Name: Muismodel voor Pancreas transplantatie met behulp van een gemodificeerde manchet techniek (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-12-16T13:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 19 s
Description: Leer een muismodel voor alvleeskliertransplantatie met een gemodificeerde manchettechniek. Deze methode onderzoekt ischemie-reperfusie letsel en verbetert het begrip van vroege graftschade.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd gesteund door subsidies #2008-1-596 en #UNI-0404/1956 van de "Tiroler Wissenschaftsfonds (TZG)" (https://www.tirol.gv.at/en/), en door subsidie #2013-042018 van de "Förderungsprogramm van de MUI-Start" van de medische Universiteit Innsbruck.

Om te voorkomen van alloimmune reacties, en strikt onderzoeken ischemie-reperfusie transplantaat schade-gerelateerde schade, moet een syngeneic paar van donor en ontvanger worden gebruikt. In dit protocol, mannelijke C57BL6 (H2b) 10-12-weken oude muizen met een gewicht van 26 tot en met 28 g werden gebruikt als grootte-matched donor-ontvanger-paren. Alle dieren gehuisvest waren in een barrière pathogen gratis faciliteit en menselijke zorg in overeenstemming met de "opdrachtgevers of laboratorium Animal Care" geformuleerd door de nationale maatschappij voor medisch onderzoek en de "gids voor de zorg en gebruik van proefdieren" ontvangen opgesteld door de National Academy of Sciences en gepubliceerd door de National Institutes of Health (NIH publicatie nr. 86-23, herzien 1985). Het Oostenrijkse Ministerie van onderwijs, wetenschap en cultuur goedgekeurd de experimenten beschreven in dit manuscript (BMWF-66.011/0056-II/3b/2011).
1. de alvleesklier aanbestedingen
<ol>
	<li>Anesthetize het donordier met een injectie intraperitoneaal (i.p.) xylazine (5 mg/kg lichaamsgewicht) en ketamine (100 mg/kg lichaamsgewicht) met behulp van een naald 27-gauge (G).</li>
	<li>Scheren van het haar in de abdominale regio met behulp van een elektrisch scheerapparaat, en monteren van de muis op de operatieve veld in een liggende positie met strengen van tape.</li>
	<li>Schrob de operatieve veld driemaal met chloorhexidine gedrenkte gauzes.</li>
	<li>Een middellijn abdominale incisie uitvoeren met de bilaterale subcostal extensie met behulp van schaar. Zachtjes exteriorize de ingewanden naar links met steriele katoen stokken, en wikkel ze in een bevochtigde gaas. Til de xyphoid cranially met een mosquito klem te zorgen voor maximale blootstelling van de buikholte voor de volgende stappen.</li>
	<li>Met behulp van een 19 G naald, injecteren 400 µL van een steriele 1:4 heparine-natrium chloride oplossing voor heparinisation in de vena cava (IVC), inferior. Na het verwijderen van de naald, euthanaseren het dier door de exsanguination transecting van de aorta.</li>
	<li>Ontleden van de abdominale aorta tussen de oorsprong van de superieure mesenterische slagader en de recht nier slagader door zachtjes scheiden met behulp van de vezelig weefsel gebogen uiteinde pincet. Het ondermijnen van de aorta en bind het met een 8/0 zijde ligatuur.</li>
	<li>Het hepatoduodenal ligament, die tussen de postpyloric van de twaalfvingerige darm en de lever Hilus loopt identificeren. Verdeel de gal duct onder de ingang van de cystic buis na distale ligatuur, en zachtjes ontleden en transect de portal vein zo distally mogelijk om voldoende lengte voor het uitvoeren van de anastomosis in de ontvanger.</li>
	<li>Met behulp van gebogen uiteinde pincet, bot ontleden de abdominale aorta vanaf de vorige ligatuur (zie stap 1.6). Ondermijnen het periaortic weefsel met pincet gebogen uiteinde, binden met een 8/0 zijde ligatuur en het transect met een schaar.<ol>
		<li>Met behulp van bipolaire pincet, coaguleren van alle takken van de lumbale en de aorta transect met een schaar zo dicht mogelijk bij het middenrif, teneinde voldoende lengte voor vaartuig wapendrager. Transect eindelijk de reeds gebonden aorta boven de linker nier slagader.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Perfuse de alvleesklier met een spuit van de 19 G met 5 mL van histidine-tryptofaan-ketoglutarate perfusie oplossing van 4 ° C op een antegrade wijze via de abdominale aorta, totdat er een duidelijke afvalwater afkomstig van de ader van de portal. Toepassing van lage druk om te voorkomen dat de vorming van oedeem. Opmerking: Voer stappen 1.5 aan 1.9 op een snelle en gestandaardiseerde manier om te voorkomen dat vooringenomenheid door warme ischemische verslechtering van de herstelde prothese.</li>
	<li>Vervang de ingewanden in de peritoneale holte met behulp van steriele katoen stokken.</li>
	<li>Het gebruik van pincet gebogen uiteinde, naast de alvleesklier stapsgewijze vanaf de postpyloric twaalfvingerige darm en vooruit zich beweegt tot het bereiken van het ligament van Treitz. Voor deze stappen, avasculaire bindweefsel gebieden tussen de alvleesklier en de duodenale muur te herkennen.<ol>
		<li>Bot ontleden deze gebieden met behulp van gebogen uiteinde pincet om te isoleren van de "passerelle" schepen tussen de alvleesklier en de twaalfvingerige darm. Passeren van een ligatuur 8/0 zijde rond elke geïsoleerde vasculaire structuur en binden.</li>
		<li>Ten slotte transect de vasculaire structuur met een schaar naar de duodenale muur. Op dezelfde manier, gebruik een 8/0 zijde Sutuur (geologie) te scheiden van de alvleesklier van de maag, het mesenterium en de transverse colon. Opmerking: Tijdens deze procedure, de choledocho-ductus pancreaticus is afgebonden.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Bepaal het gastrosplenic ligament loopt van de milt naar de maag, en de korte maag takken, door opheffing van de maag cranially en snijden met schaar. Laat de milt gekoppeld aan de herstelde prothese. Opmerking: Om te minimaliseren graft opwarmen, bevloeiing van de alvleesklier continu gebruik maakt van een 10 mL injectiespuit met een naald 19 G met de oplossing van de koude histidine-tryptofaan-ketoglutarate perfusie opgeslagen op ijs.</li>
	<li>Tenslotte, verwijderen van de alvleesklier van de donor-site (figuur 1B) door het grijpen van de milt met een tang, en breng dit in de ontvanger.<ol>
		<li>Als alternatief, om te leiden tot ernstige ischemie-reperfusie letsel, opslaan u de prothese in steriele, 4 ° C perfusie oplossing voor 16 h voordat het implanteren van het in de ontvangende dier.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
2. ontvangende voorbereiding
<ol>
	<li>Anesthetize de geadresseerden dier met een i.p. injectie van xylazine (5 mg/kg lichaamsgewicht) en ketamine (100 mg/kg lichaamsgewicht) met behulp van een naald 27 G.</li>
	<li>De juiste laterale cervicale regio met behulp van een elektrisch scheerapparaat te scheren, en plaatst u de muisaanwijzer op de operatieve veld in een liggende positie. De muis gebruiken strengen van tape vast te stellen. Vermijd overstrekking van de voorste ledematen Voorkom afbreuk te doen aan de ademhaling.</li>
	<li>Schrob de operatieve veld drie keer met chloorhexidine gedrenkte gauzes.</li>
	<li>Het maken van een juiste paramedian, licht schuine huid incisie van de jugular incisie aan de juiste onderkaak hoek.</li>
	<li>Onverbloemd identificeren en mobiliseren van de laterale takken van het recht externe halsslagader. Hen met een bipolaire Tang coaguleren en transect hen met een schaar.</li>
	<li>Til de juiste kwab van de submandibulaire speekselklier cranially, identificeren van de vasculaire stam en uitbranden met behulp van bipolaire pincet. Verwijder de kwab door transecting van de cauterized stam met een schaar.</li>
	<li>In analogie met stap 2.5, identificeren alle mediale takken van de externe halsslagader en toeschroeien hen met een bipolaire Tang transect hen met een schaar.</li></ol>De externe halsslagader ondermijnen met gebogen uiteinde pincet zo cranially mogelijk en het afbinden met twee 8/0 zijde ligaturen, genoeg ruimte tussen de ligaturen verlaat.
	<li>Transect de externe halsslagader tussen de twee eerder geplaatste ligaturen met rechte schaar.</li>
	<li>Passeren van de proximale einde van de externe halsslagader via de polyethyleen manchet (inwendige diameter van 0,75 mm, buitendiameter van 0.94 mm) en het handvat van de manchet vast met een klem veneuze microhemostat.</li>
	<li>Verwijder de band aan het eind van het vaartuig stomp en evert van het schip over de manchet. Het herstellen van de everted ader op de manchet met een cirkelvormige 8/0 - zijde ligatuur (figuur 1A).</li>
	<li>Proximally en distally toeschroeien het oppervlakkige deel van de juiste sternocleidomastoideus spier, het transect met een schaar, en verwijderen.</li>
	<li>Zachtjes mobiliseren de gemeenschappelijke halsslagader, ondermijnen het hieronder de bifurcatie en afbinden het tweemaal, om ervoor te zorgen niet te binden de carotis bifurcatie. Snijd het schip tussen de banden.</li>
	<li>Vergelijkbaar met de stap van 2.9, passeren de proximale einde van de gemeenschappelijke halsslagader via de polyamide manchet (binnendiameter van 0,57 mm, buitendiameter van 0.6 mm) en repareren met een arteriële microvasculaire klem.</li>
	<li>Verwijder de ligatuur aan het einde van de vasculaire stomp, en zachtjes verbreden de lumen met behulp van vaartuig dilatators. Evert van het schip over de arteriële manchet, en repareren met een 8/0 zijde ligatuur (figuur 1A).</li>

3. implantatie
<ol>
	<li>Plaats de prothese in de geadresseerde nek regio met behulp van de milt als een handvat, met het hoofd georiënteerde lateraal, de staart, met inbegrip van de milt mediaal en de vaartuig stompen ventro-caudally. Gebruik katoenen stokken te plaatsen van de prothese goed.</li>
	<li>Trek voorzichtig aan de portal ader van de alvleesklier prothese over van het ontvangende dier externe halsslagader, die heeft al eerder everted, en vast op de juiste manchet (zie stap 2.10). Repareren met een cirkelvormige zijde ligatuur van de 8/0.</li>
	<li>Trek de stronk van de abdominale aorta van de prothese over de everted gemeenschappelijke halsslagader van het ontvangende dier. Repareren met een ze 8/0 zijde ligatuur (Figuur 1 c).</li>
	<li>Identificeren van de milt schepen dichtbij de Hilus van de milt, en hen met een gebogen uiteinde Tang ondermijnen. Bind ze met 8/0 zijde ligaturen en transect de milt schepen om te verwijderen van de milt. Tot slot, het verkorten van de banden.</li>
	<li>Eerst de klem op de veneuze manchet met behulp van een klem Tang toepassen, verwijderen. Verwijder de arteriële klem. Opmerking: Als de transplantatie is gelukt, de alvleesklier prothese zal worden reperfused onmiddellijk toont een homogene roze kleur en zichtbaar arteriële pulsatie (Figuur 1 d).</li>
	<li>Bevochtig de prothese met normothermic zoutoplossing.</li>
	<li>Verwijder het handvat van de veneuze manchet met behulp van rechte pincet.</li>
	<li>Sluit de chirurgische wond met een lopend 6/0 hechtdraad.</li>
</ol>
4. de postoperatieve zorg (eindpunt)
<ol>
	<li>Na de procedure, tot 0,5 mL van normale zout subcutaan van toepassing zijn (SC) voor vervanging van intraoperatieve vochtverlies met behulp van een naald 19 G.</li>
	<li>Houd het ontvangende dier op een verwarming pad tot volledig herstel van de anesthesie.</li>
	<li>Eenmaal wakker is, keren de ontvangende dier naar de huisvesting faciliteit, waar het kan hebben voedsel en water ad libitum.</li>
	<li>Om te voorkomen dat postoperatieve pijn, beheren direct na de operatie (1) Buprenorphin (0,1 mg/kg b.w.) elke 12 h voor de eerste 5 dagen en b.w. van (2) carprofen 4 mg/kg elke 12 h s.c. voor de eerste week.</li>
	<li>Om te kunnen inschatten van goede voeding inname, toezicht op gewicht (g) van elke geadresseerde dier elke dag. Een gewichtsverlies van meer dan 10-15% ten opzichte van gewicht op de dag van de operatie, apathie, verlammende, een zeer gebogen rug, evenals chirurgische kant infecties vertegenwoordigen eindpunten.<ol>
		<li>In dit geval, evenals na het bereiken van klinisch eindpunt, offeren het dier met behulp van terminal Isofluraan inademing.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

<ol><li>Gruessner, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((2011+update+on+pancreas+transplantation%3A+comprehensive+trend+analysis+of+25%2C000+cases+followed+up+over+the+course+of+twenty-four+years+at+the+International+Pancreas+Transplant+Registry+%28IPTR%29%5BTitle%5D)+AND+%22Rev+Diabet+Stud%22%5BJournal%5D)">2011 update on pancreas transplantation: comprehensive trend analysis of 25,000 cases followed up over the course of twenty-four years at the International Pancreas Transplant Registry (IPTR).</a> Rev Diabet Stud. 8 (1), 6-16 (2011).</li>
<li>Troppmann, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complications+after+pancreas+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Organ+Transplant%22%5BJournal%5D)">Complications after pancreas transplantation.</a> Curr Opin Organ Transplant. 15 (1), 112-118 (2010).</li>
<li>Fernández-Cruz, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Native+and+graft+pancreatitis+following+combined+pancreas-renal+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Surg%22%5BJournal%5D)">Native and graft pancreatitis following combined pancreas-renal transplantation.</a> Br J Surg. 80 (11), 1429-1432 (1993).</li>
<li>Eltzschig, H. K., Eckle, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ischemia+and+reperfusion-from+mechanism+to+translation%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Ischemia and reperfusion-from mechanism to translation.</a> Nat Med. 17 (11), 1391-1401 (2011).</li>
<li>Konigsrainer, A., Habringer, C., Krausler, R., Margreiter, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+technique+of+pancreas+transplantation+in+the+rat+securing+pancreatic+juice+for+monitoring%5BTitle%5D)+AND+%22Transpl.+Int%22%5BJournal%5D)">A technique of pancreas transplantation in the rat securing pancreatic juice for monitoring.</a> Transpl. Int. 3 (3), 181-182 (1990).</li>
<li>Lee, S., Tung, K., Koopmans, H., Chandler, J., Orloff, M. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/4552365">Pancreaticoduodenal transplantation in the rat.</a> Transplantation. 13 (4), 421-425 (1972).</li>
<li>Tori, M., Ito, T., Matsuda, H., Shirakura, R., Nozawa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Model+of+mouse+pancreaticoduodenal+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Model of mouse pancreaticoduodenal transplantation.</a> Microsurgery. 19 (2), 61-65 (1999).</li>
<li>Oberhuber, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+cervical+heart+transplantation+model+using+a+modified+cuff+technique%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Murine cervical heart transplantation model using a modified cuff technique.</a> J Vis Exp. (92), e50753(2014).</li>
<li>Brandacher, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tetrahydrobiopterin+compounds+prolong+allograft+survival+independently+of+their+effect+on+nitric+oxide+synthase+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Tetrahydrobiopterin compounds prolong allograft survival independently of their effect on nitric oxide synthase activity.</a> Transplantation. 81 (4), 583-589 (2006).</li>
<li>Zou, Y., Brandacher, G., Margreiter, R., Steurer, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cervical+heterotopic+arterialized+liver+transplantation+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">Cervical heterotopic arterialized liver transplantation in the mouse.</a> J Surg Res. 93 (1), 97-100 (2000).</li>
<li>Zhou, Y., Gu, X., Xiang, J., Qian, S., Chen, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparative+study+on+suture+versus+cuff+anastomosis+in+mouse+cervical+cardiac+transplant%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Clin+Transplant%22%5BJournal%5D)">A comparative study on suture versus cuff anastomosis in mouse cervical cardiac transplant.</a> Exp Clin Transplant. 8 (3), 245-249 (2010).</li>
<li>Liu, X. Y., Xue, L., Zheng, X., Yan, S., Zheng, S. S. <a target="_blank" href="http://www.hbpdint.com/EN/abstract/abstract2949.shtml">Pancreas transplantation in the mouse.</a> Hepatobiliary Pancreat Dis Int. 9 (3), 254-258 (2010).</li>
<li>Maglione, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Donor+pretreatment+with+tetrahydrobiopterin+saves+pancreatic+isografts+from+ischemia+reperfusion+injury+in+a+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Transplant%22%5BJournal%5D)">Donor pretreatment with tetrahydrobiopterin saves pancreatic isografts from ischemia reperfusion injury in a mouse model.</a> Am J Transplant. 10 (10), 2231-2240 (2010).</li>
<li>Drognitz, O., Obermaier, R., von Dobschuetz, E., Pisarski, P., Neeff, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pancreas+transplantation+and+ischemia-reperfusion+injury%3A+current+considerations%5BTitle%5D)+AND+%22Pancreas%22%5BJournal%5D)">Pancreas transplantation and ischemia-reperfusion injury: current considerations.</a> Pancreas. 38 (2), 226-227 (2009).</li>
<li>White, S., Shaw, J., Sutherland, D. <a target="_blank" href="http://www.thelancet.com/journals/lancet/article/PIIS0140-6736(09)60609-7/abstract">Pancreas transplantation.</a> Lancet. 373 (9677), 1808-1817 (2009).</li>
<li>Morath, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+pancreas-kidney+transplantation+in+type+1+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Transplant%22%5BJournal%5D)">Simultaneous pancreas-kidney transplantation in type 1 diabetes.</a> Clin Transplant. 23 (Suppl 21), 115-120 (2009).</li>
<li>Perseghin, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cross-sectional+assessment+of+the+effect+of+kidney+and+kidney-pancreas+transplantation+on+resting+left+ventricular+energy+metabolism+in+type+1+diabetic-uremic+patients%3A+a+phosphorous-31+magnetic+resonance+spectroscopy+study%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Coll+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Cross-sectional assessment of the effect of kidney and kidney-pancreas transplantation on resting left ventricular energy metabolism in type 1 diabetic-uremic patients: a phosphorous-31 magnetic resonance spectroscopy study.</a> J Am Coll Cardiol. 46 (6), 1085-1092 (2005).</li>
<li>Secchi, A., Caldara, R., La Rocca, E., Fiorina, P., Di Carlo, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiovascular+disease+and+neoplasms+after+pancreas+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Cardiovascular disease and neoplasms after pancreas transplantation.</a> Lancet. 352 (9121), 65(1998).</li>
<li>Kirk, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crossing+the+bridge%3A+large+animal+models+in+translational+transplantation+research%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol+Rev%22%5BJournal%5D)">Crossing the bridge: large animal models in translational transplantation research.</a> Immunol Rev. 196, 176-196 (2003).</li>
<li>de Jong, M., Maina, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Of+mice+and+humans%3A+are+they+the+same%3F--Implications+in+cancer+translational+research%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nucl+Med%22%5BJournal%5D)">Of mice and humans: are they the same?--Implications in cancer translational research.</a> J Nucl Med. 51 (4), 501-504 (2010).</li>
<li>Niimi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+technique+for+heterotopic+cardiac+transplantation+in+mice%3A+experience+of+3000+operations+by+one+surgeon%5BTitle%5D)+AND+%22J+Heart+Lung+Transplant%22%5BJournal%5D)">The technique for heterotopic cardiac transplantation in mice: experience of 3000 operations by one surgeon.</a> J Heart Lung Transplant. 20 (10), 1123-1128 (2001).</li>
<li>Maglione, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+technique+for+heterotopic+vascularized+pancreas+transplantation+in+mice+to+assess+ischemia+reperfusion+injury+and+graft+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Surgery%22%5BJournal%5D)">A novel technique for heterotopic vascularized pancreas transplantation in mice to assess ischemia reperfusion injury and graft pancreatitis.</a> Surgery. 141 (5), 682-689 (2007).</li>
<li>Cardini, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crucial+role+for+neuronal+nitric+oxide+synthase+in+early+microcirculatory+derangement+and+recipient+survival+following+murine+pancreas+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Crucial role for neuronal nitric oxide synthase in early microcirculatory derangement and recipient survival following murine pancreas transplantation.</a> PLoS One. 9 (11), e112570(2014).</li>
<li>Maglione, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevention+of+lethal+murine+pancreas+ischemia+reperfusion+injury+is+specific+for+tetrahydrobiopterin%5BTitle%5D)+AND+%22Transpl+Int%22%5BJournal%5D)">Prevention of lethal murine pancreas ischemia reperfusion injury is specific for tetrahydrobiopterin.</a> Transpl Int. 25 (10), 1084-1095 (2012).</li>
</ol>

De auteurs verklaren dat zij geen concurrerende financiële belangen hebben.

IRI-geassocieerde transplantaat schade is inherent aan de solide orgaantransplantatie, en het wordt gekenmerkt door een verstoring van de microcirculatie. Accumulatie van metabolieten van de verscheidene tijdens de ischemische fase, en tijdens het initiëren van inflammatoire cascades stroomt voornamelijk door reactieve zuurstof en stikstof soorten bemiddelde, resulteert in weefselschade tijdens graft reperfusie4. Deze cascade niet alleen op korte termijn, maar ook op lange termijn succes in gevaar kan brengen en, vandaar, aanzienlijk beïnvloedt patiënten overleven14. Tot op heden, vertegenwoordigt gecombineerde niertransplantatie alvleesklier de therapie van keuze voor patiënten met type 1 diabetes met einde fase nierziekte15. Verschillende studies hebben aangetoond dat een succesvolle gecombineerde alvleesklier niertransplantatie niet alleen herstellen en beschermen van graft nierfunctie in diabetische ontvangers, maar ook stabiliseert of zelfs omkeert secundaire complicaties waaronder neuropathie, evenals micro- en macroangiopathy16,17,18.
Ondanks de voortdurende inspanningen in vermindering, vervanging en verfijning (3 R's) in dierlijke onderzoek is de reproductie van complexe pathofysiologische processen zoals IRI alleen onmogelijk in in vitro -instellingen. Daarom, dierlijke modellen zijn nog steeds beschouwd als de ideale tool voor translationeel onderzoek19,20. Muismodellen zoals hier beschreven hebben verschillende voordelen in vergelijking met rat of ander dier modellen. Het gaat hierbij om de beschikbaarheid van een enorme hoeveelheid genetisch welomschreven ingeteelde muis stammen (zoals transgene en knock-out-stammen), een overvloed van moleculaire analyse-instrumenten, evenals een gemakkelijke en goedkope behandeling van21. Een groot voordeel van het beschreven model ligt in de techniek van niet-hechtdraad manchet. Met behulp van de hierin gepresenteerde techniek, slagingspercentages van &#62; 90% zijn haalbaar, die is dramatisch beter in vergelijking met eerder beschreven modellen22. Met behulp van deze techniek niet-hechtdraad, verminderd wij gemeenschappelijk complicaties zoals trombose, hypovolemische shock en stenose van de anastomoses12aanzienlijk. Een ander voordeel van deze methode bestaat uit de extra abdominale positie van de prothese, die geassocieerd met snelle postoperatieve terugwinning van de ontvanger wordt. Bovendien, maakt de cervicale locatie het uitermate geschikt voor in vivo analyses, zoals live beeldvorming van de prothese door exterioration zonder enige spanning22.
Het grootste nadeel van dit model is de occlusie van de ductus pancreaticus, die niet lijken op klinische realiteit. In dit model wordt exocrine drainage beheerd door de choledocho-ductus pancreaticus koppelverkoop. In de lange termijn resulteert dit in een gemarkeerde fibrose en atrofie van de klier zonder leidt tot het enten van pancreatitis22. Als gevolg van deze verslechtering van de exocrine weefsel, dat we zo vroeg waargenomen als op dag 30 na de transplantatie, zijn wij van mening dat dit model niet voor de lange termijn waarneming geschikt is. In tegenstelling, maakt de onberispelijke endocriene functie gylcemic controles van de ontvanger een eenvoudig hulpmiddel voor dagelijkse beoordeling van de functie van het transplantaat13,23,24.
Deze kenmerken maakt dit een ideaal model voor het analyseren van de vroege graft verwondingen die hoort bij lang behoud periodes of met behoud van de verschillende oplossingen en technieken. Om te bereiken optimale succes met dit model, moeten verschillende essentiële stappen worden beschouwd. De alvleesklier zelf is zeer vatbaar voor manipulatie. Daarom, zachte behandeling met behulp van katoen stokken tijdens het herstel van het orgel en tijdens implantatie minimaliseert mechanische trauma. Direct grijpen van de klier met een tang moet worden vermeden, omdat dit onvermijdelijk leiden ernstige graft schade tot zou. Om dezelfde reden, de milt wordt teruggewonnen samen met de alvleesklier, en wordt gebruikt als een handvat. Dit is ook gevestigd in de klinische praktijk. Een verdere valkuil houdt koude perfusie, die wordt bereikt door perfusie via de aorta stomp met behulp van 4 ° C histidine-tryptofaan-ketoglutarate perfusie oplossing. Hierbij kan een overmatige zwelling van de klier worden vermeden door zachtjes zoogdierlevercellen de prothese. De resterende perfusie oplossing moet worden gebruikt voor het bevochtigen van de prothese, om de temperatuur laag te houden tijdens het herstel van het orgel.
Met betrekking tot geadresseerde voorbereiding stelt een zorgvuldige dissectie van zowel de externe halsslagader, alsmede de gemeenschappelijke halsslagader de basis voor succesvolle revascularisation. Bepaald, compleet blootstelling van de ader door het verwijderen van niet alleen alle zijrivieren, maar ook de omliggende vetweefsel, is nodig om te voorkomen dat externe compressie en stenose door resterende vetweefsel. De selectie van de juiste manchet diameters is van cruciaal belang. Gebaseerd op gedeelde ervaring, voor muizen met een gewicht van 25 tot en met 28 g, is een inwendige diameter van 0,57 mm voor de arteriële manchet, en tussen 0,75 en 0,8 mm voor de veneuze manchet, passend. Nauwkeurige, schone snijden van de randen van de manchetten is verplicht om te voorkomen dat het scheuren van het vaartuig stomp. Torsie van de vaartuigen, met name van de slagader, wordt best bereikt met behulp van vaartuig dilatators met fijne tips. Als een vuistregel moet het schip kunnen verbreden tot tweemaal het lumen van de manchet. Tijdens het proces van everting van het schip en vaststelling van het op de manchet, is het raadzaam de vasculaire klemmen te stabiliseren door ze te plaatsen onder een klep van huid, zoals dit deze cruciale stap vergemakkelijkt.
Zoals reeds vermeld, de niet-hechtdraad manchet-techniek vertegenwoordigt een eenvoudige methode voor vasculaire anastomose en kan worden uitgevoerd binnen 5 min. Juiste positionering van de prothese in de geadresseerde nek regio is echter van het grootste belang voor de juiste revascularisatie. Hierbij moet de definitieve juiste positionering van de prothese in de nek regio worden verwacht, zodat een veilige, rechte en spanningsvrije wapendrager van zowel de ader en de slagader. Vaartuigen die te lang moeten vermeden worden, omdat dit tot belemmering van de uitstroom te wijten aan het knikken leiden kan. Om dezelfde reden moet ook de manchet-greep op de veneuze wapendrager worden verwijderd na reperfusie. In geval van gelokaliseerde bloedingen uit de alvleesklier prothese, worden succesvolle hemostase bereikt door te zachtjes comprimeren van de bloedende zijde voor 5 min met behulp van katoen stokken. Dit is de enige succesvolle manier om dit soort complicatie beheren.Cauterisatie, hoewel zeer selectief, resulteerde in graft verlies in bijna alle gevallen, als gevolg van necrotisch pancreatitis.
In samenvatting ontwikkelden we een methode voor het pancreas transplantatie in muizen met behulp van een niet-hechtdraad manchet-techniek, die is technisch en microsurgically haalbaar en heeft uitstekende slagingspercentages. Gezien de progredient fibrose van de alvleesklier te wijten aan de buis occlusie, is dit model geschikt beste voor onderzoeksgebieden gericht op vroege transplantaat schade. Dit manuscript is bedoeld om onderzoekers veilig om dit model in hun laboratoria.

Gelijktijdige nier-pancreas transplantatie (SPK) vertegenwoordigt de huidige standaard van zorg voor patiënten die lijden aan diabetes mellitus en einde fase nierziekte. Succesvolle transplantatie resulteert in langdurige insuline onafhankelijkheid stabilisatie of zelfs regressie van diabetische microangiopathie en een betere levenskwaliteit1gekoppeld. Echter, in tegenstelling tot andere gemeenschappelijke solide orgaantransplantaties, zoals nier- en lever transplantatie, alvleesklier transplantaties zijn vatbaarder voor ischemie-reperfusie letsel (IRI). Gemelde gevallen van maximaal 35% in gevaar brengen niet alleen graft, maar zelfs patiënt, overleven2,3.
Oxidatieve stress, microcirculatory stoornissen, verhoogd expressie van pro-ontsteking cytokinen en celadhesie-moleculen als gevolg ten slotte in endotheel activering en verlies van de integriteit, zijn al toegeschreven aan deze niet-allogene transplantaat schade 4. tot nu toe de exacte moleculaire mechanismen van IRI zijn grotendeels onbekend en kan variëren van orgaan naar orgaan.
Ondanks grote vooruitgang is geboekt met behulp van in vitro modellen, is de ontwikkeling van diermodellen cruciaal voor het verdiepen van de kennis van moleculaire mechanismen die betrokken zijn bij graft IRI-geassocieerde veranderingen na transplantatie van de alvleesklier. Verschillende pancreas transplantatie modellen zijn ontwikkeld in knaagdieren5,6, maar slechts een wordt gemeld in muizen7. De achilleshiel van deze veeleisende microchirurgische procedure is het laag overlevingspercentage van 46%. Muismodellen vormt echter het beste model voor transplantatie-onderzoek, omdat het breedste scala aan hulpmiddelen voor moleculaire analyse kan worden toegepast op hen. Op basis van uitgebreide microchirurgische ervaring in muizen met verschillende orgel transplantaties8,9,10, ontwikkeld wij een nieuwe, zeer reproduceerbaar techniek voor heterotopic, cervicale alvleesklier transplantatie in muizen met &#62; 90% slagingspercentage met behulp van een niet-hechtdraad manchet-techniek. Met deze techniek, anastomoses-gerelateerde complicaties worden verlaagd tot een minimum, en een hoog slagingspercentage kan worden bereikt ten opzichte van de hechtdraad model11. Tot nu toe is slechts één muismodel met soortgelijke slagingspercentages beschreven door Liu et al.12. Er zijn echter geen studies gepubliceerd met behulp van dit model tot nu toe.

<table><tbody><tr><td>Adventitia Scissors</td><td>S&amp;T</td><td>S-00102</td><td>Straight</td></tr><tr><td>Dumont # 7 Forceps</td><td>FST</td><td>&nbsp;11271- 30</td><td>Curved Tip 0.17 x 0.1 mm</td></tr><tr><td>Yasargil Clip Mini Permanent 7mm</td><td>Aesculap</td><td>FE720K</td><td></td></tr><tr><td>Micro vessel clip</td><td>S&amp;T</td><td>B1 00396 V</td><td></td></tr><tr><td>Vessel dilatator</td><td>S&amp;T</td><td>D-5a.2, 00125</td><td></td></tr><tr><td>Clip applier</td><td>S &amp; T</td><td>CAF-4 00072</td><td>voor veneuze manchet</td></tr><tr><td>Clip applier</td><td>Aesculap</td><td>FE572K&nbsp;</td><td>voor de arteriële manchet</td></tr><tr><td>Polyethyleenbuis</td><td>Portex Ltd</td><td></td><td>Binnendiameter 0,75 mm voor veneuze manchet</td></tr><tr><td>Polymide buis</td><td>Vention Medical&nbsp;</td><td>141-0051</td><td>Binnendiameter 0,8 mm (Alternatief voor polyethyleenbuis van Portex Ltd)</td></tr><tr><td>Polymide buis</td><td>Vention Medical</td><td>141-0033</td><td>Binnendiameter 0,57 mm voor arteriële manchet</td></tr><tr><td>Bipolare pincet</td><td>Micromed</td><td>140-100-015</td><td></td></tr><tr><td>8/0 zijden ligaturen</td><td>Catgut GmbH, Merkuramed</td><td>17209008</td><td></td></tr><tr><td>Custodiol HTK-oplossing</td><td>Dr. Franz K&ouml;hler Chemie</td><td>59997</td><td></td></tr><tr><td>Ketamin Graeub</td><td>aniMedica GmbH</td><td>32554</td><td></td></tr><tr><td>Xylasol Graeub</td><td>aniMedica GmbH</td><td>50855</td><td></td></tr></tbody></table>

muismodel voor pancreas transplantatie met behulp van een gemodificeerde manchet techniek

Mouse Model for Pancreas Transplantation Using a Modified Cuff Technique

Muismodellen hebben verschillende voordelen in transplantatie-onderzoek, met inbegrip van eenvoudige bediening, een scala aan genetisch welomschreven stammen en de beschikbaarheid van de breedste waaier van moleculaire sondes en reagentia in vivo evenals om in te voeren vitro studies. Gebaseerd op onze ervaring met diverse lymfkliertest transplantatie modellen, ontwikkeld wij een heterotopic pancreas transplantatie model in muizen met de bedoeling te analyseren van de mechanismen die ten grondslag liggen aan de ernstige ischemie reperfusie letsel-geassocieerde vroege transplantaat schade. In tegenstelling tot eerder beschrijven beschreven technieken met behulp van de hechtdraad technieken, hierin we een nieuwe procedure met behulp van een niet-hechtdraad manchet-techniek.
In de afgelopen jaren, we hebben uitgevoerd meer dan 300 alvleesklier transplantaties in muizen met een algehele slagingspercentage van &gt; 90%, een slagingspercentage nooit voordien beschreef in muis pancreas transplantatie. De ruggengraat van deze niet-hechtdraad manchet techniek voor graft revascularisatie bestaat uit twee hoofdstappen: (I) trekken van het ontvangende vaartuig over een polyethyleen/polyamide manchet en vaststelling van het met een ligatuur van ze, en (II) het donor-schip te plaatsen over de everted ontvangende vaartuig en de vaststelling van het met een tweede ze ligatuur. De resulterende continuïteit van het endotheel laag resulteert in minder thrombogenic laesies met hoge bij tarieven en, ten slotte, hoge slagingspercentages.
In dit model, wordt arteriële anastomose bereikt door het trekken van de abdominale aorta van de donor prothese over de everted gemeenschappelijke halsslagader van het ontvangende dier. Veneuze drainage van de prothese wordt bereikt door de portal ader van de prothese trekken over de everted externe halsslagader van de ontvanger. Dit manuscript biedt details en cruciale stappen van het orgel herstel en orgel implantatie procedures, waardoor onderzoekers met microchirurgische vaardigheden voor het uitvoeren van de transplantatie met succes in hun laboratoria.

In het afgelopen decennium, hebben we meer dan 300 alvleesklier transplantaties uitgevoerd in muizen. Na vaststelling van het protocol, was er een algehele overleving van &#62; 90%. Postoperatieve bloeden was de belangrijkste oorzaak voor mislukking, gevolgd door graft trombose met latere dodelijke necrotische graft pancreatitis. In beide gevallen eindpunten waren bereikt binnen de 24u en dieren werden geofferd. Er waren niet alle neurologische aandoeningen, de symptomen zoals dysfagie, en chirurgische kant infecties in deze serie.
Om te onderzoeken de endocriene functie van de getransplanteerde transplantaten, en vandaar de bij van het model te valideren, hyperglycemie was geïnduceerd in ontvangende muizen door voorbehandeling met een enkelvoudige dosis van intraperitoneally toegepaste streptozotocin (312.5 mg/kg lichaamsgewicht) 4 dagen voor de ingreep. Muizen werden beschouwd als hyperglycemic als bloed glucoseniveaus waren &#62; 300 mg/dL. Figuur 2A toont de niveaus van de glucose van het bloed van de verschillende groepen. Muizen ontvangen van transplantaten zonder een langdurige koude ischemie tijd van 16 h normogylcemia binnen de 24u na transplantatie bereikte, en deze metabole toestand over de volledige observatieperiode gehandhaafd. Daarentegen bleef niet-getransplanteerde dieren hyperglycemic. Aangezien we geïnteresseerd in het effect van ischemie-reperfusie transplantaat schade-geassocieerde schade op de endocriene functie waren, wij een derde groep waar transplantaten werden blootgesteld aan 16 h langdurige koude ischemie tijd (CIT) en 45 min van warme ischemie tijd (WIT) toegevoegd. Muizen ontvangen deze protheses haalde niet normoglycemia en moesten worden opgeofferd na 48 h toe te schrijven aan de ontwikkeling van ernstige pancreatitis, waarvan werd aangetoond dat dodelijk in dit model13.
Dit model is handig voor diverse projecten gericht op het onderzoeken van ischemie reperfusie letsel-geassocieerde vroege transplantaat schade. Verdere onderzoeken opgenomen, o.a. confocale intravital fluorescentie microscopie voor kwantificering van microcirculatory verstoringen uitgevoerd 2 h na transplantatie. Contrast van de transplantaten microvessels werd versterkt door het injecteren van 0.3 mL van een 0,4% fluoresceïne-isothiocyanaat-geëtiketteerden dextran (MW 150 000 bijvangsten) in de penile ader. Figuur 2B weergeeft een regelmatige capillaire patroon van een naïef lymfkliertest alvleesklier en van een getransplanteerde alvleesklier prothese, die niet werd blootgesteld aan langdurige CIT (figuur 2C). In tegenstelling, kunt figuur 2D zo de uitsplitsing van de microcirculatie als gevolg van de alvleesklier prothese aan langdurige CIT. bloot
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/54998/54998fig1.jpg"> 
Figuur 1 : Intraoperatieve afbeeldingen. (A) intraoperatieve weergave van de ontvangende vaartuigen wapendrager voorbereid. De externe halsslagader (1) is everted over de veneuze polyethyleen manchet en vast met een cirkelvormige zijde ligatuur van de 8/0. De gemeenschappelijke halsslagader (2) is in analogie, everted en vaste in de kleinere arteriële polyamide manchet. Schaal bar 1 mm. (B) de alvleesklier graft ex situ. De portal-ader (1) en de stronk van de abdominale aorta (2) die nodig zijn voor vasculaire anastomose. De milt (3) samen met de alvleesklier wordt opgehaald en wordt gebruikt als een handvat. De milt zal worden verwijderd voordat reperfusie van de prothese. Schaal bar 1 cm. (C) intraoperatieve weergave van de anastomoses. De portal-ader (1) is getrokken over de manchet van de everted externe halsslagader (2) en vaste met een cirkelvormige 8/0 zijden stropdas. Ook wordt de aorta stronk van de abdominale aorta (3) getrokken over de manchet van de everted gemeenschappelijke halsslagader (4). Schaal bar 1 mm. (D) intraoperatieve weergave van de perfused alvleesklier prothese na 5 min reperfusie: na verwijdering van de ader, gevolgd door de arteriële klem, een succesvol getransplanteerde alvleesklier graft een homogene roze kleur weergegeven. De milt is verwijderd voordat reperfusie (1: ligaturen milt schip). Schaal bar 1 cm. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54998/54998fig1large.jpg" target="_blank">Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/54998/54998fig2.jpg"> 
Figuur 2 : Endocriene functie van de alvleesklier prothese en confocale in vivo fluorescentie microscopie. Figuur 2A toont een lijndiagram met de niveaus van de glucose van het bloed van getransplanteerde Muizen zonder CIT (n = 10, PTX w/o CIT, blauwe lijn), niet-getransplanteerde muizen (n = 11, geen PTX, rode lijn), en muizen ontvangen van transplantaten blootgesteld aan langdurige CIT (PTX + 16 h CIT, n = 10, groene lijn). Alle ontvangers waren eerder verleende hyperglycemic met 312.5 mg/kg b.w. streptozotocin i.p. Terwijl alle ontvangers van transplantaten zonder CIT overleven de volledige observatieperiode (50 dagen) met intact endocriene functie konden, bleef niet-getransplanteerde muizen de hyperglycemic over de volledige observatieperiode. Muizen ontvangen van transplantaten blootgesteld aan 16 h CIT deed niet herstellen van hyperglycemie en moest worden opgeofferd 48 h na de chirurgie van de haartransplantatie, als gevolg van verlies van het gewicht van meer dan 10-15%. Muizen overleven de volledige observatieperiode werden opgeofferd ten dage 50 na een laatste meting van de glycemia. Microcirculatie in getransplanteerde transplantaten werd beoordeeld door confocale intravital fluorescentie microscopie 2 h na transplantatie. Naïef alvleesklier diende als besturingselementen. Figuur 2B bevat een regelmatige capillaire patroon in de alvleesklier naïef. Een regelmatige capillaire gaas is ook gezien in getransplanteerde transplantaten niet onderworpen aan langdurige CIT (figuur 2C). Daarentegen is een uitsplitsing van de microcirculatie in getransplanteerde transplantaten blootgesteld aan langdurige CIT (figuur 2D) waargenomen. Schaal bar 100 µm. gegevens in de grafiek worden uitgedrukt als ± standaardafwijking. PTX: pancreas transplantatie; CIT: koude ischemie tijd; w/o: zonder <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54998/54998fig2large.jpg" target="_blank">Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.</a>

Onder buik solide orgaantransplantatie zijn alvleesklier transplantaties gevoelig voor het ontwikkelen van ernstige ischemie reperfusie letsel-geassocieerde transplantaat schade, leidt uiteindelijk tot vroege prothese verlies. Dit protocol beschrijft een model van lymfkliertest pancreas transplantatie met behulp van een niet-hechtdraad manchet techniek, bij uitstek geschikt voor het analyseren van deze vroege, schadelijke schadevergoeding.

Muismodel voor Pancreas transplantatie met behulp van een gemodificeerde manchet techniek

Mouse models have several advantages in transplantation research, including easy handling, a variety of genetically well-defined strains, and the ...

Mijn naam is Benno Cardini, van het Daniel Swarovski Research Laboratory van de Afdeling Viscerale, Transplantatie- en Thoracale Chirurgie van de Medische Universiteit Innsbruck. Vandaag tonen we u een muismodel voor pancreas transplantatie met behulp van een gemodificeerde cuff-techniek. Anestheseer het donordier met een intraperitonele injectie van ketamine en xylazine en scheer de abdominale regio.Plaats vervolgens de ontvanger in rugligging op een operatieveld en desinfecteer het operatiegebied drie keer met chloorhexidine. Voer nu een mediane laparotomie uit van de pubregio tot het xifoïdproces en vergroot de incisie subcostaal aan beide zijden om een beter zicht op het operatieveld te verkrijgen. Exterioriseer vervolgens de viscera naar de linkerzijde en injecteer heparine in de vena cava infrarenaal.Identificeer in de volgende stap de aorta abdominalis proximaal van het kruispunt met de linker niervene, mobiliseer de aorta en bind deze op dat punt af. Ga nu naar de leverhilus, identificeer en disseceer de ductus choledochus dicht bij de lever en ligeer deze dicht bij de pancreas. Transecteer tot slot de ductus choledochus boven de ligatuur.Dissekeer vervolgens de vena portae dicht bij de lever om voldoende lengte te verkrijgen voor een veneuze anastomose. Als tip: laat een klein stukje lever aan de vena portae zitten voor een eenvoudigere identificatie op een later moment. Ondergraaf daarna de linker niervene in het periaortale weefsel en ligeer deze.Transecteer vervolgens de niervene en het periaortische weefsel, aan de rechterzijde van de ligatuur. Ontleed daarna de abdominale aorta stomp van de truncus coeliacus tot aan het diafragma, ondergraaf de aorta vlakbij het diafragma en transecteer deze op dat punt. Identificeer vervolgens alle lumbale takken, coaguleer deze en transecteer ze.Kruis nu de aorta door onder de eerder geplaatste ligatuur. Perfuseer nu de pancreas via de aortae-patch met ijskoude perfusie-oplossing tot er effluent uit de vena portae komt. Bovenaan is de geperfuseerde vena portae te zien en onderaan de geperfuseerde aorta.Plaats nu de viscera terug in de peritoneale holte en scheid de pancreas stapsgewijs van de darm met behulp van 8-0 zijden ligaturen. Begin bij de postpylorische regio, ontbind tweemaal het duodenum en trek een 8-0 zijden ligatuur erdoorheen. Ligeer dit vervolgens en scheid de pancreas scherp van het duodenum.Deze benadering wordt herhaaldelijk uitgevoerd tot het ligament van Treitz is bereikt. Het is essentieel om het duodenum niet te beschadigen, aangezien dit het transplantaat uit de experimenten zou sluiten vanwege mogelijke contaminatie. Nadat de pancreas volledig is gescheiden van het duodenum, gaat u over naar het mesenterium, prepareert u dit door het vrij te leggen, te liganen en vervolgens te transecteren.Scheid, analoog aan de vorige stappen, de pancreas van het colon transversum door deze te ondergraven, af te binden en vervolgens door te snijden. Scheid nu met dezelfde aanpak de pancreas van het galgebied door deze na ligatie scherp te dissecteren. Dissecteer vervolgens de pancreas stomp uit de maag.Identificeer de linkermaagslagader, ligeer deze en transecteer deze. Verwijder aan het einde de pancreas samen met de aangehechte milt en plaats deze in ijskoude reperfusie-oplossing tot aan de verdere implantatie. Gebruik de milt als houvast.Anestheseer, vergelijkbaar met de donor, het ontvangende dier met een intraperitonele injectie van ketamine en xylazine en scheer de cervicale regio. Plaats daarna het donor-dier in rugligging op het operatieveld en scrub de cervicale regio drie keer met chloorhexidine. Maak vervolgens een huidincisie vanaf de jugulaire incisie tot de rechter mandibulaire hoek.Identificeer vervolgens alle laterale takken van de rechter vena jugularis externa, mobiliseer deze, ontleed ze en verdeel ze na bipolaire coagulatie. Pak daarna de onderste pool van de rechter gland submandibularis vast, til deze craniaal op en dissecteer deze na bipolaire coagulatie van de voedingsvaten. Transecteer nu alle mediale takken van de rechter vena jugularis externa na bipolaire coagulatie.Ligeer de vena jugularis externa zo craniaal mogelijk op twee plaatsen en verdeel deze tussen de ligaturen. Leid het proximale uiteinde van de vena jugularis externa door een polyethyleenmanchet. Hierbij is het belangrijk dat het handvat van de manchet naar de opererende chirurg is gericht.Plaats als volgende stap de microvasculaire veneklem vanaf de laterale zijde. Bevochtig nu de vene met heparine, verwijder de ligatuur en trek de vene voorzichtig over de polyethyleenmanchet. Fixeer tenslotte de vene over de manchet met een circulaire 8-0 zijden ligatuur met één knoop aan de achterzijde en drie aan de voorzijde.Om toegang te krijgen tot de rechter arteria carotis communis, wordt de rechter musculus sternocleidomastoideus gemobiliseerd en doorgesneden na proximale en distale coagulatie. Mobiliseer vervolgens voorzichtig de arteria carotis communis, waarbij u er op let nabijgelegen structuren zoals de nervus vagus niet te beschadigen. Ligateer, analoog aan de vene, de arteria carotis communis tweemaal, zo craniaal mogelijk, en deel deze tussen de ligaturen.Haal het vat nu door de arteriële manchet. Fixeer tot slot de arteriële manchet met de microvasculaire klem, komend vanaf de mediale zijde. Verwijder vervolgens de ligatuur en verwijd het lumen van de arterie met behulp van vaatdilatatoren.Nadat het lumen voldoende is verbreed, trekt u de arterie over de arteriële manchet. Zet vervolgens, op analoge wijze als bij de vene, de arterie vast met de 8-0 zijden ligatuur. Hier ziet u de vene en de arterie die zijn voorbereid voor de arterioveneuze anastomose.Voor de implantatie wordt het transplantaat op een bevochtigd Ace in de cervicale regio geplaatst. Trek vervolgens de poortader door een 8-0 zijden ligatuurlus, kort de ader in voor een spanningsvrije anastomose en trek de poortader daarna over de veneuze manchet. Fixeer de ader tot slot met een circulaire 8-0 zijden ligatuur.Hanteer de aortastomp analoog aan de vene door deze door een ligatuurlus te leiden en de aorta te verkorten. Trek de aorta vervolgens over de arteriële manchet en fixeer deze tot slot met een circulaire 8-0 zijden ligatuur. Identificeer vóór de reperfusie de miltvaten, ligeer deze en ontleed ze vervolgens scherp om de milt te verwijderen.Verwijder voor de reperfusie eerst de veneuze klem, gevolgd door de arteriële klem. Een adequate reperfusie van het transplantaat is zichtbaar aan een pulsatie van de arterie en een roze kleur van het gehele transplantaat. Bevochtig het transplantaat met normothermische zoutoplossing.Verwijder vóór het sluiten van de wond de handgreep van de veneuze manchet om knikking van het vat te voorkomen. Sluit aan het einde de wond met een doorlopende hechting van 6-0 en injecteer subcutaan 0,5 milliliters normothermische zoutoplossing. Om het model te valideren, hebben we de endocriene functie van de getransplanteerde pancreas getest.Muizen werden hypoglycemisch gemaakt door voorbehandeling met streptozotocine vier dagen voor de operatie en werden als hypoglycemisch beschouwd indien de bloedglucosewaarden boven de 300 milligram percent lagen. Deze grafiek toont de bloedglucosewaarden van levende, niet-getransplanteerde controlemuizen in het rood, evenals die van ontvangers van grafts die niet waren blootgesteld aan een verlengde koude ischemietijd in het blauw. Daarnaast worden de bloedglucosewaarden van ontvangers van pancreastransplantaten die waren blootgesteld aan 16 uur koude ischemietijd in het groen weergegeven.Levende muizen bleven hypoglykemisch gedurende de gehele observatieperiode. In tegenstelling hiermee leidde transplantatie van pancreasgrrafts die niet waren blootgesteld aan een verlengde koude ischemietijd tot een normale glykemie binnen 24 uur, wat de endocriene functie van het graft bevestigde. Transplantatie van grafts die waren blootgesteld aan 16 uur koude ischemietijd herstelde de normale glykemie bij de ontvangers niet.Bovendien moesten in deze groep alle muizen binnen 48 uur worden geofferd vanwege vroege transplantaatschade geassocieerd met ischemie-reperfusieschade. In deze video hebben we een methode voor pancreastransplantatie bij muizen gepresenteerd met gebruik van een niet-gehechte cuff-techniek. Dit is technisch en microsurgisch haalbaar met uitstekende succespercentages.Gezien de progressieve fibrose van de pancreas door de occlusie van de ductus, zijn wij echter van mening dat dit model het meest geschikt is voor onderzoeksgebieden die zich richten op de vroege graftschade geassocieerd met ischemie-reperfusieletsel.

mouse-model-for-pancreas-transplantation-using-modified-cuff

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Ons protocol is ontwikkeld om zuiver en eenvoudig eilandjes of cellen te leveren onder de nier capsule van muizen. Cellen zijn geconcentreerd in pellets in de finale slangen worden gebruikt voor het transplanteren van de cellen onder de nier capsule. Het gemak van deze techniek vermindert de belasting van de cellen en de muis.

Transplantatie van pancreaseilandjes Into the Kidney Capsule van diabetische muizen

Transplantatie van geïsoleerde eilandjes is voorgesteld om een ​​potentiële behandeling voor diabetes type 1 zijn. Hier beschrijven we een methode om de eilandjes van de muis pancreata isoleren en transplantatie ze aan de subcapsulaire ruimte van de nier.

Een methode voor Murine Islet Isolatie en subcapsulaire Niertransplantatie

This video describes the protocol for grafting human pancreatic islets into the anterior chamber of the mouse’s eye to monitor revascularization of human islet grafts in vivo. It also helps to understand the contribution of recipient versus donor cells in promoting the encapsulation and vascularization of the graft.

Grafting Pancreatic Islets: A Method to Implant Pancreatic Islets into the Anterior Chamber of the Mouse Eye for In Vivo Imaging

The video explains a stepwise surgical method for orthotopic implantation of a tumor fragment from a cancerous donor to the pancreas of a non-cancerous recipient mice for development of pancreatic cancer. Orthotopically implanted PDAC could recapture the tissue microenvironment of human pancreatic cancers than conventional subcutaneous (SC) models more accurately.

Orthotopic Homograft Tumor Transplantation: A Technique to Generate Pancreatic Tumor Mouse Models

In this video, we describe a procedure to infuse pancreatic islet cells into the hepatic portal vein, followed by application of gel foam to successfully prevent bleeding. Postoperative bleeding is a common cause of high mortality during islet transplantation.

Murine Model of Islet Transplantation: A Surgical Method to Infuse Pancreatic Islets in Portal Vein and Prevention of Postoperative Bleeding

Dit protocol beschrijft een letselmodel dat de chirurgische ligatie van de pancreasgang in de pancreas van een volwassen muis omvat, wat resulteert in ernstig letsel dat een omgeving schept die bètacellen neogenese en proliferatie mogelijk maakt. Dit model kan worden gebruikt als een hulpmiddel om mechanismen te bestuderen die betrokken zijn bij de vorming van bètacellen.

Chirurgische Letsel aan de muis alvleesklier door middel Ligatie van de alvleesklierbuis als een model voor Endocriene en Exocrine herprogrammeren en proliferatie

Dit protocol demonstreert het isoleren van muizen eiland en zaait op een decellularized steiger. Steigergesteunde eilandjes werden getransplanteerd in het epididymale vetpaneel van streptozotocine (STZ) geïnduceerde diabetische muizen. Islets overleefden op de transplantatieplaats en reverseerde de hyperglycemische conditie.

Steiger-gesteunde transplantatie van eilanden in het epididymale vetpaneel van diabetische muizen

Alvleesklier islet transplantatie is een manier om normoglycemia bij type 1 diabetes. Dit artikel richt zich op de transplantatie-techniek via de intraportal route om normale glucoseniveaus in diabetesmuizen te handhaven.

Intraportal transplantatie van de alvleesklier eilandjes in Mouse Model

In de klinische context zullen patiënten met gelokaliseerde alvleesklierkanker pancreatectomie ondergaan, gevolgd door adjuvante behandeling. Dit hier gerapporteerde protocol is bedoeld om een veilige en effectieve methode vast te stellen om dit klinische scenario bij naakte muizen te modelleren, door orthotopische implantatie van alvleesklierkanker gevolgd door distale pancreatectomie en splenectomie.

Een orthotopisch resectiemuismodel van alvleesklierkanker

In het huidige protocol wordt een muisharttransplantatiemodel gebruikt voor het onderzoeken van het mechanisme van cardiale allograftafstoting. In dit heterotope harttransplantatiemodel wordt de operatie-efficiëntie verbeterd en wordt de overleving van harttransplantaten verzekerd door een cervicale end-to-end anastomose van hartimplantatie met behulp van een gemodificeerde Cuff-techniek.

Een aangepaste manchettechniek voor muis cervicaal heterotopisch harttransplantatiemodel

Syngenetische muis orthotopische allografts van pancreas ductaal adenocarcinoom (PDAC) recapituleren de biologie, fenotypen en therapeutische reacties van ziektesubtypen. Vanwege hun snelle, reproduceerbare tumorprogressie worden ze veel gebruikt in preklinische studies. Hier tonen we gemeenschappelijke praktijken om deze modellen te genereren, waarbij syngenetische murine PDAC-culturen in de alvleesklier worden geïnjecteerd.

Syngeneic Mouse Orthotopic Allografts om alvleesklierkanker te modelleren

Leer een muismodel voor alvleeskliertransplantatie met een gemodificeerde manchettechniek. Deze methode onderzoekt ischemie-reperfusie letsel en verbetert het begrip van vroege graftschade.

Muismodel voor Pancreas transplantatie met behulp van een gemodificeerde manchet techniek

Meer video's verkennen