Name: Zenuwsparende Mid-urethraobstructie (Nemo) in vrouwelijke kleine knaagdieren (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-04-25T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 42 s
Description: Leer een zenuwsparende chirurgische methode voor partiële blaasuitgangsobstructie bij vrouwelijke kleine knaagdieren. Deze techniek minimaliseert morbiditeit en mortaliteit terwijl consistente obstructieniveaus worden bereikt voor betrouwbaar onderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Het werk werd gefinancierd door een CHIR-operatiesubsidie (DJB).

De volgende experimentele protocol werd goedgekeurd door Animal Care commissie van de instelling. 1. NeMO bij vrouwelijke ratten <ol><li> Voorbereiding <ol><li> Plaats een vrouwelijke Sprague-Dawley ratten met een gewicht ongeveer 200 g onder 3% isofluraan anesthesie, weegt het dier en scheren en desinfecteren prepubic gebied 3 maal gebruikmakend van een jodium chirurgisch scrub. </li><li> Een verwarmingselement, tape achterpoten en staart naar beneden en katheteriseren de blaas met een 20-gauge angiocatheter, die eveneens licht is vastgeplakt om schuiven te voorkomen. </li></ol></li><li> ontleding <ol><li> Met een scalpel een 8 mm longitudinale incisie te voeren vanaf de tastbare symphysis naar het urinekanaal. Verwijder de huid aan beide zijden om later wondsluiting te bevorderen. </li><li> Ontleden bot naar het gestente plasbuis zichtbaar door longitudinale verspreiden met een fijne schaar. Plaats fijne self-het behoud van de huid haken om de blootstelling te verbeterenvan de plasbuis. </li><li> Doe een aantal zachte longitudinale verspreiding via gebogen schaar dorsaal aan de urethra van het vlak tussen de urinebuis en de vagina te ontwikkelen. Dan botweg langs een 4-0 zijden hechtdraad achter de urinebuis en de voorbereiding van de dubbele afstand van knoop van een chirurg. </li></ol></li><li> Partiële urethraobstructie <ol><li> Verwijder het angiocatheter, plaats een 0,9 mm metalen staaf parallel aan de urethra en draai de knoop rond urethra en metalen staaf, zodat deze nog glijdt gemakkelijk daarna. </li><li> Bevestig de knoop met 3 worpen met zachte spanning voor de peilstok. Snijd de hechtdraad eindigt ongeveer 3 mm of 4 mm indien later vrijkomen van obstructie van het experiment. </li></ol></li><li> wondsluiting <ol><li> Benader de paraurethral klieren met behulp van een begraven enkele steek van absorbeerbare gevlochten hechtmateriaal 4-0. </li><li> Sluit de huid met een begraven horizontale matrassteek met behulp van dezelfde absorbeerbare suture. Let op: Hoewel het onconventionele lijkt misschien een absorbeerbare hechtdraad te gebruiken voor een huid doordringende steek, hebben we geen complicaties zoals wondinfecties tegenkomen, en dat het verwijderen van hechtingen kan worden vermeden. </li></ol></li><li> nazorg <ol><li> Injecteer buprenorfine 0,1 mg / kg subcutaan voordat de rat in een kooi herstel. </li><li> Bieden een aantal zachte herstel dieet voor de eerste 24 uur van de interne gevestigd rat. Na deze periode huis dieren weer dezelfde paren voordat de procedure mits goed gaat en tot dezelfde behandelingsgroep. </li><li> Controleer de ratten dagelijks blaas grootte en algemeen welzijn; nemen hun gewicht minstens eenmaal per week. </li></ol></li></ol> 2. NeMO bij vrouwelijke muizen <ol><li> Voorbereiding <ol><li> Plaats een vrouwelijke C57BL / 6 muizen gewicht van ongeveer 18 g en ga verder zoals beschreven in stap 1.1.1. </li><li> Ga zo gedetailleerd in stap 1.1.2, behalve gebruik maken van een 24-gauge angiocatheter. </li></ol></li><li> ontleding <ol><li> Met een scalpel om een ​​6 mm longitudinale incisie te voeren vanaf de tastbare symphysis naar het urinekanaal. </li><li> Ontleden bot naar het gestente plasbuis zichtbaar door longitudinale verspreiden met een fijne schaar. Verwijder de neuro-vasculaire bundel loopt ventraal aan de urethra van analoge stompe dissectie. </li><li> Doe een aantal zachte longitudinale verspreiding via gebogen schaar dorsaal aan de urethra van het vlak tussen de urinebuis en de vagina te ontwikkelen. Dan botweg langs een 5-0 niet-absorbeerbare gevlochten hechtmateriaal achter de urinebuis en de voorbereiding van de dubbele afstand van knoop van een chirurg. </li></ol></li><li> Partiële urethraobstructie <ol><li> Sluit de angiocatheter met een 1 ml spuit en injecteer 0,1 ml normale zoutoplossing in de blaas. </li><li> Plaats een 26-gauge canule parallel aan de urethra. Trek voorzichtig de knoop rond plasbuis en canule tijdens terugtrekken van de angiocath. </li><li> Bevestig de knoop met 3 worpen met zachte spanning voor het verwijderen van de canule. </li><li> Test voor urine verschijnen aan de gehoorgang dat bij lichte druk op de blaas van het dier; Draai de band als niet in staat om urine te drukken. Anders snijd de hechtdraad eindigt ongeveer 3 mm. </li></ol></li><li> wondsluiting <ol><li> Sluit de huid met een begraven horizontale matrassteek met behulp van een 5-0 gevlochten absorbeerbare hechtdraad. </li></ol></li><li> nazorg <ol><li> Injecteer 0,1 mg / kg subcutaan buprenorfine voordat de muis in een herstelkooi. </li><li> Bieden een aantal zachte herstel dieet voor de eerste 48 uur van de interne gevestigd muis. Na deze periode huis dieren weer in dezelfde groepen als voordat de procedure op voorwaarde dat ze het goed doen en behoren tot dezelfde behandeling groep. OPMERKING: Muizen met een tastbaar opgezwollen blaas 24 uur na de procedure die niet vervalt wanneer het behandeld worden over-belemmerd en zal sterven binnen de next 1 - 2 dagen, tenzij onder narcose teruggenomen voor het verwijderen van de belemmerende ligatuur. </li><li> Controleer de muizen dagelijks blaas grootte en algemeen welzijn; nemen hun gewicht minstens eenmaal per week. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Andersson, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Storage+and+voiding+symptoms%3A+pathophysiologic+aspects%5BTitle%5D)+AND+%22Urology%22%5BJournal%5D)">Storage and voiding symptoms: pathophysiologic aspects.</a> Urology. 62 (5), 3-10 (2003).</li>
<li>Boyle, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+prevalence+of+lower+urinary+tract+symptoms+in+men+and+women+in+four+centres.+The+UrEpik+study%5BTitle%5D)+AND+%22BJU+Int%22%5BJournal%5D)">The prevalence of lower urinary tract symptoms in men and women in four centres. The UrEpik study.</a> BJU Int. 92 (4), 409-414 (2003).</li>
<li>Coyne, K. S., Wein, A., Nicholson, S., Kvasz, M., Chen, C. I., Milsom, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Economic+burden+of+urgency+urinary+incontinence+in+the+United+States%3A+a+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22J+Manag+Care+Pharm%22%5BJournal%5D)">Economic burden of urgency urinary incontinence in the United States: a systematic review.</a> J Manag Care Pharm. 20 (2), 130-140 (2014).</li>
<li>Buttyan, R., Chen, M. W., Levin, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+bladder+outlet+obstruction+and+molecular+insights+into+the+basis+for+the+development+of+bladder+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+Urol%22%5BJournal%5D)">Animal models of bladder outlet obstruction and molecular insights into the basis for the development of bladder dysfunction.</a> Eur. Urol. 32 (Suppl 1), 32-39 (1997).</li>
<li>Mattiasson, A., Uvelius, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+contractile+properties+in+hypertrophic+rat+urinary+bladder%5BTitle%5D)+AND+%22J+Urol%22%5BJournal%5D)">Changes in contractile properties in hypertrophic rat urinary bladder.</a> J Urol. 128 (6), 1340-1342 (1982).</li>
<li>Chang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alteration+of+the+PKC-mediated+signaling+pathway+for+smooth+muscle+contraction+in+obstruction-induced+hypertrophy+of+the+urinary+bladder%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Invest%22%5BJournal%5D)">Alteration of the PKC-mediated signaling pathway for smooth muscle contraction in obstruction-induced hypertrophy of the urinary bladder.</a> Lab Invest. 89 (7), 823-832 (2009).</li>
<li>Moore, J. A., Brading, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+porcine+model+of+bladder+outlet+obstruction+incorporating+radio-telemetered+cystometry%5BTitle%5D)+AND+%22BJU+Int%22%5BJournal%5D)">A porcine model of bladder outlet obstruction incorporating radio-telemetered cystometry.</a> BJU Int. 100 (5), 1192-1193 (2007).</li>
<li>Beamon, C. R., Mazar, C., Salkini, M. W., Phull, H. S., Comiter, C. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+sildenafil+citrate+on+bladder+outlet+obstruction%3A+a+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22BJU+Inte%22%5BJournal%5D)">The effect of sildenafil citrate on bladder outlet obstruction: a mouse model.</a> BJU Inte. 104 (2), 252-256 (2009).</li>
<li>Pandita, R. K., Fujiwara, M., Alm, P., Andersson, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cystometric+evaluation+of+bladder+function+in+non-anesthetized+mice+with+and+without+bladder+outlet+obstruction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Urol%22%5BJournal%5D)">Cystometric evaluation of bladder function in non-anesthetized mice with and without bladder outlet obstruction.</a> J Urol. 164 (4), 1385-1389 (2000).</li>
<li>Kang, Y. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+Sequential+Changes+in+Bladder+Function+after+Partial+Bladder+Outlet+Obstruction+in+Awake+Sprague-Dawley+Rats%3A+Focus+on+the+Decompensated+Bladder%5BTitle%5D)+AND+%22Korean+J+Urol%22%5BJournal%5D)">Early Sequential Changes in Bladder Function after Partial Bladder Outlet Obstruction in Awake Sprague-Dawley Rats: Focus on the Decompensated Bladder.</a> Korean J Urol. 52 (12), 835-837 (2011).</li>
<li>Schroeder, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+effect+of+an+oral+endothelin+converting+enzyme+inhibitor+on+rat+detrusor+function+after+outlet+obstruction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Urol%22%5BJournal%5D)">Protective effect of an oral endothelin converting enzyme inhibitor on rat detrusor function after outlet obstruction.</a> J Urol. 172 (3), 1171-1174 (2004).</li>
<li>Sidler, M., Aitken, K., Jiang, J., Bijos, D., Bägli, D. <a target="_blank" href="http://www.jurology.com/article/S0022-5347(16)01357-4/abstract">"sometimes a sham is just a sham" - why the rodent model of partial bladder outlet obstruction needs adjustment.</a> J Urol. 195 (4), e379(2016).</li>
<li>Jin, L. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Persistent+detrusor+overactivity+in+rats+after+relief+of+partial+urethral+obstruction%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Regul.+Integr.+Comp.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Persistent detrusor overactivity in rats after relief of partial urethral obstruction.</a> Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 301 (4), R896-R904 (2011).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Dierlijke mortaliteit is een van de belangrijkste zorgen van het traditionele model van pBOO aan het proximale urethra, 15% of meer in vele rapporten 10, 11, 13. NeMO schijnt minimale mortaliteit wanneer toegepast bij vrouwelijke ratten. Proximale urethrale obstructie bij muizen is technisch moeilijker dan bij ratten en dus nog meer kans op complicaties. Met behulp van een 26-gauge canule als een tijdelijke aan...

Partiële obstructie van de blaas (pBOO) een hoge prevalentie en kan leiden tot ernstige blaasdisfunctie 1; het reikt van aangeboren afwijkingen zoals posterieure urethrale kleppen of hypospadias, dan verworven urethrale stricturen goedaardige prostaathyperplasie. De laatste die meer dan 30% van de mannen van zestig jaar en ouder 2. Grote patiënt last en de enorme kosten van de gezondheidszorg in verband met pBOO rechtvaardigen de aanzienlijke onderzoeksinspanning in het bestuderen van de blaas remodeling gezet in reactie op een verhoogde uitstroom weerstand 3. Van 2006 tot 2015 meer dan 220 PubMed geïndexeerd artikelen verschenen over het effect van pBOO op de urineblaas. Hoewel diermodellen voor pBOO bedacht in verscheidene species 4, zoals de rat 5, 6 konijnen, varkens 7 en mouse 8, 9, waarschijnlijk de meest gebruikte diermodel zijn echter vrouwtjesratten gedeeltelijke obstructie van de proximale urethra ondergaan; toegang tot buik van het dier, exteriorizing van de blaas en dissectie rond de blaashals zijn onvermijdelijk bij deze traditionele proximale urethraobstructie techniek. Variabiliteit in de mate van obstructie en dierlijke mortaliteit zijn slechts enkele van de problemen in verband met deze procedure 10, 11; We toonden aan dat schijn geopereerde dieren, dissectie rond het proximale urethra leidt tot fysiologische veranderingen die samenhangen met verlies van zenuwvezels in de blaashals 12. Deze bevinding geeft aan, dat de meest gebruikte pBOO diermodel, wat inhoudt toegang tot proximale urethra bij vrouwelijke knaagdieren leidt tot een denervatie verwonding met bijbehorende structurele en functionele veranderingen van de blaas, waardooren sham dieren belemmerd. Daarom werd een alternatieve benadering van het vermijden van denervatie letsel nodig is. Ons laboratorium ontwikkeld en geëvalueerd een zenuwsparende Mid-urethraobstructie (Nemo) benadering, effectief in het induceren van verwachte-obstructie geassocieerde veranderingen in de blaas, zoals verhoging van de orgel massa en achterblijvende urine, terwijl de pseudo-geopereerde dieren te onderscheiden van niet-geopereerde controle dieren waren . Ook de dwarsgestreepte urethrale sfincter onveranderd gebleven aangezien het ligt proximaal tot het niveau van dissectie. Bovendien variabiliteit in-obstructie veroorzaakte toename blaas massa was significant lager dan bij traditionele proximale urethrale obstructie en dierlijke mortaliteit nul. We hebben ook met succes toegepast NeMO bij vrouwelijke muizen met een sterfte van minder dan 10% in belemmerd dieren, terwijl alle pBOO modellen voor muizen tot nu toe beschreven werden in verband gebracht met een sterftecijfer rond de 50%. Het bestuderen blaas remodeling in het kader van pBOO in muizen zullen profiteren van applicabilteit van het hele spectrum van transgene modificaties. Ontleden rond het midden-urethra bij vrouwelijke knaagdieren niet de ongewenste en verwarrende structurele of functionele veranderingen in de urineblaas waargenomen in de traditionele proximale obstructie te induceren. Desalniettemin induceren een gedeeltelijke obstructie in het mid-urethrale level induceert steeds blaas hypertrofie en toegenomen urineresidu, zoals verwacht van een diermodel voor pBOO. Belangrijker uitvoeren NeMO bij muizen opent onderzoek blaas remodeling in pBOO transgene werkwijzen die nauwelijks beschikbaar in grotere knaagdieren.

<table><tbody><tr><td>Vrouwelijke rat&nbsp;</td><td>Charles-River Canada</td><td>Sprague Dawley Rat (Crl:SD); Strain Code: 400</td><td>ongeveer 200 g</td></tr><tr><td>Isoflorane verdamper</td><td>Benson medical industries inc.</td><td>TEC III Isoflurane; product code: 53-T3ISO&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Isoflorane</td><td>Fresenius Kabi Animal Health</td><td>Isoflorane; product code CP0406V2</td><td>&nbsp;250 mL fles</td></tr><tr><td>Wegwerp scalpel</td><td>Ted Pella, Inc.</td><td>#15 Sterile, Stainless Steel Scalpels; catalogue number 549-9-15S</td><td></td></tr><tr><td>Microscooptang</td><td>Ted Pella, Inc.</td><td>Aesculap Microscopy Forceps, Finepoint, 115mm; product number 5443</td><td></td></tr><tr><td>Adson-tang</td><td>Ted Pella, Inc.</td><td>Aesculap Adson Dissection Forceps, Curved, 120mm; product number 5002-9</td><td></td></tr><tr><td>Geboogde chirurgische schaar</td><td>Ted Pella, Inc.</td><td>Surgical Scissors, Curved, S/S, 105mm; catalogue number 1376</td><td></td></tr><tr><td>0,9 mm roestvrijstalen metalen staaf</td><td>goodfellow.com</td><td>Stainless Steel - AISI 316L Wire Diameter:0,9mm; bestelcode 911-684-65</td><td></td></tr><tr><td>Hudhaakjes - zelf gemaakt van roestvrij staal</td><td>goodfellow.com</td><td>Stainless Steel - AISI 316L Wire Diameter:0,9mm; bestelcode 911-684-65</td><td></td></tr><tr><td>4-0 Zijde draad</td><td>esutures.com</td><td>4-0 Sofsilk black 98" strand; product number LS640</td><td></td></tr><tr><td>5-0 Vicry draad</td><td>esutures.com</td><td>5-0 Vicryl undyed 27" RB-1 taper; product number J213H</td><td></td></tr><tr><td>Naaldhouder</td><td>Medsupplier.com</td><td>Integra Miltex Carb-N-Sert Baumgartner Needle Holder - 5 1/2"; product code SKU NEE4484-8-40TC SKU NEE4484-8-40TC SKU NEE4484-8-40TC&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Temgesic (Buprenorphine)</td><td>first veterinary supply</td><td>Buprenex 0,3MG/ml inj amps; item #075701</td><td></td></tr><tr><td>1 mL spuit met 27 G naald</td><td>Fisher Scientific</td><td>BD&nbsp;Tuberculin Syringe, BD 309623</td><td></td></tr><tr><td>20 G Angiocath</td><td>Fisher Scientific</td><td>Andwin Scientific&nbsp;ANGIOCATH 20 GA; Catalog No. NC9561906</td><td></td></tr><tr><td>Hersteldieet</td><td>clearh2o</td><td>DietGel 31M; 72-08-5022</td><td></td></tr><tr><td>C57Bl/6 vrouwelijke muizen</td><td>Charles-River Canada</td><td>C57BL/6 Mouse (C57BL/6NCrI); Strain Code: 027</td><td>ongeveer 18 g</td></tr><tr><td>24 G angiocath</td><td>Fisher Scientific</td><td>Hanna Pharmaceutical Supply Co., Inc.&nbsp;IV CATH ANGIOCATH 24GX3/4IN; Catalog No. NC9814340</td><td></td></tr><tr><td>5-0 Ethibond</td><td>esutures.com</td><td>5-0 Ethibond green 30" RB-1 taper; product number X550H</td><td></td></tr><tr><td>26 G spuitnaald</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>BD Precisionglide syringe needle, Gauge 26; z192392</td><td></td></tr><tr><td>Normale zoutoplossing</td><td>Baxter</td><td>0,9% Sodium Chloride Injection, USP, 100 mL MINI-BAG; product code 2B0043</td><td></td></tr></tbody></table>

zenuwsparende mid-urethraobstructie (nemo) in vrouwelijke kleine knaagdieren

Nerve-sparing Mid-urethral Obstruction (NeMO) in Female Small Rodents

Gedeeltelijke obstructie van de blaas (pBOO) heeft een hoge prevalentie, veroorzaakt aanzienlijke patiënt last, en de enorme kosten van de gezondheidszorg. De meest voorkomende diermodel blaas remodeling onderzoeken pBOO zijn vrouwelijke knaagdieren ondergaan gedeeltelijke obstructie in het proximale urethra. Variabiliteit in de mate van obstructie en dierlijke sterfte zijn belangrijke zorgen met proximale obstructie. Verder ontleden rond het proximale urethra en de blaashals gevaar blaas innervatie. We ontwikkelden een zenuwsparende mid-urethraobstructie (Nemo) model voor pBOO het vermijden van de nadelen van het traditionele model. We benaderden de urethra gewoon inferieur aan de symfyse, waardoor de behoefte aan laparotomie evenals voor dissectie op dit gebied te ondervangen; Ook de dwarsgestreepte urethrale sfincter intact gebleven. We voerden NeMO bij vrouwelijke Sprague-Dawley ratten (12 obstakels, 6 sham dieren) en bij vrouwelijke C57 / BL6 muizen (20 obstructies, 18 sham dieren). Na twee weken geëvalueerd we blaasfunctie, blaas massa en body mass. We hadden geen sterfte onder obstructed- of schijn-geopereerde vrouwelijke ratten; zoals beschreven voor de traditionele proximale pBOO-methode, gebonden we de hechtdraad rond het proximale urethra en een tijdelijk geplaatste 0,9 mm metalen staaf. NeMO veroorzaakte een 85% toename in de blaas massa na twee weken, gemiddelde resterende urinevolume werd 0,4 ml in ratten is vervuild, terwijl slechts 0,03 ml bij sham dieren. In muizen, testten we 3 maten van canules die wij geplaatst langs de urethra bij het binden van de hechtdraad. We vonden dat het gebruik van een 27-gauge canule geresulteerd in meer dan 50% van dieren sterfte; het plaatsen van de 25-gauge canule niet de gewenste respons bij toenemende blaas massa te verkrijgen; toepassing van een 26-gauge canule leverde goede resultaten met minimale dierlijke mortaliteit (1/8) nog een aanzienlijke 2-voudige toename in massa blaas.

Zenuwsparende Mid-urethraobstructie (Nemo) bij vrouwelijke ratten Sterfte We voerden een mid-urethraobstructie over meer dan 40 vrouwelijke ratten zo ver en had geen sterfte. blaas massa Gemiddelde relatieve blaas...

Traditionele modellering van partiële obstructie van de blaas bij knaagdieren is beladen met dierlijke mortaliteit. Een denervatie letsel door dissectie rond het proximale urethra en de blaashals is ook van groot belang. We ontwikkeld en geëvalueerd een veilige en betrouwbare mid-urethraobstructie model, het vermijden van de tekortkomingen van de traditionele model.

Zenuwsparende Mid-urethraobstructie (Nemo) in vrouwelijke kleine knaagdieren

Partial bladder outlet obstruction (pBOO) has a high prevalence, causes significant patient burden, and immense health care costs. The most common animal ...

Het algemene doel van deze techniek is om chirurgisch een gedeeltelijke obstructie van de blaasuitgang te creëren bij kleine vrouwelijke knaagdieren, waarbij de innervatie van de blaasuitgang behouden blijft, met een lage morbiditeit bij de dieren, nagenoeg geen mortaliteit en weinig variabiliteit in de graad van obstructie. Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van kernvragen over obstructie-geïnduceerde remodellering van de blaas, zoals: wat zijn de genexpressiepatronen en epigenetische veranderingen die geassocieerd zijn met een obstructie van de uitgang? De belangrijkste voordelen van deze techniek zijn dat deze betrouwbaar is en dat dissectie rond de blaasnek vermeden wordt, waardoor de innervatie van de blaasuitgang gespaard blijft.De implicaties van deze techniek strekken zich uit tot de therapie van blaasobstructie, omdat de fase na de verlichting en de herstelfase op een reproduceerbare manier kan worden beoordeeld. Herstel van blaasobstructie is bij mensen onvoorspelbaar. Met behulp van deze techniek kan de obstructie worden opgeheven, waardoor de cel- en weefselresponsen die geassocieerd zijn met het herstel van de obstructie kunnen worden geëvalueerd.Wij hebben deze methode verder uitgewerkt toen we opmerkten dat traditionele, meer proximale obstructie gepaard ging met aanzienlijke ongewenste blaasdysfunctie en dysmorfisme, zelfs na sham-dissecties zonder daadwerkelijke chirurgische obstructie. Begin met het plaatsen van een vrouwelijke rat van 200 gram op een warmtemat en zet de ledematen en de staart met tape vast. Desinfecteer vervolgens en plaats steriele handdoeken zonder de onderbuik te bedekken.Gebruik vervolgens een angiokatheter van 20 gauge om de blaas te catheteriseren en bevestig de katheter met plakband. Maak daarna, onder een dissectiemicroscoop, met een scalpel een longitudinale huidincisie van acht millimeter vanaf de tastbare pubic synthesis in de richting van de urethrale meatus. Til de huid aan weerszijden van de incisie op om de latere sluiting te vergemakkelijken, en gebruik fijne scharen om de longitudinale spreiding bot te dissecteren om de verkorte urethra te identificeren.Plaats fijne zelfhoudende huidhaken om de blootstelling van de urethra te verbeteren en gebruik vergelijkbare botte dissectie om het ventraal verlopende neurovasculaire bundel op te tillen. Ontwikkel met gebogen scharen en voorzichtig longitudinaal spreiden het vlak tussen de urethra en de vagina, dorsaal van de urethra. Haal nu botten een 4-0 zijden hechtdraad achter de urethra door en bereid de dubbele slag van een chirurgische knoop voor.Verwijder vervolgens de angiokatheter en plaats een metalen staaf van 0,9 millimeter parallel aan de urethra. Trek de knoop rond de urethra en de metalen staaf aan, zodat de staaf nog steeds gemakkelijk kan worden uitgeschoven, en zet de knoop vast met drie extra lichte slagen. Verwijder na de laatste slag de staaf en knip de uiteinden van de hechting af tot een lengte van ongeveer drie tot vier millimeter, waarbij een gevarieerde enkelvoudige steek met absorbeerbare gevlochten 4-0 hechtdraad wordt gebruikt om de paraurethrale klieren te benaderen.Sluit vervolgens de huid met een variabele horizontale matrashechting, met gebruik van dezelfde resorbeerbare hechtdraad, en injecteer de passende analgesie. Voor zenuwbesparende obstructie van de mid-urethra, of NeMO bij muizen, plaats een vrouwelijke C-57 black-6 muis van 18 gram in rugligging op een warmtepad en zet de ledematen vast met tape. Desinfecteer vervolgens en plaats steriele handdoeken zonder de onderbuik te bedekken.Katheterise vervolgens, onder een dissectiemicroscoop, de blaas met een angiokatheter van 24 gauge en zet de katheter vast met tape. Gebruik onder een dissectiemicroscoop een scalpel om een longitudinale huidincisie van zes millimeter te maken, vanaf de tastbare pubische symfyse in de richting van de urethrale meatus. Disseceer vervolgens bot met een fijne schaar om de verkorte urethra te identificeren.Ontwikkel, door middel van voorzichtig longitudinaal spreiden dorsaal van de urethra, het vlak tussen de urethra en de vagina. Voer vervolgens een 5-0 niet-absorbeerde gevlochten hechtdraad stomp achter de urethra door en bereid een dubbele chirurgische knoop voor. Sluit nu een spuit van één milliliter aan op de angiokatheter en injecteer 0,1 milliliters normale zoutoplossing in de blaas.Wanneer alle zoutoplossing is toegediend, wordt de knoop gebruikt om een 26 gauge canule voorzichtig parallel aan de urethra te verankeren, terwijl de angiocath wordt teruggetrokken. Bevestig de knoop met nog drie voorzichtig aangebrachte slagen, verwijder vervolgens de canule en oefen lichte druk uit op de blaas om te controleren of er urine bij de meatus verschijnt. Knip de uiteinden van de hechtdraad af tot ongeveer drie millimeter.Gebruik vervolgens een 5-0 gevlochten absorbeerbare hechtdraad om de huid te sluiten met een variabele horizontale matrashechting, en injecteer de passende analgesie voordat de muis in een herstelkooi wordt geplaatst. De gemiddelde relatieve ratio tussen blaasmassa en lichaamsmassa bij NeMO schijnbehandelde ratten is 0,33% twee weken na de procedure, terwijl dit voor de geretteerde ratten 0,6% is, een toename van 85% in de relatieve blaasmassa bij deze dieren. NeMO schijnbehandelde ratten vertonen vrijwel geen residu-urine die ten tijde van de orgaanwinning via een blaaspunctie kan worden geaspireerd.Geobstrueerde dieren vertonen, zoals afgesproken, een significant groter gemiddeld volume aan residuele urine, namelijk 0,42 milliliters. Over het algemeen neemt de muistersterfte bij sham- en NeMO-geopereerde dieren toe naarmate de maat van de plaatsvullende canule afneemt. Bovendien verhoogt het gebruik van een 25 gauge canule de ratio tussen blaas- en lichaamsmassa bij muizen niet effectief, terwijl het gebruik van een 26 gauge canule resulteert in een meer dan tweevoudige toename van de relatieve blaasmassa.Wanneer een placeholder van 27 gauge wordt geplaatst, wordt twee weken na de procedure een toename van meer dan 60% in de relatieve blaas Massa waargenomen. Daarnaast heeft een partiële obstructie van de blaasuitgang met een canule van 25 of 26 gauge langs de urethra geen invloed op het residu-urinevolume over de experimentele periode van twee weken. Dieren met een placeholder van 27 gauge vertonen echter een drievoudige gemiddelde toename van het residu-urinevolume in vergelijking met hun respectievelijke sham-geopereerde groepsgenoten.Na enige oefening kunnen zowel de NeMO- als de NeMO-shamprocedures in 10 tot 15 minuten worden voltooid. Bij het uitvoeren van NeMO bij muizen is het belangrijk om eraan te denken de mogelijkheid van een volledige obstructie uit te sluiten door voorzichtig wat urine uit te drukken voordat het dier wordt gesloten. Na deze procedure kunnen andere methoden, zoals de inclusie van proximale sham-dieren, worden uitgevoerd om aanvullende vragen te beantwoorden over de relatieve bijdrage of associatie van lokale neurogene uitstroomstimuli aan het ontstaan van blaasdisfunctie, dysmorfisme en gendysregulatie.Er wordt verwacht dat deze techniek de weg vrijmaakt voor onderzoekers op het gebied van obstructieve blaasmyopathie om te onderzoeken hoe anatomische en neurogene verstoringen van de blaasuitgang bijdragen aan het ontstaan van en het herstel van uitstroomobstructie.

nerve-sparing-mid-urethral-obstruction-nemo-in-female-small-rodents

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

De Gespaard zenuwletsel diermodel is hier beschreven als een muis model van perifere neuropathische pijn na een gedeeltelijke denervatie van de nervus ischiadicus door lesioning het scheenbeen en de gemeenschappelijke peroneus takken, waardoor de resterende Sural zenuw intact. Gedragsverandering als gevolg van mechanische allodynie wordt gekwantificeerd door von Frey filamenten.

De Gespaard Nerve Injury (SNI) Model van Induced mechanische allodynie in Muizen

Cystometry is een efficiënte techniek om de blaas functie van kleine dieren te...

Het gebruik van Cystometry in kleine knaagdieren: Een studie van de blaas Chemosensation

Ongeveer 3-8.000.000 mensen in de Verenigde Staten heeft last van interstitiële cystitis / pijn in de blaas syndroom (IC / BPS), een invaliderende aandoening die gekenmerkt wordt voor een deel door bekkenpijn. Om zenuwstelsel bijdragen aan de toestand te bestuderen, is een fysiologisch model urineblaas pijn in muizen en ratten.

Urineblaas Uitzetting Evoked visceromotorische Responses als een model voor de pijn in de blaas in Muizen

De gevestigde model van transuretrale catheterisatie van muizen kan de studie blaas aandoeningen, met inbegrip van infectie van de urinewegen, maar kan alleen worden uitgevoerd bij vrouwtjes. Een nieuw model van mannelijke transuretrale instillation, gepresenteerde, kan onderzoek op een gebied dat gekenmerkt door sterke klinische en epizoötiologische verschillen tussen de geslachten.

Urineweginfectie in een kleine diermodel: transuretrale catheterisatie van mannelijke en vrouwelijke muizen

We presenteren een methode voor het vaststellen van een detrusor onderactiviteitsmodel door conus medullaris transection bij ratten. Detrusor onderactiviteit werd bij deze dieren met succes gestimuleerd. Het model kan worden gebruikt voor het bestuderen van de urinewegfunctie.

Detrusor Underactivity Model bij ratten door Conus Medullaris Transection

De aangepaste chirurgie is een vereenvoudigde methode voor een model voor gespaard zenuwletsel bij muizen of ratten dat slechts één ligatie en één snede vereist om zowel de gemeenschappelijke peroneale als de surale zenuwen te verwonden.

Gemodificeerd model voor gespaard zenuwletselchirurgie van neuropathische pijn bij muizen

Partiële heupzenuwligatie induceert langdurige chronische neuropathische pijn, gekenmerkt door overdreven reacties op thermische en mechanische stimuli. Dit muismodel van neuropathische pijn wordt vaak gebruikt om innovatieve therapieën voor pijnbestrijding te bestuderen. Dit artikel beschrijft in detail de chirurgische procedure om de standaardisatie en reproduceerbaarheid te verbeteren.

Partiële heupzenuwligatie: een muismodel van chronische neuropathische pijn om het antinociceptieve effect van nieuwe therapieën te bestuderen

Dit protocol biedt een richtlijn voor het waterdicht maken van de huid met cyanoacrylaat om opname van urine door vacht en huid te voorkomen. Het bevat instructies voor het aanbrengen van de lijm op de huid, het implanteren van een blaaskatheter en elektroden voor cystometrie en elektromyografie-opnamen van externe urethrale sluitspier bij wakkere muizen.

Optimalisatie van urodynamische technieken van muizen voor verbeterde nauwkeurigheid 

Het huidige protocol beschrijft een stapsgewijs, reproduceerbaar model van eenzijdige ureterobstructie.

Een onrijp muizenmodel van omkeerbare unilaterale ureterobstructie

Dit protocol presenteert een reproduceerbaar rattenmodel dat sensorische zenuwen gebruikt om menselijke neuroompijn na te bootsen en chirurgische behandelingen te beoordelen, en biedt een waardevol hulpmiddel voor translationeel neuroomonderzoek.

Nieuw chirurgisch knaagdiermodel voor het bestuderen van opties voor de behandeling van neuroompijn met behulp van gerichte spierreïnnervatie door de nervus saphenos

Leer een zenuwsparende chirurgische methode voor partiële blaasuitgangsobstructie bij vrouwelijke kleine knaagdieren. Deze techniek minimaliseert morbiditeit en mortaliteit terwijl consistente obstructieniveaus worden bereikt voor betrouwbaar onderzoek.

Zenuwsparende Mid-urethraobstructie (Nemo) in vrouwelijke kleine knaagdieren

Meer video's verkennen