Name: Shunt Chirurgie, Right hartkatheterisatie, en Vasculaire Morphometry in een diermodel voor Flow-geïnduceerde pulmonale arteriële hypertensie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-02-11T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 23 s
Description: Leer shuntchirurgie en rechterhartkatheterisatie voor pulmonale arteriële hypertensie-onderzoek bij ratten. Deze methoden combineren hemodynamische evaluatie met vasculaire morfometrie voor betrouwbare resultaten.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Deze studie werd ondersteund door het Netherlands Cardiovascular Research Initiative, de Nederlandse Hartstichting, de Nederlandse Federatie van Universitaire Medische Centra, de Nederlandse Organisatie voor Gezondheidsonderzoek en Zorgontwikkeling en de Koninklijke Nederlandse Akademie van Wetenschappen (CVON nr. 2012-08, PHAEDRA, Het Sebald fonds, Stichting Hartekind).

Procedures waarbij proefdieren zijn goedgekeurd door de Nederlandse Centrale Commissie Dierproeven en de Animal Care Comite op Universitair Medisch Centrum Groningen (NL). Zowel Wistar en Lewis ratten met gewichten tussen 180 en 300 g werden gebruikt. 1. Huisvesting en acclimatisatie <ol><li> Na aankomst bij de centrale dier faciliteit, huis ratten in groepen van 5 per kooi. Gedurende een 7-dagen acclimatisatie periode wennen de ratten humane behandeling, maar geen experimentele procedures uitvoeren. </li></ol> 2. Voorbereiding en Injectie van Steriele Monocrotalin <ol><li> Voor 1 ml 60 mg / ml monocrotalin (MCT) oplossing Weeg 60 mg monocrotalin in een 2 ml buis. Voeg 700 ul van 0,9% NaCl. Voeg 200 ul van 1 M HCl. Verwarm de oplossing in de buis onder warm stromend leidingwater en vortex het. Met 6 N NaOH om de pH aan 7,0 te brengen. Gebruik steriele techniek voor bereiding van MCT voor injectie in knaagdieren. </li&gt; <li> Injecteer 1 ml steriele 60 mg / ml MCT oplossing per kg subcutaan in de nek (0,3 ml 60 mg / ml MCT voor een 300-g rat). OPMERKING: We liever geen kleinere hoeveelheden gebruiken vanwege de grotere kans dat de geïnjecteerde dosis geschikt zal zijn. </li></ol> 3. Aorta-caval Shunt Surgery <ol><li> Anesthesie. <ol><li> Vul de inductie kamer met 5% isofluraan / 100% O 2 (stroomsnelheid: 1 L / min) en plaats de rat in de kamer. Controleer of er voldoende diepte van de anesthesie door het uitvoeren van een hinde teen knijpen. Weeg de rat. </li><li> Scheren en de buik schoonmaken over een gebied dat ongeveer 8 cm lang en 3 cm breed. Plaats de rat op zijn rug op een warmte-mat (37 ° C) bedekt door een steriele mat. </li><li> Plaats de snuit in een beademingsmasker / kap met 2-3% isofluraan / 100% O 2 (stroomsnelheid: 1 L / min). Controleer de diepte van de anesthesie door het uitvoeren van een hinde teen knijpen. Toepassen oogzalf tot droog voorkomen terwijl onder verdoving. </li></ol></li><li> shunt Surgery. <ol><li> Scrub de huid met chloride-hexidine voor desinfectie. Injecteren 0,01 mg / kg buprenorfine subcutaan voor postoperatieve analgesie. </li><li> Gebruik steriele instrumenten voor een operatie. Een insnijding met een # 10 scalpel in de buik op de middellijn vanaf 1 cm onder het diafragma een beneden uitstrekt tot net boven de genitaliën. </li><li> Til de darm met een wattenstaafje, bedek de ingewanden in een steriele natte gaas (0,9% NaCl), en plaats ze op de linkerzijde van het dier. </li><li> Wattenstaafjes de membranen die de abdominale aorta en vena cava inferior van de omliggende weefsels hechten scheiden. LET OP: niet de membranen tussen de aorta en de vena cava ontleden. </li><li> Gebruik splinter forceps, verwijder de perivasculaire aorta vet net boven de bifurcatie, alleen aan de rechterzijde van de aorta en alleen op de plaats waar de naald wordt ingebracht. </li><li> Gebruik wattenstaafjes om de aorta en vena cava te scheiden van 2 mm supeot de plaats waar de naald om ruimte te scheppen voor een Biemer klem wordt geplaatst. </li><li> Op dit gebied, in de eerste plaats een losse ligatuur (5-0 hechtdraad) rond de aorta. Maak spanning op de ligatuur door het plaatsen van een Kocher klem op, en plaats de Kocher superieur aan de incisie (Figuur 1A). Plaats de Biemer klem gewoon superieur aan de ligatuur (Figur e 1A). </li><li> Met een wattenstaafje, comprimeren vena cava zo distaal mogelijk de flux (figuur 1A) belemmeren. Bocht een naald (18 G in dit protocol) in een hoek van 45 graden, met de opening naar buiten wijzen (figuur 1A). </li><li> Onder een hoek van 90 graden, de naald in de aorta, net boven de bifurcatie, met de opening van de naald naar links (figuur 1A). Manipuleren van de punt van de naald naar links en steek deze in de vena cava. LET OP: De naaldtip moet nu visible in de vena cava (figuur 1B). </li><li> Gebruik een tweede wattenstaafje om de resterende bloed in de aorta duwen van de insertieplaats trombose te voorkomen. Droog het gebied rond de shunt met een steriel gaas zodat de lijm voldoende blijven. </li><li> Trek de gehele naald uit de aorta en onmiddellijk een druppel weefsel lijm op de prikplaats in de aorta. Zorg ervoor dat de wattenstaafje niet te lijmen aan het weefsel. Ontspanschakelaars de aorta. </li><li> handmatig controleren de shunt door te trekken aan en loslaten van de ligatuur van de aorta proximaal van de shunt. Versoepeling moet de vena cava distale kleur aan de shunt in fel rood en creëren turbulentie op de shunt website. LET OP: Aanscherping zal het bloed terug naar donkerrood draaien in de vena cava. </li><li> Plaats de darmen opnieuw in het dier. Sluit de spierlaag en huid met resorbeerbare 4-0 hechtingen. Ventileren het dier met 100% O 2 om te herstellen van de anesthesie. NB: Gebruik geen ani geen reactiemal onbeheerd totdat het voldoende bewustzijn heeft herwonnen om borstligging handhaven. </li></ol></li><li> Sham Surgery. <ol><li> Voer alle bovenstaande procedures behalve voor het inbrengen van de naald in de aorta. </li></ol></li><li> Post-operatieve zorg. <ol><li> Plaats de rat in een kooi en in een incubator bij 37 ° C tot de volgende ochtend. </li><li> Ongeveer 6 uur na de operatie, injecteren 0,01 mg / kg subcutaan buprenorfine voor postoperatieve analgesie. Herhaal de volgende ochtend als ratten tekenen van ongemak. OPMERKING: De eerste 3 dagen na de operatie, ratten neiging om te eten en drinken minder (dit is vooral belangrijk wanneer voer of drinkwater worden gemengd met medicijnen). De meeste ratten normaal gedrag 3 dagen na de operatie. Zo niet, op de voet volgen. Gewichtsverlies van meer dan 15% in 1 week als abnormaal beschouwd en deze ratten worden gedood door de extractie van het circulerende bloedvolume terwijl onder verdoving. </li></ol></li></ol> LET OP: In dit protocol, het dier wordt gedood door de extractie van het circulerend bloedvolume, terwijl onder verdoving. <ol><li> Sacrifice 1 dag na de operatie (MF8) voor het begin van de cellulaire en functionele reacties op verhoogde pulmonale bloedstroom (bijvoorbeeld gen up-regulering of begin transcriptiefactoren). </li><li> Sacrifice 1 week na de operatie (MF14) voor een vroeg stadium van PAH vasculaire fenotype (mediale hypertrofie zonder neointima laesies). </li><li> Sacrifice 2 weken na de operatie (MF21) voor een gevorderd stadium PAH vasculaire fenotype (gemarkeerd mediale hypertrofie en de vorming van nieuwe intima) met een lichte verhoging van de RVP en mPAP. </li><li> Offeren 3 weken na de operatie (MF28) voor een eindstadium PAH vasculaire fenotype (aangeduid neointima occlusie) en sterke verhoging van RVP en mPAP. Klinische symptomen van rechter ventrikel falen zijn gebruikelijk in dit stadium. </li><li> Sacrifice na dag 28 (MF-RVF) Voor PAH geassocieerd rechter ventrikel falen (RVF), klinisch gedefinieerd als kortademigheid, ernstige lethargie, en gewichtsverlies (&lt;10% in 1 week). Beëindig ratten wanneer een van deze tekenen aanwezig is. Vaak ratten ontwikkelen deze symptomen tussen dag 28 en 35 en, indien onbewaakt, matrijs spontaan gedurende deze periode. </li></ol> 5. Recht hartkatheterisatie <ol><li> Anesthesie. <ol><li> Vul de inductie kamer met 5% isofluraan / 100% O 2 (stroomsnelheid: 1 L / min) en plaats de rat in het vak. Controleer of er voldoende diepte van de anesthesie door het uitvoeren van een hinde teen knijpen. Weeg de rat. </li><li> Scheren en reinigen van de hals aan de rechterkant ventrale zijde van de rat en voor de echocardiografie protocol, de thorax en bovenbuik. </li><li> Plaats de rat op zijn rug op een verwarmingsmat (37 ° C) en plaats de snuit in een beademingsmasker / kap met 2-3% isofluraan / 100% O 2 (stroomsnelheid: 1 L / min). De snuit moet maken aan de onderzoeker. </li><li&gt; Controleer de diepte van de anesthesie. Wees voorzichtig met ratten met ernstige PH. Als de hartslag verlaagt, vermindering van de diepte van de anesthesie. Verkiezen, voeren alle metingen binnen 20 minuten. Toepassen oogzalf tot droog voorkomen terwijl onder verdoving. </li></ol></li><li> Echocardiografie protocol. <ol><li> Voer de echocardiografie volgens de werkwijze beschreven door Brittain et al protocol. in Jupiter 13. </li></ol></li><li> Catheterisatie protocol. LET OP: Dit protocol maakt gebruik van een stijve canule met een voorgevormde tip gebogen 20 graden ten opzichte van de 15-cm silicium katheter te begeleiden met een bal 2 mm van de tip. Een 20-G naald met de opening licht gebogen naar binnen wordt gebruikt om de canule in de rechter halsader te voegen (zie de lijst van materialen). Ratten in elke fase van PAH progressie controle kan worden gebruikt in dit protocol. <ol><li> Ontsmet de hals met chloride-hexidine. Voeg een 1,5 cm incisie met een # 10 scalpel in de rechter ventrale zijdevan de hals, van rechts sleutelbeen aan de onderkaak bot. </li><li> Verspreid het weefsel met een schaar. Met behulp van een pincet, trek het weefsel uit elkaar totdat de halsader verschijnt. Ontleden de membranen rond de halsader gebruikt splinter forceps. </li><li> Zet spanning op de halsader door het plaatsen van een losse ligatuur (5-0 hechtdraad) rond het vat. Verhoog de spanning en plak de ligatuur op de beademingsmasker (Figuur 2A). </li><li> Stroomafwaarts van de insertieplaats, plaats een losse ligatuur rond het schip te draaien na de canule in situ om lekken en drukverlies te voorkomen. </li><li> Via de handvatten van een forceps, licht buigen het uiteinde van een 20-G naald met de opening naar binnen de canule te voeren met de katheter. </li><li> Voeren de punt van de 20-G naald in de ader wordt snel de canule met de katheter in het vat. Trek de naald, en sluit de ligatuurdat werd bereid in stap 5.3.4. </li><li> Het gedrag van de canule met de katheter in de halsader. De punt van de canule bij een 20 graden curve (zie stap 5.3.5). Manoeuvre de canule onder het sleutelbeen en vooraf een beetje naar rechts atrium (figuur 2C) in te voeren. </li><li> Rechts ventrikel invoeren, richt de punt van de canule naar links, naar het hart (Figuur 2D). Op het nachtkastje monitor moet een camper druk curve lijken, bijpassende figuur 2D. </li><li> Wanneer de RV druk curve constant is, noteer dan de systolische en diastolische rechter ventrikel druk 1 (sRVP1 / dRVP1). </li><li> Manipuleren van de punt van de canule naar links en naar boven. Schuif de katheter in de canule (figuur 2E). </li><li> Schuif de katheter in de belangrijkste longslagader (PA). Geen weerstand moeten worden gevoeld bij het passeren van de pulmonale klep. OPMERKING: Wanneer de katheter komt in de belangrijkste longslagader, de diastolic druk zal stijgen. Op het nachtkastje monitor moet een PA druk curve lijken, bijpassende figuur 2E. </li><li> Wanneer de PA druk curve constant is, noteert u de systolische, diastolische en gemiddelde PA druk 1 (sPAP1, dPAP1, mPAP1). </li><li> Verdere vooraf de katheter binnen de canule totdat de bal aan het uiteinde van de katheter komt te zitten in een longslagader. Let op de druk curve op het nachtkastje beeldscherm vallen en overeenkomen met de wedge druk curve in figuur 2F. </li><li> Wanneer de wiggedruk curve constant is, noteert u de systolische, diastolische en gemiddelde wiggedruk. </li><li> Trek de katheter langzaam en vervolgens te meten en noteer de waarden voor sPAP2, dPAP2, mPAP2, sRVP2 en dRVP2, zoals weergegeven op het nachtkastje monitor. </li><li> Toen in de camper, iets terug te trekken de canule en de katheter voor het meten van de gemiddelde rechter atrium druk (RAP). De curve moet overeenkomen met de RAP kromme in figuur 2A. NEETE: In dit protocol, de ratten worden gedood na de catheterisatie protocol door de extractie van het circulerend bloedvolume, terwijl onder verdoving. </li></ol></li></ol> 6. morfologie Assessment en Morphometry LET OP: In dit protocol, het dier wordt gedood door de extractie van het circulerend bloedvolume, terwijl onder verdoving. Ratten in elke fase van PAH progressie controle kan worden gebruikt in dit protocol. <ol><li> Na het offer, nemen de longen door het snijden van de luchtpijp ongeveer 5 mm boven de bronchiale vertakking en de vaten, die de longen verbinden met het hart. Doe de longen in koude zoutoplossing. Ontleden de linkerlong. Snijd de linker hoofdbronchus bij de splitsing. </li><li> Vul een 50 ml spuit met 4% paraformaldehyde, bevestig een buis met een canule op de injectiespuit, en hangen de spuit ongeveer een meter boven de werktafel. Plaats de canule in de linker hoofdbronchus aan de longen met paraformaldehyde passief te vullen.Behandel paraformaldehyde met de nodige voorzichtigheid. </li><li> Incubeer de linkerlong in paraformaldehyde gedurende 48 uur. </li><li> Uitdrogen de linkerlong van achtereenvolgens incuberen in 70% ethanol (1 uur), 80% ethanol (1 uur), 90% ethanol (1 h), 100% ethanol (3 h), xyleen (2 h), en paraffine ( 2 h). </li><li> Insluiten linkerlong in paraffine, de hilus van de long tegenover de cassette. </li><li> Vlekken de paraffine ingebedde, 4-um longcoupes met een Verhoeff of Elastica-van Gieson kleuring, volgens instructies van de fabrikant 29. Controleer de elastische laminae goed gedifferentieerd (zoals in figuur 3). Scan de gekleurde coupes bij een vergroting van 40x. </li><li> Verdeel de long in 4 kwadranten. In elk kwadrant, vindt 10 schepen met een buitendiameter van &lt;50 micrometer (intra-acinaire) en 10 schepen met een buitendiameter&gt; 50 pm (pre-acinaire). Maak een foto (2 x 40 beelden per long). Zoom in willekeurig tot 20x vergroting en foto elk schipin dit gezichtsveld selectievertekening minimaliseren. </li><li> Uitsluiten schepen die een verhouding langste / kortste diameter van&gt; 2, een onvolledige ronde vorm, of een val van meer dan een kwart van de vaatwand hebben. Opmerking: Een voorbeeld van een uitgesloten vaartuig is weergegeven in figuur 3b elk beeld op dezelfde vergroting (40X) Voeg en omvatten een schaalbalk. </li><li> Open ImageJ en de eerste foto. Trek een rechte lijn op de schaal bar in de afbeelding om de schaal te stellen via &quot;Analyse&quot; en &quot;Set schaal.&quot; Voor de &quot;bekende afstand&quot;, gebruik dan de waarde op de foto&#39;s schaal bar. Gebruik micrometer (pm) als de lengte-eenheid. Zet de schaal aan de mondiale. </li><li> Met behulp van &quot;de vrije hand selecties,&quot; trek een lijn op de binnenkant van het luminale gebied (figuur 3), en gebruik &quot;maat&quot; (Crtl m) naar dit gebied te meten. Dan trek een lijn rond de buitenste elastic plaat (figuur 3) van het totale schip oppervlaktemaat. </li><li> Bereken de luminale en buitendiameter ( <img alt="Vergelijking" src="/files/ftp_upload/55065/55065eq1.jpg" /> ) gebruik makend van <img alt="Vergelijking" src="/files/ftp_upload/55065/55065eq2.jpg" /> . </li><li> Bepalen wanddikte met <img alt="Vergelijking" src="/files/ftp_upload/55065/55065eq3.jpg" /> . </li><li> Bereken de muur / lumen verhouding met behulp <img alt="Vergelijking" src="/files/ftp_upload/55065/55065eq4.jpg" /> . </li><li> Bereken de occlusie Score met <img alt="Vergelijking" src="/files/ftp_upload/55065/55065eq5.jpg" /> . </li><li> Score het vaartuig muscularisatie (nee, gedeeltelijke of totale muscularisatie) (Figuur 3B). LET OP: Schepen met een dubbele elastische lamina voor meer dan de helft van de omtrek worden gedefinieerd als geheel gemusculariseerde. Schepen met een dubbele elastische lamina minder dan de helft van de omtrek worden gedefinieerd als gedeeltelijk gemusculariseerde. </li><li> Score het vaartuig op de aanwezigheid van een Neointima (ja of nee) (Figuur 3C). LET OP: Schepen zonder duidelijk omschreven interne elastische lamina in combinatie met (vaak excentrieke) luminale occlusie worden gedefinieerd als neointima laesies. </li></ol>

<ol><li>Hoeper, M. M., Bogaard, H. J., Condliffe, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Definitions+and+diagnosis+of+pulmonary+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Coll+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Definitions and diagnosis of pulmonary hypertension.</a> J Am Coll Cardiol. 62, D42-D50 (2013).</li>
<li>Stacher, E., Graham, B. B., Hunt, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modern+age+pathology+of+pulmonary+arterial+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Respir+Crit+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Modern age pathology of pulmonary arterial hypertension.</a> Am J Respir Crit Care Med. 186 (3), 261-272 (2012).</li>
<li>Levy, M., Maurey, C., Celermajer, D. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impaired+apoptosis+of+pulmonary+endothelial+cells+is+associated+with+intimal+proliferation+and+irreversibility+of+pulmonary+hypertension+in+congenital+heart+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Coll+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Impaired apoptosis of pulmonary endothelial cells is associated with intimal proliferation and irreversibility of pulmonary hypertension in congenital heart disease.</a> J Am Coll Cardiol. 49 (7), 803-810 (2007).</li>
<li>Sakao, S., Tatsumi, K., Voelkel, N. F. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20008280">Reversible or irreversible remodeling in pulmonary arterial hypertension.</a> Am J Respir Cell Mol Biol. 43 (6), 629-634 (2010).</li>
<li>Gomez-Arroyo, J. G., Farkas, L., Alhussaini, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+monocrotaline+model+of+pulmonary+hypertension+in+perspective%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Lung+Cell+Mol+Physiol%22%5BJournal%5D)">The monocrotaline model of pulmonary hypertension in perspective.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 302 (4), L363-L369 (2012).</li>
<li>Jones, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serial+noninvasive+assessment+of+progressive+pulmonary+hypertension+in+a+rat+model%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+-+Heart+Circ+Physiol%22%5BJournal%5D)">Serial noninvasive assessment of progressive pulmonary hypertension in a rat model.</a> Am J Physiol - Heart Circ Physiol. 283 (1), 364-371 (2002).</li>
<li>Hoffman, J. I., Rudolph, A. M., Heymann, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulmonary+vascular+disease+with+congenital+heart+lesions%3A+Pathologic+features+and+causes%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Pulmonary vascular disease with congenital heart lesions: Pathologic features and causes.</a> Circulation. 64 (5), 873-877 (1981).</li>
<li>van Albada, M. E., Berger, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulmonary+arterial+hypertension+in+congenital+cardiac+disease--the+need+for+refinement+of+the+evian-venice+classification%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiol+Young%22%5BJournal%5D)">Pulmonary arterial hypertension in congenital cardiac disease--the need for refinement of the evian-venice classification.</a> Cardiol Young. 18 (1), 10-17 (2008).</li>
<li>Dickinson, M. G., Bartelds, B., Borgdorff, M. A., Berger, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+disturbed+blood+flow+in+the+development+of+pulmonary+arterial+hypertension%3A+Lessons+from+preclinical+animal+models%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Lung+Cell+Mol+Physiol%22%5BJournal%5D)">The role of disturbed blood flow in the development of pulmonary arterial hypertension: Lessons from preclinical animal models.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 305 (1), L1-L14 (2013).</li>
<li>Garcia, R., Diebold, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simple%2C+rapid%2C+and+effective+method+of+producing+aortocaval+shunts+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc+Res%22%5BJournal%5D)">Simple, rapid, and effective method of producing aortocaval shunts in the rat.</a> Cardiovasc Res. 24 (5), 430-432 (1990).</li>
<li>Okada, K., Tanaka, Y., Bernstein, M., Zhang, W., Patterson, G. A., Botney, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulmonary+hemodynamics+modify+the+rat+pulmonary+artery+response+to+injury.+A+neointimal+model+of+pulmonary+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Pulmonary hemodynamics modify the rat pulmonary artery response to injury. A neointimal model of pulmonary hypertension.</a> Am J Pathol. 151 (4), 1019-1025 (1997).</li>
<li>van Albada, M. E., Schoemaker, R. G., Kemna, M. S., Cromme-Dijkhuis, A. H., van Veghel, R., Berger, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+increased+pulmonary+blood+flow+in+pulmonary+arterial+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Respir+J%22%5BJournal%5D)">The role of increased pulmonary blood flow in pulmonary arterial hypertension.</a> Eur Respir J. 26 (3), 487-493 (2005).</li>
<li>Brittain, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Echocardiographic+assessment+of+the+right+heart+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22JVis+Exp%22%5BJournal%5D)">Echocardiographic assessment of the right heart in mice.</a> JVis Exp. (e81), (2013).</li>
<li>Dickinson, M. G., Bartelds, B., Molema, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Egr-1+expression+during+neointimal+development+in+flow-associated+pulmonary+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Egr-1 expression during neointimal development in flow-associated pulmonary hypertension.</a> Am J Pathol. 179 (5), 2199-2209 (2011).</li>
<li>Borgdorff, M. A., Bartelds, B., Dickinson, M. G., Steendijk, P., de Vroomen, M., Berger, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+loading+conditions+reveal+various+patterns+of+right+ventricular+adaptation%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Heart+Circ+Physiol%22%5BJournal%5D)">Distinct loading conditions reveal various patterns of right ventricular adaptation.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. 305 (3), H354-H364 (2013).</li>
<li>Ruiter, G., de Man, F. S., Schalij, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reversibility+of+the+monocrotaline+pulmonary+hypertension+rat+model%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Respir+J%22%5BJournal%5D)">Reversibility of the monocrotaline pulmonary hypertension rat model.</a> Eur Respir J. 42 (2), 553-556 (2013).</li>
<li>van Albada, M. E., Bartelds, B., Wijnberg, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+expression+profile+in+flow-associated+pulmonary+arterial+hypertension+with+neointimal+lesions%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Lung+Cell+Mol+Physiol%22%5BJournal%5D)">Gene expression profile in flow-associated pulmonary arterial hypertension with neointimal lesions.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 298 (4), L483-L491 (2010).</li>
<li>Dickinson, M. G., Kowalski, P. S., Bartelds, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+critical+role+for+egr-1+during+vascular+remodelling+in+pulmonary+arterial+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc+Res%22%5BJournal%5D)">A critical role for egr-1 during vascular remodelling in pulmonary arterial hypertension.</a> Cardiovasc Res. 103 (4), 573-584 (2014).</li>
<li>van der Feen, D. E., Dickinson, M. G., Bartelds, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Egr-1+identifies+neointimal+remodeling+and+relates+to+progression+in+human+pulmonary+arterial+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22Jheart+lung+transplant%22%5BJournal%5D)">Egr-1 identifies neointimal remodeling and relates to progression in human pulmonary arterial hypertension.</a> Jheart lung transplant. 35 (4), 481-490 (2016).</li>
<li>Rungatscher, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+overcirculation-induced+pulmonary+arterial+hypertension+in+aorto-caval+shunt%5BTitle%5D)+AND+%22Microvasc+Res%22%5BJournal%5D)">Chronic overcirculation-induced pulmonary arterial hypertension in aorto-caval shunt.</a> Microvasc Res. 94, 73-79 (2014).</li>
<li>O'Blenes, S. B., Fischer, S., McIntyre, B., Keshavjee, S., Rabinovitch, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hemodynamic+unloading+leads+to+regression+of+pulmonary+vascular+disease+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thorac+Cardiovasc+Surg%22%5BJournal%5D)">Hemodynamic unloading leads to regression of pulmonary vascular disease in rats.</a> J Thorac Cardiovasc Surg. 121 (2), 279-289 (2001).</li>
<li>Sakao, S., Taraseviciene-Stewart, L., Lee, J. D., Wood, K., Cool, C. D., Voelkel, N. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Initial+apoptosis+is+followed+by+increased+proliferation+of+apoptosis-resistant+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">Initial apoptosis is followed by increased proliferation of apoptosis-resistant endothelial cells.</a> FASEB J. 19 (9), 1178-1180 (2005).</li>
<li>Spiekerkoetter, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FK506+activates+BMPR2%2C+rescues+endothelial+dysfunction%2C+and+reverses+pulmonary+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">FK506 activates BMPR2, rescues endothelial dysfunction, and reverses pulmonary hypertension.</a> J Clin Invest. 123 (8), 3600-3613 (2013).</li>
<li>Nickel, N. P., Spiekerkoetter, E., Gu, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elafin+reverses+pulmonary+hypertension+via+caveolin-1-dependent+bone+morphogenetic+protein+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Respir+Crit+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Elafin reverses pulmonary hypertension via caveolin-1-dependent bone morphogenetic protein signaling.</a> Am J Respir Crit Care Med. 191 (11), 1273-1286 (2015).</li>
<li>Meloche, J., Potus, F., Vaillancourt, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bromodomain-containing+protein+4%3A+The+epigenetic+origin+of+pulmonary+arterial+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Bromodomain-containing protein 4: The epigenetic origin of pulmonary arterial hypertension.</a> Circ Res. 117 (6), 525-535 (2015).</li>
<li>Happé, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pneumonectomy+combined+with+SU5416+induces+severe+pulmonary+hypertension+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Lung+Cell+Mol+Physiol%22%5BJournal%5D)">Pneumonectomy combined with SU5416 induces severe pulmonary hypertension in rats.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 310 (11), L1088-L1097 (2016).</li>
<li>Ranchoux, B., Antigny, F., Rucker-Martin, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial-to-mesenchymal+transition+in+pulmonary+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Endothelial-to-mesenchymal transition in pulmonary hypertension.</a> Circulation. 131 (11), 1006-1018 (2015).</li>
<li>de Raaf, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SuHx+rat+model%3A+Partly+reversible+pulmonary+hypertension+and+progressive+intima+obstruction%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Respy+J%22%5BJournal%5D)">SuHx rat model: Partly reversible pulmonary hypertension and progressive intima obstruction.</a> Eur Respy J. 44 (1), 160-168 (2014).</li>
<li>Elastic (Connective Tissue Stain) Instructions for Use. , Available from:
 <a target="_blank" href="http://www.abcam.com/ps/products/150/ab150667/documents/ab150667-Elastic%20Stain%20Kit%20(website).pdf">http://www.abcam.com/ps/products/150/ab150667/documents/ab150667-Elastic%20Stain%20Kit%20(website).pdf</a> (1506).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Deze methode beschrijft de chirurgische procedure van een aorto-caval shunt bij ratten voorbehandeld met MCT tot stromingsgeïnduceerde PAK en de technieken om het beginsel van hemodynamische en histopathologische eindpunten dat PAK en dit model te karakteriseren beoordelen creëren. Kritische stappen in het protocol en problemen oplossen Chirurgie en na de operatie. Tijdens de aorto- cavale shunt operatie, de meest kritische stap is de dissectie van de aorta en vena ...

Het doel van deze methode is om een ​​reproduceerbaar model voor ernstige stromingsgeïnduceerde pulmonale arteriële hypertensie in ratten maken en dat in beginsel hemodynamische en histopathologische eindpunten meten. Pulmonale arteriële hypertensie (PAH) is een klinisch syndroom dat een geleidelijke verhoging van de pulmonale vasculaire weerstand leidt tot rechter ventrikel falen en dood omvat. Binnen het overkoepelende ziektespectrum van pulmonaire hypertensieve ziekten (PH), PAH is de ernstigste vorm en die zonder behandeling 1 blijft. De onderliggende arteriopathie in PAH wordt gekenmerkt door een typische vorm van vasculaire hermodellering dat het vatlumen afsluit. Muscularisatie van normale niet-gemusculariseerd schepen en hypertrofie van de mediale lagen vat worden beschouwd reeds ziekteverschijnselen in PAH ook gezien in andere vormen van PH 2 en 3 worden gedacht omkeerbaar zijn. Als PAH eendvances, de intima-laag begint te verbouwen, uiteindelijk de vorming van karakteristieke neointima laesies 2. Nieuwe intima-type vasculaire longremodellering is exclusief voor PAH en wordt momenteel beschouwd onomkeerbaar 4 te zijn. Als PAH is een zeldzame ziekte, de vooruitgang in de pathobiological begrip en de ontwikkeling van nieuwe therapieën hebben zwaar op diermodellen ingeroepen. De monocrotalin (MCT) model in ratten een single hit model is, en nog steeds vaak gebruikt. MCT is een toxine dat de schade toebrengt aan de pulmonale arteriolen en regionale ontsteking 5. 60 mg / kg MCT leidt tot een verhoging van de gemiddelde pulmonale arteriële druk (mPAP), pulmonale vasculaire weerstand (PVR) en rechterventrikelhypertrofie (RVH) na 3-4 weken 6. De histomorphology wordt gekenmerkt door geïsoleerde mediale hypertrofie zonder neointima laesies 5. de MCTrattenmodel vormt derhalve een matige vorm van PH en niet PAK, hoewel het gewoonlijk wordt voorgesteld als de laatste. Bij kinderen met PAH geassocieerd met congenitale links naar rechts shunt (PAH-CHD), verhoogde pulmonaire bloedstroom wordt beschouwd als de essentiële trigger voor de ontwikkeling van neointima laesies 7, 8, 9. Bij ratten kunnen verhoogde pulmonaire bloedstroom worden geïnduceerd door het creëren van een shunt tussen de abdominale aorta en vena cava, een techniek die het eerst beschreven in 1990 10. Alternatieven voor verhoogde pulmonale stroom te creëren zijn door eenzijdige pneumonectomie of subclavia naar longslagader anastomose 11. Conceptuele nadelen van deze modellen bestaan ​​potentiële compenserende groei van de overgebleven long en adaptieve pathway activatie geïnduceerd door de pneumonectomie of iatrogene schade van de pulmonaire vasculatuur te wijtenom longslagader anastomose, zowel verstorende effecten van de toegenomen pulmonale bloedstroom. Wanneer een aorto- cavale shunt gecreëerd en verhoogde pulmonale bloedstroom wordt geïnduceerd als tweede hit in MCT behandelde ratten, origineel neointima laesies ontstaan ​​en een ernstige vorm van PAH en bijbehorende rechterkamer falen (RVF) ontwikkelen 3 weken na de toegenomen stromen 12. De hemodynamische progressie van PAK&#39;s in dit model kan in vivo worden beoordeeld door echocardiografie en rechter hartkatheterisatie. Het vasculaire histomorphology, wanddikte van het drukvat, de mate van arteriolaire occlusie, en parameters voor de rechter ventrikel falen vormen de pijlers van het ex vivo karakterisering van PAH. Deze methode beschrijft gedetailleerde protocollen voor de aorto-cavale shunt (AC-shunt) chirurgie, rechts hartkatheterisatie, en de kwalitatieve en kwantitatieve beoordeling van vasculaire histomorphology.

<table><tbody><tr><td colspan="4">Shunt Chirurgie</td></tr><tr><td>Steriele chirurgische handschoenen</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Duratears Oogzalf</td><td>Alcon</td><td>10380</td><td></td></tr><tr><td>Chloride-Hexidine</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Wattenstaafjes</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Histoacryll weefsel lijm</td><td>B. Braun Medical</td><td>1050052</td><td></td></tr><tr><td>Silkam 5-0 naalden zwart niet-resorbeerbaar</td><td>B. Braun Medical</td><td>F1134027</td><td></td></tr><tr><td>Safil 4-0 naalden violet resorbeerbaar</td><td>B. Braun Medical</td><td></td><td></td></tr><tr><td>18 G naald</td><td>Luer</td><td>NN1838R BD</td><td>tip gebogen in 45 graden opening naar buiten</td></tr><tr><td>Gazen 10 x 10 cm</td><td>Paul Hartmann</td><td>407825</td><td></td></tr><tr><td>Temgesic Buprenorfine</td><td>RB Pharmaceuticals</td><td>5429</td><td>subcutane injectie</td></tr><tr><td>Natriumchloride 0,9%</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ventilatiemask Rat</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mesje</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Biemer klem 18 mm, 5 mm opening&nbsp;</td><td><a href="https://www.google.nl/url?sa=i&amp;rct=j&amp;q=&amp;esrc=s&amp;source=images&amp;cd=&amp;cad=rja&amp;uact=8&amp;ved=0ahUKEwitqICpkITNAhWiL8AKHe6iCC8QjhwIBQ&amp;url=http%3A%2F%2Fwww.agnthos.se%2Fquote%2Fquote%2Fcaturl%2Fid%2F242%2FBiemer&amp;psig=AFQjCNEnfRXuMQ6Doi4_-2KMYu3qeRovMA&amp;ust=1464777707579746">AgnTho</a></td><td>64-562</td><td></td></tr><tr><td>Verwarmingsmat</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kocher klem</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Schaarkrabber</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microscoop</td><td>Leica</td><td></td><td></td></tr><tr><td colspan="4">Rechterhartkatheterisatie</td></tr><tr><td>Steriele chirurgische handschoenen</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Oogzalf</td><td>Duratears</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Chloride-Hexidine</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Wattenstaafjes</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Gazen 10 x 10 cm</td><td>Paul Hartmann</td><td>407825</td><td></td></tr><tr><td>Silkam 5-0 naalden zwart niet-resorbeerbaar</td><td>B. Braun Medical</td><td>F1134027</td><td></td></tr><tr><td>Naald 20 G</td><td>Luer</td><td></td><td>Tip licht gebogen naar binnen</td></tr><tr><td>Canule 20 G</td><td>Luer</td><td></td><td>om katheter te introduceren, tip voorgevormd in 20 graden</td></tr><tr><td>Silastic katheter 15 cm lang</td><td></td><td></td><td>0,5 mm bal 2 mm van de punt</td></tr><tr><td>Druktransducer</td><td>Ailtech</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Bedzijde monitor Cardiocap/5</td><td>Datex-Ohmeda</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Schaarkrabber</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>10 mL Spuit</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Natriumchloride 0,9%</td><td></td><td></td><td>voor spoelen</td></tr><tr><td colspan="4">Vasculair Morfologie</td></tr><tr><td>50 mL Spuit</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>4% Formaldehyde</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>18 G canule met buis</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Verhoef kleuring kit</td><td>Sigma-Aldrich</td><td><a href="http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/ht254?lang=en&amp;region=NL">HT254</a></td><td>http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/ht254?lang=en&amp;region=US</td></tr><tr><td>Digitale diascanner</td><td>Hamamatsu</td><td>C9600</td><td></td></tr><tr><td>ImageJ</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Elastic (Bindweefsel Kleuring)&nbsp;</td><td>Abcam</td><td>ab150667</td><td>http://www.abcam.com/elastic-connective-tissue-stain-ab150667.html 
http://www.abcam.com/ps/products/150/ab150667/documents/ab150667-Elastic%20Stain%20Kit%20(website).pdf</td></tr></tbody></table>

shunt chirurgie, right hartkatheterisatie, en vasculaire morphometry in een diermodel voor flow-geïnduceerde pulmonale arteriële hypertensie

Shunt Surgery, Right Heart Catheterization, and Vascular Morphometry in a Rat Model for Flow-induced Pulmonary Arterial Hypertension

In dit protocol wordt PAH geïnduceerd door een combinatie van een injectie van 60 mg/kg monocrotalaline (MCT) met verhoogde pulmonale bloedstroom via een aorto-cavale shunt (MCT+Flow). De shunt wordt gemaakt door een 18-G naald in te brengen vanuit de abdominale aorta in de aangrenzende cava-vene. Verhoogde pulmonale stroom is aangetoond als een essentiële trigger voor een ernstige vorm van PAH met verschillende fasen van ziekteprogressie, gekenmerkt door vroege mediale hypertrofie gevolgd door neointimale laesies en de progressieve occlusie van de kleine pulmonale vaten. Om de hemodynamiek van het rechter hart en de longen in dit model te meten, wordt catheterisatie van het rechter hart uitgevoerd door een rigide canule met een flexibele ball-tip katheter via de rechter halsslagader in het rechter ventrikel in te brengen. De katheter wordt vervolgens gevorderd naar de hoofd- en meer distale pulmonale slagaders. De histopathologie van de pulmonale vaten wordt kwalitatief beoordeeld door de pre- en intra-acinaire vaten te scoren op de mate van muscularisatie en de aanwezigheid van een neointima, en kwantitatief door de wanddikte, de wand-lumen verhoudingen en de occlusie score te meten.

Representatieve resultaten zijn weergegeven in figuur 4. De gepresenteerde resultaten tonen kenmerken van MCT + FLOW in Lewis ratten in de volgende groepen: Controle (n = 3), MF8 (n = 5), MF14 (n = 5), MF28 (n = 5) en MF-RVF ( n = 10). Statistische analyses werden uitgevoerd met de eenzijdige ANOVA met Bonferroni-correctie. 60 mg / kg MCT en verhoogde pulmonaire bloedstroom leiden tot een gemiddelde stijging v...

Dit protocol beschrijft een chirurgische procedure om een model te creëren voor stromingsgeïnduceerde pulmonale arteriële hypertensie (PAH) bij ratten en de procedures om de belangrijkste hemodynamische en histologische eindpunten in dit model te analyseren.

Shunt Chirurgie, Right hartkatheterisatie, en Vasculaire Morphometry in een diermodel voor Flow-geïnduceerde pulmonale arteriële hypertensie

In this protocol, PAH is induced by combining a 60 mg/kg monocrotalin (MCT) injection with increased pulmonary blood flow through an aorto-caval shunt ...

De algemene doelen van deze procedures zijn het creëren van een model voor stroming-geïnduceerde pulmonale arteriële hypertensie bij ratten, en het analyseren van de belangrijkste hemodynamische en histologische eindpunten door middel van rechterkatheterisatie en vasculaire morfometrie. We presenteren de creatie van een rattenmodel voor stroming-geassocieerde pulmonale hypertensie die wordt gekenmerkt door een nieuw intimal-type vasculair hermodellering vergelijkbaar met de humane pulmonale arteriële hypertensie, en die wordt geïnduceerd door een klinisch goed herkende trigger, namelijk verhoogde pulmonaire bloedstroom. Deze kenmerken zullen de translatie van de bevindingen in dit model naar de menselijke ziekte verbeteren.We tonen ook gestandaardiseerde methoden voor hemodynamische evaluatie en karakterisering van histopathologie met behulp van kwantitatieve morfometrie. De implicaties van deze technieken strekken zich uit naar de ontdekking en evaluatie van nieuwe behandelingsstrategieën en staan de beoordeling van de specifieke effecten op pulmonaire hemodynamiek en vasculaire morfologie toe. Het demonstreren van de procedures zullen Annemieke Smit-Van Oosten en Michel Weij, microchirurgen van dit laboratorium, zijn.Voordat u begint met de operatie, schuurt u de huid van een geanesthetiseerde rat met chloride hexadeen voor desinfectie en injecteert u buprenorfine subcutaan voor postoperatieve analgesie. Gebruik vervolgens een schaar om een middenlijnsnede langs de buik te maken, beginnend een centimeter onder het diafragma, zich uitstrekkend tot net boven de genitaliën. Breng de darmen over op een steriel gaasje bevochtigd met 0,9%zoutoplossing naar de linkerkant van het dier en bedek het orgaan met meer vochtig, steriel gaas.Gebruik nieuwe wattenstaafjes om de membranen te scheiden die de abdominale aorta en de vena cava inferior aan het omringende weefsel bevestigen. Gebruik onder een dissectiemicroscoop splintertangen om het perivasculare aortavet net boven de bifurcatie aan de rechterkant van de aorta te verwijderen, waar de naald zal worden ingebracht. Scheid vervolgens de aorta en vena cava vanaf twee millimeter superieur van de site, de naaldinbrengplaats, om ruimte te creëren voor een beamerklem.Plaats nu een losse 5-O-naald rond de aorta en plaats een Kocherklem op de naald om spanning op de ligatuur superieur aan de incisie te creëren. Plaats de beamerklem net superieur aan de naald en gebruik een nieuwe swap om de vena cava zo distaal mogelijk te comprimeren om de stroom te obstructeren. Buig vervolgens een 18 gauge naald naar een hoek van 45 graden met de bevel naar buiten, en houd de naald 90 graden ten opzichte van het dier, steek de naaldpunt in de aorta net boven de bifurcatie met de bevel naar links gericht.Dissecteer de membranen die de aorta en de vena cava omsluiten net genoeg om een goede zichtbaarheid van het inbrenggebied voor de shunt te creëren, aangezien over-dissectie ervoor zorgt dat de shunt lekt. Manipuleer de punt van de naald naar links en steek de naald in de vena cava totdat deze binnenin het vat kan worden waargenomen. Om trombose te voorkomen, gebruikt u een nieuw katoenen staafje om het resterende bloed uit de aorta door de inbrengplaats te duwen en gebruikt u een steriel gaas om het gebied rond de shunt te drogen.Verwijder de naald en breng onmiddellijk een druppel weefsellijm aan op de punctieplaats. Verwijder vervolgens de klem van de aorta en los handmatig de ligatuur op de aorta proximaal aan de shunt. De vena cava distaal van de shunt zou helderrood moeten worden en turbulentie creëren op de shuntplaats.Na verificatie van de shunt, brengt u de darmen terug in de buikholte en sluit u de spier- en huidlagen met resorbeerbare 4-0-naden. Ventileer vervolgens het dier met 100%zuurstof voor herstel van de anesthesie. Voor rechterkatheterisatie, desinfecteert u de nek met chloride hexadeen en gebruikt u een nummer 10 scalpelmes om een 1,5 centimeter incisie te maken in de rechter ventrale zijde van de nek van het rechter sleutelbeen tot het onderkaaksbeen.Gebruik onder de dissectiemicroscoop een schaar om het weefsel te spreiden, gebruik vervolgens pincetten om het weefsel voorzichtig uit elkaar te trekken totdat de halsslagader verschijnt. Dissecteer de membranen rond de halsslagader met behulp van splintertangen. Plaats vervolgens een losse 5-O-naald rond het vat en tape de ligatuur aan het ventilatiemasker om de spanning op de ader te verhogen.Stroomafwaarts van de inbrengplaats, plaats een losse ligatuur rond het vat. Gebruik vervolgens de handgrepen van de forceps om het uiteinde van een 20 gauge naald lichtjes te buigen met de bevel naar binnen en introduceer het uiteinde van de naald in de ader. Plaats snel een canule met een katheter in het vat en verwijder de naald, sluit de stroomafwaartse ligatuur rond de canule om de canule op zijn plaats te bevestigen.Leidt nu de canule en de katheter in de halsslagader, manoeuvreert de canule onder het sleutelbeen om de rechter atrium binnen te gaan. Richt het uiteinde van de canule naar het hart om het rechter ventrikel binnen te gaan. Een rechter ventrikeldrukcurve zou op de bedmonitor moeten verschijnen.Wanneer de rechter ventrikeldrukcurve constant is, registreert u de systolische en diastolische rechterventrikeldruk een, en manipuleert u het uiteinde van de canule naar links en omhoog. Laat de katheter in de canule voortschrijden, laat vervolgens de katheter in de hoofdpulmonale ader voortschrijden. Wanneer de pulmonale arteriële drukcurve constant is, registreert u de systolische, diastolische en gemiddelde pulmonale arteriële drukwaarden.Laat vervolgens de katheter in de canule voortschrijden totdat de bal op het uiteinde van de katheter in een longslagader vast komt te zitten. De daling van de drukcurve zou op de bedmonitor moeten worden waargenomen. Wanneer de wigdrukcurve constant is, registreert u de systolische, diastolische en gemiddelde wigdrukwaarden.Trek vervolgens langzaam de katheter terug en, geleid door de krommen op de bedmonitor, registreert u de respectieve waarden voor PA- en RV-druk. Wanneer de katheter het rechter ventrikel bereikt, trekt u de canule en katheter lichtjes terug en meet u de gemiddelde rechter

shunt-surgery-right-heart-catheterization-vascular-morphometry-rat

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Dit artikel geeft een protocol voor de echocardiografische evaluatie van rechter ventriculaire omvang en pulmonale hypertensie bij muizen. Toepassingen zijn onder andere fenotype vastberadenheid en seriële beoordeling in transgene en toxine-geïnduceerde muismodellen van cardiomyopathie en pulmonale vasculaire ziekte.

Echocardiografische Beoordeling van de rechter hart in Muizen

Pulmonaire arteriële hypertensie (PAH) is een ziekte van pulmonaire arteriolen die leidt tot hun obliteratie en de ontwikkeling van rechterventrikelfalen. Rodentmodellen van PAH zijn cruciaal voor het begrijpen van de pathofysiologie van PAH. Hier demonstreren we hemodynamische karakterisering, met rechter hartkatheterisatie en echografie, bij de muis en de rat.

Hemodynamische karakterisatie van diermodellen van pulmonale arteriële hypertensie

Linker atriale stenose (LAS) is een nieuwe chirurgische techniek gebruikt voor het bestuderen van groep 2 pulmonale hypertensie (PH) en mechanismen ten grondslag liggen aan pulmonale veneuze arterialization. Hier presenteren we een protocol om het samentrekken van de linkerboezem met behulp van een titanium clip te veroorzaken pulmonale veneuze arterialization en matige PH in een rat.

Linker atriale stenose geïnduceerde pulmonale veneuze Arterialization en groep 2 pulmonale hypertensie in Rat

De knaagdieren links Pneumectomie is een waardevolle techniek in pulmonale hypertensie onderzoek. Hier presenteren we een protocol om te beschrijven de rat Pneumectomie procedure en postoperatieve zorg aan minimale morbiditeit en mortaliteit.

De linker Pneumectomie in combinatie met Monocrotaline of Sugen als een Model van pulmonale hypertensie bij ratten

Hier presenteren we een protocol voor het uitvoeren van een invasieve hemodynamische beoordeling van de rechter ventrikel en longslagader bij muizen met behulp van een open-borstchirurgie aanpak.

Invasieve hemodynamische beoordeling voor het rechter ventrikel systeem en hypoxie-geïnduceerde pulmonale arteriële hypertensie bij muizen

Het huidige protocol beschrijft een chirurgische procedure om oplopende aortabanding te verwijderen in een rattenmodel van pulmonale hypertensie als gevolg van linkerhartaandoeningen. Deze techniek bestudeert endogene mechanismen van omgekeerde remodellering in de pulmonale circulatie en het rechterhart, waardoor strategieën worden geïnformeerd om pulmonale hypertensie en / of rechterventrikeldisfunctie om te keren.

Een model van omgekeerde vasculaire remodellering bij pulmonale hypertensie als gevolg van linkerhartziekte door aorta-debanding bij ratten

Het huidige protocol beschrijft de echocardiografische karakterisering van de morfologie en functie van de rechterventrikel in een rattenmodel van pulmonale arteriële hypertensie.

Uitgebreide echocardiografische beoordeling van de rechterventrikelfunctie in een ratmodel van pulmonale arteriële hypertensie

Dit protocol biedt een stapsgewijze procedure voor het uitvoeren van meervoudige intraveneuze toediening van bolusdoses en invasieve hemodynamische monitoring bij muizen. Onderzoekers kunnen dit protocol gebruiken voor toekomstige screening van therapeutische verbindingen voor hypertensie van de longslagader.

Meervoudige intraveneuze bolusdosering en invasieve hemodynamische beoordeling in een door hypoxie geïnduceerd model voor hypertensie van de longslagader van muizen

Rechterhartfalen (RHF) wordt gekenmerkt door rechtszijdige hartdilatatie en hypertrofie, wat leidt tot ventriculaire en atriale stoornissen. Cardiopulmonale aandoeningen geassocieerd met RHF gaan gepaard met een verhoogd risico op hartritmestoornissen. Dit artikel beschrijft een gestandaardiseerd model van door longslagaderband geïnduceerde RHF geassocieerd met verbeterde ventriculaire en atriale aritmogenese.

Rattenmodel van rechtszijdige cardiale remodellering en aritmie met behulp van longslagaderbanden

De presentatie van gedetailleerde methoden voor de evaluatie van de rechterventrikelfunctie zal de kwaliteit en betrouwbaarheid van onderzoek naar pulmonale hypertensie verbeteren, een robuust kader bieden voor toekomstige studies en de reproduceerbaarheid in verschillende laboratoria verbeteren.

Evaluatie van de rechterventrikelfunctie in experimentele modellen van pulmonale arteriële hypertensie

Het protocol biedt een gedetailleerde introductie tot de ervaring van het gebruik van de juiste hartkatheterisatiemethode om de bloeddruk van de longslagader bij ratten te detecteren, wat helpt om nauwkeurige gegevens efficiënter te verkrijgen en het slagingspercentage van het experiment te verbeteren. Deze methode verbetert ook de reproduceerbaarheid van experimenten in verschillende laboratoria.

Meting van de longslagaderdruk bij ratten met behulp van rechterhartkatheterisatie

Leer shuntchirurgie en rechterhartkatheterisatie voor pulmonale arteriële hypertensie-onderzoek bij ratten. Deze methoden combineren hemodynamische evaluatie met vasculaire morfometrie voor betrouwbare resultaten.

Shunt Chirurgie, Right hartkatheterisatie, en Vasculaire Morphometry in een diermodel voor Flow-geïnduceerde pulmonale arteriële hypertensie (Video) | JoVE Journal

Shunt Chirurgie, Right hartkatheterisatie, en Vasculaire Morphometry in een diermodel voor Flow-geïnduceerde pulmonale arteriële hypertensie

Meer video's verkennen