Name: Muizen-lymfocyt Labeling door 64 Cu-Antibody Receptor targeting voor In Vivo Celverkeer PET / CT (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-04-29T14:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 34 s
Description: Leer muizenlymfocyten labelen met 64Cu-gemodificeerde antilichamen voor in vivo PET/CT-beeldvorming. Deze methode volgt celmigratie tot 48 uur met hoge contrast en minimale schade, ideaal voor ontstekings- en kankeronderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De auteurs danken dr Julia Mannheim, Walter Ehrlichmann, Ramona Stumm, Funda Cay, Daniel Bukala, Maren Harant evenals Natalie Altmeyer voor de steun tijdens de experimenten en data-analyse. Dit werk werd ondersteund door de Werner Siemens-Stichting, de DFG door de SFB685 (project B6) en Fortune (2309-0-0).

<ol><li>Cerri, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracarotid+Infusion+of+Mesenchymal+Stem+Cells+in+an+Animal+Model+of+Parkinson%27s+Disease%2C+Focusing+on+Cell+Distribution+and+Neuroprotective+and+Behavioral+Effects%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Trans+Med%22%5BJournal%5D)">Intracarotid Infusion of Mesenchymal Stem Cells in an Animal Model of Parkinson's Disease, Focusing on Cell Distribution and Neuroprotective and Behavioral Effects.</a> Stem Cells Trans Med. 4 (9), 1073-1085 (2015).</li>
<li>Hasenbach, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+the+glioma+tropism+of+bone+marrow-derived+progenitor+cells+by+2-photon+laser+scanning+microscopy+and+positron+emission+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Neuro+Oncol%22%5BJournal%5D)">Monitoring the glioma tropism of bone marrow-derived progenitor cells by 2-photon laser scanning microscopy and positron emission tomography.</a> Neuro Oncol. 14 (4), 471-481 (2012).</li>
<li>Sood, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biodistribution+of+18F-FDG-Labeled+Autologous+Bone+Marrow+%E2%80%93+Derived+Stem+Cells+in+Patients+With+Type+2+Diabetes+Mellitus%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Nucl+Med%22%5BJournal%5D)">Biodistribution of 18F-FDG-Labeled Autologous Bone Marrow – Derived Stem Cells in Patients With Type 2 Diabetes Mellitus.</a> Clin Nucl Med. 40 (9), 697-700 (2015).</li>
<li>Perez-Diez, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD4+cells+can+be+more+efficient+at+tumor+rejection+than+CD8+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">CD4 cells can be more efficient at tumor rejection than CD8 cells.</a> Blood. 109 (12), 5346-5354 (2007).</li>
<li>Muranski, P., Restifo, N. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adoptive+immunotherapy+of+cancer+using+CD4%2B+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Adoptive immunotherapy of cancer using CD4+ T cells.</a> Curr. Opin. Immunol. 21 (2), 200-208 (2009).</li>
<li>Braumuller, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T-helper-1-cell+cytokines+drive+cancer+into+senescence%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">T-helper-1-cell cytokines drive cancer into senescence.</a> Nature. 494 (7437), 361-365 (2013).</li>
<li>Kochenderfer, J. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Eradication+of+B-lineage+cells+and+regression+of+lymphoma+in+a+patient+treated+with+autologous+T+cells+genetically+engineered+to+recognize+CD19%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Eradication of B-lineage cells and regression of lymphoma in a patient treated with autologous T cells genetically engineered to recognize CD19.</a> Blood. 116 (20), 4099-4102 (2010).</li>
<li>Cherry, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fundamentals+of+Positron+Emission+Tomography+and+Applications+in+Preclinical+Drug+Development%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Fundamentals of Positron Emission Tomography and Applications in Preclinical Drug Development.</a> J. Clin. Pharmacol. 41 (5), 482-491 (2001).</li>
<li>Tavaré, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Effective+Immuno-PET+Imaging+Method+to+Monitor+CD8-Dependent+Responses+to+Immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">An Effective Immuno-PET Imaging Method to Monitor CD8-Dependent Responses to Immunotherapy.</a> Cancer Res. 76 (1), 73-82 (2016).</li>
<li>Tavaré, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineered+antibody+fragments+for+immuno-PET+imaging+of+endogenous+CD8%2B+T+cells+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Engineered antibody fragments for immuno-PET imaging of endogenous CD8+ T cells in vivo.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 111 (3), 1108-1113 (2014).</li>
<li>Dobrenkov, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+the+Efficacy+of+Adoptively+Transferred+Prostate+Cancer-Targeted+Human+T+Lymphocytes+with+PET+and+Bioluminescence+Imaging%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nucl+Med%22%5BJournal%5D)">Monitoring the Efficacy of Adoptively Transferred Prostate Cancer-Targeted Human T Lymphocytes with PET and Bioluminescence Imaging.</a> J Nucl Med. 49 (7), 1162-1170 (2008).</li>
<li>Rini, J. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PET+with+FDG-labeled+Leukocytes+versus+Scintigraphy+with+111In-Oxine-labeled+Leukocytes+for+Detection+of+Infection%5BTitle%5D)+AND+%22Radiology%22%5BJournal%5D)">PET with FDG-labeled Leukocytes versus Scintigraphy with 111In-Oxine-labeled Leukocytes for Detection of Infection.</a> Radiology. 238 (3), 978-987 (2006).</li>
<li>Ritchie, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+tracking+of+macrophage+activated+killer+cells+to+sites+of+metastatic+ovarian+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Immunol.+Immunother%22%5BJournal%5D)">In vivo tracking of macrophage activated killer cells to sites of metastatic ovarian carcinoma.</a> Cancer Immunol. Immunother. 56 (2), 155-163 (2006).</li>
<li>Adonai, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ex+vivo+cell+labeling+with+64Cu-pyruvaldehyde-bis%28N4-methylthiosemicarbazone%29+for+imaging+cell+trafficking+in+mice+with+positron-emission+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Ex vivo cell labeling with 64Cu-pyruvaldehyde-bis(N4-methylthiosemicarbazone) for imaging cell trafficking in mice with positron-emission tomography.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99 (5), 3030-3035 (2002).</li>
<li>Huang, J., Lee, C. C. I., Sutcliffe, J. L., Cherry, S. R., Tarantal, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radiolabeling+Rhesus+Monkey+CD34%2B+Hematopoietic+and+Mesenchymal+Stem+Cells+with+64Cu-Pyruvaldehyde-Bis%28N4-Methylthiosemicarbazone%29+for+MicroPET+Imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Imaging%22%5BJournal%5D)">Radiolabeling Rhesus Monkey CD34+ Hematopoietic and Mesenchymal Stem Cells with 64Cu-Pyruvaldehyde-Bis(N4-Methylthiosemicarbazone) for MicroPET Imaging.</a> Mol. Imaging. 7 (1), (2008).</li>
<li>Griessinger, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+Vivo+Tracking+of+Th1+Cells+by+PET+Reveals+Quantitative+and+Temporal+Distribution+and+Specific+Homing+in+Lymphatic+Tissue%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nucl+Med%22%5BJournal%5D)">In Vivo Tracking of Th1 Cells by PET Reveals Quantitative and Temporal Distribution and Specific Homing in Lymphatic Tissue.</a> J Nucl Med. 55 (2), 301-307 (2014).</li>
<li>Griessinger, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((64Cu+antibody-targeting+of+the+T-cell+receptor+and+subsequent+internalization+enables+in+vivo+tracking+of+lymphocytes+by+PET%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">64Cu antibody-targeting of the T-cell receptor and subsequent internalization enables in vivo tracking of lymphocytes by PET.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 112 (4), 1161-1166 (2015).</li>
<li>McCarthy, D. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+production+of+high+specific+activity+64Cu+using+a+biomedical+cyclotron%5BTitle%5D)+AND+%22Nucl.+Med.+Biol%22%5BJournal%5D)">Efficient production of high specific activity 64Cu using a biomedical cyclotron.</a> Nucl. Med. Biol. 24 (1), 35-43 (1997).</li>
<li>Kalkhof, S., Sinz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chances+and+pitfalls+of+chemical+cross-linking+with+amine-reactive+N-hydroxysuccinimide+esters%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Bioanal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Chances and pitfalls of chemical cross-linking with amine-reactive N-hydroxysuccinimide esters.</a> Anal. Bioanal. Chem. 392 (1), 305-312 (2008).</li>
<li>Bedoya, S. K., Wilson, T. D., Collins, E. L., Lau, K., Larkin Iii,, J, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+Th17+Differentiation+of+Naive+CD4+T+Lymphocytes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Isolation and Th17 Differentiation of Naive CD4 T Lymphocytes.</a> J Vis Exp. (79), e50765(2013).</li>
<li>Flaherty, S., Reynolds, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+Naive+CD4%2B+T+Cell+Isolation+and+In+vitro+Differentiation+into+T+Cell+Subsets%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Mouse Naive CD4+ T Cell Isolation and In vitro Differentiation into T Cell Subsets.</a> J Vis Exp. (98), e52739(2015).</li>
<li>Judenhofer, M., Wiehr, S., Kukuk, D., Fischer, K., Pichler, B. Chapter 363. <a target="_blank" href="http://www.springer.com/us/book/9783642129445">Small Animal Imaging. Basics and Practical Guide</a>. , Springer. 363-370 (2011).</li>
<li>Phelps, M. E. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPhelps%2C+ME+%22PET.+Molecular+Imaging+and+Its+Biological+Applications%22">PET. Molecular Imaging and Its Biological Applications</a>. , Springer-Verlag. 93-101 (2004).</li>
<li>Wu, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibodies+and+Antimatter%3A+The+Resurgence+of+Immuno-PET%5BTitle%5D)+AND+%22JNM%22%5BJournal%5D)">Antibodies and Antimatter: The Resurgence of Immuno-PET.</a> JNM. 50 (1), 2-5 (2009).</li>
<li>Lewis, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+evaluation+of+pretargeted+64Cu+for+tumor+imaging+and+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nucl+Med%22%5BJournal%5D)">In vivo evaluation of pretargeted 64Cu for tumor imaging and therapy.</a> J Nucl Med. 44 (8), 1284-1292 (2003).</li>
<li>Boswell, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+in+vivo+stability+of+copper-64-labeled+cross-bridged+and+conventional+tetraazamacrocyclic+complexes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Med+Chem%22%5BJournal%5D)">Comparative in vivo stability of copper-64-labeled cross-bridged and conventional tetraazamacrocyclic complexes.</a> J Med Chem. 47 (6), 1465-1474 (2004).</li>
<li>Ghosh, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+DOTA+and+NODAGA+as+chelators+for+%2864%29Cu-labeled+immunoconjugates%5BTitle%5D)+AND+%22Nucl+Med+Biol%22%5BJournal%5D)">Comparison of DOTA and NODAGA as chelators for (64)Cu-labeled immunoconjugates.</a> Nucl Med Biol. 42 (2), 177-183 (2015).</li>
<li>Johnson, T. E., Birky, B. K. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aJohnson%2C+TE+%22Health+Physics+and+Radiological+Health%22">Health Physics and Radiological Health</a>. , 4th ed, Lippincott Williams & Wilkins. (2011).</li>
<li>Helmchen, F., Denk, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deep+tissue+two-photon+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Meth%22%5BJournal%5D)">Deep tissue two-photon microscopy.</a> Nat Meth. 2 (12), 932-940 (2005).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Dit protocol geeft een betrouwbare en eenvoudige methode om stabiel radioactief cellen in vivo volgen van PET. Gebruik makend van deze methode, cova-TH1 cellen geïsoleerd en geëxpandeerd in vitro uit donor muizen kon worden radiogelabeld met 64 Cu-DOTA-KJ1-26-mAb en de homing werd gevolgd aan de longen perithymic LN als gebieden van COVA presentatie in een Cova-geïnduceerde acute luchtweg DTHR. De modificatie van het mAb met de chelator vereist een snelle en effi...

Niet-invasieve cell tracking is een veelzijdige tool om celfunctie, migratie en homing in vivo te controleren. Recente cell tracking studies zijn gericht op mesenchymale 1, 2 of beenmerg afgeleide stamcellen 3 in het kader van de regeneratieve geneeskunde, autologe perifere witte bloedcellen in ontsteking of T-lymfocyten in adoptieve celtherapie tegen kanker 3, 4. De opheldering van de sites van de actie en de onderliggende biologische principes van cellen gebaseerde therapieën is van enorm belang. CD8 + cytotoxische T-lymfocyten, genetisch gemanipuleerd chimeer antigen receptor (CAR) T-cellen of tumor infiltrerende lymfocyten (TIL&#39;s) werden algemeen beschouwd als de gouden standaard. Echter, tumor geassocieerde antigen-specifieke TH1 cellen bewezen een effectief alternatief behandelingsoptie 4, zijn &lt;/ sup&gt; 5, 6, 7. Als belangrijkste spelers in ontsteking, orgaan-specifieke auto-immuunziekten (zoals reumatoïde artritis of astma), en cellen van grote belangstelling voor immunotherapie van kanker, is het belangrijk om de tijdelijke distributie en homing patronen van Th1-cellen te karakteriseren. Invasieve in vivo imaging PET weer kwantitatief, uiterst gevoelige methode 8 celmigratie patronen onderzoeken in vivo homing en het plaatsen van T-cel responsen tijdens actie en ontsteking, allergieën, infecties of tumor-afstotende 9, 10, 11. Klinisch 111In-oxine wordt gebruikt om leukocyten scintigrafie voor het onderscheiden van ontsteking en infectie 12, terwijl 2-deoxy-2- (18F) fluor-D-glucose (18F-FDG) wordt algemeen gebruikt voor cellulaire tracking studies PET 3, 13. Een belangrijk nadeel van deze PET tracer, echter de korte halfwaardetijd van de radionuclide 18F bij 109,7 min en de lage intracellulaire stabiliteit die belemmert beeldvorming op latere tijdstippen na adoptieve celoverdracht. Voor langere termijn in vivo cell tracking studies van PET, maar instabiel in de cellen, wordt 64 Cu-PTSM vaak gebruikt om niet-specifiek label cellen 14, 15 met minimale nadelige effecten op T cellevensvatbaarheid en functie 16. Dit protocol beschrijft een werkwijze om nadelige effecten op cellevensvatbaarheid en functie in een T-celreceptor (TCR) -specifieke radiogelabelde mAb verder te verminderen. Ten eerste, de productie van radio-isotopen 64 Cu, de vervoeging van het mAb KJ1-26 met the chelator DOTA en de daaropvolgende 64 Cu-radioactief labelen getoond. In een tweede stap, de isolatie en expansie van cova-TH1 cellen van DO 11.10 donormuizen en het radioactief merken met 64 Cu-loaded DOTA-geconjugeerde mAb KJ1-26 (64 Cu-DOTA-KJ1-26) worden beschreven. De beoordeling van opnamewaarden en efflux van radioactiviteit met een dosiskalibrator en door y-telling, respectievelijk, en de evaluatie van de effecten van 64 Cu-radioactief merken op cellevensvatbaarheid door trypan blauw exclusie en functionaliteit met IFN-y ELISA worden . Voor niet-invasief in vivo cell tracking, het uitlokken van een muismodel van cova-geïnduceerde acute luchtwegen DTHR en beeldacquisitie PET / CT na adoptieve celoverdracht beschreven. Bovendien kan deze benadering worden labeling doorgezet naar verschillende ziektemodellen murine T-cellen met verschillende TCR of algemene cellen plaats met membraangebonden receptoren of expressie markers onderliggende continu membraan 17 pendelen.

<table><tbody><tr><td>HCl, Suprapur</td><td>Merck, Darmstadt, Germany</td><td>1.00318</td><td>64Cu productie</td></tr><tr><td>Methanol, Suprapur</td><td>Merck, Darmstadt, Germany</td><td>1.06007</td><td>64Cu productie</td></tr><tr><td>Isopropanol, Suprapur</td><td>Merck, Darmstadt, Germany</td><td>1.0104</td><td>64Cu productie</td></tr><tr><td>Pt/Ir (90/10) plate</td><td>&Ouml;gussa</td><td>Op maat gemaakt</td><td>64Cu productie</td></tr><tr><td>PEEK chamber</td><td>WKL</td><td>Op maat gemaakt</td><td>64Cu productie</td></tr><tr><td>64Ni</td><td>Chemotrade</td><td></td><td>64Cu productie</td></tr><tr><td>Polygram SIL G/UV 254 plate</td><td>Macherey-Nagel</td><td>805021</td><td>64Cu productie</td></tr><tr><td>Ion exchange column</td><td>BioRad</td><td>AG1-X8</td><td>64Cu productie</td></tr><tr><td>Solid state target system for PETtrace</td><td>WKL</td><td>op maat gemaakt</td><td>64Cu productie</td></tr><tr><td>64Cu work-up module</td><td>WKL</td><td>op maat gemaakt</td><td>64Cu productie</td></tr><tr><td>Dose calibrator</td><td>Capintec</td><td>CRC-25R</td><td></td></tr><tr><td>PETtrace cyclotron</td><td>General Electric Medical Systems</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DOTA-NHS</td><td>Macrocyclics</td><td>B-280</td><td>DOTA-conjugatie</td></tr><tr><td>Anti-cOVA-TCR antibody (KJ1-26)</td><td></td><td>Geïsoleerd uit hybridoma celcultuur</td><td>DOTA-conjugatie</td></tr><tr><td>Na2HPO4</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>71633</td><td>DOTA-conjugatie</td></tr><tr><td>H+ Chelex 100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C7901</td><td>DOTA-conjugatie</td></tr><tr><td>Amicon Ultra-15 filter unit</td><td>Merck Millipore</td><td>UFC910008</td><td>DOTA-conjugatie</td></tr><tr><td>Rotipuran ultrapure water</td><td>Carl Roth</td><td>HN68.3</td><td>DOTA-conjugatie</td></tr><tr><td>Ammonium acetate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>32301</td><td>DOTA-conjugatie</td></tr><tr><td>PBS</td><td>University Tuebingen</td><td></td><td>DOTA-conjugatie</td></tr><tr><td>Micro Bio-spin P-6 column</td><td>Bio-Rad Laboratories</td><td>7326221</td><td>DOTA-conjugatie</td></tr><tr><td>Sodium citrate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>71497</td><td>DOTA-conjugatie</td></tr><tr><td>Cyclone Plus PhosphorImager&nbsp;</td><td>Perkin-Elmer</td><td>L2250116</td><td>DOTA-conjugatie</td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Merck Millipore</td><td>102568</td><td>ingrediënt voor T-celmedium&nbsp;</td></tr><tr><td>FCS</td><td>Merck Millipore</td><td>S0115/1004B</td><td>ingrediënt voor T-celmedium&nbsp;</td></tr><tr><td>Sodium pyruvate</td><td>Merck Millipore</td><td>L0473</td><td>ingrediënt voor T-celmedium&nbsp;</td></tr><tr><td>MEM-amino acids</td><td>Merck Millipore</td><td>K0293</td><td>ingrediënt voor T-celmedium&nbsp;</td></tr><tr><td>HEPES&nbsp;</td><td>Merck Millipore</td><td>L 1613</td><td>ingrediënt voor T-celmedium&nbsp;</td></tr><tr><td>&nbsp;Penicillin/Streptomycin</td><td>Merck Millipore</td><td>A2212</td><td>ingrediënt voor T-celmedium&nbsp;</td></tr><tr><td>0.05 mM 2-&beta;-mercaptoethanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M3148</td><td>ingrediënt voor T-celmedium&nbsp;</td></tr><tr><td>DO11.10 muizen</td><td></td><td>in-house fokken</td><td>TH1 celcultuur</td></tr><tr><td>DPBS</td><td>Gibco</td><td>14190144</td><td>TH1 celcultuur</td></tr><tr><td>Cell strainer 40 &micro;m&nbsp;</td><td>Corning</td><td>352340</td><td>TH1 celcultuur</td></tr><tr><td>ACK Lysing Buffer</td><td>Lonza</td><td>10-548E</td><td>TH1 celcultuur</td></tr><tr><td>CD4 MicroBeads, mouse</td><td>Miltenyi Biotech</td><td>130-097-145</td><td>TH1 celcultuur</td></tr><tr><td>QuadroMACS separator</td><td>Miltenyi Biotech</td><td>130-090-976</td><td>TH1 celcultuur</td></tr><tr><td>LS column</td><td>Miltenyi Biotech</td><td>130-042-401</td><td>TH1 celcultuur</td></tr><tr><td>anti-CD4 antibody (Gk1.5)</td><td></td><td>Geïsoleerd uit hybridoma celcultuur</td><td>TH1 celcultuur</td></tr><tr><td>anti-CD8 antibody (5367.2)</td><td></td><td>Geïsoleerd uit hybridoma celcultuur</td><td>TH1 celcultuur</td></tr><tr><td>Anti-rat antibody (MAR18.5)</td><td></td><td>Geïsoleerd uit hybridoma celcultuur</td><td>TH1 celcultuur</td></tr><tr><td>Rabbit complement MA</td><td>tebu-Bio</td><td>CL3221</td><td>TH1 celcultuur</td></tr><tr><td>Anti-IL-4 antibody (11B11)</td><td></td><td>Geïsoleerd uit hybridoma celcultuur</td><td>TH1 celcultuur</td></tr><tr><td>cOVA 323-339-peptide&nbsp;</td><td>EMC-micro-collections</td><td>Custom order</td><td>TH1 celcultuur</td></tr><tr><td>CPG1668-oligonucleotides</td><td>Eurofins MWG Operon</td><td>Custom order</td><td>TH1 celcultuur</td></tr><tr><td>IL-2</td><td>Novartis</td><td>65483-116-07</td><td>TH1 celcultuur</td></tr><tr><td>96-well plates</td><td>Greiner&nbsp;</td><td>655180</td><td>TH1 celcultuur</td></tr><tr><td>24-well plates</td><td>Greiner&nbsp;</td><td>662160</td><td>TH1 celcultuur</td></tr><tr><td>cell culture flask</td><td>Greiner&nbsp;</td><td>660175</td><td>TH1 celcultuur</td></tr><tr><td>48-well plates</td><td>Greiner&nbsp;</td><td>677 180</td><td>cellabeling</td></tr><tr><td>Gammacell 1000</td><td>Best Theratronics</td><td>via inquiry&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Gulmay RT225</td><td>Gulmay</td><td>via inquiry&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Trypan blue</td><td>Merck Millipore</td><td>L6323</td><td>in vitro evaluatie</td></tr><tr><td>Mouse IFN-&gamma; ELISA</td><td>BD Biosciences</td><td>558258</td><td>in vitro evaluatie</td></tr><tr><td>PE Annexin V Apoptosis Detection Kit&nbsp;</td><td>BD Biosciences</td><td>559763</td><td>in vitro evaluatie</td></tr><tr><td>Tube 5 mL</td><td>Sarstedt</td><td>55.476</td><td>in vitro evaluatie</td></tr><tr><td>Round-bottom tubes&nbsp;</td><td>BD Biosciences</td><td>352008</td><td>in vitro evaluatie</td></tr><tr><td>Wizard &gamma;-counter</td><td>Perkin-Elmer</td><td>2480-0010</td><td>in vitro evaluatie</td></tr><tr><td>ELISA Reader MultiscanEX</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>5

muizen-lymfocyt labeling door<sup&gt; 64</sup&gt; cu-antibody receptor targeting voor<em&gt; in vivo</em&gt; celverkeer pet / ct

Murine Lymphocyte Labeling by 64Cu-Antibody Receptor Targeting for In Vivo Cell Trafficking by PET/CT

Dit protocol illustreert de bereiding van 64 Cu en de chelator conjugatie / radioactief labelen van een monoklonaal antilichaam (mAb) gevolgd door muizen lymfocyt celkweek en 64 Cu-antilichaamreceptor targeting van cellen. In vitro evaluatie van het radiolabel en niet-invasief in vivo cell tracking in een diermodel van een luchtweg vertraagd type overgevoeligheidsreactie (DTHR) PET / CT beschreven. In detail wordt de conjugatie van een mAb met de chelator 1,4,7,10-tetraazacyclododecaan-1,4,7,10-tetraazijnzuur (DOTA) weergegeven. Na de productie van radioactief 64 Cu, radiolabeling van de DOTA-geconjugeerde mAb beschreven. Vervolgens wordt de groei van kippen ovalbumine (COVA) -specifieke CD4 + interferon (IFN) -γ-producerende T helpercellen (cova-TH1) en de daaropvolgende radiolabeling van cova-TH1-cellen zijn afgebeeld. Verschillende in vitro technieken worden aan de ef evaluerenfects 64 Cu-radioactief merken van de cellen, zoals het bepalen van de cellevensvatbaarheid door trypan blauw exclusie, de kleuring voor apoptosis met Annexine V voor flowcytometrie en de beoordeling van de functionaliteit van IFN-γ-enzymgebonden immunosorbent assay (ELISA) . Bovendien is de bepaling van de radioactieve opname in de cellen en de etikettering stabiliteit beschreven. Dit protocol beschrijft verder hoe cell tracking studies uit te voeren in een diermodel voor de luchtwegen DTHR en derhalve wordt de inductie van cova-geïnduceerde acute luchtwegen VHTR bij BALB / c-muizen inbegrepen. Tenslotte wordt een robuuste PET / CT workflow inclusief beeldacquisitie, reconstructie en analyse weergegeven. De 64 Cu-antilichaamreceptor targeting benadering daaropvolgende receptor internalisatie biedt een hoge specificiteit en stabiliteit, verminderde cellulaire toxiciteit en lage uitstroom tarieven in vergelijking met gewone PET-tracers voor cellulaire labelen, bijvoorbeeld 64 Cu-pyruvaldehyde bis (N4-methylthiosemicarbazone) (64 Cu-PTSM). Tenslotte onze aanpak maakt non-invasief in vivo cell tracking PET / CT met een optimale signaal-achtergrond-verhouding voor 48 uur. Deze experimentele benadering kan worden overgedragen op verschillende diermodellen en celtypen met membraangebonden receptoren die worden geïnternaliseerd.

Figuur 1 vat de kenmerken van cova-TH1 cellen met 64 Cu-DOTA-KJ1-26-mAb en experimentele opzet voor de in vitro en in vivo studies die in dit protocol. <img alt="Figuur 1" src="/files/ftp_upload/55270/55270fig1.jpg" /> Figuur 1: 64 Cu-DOTA-KJ1-26-mAb Labelling Process &amp; Experimental Design. (A) Schematische weergave van radioact...

Na de bereiding van een 64 Cu-gemodificeerd monoklonaal antilichaam dat aan een transgene muizen T-celreceptor, T-cellen radiogelabeld in vivo geanalyseerd op levensvatbaarheid functionaliteit labeling stabiliteit en apoptose en adoptief overgebracht in muizen met een luchtweg vertraagde hypersensitiviteit reactie voor niet-invasieve beeldvorming met positron emission tomography / computed tomography (PET / CT).

Muizen-lymfocyt Labeling door<sup&gt; 64</sup&gt; Cu-Antibody Receptor targeting voor<em&gt; In Vivo</em&gt; Celverkeer PET / CT

This protocol illustrates the production of 64Cu and the chelator conjugation/radiolabeling of a monoclonal antibody (mAb) followed by murine lymphocyte ...

Het algemene doel van deze procedure is om murine lymfocyten stabiel te labelen met een koper-gemodificeerd radioactief monoklonaal antilichaam om de temporele distributie en homing-patronen van lymfocyten in vivo te volgen via PET/CT in muismodellen van inflammatie of kanker. Deze methode kan helpen bij het verduidelijken van de actieplaatsen en de belangrijkste onderliggende biologische principes van celgebaseerde therapieën, zoals stamceltherapieën in de regeneratieve geneeskunde of kankerimmunotherapieën. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat het de beeldvorming van celmigratie over 48 uur mogelijk maakt met een hoog contrast en minimale nadelige effecten op de cellen.Deze methode kan eenvoudig worden overgebracht naar elk celtype van belang met specifieke membraangebonden receptoren en overeenkomstige monoklonale antilichamen. Over het algemeen kunnen personen die nieuw zijn met deze methode moeite hebben met de conjugatie van de chelator en de radiolabelingsprocessen, wat resulteert in een lagere immunoreactieve fractie en celspecifieke activiteit. Begin met het desinfecteren van een DO11.10-muis met 70% ethanol.Fixeer vervolgens de ledematen met plakkband en ma

murine-lymphocyte-labeling-64cu-antibody-receptor-targeting-for-vivo

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

In this video, we demonstrate the intracellular radiolabeling of T helper cells using radioactive isotope-conjugated monoclonal antibodies for non-invasive positron emission tomography imaging.

Labeling Murine T Helper Lymphocytes using Radiolabeled Monoclonal Antibodies

This video demonstrates a technique involving a radioimmunoconjugate for the in vivo imaging of a tumor in a mouse model. Upon injection of the radioimmunoconjugate, the antibodies of the conjugate bind to a specific membrane antigen on the cancer cells. The radiotracer of the conjugate emits positrons that interact with neighboring electrons to produce energy, which is detected by a positron emission tomography (PET) scanner to create an image of the tumor.

An In Vivo PET Imaging Technique to Detect Tumors in a Murine Model Using Radiolabeled Antibodies

We beschrijven een algemeen protocol voor in vivo cell tracking met MRI in een muismodel met ex vivo gemerkte cellen. Een typische protocol voor mobiele etikettering, beeldaanwinst verwerking en kwantificering is inbegrepen.

In vivo 19 F MRI voor mobiele Tracking

De bioorthogonale inverse elektrone-vraag Diels-Alder cycloadditie is gebruikt om een effectieve en modulaire pretargeted PET-beeldvormingsstrategie voor kanker te creëren. In dit protocol worden de stappen van deze methodologie beschreven in de context van een modelsysteem dat gebruikmaakt van het op colorectale kanker gerichte antilichaam huA33 en een 64Cu-gelabelde radioligand.

Het benutten van de Bioorthogonal Inverse Electron Demand Diels-Alder Cycloadditiereacties voor Pretargeted PET Imaging

Viral afkomstige peptiden gekoppeld aan antilichaam-geconjugeerde (ACs) is een aanpak die wint dynamiek als gevolg van het potentieel van het leveren van moleculaire payloads met verhoogde tumor cel accumulatie. Gebruik makend van gemeenschappelijke methoden voor evaluatie van peptide conjugatie, AC en lading intracellulaire accumulatie en tumor gericht op, helpt dit protocol onderzoekers tijdens de cruciale eerste ontwikkelingsfasen.

Eerste beoordeling van antilichaam-geconjugeerde bewerkt met virale afkomstige peptiden voor verhoging van cellulaire accumulatie en verbetering van de Tumor gericht op

Dit protocol beschrijft een methode om te afbeelding resident tumor-infiltreren CD8 T cellen aangeduid met fluorescently gekoppelde antilichamen binnen de menselijke longen tumor segmenten. Deze techniek staat real-time analyses van CD8 T-cel migratie met behulp van de confocal microscopie.

Ex Vivo Beeldvorming van Resident CD8 T lymfocyten in menselijke longen Tumor plakjes met behulp van confocale microscopie

Protocollen voor kwantitatieve beoordeling van lymfocyt chemotaxis en migratie zijn belangrijke hulpmiddelen voor onderzoek van de immunologie. Hier, wordt een in vitro -protocol beschreven dat vergunningen real-time, multiplexed evaluatie van cel migratie, alsmede een complementaire in vivo techniek waardoor tracking van inheemse cellen met milt.

Kwantificeren van menselijke monocyt Chemotaxis In Vitro en lymfkliertest lymfocyt handel In Vivo

Hier tonen we de methoden voor in vivo kwantificering van leukocyten egress van naïef, ontstoken, en kwaadaardige lymfkliertest huid. Wij voeren een head-to-head vergelijking van twee modellen: transdermaal FITC toepassing en in situ photoconversion. Bovendien tonen wij het nut van photoconversion voor het bijhouden van leukocyten egress van cutane tumoren.

Kwantificeren van de leukocyten Egress via de lymfevaten van lymfkliertest huid en tumoren

Dit protocol beschrijft een techniek om verschillende celpopulaties in aftappen van lymfeklieren zonder veranderingen in de orgaan structuur te beeld.

Visualisering van lymfeklieren structuur en cellulaire lokalisatie met behulp van ex-vivo confocale microscopie

Dit protocol beschrijft de methodologie voor het niet-invasief volgen van T-cellen die genetisch gemanipuleerd zijn om chimere antigeenreceptoren in vivo tot expressie te brengen met een klinisch beschikbaar platform.

Dynamische beeldvorming van chimere antigeenreceptor T-cellen met [18F]Tetrafluoroboraat positronemissietomografie/computertomografie

Dit artikel beschrijft de methodologie voor het radioactief labelen van een mensspecifiek anti-CD19 monoklonaal antilichaam en hoe het kan worden gebruikt om B-cellen in het centrale zenuwstelsel en perifere weefsels van een muismodel van multiple sclerose te kwantificeren met behulp van in vivo PET-beeldvorming, ex vivo gammatelling en autoradiografiebenaderingen.

Beeldvorming van CD19+ B-cellen in een experimenteel muismodel met auto-immuun encefalomyelitis met behulp van positronemissietomografie

Leer muizenlymfocyten labelen met 64Cu-gemodificeerde antilichamen voor in vivo PET/CT-beeldvorming. Deze methode volgt celmigratie tot 48 uur met hoge contrast en minimale schade, ideaal voor ontstekings- en kankeronderzoek.

Muizen-lymfocyt Labeling door

Meer video's verkennen