Name: Isolatie en Verrijking van Liver Progenitor subsets geïdentificeerd door een Novel Surface Marker Combinatie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-02-18T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 52 s
Description: Leer hoe je leverprogenitorcellen isoleert en verrijkt met hoge zuiverheid door flowcytometrie. Deze methode gebruikt een nieuwe oppervlaktemarkercombinatie voor gedetailleerde subsetanalyse.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Dit werk werd ondersteund door de Alexander von Humboldt Stichting Sofja Kovalevskaja Award uit aan VLK.

<ol><li>Dolle, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Successful+isolation+of+liver+progenitor+cells+by+aldehyde+dehydrogenase+activity+in+naive+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Successful isolation of liver progenitor cells by aldehyde dehydrogenase activity in naive mice.</a> Hepatology. 55 (2), 540-552 (2012).</li>
<li>Dolle, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+quest+for+liver+progenitor+cells%3A+a+practical+point+of+view%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hepatol%22%5BJournal%5D)">The quest for liver progenitor cells: a practical point of view.</a> J Hepatol. 52 (1), 117-129 (2010).</li>
<li>Dorrell, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surface+markers+for+the+murine+oval+cell+response%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Surface markers for the murine oval cell response.</a> Hepatology. 48 (4), 1282-1291 (2008).</li>
<li>Gouw, A. S., Clouston, A. D., Theise, N. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ductular+reactions+in+human+liver%3A+diversity+at+the+interface%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Ductular reactions in human liver: diversity at the interface.</a> Hepatology. 54 (5), 1853-1863 (2011).</li>
<li>Tarlow, B. D., Finegold, M. J., Grompe, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clonal+tracing+of+Sox9%2B+liver+progenitors+in+mouse+oval+cell+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Clonal tracing of Sox9+ liver progenitors in mouse oval cell injury.</a> Hepatology. 60 (1), 278-289 (2014).</li>
<li>Shin, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Foxl1-Cre-marked+adult+hepatic+progenitors+have+clonogenic+and+bilineage+differentiation+potential%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Dev%22%5BJournal%5D)">Foxl1-Cre-marked adult hepatic progenitors have clonogenic and bilineage differentiation potential.</a> Genes Dev. 25 (11), 1185-1192 (2011).</li>
<li>Furuyama, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Continuous+cell+supply+from+a+Sox9-expressing+progenitor+zone+in+adult+liver%2C+exocrine+pancreas+and+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Genet%22%5BJournal%5D)">Continuous cell supply from a Sox9-expressing progenitor zone in adult liver, exocrine pancreas and intestine.</a> Nat Genet. 43 (1), 34-41 (2011).</li>
<li>Font-Burgada, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hybrid+Periportal+Hepatocytes+Regenerate+the+Injured+Liver+without+Giving+Rise+to+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Hybrid Periportal Hepatocytes Regenerate the Injured Liver without Giving Rise to Cancer.</a> Cell. 162 (4), 766-779 (2015).</li>
<li>Kuramitsu, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Failure+of+fibrotic+liver+regeneration+in+mice+is+linked+to+a+severe+fibrogenic+response+driven+by+hepatic+progenitor+cell+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Failure of fibrotic liver regeneration in mice is linked to a severe fibrogenic response driven by hepatic progenitor cell activation.</a> Am J Pathol. 183 (1), 182-194 (2013).</li>
<li>Pritchard, M. T., Nagy, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatic+fibrosis+is+enhanced+and+accompanied+by+robust+oval+cell+activation+after+chronic+carbon+tetrachloride+administration+to+Egr-1-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Hepatic fibrosis is enhanced and accompanied by robust oval cell activation after chronic carbon tetrachloride administration to Egr-1-deficient mice.</a> Am J Pathol. 176 (6), 2743-2752 (2010).</li>
<li>Spee, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterisation+of+the+liver+progenitor+cell+niche+in+liver+diseases%3A+potential+involvement+of+Wnt+and+Notch+signalling%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Characterisation of the liver progenitor cell niche in liver diseases: potential involvement of Wnt and Notch signalling.</a> Gut. 59 (2), 247-257 (2010).</li>
<li>Eckert, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Podoplanin+discriminates+distinct+stromal+cell+populations+and+a+novel+progenitor+subset+in+the+liver%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Gastrointest+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">Podoplanin discriminates distinct stromal cell populations and a novel progenitor subset in the liver.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 310 (1), G1-G12 (2016).</li>
<li>Epting, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+cell+antigen-1+is+necessary+for+cell-cycle+withdrawal+and+myoblast+differentiation+in+C2C12+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Stem cell antigen-1 is necessary for cell-cycle withdrawal and myoblast differentiation in C2C12 cells.</a> J Cell Sci. 117 (Pt 25), 6185-6195 (2004).</li>
<li>Tirnitz-Parker, J. E., Tonkin, J. N., Knight, B., Olynyk, J. K., Yeoh, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation%2C+culture+and+immortalisation+of+hepatic+oval+cells+from+adult+mice+fed+a+choline-deficient%2C+ethionine-supplemented+diet%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Biochem+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Isolation, culture and immortalisation of hepatic oval cells from adult mice fed a choline-deficient, ethionine-supplemented diet.</a> Int J Biochem Cell Biol. 39 (12), 2226-2239 (2007).</li>
<li>Rountree, C. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+CD133-expressing+murine+liver+oval+cell+population+with+bilineage+potential%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">A CD133-expressing murine liver oval cell population with bilineage potential.</a> Stem Cells. 25 (10), 2419-2429 (2007).</li>
<li>Rountree, C. B., Ding, W., Dang, H., Vankirk, C., Crooks, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+CD133%2B+liver+stem+cells+for+clonal+expansion%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Isolation of CD133+ liver stem cells for clonal expansion.</a> J Vis Exp. (56), (2011).</li>
<li>Sidney, L. E., McIntosh, O. D., Hopkinson, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phenotypic+Change+and+Induction+of+Cytokeratin+Expression+During+In+Vitro+Culture+of+Corneal+Stromal+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Phenotypic Change and Induction of Cytokeratin Expression During In Vitro Culture of Corneal Stromal Cells.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 56 (12), 7225-7235 (2015).</li>
<li>Hass, R., Kasper, C., Bohm, S., Jacobs, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Different+populations+and+sources+of+human+mesenchymal+stem+cells+%28MSC%29%3A+A+comparison+of+adult+and+neonatal+tissue-derived+MSC%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Commun+Signal%22%5BJournal%5D)">Different populations and sources of human mesenchymal stem cells (MSC): A comparison of adult and neonatal tissue-derived MSC.</a> Cell Commun Signal. 9, 12(2011).</li>
<li>Schmelzer, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+hepatic+stem+cells+from+fetal+and+postnatal+donors%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Human hepatic stem cells from fetal and postnatal donors.</a> J Exp Med. 204 (8), 1973-1987 (2007).</li>
</ol>

De auteurs hebben geen concurrerende financiële belangen.

Leverontsteking en schade van verschillende oorsprong leiden regeneratieve processen in de lever die gepaard gaan met progenitorcelexpansie en activering 2, 3. Deze progenitorcellen bezitten stamcel kenmerken en waarschijnlijk een belangrijke rol bij het ontrafelen voor verschillende leverziekten spelen. De heterogeniteit van leverprogenitorcellen is al lang gesuggereerd. De herbeoordeling van de lever voorlopercellen subsets met beh...

Leverregeneratie wordt meestal geassocieerd met de zelfvernieuwingscapaciteit van hepatocyten. Niettemin chronische leveraandoeningen letsels ontstaan met progenitor cel activatie en expansie, die zijn geassocieerd met hun vermogen om te differentiëren in hepatocyten en cholangiocyten 1, 2, 3, 4. Dit is bijzonder relevant omdat, tijdens chronische letsels, hepatocyten proliferatie niet effectief. Ondanks meerdere genetische tracing studies gericht progenitorcellen, hun rol in leverregeneratie blijft controversieel 5, 6, 7, 8. Bovendien heeft het activeren van voorlopercellen in verband gebracht met verhoogde fibrotische respons in de lever, die vragen over hun precieze rol verhoogt tijdens verwondingen 9, 10. De heterogeniteit van de voorlopercellen compartiment lang gesuggereerd genexpressiestudies dat progenitor cellen die een enkel oppervlak aanwijzer kan microdissectie of celsortering-gebaseerde werkwijzen 1, 11 geïsoleerd. Sterker nog, onlangs, een roman oppervlak marker combinatie met behulp van GP38 (podoplanin) eenduidig gekoppeld vorige single markers van stamcellen aan verschillende subgroepen 12. Belangrijk is dat deze subgroepen niet alleen verschilden in oppervlakte marker expressie maar vertoonden functionele veranderingen gedurende 12 verwondingen. Meerdere dierlijke modellen zijn gebruikt om te onderzoeken voorlopercellen cel activatie en de lever regeneratie. Het lijkt erop dat de verschillende soorten schade bevorderen de activering van verschillende subsets van progenitorcellen 12. Dit kan het ph verklarenenotypic divergentie van de ductulaire reactie waargenomen bij mensen 4. Dus de complexe fenotypische en functionele analyse van progenitorcellen zijn cruciaal voor hun rol in verwondingen en de ware betekenis van ductulaire reactie leverziekten begrijpen. Naast de oppervlakte marker combinaties, de cruciale verschillen in cel isolatie protocollen verder te compliceren de conclusies op basis van eerdere studies 2. Een aanzienlijke hoeveelheid onderzoek gericht de rol van stamcellen die sterk verschillen in hun isolatieprotocol (bijvoorbeeld lever dissociatie (enzymcombinatie en duur van het proces), medium dichtheid en centrifugeersnelheid) 2. Een geoptimaliseerde isolatie techniek, een betere leefbaarheid voor zeldzame celpopulaties en een afspiegeling is van subgroep samenstelling, is ontwikkeld en onlangs 12 gepubliceerd. Het doel van dit artikel is om een ​​meer det biedenailed protocol van deze levercel isolatiewerkwijze en deelanalyse om de juiste reproductie van de techniek. Bovendien, het protocol bevat een vergelijking met de vorige isolatiewerkwijze de verschillen met het nieuwe protocol demonstreren.

<table><tbody><tr><td>RPMI</td><td>Life Technologies</td><td>21875-034</td><td></td></tr><tr><td>phenol red free DMEM</td><td>Life Technologies</td><td>31053-028</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>Life Technologies</td><td>10270-106</td><td></td></tr><tr><td>Collagenase P</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>11249002001</td><td></td></tr><tr><td>DNAse-I</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>10104159001</td><td></td></tr><tr><td>Dispase</td><td>Life Technologies</td><td>17105041</td><td></td></tr><tr><td>ACK Lysing Buffer</td><td>Life Technologies</td><td>A10492-01</td><td></td></tr><tr><td>HBSS</td><td>Life Technologies</td><td>14025-050</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D8537</td><td></td></tr><tr><td>Sodium Azide</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S2002</td><td>Prepare 1% stock solution</td></tr><tr><td>10% BSA</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-091-376</td><td></td></tr><tr><td>autoMACS Rinsing Solution</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-091-222</td><td>add 0.5% (v/v) BSA and store on ice</td></tr><tr><td>Phenol-red free DMEM</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D1145</td><td></td></tr><tr><td>counting Beads Count Bright</td><td>Life Technologies</td><td>C36950</td><td></td></tr><tr><td>PI</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-093-233</td><td></td></tr><tr><td>FcR Blocking Reagent</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-092-575</td><td></td></tr><tr><td>anti-CD31 MicroBeads</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-097-418</td><td></td></tr><tr><td>anti-CD45 MicroBeads</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-052-301</td><td></td></tr><tr><td>Dead Cell Removal Kit</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-090-101</td><td></td></tr><tr><td>anti-Biotin MicroBeads</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-090-485</td><td></td></tr><tr><td>CD64 Purified</td><td>BioLegend</td><td>139302</td><td>Dilution: 1:100</td></tr><tr><td>CD16/32 Purified</td><td>BioLegend</td><td>101302</td><td>Dilution: 1:100</td></tr><tr><td>CD45 APC/Cy7</td><td>BioLegend</td><td>103116</td><td>Dilution: 1:200, marks hematopoetic cells</td></tr><tr><td>CD31 Biotin</td><td>BioLegend</td><td>102504</td><td>Dilution: 1:200, marks endothelial cells</td></tr><tr><td>ASGPR1 Purified</td><td>Bio-Techne</td><td>AF2755-SP</td><td>Dilution: 1:100, marks hepatocytes</td></tr><tr><td>Podoplanin APC</td><td>BioLegend</td><td>127410</td><td>Dilution: 1:1,400, marks progenior cells</td></tr><tr><td>Podoplanin Biotin</td><td>BioLegend</td><td>127404</td><td>Dilution: 1:1,400</td></tr><tr><td>CD133 PE</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-102-210</td><td>use 3 &micro;L, marks progenitor cells</td></tr><tr><td>CD133 Biotin</td><td>BioLegend</td><td>141206</td><td>Dilution: 1:100</td></tr><tr><td>CD34 Biotin</td><td>eBioScience</td><td>13-0341-81</td><td>Dilution: 1:100</td></tr><tr><td>CD90.2 Pacific Blue</td><td>BioLegend</td><td>140306</td><td>Dilution: 1:800</td></tr><tr><td>CD157 PE</td><td>BioLegend</td><td>140203</td><td>Dilution: 1:600</td></tr><tr><td>EpCAM Brilliant Violet 421</td><td>BioLegend</td><td>118225</td><td>Dilution: 1:100</td></tr><tr><td>Sca-1 Biotin</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-101-885</td><td>use 10 &micro;L</td></tr><tr><td>Mouse IgG2b, &kappa; PE</td><td>BioLegend</td><td>400311</td><td></td></tr><tr><td>Rat IgG1 PE</td><td>BioLegend</td><td>400407</td><td></td></tr><tr><td>Rat IgG2b, &kappa; APC/Cy7</td><td>BioLegend</td><td>400624</td><td></td></tr><tr><td>Rat IgG2a, &kappa; Biotin</td><td>BioLegend</td><td>400504</td><td></td></tr><tr><td>Rat IgG2a, &kappa; Brilliant Violet 421</td><td>BioLegend</td><td>400535</td><td></td></tr><tr><td>Syrian Hamster IgG APC</td><td>BioLegend</td><td>402012</td><td></td></tr><tr><td>Syrian Hamster IgG Biotin</td><td>BioLegend</td><td>402004</td><td></td></tr><tr><td>Normal Goat IgG Control Purified</td><td>Bio-Techne</td><td>AB-108-C</td><td></td></tr><tr><td>Donkey anti-Goat IgG Alexa Fluor 488</td><td>Life Technologies</td><td>A11055</td><td>Dilution: 1:800</td></tr><tr><td>Streptavidin Alexa Fluor 405</td><td>Life Technologies</td><td>S32351</td><td>Dilution: 1:400</td></tr><tr><td>100 &micro;m Filter mesh</td><td>A. Hartenstein</td><td>PAS3</td><td></td></tr><tr><td>LS Column</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-401</td><td></td></tr><tr><td>QuadroMACS separator</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-090-976</td><td></td></tr><tr><td>MACSQuant Analyzer 10</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-096-343</td><td></td></tr><tr><td>AutoMACS Pro Separator</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-092-545</td><td></td></tr><tr><td>FACS AriaTMIII</td><td>BD Biosciences</td><td></td><td></td></tr><tr><td>FACSDiva sofware</td><td>BD Biosciences</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Polypropylene Round bottom tube</td><td>Falcon</td><td>352063</td><td></td></tr><tr><td>Rneasy plus mini kit</td><td>Qiagen</td><td>74134</td><td>RLT lysis buffer is included</td></tr></tbody></table>

isolatie en verrijking van liver progenitor subsets geïdentificeerd door een novel surface marker combinatie

Isolation and Enrichment of Liver Progenitor Subsets Identified by a Novel Surface Marker Combination

Tijdens chronische lever verwondingen, progenitorcellen breiden in een proces genaamd ductulaire reactie, die ook betrekking heeft op de weergave van inflammatoire cellulaire infiltraat en epitheliale cel activatie. De populatie voorlopercellen gedurende deze ontstekingsreacties is meestal onderzocht middels enkel oppervlak markers, door histologische analyse of met flowcytometrie-gebaseerde technieken. Echter, nieuwe oppervlak markers geïdentificeerd verschillende functioneel verschillende subgroepen binnen de lever voorloper / stamcel compartiment. De hier gepresenteerde methode beschrijft de isolatie en gedetailleerd flowcytometrie analyse van voorlopercellen subsets door middel van nieuwe oppervlak marker combinaties. Bovendien toont hoe de verschillende voorlopercel deelverzamelingen kunnen worden geïsoleerd met hoge zuiverheid met behulp van geautomatiseerde magnetische en FACS sortering-gebaseerde methoden. Belangrijker nieuwe en vereenvoudigde enzymatische dissociatie van de lever maakt de isolatie van deze zeldzame celpopulaties met een hoge levensvatbaarheiddie superieur in vergelijking met andere bestaande methodes. Dit is met name relevant voor verdere studie voorlopercellen in vitro of scheidt hoogwaardige RNA aan het genexpressieprofiel analyseren.

De hier gepresenteerde voor de digestie van de lever met een nieuw mengsel van enzymen in een enkele-celsuspensie parenchymale en niet-parenchymale levercellen (figuren 1 en 2a). Na de ACK-lyseren van rode bloedcellen, de directe flowcytometrie analyse van de enkele-celsuspensie mogelijk (figuren 1 en 2). De gating strategie omvat de uitsluiting van doubletten en dode cellen (Figuur 2a). De cellen die ne...

Lever verwondingen worden begeleid door voorlopercellen cel expansie die een heterogene populatie cellen vertegenwoordigt. Nieuwe indeling van deze cellulaire compartiment zorgt voor de onderscheidende meerdere subsets. De hier beschreven methode laat de flowcytometrieanalyse en hoge zuiverheid isoleren van diverse subsets die kunnen worden gebruikt voor verdere tests.

Isolatie en Verrijking van Liver Progenitor subsets geïdentificeerd door een Novel Surface Marker Combinatie

During chronic liver injuries, progenitor cells expand in a process called ductular reaction, which also entails the appearance of inflammatory cellular ...

De algemene doelstellingen van dit leverdigestieprotocol zijn het beoordelen van de verschillende subsets van leverprogenitoren via flowcytometrie en het isoleren van deze cellen met een hoge zuiverheid met behulp van een nieuwe cocktail van oppervlaktemarkers voor verdere downstream-analyse. Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van diverse vragen over de biologie van leverprogenitorcellen, zoals wat hun subsetspecifieke kenmerken zijn en wat hun verre oorzaak is tijdens leverbeschadiging. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat het de isolatie van progenitorcellen met een hoge zuiverheid en viabiliteit mogelijk maakt, wat essentieel is voor de in-vitro analyse.Hoewel deze digestietechniek inzicht biedt in de biologie van progenitorcellen, kan deze ook worden gebruikt voor de isolatie van hematopoëtische en endotheelcelpopulaties. Om een enkelcelpreparaat van een muizenlever te maken, brengt u de lobben over naar een droge petrischaal en gebruikt u een scalpel om het weefsel in homogene blokjes van ongeveer twee millimeter kubiek te snijden. Breng de stukjes over naar twee conische centrifugebuizen van 15 milliliter per lever, die elk 2,5 milliliter digestiebuff

isolation-enrichment-liver-progenitor-subsets-identified-novel

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Ontwikkelingsbiologie

Hier beschrijven we de isolatie van CD133 tot expressie lever stamcellen en kanker stamcellen van muizen gehele lever, een proces dat weefsel spijsvertering, cel verrijkingscocktail en flowcytometrie isolatie vereist. Wij omvatten methoden voor geavanceerde single cell isolatie en klonale expansie.

Isolatie van CD133 + lever stamcellen voor klonale expansie

Een methode om de verdeling van beenmerg hematopoietische stamcellen in flowcytometrie en efficiënt isoleren sterk gezuiverde hematopoietische stamcellen (HSC) analyse beschreven. De isolatie procedure is in hoofdzaak gebaseerd op magnetische verrijking van c-Kit + cellen en cel sortering tot HSCs voor cellulaire en moleculaire studies te zuiveren.

Fenotypische analyse en isolatie van Murine hematopoëtische stamcellen en Lineage-geëngageerde voorouders

Er wordt een techniek beschreven om menselijke hepatocyten en niet-parenchymale levercellen van dezelfde donor te isoleren. De verschillende leverceltypen vormen de basis voor functionele levermodellen en weefselengineering. Deze nieuwe methode streeft ernaar om levercellen met een hoge opbrengst en levensvatbaarheid te isoleren.

Protocol voor isolatie van primaire menselijke hepatocyten en Overeenkomstige Major Populaties van niet-parenchymale Liver Cells

We laten zien hoe te identificeren en te isoleren 6 deelverzamelingen van myeloïde voorlopercellen uit lymfkliertest beenmerg met behulp van een combinatie van magnetische en fluorescentie sorteren (MACS en FACS). Dit protocol kan worden gebruikt voor in vitro cultuur assays (methylcellulose of vloeistof culturen), in vivo adoptief overdracht experimenten en RNA/eiwit analyses.

Identificatie en isolatie van de Oligopotent en Lineage-begaan myeloïde voorlopercellen uit beenmerg van de muis

Dit protocol Details een monolayer, serum-vrije methode voor het efficiënt genereren van hepatocyte-achtige cellen van menselijke pluripotente stamcellen (hPSCs) in 18 dagen. Dit omvat zes stappen als hpscs sequentieel differentiëren in tussenliggende celtypen zoals de primitieve streak, definitieve endoderm, posterieure foregut en lever Bud voor ouders voor het vormen van hepatocyte-achtige cellen.

Efficiënte differentiatie van menselijke pluripotente stamcellen in levercellen

Het doel van dit artikel is om een gestandaardiseerde aanpak te bieden om menselijke hepatische voorloperdifferentiatie van pluripotente stamcellen te induceren. De ontwikkeling van deze procedure met kant-en-klare mediaformuleringen biedt de gebruiker een gemakkelijk systeem om menselijke levercellen te genereren voor biomedisch onderzoek en vertaling.

Hepatische voorloperspecificatie van pluripotente stamcellen met behulp van een gedefinieerd differentiatiesysteem

Dit artikel biedt een gedetailleerde methodologie voor weefseldissociatie en cellulaire fractioneringsbenaderingen die verrijking van levensvatbare epitheelcellen uit proximale en distale gebieden van de menselijke long mogelijk maken. Hierin worden deze benaderingen toegepast voor de functionele analyse van longepitheelvoorlopercellen door het gebruik van 3D organoïdencultuurmodellen.

Isolatie en verrijking van menselijke longepitheelvoorlopercellen voor organoïde cultuur

Hier schetsen en demonstreren we een protocol voor primaire muis lever sinusoïdale endotheelcel (LSEC) isolatie. Het protocol is gebaseerd op levercollageaseperfusie, niet-parenchymale celzuivering door centrifugeren met lage snelheid en CD146 magnetische kraalselectie. We fenotyperen en karakteriseren deze geïsoleerde LSEC's ook met behulp van flowcytometrie en scanning elektronenmicroscopie.

Isolatie en karakterisering van primaire leverbijholteelcellen van muizen

Met lipiden beladen hepatocyten zijn inherent aan leverregeneratie, maar gaan meestal verloren bij centrifugatie van dichtheidsgradiënt. Hier presenteren we een geoptimaliseerd celisolatieprotocol dat steatotische hepatocyten behoudt, wat representatieve populaties van regenererende hepatocyten oplevert na gedeeltelijke hepatectomie bij muizen.

Isolatie van regenererende hepatocyten na gedeeltelijke hepatectomie bij muizen

Hier presenteren we een niet-genetische methode om menselijke autologe leversferoïden te genereren met behulp van mononucleaire cellen geïsoleerd uit steady-state perifeer bloed.

Humane leversferoïden uit perifeer bloed voor leverziektestudies

Hepatocyten afgeleid van pluripotente stamcellen kunnen worden gezuiverd door middel van celsortering, met behulp van een combinatie van mitochondriale en geactiveerde leukocytenceladhesiemolecuul (ALCAM, ook bekend als CD166) kleuring.

Toepassing van levende mitochondriënkleuring bij het sorteren van cellen om hepatocyten te zuiveren die zijn afgeleid van door de mens geïnduceerde pluripotente stamcellen

Leer hoe je leverprogenitorcellen isoleert en verrijkt met hoge zuiverheid door flowcytometrie. Deze methode gebruikt een nieuwe oppervlaktemarkercombinatie voor gedetailleerde subsetanalyse.

Isolatie en Verrijking van Liver Progenitor subsets geïdentificeerd door een Novel Surface Marker Combinatie

Meer video's verkennen