Name: -Cefoperazone behandelde muismodel van klinisch relevante Clostridium difficile Strain R20291 (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-12-10T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 51 s
Description: Leer het cefoperazon-muismodel implementeren voor Clostridium difficile-infectie met stam R20291. Dit protocol omvat klinische monitoring, bacteriële telling en histopathologische analyse.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

De auteurs willen Trevor Lawley van het Wellcome Trust Sanger Institute bedanken voor C. difficile R20291 sporen en James S. Guy van de North Carolina State University College of Veterinary Medicine voor Vero cellen, beide gebruikt in dit manuscript. Dierlijke histopathologie werd uitgevoerd in de LCCC Animal Histopathology Core Facility aan de University of North Carolina at Chapel Hill, met speciale hulp van Traci Raley en Amanda Brown. De LCCC Animal Histopathology Core wordt gedeeltelijk ondersteund door een NCI Center Core Support Grant (2P30CA016086-40) aan het UNC Lineberger Comprehensive Cancer Center. We willen ook Vincent Young, Anna Seekatz, Jhansi Leslie en Cassie Schumacher bedanken voor nuttige discussies over het protocol voor de Vero-celcytotoxiciteitstest. JAW wordt gefinancierd door de Ruth L. Kirschstein National Research Service Award Research Training Grant T32OD011130 van NIH. CMT wordt gefinancierd door de career development award in metabolomics grant K01GM109236 van de NIGMS van de NIH.

<ol><li>Antibiotic Resistance Threats in the United States. , U.S.D.o.H.a.H. Services. Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.cdc.gov/drugresistance/pdf/ar-threats-2013-508.pdf">http://www.cdc.gov/drugresistance/pdf/ar-threats-2013-508.pdf</a> (2013).</li>
<li>Lessa, F. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Burden+of+Clostridium+difficile+Infection+in+the+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Burden of Clostridium difficile Infection in the United States.</a> New England Journal of Medicine. 372, 825-834 (2015).</li>
<li>Gerding, D. N., Lessa, F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+epidemiology+of+Clostridium+difficile+infection+inside+and+outside+health+care+institutions%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Dis+Clin+North+Am%22%5BJournal%5D)">The epidemiology of Clostridium difficile infection inside and outside health care institutions.</a> Infect Dis Clin North Am. 29, 37-50 (2015).</li>
<li>Dubberke, E. R., Olsen, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Burden+of+Clostridium+difficile+on+the+healthcare+system%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Burden of Clostridium difficile on the healthcare system.</a> Clin Infect Dis. 55, Suppl 2 88-92 (2012).</li>
<li>Kociolek, L. K., Gerding, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Breakthroughs+in+the+treatment+and+prevention+of+Clostridium+difficile+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Breakthroughs in the treatment and prevention of Clostridium difficile infection.</a> Nat Rev Gastroenterol Hepatol. , (2016).</li>
<li>Kelly, C. P., LaMont, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clostridium+difficile--more+difficult+than+ever%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Clostridium difficile--more difficult than ever.</a> N Engl J Med. 359, 1932-1940 (2008).</li>
<li>Louie, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fidaxomicin+versus+vancomycin+for+Clostridium+difficile+infection%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Fidaxomicin versus vancomycin for Clostridium difficile infection.</a> N Engl J Med. 364, 422-431 (2011).</li>
<li>Bartlett, J. G., Onderdonk, A. B., Cisneros, R. L., Kasper, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clindamycin-associated+colitis+due+to+a+toxin-producing+species+of+Clostridium+in+hamsters%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+infectious+diseases%22%5BJournal%5D)">Clindamycin-associated colitis due to a toxin-producing species of Clostridium in hamsters.</a> The Journal of infectious diseases. 136, 701-705 (1977).</li>
<li>Kelly, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+the+reproducibility+of+the+NAP1%2FB1%2F027+epidemic+strain+R20291+in+the+hamster+model+of+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Anaerobe%22%5BJournal%5D)">Improving the reproducibility of the NAP1/B1/027 epidemic strain R20291 in the hamster model of infection.</a> Anaerobe. , (2016).</li>
<li>Kuehne, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Importance+of+toxin+A%2C+toxin+B%2C+and+CDT+in+virulence+of+an+epidemic+Clostridium+difficile+strain%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+infectious+diseases%22%5BJournal%5D)">Importance of toxin A, toxin B, and CDT in virulence of an epidemic Clostridium difficile strain.</a> The Journal of infectious diseases. 209, 83-86 (2014).</li>
<li>Bartlett, J. G., Onderdonk, A. B., Cisneros, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clindamycin-associated+colitis+in+hamsters%3A+protection+with+vancomycin%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Clindamycin-associated colitis in hamsters: protection with vancomycin.</a> Gastroenterology. 73, 772-776 (1977).</li>
<li>Chen, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+model+of+Clostridium+difficile-associated+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">A mouse model of Clostridium difficile-associated disease.</a> Gastroenterology. 135, 1984-1992 (2008).</li>
<li>Lawley, T. D., Young, V. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+models+to+study+Clostridium+difficile+infection+and+transmission%5BTitle%5D)+AND+%22Anaerobe%22%5BJournal%5D)">Murine models to study Clostridium difficile infection and transmission.</a> Anaerobe. 24, 94-97 (2013).</li>
<li>Best, E. L., Freeman, J., Wilcox, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Models+for+the+study+of+Clostridium+difficile+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Gut+Microbes%22%5BJournal%5D)">Models for the study of Clostridium difficile infection.</a> Gut Microbes. 3, 145-167 (2012).</li>
<li>Reeves, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+interplay+between+microbiome+dynamics+and+pathogen+dynamics+in+a+murine+model+of+Clostridium+difficile+Infection%5BTitle%5D)+AND+%22Gut+Microbes%22%5BJournal%5D)">The interplay between microbiome dynamics and pathogen dynamics in a murine model of Clostridium difficile Infection.</a> Gut Microbes. 2, 145-158 (2014).</li>
<li>Owens, R. C., Donskey, C. J., Gaynes, R. P., Loo, V. G., Muto, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antimicrobial-associated+risk+factors+for+Clostridium+difficile+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Antimicrobial-associated risk factors for Clostridium difficile infection.</a> Clin Infect Dis. 46, Suppl 1 19-31 (2008).</li>
<li>Theriot, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cefoperazone-treated+mice+as+an+experimental+platform+to+assess+differential+virulence+of+Clostridium+difficile+strains%5BTitle%5D)+AND+%22Gut+Microbes%22%5BJournal%5D)">Cefoperazone-treated mice as an experimental platform to assess differential virulence of Clostridium difficile strains.</a> Gut Microbes. 2, 326-334 (2011).</li>
<li>Martin, J. S., Monaghan, T. M., Wilcox, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clostridium+difficile+infection%3A+epidemiology%2C+diagnosis+and+understanding+transmission%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Clostridium difficile infection: epidemiology, diagnosis and understanding transmission.</a> Nat Rev Gastroenterol Hepatol. , (2016).</li>
<li>Connor, J. R., Johnson, S., Gerding, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clostridium+difficile+infection+caused+by+the+epidemic+BI%2FNAP1%2F027+strain%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Clostridium difficile infection caused by the epidemic BI/NAP1/027 strain.</a> Gastroenterology. 136, 1913-1924 (2009).</li>
<li>He, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emergence+and+global+spread+of+epidemic+healthcare-associated+Clostridium+difficile%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Genet%22%5BJournal%5D)">Emergence and global spread of epidemic healthcare-associated Clostridium difficile.</a> Nat Genet. 45, 109-113 (2013).</li>
<li>Perez, J., Springthorpe, V. S., Sattar, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clospore%3A+a+liquid+medium+for+producing+high+titers+of+semi-purified+spores+of+Clostridium+difficile%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+AOAC+International%22%5BJournal%5D)">Clospore: a liquid medium for producing high titers of semi-purified spores of Clostridium difficile.</a> Journal of AOAC International. 94, 618-626 (2011).</li>
<li>Sorg, J. A., Dineen, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laboratory+maintenance+of+Clostridium+difficile%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Laboratory maintenance of Clostridium difficile.</a> Curr Protoc Microbiol. , Chapter 9, Unit9A.1 (2009).</li>
<li>Edwards, A. N., Suarez, J. M., McBride, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Culturing+and+maintaining+Clostridium+difficile+in+an+anaerobic+environment%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+visualized+experiments+%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Culturing and maintaining Clostridium difficile in an anaerobic environment.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. , e50787(2013).</li>
<li>George, W. L., Sutter, V. L., Citron, D., Finegold, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+and+differential+medium+for+isolation+of+Clostridium+difficile%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Selective and differential medium for isolation of Clostridium difficile.</a> J Clin Microbiol. 9, 214-219 (1979).</li>
<li>Knoblaugh, S., Randolph-Habecker, J., Rath, S. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKnoblaugh%2C+S+%22Comparative+Anatomy+and+Histology%22">Comparative Anatomy and Histology</a>. Dintzis, S. M. , Academic Press. 15-40 (2012).</li>
<li>Ammerman, N. C., Beier-Sexton, M., Azad, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth+and+maintenance+of+Vero+cell+lines%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Growth and maintenance of Vero cell lines.</a> Curr Protoc Microbiol. , Appendix 4, Appendix 4E (2008).</li>
<li>Clostridium difficile Toxin/Antitoxin Kit Cat No.T5000. , TECHLAB. Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.techlab.com/wp-content/uploads/2013/06/t5000isert_rev_0307.pdf">http://www.techlab.com/wp-content/uploads/2013/06/t5000isert_rev_0307.pdf</a> (2007).</li>
<li>Theriot, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibiotic-induced+shifts+in+the+mouse+gut+microbiome+and+metabolome+increase+susceptibility+to+Clostridium+difficile+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Antibiotic-induced shifts in the mouse gut microbiome and metabolome increase susceptibility to Clostridium difficile infection.</a> Nat Commun. 5, 3114(2014).</li>
<li>Koenigsknecht, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamics+and+establishment+of+Clostridium+difficile+infection+in+the+murine+gastrointestinal+tract%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Dynamics and establishment of Clostridium difficile infection in the murine gastrointestinal tract.</a> Infect Immun. 83, 934-941 (2015).</li>
<li>Theriot, C., Bowman, A., Young, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibiotic-Induced+Alterations+of+the+Gut+Microbiota+Alter+Secondary+Bile+Acid+Production+and+Allow+for+Clostridium+difficile+Spore+Germination+and+Outgrowth+in+the+Large+Intestine%5BTitle%5D)+AND+%22mSphere%22%5BJournal%5D)">Antibiotic-Induced Alterations of the Gut Microbiota Alter Secondary Bile Acid Production and Allow for Clostridium difficile Spore Germination and Outgrowth in the Large Intestine.</a> mSphere. 1, 00045(2016).</li>
<li>Xiao, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+catalog+of+the+mouse+gut+metagenome%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+biotechnology%22%5BJournal%5D)">A catalog of the mouse gut metagenome.</a> Nature biotechnology. 33, 1103-1108 (2015).</li>
<li>Leslie, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Persistence+and+toxin+production+by+Clostridium+difficile+within+human+intestinal+organoids+result+in+disruption+of+epithelial+paracellular+barrier+function%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Persistence and toxin production by Clostridium difficile within human intestinal organoids result in disruption of epithelial paracellular barrier function.</a> Infect Immun. 83, 138-145 (2015).</li>
<li>Stabler, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+genome+and+phenotypic+analysis+of+Clostridium+difficile+027+strains+provides+insight+into+the+evolution+of+a+hypervirulent+bacterium%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Biol%22%5BJournal%5D)">Comparative genome and phenotypic analysis of Clostridium difficile 027 strains provides insight into the evolution of a hypervirulent bacterium.</a> Genome Biol. 10, 102(2009).</li>
<li>Valiente, E., Dawson, L. F., Cairns, M. D., Stabler, R. A., Wren, B. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emergence+of+new+PCR+ribotypes+from+the+hypervirulent+Clostridium+difficile+027+lineage%5BTitle%5D)+AND+%22J+Med+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Emergence of new PCR ribotypes from the hypervirulent Clostridium difficile 027 lineage.</a> J Med Microbiol. 61, 49-56 (2012).</li>
</ol>

De auteurs hebben op dit moment niets te onthullen.

Dit protocol karakteriseert het klinische beloop, inclusief gewichtsverlies, bacteriële kolonisatie, toxinecytotoxiciteit en histopathologische veranderingen in het maag-darmkanaal, van antibiotica-behandelde muizen die worden uitgedaagd met C. difficile R20291 sporen. Er zijn verschillende kritische stappen binnen het protocol waarbij aandacht voor detail essentieel is. Nauwkeurige berekening van het C. difficile spore-inoculum is cruciaal. Deze berekening is gebaseerd op de originele C. difficile<...

Clostridium difficile is een anaërobe, grampositieve, sporenvormende bacil die levensbedreigende diarree 1 veroorzaakt. C. difficile infectie (CDI) is geassocieerd met een verhoogde menselijke morbiditeit en mortaliteit en resulteert in meer dan $ 4800000000 in de kosten van de gezondheidszorg per jaar 1-4. In 2013, de Centers for Disease Control and Prevention gecategoriseerd C. difficile als een dringende antibioticaresistentie risico, wat aangeeft dat het een dringende bedreiging voor de volksgezondheid 1 vormt. Op dit moment, antibiotische behandeling met vancomycine en metronidazol worden beschouwd als de standaard van zorg voor CDI 5. Helaas, herhaling van CDI na een succesvolle behandeling met antibiotica is hoog, optreedt in 20-30% van de patiënten 2,5-7. Daarom is de ontdekking van nieuwe therapieën tegen deze darmpathogeen noodzakelijk. Om therapieën te onderzoeken tegen C. difficile, een diermodel benadert de ziekte bij de mens in aclinically relevante stam nodig is. Aanvankelijk werden postulaten vastgesteld voor C. difficile in 1977 met een clindamycine behandeld Syrische hamster model 8. Dit model wordt nog steeds gebruikt om de effecten van C. difficile toxinen onderzoeken naar pathogenese 9,10. Echter, CDI in het hamstermodel resulteert in hoge sterfte en niet nader chronische sluipende ziektemanifestaties die kunnen worden gezien bij mensen met CDI 10,11. Gebaseerd op de toegankelijkheid en reagens beschikbaarheid van murine platforms in onderzoek, een muismodel van CDI relevant. In 2008, een robuust muismodel van CDI werd opgericht door de behandeling van muizen met een antibioticum cocktail in drinkwater (kanamycine, gentamicine, colistine, metronidazol en vancomycine) gedurende 3 dagen, gevolgd door een intraperitoneale injectie van clindamycine 12. Dit teruggegeven muizen gevoelig voor CDI en ernstige colitis. afhangening op de entstof dosis toegediend, kan een reeks klinische symptomen en sterfte worden geobserveerd met behulp van dit model. Sindsdien zijn diverse antibiotische regimes onderzocht dat de murine darmflora verandert, aflopend kolonisatieweerstand tot het punt waar C. difficile het maagdarmkanaal kan koloniseren (beschreven door Best et al. En Lawley &amp; Young) 13,14. Meer recent is een breed spectrum cefalosporine, cefoperazon, gezien in het drinkwater gedurende 5 of 10 dagen maakt reproduceerbaar muizen gevoelig voor CDI 15. Aangezien toediening van de derde generatie cefalosporinen geassocieerd met een verhoogd risico van CDI bij mensen gebruik van de cefoperazon model beter weergeeft nature voorkomende ziekte 16. -Cefoperazone behandelde muizen gevoelig voor C. difficile werden uitgedaagd met zowel C. difficile sporen en vegetatieve cellen van verschillende stammen variërend in klinischerelevantie en virulentie 17. Ondanks dat een aantal van de oorspronkelijke studies gebruik te maken van C. difficile vegetatieve cellen als de besmettelijke vorm, C. difficile sporen beschouwd als de belangrijkste wijze van overdracht 18. In het laatste decennium, C. difficile R20291, een NAP1 / BI / 027 stam, is ontstaan, waardoor epidemieën van CDI 19,20. Wij hebben geprobeerd om het klinisch beloop van de ziekte te bepalen wanneer-cefoperazon behandelde muizen werden uitgedaagd met de klinisch relevante en genetisch handelbaar C. difficile stam, R20291. Dit protocol geeft de klinisch verloop, zoals gewichtsverlies, bacteriële kolonisatie, toxine cytotoxiciteit en histopathologische veranderingen in het maagdarmkanaal van muizen geprikkeld met C. difficile R20291 sporen. Kortom, dit muismodel blijkt een waardevolle experimenteel platform voor CDI benaderen van ziekten bij de mens zijn. Dit kenmerk muismodel kan dus worden gebruikt om de effecten te evaluerenvan nieuwe therapieën voor de verbetering van de klinische ziekte en het herstel van kolonisatieweerstand tegen C. difficile.

<table><tbody><tr><td>#62 Perisept Sporidicial Disinfectant Cleaner&nbsp;</td><td>SSS Navigator</td><td>48027</td><td>Dit product dient te worden verdund zoals aanbevolen door de fabrikant</td></tr><tr><td>0.22 &mu;m filter</td><td>Fisherbrand</td><td>09-720-3</td><td>Alternatief voor filterplaat voor individuele monsters getest in de Vero Cell Assay</td></tr><tr><td>0.25% Trypsin-EDTA</td><td>Gibco</td><td>25200-056</td><td>Moet worden verwarmd in een waterbad op 37 &deg;C voor gebruik</td></tr><tr><td>0.4% Trypan Blue</td><td>Gibco</td><td>15250-061</td><td></td></tr><tr><td>1% Peniciilin/Streptomycin</td><td>Gibco</td><td>15070-063</td><td></td></tr><tr><td>10% verwarmde inactieve FBS</td><td>Gibco</td><td>16140-071</td><td>Moet worden verwarmd in een waterbad op 37 &deg;C voor gebruik</td></tr><tr><td>1 ml plastic spuit&nbsp;</td><td>BD Medical Supplies</td><td>309628</td><td></td></tr><tr><td>1x PBS</td><td>Gibco</td><td>10010-023</td><td></td></tr><tr><td>2 ml Micro Centrifuge Schroefkap</td><td>Corning</td><td>430917</td><td></td></tr><tr><td>96 well celkweek plaat met platte bodem</td><td>Costar Corning</td><td>CL3595</td><td></td></tr><tr><td>96 well filterplaat</td><td>Millipore</td><td>MSGVS2210</td><td></td></tr><tr><td>Zelfklevende verzegeling</td><td>ThermoScientific</td><td>AB-0558</td><td></td></tr><tr><td>Bacto Agar</td><td>Becton Dickinson</td><td>214010</td><td>Onderdeel van TCCFA platen (zie hieronder)</td></tr><tr><td>Bacto Proteose Pepton</td><td>Becton Dickinson</td><td>211684</td><td>Onderdeel van TCCFA platen (zie hieronder)</td></tr><tr><td>Cefoperazone</td><td>MP Bioworks</td><td>199695</td><td></td></tr><tr><td>Cefoxitine</td><td>Sigma</td><td>C47856</td><td>Onderdeel van TCCFA platen (zie hieronder)</td></tr><tr><td>Clostridium difficile Antitoxine Kit</td><td>Tech Labs</td><td>T5000</td><td>Gebruikt als controle voor Vero Cell Assay</td></tr><tr><td>Clostridium difficile Toxin A</td><td>List Biological Labs</td><td>152C</td><td>Positieve controle voor Vero Cell Assay</td></tr><tr><td>D-cycloserine</td><td>Sigma</td><td>C6880</td><td>Onderdeel van TCCFA platen (zie hieronder)</td></tr><tr><td>Gedestilleerde Water</td><td>Gibco</td><td>15230</td><td></td></tr><tr><td>DMEM 1x Media</td><td>Gibco</td><td>11965-092</td><td>Moet worden verwarmd in een waterbad op 37 &deg;C voor gebruik</td></tr><tr><td>Fructose</td><td>Fisher</td><td>L95500</td><td>Onderdeel van TCCFA platen (zie hieronder)</td></tr><tr><td>Hemocytometers</td><td>Bright-Line, Sigma</td><td>Z359629</td><td></td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td>Fisher</td><td>P285-500</td><td>Onderdeel van TCCFA platen (zie hieronder)</td></tr><tr><td>MgSO4 (watervrij)</td><td>Sigma</td><td>M2643</td><td>Onderdeel van TCCFA platen (zie hieronder)</td></tr><tr><td>Millex-GS 0.22 &mu;m filter</td><td>Millex-GS</td><td>SLGS033SS</td><td>Filter voor TCCFA platen&nbsp;</td></tr><tr><td>Na2HPO4</td><td>Sigma</td><td>S-0876</td><td>Onderdeel van TCCFA platen (zie hieronder)</td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Fisher</td><td>S640-3</td><td>Onderdeel van TCCFA platen (zie hieronder)</td></tr><tr><td>Nr. 10 wegwerp scalpelblad</td><td>Miltex, Inc</td><td>4-410</td><td></td></tr><tr><td>PCR Plates</td><td>Fisherbrand</td><td>14230244</td><td></td></tr><tr><td>Kunststof petrischaal</td><td>Kord-Valmark Brand</td><td>2900</td><td></td></tr><tr><td>Steriele kunststof L-vormige celverspreider</td><td>Fisherbrand</td><td>14-665-230</td><td></td></tr><tr><td>Spuit Stepper</td><td>Dymax Corporation</td><td>T15469</td><td></td></tr><tr><td>Taurocholate</td><td>Sigma</td><td>T4009</td><td>Onderdeel van TCCFA platen (zie hieronder)</td></tr><tr><td>Ultrapuur gedestilleerd water</td><td>Invitrogen</td><td>10977-015</td><td></td></tr><tr><td>C57BL/6J Muizen</td><td>The Jackson Laboratory</td><td>664</td><td>Muizen moeten 5 - 8 weken oud zijn</td></tr><tr><td>Olympus BX43F lichtmicroscoop</td><td>Olympus Life Science</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DP27 camera</td><td>Olympus Life Science</td><td></td><td></td></tr><tr><td>cellSens Dimension software&nbsp;</td><td>Olympus Life Science</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

-cefoperazone behandelde muismodel van klinisch relevante<em&gt; clostridium difficile</em&gt; strain r20291

Cefoperazone-treated Mouse Model of Clinically-relevant Clostridium difficile Strain R20291

Clostridium difficile is een anaërobe, gram-positieve, sporenvormende enterische ziekteverwekker die geassocieerd wordt met toenemende morbiditeit en mortaliteit en daarom een dringende bedreiging vormt voor de volksgezondheid. Recidief van een C. difficile infectie (CDI) na succesvolle behandeling met antibiotica is hoog, het komt voor bij 20-30% van de patiënten, wat de ontdekking van nieuwe therapieën tegen deze ziekteverwekker noodzakelijk maakt. Huidige diermodellen van CDI resulteren in hoge sterftecijfers en benaderen dus niet de chronische, insidiose ziektemanifestaties gezien bij mensen met CDI. Om therapieën te evalueren tegen C. difficile, is een muismodel nodig dat de menselijke ziekte benadert met behulp van een klinisch relevante stam. Dit protocol beschrijft het cefoperazone muismodel van CDI met behulp van een klinisch relevante en genetisch benadeerbare stam, R20291. Technieken voor klinisch ziektemonitoring, C. difficile bacterietelling, toxinecytotoxiciteit en histopathologische veranderingen tijdens CDI in een muismodel worden gedetailleerd beschreven in het protocol. In vergelijking met andere muismodellen van CDI is dit model niet uniform dodelijk bij de toegediende dosis, waardoor de observatie van een langdurig klinisch verloop van infectie mogelijk is, in overeenstemming met de menselijke ziekte. Daarom bewijst dit cefoperazone muismodel van CDI een waardevolle experimentele platform om de effecten van nieuwe therapieën op de verbetering van klinische ziekte en op de herstel van kolonisatieresistente tegen C. difficile te beoordelen.

Gedurende een representatieve studie werden 5 weken oude C57BL / 6-muizen voorbehandeld met WT cefoperazon in hun drinkwater (0,5 mg / ml) gedurende 5 dagen en men liet 2 dagen spoelen regelmatig drinkwater. Muizen werden geprikkeld met 10 5 sporen van C. difficile R20291 via orale sondevoeding op dag 0 (Figuur 1A). De muizen werden gevolgd voor gewichtsverlies en klinische symptomen (lusteloosheid, gebrek aan eetlust, diarree en gebogen houding) van ...

Dit protocol beschrijft de cefoperazon muismodel van Clostridium difficile infectie (CDI) met een klinisch relevante en genetisch handelbaar stam, R20291. Nadruk op klinische ziekte monitoring, C. difficile bacteriële opsomming, toxine cytotoxiciteit en histopathologische veranderingen in heel CDI in een muismodel worden beschreven in het protocol.

-Cefoperazone behandelde muismodel van klinisch relevante<em&gt; Clostridium difficile</em&gt; Strain R20291

Clostridium difficile is an anaerobic, gram-positive, spore-forming enteric pathogen that is associated with increasing morbidity and mortality and ...

Het algemene doel van dit protocol is om een stapsgewijze handleiding te bieden voor de implementatie van het cefoperazon-muismodel voor Clostridium difficile-infectie, met speciale nadruk op klinische ziektemonitoren, bacteriële enumeratie, toxinecytotoxiciteit en histopathologische veranderingen na de challenge. Dit gedetailleerde protocol helpt onderzoekers om een muismodel van Clostridium difficile-infectie nauwkeurig uit te voeren, wat essentieel is voor het bestuderen van de pathogenese van deze bacterie en het evalueren van nieuwe therapeutica. Het belangrijkste voordeel van het gebruik van dit muismodel is dat blootstelling aan één antibioticum gedurende vijf dagen muizen vatbaar maakt voor kolonisatie door C.difficile en leidt tot een langdurig klinisch infectieverloop dat overeenkomt met de menselijke ziekte.Begin met het nemen van de gewenste C.difficile-stamvoorraad en vortex deze. Verdun de voorraad in een laminaire flowkast in steriel water in een buis met schroefdop tot een concentratie van 10⁵ sporen per 25 µL. Label het mengsel als sporeninoculum en plaats de buis gedurende 20 minuten in een waterbad van 65 °C.Pipette vervolgens, in de laminaire flowkast, 50 µL van

cefoperazone-treated-mouse-model-clinically-relevant-clostridium

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

Source: Winston, J. A., et al. Cefoperazone-treated Mouse Model of Clinically-relevant Clostridium difficile Strain R20291. J. Vis. Exp. (2016)This video demonstrates the procedure for inoculating antibiotic-pretreated mice with Clostridium difficile spores to establish a murine model of infection for studying pathogenesis and host responses.

Establishing a Mouse Model of Clostridium difficile Infection

Source: Winston, J. A. et al. Cefoperazone-treated Mouse Model of Clinically-relevant Clostridium difficile Strain R20291. J. Vis. Exp. (2016)This video demonstrates the quantification of Clostridium difficile in fecal samples from an infected mouse model using selective culture techniques. It outlines the procedures for sample collection, anaerobic processing, serial dilution, and colony enumeration to assess bacterial colonization and host-pathogen interactions.

Quantification of Clostridium difficile in Fecal Samples from an Infected Mouse Model

Citrobacter rodentium infectie biedt een waardevol model voor enterische bacteriële infecties te bestuderen, evenals het hosten immuunreacties en colitis bij muizen. Dit protocol beschrijft de meting van de barrière integriteit, pathogeen belasting en histologische schade waardoor de grondige karakterisering van pathogeen en gastheer bijdragen aan murine infectieuze colitis.

De<em&gt; Citrobacter rodentium</em&gt; Muis Model: Studeren pathogeen en gastheer Bijdragen aan infectieuze colitis

Multi-modaliteit beeldvorming is een waardevolle benadering voor het bestuderen van bacteriële kolonisatie in kleine proefdiermodellen. Dit protocol beschrijft infectie van muizen met...

4D multimodale beeldvorming van<em&gt; Citrobacter rodentium</em&gt; Infecties in Muizen

De mogelijkheid om urineweginfecties (UTI) te modelleren is cruciaal om bacteriële pathogenese te begrijpen en de ontwikkeling van nieuwe therapeutische methoden te stimuleren. Het doel van dit werk is om muismodellen van experimentele UTI en katheter-geassocieerde UTI te demonstreren die bevindingen naspelen en voorspellen die bij mensen worden gezien.

Oprichting en karakterisering van UTI en Cauti in een muismodel

De werkzaamheid van antibiotica wordt meestal bepaald door het uitvoeren van dodingskinetische studies en het meten van kolonievormende eenheden (CFU's). Door rasterelektronenmicroscopie (SEM) te integreren met deze standaardmethoden, kunnen we de farmacologische effecten van behandeling tussen verschillende antibiotica onderscheiden.

Een protocol om de morfologische veranderingen van<em&gt; Clostridium difficile</em&gt; In reactie op Antibiotische Behandeling

Hier beschrijven we een methode om meningokokken meningitis te induceren via een intracisternale infectie route bij volwassen muizen. We presenteren een stap voor stap Protocol van meningokokkeninfectie van de bereiding van entmateriaal tot de intracisternale infectie; Noteer vervolgens de overleving van het dier en evalueer de bacteriële ladingen in muriene weefsels.

Inducerende meningokokken meningitis serogroep C in muizen via Intracisternal Delivery

Een muismodel van uropathogene E. coli (UPEC) transurethrale inenting om latente intracellulaire blaasreservoirs en daaropvolgende blaasblootstelling aan G. vaginalis vast te stellen om terugkerende UPEC-UTI te induceren, wordt aangetoond. Ook aangetoond zijn de opsomming van bacteriën, urinecytologie en in situ blaasfixatie en -verwerking voor scanningelektronenmicroscopie.

Terugkerende Escherichia coli urineweginfectie veroorzaakt door Gardnerella vaginalis blaasblootstelling bij muizen

Hier presenteren we een protocol om het door antibiotica geïnduceerde pseudo-kiemvrije dextraansulfaat-natrium-geïnduceerde colitis-muismodel op te stellen om de rol van darmmicrobiota bij het reguleren van de positieve effecten van Bacillus cereus op colitis te onderzoeken.

Onderzoek naar de verlichtende effecten van toediening van Bacillus cereus op colitis door middel van darmmicrobiotamodulatie

Vroeggeboorte (bevalling &lt; 37 weken) is een urgent wereldwijd gezondheidsprobleem met suboptimale preventie- en behandelingsopties. We presenteren een muismodel van oplopende vaginale bacteriële infectie-geïnduceerde vroeggeboorte en schetsen hoe de resulterende neonatale morbiditeit en mortaliteit kunnen worden geanalyseerd.

Modellering van oplopende vaginale infectie, vroeggeboorte en neonatale morbiditeit bij muizen

Dit protocol beschrijft de noodzakelijke stappen voor kolonisatie van muizen met pks+ Escherichia coli onder niet-inflammatoire omstandigheden, evenals niet-invasieve methoden voor validatie van kolonisatie en beoordeling van de pks+ E. coli-expansie in ontlasting.

Kolonisatie met Murine pks+ Escherichia coli onder niet-inflammatoire omstandigheden

Leer het cefoperazon-muismodel implementeren voor Clostridium difficile-infectie met stam R20291. Dit protocol omvat klinische monitoring, bacteriële telling en histopathologische analyse.

-Cefoperazone behandelde muismodel van klinisch relevante

Meer video's verkennen