16 december 2017
Onder buik solide orgaantransplantatie zijn alvleesklier transplantaties gevoelig voor het ontwikkelen van ernstige ischemie reperfusie letsel-geassocieerde transplantaat schade, leidt uiteindelijk tot vroege prothese verlies. Dit protocol beschrijft een model van lymfkliertest pancreas transplantatie met behulp van een niet-hechtdraad manchet techniek, bij uitstek geschikt voor het analyseren van deze vroege, schadelijke schadevergoeding.
Mijn naam is Benno Cardini, van het Daniel Swarovski Onderzoekslaboratorium van de afdeling Viscerale, Transplantatie en Thoracische Chirurgie van de Medische Universiteit Innsbruck. Vandaag laten we u een muismodel voor pancreastransplantatie zien met behulp van een gemodificeerde manchettechniek. Anesthesieer het donordier met een intraperitoneale injectie van ketamine en xylazine en scheer het buikgebied.
Plaats vervolgens de ontvanger op een operatieveld in rugligging en schrob het chirurgische gebied drie keer met chloorhexidine. Voer nu een midline laparotomie uit vanaf de schaamstreek tot aan het borstbeen en verbreed de incisie subcostaal naar beide zijden om een beter zicht op het operatieveld te krijgen. Buig vervolgens de ingewanden naar de linkerkant en injecteer heparine in de vena cava inferior.
In de volgende stap identificeert u de aorta abdominalis proximaal van de kruising van de linker nierslagader, ondergraaft de aorta en bindt deze op dat punt vast. Beweeg nu naar het leverhilum, identificeert en dissecteert de gemeenschappelijke galgang dicht bij de lever en bindt deze dicht bij de pancreas vast. Ten slotte snijdt u de gemeenschappelijke galgang boven de ligatuur door.
Dissecteer vervolgens de poortader dicht bij de lever om voldoende lengte te krijgen voor een veneuze anastomose. Als tip, laat een klein stukje lever op de poortader achter voor later gemakkelijker identificatie. Ondergraaf vervolgens de linker nierslagader in het periaortale weefsel en bind deze vast.
Snijd vervolgens de nierslagader en het periaortale weefsel door, terwijl u aan de rechterkant van de ligatuur blijft. Dissecteer vervolgens de abdominale aorta van de celiacus tot het diafragma, ondergraaft de aorta dicht bij het diafragma en snijdt deze op dat punt door. Identificeer en coaguleer vervolgens alle lumbale takken en snijdt ze door.
Snijd nu de aorta onder de eerder geplaatste ligatuur door. Perfundeer nu de pancreas via de aortapatch met ijskoude perfusieoplossing totdat u effluënt uit de poortader ziet komen. Bovenaan ziet u de geperfundeerde poortader en onder de geperfundeerde aorta.
Verplaats nu de ingewanden terug in de buikholte en scheidt stap voor stap de pancreas van de darm met behulp van 8-0 zijden ligaturen. Begin vanaf de postpylorische regio, ondergraaft het duodenum twee keer en trekt een 8-0 zijden ligatuur erdoorheen. Bind deze vast en scheid scherp de pancreas van het duodenum.
Deze aanpak wordt herhaald totdat u het ligament van Treitz bereikt. Het is essentieel om het duodenum niet te beschadigen, omdat dit de transplant zou uitsluiten van de experimenten vanwege mogelijke besmetting. Nadat de pancreas volledig is gescheiden van het duodenum, gaat u naar het mesenterium, ondergraaft het, bindt het vast en snijdt het door.
Analog aan de vorige stappen, scheidt u de pancreas van de transversaal darm door het onder te graven, vast te binden en tenslotte door te snijden. Gebruik vervolgens dezelfde aanpak om de pancreas van het galgebied te scheiden door deze scherp te dissecteren na ligatuur. Dissecteer vervolgens de pancreas van de maag.
Identificeer de linker maagslagader, bind hem vast en snijdt hem door. Verwijder uiteindelijk de pancreas met de bijgevoegde milt en plaats deze in ijskoude reperfusionsoplossing tot verdere implantatie. Gebruik de milt als handvat.
Analog aan de donor, anesthesieert u het ontvangerdier met een intraperitoneale injectie van ketamine en xylazine en scheer het cervicale gebied. Plaats vervolgens het donordier op het operatieveld in rugligging en schrob het cervicale gebied drie keer met chloorhexidine. Voer vervolgens een huidincisievoer uit vanaf de halsslagaders tot aan de rechter hoek van de onderkaak.
Identificeer vervolgens alle laterale takken van de rechter externe halsslagader, mobiliseer ze, ondergraaft ze en verdeelt ze na bipolaire coagulering. Grijp vervolgens de onderste pool van de rechter onderkaakklier, tilt deze craniaal en dissecteert deze na bipolaire coagulering van de voedende vaten. Snijd nu alle mediale takken van de rechter externe halsslagader door na bipolaire coagulering.
Bind de externe halsslagader twee keer zo craniaal mogelijk vast en verdeelt deze tussen ligaturen. Leid het proximale uiteinde van de externe halsslagader door een polyethyleen manchet. Hierbij is het belangrijk dat het handvat van de manchet naar de opererende chirurg is gericht.
Als volgende stap, plaats de microvasculaire veneuze klem die van de laterale kant komt. Bevochtig nu de ader met heparine, verwijder de ligatuur en trek de ader voorzichtig over de polyethyleen manchet. Fixeer uiteindelijk de ader over de manchet met een circulaire 8-0 zijden ligatuur met één knoop aan de achterkant en drie aan de voorkant.
Om toegang te krijgen tot de rechter gemeenschappelijke halsslagader, mobiliseert en snijdt u de rechter sternocleidomastoïdeus spier door na proximale en distale coagulering. Mobiliseert vervolgens voorzichtig de gemeenschappelijke halsslagader en zorg ervoor dat u de aangrenzende structuren, zoals de nervus vagus, niet beschadigt. Analoog aan de ader, bindt u de gemeenschappelijke halsslagader twee keer vast, zo craniaal mogelijk, en snijdt u deze tussen ligaturen door.
Leidt nu het vat door de arteriële manchet. Bevestig tenslotte de arteriële manchet met de microvasculaire klem, die van de mediale kant komt. Verwijder vervolgens de ligatuur en verbreed het lumen van de ader met behulp van vaatdilatatoren.
Na voldoende verbreeding van het lumen, trekt u de ader over de arteriële manchet. Bevestig uiteindelijk, analoog aan de ader, de ader met de 8-0 zijden ligatuur. Hier ziet u de ader en de ader die zijn gerepareerd voor arteriële veneuze anastomose.
Voor implantatie, plaatst u het transplantaat op een bevochtigde Ace in de cervicale regio. Trek vervolgens de poortader door een 8-0 zijden ligatuurlus, verkort de ader voor een spanningsvrije anastomose en trek de poortader vervolgens over de veneuze manchet. Bevestig tenslotte de ader met een circulaire 8-0 zijden ligatuur.
Analog aan de ader, leidt u de aortastump door een ligatuurlus
Dit artikel presenteert een gedetailleerd protocol voor een muizenmodel voor pancreas transplantatie waarbij gebruik wordt gemaakt van een niet-gehechte cuff-techniek. Deze methode is bijzonder nuttig voor het bestuderen van ischemie-reperfusieschade en de impact hiervan op de levensvatbaarheid van het transplantaat.
Dit protocol maakt reproduceerbare pancreas transplantaties bij muizen mogelijk met hoge succespercentages, ter ondersteuning van mechanistische studies naar ischemie-reperfusieschade bij transplantaatfalen. De niet-gehechte cuff-techniek vermindert trombogene complicaties, waardoor de openheid en betrouwbaarheid voor preklinische evaluatie van strategieën voor het behoud van het transplantaat worden verbeterd. Het biedt een schaalbaar platform voor targetvalidatie in de transplantatiebiologie, in het bijzonder voor mechanismen van schade aan het transplantaat in de vroege fase.
Deze methode is geïntegreerd in het ontdekkingscontinuüm van targetvalidatie tot verfijning van preklinische modellen, waarbij specifiek de beoordeling van strategieën voor het behoud van vasculaire grafts mogelijk wordt gemaakt voorafgaand aan de identificatie van lead-verbindingen.