Name: Imaging Metals in hersenweefsel door Laser Ablation - inductief gekoppeld plasma - massaspectrometrie (LA-ICP-MS) (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-01-22T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 5 s
Description: Leer metaalverdeling in hersenweefsel kwantificeren met LA-ICP-MS in muizen. Deze gevoelige techniek behoudt ruimtelijke informatie over ijzer en zink voor onderzoek naar neurodegeneratieve ziekten.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

DJH en PAD worden ondersteund door een Australische Research Council Linkage Project (LP120200081) met Agilent Technologies en ESI Ltd. De bijdrage van BK werd gesteund door de Ruhr Universiteit Research School PLUS, gefinancierd door de Duitse Excellence Initiative [DFG GSC 98/3]. DJH werd gedeeltelijk ondersteund door de Ramaciotti Foundation. KK wordt ondersteund door de Sigrid Juselius Foundation.

<ol><li>Barnham, K. J., Bush, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biological+metals+and+metal-targeting+compounds+in+major+neurodegenerative+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Chem+Soc+Rev%22%5BJournal%5D)">Biological metals and metal-targeting compounds in major neurodegenerative diseases.</a> Chem Soc Rev. 43 (19), 6727-6749 (2014).</li>
<li>Hare, D. J., Double, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Iron+and+dopamine%3A+a+toxic+couple%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">Iron and dopamine: a toxic couple.</a> Brain. 139 (4), 1026-1035 (2016).</li>
<li>Savory, J., Herman, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+instrumental+methods+for+the+measurement+and+speciation+of+trace+metals%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Clin+Lab+Sci%22%5BJournal%5D)">Advances in instrumental methods for the measurement and speciation of trace metals.</a> Ann Clin Lab Sci. 29 (2), 118-126 (1999).</li>
<li>New, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tools+to+study+distinct+metal+pools+in+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Dalton+Trans%22%5BJournal%5D)">Tools to study distinct metal pools in biology.</a> Dalton Trans. 42 (9), 3210-3219 (2013).</li>
<li>Hare, D. J., New, E. J., de Jonge, M. D., McColl, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+metals+in+biology%3A+balancing+sensitivity%2C+selectivity+and+spatial+resolution%5BTitle%5D)+AND+%22Chem+Soc+Rev%22%5BJournal%5D)">Imaging metals in biology: balancing sensitivity, selectivity and spatial resolution.</a> Chem Soc Rev. 44 (17), 5941-5958 (2015).</li>
<li>Pozebon, D., Scheffler, G. L., Dressler, V. L., Nunes, M. A. G. <a target="_blank" href="http://pubs.rsc.org/en/content/articlelanding/2014/ja/c4ja00250d">Review of the applications of laser ablation inductively coupled plasma mass spectrometry (LA-ICP-MS) to the analysis of biological samples.</a> J Anal At Spectrom. 29 (12), 2204-2228 (2014).</li>
<li>Becker, J. S., Zoriy, M. V., Dehnhardt, M., Pickhardt, C., Zilles, K. <a target="_blank" href="http://pubs.rsc.org/en/Content/ArticleLanding/2005/JA/b504978b">Copper, zinc, phosphorus and sulfur distribution in thin section of rat brain tissues measured by laser ablation inductively coupled plasma mass spectrometry: possibility for small-size tumor analysis.</a> J Anal At Spectrom. 20 (9), 912(2005).</li>
<li>Hare, D. J., Austin, C., Doble, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+strategies+for+elemental+imaging+of+biological+samples+using+laser+ablation-inductively+coupled+plasma-mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22The+Analyst%22%5BJournal%5D)">Quantification strategies for elemental imaging of biological samples using laser ablation-inductively coupled plasma-mass spectrometry.</a> The Analyst. 137 (7), 1527-1537 (2012).</li>
<li>Hare, D. J., Lear, J., Bishop, D., Beavis, A., Doble, P. A. <a target="_blank" href="http://pubs.rsc.org/en/content/articlelanding/2013/ay/c3ay26248k">Protocol for production of matrix-matched brain tissue standards for imaging by laser ablation-inductively coupled plasma-mass spectrometry.</a> Anal Meth. 5 (8), 1915-1921 (2013).</li>
<li>Hare, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://pubs.rsc.org/en/Content/ArticleLanding/2009/MT/b816188g">Quantitative elemental bio-imaging of Mn, Fe, Cu and Zn in 6-hydroxydopamine induced Parkinsonism mouse models.</a> Metallomics. 1 (1), 53(2009).</li>
<li>Potter, D. <a target="_blank" href="http://pubs.rsc.org/en/Content/ArticleLanding/2008/JA/b717322a">A commercial perspective on the growth and development of the quadrupole ICP-MS market.</a> J Anal At Spectrom. 23 (5), 690(2008).</li>
<li>Lear, J., Hare, D. J., Adlard, P., Finkelstein, D., Doble, P. <a target="_blank" href="http://pubs.rsc.org/en/content/articlelanding/2012/ja/c1ja10301f/">Improving acquisition times of elemental bio-imaging for quadrupole-based LA-ICP-MS.</a> J Anal At Spectrom. 27 (1), 159(2012).</li>
<li>Matusch, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+bioimaging+of+Cu%2C+Fe%2C+Zn%2C+and+Mn+in+the+MPTP+mouse+model+of+Parkinson%27s+disease+using+laser+ablation+inductively+coupled+plasma+mass+spectrometry+%28LA-ICP-MS%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Soc+MAss+Spectrom%22%5BJournal%5D)">Cerebral bioimaging of Cu, Fe, Zn, and Mn in the MPTP mouse model of Parkinson's disease using laser ablation inductively coupled plasma mass spectrometry (LA-ICP-MS).</a> J Am Soc MAss Spectrom. 21 (1), 161-171 (2010).</li>
<li>Hare, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://pubs.rsc.org/en/Content/ArticleLanding/2014/SC/c3sc53461h">An iron-dopamine index predicts risk of parkinsonian neurodegeneration in the substantia nigra pars compacta.</a> Chem Sci. 5 (6), 2160-2169 (2014).</li>
<li>Portbury, S. D., Hare, D. J., Sgambelloni, C., Finkelstein, D. I., Adlard, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+time-course+analysis+of+changes+in+cerebral+metal+levels+following+a+controlled+cortical+impact%5BTitle%5D)+AND+%22Metallomics%22%5BJournal%5D)">A time-course analysis of changes in cerebral metal levels following a controlled cortical impact.</a> Metallomics. 8 (2), 193-200 (2016).</li>
<li>Theiner, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((LA-ICP-MS+imaging+in+multicellular+tumor+spheroids+-+a+novel+tool+in+the+preclinical+development+of+metal-based+anticancer+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22Metallomics%22%5BJournal%5D)">LA-ICP-MS imaging in multicellular tumor spheroids - a novel tool in the preclinical development of metal-based anticancer drugs.</a> Metallomics. 8, 398-402 (2016).</li>
<li>Niedzwiecki, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+multimodal+imaging+workflow+to+visualize+metal+mixtures+in+the+human+placenta+and+explore+colocalization+with+biological+response+markers%5BTitle%5D)+AND+%22Metallomics%22%5BJournal%5D)">A multimodal imaging workflow to visualize metal mixtures in the human placenta and explore colocalization with biological response markers.</a> Metallomics. 8, 444-452 (2016).</li>
<li>Austin, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Barium+distributions+in+teeth+reveal+early-life+dietary+transitions+in+primates%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Barium distributions in teeth reveal early-life dietary transitions in primates.</a> Nature. 498 (7453), 216-219 (2013).</li>
<li>Hare, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://pubs.rsc.org/en/content/articlelanding/2013/ja/c3ja50281c">The effect of paraformaldehyde fixation and sucrose cryoprotection on metal concentration in murine neurological tissue.</a> J Anal At Spectrom. 29, 565-570 (2014).</li>
<li>Dodt, H. -U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultramicroscopy%3A+three-dimensional+visualization+of+neuronal+networks+in+the+whole+mouse+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Meth%22%5BJournal%5D)">Ultramicroscopy: three-dimensional visualization of neuronal networks in the whole mouse brain.</a> Nat Meth. 4 (4), 331-336 (2007).</li>
<li>Hare, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser+ablation-inductively+coupled+plasma-mass+spectrometry+imaging+of+white+and+gray+matter+iron+distribution+in+Alzheimer%27s+disease+frontal+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22NeuroImage%22%5BJournal%5D)">Laser ablation-inductively coupled plasma-mass spectrometry imaging of white and gray matter iron distribution in Alzheimer's disease frontal cortex.</a> NeuroImage. 137, 124-131 (2016).</li>
<li>Günther, D., Heinrich, C. <a target="_blank" href="http://pubs.rsc.org/en/Content/ArticleLanding/1999/JA/a901648a">Enhanced sensitivity in laser ablation-ICP mass spectrometry using helium-argon mixtures as aerosol carrier.</a> J Anal At Spectrom. 14 (9), 1363-1368 (1999).</li>
<li>Austin, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://pubs.rsc.org/en/content/articlelanding/2011/ja/c0ja00267d">Factors affecting internal standard selection for quantitative elemental bio-imaging of soft tissues by LA-ICP-MS.</a> J Anal At Spectrom. 26 (7), 1494-1501 (2011).</li>
<li>Hare, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+elemental+bio-imaging+of+Fe%2C+Zn%2C+Cu%2C+Mn+and+P+in+a+6-hydroxydopamine+lesioned+mouse+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Metallomics%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional elemental bio-imaging of Fe, Zn, Cu, Mn and P in a 6-hydroxydopamine lesioned mouse brain.</a> Metallomics. 2 (11), 745-753 (2010).</li>
<li>Osterholt, T., Salber, D., Matusch, A., Becker, J. S., Palm, C. <a target="_blank" href="http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1387380611001230">IMAGENA: Image Generation and Analysis - An interactive software tool handling LA-ICP-MS data.</a> Int J Mass Spectrom. 307 (1-3), 232-239 (2011).</li>
<li>Uerlings, R., Matusch, A., Weiskirchen, R. <a target="_blank" href="http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1387380615004029">Reconstruction of Laser Ablation Inductively Coupled Plasma Mass Spectrometry (LA-ICP-MS) Spatial Distribution Images in Microsoft Excel 2007.</a> Int J Mass Spectrom. 395, 27-35 (2015).</li>
<li>Paul, B., et al. <a target="_blank" href="http://pubs.rsc.org/en/content/articlelanding/sc/2015/c5sc02231b">Visualising mouse neuroanatomy and function by metal distribution using laser ablation-inductively coupled plasma-mass spectrometry imaging.</a> Chem Sci. 6 (10), 5383-5393 (2015).</li>
<li>Paton, C., Hellstrom, J., Paul, B., Woodhead, J., Hergt, J. <a target="_blank" href="http://pubs.rsc.org/en/Content/ArticleLanding/2011/JA/c1ja10172b">Iolite: Freeware for the visualisation and processing of mass spectrometric data.</a> J Anal At Spectrom. 26 (12), 2508(2011).</li>
<li>Lein, E. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome-wide+atlas+of+gene+expression+in+the+adult+mouse+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Genome-wide atlas of gene expression in the adult mouse brain.</a> Nature. 445 (7124), 168-176 (2007).</li>
<li>Hare, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+atlas+of+iron%2C+copper%2C+and+zinc+in+the+mouse+cerebrum+and+brainstem%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional atlas of iron, copper, and zinc in the mouse cerebrum and brainstem.</a> Anal Chem. 84 (9), 3990-3997 (2012).</li>
<li>Hjornevik, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+atlas+system+for+mouse+and+rat+brain+imaging+data%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+Neuroinform%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional atlas system for mouse and rat brain imaging data.</a> Frontiers Neuroinform. 1, 4(2007).</li>
<li>Bishop, D. P., et al. <a target="_blank" href="http://pubs.rsc.org/en/Content/ArticleLanding/2016/JA/C5JA00293A">Elemental bio-imaging using laser ablation-triple quadrupole-ICP-MS.</a> J Anal At Spectrom. 31 (1), 197-202 (2016).</li>
<li>Balcaen, L., Bolea-Fernandez, E., Resano, M., Vanhaecke, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inductively+coupled+plasma+-+tandem+mass+spectrometry+%28ICP-MS%2FMS%29%3A+a+powerful+and+universal+tool+for+the+interference-free+determination+of+%28ultra%29trace+elements+-+a+tutorial+review%5BTitle%5D)+AND+%22Analytica+Chimica+Acta%22%5BJournal%5D)">Inductively coupled plasma - tandem mass spectrometry (ICP-MS/MS): a powerful and universal tool for the interference-free determination of (ultra)trace elements - a tutorial review.</a> Analytica Chimica Acta. 894, 7-19 (2015).</li>
<li>Van Malderen, S. J. M., Managh, A. J., Sharp, B. L., Vanhaecke, F. <a target="_blank" href="http://pubs.rsc.org/en/content/articlelanding/2016/ja/c5ja00430f">Recent developments in the design of rapid response cells for laser ablation-inductively coupled plasma-mass spectrometry and their impact on bioimaging applications.</a> J Anal At Spectrom. 31, 423-439 (2016).</li>
</ol>

RWH en COC zijn betaalde werknemers van ESI Ltd. FF en TPH zijn betaalde werknemers van Agilent Technologies Australia.

Imaging metalen in neurologisch weefsel is slechts één voorbeeld van hoe dit protocol nuttige informatie over de verdeling en hoeveelheden metalen in een biologische matrix kunnen verschaffen. Hoewel bereiding van standaard referentiematerialen lastig kan zijn, is een experiment dat eens kunnen worden uitgevoerd en gearchiveerd voor later gebruik. LA-ICP-MS heeft bepaalde voordelen boven andere werkwijzen, zoals synchrotrongebaseerde X-ray fluorescentie microscopie, vooral wat betreft toegankelijkheid en gevoeligheid. Er zijn echter bepaalde nadelen die moeten worden overwogen bij het bereiden van een experiment met LA-ICP-MS, en als zodanig vaak een nuttige aanvullende techniek voor chemische beeldvorming dat alternatieve metal analysetechnieken, evenals vergelijkende histochemie 5 omvat. Afstemming met bekende anatomische kenmerken van de hersenen van muizen kunnen nuttige informatie over de mogelijke functionele relati biedenonship tussen metal niveaus en ruimtelijke verdeling. Eerder hebben we de Allen Brain Atlas online resource, 29 dat is een open-access opslagplaats van zowel anatomische en genexpressie data in de C57BL / 6 muizenhersenen ruimtelijke correlatie van zowel metal-afhankelijke enzym expressie 14 en neuroanatomy 27 onderzoeken gebruikt, 30. Andere bronnen, zoals inproefdierhersenen WorkBench 31 zijn ook beschikbaar om te helpen met de registratie en uitlijning van metaalbeelden te helpen bij correcte identificatie van metaaldistributie vaak in kleine anatomische gebieden. Toepassingen van deze techniek zijn nuttig bij de beoordeling van hoe metalen niveaus en distributie verandering op de microschaal gedurende zowel normale gebeurtenissen in het leven (bijvoorbeeld vergrijzing) en bij de ziekte van staten; en bestuderen van de effecten van zowel metaalbevattende verbindingen en geneesmiddelen ontworpen te richten meTal metabolisme. De huidige grote beperkingen van LA-ICP-MS als een beeldvormende techniek voor ruimtelijk beoordelen van metalen distributie zijn throughput en gevoeligheid. Er is een afweging tussen de snelheid van de analyse en de ruimtelijke resolutie van 5, 12, met een hogere resolutie beelden die langere analyse keer. De techniek is geschikt voor biologische elementen bij hogere concentraties, hoewel elementen zoals mangaan, kobalt en seleen beperkt door de lage overvloed in normaal weefsel en / of beperkingen in hun detectie met conventionele ICP-MS. Nieuwe ontwikkelingen in ICP-MS technologie, zoals de introductie van triple-quadrupool massa-analysatoren, mogelijk maken om gericht detectie van moeilijke analyten, zoals selenium 32 bij hogere gevoeligheden 33. Als een technologie-gedreven procedure, de vooruitgang in zowel laser en massaspectrometrie ontwerp zal deze beeldvormende techniek blijven evolueren zien, het verhogende snelheid van de analyse en gevoeligheid 34.

De unieke redox chemie van metalen maakt verschillende neurologische functies, waaronder signaaltransductie, energieproductie en synthese van neurotransmitters. In een aantal belangrijke neurodegeneratieve ziekten, dyshomeostasis van deze metalen zijn beide betrokken bij de ziekte pathogenese en geïdentificeerd als potentiële nieuwe doelen voor therapeutische interventie 1. Om een ​​beter begrip metalen zijn betrokken bij aandoeningen zoals de ziekte van Alzheimer en Parkinson (PD en AD, respectievelijk), is het noodzakelijk om te kunnen meten hoe metaaldistributie en niveau veranderen in gebieden getroffen door het ziekteproces. Deze veranderingen zijn vaak indicatief voor subtiele veranderingen in de biochemische reacties die nauw kan worden gekoppeld aan de processen die celdood leiden, zoals de recent voorgestelde mechanisme van ijzer en dopamine neurotoxiciteit bij PD 2. Traditioneel, metal niveaus binnen bepaalde anatomische gebieden is bereikt door een zorgvuldige uitsnijding, de spijsvertering en analyse met behulp van een scala aan analytische technieken 3. Echter, een dergelijke benadering verliest ruimtelijke informatie, die kritisch kan zijn bij ziektetoestanden onderzocht omvatten kleine, goed gedefinieerde gebieden of specifieke celtypen. Een aantal analytische methoden beschikbaar voor het visualiseren van metalen in biologische systemen, uit intacte monsters weefselcoupes en in twee en drie dimensies, middels emissie spectroscopie, fluorescerende probes en massaspectrometrie 4. Elke techniek heeft voor- en nadelen met betrekking tot gevoeligheid, selectiviteit van chemische stoffen, en de ruimtelijke resolutie kan worden bereikt. Voor een uitgebreid overzicht van het bereik van de technieken die beschikbaar zijn, zie de recensie van Hare et al. 5. Massaspectrometrie (MS) gebaseerde methodes het meest gevoelige van deze technieken, Geschikt voor het meten meest biologisch relevante metalen bij hun eigen concentratie 6. Laser ablatie - inductief gekoppeld plasma - massaspectrometrie (LA-ICP-MS) beeldvorming maakt gebruik van een gefocusseerde UV-laserbundel die variëren in grootte van 1 tot&gt; 100 urn in diameter (of breedte bij een vierhoek bundelvorm wordt gebruikt), waarbij de monster afgelopen 7. Kwantitatieve informatie kan door de representatieve ablatie van standaard referentiematerialen, die kunnen worden geproduceerd met diverse verschillende benaderingen 8, elk met een verschillende mate van technische problemen en analytische bruikbaarheid. De meest gebruikelijke benadering gebruikt matrix-matching, terwijl een standaard met een overheersende chemische samenstelling vergelijkbaar met die van het monster wordt bereid door spiking met de doelanalyt en nauwkeurig onderzocht op homogeniteit en absolute metaalconcentratie van onafhankelijke analytische middelen 9, </sup&gt; 10. Ablatie van bereide standaarden kunnen vervolgens worden gebruikt voor externe calibratie doeleinden, zodat concentratiegegevens beeld de resulterende monster van per pixel te extraheren. Beeldresolutie wordt bepaald door zowel de bundelgrootte en de snelheid waarmee het monster wordt afgetast. De standaard quadrupool-ontwerp ICP-MS (die meer dan 90% van alle geïnstalleerde ICP-MS systemen wereldwijd 11) een sequentiële massa-analysator, doordat de massadetector doorloopt alle geselecteerde massa-tot-lading verhouding (m / z ) in plaats van gegevens tegelijkertijd verzamelen. Zo moet de acquisitietijd voor elke cyclus van massa gelijk aan de tijd die het monster een breedte van de laserstraal doorlopen te zorgen voor een pixel representatief is voor de gewenste resolutie wordt verkregen 12. Laserstraal grootte selectie is een cruciale parameter die aanzienlijke gevolgen hebben voor zowel de gevoeligheid en de totale analyse tijd heeft. Laser ablatie physitisch verwijdert materiaal dat wordt geveegd met de ICP-MS door een draaggas argon, de hoeveelheid materie die fysiek met de massa analysator kan worden gedetecteerd volgt kwadratenwet. Een vermindering van de laserstraal diameter 50-25 urn resulteert in een vermindering van geablateerd materiaal met een factor vier. Bovendien, als scanmethode kleinere straaldiameters verhogen de totale tijd die nodig is om een ​​geselecteerd gebied ablatie. Daarom proefopzet is essentieel om de vereiste ruimtelijke resolutie en gevoeligheid behoeften en tijdsdruk evenwicht. Beeldvormend LA-ICP-MS werd toegepast op een reeks monsters, matrices en ziektetoestanden, waaronder diermodellen van neurologische aandoeningen 13, 14, traumatisch hersenletsel 15, verdeling van metaalbevattende antikanker geneesmiddelen 16, giftige stof blootstelling in de placenta 17 en metalen distribution in tanden als een biomarker van het vroege leven dieet overgangen. 18 In dit protocol beschrijven we een algemene werkwijze voor het afbeelden van ijzer, koper en zink in de WT muizenhersenen met een resolutie van 30 urn, hoewel het gemakkelijk kan worden aangepast aan verschillende soorten monsters en experimentele resultaten, op basis van de behoeften van de analist.

<table><tbody><tr><td>Soda glass microscope slides</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td>Typische slides zijn geschikt voor alle experimenten</td></tr><tr><td>PTFE-gecoate microtoommessen</td><td>C.L. Stuckey</td><td>DT315R50</td><td>Mesgrootte is afhankelijk van de cryostaatmeshouder. Controleer voor het bestellen.</td></tr><tr><td>Paraformaldehyde (PFA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>16005</td><td>Elke leverancier is geschikt</td></tr><tr><td>Sucrose</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td>Commerciële witte suiker is geschikt</td></tr><tr><td>Fosfaat-gebufferde zoutoplossing (PBS)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P5368</td><td>Vooraf gemengde sachets vermeld, kan worden bereid volgens normale laboratoriumprotocollen</td></tr><tr><td>Xyleen</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>247624</td><td>Elke leverancier is geschikt</td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E7023</td><td>Elke leverancier is geschikt</td></tr><tr><td>Lamsbrein</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td>Verkrijgbaar bij de meeste lokale slagerijen</td></tr><tr><td>Metaalzouten</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td>Gebruik wateroplosbare metaalzouten die de gewenste analyten bevatten</td></tr><tr><td>Omni TH weefselhomogenisator</td><td>Omni Inc</td><td>THP115</td><td>Alternatieve homogenisatoren zijn geschikt</td></tr><tr><td>Polycarbonaat homogenisatorsondes</td><td>Omni Inc</td><td>TH115-PCRH</td><td></td></tr><tr><td>Microgolfdigestie-eenheid</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td>Optioneel. Zie Sectie 2</td></tr><tr><td>1,5 mL microfugebuisjes</td><td>TechnoPlas</td><td>P4010</td><td>Metaalvrije polypropyleenbuisjes. Ook zuurgewassen buisjes zijn geschikt</td></tr><tr><td>65% salpeterzuur</td><td>Merk Millipore</td><td>100441</td><td>Trace analyse graad</td></tr><tr><td>30% waterstofperoxide</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>95321</td><td>Trace analyse graad</td></tr><tr><td>10 x 10 mm wegwerp cryovormpjes</td><td>Ted Pella</td><td>27181</td><td></td></tr><tr><td>Isopentaan</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>76871</td><td></td></tr><tr><td>Vloeibare stikstof</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td>Gebruik lokale leverancier</td></tr><tr><td>NWR213 Laserablatiepsysteem</td><td>ESI Ltd</td><td>n/a</td><td>Gebruikt in deze experimenten. Andere fabrikanten zijn geschikt, mogelijk moeten protocolaanpassingen worden gemaakt</td></tr><tr><td>Agilent 8800 Serie ICP-MS</td><td>Agilent Technologies</td><td>n/a</td><td>Gebruikt in deze experimenten. Andere fabrikanten zijn geschikt, mogelijk moeten protocolaanpassingen worden gemaakt</td></tr><tr><td>Iolite</td><td>Iolite Software</td><td>n/a</td><td>Beschikbaar via http://iolite-software.com/. Andere methoden zijn beschikbaar, zie protocol</td></tr><tr><td>Excel</td><td>Microsoft</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>IGOR Pro</td><td>Wave Metrics</td><td>n/a</td><td>Beschikbaar via https://www.wavemetrics.com/products/igorpro/igorpro.htm</td></tr></tbody></table>

imaging metals in hersenweefsel door laser ablation - inductief gekoppeld plasma - massaspectrometrie (la-icp-ms)

Imaging Metals in Brain Tissue by Laser Ablation - Inductively Coupled Plasma - Mass Spectrometry (LA-ICP-MS)

Metalen worden een rode draad door een organisme gevonden, met hun biologische rol gedicteerd door zowel hun chemische reactiviteit en overvloed binnen een bepaalde anatomische regio. In de hersenen, metalen hebben een sterk gecompartimenteerd distributie, afhankelijk van de primaire functie zij binnen het centrale zenuwstelsel. Afbeelden van de ruimtelijke verdeling van metalen heeft unieke inzicht gegeven in de biochemische architectuur van de hersenen, waardoor directe correlatie tussen neuroanatomische regio en de bekende functie met betrekking tot metaal-afhankelijke processen. Daarnaast beschikken over verschillende leeftijd gerelateerde neurologische aandoeningen verstoorde homeostase metaal, vaak beperkt tot kleine gebieden van de hersenen die anders moeilijk te analyseren zijn. We beschrijven hier een uitgebreide werkwijze voor kwantitatief afbeelden metalen in muizenhersenen, middels laser ablatie - inductief gekoppeld plasma - massaspectrometrie (LA-ICP-MS) en speciaal ontworpen beeldverwerkingsoftware. Gericht op ijzer, koper en zink, waarbij drie van de meest voorkomende en ziekte-relevante metalen in de hersenen, de ter zake stappen monsterbereiding, analyse, kwantitatieve metingen en beeldverwerking kaarten metaal verdeling in de lage micrometer produceren beschrijven resolutie afstand. Deze techniek van toepassing op alle gesneden weefselsectie, kan tonen dat zeer variabele verdeling van metalen binnen een orgaan of systeem, en kunnen worden gebruikt om veranderingen in metaal homeostase en absolute niveaus binnen fijne anatomische structuren te identificeren.

Om de mogelijkheden van deze LA-ICP-MS imaging benadering tonen, een eenvoudig experiment met een enkel stuk WT C57BL / 6 muizenhersenen, doorsneden in het corpus callosum en deelbaar in het frontale vlak wordt gepresenteerd. Een werkstroom voor de analyse van gegevens met behulp Biolite (figuur 1), zoals beschreven in de paragrafen 6 en 7, en voor het verschaffen van een representatief beeld van metaaldistributie in de sectie analyse (figuur 2) is ook beschreven. Zoals blijkt, metaalverdeling in muizenhersenen varieert volgens anatomisch gebied. Dit kan worden toegeschreven aan de variabele rollen metalen, en meer bepaald de eiwitten waaraan ze gebonden zijn, spelen in elk hersengebied 27. Bijvoorbeeld ijzer meestal hoger concentraties in de middenhersenen en langs de dentate gyrus, terwijl zink is het meest overvloedig in de cortical gebieden. Koolstof, hetgeen een algemeen gebruikte interne standaard 8, homogeen verdeeld. Elemental kaarten (figuur 2) kan bijzonder nuttig zijn wanneer gebruikt in combinatie met bestaande anatomische en functionele referentie atlassen 29, waarbij gegevens over de colokalisatie van metalen kan de expressie van specifieke metaalbindende eiwitten kan inzicht in de functie van metalen in hersenen regio, of veranderingen in de metaal niveaus in lijn met een geïdentificeerde ziekte-gerelateerde biomolecuul. Met de beschreven benadering, die is geoptimaliseerd voor een breder scala analyten, uitsluit gevoeligheid voor lage abundantie elementen zoals mangaan en werkwijzen kunnen worden aangepast om voornamelijk richten op het analyt door het verhogen verblijftijden ten koste van andere gemeten massa. Het grote voordeel bij het gebruik van beeldvorming door LA-ICP-MS is het observeren van relatieve verschillen in metalen concentratie en de verdeling tussen de experimentele groepen. We hebben eerder gebruikte techniek om dergelijke verhoogde strijken na een insult neurotoxine nabootsen PD 2, 10, en veranderingen in corticale ijzer niveaus in Alzheimer weefsel 21 te tonen. Dergelijk protocol zoals hier beschreven kan gemakkelijk worden aangepast aan andere typen weefsel met minimale wijzigingen in de genoemde methoden. <img alt="Figuur 1" src="/files/ftp_upload/55042/55042fig1.jpg" /> Figuur 1: Workflow voor Beeldverwerking. Workflow een aanvulling op de artikelen 6 en 7, beeltenis van verwerking van ruwe tijd opgelost gegevens van de ICP-MS kwantitatieve beelden van metaal distributie in de hersenen van muizen. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55042/55042fig1large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.</a> </p&gt; <img alt="Figuur 2" src="/files/ftp_upload/55042/55042fig2.jpg" /> Figuur 2: Typische Elemental Verdeling van Biometalen binnen een muizenhersenen. Vertegenwoordiger element kaarten van een 30 urn dikke coronale gedeelte van een enkele muis hersenhelft geanalyseerd met LA-ICP-MS. Beelden voor koolstof-13 (C13), magnesium-24 (MG24) en fosfor-31 (P31) weergegeven in Gold kleurschalen (tellingen per seconde; CPS) (bovenste rij). Kwantitatieve beelden (onderste rij) voor mangaan-55 (Mn55), koper-63 (Cu63), ijzer-56 (Fe56) en zink-66 (Zn66) weergegeven met bijbehorende BlueHot kleurschalen (ug g -1). Totale analysetijd het hersenpreparaat ongeveer 5 uur. Schaal bar = 2 mm. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55042/55042fig2large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.</a> <strong&gt; Aanvullende codebestand 1. Open-source Python code 6.1 beschreven, die kan worden gewijzigd met behulp van een geschikte Python editor volgens werkwijze gegevensuitvoer ICP-MS fabrikant. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55042/CopyFilesFromSubDirs_3.txt" target="_blank">Klik hier om dit bestand te downloaden.</a>

Kwantitatief afbeelden metalen weefsel door laserablatie - inductief gekoppeld plasma - massaspectrometrie (LA-ICP-MS) is een gevoelige analytische techniek die nieuw inzicht in hoe metalen deel aan normale functie en ziekteprocessen kunnen bieden. We beschrijven hier een protocol voor het kwantitatief beeldvorming metalen in dunne secties van muizen neurologisch weefsel.

Imaging Metals in hersenweefsel door Laser Ablation - inductief gekoppeld plasma - massaspectrometrie (LA-ICP-MS)

Metals are found ubiquitously throughout an organism, with their biological role dictated by both their chemical reactivity and abundance within a ...

Het algemene doel van deze methode is het kwantificeren van de ruimtelijke distributie van metalen in weefselcoupes met behulp van laserablatie-inductief gekoppelde plasma-massaspectrometrie. Deze methode kan kernvragen beantwoorden binnen zowel de fundamentele biologie als het ziekteonderzoek, in het bijzonder voor aandoeningen waarbij metaalbiochemie betrokken is bij de ziektepathologie. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat de ruimtelijke informatie over metalen behouden blijft, wat traditioneel verloren gaat bij conventionele metaalanalyse-technieken.De implicaties van deze techniek strekken zich uit tot de therapie en diagnose van neurodegeneratieve ziekten, omdat het ons in staat stelt om te monitoren hoe metalen veranderen in hersengebieden waar celsterfte optreedt. Over het algemeen kunnen mensen die nieuw zijn met deze methode moeite hebben met het opzetten van deze lange en complexe experimenten. Een visuele demonstratie van deze methode is cruciaal, aangezien het ontwerpen van het experiment en het analyseren van de gegevens uitdagend kan zijn omdat elke stap in een specifieke volgorde moet worden uitgevoerd.Plaats eerst een hersenweefselmonster en alle matrix-gematchte weefselstandaarden in de laserablatiekamer. Controleer of de monsters zich binnen de scherptediepte van de LACCD-camera bevinden. Sluit de deur van de kamer en draai de schroeven met de hand vast.Open vervolgens in de ICPMS-software de klep van het dragersgas en stel de debietsnelheid in op 1,2 liters per minuut. Voer in de LA-software een spoeling van 30 minuten van de ablatiecel uit met het dragersgas. Verplaats bij een ablatiecel met een volume van twee eenheden elke tien minuten de monsterhouder naar elke hoek van de kamer om de hoeveelheid resterende lucht in de cel te verminderen.Zet de ICPMS aan en laat het instrument twee uur opwarmen. Terwijl het instrument opwarmt, trekt u in de laserablatiesoftware een ablatielijn van ongeveer drie millimeter lang over het oppervlak van de eerste weefselstandaard. Klik op de ablatielijn en stel de standaardstraaldiameter, de scansnelheid en de stralingsfluentie in.Dupliceer de lijn zes keer en hanteer een tussenruimte tussen de lijnen die gelijk is aan de straaldiameter. Herhaal dit proces voor elke standaard. Gebruik vervolgens de lijntool om het ablatiegebied over het monster te tekenen, vanaf de linkerbovenhoek over het breedste punt van het monster, met dezelfde parameters als bij de standaarden.Herhaal de lijn indien nodig voor volledige dekking van het monster met dezelfde tussenruimte als gebruikt bij de standaarden. Teken vervolgens een reeks lijnen voor periodieke scanning van de standaarden, uiterlijk na 20 uur scannen van het monster, of tussen elk monster. Voeg aan het einde van het experiment een scan van de standaarden toe.Bepaal op basis van de lijnlengte en de scansnelheid de analysetijd voor de monster- en standaardlijnen. Maak vervolgens een nieuwe batch aan in de ICPMS-software en selecteer tijdsopgeloste analyse. Kies de massagetals-ladingsverhoudingen van belang en stel de integratietijden voor elke verhouding zo in dat de totale integratietijd voor één cyclus 0,25 seconden bedraagt.Sla de batch op. Vul voor een standaardbatch de analysetijd voor elke lijn in met een extra buffer van 15 seconden om rekening te houden met de opwarmtijd van de laser en de uitspoeltijden. Stel een monsterlijst op met een acquisitie voor elke standaardlijn.Dupliceer voor de monsterbatch de standaardbatch en pas de tijden en het aantal acquisities aan op basis van het ablatiepatroon van het monster. Zodra de ICPMS is opgewarmd, voegt u de eerste batch toe aan de wachtrij en zorgt u ervoor dat de software wacht op een trigger van het LA-instrument. Zet vervolgens in de LA-software de voeding van de laser aan en stel de opwarm- en uitspoeltijden van de laser in.Start de lasersequentie en controleer of de ICPMS na ablatie correct begint met de gegevensverzameling. Zodra de gegevens zijn verzameld, extraheert u de gegevens voor de standaarden uit de CSV-bestanden. Voer baseline-correcties uit en sluit het achtergrondsignaal uit.Identificeer signaalvalen veroorzaakt door gaten in de weefselstandaarden. Maskeer deze gebieden met een laag signaal en exporteer vervolgens de gegevens als een spreadsheet. Bereken voor elk geïdentificeerd element een conversiefactor van CPS naar PPM.Herhaal dit proces voor elke standaard. Open vervolgens de software voor kwantitatieve beeldconstructie en importeer de monstergegevens uit de CSV-bestanden. Selecteer verschillende gebieden van de achtergrond om achtergrondcorrectie toe te passen.Selecteer de grafiekbewerkingstool, klik met de rechtermuisknop op de afbeelding en selecteer 'modify image appearance'. Wijzig de eerste kleur bij Z naar een grote negatieve waarde en klik op 'done' om het achtergrondsignaal te verbeteren. Voer vervolgens in het tabblad 'standards' de CPS PPM-correctiefactoren voor elke standaard in en klik op 'go'.Open de databrowser in het tabblad gegevens, klik met de rechtermuisknop op een gecorrigeerd afbeeldingsbestand en klik op nieuwe afbeelding. Open het venster voor het wijzigen van het uiterlijk van de afbeelding en stel de kleurtabellen en de schaal in. Gebruik de tool voor het toevoegen van annotaties om een kleurenschaal op de afbeelding te plaatsen.Pas de kleurenschaal aan in het venster voor de kleurenschaal. Zodra de afbeelding is ingekleurd en geannoteerd, kan de afbeelding worden gekopieerd en geplakt in een ander programma, of worden geëxporteerd vanuit de software voor beeldconstructie. Om de ROI-instrumenten te activeren, selecteert u beeldverwerking uit de analysepakketten en kiest u een afbeelding.Klik in het tabblad afbeelding op ROI en start het tekenen van de ROI. Selecteer het gebied van interesse en klik vervolgens op finish ROI. Klik in het tabblad afbeelding op stats om de ROI-gegevens te verkrijgen.Kopieer en plak de gegevens in een spreadsheet en zorg ervoor dat u opslaat nadat elke ROI is toegevoegd. Herhaal dit proces indien nodig. Met deze techniek werd de metaalgehalte en -distributie van een wild-type muizenbrein onderzocht.Hier worden de distributies van koolstof, magnesium en fosfor weergegeven in counts per seconde. Kwantitatieve beelden worden getoond voor mangaan, koper, ijzer en zink. De koolstofdistributie werd gebruikt als interne standaard.IJzer was het meest aanwezig in het middenbrein en de gyrus dentatus. Zink was het meest aanwezig in de corticale gebieden. De informatie uit deze beelden kan vervolgens worden gebruikt om de expressie en functionaliteit van metaalbindende eiwitten te volgen. Zodra men de methode beheerst, kan een experiment dat meerdere dagen in beslag neemt, binnen een uur worden opgezet indien dit correct wordt gedaan.Tijdens het uitvoeren van deze procedure is het belangrijk om uw ablatielijnen en uw databestanden te synchroniseren met ICPMS. Na deze procedure kunnen aanvullende methoden, zoals histologische kleuring op aangrenzende secties, worden uitgevoerd om extra informatie te verkrijgen, zoals de colocalisatie van metalen met specifieke eiwitten. We kregen voor het eerst het idee voor deze methode toen we wilden onderzoeken hoe metaalniveaus veranderden in laboratoriummodellen voor de ziekte van Parkinson.Hoewel deze methode kan worden gebruikt om inzicht te krijgen in neurodegeneratie, kan ze ook worden toegepast op verschillende weefseltypen en ziektestadia, waaronder menselijk weefsel en diverse biologische matrices. Na de ontwikkeling van deze techniek werd de weg vrijgemaakt voor onderzoekers in het vakgebied van de neurowetenschappen om te onderzoeken hoe metaalniveaus veranderen in zowel menselijke monsters als diermodellen van ziekten. Na het bekijken van deze video zou u een goed beeld moeten hebben van hoe u het laserablatie-ICPMS-experiment opzet.Vergeet niet dat werken met biologisch materiaal uiterst gevaarlijk kan zijn en dat er altijd voorzorgsmaatregelen moeten worden genomen, zoals het dragen van geschikte persoonlijke beschermingsmiddelen, tijdens het uitvoeren van deze procedure.

imaging-metals-brain-tissue-laser-ablation-inductively-coupled-plasma

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Laser ablatie electrospray ionisatie (LAESI) is een atmosferische druk ionenbron voor massaspectrometrie. In de beeldvorming modus, een mid-infrarood laser peilt naar de verdeling van moleculen over een tissue sectie of een biofilm. Deze techniek biedt een nieuwe aanpak voor de diverse bio-analytische studies onder autochtone experimentele omstandigheden uitgevoerd.

Atmosferische druk moleculaire beeldvorming van biologische weefsels en biofilms door LAESI massaspectrometrie

Source: Hare, D. J., et.al. Imaging Metals in Brain Tissue by Laser Ablation - Inductively Coupled Plasma - Mass Spectrometry (LA-ICP-MS). J. Vis. Exp. (2017)This video demonstrates the use of laser ablation–inductively coupled plasma–mass spectrometry (LA-ICP-MS) to visualize and quantify metal distributions in mouse brain tissue. The protocol involves laser ablation to generate an aerosol of sample particles, ionization of the particles in high-temperature plasma, and mass spectrometry to...

Laser Ablation-Inductively Coupled Plasma-Mass Spectrometry to Visualize Metals in Mouse Brain Tissue

Dithranol (DT, 1,8-dihydroxy-9 ,10-dihydroanthracen-9-on) is eerder gerapporteerd als een MALDI matrix voor weefsel beeldvorming van kleine moleculen, protocollen voor het gebruik van DT voor de MALDI beeldvorming van endogene lipiden op de oppervlak van het weefsel secties door positieve-ion MALDI-MS op een ultrahoge resolutie quadrupool-FTICR instrument worden hier gegeven.

Dithranol als een matrix voor Matrix Assisted Laser desorptie / ionisatie Imaging op een Fourier transform ion cyclotron resonantie spectrometrie

Laser-induced afbraak spectroscopie uitgevoerd op dunne orgaan-en tumorweefsel met succes natuurlijke elementen en kunstmatig geïnjecteerd gadolinium (Gd), die met ingang van Gd-gebaseerde nanodeeltjes aangetroffen. Afbeeldingen van chemische elementen bereikt een resolutie van 100 micrometer en kwantitatieve sub-mm gevoeligheid. De verenigbaarheid van de setup met standaard optische microscopie benadrukt het potentieel om meerdere beelden van een zelfde biologisch weefsel te bieden.

Laser-induced Breakdown Spectroscopy: Een nieuwe aanpak voor de nanodeeltjes&#39;s Mapping en kwantificering in orgaanweefsel

Grootte-exclusiechromatografie gekoppeld aan inductief gekoppelde plasma - massaspectrometrie (ICP-MS) is een krachtig hulpmiddel om veranderingen in de abundantie van metalloproteïnen direct uit biologische monsters te meten. Hier beschrijven we een reeks metalloproteïne-standaarden die worden gebruikt om de moleculaire massa en de hoeveelheid metaal geassocieerd met onbekende eiwitten te schatten.

Normen voor Quantitative Metalloproteomic analyse met behulp van Size Exclusion ICP-MS

Een massaspectrometrie-beeldvormingsbron (MSI) die op atmosferische druk werkte, werd ontwikkeld door mid-infrarood laserdesorbentie te koppelen met post-ionisatie door middel van elektrospray. Exogeen ijsmatrix werd gebruikt als de energieabsorberende matrix om resonante desorbentie van weefselgerelateerd materiaal te vergemakkelijken. Dit manuscript biedt een stapsgewijs protocol voor het uitvoeren van IR-MALDESI MSI van een neonatale muis in zijn geheel.

Whole-body massaspectrometrie Imaging door Infrared Matrix-geassisteerde laser desorptie electrospray ionisatie (IR-MALDESI)

Moleculaire beeldvorming met laser matrix-bijgewoonde desorptie/ionisatie gebaseerde imaging massaspectrometrie (MALDI-IMS) kan de gelijktijdige koppeling van meerdere analyten in biologische monsters. Hier presenteren we een protocol voor de detectie en de visualisatie van amyloïde β eiwit op weefsels van de hersenen van Alzheimer en Cerebrale amyloïde angiopathie monsters met behulp van MALDI-IMS.

Visualisatie van amyloïde β-deposito's in de menselijke hersenen met Laser Matrix-bijgewoonde desorptie/ionisatie massaspectrometrie Imaging

Dit protocol presenteert een workflow voor sub-mm 2D visualisatie van meerdere labiele anorganische nutriënten- en verontreinigingsolute soorten met behulp van diffusieve gradiënten in dunne films (DGT) in combinatie met massaspectrometrie beeldvorming. Solutebemonstering en chemische analyse in hoge resolutie worden in detail beschreven voor het kwantitatief in kaart brengen van soluten in de rhizosfeer van terrestrische planten.

Tweedimensionale visualisatie en kwantificering van labiele, anorganische plantennutriënten en verontreinigingen in de bodem

Dopamine vervanging farmacotherapie met L-dopa is de meest gebruikte symptomatische behandeling van Parkinson, maar gaat gepaard met bijwerkingen zoals onwillekeurige abnormale bewegingen, genoemd...

MALDI massaspectrometrie Imaging van neuropeptiden bij de ziekte van Parkinson

Het doel van deze techniek is om serotonine (5-HT) neurotransmitter functie beoordelen in het leven en gratis-ademende dier met farmacologische magnetic resonance imaging (phMRI) en een intraveneuze uitdaging met een selectieve serotonine heropname remmers (SSRI's), fluoxetine.

Het gebruik van Farmacologische fMRI-uitdaging in de Pre-klinisch onderzoek: Toepassing op de 5-HT-systeem

Leer metaalverdeling in hersenweefsel kwantificeren met LA-ICP-MS in muizen. Deze gevoelige techniek behoudt ruimtelijke informatie over ijzer en zink voor onderzoek naar neurodegeneratieve ziekten.

Imaging Metals in hersenweefsel door Laser Ablation - inductief gekoppeld plasma - massaspectrometrie (LA-ICP-MS)

Meer video's verkennen