Name: Isolatie van circulerende tumorcellen in een orthotopische muismodel van colorectale kanker (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-07-18T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 19 s
Description: Leer een microchirurgische techniek voor het injecteren van colorectale tumorcellen in de cecumwand van muizen. Deze methode maakt isolatie van circulerende tumorcellen mogelijk voor betrouwbaar onderzoek naar metastase.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd ondersteund door de Duitse Onderzoeksstichting (WE 3548 / 4-1) en Roland-Ernst-Stiftung für Gesundheitswesen (1/14).

De hier gepresenteerde dierproeven werden onafhankelijk beoordeeld en toegestaan ​​door een institutioneel en een overheidsdier voor dierenwelzijn en gebruik en werden uitgevoerd volgens de richtlijnen van de Federatie van Laboratorium Diervoederverenigingen (FELASA). Alle mogelijke maatregelen werden genomen om het lijden te verminderen, met inbegrip van verdoving en analgesie of, indien nodig, vroegtijdige euthanasie. 1. Bereiding van cellen en organoïden OPMERKING: Gebruik een volume van 20 μL met 100.000 cellen voor elke injectie. Gebruik basementmembraanmatrix (BMM) om lekkage te voorkomen en een gestandaardiseerde injectie te waarborgen. Om de reproduceerbare resultaten te waarborgen, moet u met regelmatige intervallen celleline authentication analyses uitvoeren ( bijvoorbeeld via STR profilering). <ol><li> Bereiding van primaire cel suspensies van vers weefsel OPMERKING: Werk altijd onder steriele omstandigheden. Onmiddelijke overdracht van de versGeresecteerd weefsel van de operatiekamer naar het laboratorium op ijs is nodig om de levensvatbaarheid van de cellen te waarborgen. Het welzijn van de patiënt en de optimale behandeling moeten altijd de eerste prioriteit zijn. Daarom moeten weefselmonsters voor onderzoek worden verkregen op een manier die geen interferentie met de daaropvolgende pathologische opbouw en opstelling van de gereserveerde tumor. In de meeste gevallen is het daarom redelijk om de monsters te hebben voor onderzoek verkregen door een getrainde patholoog om ervoor te zorgen dat de pathologische diagnose niet wordt verstoord. <ol><li> Onmiddellijk na steriele verwijdering van het geresecteerde monster (ideaal ~ 1 cm 3 ), plaats het weefselmonster in een 50 ml buis, vooraf gevuld met 20-30 ml fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS). Bewaar de buis op ijs en breng onmiddellijk naar het laboratorium. </li><li> Leg het weefsel in een Petri-schotel en doe het tweemaal met veel PBS om het resterende bloed te verwijderen. </li><li> Snijd het weefsel in kleine stukken (~ 2-4 mm) met een scaLpel ( bijv . Met een # 20 of # 36 blad). </li><li> Gebruik de dissociator volgens de instructies van de fabrikant om het tumorweefsel verder te dissociëren naar een enkelcelsuspensie. Alternatieven, gebruik andere protocollen van enzymatische tumorvertering. </li><li> Tel de cellen van de resulterende enkelcelsuspensie ( bijv . In een coulterteller of een hemocytometer). </li><li> Centrifuge (5 minuten bij 1.500 xg) en was de cel suspensie tweemaal met PBS. </li><li> Resusteer de cellen in BMM bij een concentratie van 5 x 10 6 cellen / ml en houd ze op ijs. </li></ol></li><li> Bereiding van cellijnen voor injectie <ol><li> Groei alle cellijnen van de colorectale kanker onder de normale cultuuromstandigheden (37 ° C, 5% CO 2 ) en bereiding op de dag van de operatie. </li><li> Oog de cellen volgens de standaardcellen voor culturele cellen, tel de cellen ( bijv . In een coulterteller of een hemocytometer) en bereken de reqOngewenste hoeveelheid voor alle injecties afhankelijk van het aantal geïnjecteerde dieren. </li><li> Bereid 3-5x van het daadwerkelijk benodigde volume om rekening te houden met pipetteringsverliezen en het dode volume van de injectiespuit. </li><li> Centrifuge (5 minuten bij 1.500 g) en was de cel suspensie tweemaal met PBS. </li><li> Resusteer de cellen in BMM bij een concentratie van 5 x 10 6 cellen / ml en houd ze op ijs. </li></ol></li><li> Organoïde bereiding OPMERKING: Alle 3D organoïdeculturen worden gekweekt onder standaard cultuuromstandigheden (37 ° C, 5% CO 2 ). Gedetailleerde protocollen voor organo-cultuur zijn eerder gepubliceerd. 18 , 19 , 20 In vergelijking met conventionele cellijnen adviseren we een volume van 20 μL BMM met 100.000 cellen per injectie. De organoïden worden op de dag van de operatie opgesteld als volgt: <ol><li> Bereid het volgende medium voor (in de volgende verwijzingAls DMEM / F12 +++): Geavanceerde Dulbecco&#39;s Modified Eagle&#39;s Medium (DMEM) / F12 + 1% HEPES (1M) + 1% Glutamine (200 mM) + 1% Penicilline / Streptomycine. </li><li> Pre-fill 15 ml buizen met 1 ml DMEM / F12 +++. </li><li> Sorg de organoïden zorgvuldig uit het oppervlak van de kweekplaat en verplaats de inhoud van 3 tot 5 putjes in een 15 ml buis. </li><li> Pak de organoïden zorgvuldig in kleinere stukken door ze op en neer te pipetteren met een verlengde glazen pipet. </li><li> Voeg 5 ml DMEM / F12 +++ aan de buis toe, gevolgd door centrifugeren bij 1000 xg gedurende 5 minuten. </li><li> Verwijder na het centrifugeren de supernatant, resuspendeer de pellet in 600 μl enzymatische dissociatiebuffer en draag de suspensie over naar een putje van een 6-putjesplaat. </li><li> Incubeer gedurende 1-5 minuten bij 37 ° C en pipet de suspensie op en neer met zorg om de organoïden op te lossen. OPMERKING: Controleer de spijsvertering via microscoop; Het is compleet als alle celclusters zijn gedistribueerdD naar enkele cellen. </li><li> Na succesvolle spijsvertering, voeg 1,4 ml DMEM / F12 +++ toe om de spijsvertering te stoppen. Vervolgens alle putjes van verteerde organoïden overbrengen naar een 50 ml buis. </li><li> Tel de cellen en bereken de benodigde hoeveelheid voor alle injecties. </li><li> Bereid 3 - 5x van het daadwerkelijk benodigde volume om rekening te houden met pipetteringsverliezen en het dode volume van de injectiespuit </li><li> Centrifuge (5 minuten bij 1.500 xg) en was de cel suspensie tweemaal met PBS. </li><li> Resuspendeerde de cellen in BMM tot een concentratie van 5 x 10 6 cellen / ml en houd ze op ijs. </li></ol></li></ol> 2. Orthotopische muismodel <ol><li> Voorbereiding van ontvanger dieren voor operatie OPMERKING: Gebruik 6-8 week oude NOD.Cg-Prkdc scid Il2rg tm1Wjl / SzJ (NOD scid gamma, NSG) muizen als ontvangers. 21 NSG behoren tot de meest immunocompromised muizen, die volwassen B, T en NK cellen ontbreken, samen met meerdere andere immunefects. 21 Ze groeien betrouwbaar tumoren, zelfs als lage cijfers worden geïnjecteerd en zeer gevoelig zijn voor verre metastasen. NSG muizen zijn uitstekende fokkers en kunnen worden bewaard in conventionele specifieke pathogeenvrije (SPF) eenheden. <ol><li> Voor de eerste incisie injecteer 0,05 mg / kg buprenorfine subcutaan. </li><li> Gebruik sevofluraan bij 3-3,5 vol% voor algemene verdoving. Een verlies van de teenvliesreflex geeft voldoende narkose aan. </li><li> Bedek de ogen van de verdoofde muizen met oftalmische zalf om uitdroging van de hoornvlies te vermijden. </li><li> Houd de muizen in een rugliggende positie op een kleine tafel. </li><li> Scheer de buik met een elektrische scheerapparaat (afzettende crème kan alternatief worden gebruikt) en desinfecteren met ten minste 3 keer clorhexidine / jodium en 70% alcohol. </li><li> Bedek het chirurgische veld met steriele gordijnen. OPMERKING: Het gebruik van perioperatieve antibiotica is facultatief en onderworpen aan institutionele richtlijnen. </li></ol></li><li> Midline laparotomie en blootstelling van de cecum <ol><li> Gebruik een schaar (scalpels kunnen alternatief worden gebruikt) om een ​​kleine middenlijninsnijding (3 - 5 mm) van de huid op de onderbuik te maken. Pak de buikspiermuskulatuur op met pincet en zorg het voorzichtig met een schaar, zodat de buikholte wordt geopend. </li><li> Identificeer en zorgvuldig exterieur de cecum met atraumatische tang. Plaats het blinde uiteinde van de cecum op de buik die craniaal wijst. </li><li> Eens exterieur, houd de cecum vochtig met behulp van warme zoutoplossingen te allen tijde. </li></ol></li><li> Orthotopische injectie, sluiting van de buik en postoperatieve herstel <ol><li> Voor intracale injectie, gebruik een standaard 1 ml spuit met een 30 G canule. Monteer deze spuit op een microinjectiepomp, die op zijn beurt wordt gemonteerd op een micromanipulator. </li><li> Grijp het punt van de cecum zorgvuldig met atraumatische pincet en verzacht het zachtjes door het naar beneden te buigenD met een tweede reeks tangjes bevochtigd met warme zoutoplossing. </li><li> Plaats de canule direct boven de cecum. </li><li> Voer de volgende stappen uit onder visuele controle met een binoculaire chirurgische microscoop. </li><li> Pak de cecum voorzichtig met twee atraumatische tangen aan beide uiteinden van het buitenste gedeelte van de cecum, steek het licht uit en trek het langzaam over de canule, die parallel en recht boven is geplaatst. Het is van cruciaal belang de gehele darmmuur niet te perforeren (waardoor de cellen in het lumen worden ingezet), evenals de serosa niet te perforeren boven het beginpunt van de penetratie, omdat dit lekkage en peritoneale verspreiding zou veroorzaken. <ol><li> Verplaats de darm naar de canule, niet de canule naar de darm. Houd de darm vast tussen twee tangen. De handen van de chirurg moeten op een oppervlak rusten om tremor te verminderen. </li></ol></li><li> Spuit de cellen tussen de serosa (gezien als zeer dun, doorschijnend voering boven deE intramurale bloedvaten) en de muscularis. De canule moet dus visueel boven de bloedvaten en onder het dunne doorschijnende membraan worden geplaatst. </li><li> Gebruik een voetschakelaar om de injectie te starten om tremor te verminderen terwijl de canula in de darmwand ligt. </li><li> Zodra de canule in positie is, start de injectie. Gebruik een duur van 20 s, wat resulteert in 1 μL / s instelling op de besturing van de pomp. OPMERKING: De injectie in of nabij een beschadigd bloedvat leidt tot directe intravasculaire verspreiding en verre metastase en moet daarom vermeden worden. </li><li> Na de injectie af te maken, verwijder de canule zorgvuldig door deze naar achteren te trekken. </li><li> Plaats een droge zwabber onder de cecum en doe de cecum grondig met gedestilleerd water om lekcellen te lichten en voorkom kunstmatige peritoneale verspreiding. </li></ol></li><li> Sluiting van de buik en postoperatieve herstel <ol><li> Na rTerugzetten, de cecum voorzichtig terugzetten naar de buikholte. </li><li> Sluit de buikwand met 6-0 snel absorbeerbare lopende hechtingen. </li><li> Sluit de huid met chirurgische wondklemmen. </li><li> Plaats de muis op een verwarmingscartridge die ingesteld is op 38 ° C tot het volledig is hersteld van de verdoving. </li><li> Let op de postoperatieve conditie van de muizen voor de volgende 48 uur. In geval van nood behandel u elke 12 uur met 0,05 mg / kg buprenorfine. </li><li> Monitor de muizen ten minste eenmaal per dag voor tekenen van nood als gevolg van tumorgroei. </li></ol></li></ol> 3. Isolatie van circulerende tumorcellen uit hele bloedmonsters OPMERKING: Verkrijg bloed door transcutane hartsporing op verdovende muizen, gevolgd door euthanasie. Ideaal gezien worden 1000 μL bloed getrokken in een spuit die wordt gevuld met 100 μl van een anticoagulant (Ethyleendiamintetraazijnzuur (EDTA) of heparine). Gebruik een anti-humaan-EpCAM (epitheliale celadhesieMolecuul) antilichaam om de CTC&#39;s te identificeren. Dit werkt zeer goed als menselijke epitheliale cellijnen worden gebruikt in het muismodel. Voor andere apparaten kunnen verschillende antilichamen nodig zijn. <ol><li> CTC verrijking: <ol><li> Voorvervul 15 ml buizen met 5 ml dichtheidsgradiëntmedium en plaats het bloed zorgvuldig in de 15 ml buis. </li><li> Centrifuge (30 minuten bij 300 xg zonder rem) en verwijder de bovenste supernatant zorgvuldig. </li><li> Giet de rest in een nieuwe 15 ml buis en centrifugeer (15 min, 300 xg met rem). </li><li> Herstel de interfase die de mononucleaire cellen bevat (verwijder de rest) en doe de cellen tweemaal met PBS. </li><li> Resulteer de pellet in 200 μl PBS / 1% EDTA en voeg 4 μL EpCAM antilichaam toe. Incubeer 20 minuten op ijs in het donker. </li></ol></li><li> Screening en plukken <ol><li> Bereid de volgende buffer voor (in het volgende aangeduid als plukbuffer): PBS + 10% foetaal kalfserum (FCS) + 1% Penicilline / STreptomycine (1%) + 0,8% EDTA. </li><li> Gebruik een PAP-pen om een ​​cirkel van ongeveer 1 cm in een 6 cm steriele Petri-schaal te trekken (voorkomt dat de vloeistof in de schotel verspreidt), en pipet 700 μL plukbuffer in deze cirkel. </li><li> Voeg 50 μL cel suspensie toe aan de 700 μL plukbuffer binnen de cirkel. Controleer de dichtheid van cellen met de microscoop. Verdeel het monster in verschillende gerechten als het te dicht is. </li><li> Wacht tot de cellen zich neerzetten (~ 5 min). </li><li> Scherm de druppel cel suspensie voor gekleurde (= EpCAM-positieve) cellen. </li><li> Zodra een cel is gevonden, kies de cel met de micromanipulator en zet het in 50 μL buffer, afhankelijk van de beoogde stroomafwaartse analyse ( bijv . RNA-extractiebuffer of cultuurmedium). </li><li> Afhankelijk van de beoogde stroomafwaartse analyses isoleren EpCAM-negatieve cellen en / of medium als negatieve controles. </li><li> Ga door met downstream analyses ( bijvoorbeeld celcultuur, PCR). </li></ol></li></ol>

<ol><li>Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/26742998">Cancer statistics, 2016.</a> CA Cancer J Clin. 66 (1), 7-30 (2016).</li>
<li>Weitz, J., Koch, M., Debus, J., Höhler, T., Galle, P. R., Büchler, M. W. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/15639298">Colorectal cancer.</a> Lancet. 365 (9454), 153-165 (2005).</li>
<li>Schölch, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.smartscitech.com/index.php/CCM/article/view/323">Circulating tumor cells of colorectal cancer.</a> Cancer Cell Microenviron. 1 (5), (2014).</li>
<li>Steinert, G., Schölch, S., Koch, M., Weitz, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biology+and+significance+of+circulating+and+disseminated+tumour+cells+in+colorectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Langenbecks+Arch+Surg%22%5BJournal%5D)">Biology and significance of circulating and disseminated tumour cells in colorectal cancer.</a> Langenbecks Arch Surg. 397 (4), 535-542 (2012).</li>
<li>Bork, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prognostic+relevance+of+minimal+residual+disease+in+colorectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22World+J+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Prognostic relevance of minimal residual disease in colorectal cancer.</a> World J Gastroenterol. 20 (30), 10296-10304 (2014).</li>
<li>Bork, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circulating+tumour+cells+and+outcome+in+non-metastatic+colorectal+cancer%3A+a+prospective+study%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Cancer%22%5BJournal%5D)">Circulating tumour cells and outcome in non-metastatic colorectal cancer: a prospective study.</a> Br J Cancer. 112 (8), 1306-1313 (2015).</li>
<li>Rahbari, N. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Compartmental+differences+of+circulating+tumor+cells+in+colorectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Surg+Oncol%22%5BJournal%5D)">Compartmental differences of circulating tumor cells in colorectal cancer.</a> Ann Surg Oncol. 19 (7), 2195-2202 (2012).</li>
<li>Rahbari, N. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metastatic+Spread+Emerging+From+Liver+Metastases+of+Colorectal+Cancer%3A+Does+the+Seed+Leave+the+Soil+Again%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Surg%22%5BJournal%5D)">Metastatic Spread Emerging From Liver Metastases of Colorectal Cancer: Does the Seed Leave the Soil Again?</a> Ann Surg. 263 (2), 345-352 (2016).</li>
<li>Rahbari, N. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Meta-analysis+shows+that+detection+of+circulating+tumor+cells+indicates+poor+prognosis+in+patients+with+colorectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Meta-analysis shows that detection of circulating tumor cells indicates poor prognosis in patients with colorectal cancer.</a> Gastroenterology. 138 (5), 1714-1726 (2010).</li>
<li>Steinert, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+Escape+and+Survival+Mechanisms+in+Circulating+Tumor+Cells+of+Colorectal+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Immune Escape and Survival Mechanisms in Circulating Tumor Cells of Colorectal Cancer.</a> Cancer Res. 74 (6), 1694-1704 (2014).</li>
<li>Sharpless, N. E., Depinho, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mighty+mouse%3A+genetically+engineered+mouse+models+in+cancer+drug+development%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Drug+Discov%22%5BJournal%5D)">The mighty mouse: genetically engineered mouse models in cancer drug development.</a> Nat Rev Drug Discov. 5 (9), 741-754 (2006).</li>
<li>Roper, J., Hung, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Priceless+GEMMs%3A+genetically+engineered+mouse+models+for+colorectal+cancer+drug+development%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Pharmacol+Sci%22%5BJournal%5D)">Priceless GEMMs: genetically engineered mouse models for colorectal cancer drug development.</a> Trends Pharmacol Sci. 33 (8), 449-455 (2012).</li>
<li>Schölch, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radiotherapy+combined+with+TLR7%2F8+activation+induces+strong+immune+responses+against+gastrointestinal+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Radiotherapy combined with TLR7/8 activation induces strong immune responses against gastrointestinal tumors.</a> Oncotarget. 6 (7), 4663-4676 (2015).</li>
<li>Schölch, S., Rauber, C., Weitz, J., Koch, M., Huber, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TLR+activation+and+ionizing+radiation+induce+strong+immune+responses+against+multiple+tumor+entities%5BTitle%5D)+AND+%22Oncoimmunology%22%5BJournal%5D)">TLR activation and ionizing radiation induce strong immune responses against multiple tumor entities.</a> Oncoimmunology. 4 (11), e1042201(2015).</li>
<li>Schölch, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circulating+tumor+cells+exhibit+stem+cell+characteristics+in+an+orthotopic+mouse+model+of+colorectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Circulating tumor cells exhibit stem cell characteristics in an orthotopic mouse model of colorectal cancer.</a> Oncotarget. 7 (19), 27232-27242 (2016).</li>
<li>Nanduri, L. K., García, S., Weitz, J., Schölch, S. <a target="_blank" href="https://www.omicsonline.org/open-access/mouse-models-of-colorectal-cancerderived-circulating-tumor-cells-2161-0444-1000389.pdf">Mouse Models of Colorectal Cancer-Derived Circulating Tumor Cells.</a> Med Chem (Los Angeles). 6 (7), 497-499 (2016).</li>
<li>van Noort, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+Drug+Candidates+for+the+Treatment+of+Metastatic+Colorectal+Cancer+through+Global+Inverse+Gene-Expression+Profiling%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Novel Drug Candidates for the Treatment of Metastatic Colorectal Cancer through Global Inverse Gene-Expression Profiling.</a> Cancer Res. 74 (20), 5690-5699 (2014).</li>
<li>Sato, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+expansion+of+epithelial+organoids+from+human+colon%2C+adenoma%2C+adenocarcinoma%2C+and+Barrett%27s+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Long-term expansion of epithelial organoids from human colon, adenoma, adenocarcinoma, and Barrett's epithelium.</a> Gastroenterology. 141 (5), 1762-1772 (2011).</li>
<li>Boj, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organoid+models+of+human+and+mouse+ductal+pancreatic+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Organoid models of human and mouse ductal pancreatic cancer.</a> Cell. 160 (1-2), 324-338 (2015).</li>
<li>Gao, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organoid+cultures+derived+from+patients+with+advanced+prostate+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Organoid cultures derived from patients with advanced prostate cancer.</a> Cell. 159 (1), 176-187 (2014).</li>
<li>Ito, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NOD%2FSCID%2Fgamma%28c%29%28null%29+mouse%3A+an+excellent+recipient+mouse+model+for+engraftment+of+human+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">NOD/SCID/gamma(c)(null) mouse: an excellent recipient mouse model for engraftment of human cells.</a> Blood. 100 (9), 3175-3182 (2002).</li>
<li>Simon, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparative+phenotypic+and+genomic+analysis+of+C57BL%2F6J+and+C57BL%2F6N+mouse+strains%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Biol%22%5BJournal%5D)">A comparative phenotypic and genomic analysis of C57BL/6J and C57BL/6N mouse strains.</a> Genome Biol. 14 (7), R82(2013).</li>
<li>Kalish, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((C57BL%2F6N+Mice+Are+More+Resistant+to+Ehrlich+Ascites+Tumors+Than+C57BL%2F6J+Mice%3A+The+Role+of+Macrophage+Nitric+Oxide%5BTitle%5D)+AND+%22Med+Sci+Monit+Basic+Res%22%5BJournal%5D)">C57BL/6N Mice Are More Resistant to Ehrlich Ascites Tumors Than C57BL/6J Mice: The Role of Macrophage Nitric Oxide.</a> Med Sci Monit Basic Res. 21, 235-240 (2015).</li>
<li>Tseng, W., Leong, X., Engleman, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+mouse+model+of+colorectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Orthotopic mouse model of colorectal cancer.</a> J Vis Exp. (10), e484(2007).</li>
<li>Roper, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combination+PI3K%2FMEK+inhibition+promotes+tumor+apoptosis+and+regression+in+PIK3CA+wild-type%2C+KRAS+mutant+colorectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Lett%22%5BJournal%5D)">Combination PI3K/MEK inhibition promotes tumor apoptosis and regression in PIK3CA wild-type, KRAS mutant colorectal cancer.</a> Cancer Lett. 347 (2), 204-211 (2014).</li>
<li>Coffee, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Concomitant+BRAF+and+PI3K%2FmTOR+blockade+is+required+for+effective+treatment+of+BRAF%28V600E%29+colorectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Concomitant BRAF and PI3K/mTOR blockade is required for effective treatment of BRAF(V600E) colorectal cancer.</a> Clin Cancer Res. 19 (10), 2688-2698 (2013).</li>
<li>Belmont, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resistance+to+dual+blockade+of+the+kinases+PI3K+and+mTOR+in+KRAS-mutant+colorectal+cancer+models+results+in+combined+sensitivity+to+inhibition+of+the+receptor+tyrosine+kinase+EGFR%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Signal%22%5BJournal%5D)">Resistance to dual blockade of the kinases PI3K and mTOR in KRAS-mutant colorectal cancer models results in combined sensitivity to inhibition of the receptor tyrosine kinase EGFR.</a> Sci Signal. 7 (351), ra107(2014).</li>
<li>Hung, K. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+mouse+model+for+sporadic+and+metastatic+colon+tumors+and+its+use+in+assessing+drug+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">Development of a mouse model for sporadic and metastatic colon tumors and its use in assessing drug treatment.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 107 (4), 1565-1570 (2010).</li>
<li>Wang, F., Johnson, R. L., Snyder, P. W., DeSmet, M. L., Fleet, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Inducible%2C+Large-Intestine-Specific+Transgenic+Mouse+Model+for+Colitis+and+Colitis-Induced+Colon+Cancer+Research%5BTitle%5D)+AND+%22Dig+Dis+Sci%22%5BJournal%5D)">An Inducible, Large-Intestine-Specific Transgenic Mouse Model for Colitis and Colitis-Induced Colon Cancer Research.</a> Dig Dis Sci. 61 (4), 1069-1079 (2016).</li>
<li>Xue, Y., Johnson, R., Desmet, M., Snyder, P. W., Fleet, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+a+transgenic+mouse+for+colorectal+cancer+research+with+intestinal+cre+expression+limited+to+the+large+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Generation of a transgenic mouse for colorectal cancer research with intestinal cre expression limited to the large intestine.</a> Mol Cancer Res. 8 (8), 1095-1104 (2010).</li>
<li>Tetteh, P. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+an+inducible+colon-specific+Cre+enzyme+mouse+line+for+colon+cancer+research%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">Generation of an inducible colon-specific Cre enzyme mouse line for colon cancer research.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 113 (42), 11859-11864 (2016).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Ondanks hun preclinisch bewezen activiteit in subcutane muismodellen, falen de grote meerderheid van de nieuwe verbindingen in klinische proeven en bereiken ze nooit de kliniek. 11 Deze duidelijke tekort aan subcutane muismodellen om de biologie en groeipatronen van tumoren nauwkeurig te simuleren heeft geleid tot de ontwikkeling van orthotopische muismodellen op basis van de injectie van tumorcellen direct in het oorspronkelijke orgaan. Orthotopische muismodellen kun...

Colorectale kanker (CRC) is een van de meest voorkomende oorzaken van kanker dood in westerse landen. 1 Terwijl de primaire tumor vaak kan worden geresecteerd, verergert het voorkomen van verre metastasen de prognose dramatisch en leidt vaak tot de dood. 2 , 3 Het biologische correlaat van de metastase is circulerende tumorcellen (CTC&#39;s), die losmaken van de tumor, in de circulatie overleven, aan het epithelium in het doelorgaan vallen, het orgaan binnendringen en uiteindelijk uitgroeien tot nieuwe letsels. 4 Hoewel CTC&#39;s van prognostische relevantie bekend zijn, zijn 5 , 6 , 7 , 8 , 9 hun biologie slechts gedeeltelijk begrepen als gevolg van hun uiterste zeldzaamheid in CRC. 10 Muismodellen zijn een krachtige tOol om diverse aspecten van kankerbiologie te bestuderen. Klassieke subcutane tumormodellen worden geproduceerd door subcutane injectie van tumorcellen in ontvangermuizen, die immunocompetente kunnen zijn (indien syngeneuze muizen tumorcellen worden gebruikt) of immunodeficient. Subcutane tumormodellen zijn goedkoop en produceren data snel; Hun eindpunt tumor groei kan gemakkelijk en niet-invasieve gemeten worden. 88% van de nieuwe verbindingen die antitumoractiviteit in dergelijke modellen hebben aangetoond, falen echter in klinische studies. 11 Dit is mede te danken aan interspecies verschillen tussen mensen en muizen; Een groot deel van deze mislukking is echter te wijten aan de lage voorspellende waarde van subcutane muismodellen. Orthotopische muismodellen, waarin de tumorcellen worden geïnjecteerd in het orgaan van herkomst en dus groeien in hun oorspronkelijke micro-omgeving, worden daarom steeds meer gebruikt bij kankeronderzoek. 11 , 12 , </sUp&gt; 13 , 14 Orthotopische modellen simuleren niet alleen lokale tumorgroei condities; Door de anatomisch correcte plaats van tumorgroei kunnen orthotopische muismodellen ook realistische simulatie van metastase mogelijk maken en worden daarom gebruikt om CTC biologie 8 , 15 , 16 of hun reactie op verschillende behandelingen in CRC te bestuderen. 13 , 17 Een belangrijk nadeel van orthotopische muismodellen is hun technische complexiteit. Afhankelijk van het orgaan waarin de cellen worden geïnjecteerd, is de leercurve tot de experimentator in staat om reproduceerbare tumoren te induceren, vrij lang. Dit geldt vooral voor colonectale kankermodellen, aangezien de tumorcellen in de darmmuur moeten worden geïnjecteerd, wat vaak resulteert in perforatie, tumorcellekkage of endoluminale tumorcelverlies. Dit isArtikel is bedoeld om de methode van celbereiding te beschrijven van primaire weefselmonsters, 2D-cellijnen en 3D-organoidcultuur en hun injectie in de cecum van muizen. De hier beschreven techniek leidt tot zeer gelijkmatige tumoren en, afhankelijk van de tumorbiologie van de cellijn die gebruikt wordt voor injectie, reproduceerbare vorming van verre metastasen en CTC&#39;s in de ontvanger muizen. 15

<table><tbody><tr><td>Cell culture Media and Components</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Advanced DMEM F12</td><td>Invitrogen</td><td>12634010</td><td>DMEM/ F12 +++ medium</td></tr><tr><td>HEPES (1 M)</td><td>Life Technologies GmbH</td><td>15630056</td><td>DMEM/ F12 +++ medium</td></tr><tr><td>Glutamax-I Supplement (200 mM)</td><td>Life Technologies GmbH</td><td>35050038</td><td>DMEM/ F12 +++ medium</td></tr><tr><td>Penicillin/Streptomycin (PenStrep)</td><td>Life Technologies GmbH</td><td>15140122</td><td>DMEM/ F12 +++ medium</td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Life Technologies GmbH</td><td>61965026</td><td>basis medium van 2D cel lijnen (DMEM/10% FCS)</td></tr><tr><td>Fetal Calf Serum (FCS)</td><td>BIOCHROM AG</td><td>S 0115</td><td>basis medium van 2D cel lijnen (DMEM/10% FCS)</td></tr><tr><td>TrypLE Express enzymatische dissociatie buffer</td><td>Life Technologies GmbH</td><td>12604021</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel basement membrane matrix (BMM, phenol red free)</td><td>CORNING B.V. Life Sciences</td><td>356231</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco's Phosphate Buffered Saline</td><td>Life Technologies GmbH</td><td>14190169</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA (0.25%, Phenol-Red)</td><td>Life Technologies GmbH</td><td>25200072</td><td></td></tr><tr><td>6-/48-well platen met deksel</td><td>CORNING</td><td>3516/3548</td><td></td></tr><tr><td>cel cultuur flacon 75 cm&sup2;, 250 mL</td><td>VWR International GmbH</td><td>734-2066</td><td></td></tr><tr><td>cel cultuur flacon 150 cm&sup2;, 600 mL</td><td>Corning B.V. Life Sciences</td><td>355001</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf buisjes 1,5 mL / 2 mL</td><td>Sarstedt AG &amp; Co.</td><td>72.706.400/ 72.695.400</td><td></td></tr><tr><td>15 mL, 50 mL centrifuge buisjes</td><td>Greiner-Bio-One GmbH</td><td>188271/227270</td><td></td></tr><tr><td>TC10 Telling Slides (voor TC20 Telling Machine)</td><td>Bio-Rad Laboratories GmbH</td><td>1450016</td><td></td></tr><tr><td>Pasteur pipetten (glas, 150 mm)</td><td>Fisher Scientific GmbH</td><td>11546963/ FB50251</td><td>dun getrokken door gebruik van een bunsenbrander</td></tr><tr><td>gentleMACS Dissociator</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-093-235</td><td>voor primaire tumor weefsel bereiding</td></tr><tr><td>MACSmix Tube Rotator</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-090-753</td><td>voor primaire tumor weefsel bereiding</td></tr><tr><td>gentleMACS C Tubes</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-093-237</td><td>voor primaire tumor weefsel bereiding</td></tr><tr><td>Human Tumor Dissociation Kit</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-095-929</td><td>voor primaire tumor weefsel bereiding</td></tr><tr><td>Falcon 70 &micro;m Cell Strainer</td><td>Corning B.V. Life Sciences</td><td>352350</td><td>voor primaire tumor weefsel bereiding</td></tr><tr><td>Naam</td><td>Bedrijf</td><td>Catalogus nummer</td><td>Opmerkingen</td></tr><tr><td>Chirurgische apparatuur</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sevofluraan</td><td>AbbVie Germany GmbH &amp; Co. KG</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Medische zuurstof</td><td>Air Liquide Medical GmbH</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Buprenorfine</td><td>Temgesic</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Bepanthen - oogzalf</td><td>Bayer Vital GmbH</td><td>10047757</td><td></td></tr><tr><td>Normale zoutoplossing 0.9% (E154)</td><td>Serumwerk Bernburg AG</td><td>10013</td><td></td></tr><tr><td>Aqua ad injectabilia</td><td>Braun</td><td>235144</td><td></td></tr><tr><td>1 mL spuit (zonder dood volume) - Injekt-F SOLO</td><td>Braun/neoLab</td><td>194291661</td><td></td></tr><tr><td>30G injectienaald</td><td>BECTON DICKINSON</td><td>304000</td><td></td></tr><tr><td>cellulose tampons</td><td>Lohmann &amp; Rauscher Deutschland</td><td>13356</td><td></td></tr><tr><td>Micro-Adson Forceps</td><td>FST - Fine Science Tools</td><td>11018-12</td><td></td></tr><tr><td>Iris Scissor - ToughCut</td><td>FST - Fine Science Tools</td><td>14058-11</td><td></td></tr><tr><td>Olsen-Hegar Needle Holder</td><td>FST - Fine Science Tools</td><td>12002-12</td><td></td></tr><tr><td>AutoClip Kit</td><td>FST - Fine Science Tools</td><td>12020-00</td><td></td></tr><tr><td>PDS Z1012H 6/0 C1 (chirurgische hechting)</td><td>Johnson &amp; Johnson Medical GmbH</td><td>Z1012H</td><td></td></tr><tr><td>Table Top Research Anesthesia Machine met O2 Flush en een Sevofluraan Verdamper</td><td>Parkland Scientific</td><td>V3000PS/PK</td><td></td></tr><tr><td>UltraMicro Pomp met Micro4 Controller</td><td>World Precision Instruments</td><td>UMP3-4</td><td>apparatuur voor zeer gecontroleerde orthotopische injectie</td></tr><tr><td>Voetschakelaar voor SYS-Micro4 Controller</td><td>World Precision Instruments</td><td>15867</td><td>apparatuur voor zeer gecontroleerde orthotopische injectie</td></tr><tr><td>Drie-as handmatige micromanipulator</td><td>World Precision Instruments</td><td>M325</td><td>apparatuur voor zeer gecontroleerde orthotopische injectie</td></tr><tr><td>Magnetische standaard voor micromanipulator</td><td>World Precision Instruments</td><td>M10</td><td>apparatuur voor zeer gecontroleerde orthotopische injectie</td></tr><tr><td>Stalen basisplaat voor M10 magnetische standaard</td><td>World Precision Instruments</td><td>5479</td><td>apparatuur voor zeer gecontroleerde orthotopische injectie</td></tr><tr><td>Hot Plate 062</td><td>Labotect</td><td>13854</td><td></td></tr><tr><td>Isis - Haar scheerapparaat</td><td>AESCULAP - Braun</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Binoculaire chirurgische microscoop</td><td>Parkland Scientific</td><td>VS-2Z</td><td></td></tr><tr><td>Naam</td><td>Bedrijf</td><td>Catalogus nummer</td><td>Opmerkingen</td></tr><tr><td>CTC isolatie</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Roth</td><td>8040.1</td><td></td></tr><tr><td>Dichtheidsgradiënt medium &ndash; Ficoll</td><td>StemCell - Lymphoprep</td><td>7801</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 anti-human CD326 (EpCAM) Antilichaam klon 9C4</td><td>BioLegend</td><td>324210</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 anti-muis CD326 (EpCAM) Antilichaam klon G8.8</td><td>BioLegend</td><td>118210</td><td></td></tr><tr><td>Petri Dish, &oslash; 60 x 15 mm, 21 cm&sup2;, Vent</td><td>G

isolatie van circulerende tumorcellen in een orthotopische muismodel van colorectale kanker

Isolation of Circulating Tumor Cells in an Orthotopic Mouse Model of Colorectal Cancer

Ondanks de voordelen van makkelijke toepasselijkheid en kosteneffectiviteit, hebben subcutane muismodellen ernstige beperkingen en worden de tumorbiologie en tumorcel-verspreiding niet nauwkeurig gesimuleerd. Orthotopische muismodellen zijn geïntroduceerd om deze beperkingen te overwinnen; Dergelijke modellen zijn echter technisch veeleisend, vooral in holle organen zoals de dikke darm. Om uniforme tumoren te produceren die op betrouwbare wijze groeien en metastaseren, zijn gestandaardiseerde technieken van tumorcelbereiding en injectie kritisch. We hebben een orthotopisch muismodel van colorectale kanker (CRC) ontwikkeld die zeer uniforme tumoren ontwikkelt en kan gebruikt worden voor tumorbiologie studies en therapeutische proeven. Tumorcellen uit primaire tumoren, 2-dimensionale (2D) cellijnen of 3-dimensionale (3D) organoïden worden geïnjecteerd in de cecum en, afhankelijk van het metastatische potentieel van de geïnjecteerde tumorcellen, vormen zeer metastatische tumoren. Daarnaast,CTC&#39;s kunnen regelmatig worden gevonden. Hier beschrijven we de techniek van tumorcelbereiding uit zowel 2D-cellijnen als 3D-organoïden, evenals primair tumorweefsel, de chirurgische en injectietechnieken, alsmede de isolatie van CTC&#39;s uit de tumorhoudende muizen en de huidige tips voor het oplossen van problemen.

De succesvolle en reproduceerbare generatie van colorectale tumoren in dit model hangt kritisch af van de nauwkeurige injectie van de cellen zonder spleten of lekkage. Als dit bereikt wordt, is dit model extreem betrouwbaar en resulteert het zeer zelden in kunstmatige peritoneale verspreiding. De groeikinetiek van de tumoren, evenals hun verspreidingspatronen, is afhankelijk van de biologie van de gebruikte organoïden en cellen. 15 Terwijl HCT116-cellen op betrouw...

We beschrijven de oprichting van orthotopische colorectale tumoren via injectie van tumorcellen of organoïden in de cecum van muizen en de daaropvolgende isolatie van circulerende tumorcellen (CTC&#39;s) uit dit model.

Isolatie van circulerende tumorcellen in een orthotopische muismodel van colorectale kanker

Despite the advantages of easy applicability and cost-effectiveness, subcutaneous mouse models have severe limitations and do not accurately simulate ...

Het algemene doel van deze microchirurgische techniek is om colorectale tumorcellen in de wand van het caecum te injecteren om reproduceerbare en metastatische colorectale tumoren bij muizen te induceren. Deze methode kan belangrijke vragen beantwoorden in het veld van de biologie van circulerende tumorcellen; de belangrijkste voordelen zijn de zeer reproduceerbare en uniforme tumoren, waardoor een betrouwbare voorspelling van het stadium en van circulerende tumorcellen mogelijk is. Begin door met atraumatische pincetten het caecum van een immuungecompromitteerde muis van zes tot acht weken oud voorzichtig naar buiten te brengen.Plaats het blinde uiteinde van het caecum op de buikwand, zodanig dat de zak naar craniaal is gericht. Voor de intra-cecale injectie monteert u een standaard spuit van 1 ml, voorzien van een canule van 30 gauge, gevuld met de tumorcellen, op een micro-injectiepomp die is bevestigd aan een micromanipulator. Gebruik vervolgens de atraumatische pincet om de tip van het caecum voorzichtig vast te pakken en gebruik een tweede pincet, bevochtigd met warme zoutoplossing, om het caecum met neerwaartse bewegingen voorzichtig glad te strijken.Verplaats het dier nu onder een binoculaire chirurgische microscoop en gebruik, met de canule direct parallel aan en boven het caecum, twee atraumatische pincetten om het weefsel aan beide uiteinden van het geëxternaliseerde deel van het caecum voorzichtig uit te rekken. Trek het caecum langzaam over de canule, waarbij u er zorg voor draagt dat u niet de gehele wandring of de serosa voorbij het initiële penetratiepunt perforeert, en plaats de canule boven de bloedvaten en onder het dunne transparante membraan binnen de wandring. Wanneer de canule op zijn plaats zit, gebruik dan een voetpedaal om 20 µL cellen te injecteren over een periode van 20 seconden.Tussen de dunne, doorschijnende serosa-laag, boven de intramurale bloedvaten en de muscularis. Wanneer alle cellen zijn geïnjecteerd, wordt de canule voorzichtig verwijderd en wordt een droog wattenstaafje onder het caecum geplaatst. Om kunstmatige peritoneale verspreiding te voorkomen, worden eventueel gelekte cellen gelyseerd door grondig spoelen met gedestilleerd water, waarna het caecum voorzichtig in de buikholte wordt teruggeplaatst.Sluit de bukwand met snel resorbeerbare doorlopende hechtingen en de huid met chirurgische wondklemmen. Plaats de muis vervolgens op een warmtemat die is ingesteld op 38 °C met monitoring tot volledige narcose is bereikt. Om de circulerende tumorcellen te isoleren, vult u op het juiste experimentele eindpunt conische buisjes van 15 ml met vijf milliliter dichtheidsgradiëntmedium per buisje en brengt u voorzichtig volbloedmonsters van tumordragende dieren over op de dichtheidsgradiëntlagen.Scheid de cellen door middel van centrifugatie en win voorzichtig de interface met de mononucleaire cellen terug. Pipetteer de mononucleaire cellen in een nieuwe buis van 15 milliliter voor een tweede centrifugatie, gevolgd door het wassen van de buis met PBS.Resuspendeer na de tweede wasbeurt de pellets in 200 µL PBS, aangevuld met EDTA, en voeg vier µL anti-amp cyclic AMP-antilichaam toe aan elk monster, voor een incubatie van 20 minuten op ijs in het donker. Gebruik vervolgens een hydrofobe barrièrepen om een cirkel van ongeveer 1 cm te tekenen in één steriele petrischaal van 6 cm per monster en voeg 700 µL picking-buffer toe aan elke cirkel, gevolgd door 50 µL cel-suspensie. Gebruik een microscoop om de dichtheid van de cellen te controleren en laat de monsters ongeveer vijf minuten bezinken.Screen vervolgens de celdruppel op amp camp-positiviteit en gebruik de micromanipulator om de cellen van interesse over te dragen naar 15 µL van de geschikte buffer voor de beoogde daaropvolgende downstream-analyse. Het gebruik van colorectale cellen in dit model resulteert betrouwbaar in een groter aantal muizen binnen 35 dagen na de injectie van tumorcellen, waarbij de primaire tumoren ongeveer 10 mm groot zijn en lever- en longmetastasen, evenals circulerende tumorcellen, bijna onvermijdelijk aanwezig zijn. Bovendien kunnen de circulerende tumorcellen eenvoudig worden geïsoleerd voor downstream-analyse.Zodra deze techniek beheerst is en correct wordt uitgevoerd, kan deze binnen 10 minuten worden voltooid, wat de vorming van uniforme en metastatische tumoren faciliteert die zowel voor therapeutische als moleculaire studies kunnen worden gebruikt. Beperkingen van het model zijn onder meer de afhankelijkheid van cellyse, die eigen beperkingen heeft, evenals de immuundeficiëntie van de muizen; beide kunnen worden overwonnen door het gebruik van mutante colorectale kankercellen. Vanwege de eenvoud kan dit model een waardige aanvulling zijn op de momenteel beschikbare modellen voor colorectale kanker.

isolation-circulating-tumor-cells-an-orthotopic-mouse-model

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kankeronderzoek

Twee technieken kunnen worden gebruikt om dit model te stellen: injectie van een kankercel suspensie in de blindedarmkeutels muur of transplantatie van een stukje van subcutane tumor op de blindedarm. Dit model is handig voor het bestuderen van de natuurlijke progressie van colorectale kanker en testen van nieuwe therapeutische middelen tegen colorectale kanker.

Orthotope Muis Model van colorectale kanker

This video describes the protocol to establish a spontaneous metastasis mouse model of colorectal cancer patient-derived xenografts or PDXs. These xenograft models partially mimic the features of human carcinomas and understand the critical aspects of human malignancies, including invasion and metastasis.

Spontaneous Metastasis Mouse Models: A Platform to Study the Metastatic Potential of Orthotopically Injected Colorectal Cancer Cells

This video describes the protocol for generating metastases by the PDX derived CRC organoids labeled with GFP lentivirus into the spleen of an immunodeficient mouse. Cancer micrometastases colonizing other organs can be detected using a fluorescence microscope to assess the GFP expression.

Establishing Experimental Metastases Mouse Model: Implanting GFP Expressing CRC Organoid Cells in PDX Model to Detect Micrometastases

The video describes the technique for intracecal injection of cancerous cells to develop an orthotopic mouse model with highly uniform tumors. Therefore, the orthotopic mouse model allows realistic simulation of metastasis, providing a valuable tool to study the phenotype changes during tumor growth and dissemination.

Intracecal Tumor Cell Injection: A Technique to Deliver Cancer Cells for Establishing Orthotopic Colorectal Cancer Mouse Model

This video describes a detailed protocol for isolating circulating tumor cells from the whole blood sample of a euthanized colorectal tumor mouse model. These isolated CTCs can be cultured and used for intended downstream analysis.

CTC Isolation from a Whole Blood Sample: A Method to Obtain CTCs from Murine Colorectal Cancer Model

Circulerende tumorcellen (CTC's) hebben aangetoond een belangrijke rol te spelen bij tumormetastase. Hier wordt een methode beschreven voor het isoleren en vermenigvuldigen van CTC's uit het volledige bloed van een syngene model van muistumoren met leverkanker (HCC) metastase.

Isolatie en Voortplanting van circulerende tumorcellen uit een muis Cancer

Om zeer gevoelige detectie van de verspreiden menselijke colorectaal carcinoom (CRC) cellen koloniseren van weefsels, tonen we hierin een protocol voor efficiënte transductie van groen fluorescent proteïne (GFP) lentivirale deeltjes in PDX-afgeleide CRC organoid cellen voorafgaand aan hun injectie in ontvangende muizen, met stereo-fluorescentie microscopische observatie.

Hoog-gevoeligheids detectie van micrometastasen gegenereerd door GFP Lentivirus-getransduceerde Organoids gekweekt uit een patiënt-afgeleide dikke darm Tumor

Dit protocol beschrijft de generatie van door patiënten afgeleide orthotopic xenotransplantaatmodellen is-modellen door intra-vesisch bijbrengen van hoogwaardige urotheelcelcarcinoom cellen of intra-rectale injectie van colorectale kankercellen in niet-zwaarlijvige diabetische/ernstige gecombineerde immunodeficiëntie (NOD/SCID) muizen voor primaire tumorgroei en spontane metastasen onder invloed van lymfeklier stromale cellen, die de progressie van humane gemetastaseerde ziekten nabootst.

Patiënt-afgeleide Orthotopic xenograft modellen voor humaan Urotheelcelcarcinoom en colorectale kanker tumor groei en spontane metastasen

Portale ader injectie van colorectale kanker (CRC) organoïden genereert stroma-rijke levermetastase. Dit muismodel van CRC-levermetastase vertegenwoordigt een nuttig hulpmiddel om tumor-stroma-interacties te bestuderen en nieuwe stroma-gerichte therapieën te ontwikkelen, zoals adeno-geassocieerde virus-gemedieerde gentherapieën.

Portale ader injectie van colorectale kanker organoïden om de levermetastase stroma te bestuderen

Dit protocol beschrijft de orthotope implantatie van kankercellen van patiënten in de blindedarmwand van immunodeficiënte muizen. Het model recapituleert gevorderde uitgezaaide ziekte van colorectale kanker en maakt de evaluatie van nieuwe therapeutische geneesmiddelen mogelijk in een klinisch relevant scenario van long- en levermetastasen.

Orthotope implantatie van patiënt-afgeleide kankercellen bij muizen recapituleert gevorderde colorectale kanker

Deze studie richt zich op de in vivo subcutane inductie van luminescente colorectale kankercellen in een muizenmodel en de daaropvolgende luminescentiemeting met behulp van een beeldvormingssysteem. De procedure heeft tot doel een reproduceerbaar tumorgroeimodel op te zetten voor real-time monitoring en therapeutische evaluatie.

Subcutane injectie van menselijke colorectale kankercellen bij athymische naakte muizen om de werkzaamheid van antitumoren te evalueren

Leer een microchirurgische techniek voor het injecteren van colorectale tumorcellen in de cecumwand van muizen. Deze methode maakt isolatie van circulerende tumorcellen mogelijk voor betrouwbaar onderzoek naar metastase.

Isolatie van circulerende tumorcellen in een orthotopische muismodel van colorectale kanker

Meer video's verkennen