Name: teelt van Caenorhabditis elegans In drie dimensies in het Laboratorium (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-12-12T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 1 s
Description: Leer een 3D-kweeksysteem bouwen voor Caenorhabditis elegans om natuurlijke omstandigheden te simuleren. Deze methode verbetert gedrags- en fitheidsstudies in vergelijking met standaard 2D-technieken.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Dit werk werd ondersteund door een New Investigator Grant [2014R1A1A1005553] van de National Research Foundation Korea (NRF) naar JIL; en een Yonsei University Future Leader Challenge Grant [2015-22-0133] om JIL

1. Bereid Oplossingen voor NGT-3D en NGB-3D <ol><li> Bereid de volgende steriele oplossingen: 1 l 0,1454 M NaCl-oplossing, 1 L van 1 M CaCl2, 1 L van 1 M MgSO4, lysogenie bouillon (LB), 1 L van 1 M KPO 4 buffer (108,3 g KH 2 PO 4 en 35,6 g K 2 HPO 4, en vul H 2 O tot 1 L). Productie van NGM behulp van deze oplossingen kan worden gevonden in een eerder protocol 10. </li><li> Oplossingen autoclaaf bij 121 ° C, 15 min. </li><li> Bereid 50 ml van een steriele 5 mg / ml oplossing cholesterol. In een 50 ml conische buis, meng 0,25 g cholesterol en 50 ml 99,99% ethanol en meng. Niet in een autoclaaf. Steriliseer de oplossing cholesterol via een 50 ml spuit met een 0,45 urn spuitfilter. Dit zal ook eventuele onopgeloste cholesterol te verwijderen. </li><li> (Optioneel) Maak 10 ml van een 150 mM 2&#39;-deoxy-5-fluoruridine (FUdR) voorraad. In een 15 ml conische buis, meng 0,3693 gvan FUdR en 10 ml gedestilleerd water. Goed schudden. </li></ol> 2. Bereid Cultuur van bacteriën voor NGT-3D en NGB-3D <ol><li> Inoculeer 10 ml LB-bouillon met bacteriën. De standaard bacteriën gebruikt voor C. elegans voeden is E. coli stam OP50. </li><li> Cultuur de bacteriële inoculatie bij 37 ° C in een schudincubator nachts. </li><li> Ter voorbereiding van een seriële verdunning, aliquot 9 ml van de NaCl oplossing in steriele 15 ml conische buizen. Bijvoorbeeld, monster 9 ml in een totaal van 7 buizen een 10 -7 verdunning van OP50 stam E. coli maken. </li><li> Met behulp van een steriele 1000 ui pipet Pipetteer 1 ml van de bacteriële kweek of verdunde bacteriële kweek in de nieuwe steriele buis met 9 ml NaCl-oplossing en vortex het mengsel 10 ml ook. Herhaal dit tot de gewenste bacteriële verdunning wordt bereikt. OPMERKING: De gewenste bacteriële verdunning hangt af van het type en de toestand van bacteriën en de exacte experimentele omstandigheden.Bijvoorbeeld, een 10 -6 - 10 -8 verdunning van OP50 stam E. coli werd voldoende is om 1-200 bacteriekolonies per 6,5 ml NGT-3D buis. Wormen betrouwbaar ontwikkeld en gereproduceerd normaal wanneer het aantal kolonies was dan 60, die zich bij een verdunning van 10 -6 - 10 -7. Voor NGB-3D, maken gebruik van een verdunning van 10 -8. </li></ol> 3. Het maken NGT-3D en NGB 3D (200 ml) <ol><li> Na bereiding van de bacteriecultuur, meng 0,6 g NaCl, 1 g gegranuleerd agar en 0,5 g pepton in een 500 ml kolf. Plaats een magnetische roerstaaf in de kolf. </li><li> Voeg 195 ml gedestilleerd water en hebben betrekking op de mond van de kolf in aluminiumfolie. </li><li> Autoclaaf 121 ° C gedurende 15 minuten. </li><li> Plaats de hete geautoclaveerde kolf op een roer plaat, en roer op een matig tempo gedurende minstens 2 uur. Koel de kolf tot 40 ° C. Zorg ervoor dat u voldoende afkoelen als de voortzetting van hier bij hoge temperaturen kunnen leiden tot vertroebeling van het afgewerkte agar.Evenwel lagere temperaturen resulteren in voortijdige verharding van de agar. <ol><li> (Optioneel) Om het tempo van het koelproces, zet de kolf in een 40 ° C waterbad 15 minuten voordat het op een roer plaat. </li></ol></li><li> Wanneer de temperatuur van de agar media 40 ° C bereikt, voeg 200 ul 1 M CaCl2 200 gl van 5 mg / ml cholesterol oplossing, 200 ul 1 M MgSO4 en 5 ml 1 M KPO 4 buffer oplossing blijft roeren tot eindconcentraties van 1 mM CaCl2, 5 ug / ml cholesterol, 1 mM MgSO4, 1 mM KPO 4. <ol><li> (Optioneel) voor NGT-3D levensduur assay voeg 80 ul van 150 mM FUdR tot een eindconcentratie van 120 pM 12. </li></ol></li><li> Voeg 6 ml van de 10 ml verdunde bacteriecultuur uit stap 2.4 in de kolf direct. <ol><li> (Optioneel) voor NGT-3D, verwijderen 6 ml agar media vóór stap 3.6 en houd het warm apart. Dit medium wordt gebruikt voor het bacterievrijbovenste laag. </li></ol></li><li> Met behulp van steriele procedures, afzien van de media in een steriele cultuur kamer. Zorg ervoor dat het deksel van de kamer sluit stevig vast. <ol><li> (Optioneel) voorkoming van bacteriële kolonies vormen op het bovenoppervlak van de agar, maken een laag bacterievrij agar media uit stap 3.6.1 bovenaan voor de media uit stap 3.7 volledig verhardt. Dit zal een bacterie zone boven in de NGT-3D maken. </li><li> Voor NGT-3D, giet 6,5 ml medium in de 8 ml doorzichtige plastic testbuisjes een bacterie agarlaag maken, en zorgvuldig afzien 200 pl van het bacterievrije media bovenop het deels geharde 3D media een dun maken bacterie- vrij laag bovenop. </li><li> Voor NGB-3D, giet 65 ml van media in de 25 cm 2 doorzichtige plastic celcultuur fles. Dit bedrag moet het lichaam van de 25 cm 2 celkweek fles te vullen. </li></ol></li><li> Reactie kamers verticaal bij kamertemperatuur gedurende één week om bacteriële kolonies groeieneen aanzienlijke grootte diameter van ten minste 1 mm. <ol><li> (Optioneel) voor de levensduur test in NGT-3D, cover kamers met aluminiumfolie aan het licht degradatie van FUdR voorkomen. </li></ol></li></ol> 4. Meet de geschiktheid van Worm Bevolking op NGT-3D (Relative Brood Maat Assay) <ol><li> Kies een L4 stadium worm met behulp van een platina draad oppikken en overbrengen op een bacterie-vrij NGM plaat. Sta worm vrij bewegen gedurende enkele minuten om bacteriën gehecht aan zijn lichaam. </li><li> Herhaal stap 4.1 en zorg ervoor dat de worm is vrij van bacteriën. In het algemeen, twee herhalingen van 4,1 voldoende. </li><li> Plaats de schone worm voorzichtig op het oppervlak van de 3D media met een platina draad pick. De worm moet uiteindelijk voer de agar in de 3D-agar matrix. </li><li> Sluit het deksel los waardoor wat lucht te krijgen in de buis, maar het voorkomen van het drogen van de agar media. </li><li> Incubeer gedurende 96 uur bij 20 ° C. </li><li> Na 4 dagen, sluit de deksels goed vast en plaats deNGT-3D kweekkamer in een 88 ° C waterbad om de agar te smelten. De hitte doodt wormen, maar hun lichamen blijven intact. OPMERKING: met 8 ml buizen voor NGT-3D, 20 - 30 min incubatie meestal voldoende. </li><li> Met behulp van een glazen pipet de gesmolten media op een 9 cm plastic petrischaal. Plastic pipetten zijn niet mogelijk, zoals wormen vaak kan vasthouden aan hen. </li><li> Met behulp van een transmissie stereo stereomicroscoop Tel het aantal wormen in de L3, L4 en volwassen stadia. Heeft wormen die zijn L2 fase en jonger niet mee, omdat de F1 en F2 generaties hier kan worden verward. Dus deze test is een relatief broedselgrootte test in plaats van een totale broedselgrootte assay. </li></ol> 5. Beeld en Record Worm gedrag op NGB-3D <ol><li> Kies een L4 stadium worm met behulp van een platina draad oppikken en verwijder alle bacteriën vast aan de oppervlakte door de overdracht aan een bacterie-vrij NGM plaat en waardoor zij zich vrij te bewegen voor een paar minuten. </li><li> Herhaal stap 5.1 om ervoor te zorgen dat de worm is vrij van bacteriën. </li><li> Plaats de schone worm voorzichtig op het midden van de agar oppervlak van de NGB 3D nabij de hals van de fles met een platina draad pick. De worm moet uiteindelijk voer de agar in de 3D-agar matrix. </li><li> Sluit het deksel los waardoor wat lucht te krijgen in de buis, terwijl het voorkomen van het drogen van de agar media. </li><li> Afbeelding of de worm onder een transmissie stereo dissectie microscoop te leggen. Pas de focus als de worm door de 3D-matrix beweegt. </li></ol>

<ol><li>Corsi, A. K., Wightman, B., Chalfie, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Transparent+Window+into+Biology%3A+A+Primer+on+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">A Transparent Window into Biology: A Primer on Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 200 (2), 387-407 (2015).</li>
<li>Consortium, C. E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome+sequence+of+the+nematode+C.+elegans%3A+a+platform+for+investigating+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Genome sequence of the nematode C. elegans: a platform for investigating biology.</a> Science. 282 (5396), 2012-2018 (1998).</li>
<li>Choi, J. I., Yoon, K. H., Kalichamy, S. S., Yoon, S. S., Lee, J. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+natural+odor+attraction+between+lactic+acid+bacteria+and+the+nematode+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22ISME+J%22%5BJournal%5D)">A natural odor attraction between lactic acid bacteria and the nematode Caenorhabditis elegans.</a> ISME J. 10 (3), 558-567 (2016).</li>
<li>Gaertner, B. E., Phillips, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Caenorhabditis+elegans+as+a+platform+for+molecular+quantitative+genetics+and+the+systems+biology+of+natural+variation%5BTitle%5D)+AND+%22Genet+Res+%28Camb%29%22%5BJournal%5D)">Caenorhabditis elegans as a platform for molecular quantitative genetics and the systems biology of natural variation.</a> Genet Res (Camb). 92 (5-6), 331-348 (2010).</li>
<li>Cutter, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Caenorhabditis+evolution+in+the+wild%5BTitle%5D)+AND+%22Bioessays%22%5BJournal%5D)">Caenorhabditis evolution in the wild.</a> Bioessays. 37 (9), 983-995 (2015).</li>
<li>Brenner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+genetics+of+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">The genetics of Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 77 (1), 71-94 (1974).</li>
<li>Felix, M. A., Braendle, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+natural+history+of+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">The natural history of Caenorhabditis elegans.</a> Curr Biol. 20 (58), R965-R969 (2010).</li>
<li>Barriere, A., Felix, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+local+genetic+diversity+and+low+outcrossing+rate+in+Caenorhabditis+elegans+natural+populations%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">High local genetic diversity and low outcrossing rate in Caenorhabditis elegans natural populations.</a> Curr Biol. 15 (13), 1176-1184 (2005).</li>
<li>Lee, T. Y., Yoon, K. H., Lee, J. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NGT-3D%3A+a+simple+nematode+cultivation+system+to+study+Caenorhabditis+elegans+biology+in+3D%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Open%22%5BJournal%5D)">NGT-3D: a simple nematode cultivation system to study Caenorhabditis elegans biology in 3D.</a> Biol Open. 5 (4), 529-534 (2016).</li>
<li>Lewis, J. A., Flemming, J. T. Basic Culture Methods. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aLewis%2C+JA+%22Caenorhabditis+elegans.%3A+Modern+Biological+Analysis+of+an+Organism%22">Caenorhabditis elegans.: Modern Biological Analysis of an Organism</a>. Epstein, H. F., Shakes, D. C. 48, 4-27 (1995).</li>
<li>Choi, S. Y., Yoon, K. H., Lee, J. I., Mitchell, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Violacein%3A+Properties+and+Production+of+a+Versatile+Bacterial+Pigment%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Res+Int%22%5BJournal%5D)">Violacein: Properties and Production of a Versatile Bacterial Pigment.</a> Biomed Res Int. , 465056(2015).</li>
<li>Solis, G. M., Petrascheck, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+Caenorhabditis+elegans+life+span+in+96+well+microtiter+plates%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Measuring Caenorhabditis elegans life span in 96 well microtiter plates.</a> J Vis Exp. (48), (2011).</li>
<li>Kwon, N., Pyo, J., Lee, S. J., Je, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((3-D+worm+tracker+for+freely+moving+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">3-D worm tracker for freely moving C. elegans.</a> PLoS One. 8 (2), e57484(2013).</li>
<li>Pierce-Shimomura, J. T., Chen, B. L., Mun, J. J., Ho, R., Sarkis, R., McIntire, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+analysis+of+crawling+and+swimming+locomotory+patterns+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Genetic analysis of crawling and swimming locomotory patterns in C. elegans.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 105 (52), 20982-20987 (2008).</li>
<li>Kwon, N., Hwang, A. B., You, Y. J., SJ, V. L., Je, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissection+of+C.+elegans+behavioral+genetics+in+3-D+environments%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Dissection of C. elegans behavioral genetics in 3-D environments.</a> Sci Rep. 5, 9564(2015).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Het laboratorium teelt van C. elegans het gebruik van de klassieke nematode groei media platen was van cruciaal belang voor de honderden belangrijke ontdekkingen die het onderzoek in C. elegans heeft verstrekt. Hier presenteren we nieuwe methoden om C. elegans kweken in een omgeving die een betere afspiegeling hun natuurlijke driedimensionale habitats. Hoewel andere methoden zijn gebruikt om C. elegans observeren 3D 13, is het eerste protocol dat kweken van wormen maakt in ...

Het onderzoek naar de nematode Caenorhabditis elegans in het laboratorium heeft in de afgelopen vijf decennia geleid tot baanbrekende ontdekkingen op het gebied van de biologie1. C. elegans was de eerste meercellige organisme waarvan het genoom werd gesequenced in 19982, en het is van onschatbare waarde geweest bij het begrijpen van de bijdragen van individuele genen aan de ontwikkeling, fysiologie en het gedrag van een heel organisme. Wetenschappers zijn nu op zoek naar meer inzicht in hoe deze genen kunnen bijdragen aan de overleving en reproductieve fitness van organismen in hun natuurlijke omgevingen, door vragen te stellen over ecologie en evolutie op genetisch niveau3-5.
C. elegans kan opnieuw een uitstekend systeem bieden om deze vragen te beantwoorden. Er is echter weinig bekend over de biologie van C. elegans in natuurlijke nematode habitats, en er zijn geen huidige methoden om gecontroleerde natuurlijke omstandigheden van C. elegans in het laboratorium te simuleren. In het laboratorium wordt C. elegans gekweekt op het oppervlak van agar platen gezaaid met E. coli bacteriën6. In de natuur, kunnen C. elegans en verwante nematoden echter schaars worden aangetroffen in bodems over de hele wereld, maar ze worden specifiek aangetroffen in rottend fruit en plantaardig materiaal7,8. Deze driedimensionale (3D) complexe omgevingen verschillen aanzienlijk van de eenvoudige 2D omgevingen waaraan wormen in het laboratorium worden blootgesteld.
Om vragen over de biologie van nematoden in een meer natuurlijke 3D omgeving te beginnen te beantwoorden, hebben we een 3D habitat ontworpen voor laboratorium cultivatie van nematoden die we Nematode Growth Tube 3D of NGT-3D noemen voor kort9. Het doel was om een 3D groeisysteem te ontwerpen dat vergelijkbare groei, ontwikkeling en vruchtbaarheid mogelijk maakt met de standaard 2D Nematode Growth Media (NGM) platen10. Dit systeem ondersteunt de groei van bacteriën en nematoden gedurende hun hele levenscyclus in 3D, stelt wormen in staat zich vrij te bewegen en te gedragen in drie dimensies, en is eenvoudig en goedkoop te fabriceren en te gebruiken.
In het huidige onderzoek bieden we een stapsgewijze methode om NGT-3D te fabriceren en wormontwikkeling en vruchtbaarheid te evalueren. Naast het beoordelen van wormfitheid in 3D, probeerden we wormgedrag en fysiologie in 3D cultivatie te beeldhouwen, te videoën en te beoordelen. Daarom presenteren we hier, naast NGT-3D, een alternatieve methode genaamd Nematode Growth Bottle 3D of NGB-3D, voor de microscopische beeldvorming van C. elegans tijdens 3D cultivatie. Dit zal vooral belangrijk zijn voor de studie van bekende gedragingen die in 2D zijn geïdentificeerd, en de identificatie van nieuwe gedragingen uniek voor 3D cultivatie.

<table><tbody><tr><td>LB bouillon, Miller (Luria-Bertani)</td><td>Difco</td><td>224620</td><td></td></tr><tr><td>Natriumchloride</td><td>DAEJUNG</td><td>7548-4400</td><td>58.44 MW</td></tr><tr><td>Agar, gegranuleerd</td><td>Difco</td><td>214530</td><td></td></tr><tr><td>Pepton</td><td>Bacto</td><td>211677</td><td></td></tr><tr><td>Calciumchloride, dihydraat</td><td>Bio Basic</td><td>CD0050</td><td>2*H2O; 147.02 MW</td></tr><tr><td>Cholesterol</td><td>Bio Basic</td><td>CD0122</td><td>386.67 MW</td></tr><tr><td>Ethylalcohol</td><td>B&amp;J</td><td>RP090-1</td><td>99.99%; 46.07 MW</td></tr><tr><td>Magnesiumsulfaat, watervrij</td><td>Bio Basic</td><td>MN1988</td><td>120.37 MW</td></tr><tr><td>Kaliumfosfaat, monobasisch, watervrij</td><td>Bio Basic</td><td>PB0445</td><td>136.09 MW</td></tr><tr><td>2'-Deoxy-5-fluorouridine</td><td>Tokyo Chemical Industry</td><td>D2235</td><td>246.19 MW</td></tr><tr><td>Kaliumfosfaat, dibasisch, watervrij</td><td>Bio Basic</td><td>PB0447</td><td>174.18 MW</td></tr><tr><td>Multi-Purpose Testbuizen</td><td>Stockwell Scientific</td><td>ST.8570</td><td>8 ml</td></tr><tr><td>Testbuisver sluitingen</td><td>Stockwell Scientific</td><td>ST.8575</td><td></td></tr><tr><td>Cell Culture Flask</td><td>SPL Lifescience</td><td>70125</td><td>25 cm2</td></tr><tr><td>Research Stereo Microscope</td><td>Nikon</td><td>SMZ18</td><td></td></tr><tr><td>High-Definition Color Camera Head</td><td>Nikon</td><td>DS-Fi2</td><td></td></tr><tr><td>PC-Based Control Unit</td><td>Nikon</td><td>DS-U3</td><td></td></tr><tr><td>NIS-Elements Basic Research, Microscope Imaging Software</td><td>Nikon</td><td>MQS32000</td><td></td></tr></tbody></table>

teelt van<em&gt; caenorhabditis elegans</em&gt; in drie dimensies in het laboratorium

Cultivation of Caenorhabditis elegans in Three Dimensions in the Laboratory

Het gebruik van genetisch modelorganismen zoals Caenorhabditis elegans heeft in de afgelopen vijf decennia geleid tot baanbrekende ontdekkingen in de biologie. Het meeste wat we weten over C. elegans beperkt zich tot de laboratoriumcultivatiek van de nematoden die mogelijk niet noodzakelijkerwijs de omgevingen weerspiegelen waarin ze normaal gesproken in de natuur voorkomen. De cultivatie van C. elegans in een 3D-habitat die meer lijkt op de 3D-matrix die wormen in de natuur tegenkomen in rotte vruchten en vegetatieve compost, zou nieuwe fenotypen en gedragingen kunnen onthullen die niet waargenomen worden in 2D. Bovendien kunnen experimenten in 3D aantonen hoe fenotypen die we in 2D waarnemen relevant zijn voor de worm in de natuur. Hier wordt een nieuwe methode gepresenteerd waarbij C. elegans normaal groeit en zich voortplant in drie dimensies. De cultivatie van C. elegans in Nematode Growth Tube-3D (NGT-3D) kan ons toelaten om de reproductieve fitheid van C. elegans-stammen of verschillende condities in een 3D-omgeving te meten. We presenteren ook een nieuwe methode, genaamd Nematode Growth Bottle-3D (NGB-3D), om C. elegans in 3D te cultiveren voor microscopische analyse. Deze methoden stellen wetenschappers in staat om de biologie van C. elegans te bestuderen in omstandigheden die beter weerspiegelen de omgevingen waarin ze in de natuur voorkomen. Dit kan ons helpen de evolutionaire relevantie te begrijpen van de fysiologie en het gedrag van C. elegans dat we in het laboratorium waarnemen.

De constructie van NGT-3D is een eenvoudige en protocol dat resulteert in een agar-gevulde reageerbuis met kleine bacteriële kolonies verspreid over de agar (Figuur 1A). Wormen kunnen zich vrij bewegen door de agar matrix, vinden en de consumptie van de bacteriële kolonies. Om te bevestigen of C. elegans kunnen voortplanten en groeien normaal in NGT-3D, vergeleken we de vruchtbaarheid en larvale ontwikkeling in 3D met standaard 2D NGM platen. In de relatieve bro...

We presenteren een eenvoudige methode om 3D nematode teeltsystemen genaamd NGT-3D en NGB-3D construeren. Deze kunnen worden gebruikt om nematode fitness en gedragingen bij habitats die meer lijken op natuurlijke Caenorhabditis elegans habitats dan standaard 2D laboratorium C. elegans kweekplaten zijn bestuderen.

teelt van<em&gt; Caenorhabditis elegans</em&gt; In drie dimensies in het Laboratorium

The use of genetic model organisms such as Caenorhabditis elegans has led to seminal discoveries in biology over the last five decades. Most of what we ...

Het algemene doel van deze procedure is om een driedimensionaal kweeksysteem voor nematoden te produceren dat natuurlijke omstandigheden beter kan simuleren. Deze methode kan belangrijke vragen beantwoorden op het gebied van de ontwikkeling, fysiologie en het gedrag van C elegans. We hadden het idee voor deze methode voor het eerst toen we natuurlijk nematodengedrag in rottend fruit bestudeerden, wat een 3D-omgeving is.Deze techniek heeft een voordeel ten opzichte van standaard tweedimensionale kweektechnieken omdat nematoden in de natuur in 3D-habitats verblijven. Hoewel deze methode is ontwikkeld voor de kweek van C elegans, kan deze ook op andere nematoden worden toegepast. Deze procedure zal worden gedemonstreerd door Tong Young Lee, een afgestudeerde student in mijn laboratorium.Om deze procedure te beginnen, steriliseert Otto Clave de bereide oplossingen gedurende 15 minuten bij 121 graden Celsius. Bereid vervolgens 50 milliliter van de steriele cholesteroloplossing met 5 milligram per milliliter. Voeg in een 50 milliliter conische buis 0,25 gram cholesterol en 50 milliliter 99,99% ethanol toe en meng goed.Steriliseer vervolgens de cholesteroloplossing met behulp van een 50 m

cultivation-caenorhabditis-elegans-three-dimensions

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Source: Petersen, C. et. al., Isolation and Characterization of the Natural Microbiota of the Model Nematode Caenorhabditis elegans. J. Vis. Exp. (2022)This video demonstrates the isolation and cultivation of bacterial species associated with Caenorhabditis elegans. A bead-based lysis of C. elegans, followed by selective culturing, enables the isolation of diverse microbial strains for further analysis.

Isolation and Cultivation of Caenorhabditis elegans-Associated Bacteria

We beschrijven hier een herziene protocol voor grootschalige kweek van embryonale C. elegans cellen. Embryonale C. elegans cellen gekweekt in vitro gebruik van deze methode, blijken differentiëren en herhalen de expressie van genen in een celspecifieke wijze. Technieken die directe toegang tot de cellen of isolatie van specifieke celtypen van andere weefsels vereisen, kunnen worden toegepast C. elegans gekweekte cellen.

Een methode voor het kweken van embryonale<em&gt; C. elegans</em&gt; Cellen

C. elegans is meestal gekweekt op vaste agar platen of in vloeibare culturen bezaaid met E. coli. Om te voorkomen dat bacteriële bijproducten van verstorende toxicologische en nutritionele studies, hebben we gebruik gemaakt van een axenische vloeibaar medium, CeHR, te groeien en te synchroniseren een groot aantal wormen voor een reeks afgeleide toepassingen.

Kweken Caenorhabditis elegans In Axenische Liquid Media en Creatie van transgene Worms door bombardement met microdeeltjes

Hier presenteren we de nematode Caenorhabditis elegans als een veelzijdig hostmodel aan de studie van microbiële interactie.

De Nematode Caenorhabditis Elegans - een veelzijdig In Vivo -Model om te studeren van Host-microbe interacties

Dit protocol beschrijft een methode voor de grootschalige teelt van Caenorhabditis elegans op solide media. Als alternatief voor vloeibare cultuur kunnen dit protocol verkrijgen van parameters voor verschillende schalen onder plaat gebaseerde teelt. Dit verhoogt de vergelijkbaarheid van de resultaten door het weglaten van de morfologische en metabole verschillen tussen vloeibare en vaste mediacultuur.

Plaat gebaseerde grootschalige teelt van Caenorhabditis elegans: bereiding van de monsters voor de studie van de metabole veranderingen bij Diabetes

Een protocol voor het in beeld brengen van de dynamische microtubuli in vivo met behulp van fluorescerend gelabeld Eindbindend eiwit is gepresenteerd. We beschreven de methoden om de dynamische microtubuli in het posterieure laterale microtubuli (PLM) neuron van C. elegans te labelen,in beeld te geven en te analyseren .

In vivo Beoordeling van microtubule dynamica en oriëntatie in Caenorhabditis elegans neuronen

Het protocol beschrijft een eenvoudig microfluïdisch chipontwerp en microfabricagemethodologie die wordt gebruikt om C. elegans te laten groeien in aanwezigheid van een continue voedselvoorziening gedurende maximaal 36 uur. Het groei- en beeldvormingsapparaat maakt ook intermitterende langetermijnbeeldvorming met hoge resolutie van cellulaire en subcellulaire processen mogelijk tijdens de ontwikkeling gedurende meerdere dagen.

Een eenvoudige microfluïdische chip voor groei op lange termijn en beeldvorming van Caenorhabditis elegans

Compostmicrokosmos brengt de microbiële diversiteit in de natuur in het laboratorium om microbioomonderzoek in Caenorhabditis elegans te vergemakkelijken. Hier worden protocollen verstrekt voor het opzetten van microkosmosexperimenten, waarbij de experimenten het vermogen aantonen om de microbiële diversiteit van het milieu te moduleren om de relaties tussen microbiële diversiteit in het milieu en de samenstelling van het microbioom van de wormdarm te onderzoeken.

Compost microkosmos als microbieel diverse, natuurlijk-achtige omgevingen voor microbioomonderzoek in Caenorhabditis elegans

Hier wordt een geoptimaliseerd protocol gepresenteerd voor het kweken van geïsoleerde individuele nematoden op vaste media in microgefabriceerde multi-well-apparaten. Met deze aanpak kunnen individuele dieren gedurende hun hele leven worden gevolgd op een verscheidenheid aan fenotypen die verband houden met veroudering en gezondheid, waaronder activiteit, lichaamsgrootte en -vorm, bewegingsgeometrie en overleving.

Langetermijnkweek en monitoring van geïsoleerde Caenorhabditis elegans op vaste media in multiwell-apparaten

Hier presenteren we een protocol om geïsoleerde individuele nematoden op vaste media te kweken voor levenslange fysiologische parametertracking en fluorescentiekwantificering. Dit kweeksysteem omvat een palmitinezuurbarrière rond putten met één worm om te voorkomen dat dieren vluchten, waardoor aversieve interventies mogelijk zijn, waaronder pathogene bacteriën en chemische stressoren.

Langetermijnkweek van individuele Caenorhabditis elegans op vaste media voor longitudinale fluorescentiemonitoring en aversieve interventies

Leer een 3D-kweeksysteem bouwen voor Caenorhabditis elegans om natuurlijke omstandigheden te simuleren. Deze methode verbetert gedrags- en fitheidsstudies in vergelijking met standaard 2D-technieken.

teelt van

Meer video's verkennen