 uur. </li><li> TLC voeren 16 en test Kaiser&#39;s (een blauwe kleur, de aanwezigheid van vrije NH2) 17 (zie stap 1,4) aan de voltooiing van de reactie te bevestigen. Als de reactie is voltooid, verdampen de polymeer-in-TFA / DCM mengsel met lucht tot een viskeuze oplossing wordt verkregen. Ga verder met de ether neerslag, zoals genoemd voor product 1 (stappen 1,4-1,6). Droog het polymere product 6 (MeO-PEG 5k Lys-Lys 2 - ((Fmoc) Lys (NH 2)) 4) onder een vacuüm. </li><li> Transfer polymeertussenproduct 6 in een reactiekolf. Gebruik ongeveer 40 ml watervrij DMF dat 8 equiv. N.N -diisopropylethylamine (DIEA) het polymeer intermediair 6 lossen. In een glazen beker, los 12 equiv. HOBt, 12 equiv. DIC en 12 equiv. van (Fmoc) Cys (Trt) -OH in 20-25 ml watervrij DMF. Schud gedurende 10-15 min en voeg het reactiemengsel aan de reactiekolf bevattende 6. Voer de reactie &#39;s nachts. </li><li> Bevestig de voltooiing van de reactie met TLC 16 en test Kaiser&#39;s (zie stap 1.4, een gele kleur geeft de afwezigheid van vrije NH 2) 17. Als de reactie voltooid is, gaat de ether neerslaan, zoals genoemd voor product 1 (stap 1,4-1,6), te isoleren product 7 (MeO-PEG 5K-Lys-Lys 2 - ((Fmoc) Lys - ((Fmoc) Cys (Trt))) 4. </li><li> Uitvoeren Fmoc ontscherming op 7, zoals bepaald in stap 1,8, productgroep 8 te verkrijgen (5K PEG-Lys-Lys 2 - (Lys (NH2) - (Cys (NH2) (Trt))) 4). Stel (Fmoc) -PEG 2 -Suc-OH ( &quot;Ebes&quot; linker, 24 equiv.) Op een polymeer intermediair met de bovenstaande procedure voor HOBt / DIC-gemedieerde koppeling aan tussenproduct 9 (MeO-PEG 5K-Lys-Lys-Lys 2 4 verkrijgen - (Cys (Trt) ) 4 (Ebes (NH-Fmoc)) 8). </li><li> Voer nog een ronde van Fmoc de-bescherming (stappen 1,6-1,8) tot gemiddeld 10 te krijgen (MeO-PEG 5K Lys-Lys 2 Lys 4 - (Cys (Trt)) 4 (Ebes (NH 2)) 8). </li><li> Breng het polymeer intermediair 10 in een reactiekolf en voeg watervrij DMF (ongeveer 30-40 ml) te ontbinden. In een andere reactiekolf werd los 24 equiv. van CAOSu (bereid volgens de eerder gepubliceerde werkwijze) in watervrij DMF (20-30 ml) 18. Voeg 48 equiv. N, N-diisopropylethylamine en laat roeren gedurende 10-15 min. Breng de inhoud in de reactiekolf met 10 en laat de reactie run overnight. </li><li> Bevestigt de voltooiing van de reactie met TLC 16 en test Kaiser&#39;s (zie stap 1,4, een gele kleur geeft de afwezigheid van vrije NH2) 17. Als de reactie voltooid is, gaat de ether neerslaan, zoals genoemd voor product 1 (stappen 1.4-1.6) om product 11 te isoleren (MeO-PEG 5K-Lys-Lys-Lys 2 4 - (Cys (Trt)) 4 -Ebes 8 -CA 8). Dialyseren in gedeïoniseerd water en lyofiliseren van het monster om een ​​wit poeder. </li><li> Plaats het polymeer intermediair 11 in een reactiekolf. Bereiden en voeg 20 ml van TFA / 1,2-ethaandithiol (EDT) / triethylsilaan (TIS) / H2O (94 / 2,5 / 1 / 2,5, v / v) mengsel in de polymeeroplossing. Roer het mengsel tot volledige oplossing. Voer de reactie gedurende 4 uur. Bevestigt de voltooiing van de reactie door TLC 16. </li><li> Onder de zuurkast, blazen lucht in de polymeer-TFA / EDT / TIS / H 2O mengsel tot de oplossing viskeus. Overgaan tot het neerslaan ether, zoals genoemd voor product 1 (stappen 1.4-1.6), hetgeen het eindproduct, 12 (PEG 5K -Cvs 4 -Ebes 8 -CA 8) te isoleren. Oplossen in acetonitril en lyofiliseren aan een wit poeder werd verkregen. </li></ol> 2. Bereiding van PTX-beladen micellen <ol><li> Bereid een PTX-geladen PEG 5K Cys 4 -Ebes 8 -CA 8 micellen met behulp van de standaard verdamping methode. <ol><li> Los op 20 mg TD met een verschillende hoeveelheid PTX (1-9 mg) in 1 ml chloroform (CHCl3). Verwijder het oplosmiddel met een rotatieverdamper tot een homogene droge polymeerfilm verkregen. Reconstitueer de film met 1 ml fosfaat-gebufferde zoutoplossing (PBS) met vortex, gevolgd door sonicatie gedurende 30 minuten bij 40 kHz, indien nodig, de vorming van met geneesmiddel beladen micellen mogelijk. </li><li> Voeg 6 pl 3% (w / w) H 2 O 2 (1 equiv. Tot vree de thiolgroepen) aan de thiolgroepen oxideren op de TD. Gebruik de miceloplossing voor verdere karakterisering zodra het gehalte aan vrije thiolgroepen tegen constante lage waarde blijft, zoals blijkt uit onderzoek van Ellman 19. </li><li> Filtreer de oplossing door een 0,22 urn filter om het monster te steriliseren. Analyseer de hoeveelheid geneesmiddel beladen micellen in een HPLC systeem 20 na het loslaten van geneesmiddelen uit de micellen door het toevoegen van 9 maal acetonitril en uitvoeren 10 min sonicatie. Gebruik een C18 HPLC kolom met acetonitril / water als de mobiele fase. </li><li> Bereken de geneesmiddelbelading volgens de kalibratiecurve tussen de HPLC-oppervlakteverhouding waarden en de concentraties van het geneesmiddel 11 standaard. OPMERKING: De beladingsrendement wordt gedefinieerd als de verhouding van geneesmiddel geladen in de micellen de oorspronkelijke geneesmiddelgehalte. </li></ol></li></ol> 3. Karakteriseringen van micellen <ol><li> Meet de grootte en grootteverdeling van de micelles met een dynamische lichtverstrooiing (DLS) instrument 29. Voer de metingen bij kamertemperatuur en houd de micel concentratie 1 mg / ml. OPMERKING: Om de deeltjesgrootte analyses uit te voeren, gebruik PBS als blanco, en vervolgens de deeltjesgrootte vast te leggen voor de werkelijke monsters. Neem de metingen in drievoud voor monsters, en dan het gemiddelde van de metingen. </li><li> Gebruik fluorescentiespectra de kritische micellaire concentratie (CMC) van PEG 5K Cys 4 -Ebes 8 -CA 8 meten voor en na het vernetten met pyreen als hydrofobe fluorescente probe, zoals eerder beschreven 13,21. OPMERKING: Gewoonlijk is de micel concentratie varieert van 5 x 10 -7 tot 5 x 10 -4 M </li></ol> 4. Stabiliteit van micellen in SDS met of zonder reductiemiddelen <ol><li> Bereid voorraadoplossingen van natriumdodecylsulfaat (SDS) oplossing (7,5 mg / ml) en disulfide verknoopte micellen (1,5 mg / ml) in PBS. Vervolgens, uzingen voorraadoplossingen, maak een oplossing mengsel waarin de uiteindelijke concentratie SDS bij 2,5 mg / ml en de micel concentratie van 1,0 mg / ml. </li><li> Meet de grootte en grootteverdeling (zoals vermeld in stap 3,1) van de micellen op vooraf bepaalde tijdsintervallen met of zonder de aanwezigheid van 10 mM glutathion (GSH). </li></ol> 5. Hemolyse Assay <ol><li> Evalueer de hemolytische potentieel van PTX-geladen, niet-verknoopte micellen (PTX-NCMS) bereid volgens eerder gepubliceerde werkwijze 11 en PTX-geladen verknoopte micellen (PTX-DCM) met verse gecitreerd bloed van naakt muizen verzameld uit de staart sluier. <ol><li> Verzamelen rode bloedcellen door centrifugeren bloedmonster (1,0 ml) bij 1000 g gedurende 10 minuten, wassen driemaal met PBS, en daarna resuspendeer de celpellets met PBS tot een eindconcentratie van 2%. </li></ol></li><li> Meng 200 pl erythrocytensuspensie met verschillende concentraties (0,2 en 1,0mg / ml) van PTX-NCMS en PTX-DCM, respectievelijk, en incubeer gedurende 4 uur bij 37 ° C in een incubator shaker. </li><li> Centrifugeer de micel-erytrocyt mengsels bij 3000 xg gedurende 5 minuten. Breng 100 pi van het supernatant van alle monsters op een 96-wells plaat. Meet de absorptie van vrij hemoglobine in het supernatant bij 540 nm onder toepassing van een microplaat reader. OPMERKING: RBC geïncubeerd met Triton-100 (2%) en PBS worden gebruikt als positieve en negatieve controles, respectievelijk. Het percentage hemolyse van de rode bloedcellen wordt berekend met de volgende formule: RBC hemolyse = (OD monster - OD negatieve controle) / (OD positieve controle - OD negatieve controle) x 100%. </li></ol>

<ol><li>Zhang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanoparticles+in+medicine%3A+therapeutic+applications+and+developments%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Pharmacol.+Ther%22%5BJournal%5D)">Nanoparticles in medicine: therapeutic applications and developments.</a> Clin. Pharmacol. Ther. 83, 761-769 (2008).</li>
<li>Wang, A. Z., Langer, R., Farokhzad, O. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanoparticle+Delivery+of+Cancer+Drugs%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Med%22%5BJournal%5D)">Nanoparticle Delivery of Cancer Drugs.</a> Annu. Rev. Med. 63, 185-198 (2012).</li>
<li>Iyer, A. K., Khaled, G., Fang, J., Maeda, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exploiting+the+enhanced+permeability+and+retention+effect+for+tumor+targeting%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Disc.+Today+Targets%22%5BJournal%5D)">Exploiting the enhanced permeability and retention effect for tumor targeting.</a> Drug Disc. Today Targets. 11, 812-818 (2006).</li>
<li>Morachis, J. M., Mahmoud, E. A., Almutairi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physical+and+chemical+strategies+for+therapeutic+delivery+by+using+polymeric+nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol.+Rev%22%5BJournal%5D)">Physical and chemical strategies for therapeutic delivery by using polymeric nanoparticles.</a> Pharmacol. Rev. 64, 505-519 (2012).</li>
<li>Kamaly, N., Xiao, Z., Valencia, P. M., Radovic-Moreno, A. F., Farokhzad, O. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+polymeric+therapeutic+nanoparticles%3A+design%2C+development+and+clinical+translation%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Soc.+Rev%22%5BJournal%5D)">Targeted polymeric therapeutic nanoparticles: design, development and clinical translation.</a> Chem. Soc. Rev. 41, 2971-3010 (2012).</li>
<li>Li, Y. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reversibly+stabilized+multifunctional+dextran+nanoparticles+efficiently+deliver+doxorubicin+into+the+nuclei+of+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Angew.+Chem.+Int.+Ed.+Engl%22%5BJournal%5D)">Reversibly stabilized multifunctional dextran nanoparticles efficiently deliver doxorubicin into the nuclei of cancer cells.</a> Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 48, 9914-9918 (2009).</li>
<li>Miyata, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Block+catiomer+polyplexes+with+regulated+densities+of+charge+and+disulfide+cross-linking+directed+to+enhance+gene+expression%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Chem.+Soc%22%5BJournal%5D)">Block catiomer polyplexes with regulated densities of charge and disulfide cross-linking directed to enhance gene expression.</a> J. Am. Chem. Soc. 126, 2355-2361 (2004).</li>
<li>Chan, Y., Wong, T., Byrne, F., Kavallaris, M., Bulmus, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acid-labile+core+cross-linked+micelles+for+pH-triggered+release+of+antitumor+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22Biomacromolecules%22%5BJournal%5D)">Acid-labile core cross-linked micelles for pH-triggered release of antitumor drugs.</a> Biomacromolecules. 9, 1826-1836 (2008).</li>
<li>Rijcken, C. J., Snel, C. J., Schiffelers, R. M., van Nostrum, C. F., Hennink, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydrolysable+core-crosslinked+thermosensitive+polymeric+micelles%3A+synthesis%2C+characterisation+and+in+vivo+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Hydrolysable core-crosslinked thermosensitive polymeric micelles: synthesis, characterisation and in vivo studies.</a> Biomaterials. 28, 5581-5593 (2007).</li>
<li>Talelli, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Core-crosslinked+polymeric+micelles+with+controlled+release+of+covalently+entrapped+doxorubicin%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Core-crosslinked polymeric micelles with controlled release of covalently entrapped doxorubicin.</a> Biomaterials. 31, 7797-7804 (2010).</li>
<li>Xiao, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+self-assembling+nanoparticle+for+paclitaxel+delivery+in+ovarian+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">A self-assembling nanoparticle for paclitaxel delivery in ovarian cancer.</a> Biomaterials. 30, 6006-6016 (2009).</li>
<li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+size-tunable+nanocarrier+system+for+targeted+anticancer+drug+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Control.+Release%22%5BJournal%5D)">A novel size-tunable nanocarrier system for targeted anticancer drug delivery.</a> J. Control. Release. 144, 314-323 (2010).</li>
<li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Well-defined%2C+reversible+disulfide+cross-linked+micelles+for+on-demand+paclitaxel+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Well-defined, reversible disulfide cross-linked micelles for on-demand paclitaxel delivery.</a> Biomaterials. 32, 6633-6645 (2011).</li>
<li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Well-defined%2C+reversible+boronate+crosslinked+nanocarriers+for+targeted+drug+delivery+in+response+to+acidic+pH+values+and+cis-diols%5BTitle%5D)+AND+%22Angew.+Chem.+Int.+Ed.+Engl%22%5BJournal%5D)">Well-defined, reversible boronate crosslinked nanocarriers for targeted drug delivery in response to acidic pH values and cis-diols.</a> Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 51, 2864-2869 (2012).</li>
<li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+smart+and+versatile+theranostic+nanomedicine+platform+based+on+nanoporphyrin%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Commun%22%5BJournal%5D)">A smart and versatile theranostic nanomedicine platform based on nanoporphyrin.</a> Nat. Commun. 5, (2014).</li>
<li>Belenki, B. G., Gankina, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thin-Layer+chromatography+of+polymers%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr.+A%22%5BJournal%5D)">Thin-Layer chromatography of polymers.</a> J. Chromatogr. A. 141, 13-90 (1977).</li>
<li>Kaiser, E., Colescott, R. L., Bossinger, C. D., Cook, P. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Color+test+for+detection+of+free+terminal+amino+groups+in+the+solid-phase+synthesis+of+peptides%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Biochem%22%5BJournal%5D)">Color test for detection of free terminal amino groups in the solid-phase synthesis of peptides.</a> Anal. Biochem. 34, 595-598 (1970).</li>
<li>Pandey, P. S., Rai, R., Singh, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthesis+of+cholic+acid-based+molecular+receptors%3A+head-to-head+cholaphanes%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chem.+Soc.%2C+Perkin+Trans+1%22%5BJournal%5D)">Synthesis of cholic acid-based molecular receptors: head-to-head cholaphanes.</a> J. Chem. Soc., Perkin Trans 1. , 918-923 (2002).</li>
<li>Riddles, P. W., Blakeley, R. L., Zerner, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reassessment+of+Ellman%27s+reagent%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Enzymol%22%5BJournal%5D)">Reassessment of Ellman's reagent.</a> Methods Enzymol. 91, 49-60 (1983).</li>
<li>Ahuja, S., Rasmussen, H. Overview of HPLC method development for pharmaceuticals. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAhuja%2C+S+%22HPLC+Method+Development+for+Pharmaceuticals%22">HPLC Method Development for Pharmaceuticals</a>. , Separation Science and Technology; 8. Elsevier Academic Press Inc. 1-11 (2007).</li>
<li>Li, Y., Pan, S., Zhang, W., Du, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+thermo-sensitive+core-shell+nanoparticles+for+targeted+paclitaxel+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Nanotechnology%22%5BJournal%5D)">Novel thermo-sensitive core-shell nanoparticles for targeted paclitaxel delivery.</a> Nanotechnology. 20 (6), 065104(2009).</li>
<li>Kato, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disulfide+cross-linked+micelles+for+the+targeted+delivery+of+vincristine+to+B-cell+lymphoma%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Pharm%22%5BJournal%5D)">Disulfide cross-linked micelles for the targeted delivery of vincristine to B-cell lymphoma.</a> Mol. Pharm. 9, 1727-1735 (2012).</li>
<li>Lu, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+glutathione+synthesis%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Aspects+Med%22%5BJournal%5D)">Regulation of glutathione synthesis.</a> Mol. Aspects Med. 30, 42-59 (2009).</li>
<li>Xiao, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%22OA02%22+peptide+facilitates+the+precise+targeting+of+paclitaxel-loaded+micellar+nanoparticles+to+ovarian+cancer+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">"OA02" peptide facilitates the precise targeting of paclitaxel-loaded micellar nanoparticles to ovarian cancer in vivo.</a> Cancer Res. 72, 2100-2110 (2012).</li>
<li>Koo, A. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disulfide-cross-linked+PEG-poly%28amino+acid%29s+copolymer+micelles+for+glutathione-mediated+intracellular+drug+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Commun%22%5BJournal%5D)">Disulfide-cross-linked PEG-poly(amino acid)s copolymer micelles for glutathione-mediated intracellular drug delivery.</a> Chem. Commun. 28, 6570-6572 (2008).</li>
<li>McLellan, L. I., Wolf, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glutathione+and+glutathione-dependent+enzymes+in+cancer+drug+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Drug.+Resist.+Update%22%5BJournal%5D)">Glutathione and glutathione-dependent enzymes in cancer drug resistance.</a> Drug. Resist. Update. 2, 153-164 (1999).</li>
<li>Karala, A. R., Lappi, A. K., Saaranen, M. J., Ruddock, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+peroxide-mediated+oxidative+refolding+of+a+protein+at+physiological+pH+and+implications+for+oxidative+folding+in+the+endoplasmic+reticulum%5BTitle%5D)+AND+%22Antioxid.+Redox+Signal%22%5BJournal%5D)">Efficient peroxide-mediated oxidative refolding of a protein at physiological pH and implications for oxidative folding in the endoplasmic reticulum.</a> Antioxid. Redox Signal. 11, 963-970 (2009).</li>
<li>Gabizon, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+nanomedicines%3A+closing+the+translational+gap%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Cancer nanomedicines: closing the translational gap.</a> Lancet. 384, 2175-2176 (2014).</li>
<li>Nanotrac Nanotechnology Particle Size Measurement Solutions. , Available from:
 <a target="_blank" href="http://www.vahitech.com/Assets/Nano(US)Web.pdf">http://www.vahitech.com/Assets/Nano(US)Web.pdf</a> (2006).</li>
</ol>

Y. Li en K.S.L. zijn de uitvinders van een in afwachting zijnde octrooi op omkeerbaar gekruiste micelssystemen (VS octroopaanvraag 61/485.774). K.S.L. is de oprichtende wetenschapper van LamnoTherapeutics Inc., dat van plan is de in het manuscript beschreven nanotherapeutica te ontwikkelen. De overige auteurs verklaren geen concurrerende financiële belangen te hebben.

Verscheidene nanodeeltjes zijn onderzocht op hun mogelijke toepassing in geneesmiddelafgifte. Liposomaal doxorubicine en paclitaxel (PTX) -geladen humaan serumalbumine nano-aggregaten van de door de FDA goedgekeurd voor de behandeling van kanker nanotherapeutics. Hoewel klinisch effectieve, beide nanotherapeutics relatief &quot;grote&quot; groot en ze hopen zich in de lever en longen. Polymere micellen met relatief kleinere deeltjes en hogere drug laadcapaciteit zijn in opkomst nanocarriers voor drug delivery. Hun uniek...

Nanotechnologie is een snel opkomende gebied dat een aantal biomedische gebieden 1 heeft geprofiteerd. Nanodeeltjes mogelijkheden voor het ontwerpen en afstemmen eigenschappen die niet haalbaar zijn met andere soorten conventionele therapeutica. Nano-carriers verbeteren van de stabiliteit van geneesmiddelen tegen biologische afbraak, te verlengen drug circulatie tijd, oplosbaarheid drugsproblematiek te overwinnen, en kan verfijnd voor gerichte toediening van geneesmiddelen en voor co-leveren imaging agenten 1,2 zijn. Nanodeeltjes gebaseerde afgiftesystemen houden belofte in kanker beeldvorming en behandeling. Tumor vasculatures zijn lekkende macromoleculen en kan leiden tot preferentiële ophoping van circulerende nanodeeltjes op tumorplaatsen via de verhoogde permeabiliteit en retentie (EPR) effect 3. Onder de verschillende nano-dragers (bijvoorbeeld liposomen, hydrogels, en polymere micellen) dat actief als dragers voor anti-kanker medicijnen worden nagestreefd, hebben polymere micellen opgedaan grote populariteit in the afgelopen tien jaar 4,5. Polymere micellen een thermodynamisch systeem, op intraveneuze toediening, kan mogelijk worden onder de kritische micel concentratie (CMC) verdund, wat leidt tot de dissociatie in unimers. Verknoping strategieën zijn toegepast om dissociatie in micellaire unimers minimaliseren. Echter overmatig gestabiliseerd micellen voorkomen dat het geneesmiddel uit los op de doelwitplaatsen, waardoor de totale therapeutische werkzaamheid verminderen. Verschillende chemische middelen zijn beproefd om de verknoping afbreekbaar reactie op redox of externe stimuli, zoals reduceerbare disulfidebindingen 6,7 en pH-splitsbare 8 of hydrolyseerbare esterbindingen 9,10. We hebben eerder gemeld het ontwerpen en synthetiseren van micellaire nanopartikels bestaande uit dendritische cholinezuur (CA) blokken en lineair polyethyleen glycol (PEG) copolymeren, hierna telodendrimers (TD) 11-15 </sup&gt;. Deze TD worden weergegeven als PEG nK -CAy (waarbij n = molecuulgewicht in kilodalton (K), y = aantal cholinezuur (CA) eenheden). Ze worden gekenmerkt door hun geringe omvang, lange houdbaarheid en een hoge efficiëntie inkapselen geneesmiddelen zoals paclitaxel (PTX) en doxorubicine (DOX) bij de hydrofobe kern. De bouwstenen van TD, zoals PEG, lysine en CA, biocompatibel, en de aanwezigheid van een corona PEG kan een &quot;stealth&quot; nanodeeltjes karakter geven, dat niet-specifieke opname van micellaire nanopartikels door het reticulo-endotheliale systeem. Gethioleerde lineaire dendritische polymeren kunnen gemakkelijk worden gegenereerd door het introduceren van cysteïnen in de dendritische oligo-lysine ruggengraat van onze standaard TDS. Dit artikel een gemakkelijke protocol voor de productie van een omkeerbaar verknoopt micellaire geneesmiddelafgiftesysteem door de invoering disulfide verknopingen in de hydrofobe kern van TD (figuur 1).

<table><tbody><tr><td>MeO-PEG5K-NH2</td><td>Rapp Polymere</td><td>125000-2</td><td></td></tr><tr><td>Fmoc-Lys(Fmoc)-OH</td><td>Aaptec</td><td>AFK107</td><td></td></tr><tr><td>Fmoc-Lys(Boc)-OH</td><td>Anaspec</td><td>AS-20132</td><td></td></tr><tr><td>Fmoc-Cys(Trt)-OH</td><td>Aapptec</td><td>AAC105</td><td></td></tr><tr><td>Dimethylformamide</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP1160-4</td><td></td></tr><tr><td>Ethyl ether</td><td>Fisher Scientific</td><td>E134-20</td><td></td></tr><tr><td>N,N-Diisopropylethylamine</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D125806</td><td></td></tr><tr><td>Trifluoroacetic acid</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T6508</td><td>Corrosie, voorzichtig hanteren</td></tr><tr><td>4-methyl piperidine</td><td>Alfa-Aesar</td><td>L-02709</td><td></td></tr><tr><td>Ebes linker</td><td>Anaspec</td><td>AS-61924</td><td></td></tr><tr><td>Cholic acid</td><td>Sigma Aldrich</td><td>C1129</td><td></td></tr><tr><td>1,2-Ethanedithiol</td><td>Sigma Aldrich</td><td>02390</td><td>Gebruik binnen de afzuigkap. Handschoenen bleken na gebruik.</td></tr><tr><td>Triisopropylsilane</td><td>Sigma Aldrich</td><td>233781</td><td></td></tr><tr><td>Chloroform (anhydrous)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>288306</td><td></td></tr><tr><td>Hydrogen peroxide solution 30%</td><td>Aaron Industries</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>HoBt-Cl</td><td>Aaptec</td><td>CXZ096</td><td></td></tr><tr><td>DIC</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D125407</td><td></td></tr><tr><td>Female athymic nude mice (Nu/Nu strain), 6&ndash;8 weeks age</td><td>Harlan (Livermore, CA)</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

een facile en efficiënte aanpak voor de productie van omkeerbare disulfide cross-linked micellen

A Facile and Efficient Approach for the Production of Reversible Disulfide Cross-linked Micelles

Nanogeneeskunde is een nieuwe vorm van therapie die de unieke eigenschappen van deeltjes die nanometer schaal voor biomedische toepassingen benut. Verbetering van de drug delivery om therapeutische resultaten te maximaliseren en drugs geassocieerde bijwerkingen te verminderen zijn enkele van de hoekstenen van het huidige nanomedicine. Nanodeeltjes in het bijzonder hebben een brede toepassing in de behandeling van kanker gevonden. Nanodeeltjes die een hoge mate van flexibiliteit in het ontwerp, toepassing en productie op basis van de tumor micro bieden worden geprojecteerd effectiever met snelle vertaling in de klinische praktijk. Het polymere micellaire nano-carrier is een populaire keuze voor drug delivery applicaties. In dit artikel beschrijven we een eenvoudig en doeltreffend protocol voor het synthetiseren van met geneesmiddel beladen, disulfide verknoopte micellen basis van de zelf-assemblage van een welomschreven amfifiele dendritische lineair copolymeer (telodendrimer, TD). TD is samengesteld uit polyethyleen glycol (PEG) als hydrofiel segment en een gethioleerde cholinezuur cluster als kernvormende hydrofoob deel verbonden stapsgewijs een met amine beëindigd middels PEG-oplossing op basis peptidechemie. Geneesmiddelen voor chemotherapie, zoals paclitaxel (PTX), kunnen worden geladen met een standaard werkwijze met oplosmiddelverdamping. De O 2 gemedieerde oxidatie werd eerder gebruikt om intra-micellaire disulfide cross-links van vrije thiol groepen op de TD&#39;s te vormen. De reactie was traag en niet haalbaar voor grootschalige productie. Onlangs werd een H 2 O 2 bemiddelde oxidatiewerkwijze onderzocht als een meer haalbare en efficiënte aanpak en het was 96 keer sneller dan de eerder beschreven methode. Met deze benadering hebben 50 g PTX-loaded, disulfide verknoopte nanodeeltjes met succes geproduceerd met een smalle deeltjesgrootteverdeling en geneesmiddelbelading hoge efficiency. De stabiliteit van de verkregen miceloplossing wordt geanalyseerd met verstoren aandoeningen zoals co-incubatie wet een detergens natriumdodecylsulfaat, met of zonder een reductiemiddel. De met geneesmiddel beladen, disulfide verknoopte micellen toonde dat de hemolytische activiteit in vergelijking met hun niet-verknoopt tegenhangers.

Bereiding en karakterisering van met geneesmiddel beladen, Disulfide Cross-linked micellen Amfifiele polymeer PEG 5K Cys 4 -Ebes 8 -CA 8 is een dendritisch polymeer staat tot het vormen van een disulfide verknoopte micellaire voor kanker geneesmiddelafgifte. Structureel wordt gedefinieerd als een dendritische oligomeer van choline zuren (hydrofoob domein) gekoppeld aan een uiteinde van de lineaire P...

Om kankermedicijnen met hoge specificiteit en verminderde bijwerkingen naar tumorlocaties te brengen, zijn nieuwe methoden op basis van nanodeeltjes vereist. Hier beschrijven we disulfide-gekruiste micellen die gemakkelijk kunnen worden bereid door waterstofperoxide-gemedieerde oxidatie en die zich efficiënt kunnen dissociëren in een reducerende tumoromgeving om ladingen vrij te geven.

Een Facile en efficiënte aanpak voor de productie van omkeerbare Disulfide Cross-linked micellen

Nanomedicine is an emerging form of therapy that harnesses the unique properties of particles that are nanometers in scale for biomedical application. ...

Het algemene doel van deze procedure is om een eenvoudig en effectief protocol te bieden voor het synthetiseren van medicijn-geladen disulfide gekruiste micellen voor gerichte geneesmiddelafgifte. Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van vragen op het gebied van nano-geneeskunde. Bijvoorbeeld hoe effectief stabiele nanoformuleringen kunnen worden geproduceerd.Het grootste voordeel van deze techniek is dat het ons in staat stelt om gemakkelijk disulfide gekruiste micellen op grote schaal te synthetiseren, wat uiterst wenselijk is voor klinische studies bij patiënten. Om met deze procedure te beginnen, voegt u twee gram monomethyl-termineerde polyethyleenglycol-monoamine toe aan een ronde bodemkolf. Voeg tien milliliter anhydrous DMF toe om het op te lossen.Koel op ijs. Voeg drie equivalenten hydroxybenzotriazool, drie equivalenten DIC en drie equivalenten di-eth-moc beschermde lysine toe aan een ronde bodemkolf. Voeg vervolgens tien milliliter anhydrous DMF toe.Roer het mengsel gedurende 20 minuten op een magnetische roerplaat. Voeg vervolgens het mengsel toe aan de ronde bodemkolf met monomethyl-termineerde polyethyleenglycol. Verwijder de ronde bodemkolf uit het ijsbad en roer vervolgens een nacht bij kamertemperatuur.Zodra het roeren is voltooid, bevestigt u de voltooiing van de reactie zoals beschreven in het tekstprotocol. Voeg 200 milliliter ijskoude ether toe aan de reactiekolf. Centrifugeer gedurende zes minuten bij 6.000 x g en vier graden Celsius om het geprecipiteerde polymeer te scheiden.Herhaal het precipitatie- en centrifugatieproces twee keer en lost het product elke keer opnieuw op in 10 milliliter DMF voordat het wordt geprecipiteerd. Was vervolgens het polymeer drie keer met ijskoude ether. Sluit de buis aan op een hoge vacuümbron om de resterende ether te verwijderen.Voeg hierna 20 milliliter van 20% 4-methylpiperidine in DMF toe aan het polymeer. Roer totdat het oplossen compleet is. Laat de reactie drie uur doorlopen.Nadat u de voltooiing van de reactie hebt bevestigd, droogt u het polymere product. Droog nu polymeerintermediair nummer twee onder vacuüm en voer vervolgens aanvullende polymere synthese stappen uit zoals beschreven in het tekstprotocol. Zodra polymeerintermediair nummer 10 is geproduceerd, brengt u het over naar een reactiekolf.Voeg 30 milliliter anhydrous DMF toe. Los in een nieuwe kolf 24 equivalenten geactiveerd cholic acid op in 20 milliliter DMF. Voeg vervolgens 48 equivalenten N, N-Diisopropylethylamine toe.Roer gedurende 10 minuten. Na het roeren, brengt u het mengsel over naar de reactiekolf met polymeerintermediair nummer 10. Laat de reactie een nacht doorlopen.Bevestig de volgende dag de voltooiing van de reactie en geprecipiteerd polymeerintermediair nummer 11, zoals beschreven in het tekstprotocol. Dialyseer vervolgens het polymeerintermediair in gedeïoniseerd water. Lyophiliseer het monster om een wit poeder te verkrijgen.Na het bereiden van de micel, lost u 20 milligram telodendrimeer en vijf milligram PTX op in één milliliter chloroform. Verwijder het oplosmiddel met behulp van een roterende verdamper om een homogene droge polymeerfilm te verkrijgen. Reconstitueer de film met één milliliter PBS door te vortexen.Soniceer vervolgens gedurende 30 minuten bij 40 kilohertz. Voeg 3% waterstofperoxide toe om de thiolgroepen op het telodendrimeer te oxideren. Voer aanvullende voorbereidings- en verificatie stappen uit zoals beschreven in het tekstprotocol.Nadat de micelbereiding voltooid is, meet u de grootte en grootteverdeling van de micellen met behulp van een dynamisch lichtverstrooiingsinstrument. Voer de metingen uit bij kamertemperatuur en houd de micelconcentratie op één milligram per milliliter. Bereid vervolgens een 7,5 milligram per milliliter stockoplossing van natriumdodecylsulfaat in PBS voor.Bereid vervolgens een 1,5 milligram per milliliter stockoplossing van disulfide gekruiste micellen in PBS voor. Gebruik deze stockoplossingen om een mengsel te creëren waarbij de uiteindelijke SDS-concentratie 2,5 milligram per milliliter is en de micelconcentratie 1,0 milligram per milliliter is.Laad het monster en meet de grootte en grootteverdeling van de miceloplossing met tussenpozen van twee minuten. Na het verzamelen van vers geciteerd bloed van naakte muizen, centrifugeert u een monstersteekproef van één milliliter bij 1.000 x g gedurende 10 minuten om rode bloedcellen te verzamelen. Was ze drie keer met PBS en suspendeer vervolgens het celpellet met PBS tot een uiteindelijke concentratie van 2%. Meng 200 microliters erytrocytensuspensie met een oplossing van 1,0 milligram per milliliter PTX NCM's.Meng vervolgens 200 microliters erytrocytensuspensie met een oplossing van 1,0 milligram per milliliter PTX DCM's. Incubeer deze mengsels gedurende vier uur in een incubator shaker bij 37 graden Celsius. Na incubatie centrifugeert u de mengsels gedurende vijf minuten bij 3.000 x g.Breng 100 microliter van het supernatant van elk monster over naar een 96-wells plaat. Gebruik vervolgens een microplaatlezer om de absorptie van vrij hemoglobine bij 540 nanometer te meten. Zoals gemeten door de Test van Ellman, bereikte de conversiesnelheid van vrije thiolgroepen naar disulfidebindingen 85% na 48 uur van door zuurstof gemedieerde oxidatie.Hier wordt een door waterstofperoxide gemedieerde oxidatiemethode gebruikt als alternatieve methode. De conversiesnelheid bereikt 88% in 30 minuten. Dat is 96 keer sneller dan de door zuurstof gemedieerde benadering.Met behulp van deze efficiëntere aanpak zijn meer dan 50 gram nanodeeltjes geproduceerd met een gemeten deeltjesgrootte van 27 nanometer met een smalle grootteverdeling. De stabiliteit van PTX-geladen disulfide gekruiste micellen is ook onder ernstige micelstorende omstandigheden onderzocht. De deeltjesgrootte van de micellen bleef stabiel over de tijd, wat aangeeft dat ze intact bleven.</p

a-facile-efficient-approach-for-production-reversible-disulfide-cross

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Biochemie

Werkwijze voor het oplosmiddel toegankelijkheid van de thiolgroep van cysteine ​​residuen van...

Analyse van de Solvent Toegankelijkheid van cysteïneresten op<em&gt; Maïs rayado fino virus</em&gt; Virus-achtige deeltjes, geproduceerd in<em&gt; Nicotiana benthamiana</em&gt; Plants and Cross-linking van peptiden aan VLP

Biofysische en biochemische studies van interacties tussen membraan-ingebed eiwitdomeinen geconfronteerd met vele technische uitdagingen, waarvan de eerste is het verkrijgen van passende studiemateriaal. Dit artikel beschrijft een protocol voor het produceren en zuiveren van disulfide-gestabiliseerde transmembraan peptide complexen die geschikt zijn voor structurele analyse door oplossing kernspinresonantie (NMR) en andere analytische toepassingen.

Productie van Disulfide gestabiliseerde Transmembrane peptidecomplexen voor structurele studies

Een eenvoudige, robuuste en schaalbare techniek om functionaliseren en zelf te monteren macroscopische nanodeeltjes-ligand monolaag films op-template gratis substraten wordt beschreven in dit protocol.

Een techniek om functionaliseren en zelf-assembleren Macroscopisch Nanoparticle-ligand Monolayer Films op-Sjabloonloze Substrates

Dit artikel beschrijft een proces voor het produceren van zelfgeassembleerde polymere nanodeeltjes met behulp van zichtbare licht gemedieerde dispersiepolymerisatie. Het gebruik van zichtbaar licht met lage energie om de polymerisatie te controleren, maakt de reproduceerbare vorming van zelfgeassembleerde worm-achtige micelles mogelijk bij een hoog vast stofgehalte.

Facile Synthese van Worm-micellen door het zichtbare licht Mediated Dispersion polymerisatie onder toepassing van Photoredox Catalyst

Het huidige werk beschrijft een methode om te fabriceren micellaire nanokristallen, een opkomende grote klasse van nanobiomaterials. Deze methode combineert topdown electrospray, onderop zelf-assemblage, en op basis van oplosmiddel structuur controle. De fabricage methode is grotendeels continu kan produceren hoogwaardige producten en bezit een goedkoop middel structuur controle.

Fabricage van bolvormig en Worm-vormige micellaire nanokristallen door het combineren van Electrospray, zelf-assemblage en controle van de structuur op basis van oplosmiddel

Hier presenteren we twee ultrasnelle protocollen voor reconstructie van membraaneiwitten in fusogenic proteoliposomes, en de fusie van dergelijke proteoliposomes met doel lipide bilayers voor wasmiddel-gratis bezorging van deze membraaneiwitten binnen de postfusion dubbelgelaagde. De combinatie van deze benaderingen kan snel en gemakkelijk-gecontroleerde vergadering van complexe multi-component membraan systemen.

Wasmiddel-vrije ultrasnelle reconstitutie van membraaneiwitten in lipide-Bilayers met behulp van Fusogenic aanvullende geladen Proteoliposomes.

We presenteren een protocol voor de bouw van thioether/vinyl sulfide-aangebonden spiraalvormige peptiden met behulp van foto-geïnduceerde thiol-Ono/thiol-yne hydrothiolation.

Bouw van de Thioether/Vinyl Sulfide-aangebonden Helical peptiden Via foto-geïnduceerde Thiol-Ono/yne Hydrothiolation

Hier presenteren we een één-pot, overgang-metaalvrije synthese van thiolen en thioesters van aromatische halogeniden en natrium thiomethoxide, gevolgd door de voorbereiding van enkele kristallen van een metaal-dithiolene-netwerk met behulp van thiol soorten gegenereerd in situ van de meer stabiele en hanteerbare thio-ester.

Synthese van een Thiol bouwsteen voor de kristallisatie van een halfgeleidende Gyroidal metaal-zwavel-kader

Disulfide verbanden zijn al lang bekend om de structuur van veel eiwitten te stabiliseren. Een eenvoudige methode om multimeric complexen te analyseren die door deze aaneenschakelingen worden gestabiliseerd is door niet-vermindert SDS-pagina analyse. Hier wordt deze methode geïllustreerd door het analyseren van de nucleaire isovorm van dUTPase van het menselijk bot Osteosarcoom Cell line U-2 OS.

Het combineren van niet-vermindert SDS-pagina analyse en chemische crosslinking om multimeric complexen te ontdekken die door disulfide verbindingen in zoogdiercellen in cultuur worden gestabiliseerd

Het protocol presenteert de geoptimaliseerde parameters voor de voorbereiding van thermogevoelige liposomen met behulp van de gespreide visgraat micromixer microfluidics apparaat. Dit maakt het ook mogelijk co-inkapseling van doxorubicin en indocyanine groen in de liposomen en de fotothermale geactiveerde release van doxorubicin voor gecontroleerde / getriggerde drug release.

Microfluïde productie van lysolipidenhoudende temperatuurgevoelige liposomen

Leer een eenvoudige methode voor de synthese van geneesmiddelgeladen disulfide-gekruiste micellen voor gerichte geneesmiddelafgifte in kankertherapie. Deze schaalbare aanpak maakt klinische toepassingen mogelijk.

Een Facile en efficiënte aanpak voor de productie van omkeerbare Disulfide Cross-linked micellen

Meer video's verkennen