Name: Visualisatie van celcyclus Variaties en Bepaling van Nucleatie in Postnatale Cardiomyocytes (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-02-24T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 41 s
Description: Leer celcyclusvisualisatie in postnatale cardiomyocyten met behulp van transgene muizen en fluorescentiemicroscopie. Deze methode onderscheidt celdeling van ploïdieveranderingen voor hartregeneratieonderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

We danken S. Grünberg (Bonn, Duitsland) en P. Freitag (Bonn, Duitsland) voor hun technische assistentie.

<ol><li>Bergmann, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+for+cardiomyocyte+renewal+in+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Evidence for cardiomyocyte renewal in humans.</a> Science. 324 (5923), 98-102 (2009).</li>
<li>Raulf, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgenic+systems+for+unequivocal+identification+of+cardiac+myocyte+nuclei+and+analysis+of+cardiomyocyte+cell+cycle+status%5BTitle%5D)+AND+%22Basic+Res.Cardiol%22%5BJournal%5D)">Transgenic systems for unequivocal identification of cardiac myocyte nuclei and analysis of cardiomyocyte cell cycle status.</a> Basic Res.Cardiol. 110 (3), 33(2015).</li>
<li>Field, C. M., Alberts, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anillin%2C+a+contractile+ring+protein+that+cycles+from+the+nucleus+to+the+cell+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22J.Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Anillin, a contractile ring protein that cycles from the nucleus to the cell cortex.</a> J.Cell Biol. 131 (1), 165-178 (1995).</li>
<li>Hesse, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+visualization+of+cell+division+using+high-resolution+imaging+of+M-phase+of+the+cell+cycle%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.Commun%22%5BJournal%5D)">Direct visualization of cell division using high-resolution imaging of M-phase of the cell cycle.</a> Nat.Commun. 3, 1076(2012).</li>
<li>Eulalio, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+screening+identifies+miRNAs+inducing+cardiac+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Functional screening identifies miRNAs inducing cardiac regeneration.</a> Nature. 492 (7429), 376-381 (2012).</li>
<li>Di, S. V., Giacca, M., Capogrossi, M. C., Crescenzi, M., Martelli, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Knockdown+of+cyclin-dependent+kinase+inhibitors+induces+cardiomyocyte+re-entry+in+the+cell+cycle%5BTitle%5D)+AND+%22J.Biol.Chem%22%5BJournal%5D)">Knockdown of cyclin-dependent kinase inhibitors induces cardiomyocyte re-entry in the cell cycle.</a> J.Biol.Chem. 286 (10), 8644-8654 (2011).</li>
<li>Hosoda, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clonality+of+mouse+and+human+cardiomyogenesis+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A%22%5BJournal%5D)">Clonality of mouse and human cardiomyogenesis in vivo.</a> Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A. 106 (40), 17169-17174 (2009).</li>
<li>Soonpaa, M. H., Field, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+cardiomyocyte+DNA+synthesis+in+normal+and+injured+adult+mouse+hearts%5BTitle%5D)+AND+%22Am.J.Physiol%22%5BJournal%5D)">Assessment of cardiomyocyte DNA synthesis in normal and injured adult mouse hearts.</a> Am.J.Physiol. 272 (1 Pt 2), H220-H226 (1997).</li>
<li>Ang, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Limitations+of+conventional+approaches+to+identify+myocyte+nuclei+in+histologic+sections+of+the+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Am.J.Physiol+Cell+Physiol%22%5BJournal%5D)">Limitations of conventional approaches to identify myocyte nuclei in histologic sections of the heart.</a> Am.J.Physiol Cell Physiol. 298 (6), C1603-C1609 (2010).</li>
<li>Engel, F. B., Schebesta, M., Keating, M. T. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/16889791">Anillin localization defect in cardiomyocyte binucleation.</a> J Mol Cell Cardiol. 41 (4), 601-612 (2006).</li>
<li>Bergmann, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamics+of+Cell+Generation+and+Turnover+in+the+Human+Heart%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Dynamics of Cell Generation and Turnover in the Human Heart.</a> Cell. 161 (7), 1566-1575 (2015).</li>
</ol>

De auteurs verklaren dat ze geen concurrerende financiële belangen hebben.

Er is een discussie over de vraag of cardiomyocyten kunnen de celcyclus opnieuw invoeren en verdelen en na beschadiging tijdens weefsel homeostase. Waarden voor de basisomzet cardiomyocyten werden gegeven in het traject tussen 1% en 80% 1 7. Ook na een cardiale laesie, is de inductie van celcyclus-activiteit en het scheppen van nieuwe cardiomyocyten gerapporteerd in het grensgebied, met waarden tussen 0,0083% 8 en 25 - 40% 7....

De correcte identificatie van cardiomyocyt kernen en de celcyclus status van cruciaal belang voor het bepalen van de cardiale omzet en regeneratie spier. Dit geldt met name voor het gebruik van nucleaire merkers, zoals pHH3, Ki-67, of thymidine analogen, voor het identificeren celcyclusactiviteit. Aangezien de proliferatieve capaciteit van zoogdier volwassen hartspiercellen zeer klein 1, een valse identificatie van een kern voor een positieve marker proliferatie van cardiomyocyten kern kan een wezenlijk verschil in de uitkomst van een proliferatie assay maken. Bovendien cardiomyocyten zijn gevoelig voor variaties in de celcyclus, zoals endoreduplicatie en acytokinetic mitose, die resulteren in polyploïde en meerkernige cellen dan bij de celdeling. Daartoe is de interpretatie van antilichaamkleuring tegen gemeenschappelijke celcyclus markers is niet beslissend in alle gevallen. Hier presenteren we methoden voor de straight-forwa<html> rd erkenning van de muis hartspiercellen en hun nucleariteit in de moedertaal geïsoleerde cellen en dikke weefselcoupes bij postnatale en volwassen stadia door de ondubbelzinnige identificatie van hun kernen. Daartoe een transgene muis lijn cardiomyocyt- specifieke expressie van een fusieproteïne bestaande uit humaan histon H2B en mCherry onder controle van de promoter Myh6 (Myh6-H2B-MCH) werd 2. Kruisen deze muis lijn met een transgene proliferatie indicator muizenlijn, waarin de expressie van een eGFP-anillin fusie-eiwit onder controle van de alomtegenwoordige kip actine promoter een CMV enhancer (CAG-eGFP-anillin), maakt de bepaling van de status van celcyclus. De steiger anillin proteïne specifiek tot expressie gebracht in celcyclus actieve cellen 3 en het differentieel subcellulaire lokalisatie tijdens de celcyclus maakt live tracering celcyclusprogressie met een hoge resolutie van de M-faseef &quot;&gt; 4. Derhalve dubbele transgene muizen kunnen worden gebruikt om te discrimineren tussen prolifererende hartspiercellen en die celcyclus variaties ondergaan. Dit bewijst vooral nuttig bij het screenen op proliferatie-inducerende stoffen in vitro.

<table><tbody><tr><td>10 cm Petri dish</td><td>Sarstedt</td><td>821472</td><td></td></tr><tr><td>100 &micro;m cell strainer</td><td>Becton Dickinson GmbH/Falcon</td><td>352360</td><td></td></tr><tr><td>2,3-Butanedione monoxime (BDM)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B0753</td><td></td></tr><tr><td>G20x1 &frac12; injection cannula, Sterican</td><td>Braun, Melsungen</td><td>4657519</td><td></td></tr><tr><td>20 gauge needle</td><td>Becton Dickinson GmbH</td><td>301300</td><td></td></tr><tr><td>24-well plates</td><td>Becton Dickinson GmbH/Falcon</td><td>353047</td><td></td></tr><tr><td>2-Methyl-butane</td><td>Carl Roth GmbH + Co. KG</td><td>3927.1</td><td></td></tr><tr><td>37% formaldehyde solution</td><td>AppliChem GmbH&nbsp;</td><td>A0936,1000</td><td></td></tr><tr><td>3-way stopcock</td><td>B. Braun Medical Inc.</td><td>16494C</td><td></td></tr><tr><td>50 mL syringe</td><td>B. Braun Medical Inc.</td><td>8728810F</td><td></td></tr><tr><td>70% ethanol</td><td>Otto Fischar GmbH</td><td>27669</td><td></td></tr><tr><td>Alexa-Fluor-conjugated secondary antibody</td><td>Jackson ImmunoResearch</td><td>115-605-205</td><td></td></tr><tr><td>Alpha-Aktinin EA-53, Mouse IgG</td><td>Sigma-Aldrich, Steinheim</td><td>A7811</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C4901</td><td></td></tr><tr><td>Cell Culture Microplate, 96 Well, Half Area</td><td>Greiner bio-one</td><td>675986</td><td></td></tr><tr><td>Collagenase B</td><td>Roche</td><td>11088815001</td><td></td></tr><tr><td>confocal microscope Eclipse Ti-E</td><td>Nikon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>cryostat CM 3050S</td><td>Leica</td><td></td><td></td></tr><tr><td>donkey serum</td><td>Jackson Immuno Research, Suffolk, GB</td><td>017-000-121</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco's Phosphate Buffered Saline</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D8537</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E4884</td><td></td></tr><tr><td>fetal calf serum</td><td>PromoCell, Heidelberg</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Formaldehyde solution (4%)</td><td>PanReac AppliChem</td><td>A3697</td><td></td></tr><tr><td>Gelatine from porcine skin, Type A</td><td>Sigma-Aldrich, Steinheim</td><td>G2500</td><td></td></tr><tr><td>glass coverslips</td><td>VWR</td><td>631-0146</td><td></td></tr><tr><td>Glucose</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G7021</td><td></td></tr><tr><td>Heidelberger extension tube</td><td>IMPROMEDIFORM GmbH</td><td>MF 1833</td><td></td></tr><tr><td>Heparin-Natrium</td><td>Ratiopharm</td><td>5394.02.00</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H3375</td><td></td></tr><tr><td>HistoBond microscope slides</td><td>Marienfeld</td><td>0810000</td><td></td></tr><tr><td>Hoechst 33342 (1&nbsp;mg/mL)</td><td>Sigma Aldrich, Taufkirchen</td><td>B2261</td><td></td></tr><tr><td>Insulin syringe</td><td>Becton Dickinson GmbH</td><td>300334</td><td></td></tr><tr><td>Iscove&rsquo;s ModifiedDulbecco&rsquo;s Medium (IMDM)</td><td>Gibco/Life Technologies, Darmstadt</td><td>21980-032</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P9333</td><td></td></tr><tr><td>Laminin</td><td>Corning</td><td>354221</td><td></td></tr><tr><td>Laser Scanning Mikroskop Eclipse Ti</td><td>Nikoninstruments, D&uuml;sseldorf</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Lipofectamine RNAiMAX</td><td>Invitrogen/Life Technologies, Darmstadt</td><td>13778075</td><td></td></tr><tr><td>Mouse IgG Cy5 (donkey)</td><td>Jackson ImmunoResearch</td><td>715-175-151</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M8266</td><td></td></tr><tr><td>microcentrifuge tube</td><td>Sarstedt</td><td>72690</td><td></td></tr><tr><td>Mini shaker</td><td>VWR</td><td>12620-940</td><td></td></tr><tr><td>mirVana miRNA mimic, hsa-miR199a-3p</td><td>Ambion/Thermo Fischer Scientific</td><td>4464066</td><td></td></tr><tr><td>Biopsy Mold</td><td>Sakura Finetek/ VWR</td><td>4565</td><td></td></tr><tr><td>M-slide 8-well ibiTreat</td><td>ibidi</td><td>80826</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S9888</td><td></td></tr><tr><td>NaOH</td><td>Merck Millipore</td><td>567530</td><td></td></tr><tr><td>negative control(scrambled RNA)</td><td>Ambion/Thermo Fischer Scientific</td><td>AM4611</td><td></td></tr><tr><td>Neonatal Heart Dissociation Kit</td><td>Miltenyi Biotech, Bergisch Gladbach</td><td>130-098-373</td><td></td></tr><tr><td>NIS Elements AR 4.12.01-4.30.02-64bit</td><td>Nikoninstruments, D&uuml;sseldorf</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Non essential amino acids, NEAA</td><td>Gibco/Life Technologies, Darmstad</td><td>11140-035</td><td></td></tr><tr><td>Opti-MEM, Reduced Serum Medium</td><td>Gibco</td><td>51985-026</td><td></td></tr><tr><td>P21-siRNA</td><td>Ambion/Thermo Fischer Scientific</td><td>4390771</td><td></td></tr><tr><td>P27-siRNA</td><td>Ambion/Thermo Fischer Scientific</td><td>4390771</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin/Streptomycin</td><td>Gibco/Life Technologies, Darmstadt</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>Phosphate buffered saline (PBS)</td><td>Sigma-Aldrich, Steinheim</td><td>14190-094</td><td></td></tr><tr><td>Polyvinyl alcohol mounting medium with DABCO&reg;, antifading</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>10981</td><td></td></tr><tr><td>RNase A</td><td>Qiagen</td><td>1007885</td><td></td></tr><tr><td>RNaseZap</td><td>Invitrogen/Life Technologies, Darmstadt</td><td>AM9780</td><td></td></tr><tr><td>sample containers</td><td>Vitlab</td><td>80731</td><td></td></tr><tr><td>Serological pipette</td><td>Greiner</td><td>607180</td><td></td></tr><tr><td>software NIS Elements</td><td>Nikon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sucrose</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S0389</td><td></td></tr><tr><td>Tissue-Tek O.C.T. Compound</td><td>Sakura Finetek/ VWR</td><td>25608-930</td><td></td></tr><tr><td>ToPro3 iodide (642/661)</td><td>Molecular probes/ThermoFisher Scientific</td><td>T3605</td><td></td></tr><tr><td>Tris</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T1503</td><td></td></tr><tr><td>Triton X</td><td>Fluka</td><td>93418</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Fluka</td><td>93418</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T1426</td><td></td></tr><tr><td>Wheat germ agglutinin (WGA) Fluorescein labeled</td><td>Vector Laboratories</td><td>VEC-FL-1021-5</td><td></td></tr><tr><td>&alpha;-actinin antibody</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A7811</td><td></td></tr><tr><td>&beta;-Mercaptoethanol</td><td>Sigma-Aldrich, Steinheim</td><td>M3148</td><td></td></tr></tbody></table>

visualisatie van celcyclus variaties en bepaling van nucleatie in postnatale cardiomyocytes

Visualization of Cell Cycle Variations and Determination of Nucleation in Postnatal Cardiomyocytes

Cardiomyocyten zijn vatbaar voor variaties in de celcyclus, zoals endoreduplicatie (doorgaande rondes van DNA-synthese zonder karyokinese en cytokinese) en acytokinische mitose (karyokinese maar geen cytokinese). Dergelijke atypische celcyclusvariaties resulteren in polyploïde en multinucleaire cellen in plaats van celdeling. Daarom is het van cruciaal belang om cardiomyocyt-kernen, het aantal kernen per cel en hun celcyclusstatus correct te identificeren om cardiale vernieuwing en regeneratie te bepalen. Dit geldt vooral voor het gebruik van nucleaire markeringen voor het identificeren van celcyclusactiviteit, zoals thymidine-analogen Ki-67, PCNA of pHH3. Hier presenteren we methoden voor het herkennen van cardiomyocyten en hun nucleaire status en voor het bepalen van hun celcyclusactiviteit. We gebruiken twee gepubliceerde transgene systemen: de Myh6-H2B-mCh transgene muislijn, voor de ondubbelzinnige identificatie van cardiomyocyt-kernen, en de CAG-eGFP-anillin muislijn, voor het onderscheiden van celdeling van celcyclusvariaties. Gecombineerd vergemakkelijken deze twee systemen het onderzoek naar cardiale regeneratie en plasticiteit.

Om de effecten van siRNAs / miRNAs de celcyclusactiviteit postnatale cardiomyocyten in vitro cardiomyocyten van dubbel transgene Myh6-H2B-MCH / CAG-eGFP-anillin muizen te analyseren werden geïsoleerd op postnatale dag 3 (P3) en getransfecteerd met celcyclus activiteit-inducerende miR199 5, siRNA p27 en siRNA Fzr1. In vergelijking met de negatieve controle (Figuur 1A), de Foto miR199- (figuur 1B) en p27- siRNA (fig...

Om celdeling te onderscheiden van variaties in de celcyclus in cardiomyocyten, presenteren we protocollen met behulp van twee transgene muislijnen: Myh6-H2B-mCh transgene muizen, voor de ondubbelzinnige identificatie van cardiomyocytenkernen, en CAG-eGFP-anillin muizen, voor het onderscheid tussen celdeling en variaties in de celcyclus.

Visualisatie van celcyclus Variaties en Bepaling van Nucleatie in Postnatale Cardiomyocytes

Cardiomyocytes are prone to variations of the cell cycle, such as endoreduplication (continuing rounds of DNA synthesis without karyokinesis and ...

Het algemene doel van deze procedure is om de celcyclusactiviteit in postnatale cardiomyocyten te visualiseren en hun nucleariteit te bepalen. Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van kernvragen in het veld van hartregeneratie, zoals of een cardiomyocyt daadwerkelijk deelt, of dat deze enkel zijn ploidie verhoogt of meerkernig wordt. De belangrijkste voordelen van deze techniek zijn dat de M-fase van de celcyclus met een hoge spatiotemporele resolutie kan worden gevisualiseerd en dat cardiomyocytenkernen via fluorescentie kunnen worden geïdentificeerd.Patricia Freitag, een technicus uit ons laboratorium, zal de procedure demonstreren. Indien niet-homozygote fokparen worden gebruikt, identificeer dan eerst de transgene harten via fluorescentiemicroscopie om de expressie van EGFP analine en H2B-mCherry te controleren. EGFP-analine nucleaire signalen kunnen het eenvoudigst worden gedetecteerd aan de randen van de atria door door de weefsellagen heen te focussen.Om de cardiomyocyten te isoleren, plaatst u het juiste aantal harten in reactiebuisjes van 1,5 milliliter die één milliliter enzymmix uit een neonatale hartdissociatiekit bevatten en knipt u de harten met een schaar in

visualization-cell-cycle-variations-determination-nucleation

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Ontwikkelingsbiologie

We hebben een protocol voor de inductie van cardioblasts rechtstreeks van pluripotente menselijke embryonale stamcellen gehouden onder bepaalde voorwaarden met kleine moleculen, die afleiding van een groot aanbod van menselijke voorouders hart-en functionele cardiomyocyten voor hart-en reparatie mogelijk maakt.

Efficiënte Afleiding van de Mens Cardiac precursoren en cardiomyocyten uit pluripotente menselijke embryonale stamcellen met op kleine moleculen Inductie

Cardiale kernen worden geïsoleerd via dichtheid sedimentatie en immunolabeled met antilichamen tegen pericentriolar materiaal 1 (PCM-1) te identificeren en cardiomyocyten kernen sorteren op flowcytometrie.

Isolatie van cardiomyocyten Kernen van Post-mortem weefsel

Het artikel beschrijft de gedetailleerde methodologie efficiënt onderscheiden humane pluripotente stamcellen naar cardiomyocyten door het selectief moduleren van de Wnt route, gevolgd door flow cytometrie analyse van referentiemarkeringen aan homogeniteit en identiteit van de bevolking beoordelen.

High Efficiency differentiatie van humane pluripotente stamcellen naar cardiomyocyten en karakterisering door flowcytometrie

Mutaties die leiden tot aangeboren hartafwijkingen profiteren van in vivo onderzoek van de hartstructuur tijdens de ontwikkeling, maar hoogwaardige structurele studies in het embryonale muishart zijn technisch uitdagend. Hier presenteren we een robuuste immunofluorescentie- en beeldanalysemethode om cardiomyocyt-specifieke structuren in het zich ontwikkelende muishart te beoordelen.

Analyse van Cardiomyocyte Development behulp Immuunfluorescentie in Embryonale Muis Hart

Het kwantificeren van cardiomyocytenvernieuwing is een uitdaging. Het hier beschreven protocol levert een belangrijke bijdrage aan deze uitdaging door nauwkeurige en gevoelige kwantificering van neo-cardiomyocytkerngeneratie en kern-ploïdie mogelijk te maken.

Gelijktijdig Beoordeling van Cardiomyocyte DNA Synthese en Ploïdie: een methode om Assist Kwantificering van Cardiomyocyte Regeneration en Omzet

We beschrijven een protocol voor het volumetrisch afbeelden van met fluorescente eiwitten gelabelde cellen diep in intacte embryonale en postnatale harten. Door gebruik te maken van weefselklaringsmethoden in combinatie met gehele montagekleuring, kunnen enkele met fluorescente eiwitten gelabelde cellen in een embryonaal of postnataal hart duidelijk en nauwkeurig worden afgebeeld.

Imaging Ontruimde embryonale en postnatale Hearts bij Single-cell Resolution

Gebruikelijke werkwijzen tot inleiding suspensie geaggregeerde basis cardiale differentiatie van humane pluripotente stamcellen (hPSCs) geplaagd cultuur heterogeniteit met betrekking tot de totale grootte en vorm. Hier beschrijven we een robuuste methode voor cardiale differentiatie gebruik microputjes genereren maat gecontroleerde HPSC aggregaten gekweekt onder omstandigheden cardiale bevorderen.

Aggregate Size Optimization in Microputjes voor Suspension basis Cardiac Differentiatie van menselijke pluripotente stamcellen

Dit manuscript beschrijft een stapsgewijs protocol voor het genereren en kwantificeren van diverse geherprogrammeerde hartsubtypen met behulp van een retrovirus-gemedieerde levering van Gata4, Hand2, Mef2c en Tbx5.

Het beoordelen van Cardiomyocyte Subtypen Na transcriptie Factor-gemedieerde herprogrammeren van muis embryonale fibroblasten

Hier beschrijven en valideren we een methode voor het consequent genereren van robuuste menselijke geïnduceerde pluripotente stamcel-afgeleide cardio myocytes en karakteriseren hun functie. Deze technieken kunnen helpen bij het ontwikkelen van mechanistisch inzicht in signalering trajecten, bieden een platform voor grootschalige drug screening, en betrouwbaar model cardiale ziekten.

Generatie van ventriculaire-achtige HiPSC-afgeleide cardio myocyten en hoogwaardige celpreparaten voor de karakterisering van calcium behandeling

Het doel van dit werk is het ontwikkelen van een methode om cardiomyocyten reproduceerbaar te isoleren van het volwassen hart en het DNA-gehalte en nucleatie te meten.

Isolatie van Cardiomyocyten uit vaste harten voor immunocytochemie en ploidy-analyse

Door de mens geïnduceerde pluripotente stamcel-afgeleide cardiomyocyten (hiPSC-CMs) bieden een alternatief voor het gebruik van dieren voor preklinische cardiotoxiciteitsscreening. Een beperking voor de wijdverbreide toepassing van hiPSC-CMs in preklinische toxiciteitsscreening is het onrijpe, foetale fenotype van de cellen. Hier worden protocollen gepresenteerd voor robuuste en snelle rijping van hiPSC-CMs.

High-throughput cardiotoxiciteitsscreening met behulp van volwassen door de mens geïnduceerde pluripotente stamcel-afgeleide cardiomyocytenmonolagen

Leer celcyclusvisualisatie in postnatale cardiomyocyten met behulp van transgene muizen en fluorescentiemicroscopie. Deze methode onderscheidt celdeling van ploïdieveranderingen voor hartregeneratieonderzoek.

Visualisatie van celcyclus Variaties en Bepaling van Nucleatie in Postnatale Cardiomyocytes

Meer video's verkennen