Name: Een methode voor het evalueren van Insecticide werkzaamheid tegen Bed Bug, Cimex lectularius, Eieren en First stadia (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-03-15T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 4 s
Description: Leer een methode om insecticide-effectiviteit te evalueren tegen bedwantseneieren en eerste stadia van Cimex lectularius. Dit protocol verbetert plaagbeheersstrategieën door immature levensstadia te targeten.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Wij danken Molly een getrouw voor verdunning en pesticide formulering hulp. We danken ook Troy Anderson probitmethode begeleiding en Zachary Adelman voor hulp bij experimenteel design. Dit onderzoek werd mede ondersteund door een Entomologische Foundation Award en door Virginia gewasbescherming beurs fondsen.

NB: Dit protocol omvat twee insecticide assays voor het afzonderlijk behandelen van bed bug eieren en de eerste stadia. Beide protocollen werden uitgevoerd met dezelfde insecticiden had echter de protocollen worden aangepast om blootstelling insecticide waarborgen en gemakkelijk de specimens manipuleren. 1. Egg Dompelen insecticide Assay <ol><li> Pull gekoppeld, goed gevoede insecten volwassen vrouwelijke bed uit een kolonie en plaats de vrouwtjes (5-10) in een Petri schaal met filtreerpapier. Ten minste tien herhalingen zodat er genoeg eieren voor de insecticide assay. Controleer of de vrouwtjes eieren elke dag hebben gelegd. <ol><li> Zodra ze eieren leggen, nemen de vrouwtjes uit de petrischaal (6 cm x 5 cm) en leg ze in nieuw Petri gerechten met een nieuw filterpapier dagelijks en noteer de datum van de oude en nieuwe Petri gerechten. </li><li> Laat de eieren 4 tot 5 dagen vóór aanvang van de test. Gevoeligheid voor insecticiden veranderingen tijdens embryonale ontwikkeling, so is het belangrijk om te controleren voor eieren leeftijd. Houd alle levensfasen op 12:12 L: D lichtperiode, 60% RH en 27 ° C. </li></ol></li><li> Zodra de eitjes op de juiste wijze zijn verouderd, verwijder het bed bug eieren voorzichtig uit filter papers met behulp van soft-tip tang. Voorzichtig schrapen de onderkant van het ei aan de filterpapier behulp van de tang en voorzichtig grijpen zonder toepassing van veel druk op het ei gooien bed luizeneieren beperken. </li><li> Plaats de verwijderde bed bug eieren in hun respectievelijke groepen binnenkant van plastic petrischaaltjes. Beperk statische elektriciteit uit wierp bed bug eieren door wrijven de onderkant van elke petrischaal aan de buitenkant met een wasverzachter blad. Treat groepen van bed bug eieren (5-10 eieren per groep) in een keer. Beschouw één groep overgenomen en gebruikt ten minste vijf (of meer) repliceert voor deze test. </li><li> Bereid seriële verdunningen van insecticiden een reeks 5 verschillende concentraties (0,21-21 krijgen ul / ml voor imidacloprid (0,1%) / β-cyfluthrin (0,5%) en een controlegroepoplossing met een oplosmiddel (leidingwater) alleen. Voeg 20 ml elke concentratie om voldoende volume voor het dompelen assay. </li><li> Cut centrifugebuizen (50 ml) bij de 35 ml lijn mediaal met behulp van een draaiend gereedschap met een cut-off wiel accessoire en snijd een gat in de dop van de centrifugebuis (diameter = 2,54 cm) met behulp van dezelfde roterende gereedschap met een aluminium oxide slijpsteen accessoire. Laat 5 cm aan de rand van de dop bij het snijden, zodat de dop goed zal schroef in de buis (figuur 1). </li><li> Snijd fijnmazige vierkant groot genoeg om in de dop (~ 5 cm 2). Schroef het gaas strak, het wegnemen van hobbels, in de centrifuge buizen met behulp van de centrifugebuis dop. </li><li> Plaats een groep van bed bug eieren (een herhaling) met behulp van een penseel op het gaas binnenkant van de centrifuge buis. Dompel de groep van bed bugs binnenkant van de snede centrifugebuis in een insecticide concentratie gedurende 5 seconden. </li><li> Verwijder de centrifugebuis uit the insecticide oplossing. Droog de maas met eieren binnen door het plaatsen van de centrifugebuis direct op een laboratorium tissue. </li><li> Verwijder de groep van eieren uit de centrifuge buis met behulp van een kleine, fijne haren kwast en plaats ze in een schone Petrischaal met een schone papieren filter. </li><li> Record ei mortaliteit (niet uitkomen) gedurende 14 dagen de tijd om alle eieren te verzekeren hebben voldoende tijd om uit te komen hadden. </li><li> Juist voor de sterfte in de controlegroep behandeling met behulp van de formule van Abbott (% test sterfte -% controle sterfte / 100 - sterfte in de controlegroep x 100). </li><li> Plaats opgenomen mortaliteit met de overeenkomstige concentraties in de analysesoftware 15 LC 50 waarden berekend. </li></ol> 2. Eerste Instar insecticide Assay <ol><li> Scheid een groep van goed gevoede bed bugs (5 volwassen mannen en 5 volwassen vrouwtjes), bij voorkeur gevoed 1 dag voor, en plaats ze in een petrischaal (6 cm x 5 cm) met filter papier voorzien mating en eileg. Laat de volwassen bed bugs om te paren en eieren leggen gedurende ongeveer 7-9 dagen. Voor voeding, gebruik van een kunstmatige voeding systeem dat warm water in glazen buizen omringende bloed 16 circuleert. Voor dit onderzoek gebruiken defibronated konijn bloed. </li><li> Verwijder de volwassenen uit de petrischaaltjes (6 cm x 5 cm) en laat de eieren uit te broeden in de eerste stadia binnen de petrischaaltjes. Het duurt ongeveer 7-9 dagen voor bed bug te broeden eieren bij kamertemperatuur. </li><li> Verzamel de unfed eerste stadia van dezelfde leeftijd met behulp van een kwast. Leeftijd kan worden bepaald door dagelijkse verwijderen van de eerste stadia en registreren van de dag dat ze uitgebroed. Plaats ze in nieuwe, schone Petrischalen tot de insecticide-test. Eerste instar nimfen niet erg resistent droogmiddel, waardoor de insecticide test zo snel mogelijk worden verstrekt. </li><li> Voor de test bereiden seriële verdunningen van imidacloprid / β-cyfluthrin een reeks van 5 verschillende concentraties en een controle oplos krijgentie met slechts oplosmiddel. Geformuleerde producten gelabeld voor bed bug controle in de Verenigde Staten werden gebruikt voor deze studies, dus het oplosmiddel werd water (volgens het etiket). </li><li> Pipetteer 150 ul aliquots van elke insecticidenconcentratie en water voor de controlegroep op individuele filtreerpapier (# 1, 4,2 cm diameter). Verdeel het insecticide voor de gehele filtreerpapier met de pipet door toepassing van druppels langs de hele rand en het midden van het filterpapier. </li><li> Plaats het behandelde filter papers individueel boven op de losse hardboardpanelen (7 cm 2). </li><li> Afgifte groepen eerste stadia (5-10 per groep) op de individuele filterpapieren ze nog nat met insecticide en bedekken de eerste stadia met een omgekeerde bodem van een petrischaal. </li><li> Plaats een gewicht boven op de petrischaal om te voorkomen dat het eerste instar huismijten ontsnapt het behandelde oppervlak. </li><li> Record mortaliteit van eerste larvestadium bedwantsen na 24 uur blootstelling aan alleinsecticide concentraties. </li><li> Juist voor de sterfte in de controlegroep behandeling met behulp van de formule van Abbott (% test sterfte -% controle sterfte / 100 - sterfte in de controlegroep x 100). </li><li> Invoegen opgenomen mortaliteit en concentraties in de analysesoftware 15 LC 50 waarden berekend. </li></ol>

<ol><li>Sabou, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bed+bugs+reproductive+life+cycle+in+the+clothes+of+a+patient+suffering+from+Alzheimer%27s+disease+results+in+iron+deficiency+anemia%5BTitle%5D)+AND+%22Parasite%22%5BJournal%5D)">Bed bugs reproductive life cycle in the clothes of a patient suffering from Alzheimer's disease results in iron deficiency anemia.</a> Parasite. 20, (2013).</li>
<li>Reinhardt, K., Kempke, D., Naylor, R. A., Siva-Jothy, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensitivity+to+bites+by+the+bedbug%2C+Cimex+lectularius%5BTitle%5D)+AND+%22Med.+Vet.+Entomol%22%5BJournal%5D)">Sensitivity to bites by the bedbug, Cimex lectularius.</a> Med. Vet. Entomol. 23, 163-166 (2009).</li>
<li>Leverkus, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bullous+allergic+hypersensitivity+to+bed+bug+bites+mediated+by+IgE+against+salivary+nitrophorin%5BTitle%5D)+AND+%22J.+invest.+entomol%22%5BJournal%5D)">Bullous allergic hypersensitivity to bed bug bites mediated by IgE against salivary nitrophorin.</a> J. invest. entomol. 126, 91-96 (2006).</li>
<li>Fletcher, C. L., Ardern-Jones, M. R., Hay, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Widespread+bullous+eruption+due+to+multiple+bed+bug+bites%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Exp.+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Widespread bullous eruption due to multiple bed bug bites.</a> Clin. Exp. Dermatol. 27, 74-75 (2002).</li>
<li>Pritchard, M. J., Hwang, S. W. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2734207/">Severe anemia from bedbugs.</a> Can. Med. Assoc. J. 181, 287-288 (2009).</li>
<li>Goddard, J., de Shazo, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Psychological+effects+of+bed+bug+attacks+%28Cimex+lectularius+L%29%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Med%22%5BJournal%5D)">Psychological effects of bed bug attacks (Cimex lectularius L).</a> Am. J. Med. 125, 101-103 (2012).</li>
<li>Harlan, H. J. <a target="_blank" href="https://www.researchgate.net/publication/263133743_Bed_Bugs_101_the_Basics_of_Cimex_lectularius">Bed bugs 101: the basics of Cimex lectularius.</a> Am. Entomol. 52, 99-101 (2006).</li>
<li>Pinto, L. J., Cooper, R., Kraft, S. K. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPinto%2C+LJ+%22Bed+Bug+Handbook%3A+The+Complete+Guide+to+Bed+Bugs+and+Their+Control%22">Bed Bug Handbook: The Complete Guide to Bed Bugs and Their Control</a>. , Pinto & Associates, Inc.. Mechanicsville, MD, USA. (2007).</li>
<li>Toloza, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+patterns+of+insecticide+resistance+in+eggs+and+first+instars+of+Triatoma+infestans+%28Hemiptera%3A+Reduviidae%29+from+Argentina+and+Bolivia%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Med.+Entomol%22%5BJournal%5D)">Differential patterns of insecticide resistance in eggs and first instars of Triatoma infestans (Hemiptera: Reduviidae) from Argentina and Bolivia.</a> J. Med. Entomol. 45, 421-426 (2008).</li>
<li>Cueto, G. M., Zerba, E. N., Picollo, M. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+of+pyrethroid+resistance+in+eggs+of+Pediculus+humanus+capitis+%28Phthiraptera%3A+Pediculidae%29+from+Argentina%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Med.+Entomol%22%5BJournal%5D)">Evidence of pyrethroid resistance in eggs of Pediculus humanus capitis (Phthiraptera: Pediculidae) from Argentina.</a> J. Med. Entomol. 45, 693-697 (2008).</li>
<li>Ho, S. H., Goh, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deltamethrin+as+a+potential+ovicidal+pyrethroid+against+Plutella+xylostella+L%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol.+let%22%5BJournal%5D)">Deltamethrin as a potential ovicidal pyrethroid against Plutella xylostella L.</a> Toxicol. let. 22, 161-164 (1984).</li>
<li>Bell, C. H., Hole, B. D., Evans, P. H. The occurrence of resistance to phosphine in adult and egg stages of strains of Rhyzopertha dominica (F.)(Coleoptera: Bostrichidae). J. Stored Prod. Res. 13, 91-94 (1977).</li>
<li>Campbell, B. E., Miller, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insecticide+Resistance+in+Eggs+and+First+Instars+of+the+Bed+Bug%2C+Cimex+lectularius+%28Hemiptera%3A+Cimicidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22Insects%22%5BJournal%5D)">Insecticide Resistance in Eggs and First Instars of the Bed Bug, Cimex lectularius (Hemiptera: Cimicidae).</a> Insects. 6, 122-132 (2015).</li>
<li>Price, L. A., Mills, K. A. <a target="_blank" href="http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/0022474X88900082">The toxicity of phosphine to the immature stages of resistant and susceptible strains of some common stored product beetles, and implications for their control.</a> J. Stored Prod. Res. 24, 51-59 (1988).</li>
<li>Robertson, J. L., Preisler, H. K., Russel, R. M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aRobertson%2C+JL+%22PoloPlus%3A+Probit+and+Logit+Analysis+User%27s+Guide%22">PoloPlus: Probit and Logit Analysis User's Guide</a>. , LeOra Software. Petaluna, CA, USA. (2003).</li>
<li>Montes, C., Cuadrillero, C., Vilella, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maintenance+of+a+laboratory+colony+of+Cimex+lectularius+%28Hemiptera%3A+Cimicidae%29+using+an+artificial+feeding+technique%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Med.+Entomol%22%5BJournal%5D)">Maintenance of a laboratory colony of Cimex lectularius (Hemiptera: Cimicidae) using an artificial feeding technique.</a> J. Med. Entomol. 39, 675-679 (2002).</li>
<li>Brogdon, W. G., McAllister, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simplification+of+adult+mosquito+bioassays+through+use+of+time-mortality+determinations+in+glass+bottles%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Mosq.+Control.+Assoc%22%5BJournal%5D)">Simplification of adult mosquito bioassays through use of time-mortality determinations in glass bottles.</a> J. Am. Mosq. Control. Assoc. 14, 159-164 (1998).</li>
<li>Katarzyna, K., Saddler, A., Koella, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+age+and+larval+nutrition+on+phenotypic+expression+of+insecticide-resistance+in+Anopheles+mosquitoes%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Effects of age and larval nutrition on phenotypic expression of insecticide-resistance in Anopheles mosquitoes.</a> PLoS One. 8 (3), (2013).</li>
<li>Outram, I. <a target="_blank" href="https://www.researchgate.net/publication/248283593_Factors_affecting_the_resistance_of_insect_eggs_to_sulphuryl_fluoride-I_The_uptake_of_sulphuryl-35S_fluoride_by_insect_eggs">Factors affecting the resistance of insect eggs to sulphuryl fluoride-II: the distribution of sulphuryl-35 S fluoride in insect eggs after fumigation.</a> J. Stored. Prod. Res. 3, 353-358 (1967).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Een cruciale stap in deze test is om ervoor te zorgen dat geen eieren die van een oppervlak worden verwijderd, beschadigd raken voorafgaand aan de test. Veel insecten bevestigen hun eieren aan een substraat, daarom kan een voorlopige test nodig zijn om ervoor te zorgen dat verwijdering geen mortaliteit veroorzaakt. Deze test kan worden uitgevoerd met verschillende herhalingen van een behandelde groep (bedwantsen verwijderd van filterpapier) vergeleken met een controlegroep (bedwantsen niet verwijderd). Vergelijkbare lage...

Bed bugs zijn een belangrijke stedelijke plaag die bloedverlies, huidirritaties, slapeloosheid, depressie en angst bij de humane gastheer 1, 2, 3, 4, 5, 6 kunnen veroorzaken. De kosten van de verwijdering en het regelen van bed bugs zijn hoog en vaak vereisen meerdere bezoeken aan een huis door een ongediertebestrijding bedrijf 7. Meerdere bezoeken zijn meestal verplicht vanwege de cryptische gedrag van bed bugs en de problemen in verband met hen te doden. Vooral bed luizeneieren moeilijk te controleren vanwege hun kleine afmetingen en de bescherming van het embryo van de eierschaal. Momenteel is een gangbare praktijk voor veel ongediertebestrijding bedrijven in de Verenigde Staten is om een ​​huis voor bed bugs met een chemisch insecticide te behandelen. Het is bekenddat de eieren moeilijk te controleren zijn zo veel bedrijven twee weken tijd voor herhalingsbehandelingen 8 uitgevoerd. Hiermee bed luizeneieren voldoende tijd om uit te komen, zodat het eerste instar-stadium zal ontstaan ​​en ogenschijnlijk makkelijker te doden met insecticiden. Er is echter een gebrek aan studies evalueren van de werkzaamheid van insecticiden tegen bedmijt eieren en eerste stadia. Insecteneieren zijn gedocumenteerd de moeilijkste levensfase te beheersen stedelijke insectenplagen, behalve bed bugs zijn, naast vele landbouwongedierte. De meeste van deze problemen zijn toegeschreven aan de schalen, terwijl een paar studies insecticide resistentie gemeld. De weerstand in het ei stadium is gedocumenteerd in Triatoma infestans 9, Pediculus humanus capitis 10, Plutella xylostella 11, Rhyzopertha Dominica 12, <em&gt; Cimex lectularius 13, en meerdere opgeslagen product kevers (dwz Oryzaephilus surinamensis, Tribolium castaneum, Cryptolestes ferrugineus en Rhyzopertha Dominica). 14 De resistentie van de eistadium en onvolwassen stadia, en complicaties van insecticide penetratie door de eierschaal, vereist de noodzaak insecticide werkzaamheid bioassays tegen deze levensstadia. Dit protocol wordt stap-voor-stap procedure voor het bepalen van de werkzaamheid van insecticiden in het ei en eerste instar fase van het gemeenschappelijk huismijten, Cimex lectularius. Beide protocollen concentratie-respons assays voor kwantificering van LC 50 waarden toe. Concentratie-respons testen worden vaak gebruikt voor toxicologisch onderzoek, maar dit protocol is aangepast voor het eenvoudig te behandelen groepen van bed bug eieren en de eerste stadia. Deze assays kunnen worden aangepastvoor eieren verschillende insectensoorten en onvolwassen levensfasen.

<table><tbody><tr><td>Petrischalen</td><td>Fisher Scientific Inc.</td><td>08-757-105</td><td>Kunststof</td></tr><tr><td>Filterpapier</td><td>Whatman</td><td>1001-042</td><td></td></tr><tr><td>Lichtgewicht pincet</td><td>Fisher Scientific Inc.</td><td>4750</td><td></td></tr><tr><td>Temprid SC (imidacloprid/bifenthrin)</td><td>Bayer CropScience</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Transport GHP (acetamiprid/bifenthrin)</td><td>FMC Corp.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Centrifugebuis</td><td></td><td>06-443-18</td><td>50 mL; flat-top met schroefdraad</td></tr><tr><td>Fijne maas</td><td></td><td>7250C</td><td></td></tr><tr><td>KimWipe</td><td></td><td>06-666A</td><td>11 cm x 21 cm</td></tr><tr><td>Kleine verfkwast</td><td></td><td></td><td>Elke kleine verfkwast</td></tr><tr><td>Hardboard panelen</td><td></td><td></td><td>Composiet hout of tegel zou voldoende zijn van een bouwmarkt</td></tr><tr><td>Metaalgewichten</td><td></td><td></td><td>Elk type metalen schroef die het gewicht van de Petrischaal op een oppervlak houdt</td></tr></tbody></table>

een methode voor het evalueren van insecticide werkzaamheid tegen bed bug,<em&gt; cimex lectularius</em&gt;, eieren en first stadia

A Method for Evaluating Insecticide Efficacy against Bed Bug, Cimex lectularius, Eggs and First Instars

Standard toxiciteit evaluaties van insecticiden tegen schadelijke insecten worden voornamelijk uitgevoerd op volwassen insecten. Evaluatie op basis van een dosis-respons of concentratie-respons curve, de sterfte toeneemt naarmate de dosis of concentratie van een insecticide wordt verhoogd. Standaard letale concentratie (LC50) en letale dosis (LD50) tests die leiden tot 50% mortaliteit van een testpopulatie kan een uitdaging voor de evaluatie toxiciteit van insecticiden tegen insecten levensstadia niet voor volwassenen, zoals eieren en vroege instar of nimfenstadia . Echter, deze informatie is essentieel voor het begrijpen van insecticide werkzaamheid in alle bed bug levensfasen, die de controle en behandeling inspanningen beïnvloedt. Dit protocol maakt gebruik van een standaard dompelen bioassay aangepast voor bed bug eieren en een contact insecticide-test voor de behandeling van nymphal eerste stadia. Deze assays produceren een concentratie-respons curve verder kwantificeren LC 50 waarden voor insecticide evaluaties.

De eieren werden ondergedompeld in 5 verschillende concentraties van imidacloprid / β-cyfluthrin (ul / ml). De eerste stadia werden op behandelde oppervlakken van vijf verschillende concentraties van imidacloprid / β-cyfluthrin (Figuur 2) geplaatst. We gebruikten drie verschillende populaties van C. lectularius: Harlan, Richmond, en epicentrum (tabel 1). The Harlan stam i...

Insecticide evaluaties zijn vaak gericht tegen volwassen insecten, in plaats van onvolwassen stadia. Hier presenteren we een protocol voor het evalueren van insecticiden tegen bed bug eieren met een vergelijking met de eerste nimfenstadium bedwants podium. Deze protocollen kunnen worden aangepast voor andere insecten insecticide werkzaamheid in niet-volwassen levensstadia evalueren.

Een methode voor het evalueren van Insecticide werkzaamheid tegen Bed Bug,<em&gt; Cimex lectularius</em&gt;, Eieren en First stadia

Standard toxicity evaluations of insecticides against insect pests are primarily conducted on adult insects. Evaluations are based on a dose-response or ...

Het algemene doel van dit experiment is om de effectiviteit van insecticiden bij het doden van bedwantseneieren en eerste instars te beoordelen. Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van kernvragen binnen de entomologie, zoals de effecten van toxicologische assays op bedwantseneieren en kleine nimfen. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat deze is ontworpen voor de behandeling van een moeilijk te bestrijden levensstadium van het insect met insecticiden, in het bijzonder het eistadium.Om het experiment te starten, haalt u vijf tot 10 gepaarde, goed gevoede volwassen vrouwelijke bedwantsen uit een kolonie en plaatst u de vrouwtjes in een Petrischaal met filterpapier. Bereid 10 replica's voor om ervoor te zorgen dat er voldoende eieren beschikbaar zijn voor de insecticidenassay. Controleer de schalen dagelijks om te zien of de vrouwtjes eieren hebben gelegd.Zodra de vrouwtjes eitjes hebben gelegd, haalt u de vrouwtjes dagelijks uit de Petrischaal en plaatst u ze in nieuwe Petrischalen met nieuw filterpapier. Noteer de gegevens op de oude en nieuwe Petrischalen. Laat de eitjes vier tot vijf dagen rijpen voordat u de assay start.Zodra de eitjes voldoende zijn verouderd, verwijdert u de bedwangedeitjes voorzichtig van het filterpapier met behulp van zachte pincetten. Schraap met de pincet voorzichtig aan de onderkant van het eitje dat aan het filterpapier vastzit en pak het eitje vervolgens voorzichtig vast zonder te veel druk uit te oefenen, om te voorkomen dat de bedwangedeitjes wegspringen. Plaats de verwijderde bedwangedeitjes in hun respectievelijke groepen in de plastic Petrischaaltjes.Wrijf de buitenkant van de bodem van elke Petri-schaal in met een droogdoekje voor wasverzachter om statische elektriciteit te beperken, zodat bedwantseneitjes niet wegspringen. Bereid vervolgens seriële verdunningen van insecticiden voor om een reeks van vijf verschillende concentraties te verkrijgen, evenals een controleoplossing met enkel kraanwater, elk met een volume van 20 mL. Neem 50 mL centrifugebuizen die zijn voorgesneden op de mL-lijn en knip vervolgens fijnmazig gaas in vierkanten die groot genoeg zijn om in de dop te passen.Schroef het gaas strak vast met de dop van de centrifugebuis, zodat er geen bulten ontstaan. Plaats vervolgens met een schilderspenseel een groep bedwantseneieren op het gaas in een centrifugebuis. Dompel de groep bedwantseneieren in de afgesneden centrifugebuis gedurende vijf seconden in een insecticideconcentratie.Haal de centrifugebuis uit de insecticidenoplossing. Plaats de centrifugebuis direct op laboratoriumpapier om het gaas met de eieren erin te drogen. Verwijder na het drogen de groep eieren uit de centrifugebuis met een klein penseel met fijne haren en plaats deze in een schone Petrischaal met schoon filterpapier.Registreer de eimortaliteit gedurende 14 dagen om ervoor te zorgen dat alle eieren voldoende tijd hebben gehad om uit te komen. Corrigeer de mortaliteit in de controlebehandeling met behulp van de formule van Abbott. Voer de geregistreerde mortaliteit samen met de overeenkomstige concentraties in de analysesoftware in om de LC50-waarden te berekenen.Scheid een groep van vijf volwassen mannelijke en vijf volwassen vrouwelijke bedwantsen die de vorige dag gevoed zijn en plaats deze in een Petrischaal met filterpapier. Laat de volwassen bedwantsen acht dagen lang paren en eieren leggen. Verwijder vervolgens de volwassenen uit de Petrischalen en laat de eieren in de Petrischalen uitkomen tot eerste stadia (first instars).Verzamel de niet-gevoede eerste instars van dezelfde leeftijd met een penseel en plaats ze vervolgens in nieuwe, schone Petrischalen tot aan de insecticide-assay. Pipetteer aliquots van 150 microliter van elk van de vijf eerder bereide verdunningen van het insecticide en water voor de controlegroep op individuele filterpapieren. Verdeel het insecticide gelijkmatig door druppels aan te brengen langs de gehele rand en in het centrum van het filterpapier.Plaats de behandelde filterpapieren afzonderlijk boven op individuele hardboardpanelen. Laat groepen eerste instars los op de individuele filterpapieren terwijl deze nog nat zijn met insecticide en dek de eerste instars af met de bodem van een omgekeerde Petrischaal; plaats een gewicht bovenop de Petrischaal om te voorkomen dat de bedwantsen in het eerste stadium ontsnappen. Registreer de mortaliteit van de eerste instar bedwantsen na 24 uur blootstelling aan alle insecticideconcentraties.Corrigeer voor mortaliteit in de controlebehandeling met behulp van de formule van Abbott. Voer de geregistreerde mortaliteit en concentraties in de analysesoftware in om de LC50-waarden te berekenen. Het percentage respons of mortaliteit van bedbug-eieren van het Harlin-stam bij vijf verschillende concentraties metocloprid bèta-cyfluthrin nam toe naarmate de dosis steeg.De mortaliteit bereikte 100% bij de hoogste geteste concentratie. Na het bekijken van deze video zou u een beter inzicht moeten hebben in hoe de werkzaamheid van insecticiden tegen bedwangen-eieren en eerste instars kan worden geëvalueerd.

a-method-for-evaluating-insecticide-efficacy-against-bed-bug-cimex

Research

JoVE Journal

Environment

Milieu

Dit manuscript toont en bespreekt technieken die gebruikt worden om pesticiden gevoeligheid enquête en de weerstand tegen contact-en systemische bestrijdingsmiddelen te detecteren in arthropod ongedierte.

Bioassays voor Monitoring Insecticide Resistance

C. elegans eierleggedrag kan belangrijke informatie bieden in ontwikkelings-, reproductieve en anatomische studies.  Deze video introduceert de belangrijke stappen van een eierlegtest en toont een monsterexperiment waarbij een medicijn wordt getest op reproductietoxiciteit.

Egg Laying Assay: Een methode om het eierleggedrag van C. elegans te kwantificeren

Een ei-in-worm (EIW) test is een handige methode om eierleggende gedrag te kwantificeren. Veranderingen in eileg kan een gedragsmatige reactie van het modelorganisme...

Het meten van de effecten van bacteriën op<em&gt; C. Elegans</em&gt; Gedrag Met behulp van een Ei Retention Assay

Bedwantsen vertrouwen op olfactorische receptorneuronen die zich in hun antenne olfactorische sensilla bevinden om semiochemicaliën in de omgeving te detecteren. Met behulp van een enkele sensillum-opname demonstreren we een methode om de reactie van bedwantsen op semiochemicaliën te evalueren en het coderingsproces dat hierbij betrokken is, te onderzoeken.

Met behulp van Single sensillum Opnemen op Olfactorische Neuron Reacties van bedwantsen te semiochemicaliën Detect

Leven tabellen toestaan van kwantificering van de bronnen en de tarieven van sterfte in de insectenbevolking en bijdragen aan het begrijpen, voorspellen en manipuleren van de populatiedynamiek in agro-ecosystemen. Methoden voor het uitvoeren en analyseren van de cohort gebaseerde leven tabellen in het veld voor een insect met sessiele onvolwassen levensstadia worden gepresenteerd.

Methodologie voor ontwikkeling van leven tabellen voor sessiele insecten in het veld met de wittevlieg, Bemisia tabaci, in katoen als een modelsysteem

Protocollen worden voor de beoordeling van de toxiciteit van chemicaliën te onvolwassen en volwassen muggen voor ontwikkeling als nieuwe klassen van larvicides, adulticides en endectocides beschreven. De protocollen inschakelen high-throughput testen van meerdere oplossingen op single-point dosis en evaluatie achteraf via dosis reactie assay om toxiciteit op contact te bepalen of via ingestie.

Protocollen voor het testen van de toxiciteit van roman insecticide chemicaliën aan muggen

Hier presenteren we een protocol voor het onderzoek naar de voorkeur van de verpopt van volwassen larven van Ectropis grisescens in reactie op de bodem factoren (e.g., substraat type en vocht inhoud) met behulp van bioassays keuze. Wij presenteren ook een protocol van neen-keuze bioassays om te bepalen van de factoren die invloed hebben op het gedrag van de verpopt en nabestaanden van E. grisescens.

Keuze en nee-keuze Bioassays te bestuderen de verpopt voorkeur en het succes van de opkomst van Ectropis grisescens

Wij presenteren een eenvoudige cytogenetische techniek met behulp van 4 ', 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) om te bepalen van het tarief van de bevruchting en primaire sex-ratio van de haplodiploid invasieve plaag Bemisia tabaci.

Bepaling van het tarief van de bevruchting ei van Bemisia tabaci met behulp van een cytogenetische techniek

Een methode met behulp van groene koffievruchten (GFs) werd ontwikkeld om de toxiciteit van insecticiden tegen de koffiebessenboorder (CBB) te testen. Insecticiden of giftige stoffen werden aangebracht op gedesinfecteerde GFs voor of na CBB-besmetting. Insectensterfte, afstotendheid en voortplantingsvermogen, naast andere parameters, werden geëvalueerd.

Methodologie om controlemiddelen en insecticiden te testen tegen de koffiebesboorder Hypothenemus hampei

Dit protocol beschrijft de verplichte voedingstest om het potentieel toxische effect van een fytochemische stof op de larven van het lepidoptera-insect te evalueren. Dit is een zeer schaalbare insectenbioassay, waarmee de subletale en dodelijke dosis, afschrikkende activiteit en fysiologisch effect eenvoudig kunnen worden geoptimaliseerd. Dit zou kunnen worden gebruikt voor het screenen van milieuvriendelijke insecticiden.

Ontwikkeling van een voedingstestsysteem voor het evalueren van het insecticide effect van fytochemicaliën op Helicoverpa armigera

Leer een methode om insecticide-effectiviteit te evalueren tegen bedwantseneieren en eerste stadia van Cimex lectularius. Dit protocol verbetert plaagbeheersstrategieën door immature levensstadia te targeten.

Een methode voor het evalueren van Insecticide werkzaamheid tegen Bed Bug,

Meer video's verkennen