24 april 2017
Behavioral testen is de gouden standaard voor het bepalen van de resultaten na hersenletsel, en kan de aanwezigheid van ontwikkelingsstoornissen bij zuigelingen en kinderen te identificeren. Neurologische reflexen zijn een vroege indicator van deze afwijkingen. Een groot aantal eenvoudig te realiseren ontwikkelingsstoornissen reflex testen in de neonatale knaagdieren werden ontwikkeld en beschreven.
Het algemene doel van deze reflexmethodologie voor neonatale ratten is om te leren hoe deze taken snel, nauwkeurig en vergelijkbaar uit te voeren. Deze methode kan cruciale vragen beantwoorden op het gebied van ontwikkelingsstoornissen van zenuwen, zoals hersenverlamming. Het grote voordeel van deze techniek is dat het een manier biedt om vroege ontwikkelingsreflexen bij pasgeboren ratten te testen.
Net als mensen hebben pasgeboren knaagdieren vroege ontwikkelingsreflexen die een venster bieden naar latere ontwikkeling. Personen die nieuw zijn met deze methode zullen worstelen omdat de reflexen snel optreden en moeilijk te scoren zijn. Het is belangrijk om zo consistent mogelijk te zijn.
De implicaties van deze techniek strekken zich uit tot de therapie en diagnose van hersenverlamming en ontwikkelingsstoornissen. De bepaling van reflexgedrag is de gouden standaard voor de vaststelling en de effectiviteit van therapeutische interventies. Visuele demonstratie van deze methode is cruciaal omdat de stappen moeilijk te leren zijn door middel van geschreven woorden.
Om te beginnen, laat de ratten acclimatiseren aan de omgeving en aan menselijke hantering zoals beschreven in het bijbehorende protocol. Eenmaal aangepast, laat de ratten paren om een nestje pups voor het testen te produceren. Vanaf postnatale dag drie, verplaats de pups naar een rustige kamer op een vast tijdstip elke dag.
Laat ze minimaal een uur acclimatiseren voordat u een reeks neurodevelopmentale reflextesten uitvoert. Zet in de kamer een verwarmingslamp of verwarmingskussen op om de lichaamstemperatuur van de pups op 36,5 graden Celsius te houden. Noteer ook het gewicht van de pups elke dag.
Stel vervolgens een videocamera in met een sluitertijd van minimaal 1/1000ste van een seconde om de reflextesten frame per frame te analyseren. Plaats de camera zodat deze direct boven of naast de rattenpup en de testmaterialen staat tijdens elke test. Voer voor elk van de volgende tests de test elke dag uit totdat de pup in staat is om de taak twee opeenvolgende dagen uit te voeren.
De datum van de eerste keer is de datum die moet worden geregistreerd voor gegevenskwantificering. Vanaf postnatale dag drie, voer de voorpootgreepreflextest uit. Voor deze test plaatst u een stompe staaf tegen de palm van elke voorpoot van de pup, één voor één, en oefent u handmatig lichte druk uit.
De druk moet de voorpoot licht verplaatsen om ervoor te zorgen dat contact wordt gemaakt en de pups de staaf kunnen voelen. Grijpen zal verschijnen als flexie van alle vingers rond de staaf. Succesvolle verwerving van deze reflex treedt op wanneer beide voorpoten de staaf twee dagen achter elkaar grijpen.
Plaats vervolgens een stompe staaf tegen de zool van elke achterpoot en oefen handmatig lichte druk uit om de achterpootgreepreflextest uit te voeren. De lichte druk moet de achterpoot licht verplaatsen om ervoor te zorgen dat contact wordt gemaakt en de pups de staaf kunnen voelen. Succesvol grijpen van de staaf verschijnt als flexie van de tenen rond de staaf.
Verwerving van deze reflex treedt op wanneer beide achterpoten de staaf twee dagen achter elkaar grijpen. Ook vanaf postnatale dag drie, voer de rechtingreflextest uit. Voor deze test houdt u de pup stevig in een rugligging, zodat alle vier de poten rechtop staan.
Laat de pup los en start onmiddellijk de timer. Rechting wordt bereikt wanneer de pup in staat is om zich om te draaien of over alle vier de poten heen te rollen en elke poot loodrecht op het lichaam staat. Geef elke pup maximaal 15 seconden om dit doel te bereiken.
Vanaf postnatale dag vier, voer de achterpootplaatsreflextest uit. Voor deze test houdt u de pup verticaal in de lucht bij de romp. Strijk zachtjes over de rugzijde van de achterpoot met een stomp oppervlak, zoals de rand van een tafel.
Een correcte plaatsreflex is wanneer de rattenpup de gestimuleerde achterpoot intrekt, gevolgd door plaatsing van de achterpoot op dat oppervlak. Ook vanaf postnatale dag vier, voer de klifvermijdingstest uit. Voor deze test plaatst u de rattenpup aan de rand van een vlakke oppervlakte, zodat de voorpoten en snuitje van de pup over de rand hangen.
Het juiste resultaat is een beschermende reactie waarbij de rattenpup zich afkeert van de rand van het klif. Begin de evaluatie van het looppatroon op postnatale dag zes. Voor deze test plaatst u de pups in het centrum van een cirkel met een diameter van 15 centimeter en laat u de pup 30 seconden om de cirkel te verlaten.
Een succesvol looppatroon wordt uitgevoerd wanneer de rattenpup in staat is om beide voorpoten buiten de cirkel te bewegen in minder dan 30 seconden. Begin de analyse van de auditieve schrikreactie op postnatale dag 10. Hiervoor is iets nodig, zoals een belletje, dat in staat is om een luide klap te produceren.
Plaats de bel direct boven de pup. Laat de bel rinkelen en beoordeel vervolgens of er een schrikreactie aanwezig is. Een positieve schrikreactie wordt waargenomen wanneer de pup een rukbeweging weg van het geluid vertoont.
Vanaf postnatale dag 12, plaatst u de pups op een niet-gladde open oppervlakte en observeert u de houding die de pup heeft tijdens het bewegen. Een onrijpe houding wordt weerspiegeld door het slepen van de buik tijdens het bewegen, en loodrecht wijzen van zowel de voorpoten als de achterpoten ten opzichte van het lichaam. Een volwassen houding wordt verworven wanneer de pup de buik van het oppervlak kan tillen en zowel de voorpoten als de achterpoten recht of evenwijdig aan het lichaam staan gericht tijdens het bewegen.
Ook vanaf postnatale dag 12, begint u met het observeren van de oogleden van de pup. Noteer de dag dat beide oogleden openen. Op postnatale dag 14, begint u met de versnelde rechtingtest.
Plaats voor deze test de pup in een rugligging op 30,48 centimeter boven een schuimlandingsmat. Laat de pup vallen en observeer zijn vermogen om zichzelf te rechtzetten. Goede rechting verwijst naar wanneer de pup in staat is om zich om te draaien naar de buikligging en op zijn
Bekijk het volledige transcript en krijg toegang tot duizenden wetenschappelijke video's
Dit artikel presenteert een methodologie voor het beoordelen van vroege ontwikkelingsreflexen bij pasgeboren ratten, wat inzicht kan geven in potentiële ontwikkelingsstoornissen. De techniek is erop gericht om nauwkeurige en consistente tests van deze reflexen te faciliteren, welke cruciaal zijn voor het begrijpen van problemen bij de ontwikkeling van de zenuwen.
Het testen van neuro-ontwikkelingsreflexen bij pasgeboren ratpups biedt een vroege biomarker voor het detecteren van hersenletsel en het evalueren van therapeutische interventies in preklinische modellen. Deze aanpak ondersteunt mechanische risicoreductie door gedragsfenotypes te koppelen aan neuro-ontwikkelingsuitkomsten, wat voorspellend vertrouwen geeft bij de validatie van targets voor aandoeningen van het centrale zenuwstelsel. De methodologie verbetert de translationele continuïteit van de ontdekkingsfase tot de preklinische stadia door kwantificeerbare, reproduceerbare reflexmetrieken aan te bieden.
De methode is geïntegreerd in het ontdekkingscontinuüm, van vroege biologie tot lead-identificatie, en biedt gedragsfenotypering die moleculaire en histologische beoordelingen in de ontwikkeling van geneesmiddelen voor het CZS aanvult.