1D Dunne-laags chromatografie uitvoeren

1. TLC Plates

1. Vastgebruikte adsorbentia voor TLC zijn silicagel, alumina en cellulose. TLC platen zijn commercieel verkrijgbaar met verschillende eigenschappen. Kies een TLC plaat en snijd deze op een geschikte grootte (ongeveer 5 cm x 5 cm is voldoende voor de meeste toepassingen). Voor TLC platen met een glazen rug, score het glas met een liniaal en een glazen snijder, breek dan voorzichtig langs de lijn.

2. Spotting

1. Los het monster op in een geschikt oplosmiddel om een ongeveer 1% oplossing te maken. Indien mogelijk moet het oplosmiddel nonpolair zijn. Fracties uit kolomchromatografie en andere verdunde oplossingen kunnen worden gebruikt zonder verdunning als het opgeloste materiaal een concentratie heeft tussen de 0,2% en 2,0%.
2. Markeer de basislijn met een potlood op ongeveer 1,0 cm van de onderkant van de plaat. Plaats de punten ten minste 1,0 cm van de rand van de plaat en label ze gepast.
3. Punten kunnen worden aangebracht met een glazen capillair. Om de TLC plaat te spotten, dompel de capillair in de oplossing om een kleine hoeveelheid vloeistof op te nemen. Raak voorzichtig de punt aan op de gewenste locatie op de TLC plaat en verwijder hem onmiddellijk.
4. Alternatief, breng punten aan met een microliter spuit door ongeveer 1 μL oplossing voor elke toepassing te leveren.
5. Punten kunnen achtereenvolgens op elke locatie worden aangebracht, zorg ervoor dat u het oppervlak van de adsorbent niet verstoort met de spotter. Laat het oplosmiddel tussen toepassingen drogen.

3. Het kiezen van een ontwikkelingsoplosmiddel

1. Het is voor te verkieuren om het minst polaire oplosmiddel mogelijk te gebruiken voor een goede scheiding. Gangbare oplosmiddelen voor TLC zijn hexaan, ethylacetaat, dichloromethaan en methanol (Tabel 1).
2. Een gemakkelijke manier om een geschikte mobiele fase te vinden is door de TLC plaat met een monster te spotten. Breng voldoende oplosmiddel rechtstreeks op de punt aan om een cirkel van oplosmiddel met een diameter van 1–2 cm te vormen. Markeer de omtrek van de cirkel. Bij visualisatie zal een geschikt oplosmiddel goed gescheiden ringen laten zien, waarbij de buitenste ring ongeveer 50% van de afstand van het centrum tot de oplosmiddelfront ligt.
3. Het kan noodzakelijk zijn om de polariteit van de mobiele fase aan te passen door twee mengbare oplosmiddelen te kiezen en ze in verschillende verhoudingen te testen. Voorbeelden van gangbare mengsels zijn hexanen met ethylacetaat en dichloromethaan met methanol.

4. Ontwikkeling

1. Plaats de bespoten TLC plaat in een ontwikkelingskamer die het geschikte ontwikkelingsoplosmiddel bevat. De oplosmiddellijn moet onder de op de TLC plaat aangegeven basislijn liggen.
2. De ontwikkelingskamer kan een pot met een deksel zijn, of een beker bedekt met aluminiumfolie of plastic folie. Gebruik de kleinste beschikbare container die de TLC plaat kan herbergen.
3. Laat het oplosmiddel de bovenrand van de plaat niet bereiken. Wanneer de oplosmiddelfront (de grens waar de natteel deel van de adsorbent eindigt) 5–10 mm van de bovenkant van de plaat is, verwijder dan de TLC plaat uit de ontwikkelingskamer en markeer de oplosmiddelfront met een potlood voordat het oplosmiddel droogt.

5. Visualisatie

1. Gekleurde punten kunnen onmiddellijk worden gevisualiseerd en met een potlood worden gemarkeerd. Vaak zijn punten niet zichtbaar en moeten daarom op een andere manier worden gevisualiseerd.
2. Vaak bevat de TLC adsorbent een fluorescerende indicator. Punten kunnen worden gevisualiseerd met behulp van een handbediende ultraviolette (UV) lamp. Verbindingen die fluorescentie dempen, zullen als donkere punten verschijnen wanneer de plaat wordt bestraald met kortgolf (254 nm) UV-licht. Fluorescerende verbindingen zullen heldere punten produceren wanneer ze worden bestraald met UV-licht van een geschikte golflengte. Markeer het centrum van elke punt met een potlood.
3. Punten kunnen ook worden gevisualiseerd door een visualiserend reagens of kleurstof op de TLC plaat aan te brengen. Het visualiserende reagens kan worden aangebracht door de plaat in het reagens te dompelen, of door de plaat af te vegen met een wattenbolletje gedrenkt in een niet-corrosieve reagens.
4. Een 20% oplossing van fosfomolybdinezuur in ethanol is nuttig voor de visualisatie van de meeste organische verbindingen. De punten verschijnen bij het verwarmen van de plaat met een heteluchtpistool of in een oven.
5. Andere reagentia kunnen worden gebruikt voor de visualisatie van specifieke klassen van verbindingen. Ninhydrinereagens wordt bijvoorbeeld gebruikt voor aminozuurvisualisatie en 2,4-dinitrofenylhydrazine voor aldehyden en ketonen.

6. Analyse

1. De retardatiefactor (R_f) is de verhouding van de afstand die een verbinding op een TLC plaat aflegt tot de afstand die het oplosmiddel aflegt. Dit kan worden bepaald door de afstand van de basislijn tot het centrum van de punt te meten en de waarde te delen door de afstand van de basislijn tot de oplosmiddelfront.
   
2. De R_f van een verbinding is karakteristiek voor zijn fysische eigenschappen en afhankelijk van factoren zoals temperatuur, monstersteekproefgrootte, en dikte en activiteit van de adsorbent, temperatuur en monstersteekproefgrootte.
3. Om te bevestigen dat een onbekende identiek is aan een bekende verbinding, moet een standaard op dezelfde TLC plaat worden gespot. Identieke stoffen zullen dezelfde karakteristieke R_f hebben.