Scheiding van mengsels via precipitatie

1. Precipitatie van CaCO₃

1. Bereid 5 mL van 1 M CaCl₂ voor.
2. Bereid 5 mL 1 M Na₂CO₃ voor.
3. Voeg in een kleine centrifugebuis (1,5 mL) 750 µL van CaCl₂ en 750 µL van Na₂CO₃ toe.
4. Wacht 2 min voordat de reactie plaatsvindt. De oplossing moet troebel worden.
5. Centrifugeer het mengsel bij 10.000 × g gedurende 5 min.
6. Decanteer het supernatant.
7. Voeg 1 mL koud water toe aan de pellet.
8. Resuspendeer de pellet door 10 s te mengen in een vortexmixer.
9. Centrifugeer het mengsel bij 10.000 × g gedurende 5 min.
10. Decanteer het supernatant.

2. Precipitatie van melkeiwitten

1. Pour de melk in een beker en voeg een roerbare toe.
2. Verwarm de melk voorzichtig tot 40 °C op een roerbare verwarmingsplaat. Verwarm niet boven 40 °C.
3. Bereid 15% (v/v) azijnzuur voor door 7,5 mL azijnzuur te mengen en te verdunnen in voldoende water om 50 mL te bereiken.
4. Dompel de elektrode van een pH-meter in warme melk en bewaak de pH.
5. Voeg druppelsgewijs azijnzuur toe aan de melk tot een pH van 4,6 is bereikt.
6. Filtratie van melk
   1. Vul een stuk filterpapier en plaats het in een trechter.
   2. Plaats de trechter in een kolf en giet de aangezuurde melkoplossing in de trechter.
   3. Terwijl de oplossing wordt gegoten, kan het filterpapier verstopt raken. Gebruik een roerstaaf om de oplossing en het filterpapier af en toe te roeren om het te ontstoppen. Als het de doorstroming van de oplossing niet verbetert, vervang het filterpapier.
   4. Plaats een nieuw stuk filterpapier op de werktafel en breng zoveel mogelijk van het natte vaste stof over naar het nieuwe filterpapier. Dit zou meer water uit de vaste stof moeten absorberen.
   5. Als het nieuwe filterpapier te nat wordt, blijf het vervangen totdat er een minimale hoeveelheid vocht op het filterpapier aanwezig is. Druk het lichtjes om meer water te absorberen indien nodig.
   6. Neem het droge vaste stof en suspendeer het opnieuw in ongeveer 70% ethanol. Filtreer het vaste stof opnieuw volgens stappen 2.6.1 tot 2.6.5.
7. Centrifugatie van melk (als alternatief voor filtratie)
   1. Breng 50 mL porties van het mengsel over naar 50-mL centrifugebuizen.
   2. Centrifugeer bij 4.500 × g gedurende 10 min, en decanteer vervolgens het supernatant.
   3. Voeg 50 mL 70% ethanol toe aan de pellet.
   4. Resuspendeer de pellet in de ethanol met behulp van een roerstaaf.
   5. Centrifugeer deze suspensie volgens stap 2.7.2.
8. Resuspendeer de pellet in buffer voor verdere analyse zoals SDS-PAGE, anders bewaar deze bij 4°C.

3. Rekristallisatie van KCl

1. Weeg 50 g KCl in een Erlenmeyerkolf en voeg 100 mL water toe
2. Verwarm het mengsel tot het water kookt. Zorg ervoor dat alle KCl-poeder is opgelost. Sommige onzuiverheden kunnen niet in water oplossen.
3. Verwarm een andere (lege) Erlenmeyerkolf samen met het mengsel en houd deze erg warm.
4. Plaats een trechter met filterpapier in de warme, lege kolf.
5. Giet de oplossing door het filterpapier om onopgeloste onzuiverheden te verwijderen. De ontvangende kolf wordt warm gehouden om ervoor te zorgen dat er geen temperatuurveranderingen optreden tijdens de filtratie, anders zal een grof neerslag zich vormen. Als dat gebeurt, verwarm het mengsel opnieuw totdat alle neerslag is opgelost.
6. Verwijder de kolf met de oplossing van het vuur.
7. Bewaar het op een koele plaats in de kamer en laat het ongeveer 30 min langzaam afkoelen, of tot het niet langer warm aanvoelt.
8. Eenmaal afgekoeld tot kamertemperatuur, plaats de kolf in een ijsbad om de temperatuur verder te verlagen. Als alternatief kan de kolf in de koelkast of een temperatuurgecontroleerde kamer op 4 °C worden achtergelaten.
9. Kristallen kunnen worden geoogst door te filteren zoals in stappen 3.4–3.5 (gebruik een kolf en trechter op kamertemperatuur).