Name: In Vitro en In Vivo beoordeling van T-, B- en myeloïde cellen onderdrukkende activiteit en humorale reacties van transplantatie ontvangers (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-08-12T14:00:00.000+00:00
Duration: 18 min 48 s
Description: Leer een protocol voor tolerantie-inductie bij transplantatie met in vitro en in vivo beoordeling van regulatoire cellen. Deze methode evalueert onderdrukkende capaciteit en humorale reacties bij ratten.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd gerealiseerd in het kader van het project Labex IGO (n ° ANR-11-LABX-0016-01), dat deel uitmaakt van het "Investissements d'Avenir" Franse regering programma beheerd door de ANR (ANR-11-LABX-0016-01) en de IHU-Cesti project gefinancierd wordt ook door de " Investissements d'Avenir"Franse regering programma, beheerd door de Franse nationale onderzoek Bureau (ANR) (ANR-10-IBHU-005). Het IHU-Cesti project wordt ook ondersteund door de Nantes Métropole en Région Pays de la Loire.

De auteurs verklaren dat zij geen concurrerende financiële belangen hebben.

Adoptief overdracht van totale splenocytes in een nieuw geënte ontvanger is een efficiënte manier om de aanwezigheid van regelgevende cellen veroorzaakt of versterkt door een behandeling. Host bestraling-geïnduceerde voorbijgaande lymphopenia bevordert de overleving van de cel na overdracht en vestiging van tolerantie. Bovendien laat subletale bestraling tijd voor cellen met tolerogenic eigenschappen tijdens wilt converteren naar nieuwe regelgevende cellen immuunsysteem reconstitutie, een verschijnsel genaamd besmettelij...

Cardiale allograft in rat is een betrouwbare orgaan transplantatie model te beoordelen tolerantie inductie behandelingen, om te ontcijferen van de mechanismen van de inductie van de tolerantie en onderhoud, en heeft het potentieel voor het opwekken van de functioneel bevoegde en dominante regulatoire cellen. De protocollen hieronder beschrijven een volledig mismatch heterotopic cardiale transplantaat van een Lewis 1W donor rat (LEW.1W, RT1u) in een Lewis 1A ontvangende rat (LEW.1A, RT1een). In deze combinatie van de graft, acute afwijzing gebeurt snel (in ongeveer 7 dagen) en gemakkelijk kan worden geëvalueerd door graft verslaan meting door middel van palpatie van de buik. Hier stellen wij drie protocollen voor het opwekken van tolerantie voor de cardiale allograft in rat. Deze modellen, tolerantie wordt geïnduceerd en/of onderhouden door verschillende regelgevende celtypes. Eerste, de blokkade van interactie CD40-CD40L interacties met een adenovirus codering van CD40Ig (AdCD40Ig) de generatie van CD8 geïnduceerde+ Tregs staat inducerende tolerantie wanneer adoptively overgedragen aan secundaire geënte ontvangers1. Bovendien, uitputting van CD8+ cellen (met anti-CD8α antilichamen) in2Bregs en RegMCs AdCD40Ig-behandelde ontvangers gegenereerd. Diepgaande analyse van CD8+ Tregs eigenschappen de sleutelrol van verschillende immunoregulerende moleculen gedefinieerd als Interleukine-34 (IL-34) en Fibroleukin-2 (FGL-2)3,4,5,6 benadrukt . Overwegende dat de overexpressie van IL-34 (met een vector van AAV) geïnduceerde Tregs door middel van de generatie van RegMCs, geïnduceerde overexpressie van FGL-2 Bregs, ten grondslag liggen aan het complexe netwerk van regulatoire cellen.
Omdat chronische afwijzing langzaam ontwikkelt en op lange termijn, is een diepgaande analyse vereist om te onderscheiden van tolerantie ten opzichte van chronische afwijzing. Graft is meestal beoordeeld op cel infiltratie, fibrose, verdikking van vasculaire muur en aanvulling C4d depositie door immunohistology7. Terwijl histologie methoden dierlijke offer vereisen of biopsie graft, hier beschrijven we een eenvoudige methode om te beoordelen van verschillende kenmerken van getolereerd allograft: de opkomst en de functie van de regulatoire cellen en de reacties van de anti-donor specifiek antilichaam van bloed monster door stroom cytometry (hier, wij gebruikten fluorescentie-activated cell sorting (FACS)).
Onderhoud van tolerantie-doorbraak tot de allograft na arrestatie van de behandeling is over het algemeen geassocieerd met de inductie van regulatoire cellen8. In de laatste decennia, studies gericht op CD4+Tregs met eenparigheid van stemmen gekenmerkt hen door de belangrijke markeringen Foxp3+,hogeCD25 en CD127-9,10,11. Ook verschillende markeringen werden toegeschreven aan CD8+ Tregs, zoals CD122+, CD28-, CD45RClage, PD1+, en Helios+ 1,12,13,14 , 15 , 16 , 17. over het jaar, de uiting van GITR, CTLA4 en cytokines (IL-10, TGFβ, IL-34, IL-35, FGL-2) werden bovendien gekoppeld aan een Treg profiel3,4,6,13, 18,19,20,21. Echter een opkomende regelgevende cel populaties, zoals Bregs, RegMCs of NKTregs, gebrek aan relevante specifieke markers. Inderdaad, Bregs zijn meestal gemeld als onvolwassen CD24+ cellen, met meervoudige CD27 expressie en soms de productie van IL-10, TGFβ of granzyme B22,23,24. De complexiteit van de myeloïde cel overdrachtslijn vereist een combinatie van verschillende markers te definiëren hun regelgevende of proinflammatoire profiel zoals CD14, CD16, CD80, CD86, interactie CD40, CD209a of CD16325,-26. Tot slot, sommige markeringen zijn gemeld bij het identificeren van NKTregs zoals CD11b+, CD27+, TGFβ+, maar meer studies nodig zijn om verdere fenotypische beschrijven ze27,28,29 ,30,31,32. Dus, bewijzen van onderdrukkende activiteit moeten legitimeren verder fenotypische beschrijving voor de identificatie van nieuwe biomarkers, nieuwe immunoregulerende bemiddelaars/mediators, en uitbreiding van het toepassingsgebied tot nieuwe celtherapieën.
Wij stellen twee complementaire methoden om te evalueren van de onderdrukkende activiteit van cellen. Ten eerste, de in vitro -methode bestaat uit het kweken van onderdrukkende cellen met gelabelde effector T cellen gestimuleerd door allogene donor antigeen presenteert cellen (APCs) op verschillende ratio's over 6 dagen en analyseren van de effector T cel proliferatie die donor-geleide immuun onderdrukking weerspiegelt. Cellen uit behandelde ratten kunnen worden vergeleken rechtstreeks met cellen van naïeve ratten en niet-behandelde geënte ratten voor onderdrukkende activiteit (of enige andere regelgevende celpopulatie), in een waaier van suppressor: effector ratio's. Bovendien, deze methode hoeft niet een transplantatie, en resultaten worden verkregen binnen 6 dagen. Ten tweede bestaat de in vivo -methode uit het overzetten van de beoogde regulatoire cellen van een behandelde rat naar een nieuw bestraalde geënte ontvanger. Terwijl B myeloïde cellen, cellen en T cellen van niet-behandelde naïef ratten zijn gewoonlijk niet voor de remming van de acute afwijzing en te verlengen graft overleving bij adoptief overdracht, cellen met medicijn onderdrukkende activiteit van behandeld-ontvangers hebben deze kenmerken 1,2,,3,,4,33. Lymphopenia geïnduceerd door bestraling van de ontvanger wordt aanbevolen om adoptively overgedragen cellen onaangetast blijven door bloed homeostase en meester gemakkelijker de immuunrespons van de anti-donor toestaan. Voor beide methoden, de besteding in vitro van allogene derden APCs of in vivo adoptief overdracht van onderdrukkende toestaan cellen ontvangers geënt met een derde-partij hart analyse van de specificiteit van de anti-donor. Overwegende dat de in-vivo -methode een groot aantal cellen, slecht vertegenwoordigd vereist kunnen cel subpopulaties gemakkelijker worden beoordeeld voor onderdrukkende activiteit in vitro33.
Humorale reacties kunnen ook worden gemeten om te beoordelen van de toestand van de tolerantie en de controle van gestuurde antilichaam reacties op antigenen van de donor. Inderdaad, tolerantie kan worden gekenmerkt door het ontbreken van humorale respons naar de donor maar behoud van de capaciteit van de geadresseerden te ontwikkelen humorale reactie op nieuwe antigenen en het behoud van geheugen reacties. Ten eerste is het beginsel van alloantibody detectie gebaseerd op de erkenning van de donor cellen door ontvangende antilichamen na incubatie van donor celtype met serum van een geënte ontvanger. Tweede, humorale antwoorden gericht aan exogene antigenen kunnen beoordeeld volgende stimulatie van langdurige tolerant ontvangers met sleutelgat Limpet hemocyanine (HC) geëmulgeerd met compleet Freund van adjuvans. De aanwezigheid van specifiek IgM en IgG antistoffen tegen antigenen kan worden gedetecteerd 4 en 13 dagen, respectievelijk na immunisatie, met enzym gekoppelde ImmunoSorbent Assay (ELISA)34. Ten derde, het behoud van immuun geheugen reacties kan worden beoordeeld door injectie van XENOGENECELLEN rode bloedcellen (RBC) dagen -7 en + 3 van transplantatie en RBC kleuring met geadresseerden serum verzameld op dagen + 8 en +17 na transplantatie. Al deze methoden toestaan voor de identificatie van immunoglobuline subtypen met behulp van specifieke secundaire antilichamen, en snelle verwerving van resultaten in minder dan 1,5 h door FACS kleuring of een paar uur door ELISA.
Ten slotte, deze protocollen zijn ontworpen voor karakterisering van transplantatie modellen, en kunnen, tot op zekere hoogte, toegepast op auto-immuunziekte modellen. De beginselen van de methode kunnen worden omgezet naar alle soorten.

<table><tbody><tr><td>dieren</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>LEW.1W en LEW.1A ratten</td><td>Janvier Labs, Frankrijk</td><td></td><td>8 weken oud,</td></tr><tr><td>BN derde partij donorratten</td><td>Janvier Labs, Frankrijk</td><td></td><td>8 weken oud,</td></tr><tr><td>naam</td><td>bedrijf</td><td>catalogusnummer</td><td>opmerkingen</td></tr><tr><td>reagentia</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>AdCD40Ig</td><td>Viral Vector Core, INSERM UMR 1089, Nantes, Frankrijk</td><td></td><td>zelfgemaakte plasmiden</td></tr><tr><td>IL34-AAV</td><td>Viral Vector Core, INSERM UMR 1089, Nantes, Frankrijk</td><td></td><td>zelfgemaakte plasmiden</td></tr><tr><td>FGL2-AAV</td><td>Viral Vector Core, INSERM UMR 1089, Nantes, Frankrijk</td><td></td><td>zelfgemaakte plasmiden</td></tr><tr><td>anti-TCRab</td><td>Hybridoma uit European Collection of Cell Culture, Salisbury, VK</td><td>R7/3 clone</td><td>Zelfgemaakte kweek, zuivering en fluoroforkoppeling</td></tr><tr><td>anti-CD25</td><td>Hybridoma uit European Collection of Cell Culture, Salisbury, VK</td><td>OX39 clone</td><td>Zelfgemaakte kweek, zuivering en fluoroforkoppeling</td></tr><tr><td>anti-CD8</td><td>Hybridoma uit European Collection of Cell Culture, Salisbury, VK</td><td>OX8 clone</td><td>Zelfgemaakte kweek, zuivering en fluoroforkoppeling</td></tr><tr><td>anti-CD45RA</td><td>Hybridoma uit European Collection of Cell Culture, Salisbury, VK</td><td>OX33 clone</td><td>Zelfgemaakte kweek, zuivering en fluoroforkoppeling</td></tr><tr><td>anti-CD161</td><td>Hybridoma uit European Collection of Cell Culture, Salisbury, VK</td><td>3.2.3 clone</td><td>Zelfgemaakte kweek, zuivering en fluoroforkoppeling</td></tr><tr><td>anti-CD11b/c</td><td>Hybridoma uit European Collection of Cell Culture, Salisbury, VK</td><td>OX42 clone</td><td>Zelfgemaakte kweek, zuivering en fluoroforkoppeling</td></tr><tr><td>anti-TCRgd</td><td>Hybridoma uit European Collection of Cell Culture, Salisbury, VK</td><td>V65 clone</td><td>Zelfgemaakte kweek, zuivering en fluoroforkoppeling</td></tr><tr><td>anti-CD45RC</td><td>Hybridoma uit European Collection of Cell Culture, Salisbury, VK</td><td>OX22 clone</td><td>Zelfgemaakte kweek, zuivering en fluoroforkoppeling</td></tr><tr><td>anti-CD4</td><td>Hybridoma uit European Collection of Cell Culture, Salisbury, VK</td><td>OX35 clone</td><td>Zelfgemaakte kweek, zuivering en fluoroforkoppeling</td></tr><tr><td>anti-CD45R</td><td>BD Biosciences, Mountain View, CA</td><td>#554881, His24 clone</td><td></td></tr><tr><td>anti-rat IgG-FITC</td><td>Jackson ImmunoResearch Laboratories, INC, Baltimore, VS</td><td>#112-096-071</td><td></td></tr><tr><td>anti-rat IgG1</td><td>Serotec</td><td>#MCA 194</td><td></td></tr><tr><td>anti-rat IgG2a</td><td>Serotec</td><td>#MCA 278</td><td></td></tr><tr><td>anti-rat IgG2b</td><td>Serotec</td><td>#MCA 195</td><td></td></tr><tr><td>anti-rat IgM-FITC</td><td>Jackson ImmunoResearch Laboratories, INC, Baltimore, VS</td><td>#115-095-164</td><td></td></tr><tr><td>streptavidine HRP</td><td>BD Biosciences, Mountain View, CA</td><td>#554066</td><td></td></tr><tr><td>KLH</td><td>Sigma Aldrich, St. Louis, VS</td><td>#9013-72-3</td><td></td></tr><tr><td>PBS 1X</td><td>Thermo Fisher Scientific Inc, VS</td><td></td><td>Fosfaatbufferoplossing zonder calcium en magnesium,</td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>Sigma, Saint-Louis, VS</td><td>#9005-64-5</td><td></td></tr><tr><td>TMB substraat reagent kit</td><td>BD Biosciences, Mountain View, CA</td><td>#555214</td><td></td></tr><tr><td>CellTraceTM CFSE celproliferatie kit</td><td>Thermo Fisher Scientific Inc, VS</td><td>#C34554</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640 medium 1X</td><td>Thermo Fisher Scientific Inc, VS</td><td>#31870-025</td><td></td></tr><tr><td>penicilline streptomycine</td><td>Thermo Fisher Scientific Inc, VS</td><td>#15140-122</td><td></td></tr><tr><td>Hepes Buffer</td><td>Thermo Fisher Scientific Inc, VS</td><td>#15630-056</td><td></td></tr><tr><td>niet-essentiële aminozuren</td><td>Thermo Fisher Scientific Inc, VS</td><td>#11140-035</td><td></td></tr><tr><td>Natriumpyruvaat</td><td>Thermo Fisher Scientific Inc, VS</td><td>#11360-039</td><td></td></tr><tr><td>2 beta mercaptoethanol</td><td>Sigma, Saint-Louis, VS</td><td>#M3148</td><td></td></tr><tr><td>Cell Proliferation Dye eFluor® 450 Cell</td><td>Thermo Fisher Scientific Inc, VS</td><td>#65-0842-85</td><td></td></tr><tr><td>Glutamine</td><td>Sigma, Saint-Louis, VS</td><td>#G3126</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Thermo Fisher Scientific Inc, VS</td><td>#D1306</td><td></td></tr><tr><td>Collagenase D</td><td>Roche Diagnostics, Duitsland</td><td>#11088882001</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Sigma, Saint-Louis, VS</td><td>#E5134</td><td></td></tr><tr><td>NaCl 0,9%</td><td>Fresenius Kabi</td><td>#B230561</td><td></td></tr><tr><td>Magnetische dynabeads</td><td>Dynal, Invitrogen</td><td>#11033</td><td>Geit anti-muis IgG</td></tr><tr><td>One Comp eBeads</td><td>Ebiosciences, San Diego, VS</td><td>#01-1111-42</td><td></td></tr><tr><td>Betadine</td><td>Verwijs naar de institutionele richtlijnen</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Isofluraan</td><td>Verwijs naar de institutionele richtlijnen</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Naplbuphine</td><td>Verwijs naar de institutionele richtlijnen</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Terramycine</td><td>Verwijs naar de institutionele richtlijnen</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Buprenorfine</td><td>Verwijs naar de institutionele richtlijnen</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Meloxicam</td><td>Verwijs naar de institutionele richtlijnen</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Complete Freund's adjuvant</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Rompun</td><td>Verwijs naar de institutionele richtlijnen</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ringer lactate</td><td>Verwijs naar de institutionele richtlijnen</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ketamine</td><td>Verwijs naar de institutionele richtlijnen</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Rode bloedcel lyse-oplossing</td><td></td><td></td><td>Verdun 8,29g NH4Cl (Sigma, Saint-Louis, VS A-9434), 1g KHCO3 (Prolabo 26 733.292) en 37,2mg EDTA (Sigma, Saint-Louis, VS E5134) in 800ml H2O. Breng pH aan op 7,2-7,4 en maak aan tot 1L met H2O.</td></tr><tr><td>Collagenase D</td><td></td><td></td><td>Verdun 1g collagenase in 500 ml RPMI-1640 + 5 ml Hepes + 2% FCS</td></tr><tr><td>PBS-FCS (2%)-EDTA (0,5%)</td><td></td><td></td><td>Voeg 5 mL EDTA 0,1M (Sigma, Saint-Louis, VS E5

in vitro en in vivo beoordeling van t-, b- en myeloïde cellen onderdrukkende activiteit en humorale reacties van transplantatie ontvangers

In Vitro and In Vivo Assessment of T, B and Myeloid Cells Suppressive Activity and Humoral Responses from Transplant Recipients

De belangrijkste zorg in transplantatie is het bereiken van specifieke tolerantie door inductie van regulatoire cellen. Het begrip van tolerantie mechanismen vereist betrouwbare modellen. Hier beschrijven we modellen van tolerantie-doorbraak tot cardiale allograft in rat, veroorzaakt door blokkade van costimulatie signalen of opregulatie van immunoregulerende moleculen door genenoverdracht. Elk van deze modellen toegestaan in vivo generatie regulatoire cellen zoals regulatoire T-cellen (Tregs), regelgevende B cellen (Bregs) of regelgevende myeloïde cellen (RegMCs). In dit manuscript beschrijven we de twee aanvullende protocollen die zijn gebruikt om te identificeren en te definiëren in vitro en in vivo regelgevende cel activiteit om te bepalen hun verantwoordelijkheid in tolerantie inductie en onderhoud. Eerst een in vitro onderdrukkende assay toegestaan snelle identificatie van cellen met onderdrukkende capaciteit op effector immuunrespons op een dosis-afhankelijke wijze, en kan worden gebruikt voor verdere analyse zoals cytokine meting of cytotoxiciteit. Ten tweede, de adoptieve overdracht van cellen van een tolerante behandelde ontvanger aan een nieuw bestraalde geënte geadresseerde, benadrukt de tolerogenic eigenschappen van deze cellen in graft geregisseerd immuunresponsen beheersen en/of omzetten van nieuwe regelgevende cellen ( besmettelijke tolerantie genoemd). Deze methoden zijn niet beperkt tot cellen met bekende fenotypische markeringen en kunnen worden uitgebreid tot iedere cel bevolking. Bovendien niet donor gericht allospecificity van regelgevende cellen (een belangrijk doel in het veld) kunnen worden beoordeeld met behulp van derden donor cellen of graft in vitro of in vivo. Tot slot, om te bepalen van de capaciteit van de specifieke tolerogenic van deze regelgevende cellen, bieden wij protocollen voor de beoordeling van de humorale anti-donor antilichaam reacties en de capaciteit van de ontvanger te ontwikkelen humorale reacties tegen nieuwe of oude bekende antigenen. De modellen van tolerantie beschreven kunnen worden gebruikt om verder karakteriseren regulatoire cellen, ter identificatie van nieuwe biomarkers en immunoregulerende moleculen, en zijn aan te passen aan andere transplantatie modellen of auto-immune ziekten in knaagdieren of menselijke.

De beoordeling van de onderdrukkende activiteit na het sorteren van de APCs (Figuur 1), responder cellen en Tregs tegelijk (Figuur 2), of afzonderlijk (Figuur 4), en alle andere vermeende regelgevende cellen (Figuur 3), kan worden gedaan in vivo door directe inspuiting van de regulatoire cellen en in vitro door meting van de helderheid van de CFSE (<str...

Hier presenteren we een protocol bij het opwekken van tolerantie in transplantatie, en beoordelen van in vitro en in vivo de onderdrukkende capaciteit van afzonderlijke cel subsets van de ontvanger en de immuunstatus van de ontvanger naar donor of exogene antigenen.

In Vitro en In Vivo beoordeling van T-, B- en myeloïde cellen onderdrukkende activiteit en humorale reacties van transplantatie ontvangers

The main concern in transplantation is to achieve specific tolerance through induction of regulatory cells. The understanding of tolerance mechanisms ...

Tolerantie-inductie bij transplantatie is vaak geassocieerd met het ontstaan van een regulatoire celpopulatie. Dit kenmerkt zich door de afwezigheid van een immuunrespons tegen de donor, terwijl de immuniteit tegen exogene antigenen behouden blijft. Wij beschikken over verschillende protocollen om in vitro en in vivo de suppressieve capaciteit van elke regulatoire celsubset en de status van de humorale responsen van de gastheer te beoordelen.Anestheseer een donor Lewis 1W rat met isofluraan O2-inhalatie, aangevuld met 1% N20 na vijf minuten. Plaats het dier in rugligging en desinfecteer de buik met betadine om een thoracotomie uit te voeren. Klem de vena cava inferior en superior af, zet ligaturen en snijd deze vervolgens door.Snijd vervolgens de longslagader en de aorta door en bewaar het transplantaat in koud NaCl 0,9%. Anestheseer een Lewis 1A ontvanger-rat van 150 gram en acht tot 12 weken oud met isofluraan O2-inhalatie aangevuld met N2O 1%. Leg het dier in rugligging en desinfecteer het abdomen met betadine om een cefalo-pubische laparotomie uit te voeren. Externaliseer de darmen en klem de abdominale bloedvaten af. Voer een terminale laterale anastomose uit tussen de getrans

in-vitro-vivo-assessment-t-b-myeloid-cells-suppressive-activity

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

Tregs zijn krachtige onderdrukkers van het immuunsysteem. Er is een gebrek van unieke oppervlakte markers om ze te definiëren, dus, de definities van Tregs zijn vooral functioneel. Hier beschrijven we een...

Menselijk In Vitro Onderdrukking als Screening Tool voor de erkenning van een vroege staat van Immune Imbalance

Murine beenmergtransplantatie is een veel gebruikte techniek om immunologische mechanismen voor graft-versus-host ziekte bij mensen bestuderen. De mogelijkheid om T-cel mensenhandel patronen te...

Inductie van Graft-versus-host ziekte en<em&gt; In Vivo</em&gt; T-cel monitoren door gebruik van een MHC-matched muizenmodel

We beschrijven een waardevolle diagnostische test die zouden kunnen worden gebruikt om de terugtrekking van immunosuppressie na transplantatie beslist zo verhoogd risico op afstoting. De test maakt gebruik van de principes van Delayed Type Overgevoeligheid en biedt nauwkeurige beoordeling van zowel donor-specifieke effector en regulerende immuunreacties gemonteerd door de ontvangers.

Trans-vivo Vertraagd Type Overgevoeligheid Assay voor Antigen Specifieke Verordening

Het vermogen om T-cel responsen in detail volgen in vivo is belangrijk voor de ontwikkeling van ons begrip van de immuunrespons. Hier beschrijven we het gebruik van fluorescerende doel arrays (FTA's) in een in vivo T-cel test die&gt; 250 parameters beoordeelt gelijktijdig door flowcytometrie.

Het gebruik van TL-Target Arrays voor het beoordelen van de T-cel responsen<em&gt; In vivo</em

Dit document beschrijft een werkwijze voor het meten van alloreactiviteit in een gemengde populatie van T-cellen met behulp van beeldvorming flowcytometrie.

Meting van de T-cel alloreactiviteit Met behulp van Imaging flowcytometrie

Wij presenteren hier een aanvraag voor een standaard immunologische techniek (CFSE gekleurd OT-ik proliferatie) willen snel controleren adjuvans-gemedieerde cytotoxische T lymfocyten (CTL) generatie in vivo. Deze snelle inschatting van CTL capaciteiten is nuttig voor de ontwikkeling van profylactische vaccins tegen intracellulaire pathogenen, alsmede therapeutische kanker vaccins.

Snelle In Vivo beoordeling van adjuvante van cytotoxische T-lymfocyten de mogelijkheden van de generatie voor vaccinontwikkeling

Dit protocol beschrijft een gedetailleerde workflow voor de generatie en ex vivo karakterisering van oncolytische virussen voor expressie van immunomodulators, met behulp van mazelen virussen bispecifieke T cel engagers codering als een voorbeeld. Toepassing en aanpassing aan andere vector platforms en transgenen zal de ontwikkeling van nieuwe immunovirotherapeutics voor klinische vertaling versnellen.

Paramyxovirussen voor Tumor-gerichte immunomodulatie: ontwerp en evaluatie Ex Vivo

We beschrijven hier een flow Cytometry-based in vivo doden assay die het mogelijk maakt onderzoek van immunodominance in chemo T lymfocyten (CTL) Reacties op een model tumor antigeen. Wij bieden voorbeelden van hoe deze elegante assay kan worden gebruikt voor mechanistische studies en voor de effectiviteit van geneesmiddelen testen.

Maatwerk in vivo chemo tests om Immunodominance in tumor-specifieke CD8+ T Cell responsen te bestuderen

Graft-versus-host ziekte is een belangrijke complicatie na allogene beenmergtransplantatie. Dendritische cellen spelen een cruciale rol in de pathogenese van graft-versus-host ziekte. Het huidige artikel beschrijft een nieuw beenmergtransplantatieplatform om de rol van dendritische cellen te onderzoeken bij de ontwikkeling van graft-versus-host ziekte en het graft-versus-leukemie-effect.

Beenmergtransplantatie Platform om de rol van dendritische cellen in graft-versus-host ziekte te onderzoeken

De studie toont de rol van de huid aan bij het moduleren van immuunresponsen bij muizen door middel van epicutane (EC) immunisatie. EC-immunisatie met een eiwitantigeen kan immuunresponsen bij contactovergevoeligheid onderdrukken of door de huid geïnduceerde onderdrukking omkeren in combinatie met pathogeen-geassocieerde moleculaire patronen. EC-immunisatie is veelbelovend als een effectieve, naaldvrije benadering van immunotherapie.

Muizenmodel van epicutaan geïnduceerde immunomodulatie

Dit protocol biedt een in vitro co-kweekstrategie om de effecten van regulerende T-cellen op de proliferatie en differentiatie van effector T-cellen te onderzoeken.

In vitro Functionele analyse van regulerende T-cellen: Focus op proliferatie en differentiatie

Leer een protocol voor tolerantie-inductie bij transplantatie met in vitro en in vivo beoordeling van regulatoire cellen. Deze methode evalueert onderdrukkende capaciteit en humorale reacties bij ratten.

In Vitro en In Vivo beoordeling van T-, B- en myeloïde cellen onderdrukkende activiteit en humorale reacties van transplantatie ontvangers (Video) | JoVE Journal

In Vitro en In Vivo beoordeling van T-, B- en myeloïde cellen onderdrukkende activiteit en humorale reacties van transplantatie ontvangers

Meer video's verkennen