Name: Murine Aortic Crush Injury: Een Efficiënt In Vivo Model van gladde spiercel proliferatie en endotheliale functie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-06-11T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 14 s
Description: Leer een muizenmodel voor vasculaire gladde spiercelproliferatie en endotheliale functie. Deze methode helpt onderzoekers restenose na cardiovasculaire ingrepen te bestuderen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Wij danken Hsia Ru-ching PhD, van de Electron Microscopy Core Facility van de Universiteit van Maryland School of Medicine, voor haar technische ondersteuning bij het verwerken van de scan elektronische microscopie monsters.

Etiekverklaring: De protocollen voor dierhantering werden goedgekeurd door het Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) van de Universiteit van Maryland (protocol nummer 0416009) en uitgevoerd volgens de AAALAC-internationale normen. 1. Chirurgische procedure <ol><li> Anesthetische techniek <ol><li> Steriliseer alle instrumenten die worden gebruikt in overlevingskirurgie met stoomsterilisatie bij 121 ° C gedurende 30 minuten. </li><li> Anesthesie via een inductietank met 100% O2 en 2,5% isofluraan afgeven via precisieverdamper. Na inductie, stop de isofluraan en spoel de kamer met O2. Anesthesie onderhouden met 1,5-2% isofluraan via gezichtsmasker en 1 L / min O 2 bij inademing. </li><li> Bevestig zowel de inductiekamer als het gezichtsmasker aan een houtskoolafscheider voor afzuigafzetting om personeel te beschermen. Zorg voor een adequaat verdovingsplan door demonstratieDaarbij is er geen reactie op schadelijke stimuli (toe knijp). </li><li> Creëer een operatief veld bestaande uit een chirurgische dienblad met isothermisch pad om thermische ondersteuning tijdens de operatie te verschaffen. Een extra isothermisch pad zorgt voor thermische ondersteuning voor dieren in hun herstelkooi. </li></ol></li><li> Dierlijke bereiding <ol><li> Voer het volgende onderzoek uit op 10-12 weken oude mannelijke C57BL / 6 muizen. </li><li> Verwijder het haar op het ventrale buikoppervlak van het dier van het baarmoeder naar het inguinale gebied met een depilator of een elektrische klipper met een nummer 40 blad. <ol><li> In geval van depilatory agent, voeg deze verbinding toe op het chirurgische gebied gedurende 2-3 minuten en verwijder het dan met katoen. We gebruiken een in de handel verkrijgbare verbinding van calciumhydroxide en natriumhydroxide. </li></ol></li><li> Prep het gebied over de schouder met 70% alcohol en injecteer carprofen (5 mg / kg) subcutaan met een 25 gauge of kleinere boornaald. DezeDe behandeling zal postoperatieve analgesie voor het dier verschaffen. </li><li> Verplaats het dier naar het chirurgische veld en plaats in dorsale recumbency. </li><li> Bereid de chirurgische plaats door 8-12% providone-jodium te schrobben met een schone katoen applicator of katoen gaas. Spoel vervolgens de huid twee keer met 70% alcohol. </li><li> Plaats oculair smeermiddel in beide ogen om de incidentie van corneale uitdroging te verminderen. Bedek de chirurgische plaats met een steriele draperie. </li></ol></li><li> Operatieve techniek <ol><li> Maak een median buiklaparotomie incisie ongeveer 2-2,5 cm lang met een scalpel begin onmiddellijk caudal het xiphoide proces en uitstrekken naar het bekken. </li><li> Mobiliseer de darm en duodenum en zijwaarts naar rechts. Rol een strook steriele katoen door en bedekt met steriele zoutoplossing voor injectie om de viscera te verpakken om de blootstelling te verbeteren. </li><li> Met de dunne darm gemobiliseerd naar de rechterkant van deBuik, de retroperitoneum blootstellen en de abdominale aorta van de linker nierader naar de aorta bifurcatie blootstellen ( Figuur 1 ). </li><li> Met een steriele katoenen tip applicator, leveren 30 opeenvolgende knuffels, elke vijf seconden in de duur. </li><li> Verwijder de verpakking en laat de viscera terugkeren naar hun oorspronkelijke positie. </li><li> Sluit fascia met een lopende 4-0 absorberende monofilament hechting (polydioxanon). De huid is gesloten met een lopende 6-0 niet-absorbeerbare monofilament hechting (nylon). </li></ol></li><li> Herstel en post-procedure zorg <ol><li> Plaats de dieren in een herstelkooi met schoon beddengoed op een isotermisch pad om de thermische ondersteuning te doorlopen totdat het dier normaal kan ambuleren. Verlaat het dier niet toezicht totdat het het vermogen toont om sternale recumbency te onderhouden. </li><li> Monitor het dier elke uur voor de eerste 4 uur na de operatie. Zodra het dier ambulerend is, ga ik normaal terug<html> T naar de toegewezen boerenkamer. Het dier wordt niet gehuisvest in het gezelschap van een ander dier totdat het volledig is hersteld. </li><li> Monitor het dier tweemaal daags gedurende de eerste 72 uur na de operatie en tenminste 3 keer per week daarna. Monitoring omvat het wegen van het dier drie keer per week. </li><li> Administreer carpofen (5 mg / kg) tweemaal daags subcutaan gedurende de eerste 72 uur na de operatie. </li></ol></li></ol> 2. Aankoop van Weefsel <ol><li> Methode van Euthanasie <ol><li> Euthanize de dieren op vooraf bepaalde tijdspunten. </li><li> Anesthesie via een inductietank met 100% O2 en 2,5% isofluraan afgeven via precisieverdamper. <ol><li> Om de integriteit van het endothelium te bestuderen, geef Evans Blue kleurstof aan het dier. OPMERKING: Evans Blue is een negatief geladen azofleurstof met een hoge bindingsaffiniteit voor albumine en kan alleen bloedvaten vinnen in afwezigheid van een intact endotheelS = &quot;xref&quot;&gt; 6. </li><li> Voor endothelial integrity studies, op het tijdstip van euthanasie, perfuse de dieren met 5 ml van 0,3% Evans Blue kleurstof gevolgd door 5 mL PBS bij fysiologische druk gedurende 5 min. Het dier wordt gehandhaafd in een chirurgisch vlak van verdoving tijdens de perfusieprocedure. </li></ol></li><li> Na het bereiken van een diep anesthetisch vliegtuig, open de borst met een sternotomie. Maak een laceratie in het rechter atrium om de afvoer van bloed uit het dier mogelijk te maken en toegang tot de linker ventrikel is toegankelijk met een 21 G-naald en injecteer fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS) tot het effluent van het rechter atrium duidelijk is. </li><li> Na perfusie met PBS, ga de buik binnen door middel van een incisie. </li><li> Nogmaals mobiliseer de dunne darm aan de rechterkant van de buik die de infrarenale aorta blootstelt, ontleed de aorta van aangrenzende weefsels en accijns het van de linker nierader naar de aorta bifurcatie. </li><li> Bewaar de uitgesneden aorta in een 4% paraformaalEhydraatoplossing tot weefselverwerking optreedt. <ol><li> Voor endotheliale integriteitstudies, open de aorta in de lengterichting en knijp het op een wasblad dat de helft van het luminale oppervlak 6 blootstelt. Voer een kwalitatieve beoordeling van de endotheliale integriteit uit door de mate van kleuring met Evans Blue Dye 6 . </li><li> Voor andere histologische analyses, snijd de aorta dwars door en integreer deze in optimale snijtemperatuur (OCT) verbindingen zoals bepaald door de histologische methode die moet worden gebruikt 7 . </li></ol></li></ol></li></ol>

<ol><li>Carmeliet, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+angiogenesis+and+arteriogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of angiogenesis and arteriogenesis.</a> Nat Med. 6 (4), 389-395 (2000).</li>
<li>Carmeliet, P., Moons, L., Collen, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+angiogenesis%2C+arterial+stenosis%2C+atherosclerosis+and+hemostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc+Res%22%5BJournal%5D)">Mouse models of angiogenesis, arterial stenosis, atherosclerosis and hemostasis.</a> Cardiovasc Res. 39 (1), 8-33 (1998).</li>
<li>Baker, A. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heparanase+Alters+Arterial+Structure%2C+Mechanics%2C+and+Repair+Following+Endovascular+Stenting+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Heparanase Alters Arterial Structure, Mechanics, and Repair Following Endovascular Stenting in Mice.</a> Circ Res. 104 (3), 380-387 (2009).</li>
<li>Petrov, L., Laurila, H., Hayry, P., Vamvakopoulos, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+model+of+aortic+angioplasty+for+genomic+studies+of+neointimal+hyperplasia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vasc+Res%22%5BJournal%5D)">A mouse model of aortic angioplasty for genomic studies of neointimal hyperplasia.</a> J Vasc Res. 42 (4), 292-300 (2005).</li>
<li>Li, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular+smooth+muscle+cells+of+recipient+origin+mediate+intimal+expansion+after+aortic+allotransplantation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Path%22%5BJournal%5D)">Vascular smooth muscle cells of recipient origin mediate intimal expansion after aortic allotransplantation in mice.</a> Am J Path. 158 (6), 1943-1947 (2001).</li>
<li>Radu, M., Chernoff, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+in+vivo+assay+to+test+blood+vessel+permeability%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">An in vivo assay to test blood vessel permeability.</a> J Vis Exp. (73), e50062(2013).</li>
<li>Turbett, G. R., Sellner, L. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+optimal+cutting+temperature+compound+can+inhibit+amplification+by+polymerase+chain+reaction%5BTitle%5D)+AND+%22Diagn+Mol+Pathol%22%5BJournal%5D)">The use of optimal cutting temperature compound can inhibit amplification by polymerase chain reaction.</a> Diagn Mol Pathol. 6 (5), 298-303 (1997).</li>
<li>Puchtler, H., Waldrop, F. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+mechanism+of+Verhoeff%27s+elastica+stain%3A+a+convenient+stain+for+myelin+sheaths%5BTitle%5D)+AND+%22Histochem%22%5BJournal%5D)">On the mechanism of Verhoeff's elastica stain: a convenient stain for myelin sheaths.</a> Histochem. 62 (3), 233-247 (1979).</li>
<li>Salic, A., Mitchison, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+chemical+method+for+fast+and+sensitive+detection+of+DNA+synthesis+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">A chemical method for fast and sensitive detection of DNA synthesis in vivo.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 105 (7), 2415-2420 (2008).</li>
<li>Nelson, P. R., Yamamura, S., Mureebe, L., Itoh, H., Kent, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Smooth+muscle+cell+migration+and+proliferation+are+mediated+by+distinct+phases+of+activation+of+the+intracellular+messenger+mitogen-activated+protein+kinase%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vasc+Surg%22%5BJournal%5D)">Smooth muscle cell migration and proliferation are mediated by distinct phases of activation of the intracellular messenger mitogen-activated protein kinase.</a> J Vasc Surg. 27 (1), 117-125 (1998).</li>
<li>Rzucidlo, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Signaling+pathways+regulating+vascular+smooth+muscle+cell+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Vascular%22%5BJournal%5D)">Signaling pathways regulating vascular smooth muscle cell differentiation.</a> Vascular. 17, Suppl 1. S15-S20 (2009).</li>
<li>Aoki, T., Sumii, T., Mori, T., Wang, X., Lo, E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood-brain+barrier+disruption+and+matrix+metalloproteinase-9+expression+during+reperfusion+injury%3A+mechanical+versus+embolic+focal+ischemia+in+spontaneously+hypertensive+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Blood-brain barrier disruption and matrix metalloproteinase-9 expression during reperfusion injury: mechanical versus embolic focal ischemia in spontaneously hypertensive rats.</a> Stroke. 33 (11), 2711-2717 (2002).</li>
<li>Yu, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MARCKS+Signaling+Differentially+Regulates+Vascular+Smooth+Muscle+and+Endothelial+Cell+Proliferation+through+a+KIS-%2C+p27kip1-+Dependent+Mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">MARCKS Signaling Differentially Regulates Vascular Smooth Muscle and Endothelial Cell Proliferation through a KIS-, p27kip1- Dependent Mechanism.</a> PLoS One. 10 (11), e0141397(2015).</li>
<li>Banai, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rabbit+ear+model+of+injury-induced+arterial+smooth-muscle+cell-proliferation+-+kinetics%2C+reproducibility%2C+and+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Rabbit ear model of injury-induced arterial smooth-muscle cell-proliferation - kinetics, reproducibility, and implications.</a> Circ Res. 69 (3), 748-756 (1991).</li>
</ol>

Dit werk werd gefinancierd door de afdeling Veterinaire Zaken Carrièreontwikkeling Award (1IK2BX001553-01) (TSM) en de Vasculaire Cures EJ Wylie Scholarship (TSM).

We hebben de effecten van een muizen aorta verwondingsmodel gekenmerkt, dat resulteert in mediale hyperplasie en endotheliale barriere dysfunctie. Gedeeltelijke EC-detachering langs de aorta-intima leidde tot het verlies van cel-celcontact en het verhogen van celuitstulpingen. Corresponderend was de endotheliale barrièrefunctie significant aangetast, die de mitogeengevoelige signaleringstrajecten stimuleerde, wat leidde tot proliferatie van VSMC&#39;s en verdikking van de vatwand. De sterkten van dit model zijn dat het ...

restenose Volgende cardiovasculaire procedures (bypass operatie, angioplastie of stenting) is een significant probleem waardoor de duurzaamheid van deze procedures wordt verminderd. Alle revascularisatieprocedures worden geplaagd door restenose. Huidige strategieën ter voorkoming van restenose (drug-eluerende stents en geneesmiddelcoated ballonnen) remmen zowel vasculaire gladde spiercellen (VSMC) en endotheliale cel proliferatie (EC). Bijgevolg voorkomen deze interventies VSMC gemedieerde restenose, maar voorkomen ook de regeneratie van het endothelium. Zonder een intact endothelium, zijn patiënten verplicht te zijn op krachtige antiplatelet middelen om het risico op in situ trombose te verminderen met het risico op bloedingen complicaties. Een ideale therapie zou VSMC proliferatie remmen, terwijl het bevorderen van de regeneratie van het endothelium. Zo is er een noodzaak om tegelijkertijd de VSMC proliferatie- en endotheliale barrièrefunctie in n vivo te bestuderen. Momenteel zijn er ernstigeAl muismodellen van restenose 1 . Deze modellen omvatten carotid ligatie en femorale arterie draad verwonding 2 . Aortische modellen omvatten stentplaatsing 3 , ballonbesering 4 en aorta-allograft 5 . Alle huidige modellen zijn beperkt. Carotidligatie genereert een doorstroming gemedieerde neointimale laesie en heeft geen endotheel letsel. Bovendien hebben zowel carotide- als femorale slagaders veel vallen minder cellagen dan menselijke vaten, waardoor hun translatiewaarde wordt beperkt. De aorta van de muis die ongeveer 1,3 mm in diameter is, is het enige vat dat een klinisch relevante (coronaire) menselijke slagader benadert (3). Ondanks het translatiepotentiaal van muizen aorta modellen van ziekte, hebben huidige modellen beperkingen. Deze modellen vereisen geavanceerde microchirurgische vaardigheden en gespecialiseerde apparatuur zoals angioplastiekballonnen en stents. Hierin presenteren weEen nieuwe, reproduceerbare techniek om tegelijkertijd VSMC proliferatie te induceren en endotheliale barrièrefunctie te verstoren.

<table><tbody><tr><td>Ocular lubricant</td><td>Dechra</td><td>17033-211-38</td><td>Farmaceutische middelen</td></tr><tr><td>Isofluraan</td><td>VetOne</td><td>502017</td><td>Farmaceutische middelen</td></tr><tr><td>Carprofen</td><td>Zoetis</td><td>26357</td><td>Farmaceutische middelen</td></tr><tr><td>Precisie verdamper</td><td>Summit Medical</td><td>10675</td><td>Chirurgische benodigdheden</td></tr><tr><td>Houtskoolschotel</td><td>Bickford Inc.</td><td>80120</td><td>Chirurgische benodigdheden</td></tr><tr><td>Isothermale pad</td><td>Harvard Apparatus</td><td>50-7053-R</td><td>Chirurgische benodigdheden</td></tr><tr><td>Steriele katoenen applicator</td><td>Fisher Scientific</td><td>23-400-124</td><td>Chirurgische benodigdheden</td></tr><tr><td>4-0 absorbeerbare monofilamentnaald</td><td>Ethicon, Inc</td><td>J310</td><td>Chirurgische benodigdheden</td></tr><tr><td>5-0 niet-absorbeerbare monofilamentnaald</td><td>Ethicon,Inc</td><td>1666</td><td>Chirurgische benodigdheden</td></tr><tr><td>21-gauge x 1 inch naald</td><td>BD Biosciences</td><td>305165</td><td>Chirurgische benodigdheden</td></tr><tr><td>25-gauge x 1 inch naald</td><td>BD Biosciences</td><td>305125</td><td>Chirurgische benodigdheden</td></tr><tr><td>Droge sterilisator</td><td>Cellpoint</td><td>7770</td><td>Chirurgische benodigdheden</td></tr><tr><td>Fijne schaar</td><td>Fine Science Tools</td><td>14058-09</td><td>Chirurgische instrumenten</td></tr><tr><td>Adsontang</td><td>Fine Science Tools</td><td>11006-12</td><td>Chirurgische instrumenten</td></tr><tr><td>Dumont #5 fijne pincet</td><td>Fine Science Tools</td><td>11254-20</td><td>Chirurgische instrumenten</td></tr><tr><td>Vannas veerscharen 3 mm snijkant</td><td>Fine Science Tools</td><td>15000-00</td><td>Chirurgische instrumenten</td></tr><tr><td>Naaldvoerder</td><td>Fine Science Tools</td><td>91201-13</td><td>Chirurgische instrumenten</td></tr><tr><td>Scalpamel #4</td><td>Fine Science Tools</td><td>10004-13</td><td>Chirurgische instrumenten</td></tr><tr><td>Scalpamelmesjes #10</td><td>Fine Science Tools</td><td>10010-00</td><td>Chirurgische instrumenten</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Lonza</td><td>17-516F</td><td>Reagentia voor weefselverwerking</td></tr><tr><td>Evans Blue</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E2129</td><td>Reagentia voor weefselverwerking</td></tr><tr><td>Paraformaldehyde</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P6148</td><td>Reagentia voor weefselverwerking</td></tr><tr><td>Modelleerwaar</td><td>Bego</td><td>40001</td><td>Reagentia voor weefselverwerking</td></tr><tr><td>OCT compound</td><td>Tissue-Tek Sakura</td><td>4583</td><td>Reagentia voor weefselverwerking</td></tr><tr><td>Mayer's hematoxylinen oplossing</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>MHS16</td><td>Reagentia voor immunohistologische analyse</td></tr><tr><td>Eosin Y alcoholische oplossing</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>HT110316</td><td>Reagentia voor immunohistologische analyse</td></tr><tr><td>Elastine kleurstofkit</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>HT25A</td><td>Reagentia voor immunohistologische analyse</td></tr><tr><td>Click-it Edu Alexa-488 Beeldvormingskit</td><td>Invitrogen</td><td>C10337</td><td>Reagentia voor immunohistologische analyse</td></tr><tr><td>Anti-Erk1/2 antilichaam</td><td>Cell Signaling Technology</td><td>4695</td><td>Reagentia voor immunohistologische analyse</td></tr><tr><td>Anti-fosfo-Erk1/2 antilichaam</td><td>Cell Signaling Technology</td><td>4370</td><td>Reagentia voor immunohistologische analyse</td></tr><tr><td>Anti-p27kip1 antilichaam</td><td>Cell Signaling Technology</td><td>3698</td><td>Reagentia voor immunohistologische analyse</td></tr><tr><td>Trichloorazijnzuur</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T9159</td><td>Reagentia voor immunohistologische analyse</td></tr></tbody></table>

murine aortic crush injury: een efficiënt<em&gt; in vivo</em&gt; model van gladde spiercel proliferatie en endotheliale functie

Murine Aortic Crush Injury: An Efficient In Vivo Model of Smooth Muscle Cell Proliferation and Endothelial Function

Arteriële reconstructie, ofwel angioplastiek of bypass-operatie, omvat iatrogene trauma waardoor endotheliale verstoring en vasculaire gladde spiercellen (VSMC) proliferatie veroorzaakt worden. Gemeenschappelijke muizenmodellen bestuderen kleine vaten, zoals de carotis- en femorale slagaders. Hierin beschrijven we een in vivo systeem waarin zowel VSMC proliferatie als endotheliale barrière functie gelijktijdig in een groot vat kunnen worden beoordeeld. We bestudeerden het infrarenale aorta respons op letsel in C57BL / 6 muizen. De aorta werd gewond van de linker nierader naar de aorta bifurcatie door 30 transmurale verpletteringen van 5 seconden duur met een katoenstippel applicator. Morfologische veranderingen werden beoordeeld met conventionele histologie. Aorta wanddikte werd gemeten van het luminale oppervlak naar de adventitia. EdU-integratie en tellerverf met DAPI en alfa-actine werd gebruikt om VSMC proliferatie te demonstreren. Activatie van ERK1 / 2, een bekende moderator van intimale hyperplasievorming, was afschrikkelijkOntgonnen door Western Blot analyse. Het effect van ontsteking werd bepaald door immunohistochemie voor B-cellen, T-cellen en macrofagen . En gezichtsafdelingen van endothelium werden gesynchroniseerd met scan-elektronenmicroscopie (SEM). Endotheliale barriere functie werd bepaald met Evans Blue staining. Transmurale letsel leidde tot verdikking van de aorta wand. Deze verwonding veroorzaakte VSMC proliferatie, meest prominente bij 3 dagen na verwonding, en vroege activatie van ERK1 / 2 en verminderde p27 kip1 expressie. Schade leidde niet tot verhoogde B-cellen, T-cellen, of macrofagen infiltratie in de vat van het vat. Schade veroorzaakte deelement van de endotheliale cel en verlies van cel-celcontact. Schade resulteerde in een significant verlies van de endotheliale barrière functie, die na zeven dagen terug naar de basislijn kwam. Het murine transmurale stomp aorta schade model biedt een efficiënt systeem om zowel VSMC proliferatie als endotheliale barrière functie in een groot vat te bestuderen.

Transversale afdelingen aorta ingebed in OCT werden gesneden en gekleurd met hematoxyline en eosine, vervolgens teller gekleurd met Verhoeff-Van Gieson (VVG) vlek om de interne en externe elastische lamina 7 te identificeren. Crush injury veroorzaakte aorta wandverdikking in vergelijking met de aorta&#39;s van dieren die werden behandeld met een sham procedure (alleen laparotomie en kleine darm mobilisatie). De wanddikte, zoals beoordeeld door de afstand van adven...

Restenosis na cardiovasculaire procedures (bypass operatie, angioplastie of stenting) is een significant probleem waardoor de duurzaamheid van deze procedures wordt verminderd. Een ideale therapie zou de proliferatie van gladde spiercellen (VSMC) verhinderen, terwijl het bevorderen van regeneratie van het endothelium. We beschrijven een model voor gelijktijdige beoordeling van VSMC proliferatie en endotheliale functie in vivo.

Murine Aortic Crush Injury: Een Efficiënt<em&gt; In Vivo</em&gt; Model van gladde spiercel proliferatie en endotheliale functie

Arterial reconstruction, whether angioplasty or bypass surgery, involves iatrogenic trauma causing endothelial disruption and vascular smooth muscle cell ...

Het algemene doel van deze procedure is het creëren van een diermodel waarmee de proliferatie van vasculaire gladde spiercellen en de re-endothelialisatie gelijktijdig kunnen worden beoordeeld. Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van kernvragen in het vakgebied van de vasculaire biologie, zoals wat het mechanisme is van restenose na vasculaire interventies? Deze techniek maakt de gelijktijdige in vivo beoordeling van vasculaire gladde spiercelproliferatie en re-endothelialisatie mogelijk.Beide sleutelgebeurtenissen die restenose na vasculaire interventies versterken of verminderen. De procedure zal worden gedemonstreerd door Dr. Dan Yu, een postdoctoraal onderzoeker uit mijn laboratorium. Nadat is bevestigd dat er geen reactie is op de teenknijptest, wordt het haar op de ventrale buik van een geanestheseerde mannelijke C57BL/6 muis van 10 tot 12 weken oud verwijderd, van het borstbeen tot de liesstreek.Desinfecteer vervolgens het schoudergebied met 70% ethanol en gebruik een naald van 25-gauge of kleiner om een passende analgesie toe te dienen. Plaats het dier daarna in rugligging op een chirurgische tray die wordt verwarmd door een isothermisch kussentje. Schrob de operat

murine-aortic-crush-injury-an-efficient-vivo-model-smooth-muscle-cell

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

We demonstreren a novel arteriële ligatie model in muizen spinotrapezius spier, inclusief een stap-voor-stap procedure en beschrijving van de vereiste instrumenten. We beschrijven de operatie en relevante uitkomstmaten met betrekking tot vasculaire netwerk remodeling en functionele vasodilatatie met intravitale en confocale microscopie.

Murine Spinotrapezius model om de invloed van arteriolaire Ligatie beoordelen op microvasculaire functie en Remodeling

Een model van stent implantatie in muizen halsslagader wordt beschreven. In vergelijking met andere, soortgelijke middelen, deze procedure is zeer snel, eenvoudig en toegankelijk, het aanbieden van de mogelijkheid om te studeren in een handige manier de vaatwand reactie op verschillende drug-eluting stents en de moleculaire mechanismen van restenose.

Een Muizenmodel van Stent Implantatie in de halsslagader voor de Studie van Restenose

Histologische en biochemische veranderingen na aneurysma endograft uitsluiting zijn nog onduidelijk. We beschrijven een nieuw model van endograft implantatie op een muizen aneurysma. Door trombus analyse met en zonder hardnekkig circulerende bloed-interface en nieuwe endovasculaire biomaterialen evaluatie, zal dit model helpen om beter te begrijpen endovasculaire aneurysma uitsluiting pathobiology.

Een nieuw muizenmodel van endovasculaire aortaaneurismareparatie

Het begrijpen van de cellulaire en moleculaire mechanismen van re-endothelialisatie na arteriële ontbloting letsel is van het grootste belang bij het voorkomen van trombose en restenose van slagaders. Hier beschrijven we een protocol voor reproduceerbare arteriële erosie letsel van de infrarenale abdominale aorta. De procedure werd ontwikkeld om de onderliggende mechanismen die endotheliale regeneratie met behulp van muismodellen te regelen onderzoeken.

Reproduceerbare Arteriële ontbossing en erosie Letsel door infrarenale abdominale aorta vastklemmen in een Murine Model

Protocollen voor het bestuderen van de embryonale en perinatale lymfkliertest aorta met behulp van in vivo klonale analyse en lot toewijzing, aorta explantaten en geïsoleerde gladde spier cellen zijn gedetailleerd hier. Deze uiteenlopende benaderingen vergemakkelijken het onderzoek van de morfogenese van de embryonale en perinatale aorta in normale ontwikkeling en de pathogenese in ziekte.

Met behulp van In Vivo en weefsel en cel Explant benaderingen te bestuderen van de voedselproductie en de pathogenese van de embryonale en perinatale Aorta

Hier presenteren we een nieuwe toepassing van de bepaling van de aorta ring waar prelabelled mesenchymale cellen zijn mede gekweekte met rat aorta afkomstige endothelial netwerken. Deze nieuwe methode kunt visualisatie van mesenchymale stromale cellen (MSCs) homing en integratie met endothelial netwerken, kwantificering van netwerkeigenschappen en evaluatie van MSC immunophenotypes en gen-expressie.

De aorta Ring mede cultuur Assay: Een handig hulpmiddel om te beoordelen van het potentieel van de Angiogenic van mesenchymale stromale cellen In Vitro

Dit artikel demonstreert een lymfkliertest model voor het bestuderen van de ontwikkeling van myointimal hyperplasie (MH) na de ballon van de aorta blessure.

Ballon gebaseerde letsel ertoe Myointimal Hyperplasia in de muis abdominale Aorta

Dit artikel beschrijft een gedetailleerde methodologie van het gebruik van een radiopaak loodhoudende silicone rubber te perfuse de lymfkliertest therapieën voor de diameter van de aorta kwantificering in een muismodel van aorta aneurysma en dissectie.

Kwantitatieve analyse van de Micro-CT van Aortopathy in een muismodel van β-aminopropionitrile-geïnduceerde aorta aneurysma en dissectie

Het huidige protocol beschrijft een gestandaardiseerde chirurgische methode voor de inductie van halsslagaderaneurysma's in een muizenmodel door middel van een enkele chirurgische ingreep.

Een muizenmodel van de vorming van een aneurysma van de halsslagader

Hier presenteren we een muizenmodel voor anastomose van de dijbeenslagader, en bieden we onderzoekers een waardevol diermodel om vasculaire anastomosestenose te bestuderen en te simuleren. Deze ontwikkeling is cruciaal voor het vergroten van ons begrip van de pathofysiologie die aan deze aandoening ten grondslag ligt en voor het mogelijk maken van nauwkeuriger en effectiever onderzoek naar vaatziekten.

Ontwikkeling van een muizenmodel voor anastomosestenose van de dijbeenslagader

Dit protocol biedt een herhaalbare en betrouwbare methode om abdominale aorta-aneurysma's (AAA's) in C57BL/6-muizen op te wekken met behulp van elastine-sensitisatie en perivasculaire elastase-toepassing, als een AAA-model dat een immuunsensitisatiecomponent bevat.

Betrouwbare creatie van een model voor muriene abdominale aorta-aneurysma met behulp van elastine-sensitisatie en perivasculaire elastase

Leer een muizenmodel voor vasculaire gladde spiercelproliferatie en endotheliale functie. Deze methode helpt onderzoekers restenose na cardiovasculaire ingrepen te bestuderen.

Murine Aortic Crush Injury: Een Efficiënt

Meer video's verkennen