Name: Extractie en zuivering van polyfenolen uit bevroren gedroogde bessenpoeder voor de behandeling van vasculaire gladde spiercellen In Vitro (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-07-05T14:00:00.000+00:00
Duration: 12 min
Description: Leer een eenvoudige methode voor extractie en zuivering van polyfenolen uit bevroren bessenpoeder met ethanol en ultrasoon. Deze techniek ondersteunt cardiovasculair onderzoek naar celbiologische effecten op vasculaire gladde spiercellen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd gefinancierd door de American Heart Association (14GRNT20180028) en de Florida State University Council for Research and Creativity (COFRS).

1. Bereiding van reagentia <ol><li> Bereid 80% ethanol (100 ml) door 80 ml absolute ethanol (moleculaire biologiegraad) en 20 ml steriel water van celkweekgraad te mengen. </li><li> Voor het bereiden van polyphenol extract (10 mg / ml) weeg 10 mg CE of PE. Voeg 1 ml gewone Dulbecco&#39;s Modified Eagle Medium (DMEM) onder een celkweekkap toe. Vortex de oplossing. Aliquot in 200 μl porties en opslaan bij -20 ° C. </li><li> Bereid lysisbuffer op. <ol><li> Voeg 5 ml 1 M HEPES-voorraadoplossing toe (pH 7,4; 50 mM definitief), 1 ml 5 M NaCl voorraadoplossing (50 mM definitief), 1 ml 0,5 M EDTA voorraadoplossing (5 mM definitief), 2 ml 0,5 M NaF stamoplossing (10 mM definitief), 286 μL 700 mM Na 3 VO 4 stamoplossing (2 mM finale), 5 ml 200 mM Na4P207 voorraadoplossing (10 mM definitief) en 5 ml 20% Triton-X-100 voorraadoplossing bereid in water (1% definitief). Voeg water toe om een ​​volume van 100 ml te bereiken. Houd bij 4 ° C. </li><lI&gt; Voeg 10 μL / ml proteaseremmerscocktail toe. Voeg vers toe als de cellen klaar zijn voor lysis. </li></ol></li><li> Bereid Laemmli monsterbuffer (4x) op. <ol><li> Voeg 31,25 ml 2 M Tris-voorraadoplossing (pH 6,8), 100 ml glycerol, 50 ml van een 20% natriumdodecylsulfaat (SDS) -oplossing bereid in water en 50 ml ß-mercaptoethanol. Voeg water toe tot 250 ml. Houd bij 4 ° C. </li></ol></li><li> Voor het bereiden van Tris-Buffered Saline (TBS) buffer weeg 3 g Tris (25 mM definitief), 0,18 g KCl (2,5 mM definitief) en 8,76 g NaCl (150 mM definitief). Pas de pH op op 7.4 en voeg water tot 1 liter toe. Houd bij kamertemperatuur. </li><li> Om TBS-T te bereiden, voeg 997,5 ml TBS en 2,5 ml van een 20% Triton-X-100 oplossing bereid in water toe. Blijf bij RT. </li></ol> 2. Bereiding van Blackberry Extracts <ol><li> Bereiding van ruw extract uit gevriesdroogd bessenpoeder. <ol><li> Weeg 10 g gevriesdroogde blackberry poeder (of 5 g verspoeder). Als bevroren fruit wordt gebruikt, snijd het iNa zeer kleine stukken voordat u de extractie begint. </li><li> Meng het fruitpoeder met 100 ml 80% waterige ethanol in een 1 liter ronde Erlenmeyer-fles. </li><li> Soniceer het mengsel gedurende 20 minuten bij 42 kHz, 135 W met behulp van een ultrasoonbad bij 25 ° C, zonder enig tijdsinterval tussenin. Voer de sonication uit met continu stikstofspoeling in gedempt licht. Voor bevroren fruit verhoogt u de incubatietijd tot 4 uur. </li><li> Filter het mengsel door een filterpapier # 2 met behulp van een gekoelde Buchner-trechter met vacuümzuiging. OPMERKING: Aan het eind van deze stap verschijnen residuen van het monster op het filterpapier; Dit heet filtertaart. </li><li> Spoel de filterkoek met 50 ml 100% ethanol. Bewaar het filtraat en voeg de filterkoek toe aan een 1 liter ronde bodemkolf die 100 ml 80% waterige ethanol bevat. </li><li> Herhaal het extractieproces voor het residu (stappen 2.1.2 - 2.1.4). </li><li> Combineer de twee filtraten in een rondbodemkolf met nog eens 50 mlVan 80% waterige ethanol. OPMERKING: Het uiteindelijke volume moet ongeveer 300 ml zijn. </li><li> Gebruik een roterende verdamper bij 62 ° C en 50 rpm om het oplosmiddel te verdampen. Ga door met dit proces totdat de ethanol niet meer verdampt. OPMERKING: dit proces duurt ongeveer 45 minuten. </li><li> Breng het monster over naar een 50 ml conische buis. Verdamp de ethanol door 10 minuten stikstofgas bovenaan de buis te injecteren. OPMERKING: Deze stap is nodig om de volledige verdamping van de ethanol te verzekeren. Het volume van het monster bij deze stap is ongeveer 20 ml. </li><li> Bevroren het monster gedurende minstens 24 uur bij -80 ° C. OPMERKING: Deze stap is nodig om een ​​efficiënter vriesdrogingsproces mogelijk te maken. </li><li> Bevroren het monster gedurende ongeveer 8 uur bij -50 ° C. Bewaar de monsters bij -20 ° C. OPMERKING: De vriesdroger zorgt voor een sterk vacuüm bij -50 ° C in de kamer om de monsters te drogen, maar behoudt de meeste verbindingen, zoals polyfennols. </li></ol></li><li> Bereiding van gezuiverde polyfenol extracten uit ruwe extracten. <ol><li> Weeg de gevriesdroogde geëxtraheerde monsters. OPMERKING: Het volume van het extract bij deze stap is ongeveer 10 ml. </li><li> Voeg twee volumes (~ 20 ml) chloroform toe aan het ruwe extract en schud de oplossing gedurende 5 minuten in een roerplaat. </li><li> Giet het mengsel in een scheidtrechter. Laat het ruwe ekstrakt gedurende 1 uur bij RT afkanten om de gezuiverde fractie te verkrijgen. OPMERKING: Bij deze stap vormt een tweefase-mengsel. </li><li> Gooi de onderste laag (chloroformfase) uit de scheidtrechter weg en haal de waterlaag in een schone beker. </li><li> Voeg twee volumes ethylacetaat toe aan de waterige fractie en gebruik een magnetische roerbalk om het mengsel gedurende 5 minuten bij kamertemperatuur te roeren. </li><li> Filter het mengsel door middel van # 2 filterpapier met behulp van een gekoelde Buchner-trechter met vacuümzuiging. </li><li> Verzamel het gefilterde monster en verplaats het naar een rondbodemkolf om ons te zijnEd met de roterende verdamper. </li><li> Zet de roterende verdamper op 62 ° C en 50 rpm en verdamp het ethylacetaat gedurende ongeveer 30 minuten. </li><li> Bevroren het monster gedurende ongeveer 8 uur bij -50 ° C. Breng het monster over op een 50 ml conische buis en hou het op -20 ° C. </li></ol></li></ol> 3. Behandeling van VSMC&#39;s met bessenxtracten <ol><li> VSMC&#39;s cultuur. <ol><li> Isolate VSMC&#39;s uit de thoracale aorta&#39;s van Sprague-Dawley ratten door een enzymatische spijsvertering uit te voeren, zoals eerder beschreven 29 . Cultuur de VSMCs zoals beschreven 29 . </li><li> Bereid compleet medium voor de cultuur van VSMC&#39;s met behulp van DMEM die 1 g / L glucose bevat en aangevuld met 10% Fetal Bovine Serum (FBS), 100 U / ml penicilline, 100 mg / ml streptomycine en 2 mM L-glutamine. Bewaar het volledige medium bij 4 ° C. </li></ol></li><li> Incubatie van VSMC&#39;s met polyfenol extracten. <ol><li> Om de VSMC&#39;s te verdelen, verwerp de cultuRe medium en was de cellen tweemaal met fosfaat gebufferde zoutoplossing (PBS). Voeg 4 ml PBS en 2 ml trypsine EDTA 0,25% toe. Incubeer de cellen gedurende 5 minuten bij 37 ° C in een CO 2 incubator. <ol><li> Verzamel de cellen, meng ze met 2 ml volledig medium in een 15 ml centrifugebuis en centrifugeer bij 1.100 × g gedurende 5 minuten. Verwijder de supernatant en resuspendeer de celpellet met 1 ml PBS. Tel de cellen met behulp van een hemocytometer. </li><li> Zaad 50.000 VSMC&#39;s per putje in 6-putjes cultuurplaten en groei ze in compleet medium dat 10% FBS bevat totdat ze 90% samenvliegendheid bereiken (ongeveer 3 d). Bewaar de VSMC&#39;s bij 37 ° C in een bevochtigde 5% CO 2 incubator. </li></ol></li><li> Bereid het medium voor de behandeling aan met DMEM-medium dat 1 g / L glucose, 100 U / ml penicilline, 100 mg / ml streptomycine, 2 mM L-glutamine en 0,5% FBS bevat. Bewaar het behandelingsmedium bij 4 ° C. OPMERKING: Polyfenol extracten en Ang II worden direct toegevoegd aan cellen die deze me gebruikendium. </li><li> Bereid een voorraadoplossing van 10 mg / ml Ruwe Extract (CE) of Gezuiverde Extract (PE) van Polyfenolen door 10 mg extract in 10 ml DMEM-medium op te lossen. Houd de voorraad in 200 μl aliquots bij -20 ° C. </li><li> Incubeer de VSMCs met 2 ml behandelingsmedium dat 0,5% FBS bevat en voeg CE of PE extracten toe om een ​​concentratie van 50 - 500 μg / ml te bereiken. Verander het medium elke 24 uur door verse polyfenol extracten toe te voegen. Behandel de cellen voor 3 d. </li><li> Voor behandeling met Ang II of andere hormonen en groeifactoren, verhong de cellen gedurende tenminste 24 uur door incubatie van de cellen met behandelingsmedium dat 0,5% FBS bevat vóór de toevoeging van Ang II (100 nM). OPMERKING: Incubatie met en zonder CE en PE in 0,5% FBS behandelingsmedium voordat de toevoeging van Ang II wordt aanbevolen. <ol><li> Na 24 uur honger, voeg 100 nM Ang II toe. Vervang het behandelmedium met verse CE, PE of Ang II elke 24 uur voor 3 d. </li></ol></li></ol></li><li> Bereiding van celmonsters. <ol><li> Was de behandelde cellen tweemaal in koude PBS en leg ze met 200 μl lysisbuffer op ijs. </li><li> Verzamel cellysaten met behulp van celschrapers en overdracht van de lysaten naar 1,5 ml microcentrifuge buizen. Incubeer de totale cellysaten gedurende 20 minuten op ijs en vortex elke 5 minuten. </li><li> Soniceer de celextracten met drie uitbarstingen bij 125 W gedurende 10 s elk, met een tussenpose van 2 s. Houd de monsters op ijs gedurende de sonicatie. </li><li> Meet de eiwitconcentratie met behulp van een eiwitassay reagens bij 595 nm. </li><li> Bewaar de monsters bij -20 ° C voor analyse door Western blot. </li></ol></li><li> Western blot. <ol><li> Meng gelijke hoeveelheden eiwit (ongeveer 50 μg) van controle niet behandelde en polyfenol behandelde of Ang II behandelde monsters met lysis buffer om een ​​maximaal totaal volume van 50 μl te verkrijgen. Voeg 16 μl van een 4x Laemmli monsterbuffer toe. Verhit de monsters gedurende 5 minuten bij 75 ° C. </li><li> Scheid de samplEs in 10% SDS-PAGE gels en overdragen ze naar PDVF membranen bij 10 V gedurende 75 minuten in een semi-droog transfer systeem voor Western blot analyse met specifieke antilichamen. </li><li> Blokkeer het membraan met 2% melk in TBS 0,05% Triton-X100 buffer (TBS-T) gedurende 20 minuten. </li><li> Verwijder de melk door het membraan minstens drie keer te wassen met TBS (5 min elk) en incubeer met 1 uur bij RT of O / N bij 4 ° C bij primaire antilichamen. </li><li> Was het membraan drie keer, 10 minuten elk, met TBS-T en incubeer met een HRP-gekoppeld secundair antilichaam gedurende 45 minuten. </li><li> Was het membraan driemaal, 10 minuten elk, met TBS-T en ontwikkeld door verbeterde chemiluminescentie (ECL). </li></ol></li></ol>

<ol><li>Morton, L. W., Abu-Amsha Caccetta, R., Puddey, I. B., Croft, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemistry+and+biological+effects+of+dietary+phenolic+compounds%3A+relevance+to+cardiovascular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Exp+Pharmacol+Physiol%22%5BJournal%5D)">Chemistry and biological effects of dietary phenolic compounds: relevance to cardiovascular disease.</a> Clin Exp Pharmacol Physiol. 27 (3), 152-159 (2000).</li>
<li>Sekirov, I., Russell, S. L., Antunes, L. C., Finlay, B. B. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20664075">Gut microbiota in health and disease.</a> Physiol Rev. 90 (3), 859-904 (2010).</li>
<li>Manach, C., Scalbert, A., Morand, C., Remesy, C., Jimenez, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polyphenols%3A+food+sources+and+bioavailability%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Clin+Nutr%22%5BJournal%5D)">Polyphenols: food sources and bioavailability.</a> Am J Clin Nutr. 79 (5), 727-747 (2004).</li>
<li>Griffiths, G., Trueman, L., Crowther, T., Thomas, B., Smith, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Onions--a+global+benefit+to+health%5BTitle%5D)+AND+%22Phytother+Res%22%5BJournal%5D)">Onions--a global benefit to health.</a> Phytother Res. 16 (7), 603-615 (2002).</li>
<li>Mazzoni, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+genetic+aspects+of+berries%3A+from+field+to+health%5BTitle%5D)+AND+%22J+Sci+Food+Agric%22%5BJournal%5D)">The genetic aspects of berries: from field to health.</a> J Sci Food Agric. 96 (2), 365-371 (2016).</li>
<li>Wang, S. Y., Jiao, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scavenging+capacity+of+berry+crops+on+superoxide+radicals%2C+hydrogen+peroxide%2C+hydroxyl+radicals%2C+and+singlet+oxygen%5BTitle%5D)+AND+%22J+Agric+Food+Chem%22%5BJournal%5D)">Scavenging capacity of berry crops on superoxide radicals, hydrogen peroxide, hydroxyl radicals, and singlet oxygen.</a> J Agric Food Chem. 48 (11), 5677-5684 (2000).</li>
<li>Choi, M. H., Shim, S. M., Kim, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+effect+of+black+raspberry+seed+containing+anthocyanins+against+oxidative+damage+to+DNA%2C+protein%2C+and+lipid%5BTitle%5D)+AND+%22J+Food+Sci+Technol%22%5BJournal%5D)">Protective effect of black raspberry seed containing anthocyanins against oxidative damage to DNA, protein, and lipid.</a> J Food Sci Technol. 53 (2), 1214-1221 (2016).</li>
<li>Forbes-Hernandez, T. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Healthy+Effects+of+Strawberry+Polyphenols%3A+Which+Strategy+behind+Antioxidant+Capacity%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Crit+Rev+Food+Sci+Nutr%22%5BJournal%5D)">The Healthy Effects of Strawberry Polyphenols: Which Strategy behind Antioxidant Capacity?</a> Crit Rev Food Sci Nutr. 56, Suppl 1. S46-S59 (2016).</li>
<li>Figueira, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+effects+of+a+blueberry+extract+in+acute+inflammation+and+collagen-induced+arthritis+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Pharmacother%22%5BJournal%5D)">Protective effects of a blueberry extract in acute inflammation and collagen-induced arthritis in the rat.</a> Biomed Pharmacother. 83, 1191-1202 (2016).</li>
<li>Daglia, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polyphenols+as+antimicrobial+agents%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Polyphenols as antimicrobial agents.</a> Curr Opin Biotechnol. 23 (2), 174-181 (2012).</li>
<li>Hügel, H. M., Jackson, N., May, B., Zhang, A. L., Xue, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polyphenol+protection+and+treatment+of+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22Phytomedicine%22%5BJournal%5D)">Polyphenol protection and treatment of hypertension.</a> Phytomedicine. 23 (2), 220-231 (2016).</li>
<li>Niedzwiecki, A., Roomi, M. W., Kalinovsky, T., Rath, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anticancer+Efficacy+of+Polyphenols+and+Their+Combinations%5BTitle%5D)+AND+%22Nutrients%22%5BJournal%5D)">Anticancer Efficacy of Polyphenols and Their Combinations.</a> Nutrients. 8 (9), E552(2016).</li>
<li>Kresty, L. A., Mallery, S. R., Stoner, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Black+raspberries+in+cancer+clinical+trials%3A+Past%2C+present+and+future%5BTitle%5D)+AND+%22J+Berry+Res%22%5BJournal%5D)">Black raspberries in cancer clinical trials: Past, present and future.</a> J Berry Res. 6 (2), 251-261 (2016).</li>
<li>Hertog, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flavonoid+intake+and+long-term+risk+of+coronary+heart+disease+and+cancer+in+the+seven+countries+study%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Intern+Med%22%5BJournal%5D)">Flavonoid intake and long-term risk of coronary heart disease and cancer in the seven countries study.</a> Arch Intern Med. 155 (4), 381-386 (1995).</li>
<li>Peterson, J. J., Dwyer, J. T., Jacques, P. F., McCullough, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Associations+between+flavonoids+and+cardiovascular+disease+incidence+or+mortality+in+European+and+US+populations%5BTitle%5D)+AND+%22Nutr+Rev%22%5BJournal%5D)">Associations between flavonoids and cardiovascular disease incidence or mortality in European and US populations.</a> Nutr Rev. 70 (9), 491-508 (2012).</li>
<li>Cassidy, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+anthocyanin+intake+is+associated+with+a+reduced+risk+of+myocardial+infarction+in+young+and+middle-aged+women%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">High anthocyanin intake is associated with a reduced risk of myocardial infarction in young and middle-aged women.</a> Circulation. 127 (2), 188-196 (2013).</li>
<li>Jacques, P. F., Cassidy, A., Rogers, G., Peterson, J. J., Dwyer, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dietary+flavonoid+intakes+and+CVD+incidence+in+the+Framingham+Offspring+Cohort%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Nutr%22%5BJournal%5D)">Dietary flavonoid intakes and CVD incidence in the Framingham Offspring Cohort.</a> Br J Nutr. 114 (9), 1496-1503 (2015).</li>
<li>Aghababaee, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+blackberry+%28Morus+nigra+L.%29+consumption+on+serum+concentration+of+lipoproteins%2C+apo+A-I%2C+apo+B%2C+and+high-sensitivity-C-reactive+protein+and+blood+pressure+in+dyslipidemic+patients%5BTitle%5D)+AND+%22J+Res+Med+Sci%22%5BJournal%5D)">Effects of blackberry (Morus nigra L.) consumption on serum concentration of lipoproteins, apo A-I, apo B, and high-sensitivity-C-reactive protein and blood pressure in dyslipidemic patients.</a> J Res Med Sci. 20 (7), 684-691 (2015).</li>
<li>Jeong, H. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+Rubus+occidentalis+extract+on+blood+pressure+in+patients+with+prehypertension%3A+Randomized%2C+double-blinded%2C+placebo-controlled+clinical+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Nutrition%22%5BJournal%5D)">Effects of Rubus occidentalis extract on blood pressure in patients with prehypertension: Randomized, double-blinded, placebo-controlled clinical trial.</a> Nutrition. 32 (4), 461-467 (2016).</li>
<li>Jia, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+antihypertensive+effect+of+ethyl+acetate+extract+from+red+raspberry+fruit+in+hypertensive+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacogn+Mag%22%5BJournal%5D)">The antihypertensive effect of ethyl acetate extract from red raspberry fruit in hypertensive rats.</a> Pharmacogn Mag. 7 (25), 19-24 (2011).</li>
<li>Feresin, R. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blackberry%2C+raspberry+and+black+raspberry+polyphenol+extracts+attenuate+angiotensin+II-induced+senescence+in+vascular+smooth+muscle+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Funct%22%5BJournal%5D)">Blackberry, raspberry and black raspberry polyphenol extracts attenuate angiotensin II-induced senescence in vascular smooth muscle cells.</a> Food Funct. 7 (10), 4175-4187 (2016).</li>
<li>Pergola, C., Rossi, A., Dugo, P., Cuzzocrea, S., Sautebin, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+nitric+oxide+biosynthesis+by+anthocyanin+fraction+of+blackberry+extract%5BTitle%5D)+AND+%22Nitric+Oxide%22%5BJournal%5D)">Inhibition of nitric oxide biosynthesis by anthocyanin fraction of blackberry extract.</a> Nitric Oxide. 15 (1), 30-39 (2006).</li>
<li>Lu, H., Li, J., Zhang, D., Stoner, G. D., Huang, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+mechanisms+involved+in+chemoprevention+of+black+raspberry+extracts%3A+from+transcription+factors+to+their+target+genes%5BTitle%5D)+AND+%22Nutr+Cancer%22%5BJournal%5D)">Molecular mechanisms involved in chemoprevention of black raspberry extracts: from transcription factors to their target genes.</a> Nutr Cancer. 54 (1), 69-78 (2006).</li>
<li>Kim, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aqueous+extract+of+unripe+Rubus+coreanus+fruit+attenuates+atherosclerosis+by+improving+blood+lipid+profile+and+inhibiting+NF-%CE%BAB+activation+via+phase+II+gene+expression%5BTitle%5D)+AND+%22J+Ethnopharmacol%22%5BJournal%5D)">Aqueous extract of unripe Rubus coreanus fruit attenuates atherosclerosis by improving blood lipid profile and inhibiting NF-κB activation via phase II gene expression.</a> J Ethnopharmacol. 146 (2), 515-524 (2013).</li>
<li>Wang, J., Mazza, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+anthocyanins+and+other+phenolic+compounds+on+the+production+of+tumor+necrosis+factor+alpha+in+LPS%2FIFN-gamma-activated+RAW+264.7+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22J+Agric+Food+Chem%22%5BJournal%5D)">Effects of anthocyanins and other phenolic compounds on the production of tumor necrosis factor alpha in LPS/IFN-gamma-activated RAW 264.7 macrophages.</a> J Agric Food Chem. 50 (15), 4183-4189 (2002).</li>
<li>Pascual-Teresa, S., Moreno, D. A., Garcia-Viguera, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flavanols+and+anthocyanins+in+cardiovascular+health%3A+a+review+of+current+evidence%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Flavanols and anthocyanins in cardiovascular health: a review of current evidence.</a> Int J Mol Sci. 11 (4), 1679-1703 (2010).</li>
<li>Kim, D. O., Lee, C. Y. <a target="_blank" href="http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/0471142913.fai0102s06/abstract">Extraction and Isolation of Polyphenolics.</a> Curr Protoc Food Analyt Chem. 1, John Wiley & Sons. New York. 2.1-2.12 (2002).</li>
<li>Queires, L. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polyphenols+purified+from+the+Brazilian+aroeira+plant+%28Schinus+terebinthifolius%2C+Raddi%29+induce+apoptotic+and+autophagic+cell+death+of+DU145+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Anticancer+Res%22%5BJournal%5D)">Polyphenols purified from the Brazilian aroeira plant (Schinus terebinthifolius, Raddi) induce apoptotic and autophagic cell death of DU145 cells.</a> Anticancer Res. 26 (1A), 379-387 (2006).</li>
<li>Griendling, K. K., Taubman, M. B., Akers, M., Mendlowitz, M., Alexander, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+phosphatidylinositol-specific+phospholipase+C+from+cultured+vascular+smooth+muscle+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Characterization of phosphatidylinositol-specific phospholipase C from cultured vascular smooth muscle cells.</a> J Biol Chem. 266 (23), 15498-15504 (1991).</li>
<li>Vuong, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+a+polyphenol-enriched+preparation+on+chemoprevention+of+mammary+carcinoma+through+cancer+stem+cells+and+inflammatory+pathways+modulation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Role of a polyphenol-enriched preparation on chemoprevention of mammary carcinoma through cancer stem cells and inflammatory pathways modulation.</a> J Transl Med. 14, (2016).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Polyfenolen geïsoleerd uit bessen bevatten duidelijke composities. Het hier beschreven ethanol-gebaseerde extractieprotocol is toegestaan ​​voor het identificeren van verschillende niveaus van fenolzuren en flavonoïden die aanwezig zijn in ruwe en gezuiverde polyfenol-extracten van BL ( tabel 1 ). CE was verrijkt in gallinezuur, ferulzuur, 4-0-caffeoylchinezuur en 5-0-caffeoylchinezuur. Het zuiveringsproces heeft de niveaus van gallinezuur en p-coumaarzuur niet significant veranderd. Het verhoogde echte...

Polyfenolen zijn verbindingen die tenminste één fenolische ring in hun structuur bevatten en in overvloed aanwezig zijn in het plantenrijk 1 . Mense hebben voor millennia planten verbruikt voor medicinale doeleinden zonder zich bewust te zijn van het bestaan ​​van dergelijke verbindingen 2 . Veel groenten en fruit hebben sommige gedeelde polyfenolische verbindingen, zij het met verschillende hoeveelheden, waaronder flavonoïden, stilbenen en fenolzuren 3 . Hoewel polyfenolen vaak geassocieerd worden met kleurrijke groenten en fruit, is dit niet strikt waar. Zeaxanthine en xanthine zijn bijvoorbeeld aanwezig in groenten die niet zeer kleurrijk zijn, zoals uien en knoflook, die uit de familie van scallions zijn en in verband staan ​​met tal van voordelen voor de gezondheid 4 . Afgezien van geassocieerd met verschillende gezondheidsvoordelen 5 , dienen polyfenolen ook planten door ze te beschermen tegen insecten enD ultraviolette straling 2 . Polyfenolen komen vaak voor in het menselijke dieet en worden beschouwd als krachtige antioxidanten, omdat ze Reactieve Zuurstof Soorten (ROS) 6 , 7 , 8 kunnen afscheiden. Ze hebben ook anti-inflammatoire 9 , antimicrobiële 10 , anti-hypertensieve 11 en anti-carcinogene 12 , 13 eigenschappen. Epidemiologische studies tonen een omgekeerde associatie tussen de consumptie van flavonoïden en cardiovasculaire aandoeningen (CVD) 16 , 17 en mortaliteit 14 , 15 . Bessen worden in de VS veel gebruikt en hebben grote hoeveelheden polyfenolen, waaronder flavonoïden. Bijvoorbeeld, consumptie van blackberry (BL) sap (300<html> ML / d) gedurende acht weken significant verminderde systolische bloeddruk bij dyslipidemische patiënten 18 . Jeong et al. 19 meldde dat prehypnotherapie mannen en vrouwen die 2,5 g zwarte frambozen (BRB) per dag consumeren, een lagere 24 uur en nachtelijke bloeddruk hadden vergeleken met die van een placebo. Frambozen (RB) daalden de bloeddruk terwijl de expressie van superoxide dismutase (SOD) bij spontane hypertensieve ratten 20 werd verhoogd. Recent is aangetoond dat BL, RB en BRB de niveaus van ROS en senescentie verminderen die geïnduceerd worden door angiotensine II (Ang II) in Vascular Smooth Muscle Cells (VSMCs) 21 . Daarnaast verminderde de anthocyanine fractie van BL extract de expressie van induceerbaar stikstofoxide synthase (iNOS) en remde de activiteit van Nuclear Factor kappa B (NF-KB) en extracellulaire signaal-gereguleerde kinase (ERK) in lipopolysaccharide (LPS) gestimuleerde J774 cellenAss = &quot;xref&quot;&gt; 22. BRB-extracten verlaagden de in vitro 23 NF-KB activatie en cyclooxygenase 2 (COX-2) expressie, verbeterde het lipide profiel en verhinderde atherosclerose lesievorming bij muizen die een vet vet dieet 24 voerden. Anthocyaninen, die de meest voorkomende flavonoïden in bessen worden beschouwd, moduleren de ontstekingsreactie in LPS-gestimuleerde RAW 264.7 macrofagen door de productie van Tumor Necrosis Factor alpha (TNF-α) 25 te verminderen en de proliferatie en migratie van VSMCs 26 te verminderen . Aangezien er belangstelling is voor het begrijpen van de rol van polyfenolen bij de gezondheid en de ziekte van de mens, is het belangrijk om de extractiemethode te optimaliseren. Oplosmiddelwinning wordt daarvoor veel gebruikt, omdat het kosteneffectief en makkelijk reproduceerbaar is. In deze studie werd een oplosmiddelxtractie gebruikt met ethanol, samen met een ultrasoon geassisteerde extractioN methode, die is aangepast uit Kim en Lee 27 . De zuivering en fractionering van ruwe extracten (CE) onder toepassing van chloroform en ethylacetaat werden uitgevoerd ter verkrijging van de gezuiverde extract (PE) fractie die werd aangepast uit Queires et al. 28 . Bovendien werden de werkzaamheid van ruwe versus gezuiverde polyfenol-extracten van BL vergeleken bij het reduceren van de basale fosforylering van ERK1 / 2, en representatieve voorbeelden van het remmende effect van gezuiverd BL-polyfenol-extract op Ang II-geïnduceerde signaleringsreducties in VSMC&#39;s werden verschaft.

<table><tbody><tr><td>Angiotensin II</td><td>Sigma-Aldrich, Inc.</td><td>A9525-10MG</td><td>Behandeling van VSMC's</td></tr><tr><td>&beta;-actine</td><td>Sigma-Aldrich, Inc.</td><td>A2228</td><td>Primair antilichaam (1:5000)</td></tr><tr><td>Bessen van braambes</td><td>Mercer Foods</td><td></td><td>Gevroren gedroogd poeder van braambessen</td></tr><tr><td>Catalase&nbsp;</td><td>Calbiochem</td><td>219010</td><td>Primair antilichaam (1:1000)</td></tr><tr><td>Chloroform</td><td>Biotech Grd, Inc.</td><td>97064-678</td><td>Bereiding van gezuiverde polyfenolextracten</td></tr><tr><td>Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM )</td><td>Mediatech, Inc.</td><td>10-014-CV</td><td>Kweek van VSMC's</td></tr><tr><td>Ethanol (absoluut moleculair biologie niveau)</td><td>Sigma-Aldrich, Inc.</td><td>E7023-500ML</td><td>Bereiding van polyfenolextracten&nbsp;</td></tr><tr><td>Ethylacetaat</td><td>Sigma-Aldrich, Inc.</td><td>439169</td><td>Bereiding van gezuiverde polyfenolextracten</td></tr><tr><td>ERK1/2</td><td>Cell Signaling Technology, Inc.</td><td>9102S</td><td>Primair antilichaam (1:500)</td></tr><tr><td>EDTA, 500 mM, pH 8,0</td><td>Teknova, Inc.</td><td>E0306</td><td>Lyseringsbuffer</td></tr><tr><td>Vriesdroger</td><td>Labconco</td><td>VirTis Benchtop K</td><td>Bereiding van polyfenolextracten</td></tr><tr><td>Foetaal runder serum (FBS)</td><td>Seradigm</td><td>1400-500</td><td>Celkweek</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma-Aldrich, Inc.</td><td>H3375</td><td>Lyseringsbuffer&nbsp;</td></tr><tr><td>NaCl</td><td>EMD Millipore, Inc.</td><td>7760</td><td>Lyseringsbuffer</td></tr><tr><td>NaF</td><td>J.T.Baker, Inc.</td><td>3688-01&nbsp;</td><td>Lyseringsbuffer</td></tr><tr><td>Na3VO4</td><td>Sigma-Aldrich, Inc.</td><td>450243</td><td>Lyseringsbuffer</td></tr><tr><td>Na4P2O7, decahydraat</td><td>Sigma-Aldrich, Inc.</td><td>S-9515</td><td>Lyseringsbuffer</td></tr><tr><td>fosfo ERK1/2&nbsp;</td><td>Cell Signaling Technology, Inc.</td><td>9101S</td><td>Primair antilichaam (1:1000)</td></tr><tr><td>Protease-remmercocktail</td><td>Sigma-Aldrich, Inc.</td><td>P8340-5ml</td><td>Lyseringsbuffer</td></tr><tr><td>Proteïne-assaykleurstofreagens</td><td>Bio-Rad Laboratories, Inc.</td><td>500-0006</td><td>Proteïneconcentratiemeting</td></tr><tr><td>PVDF-overdrachtsmembraan</td><td>Thermo Scientific, Inc.</td><td>88518</td><td>Western blots</td></tr><tr><td>Roterende verdamper</td><td>Buchi Labortechnik</td><td>Rotavapor R3000</td><td>Bereiding van polyfenolextracten</td></tr><tr><td>Steriele water</td><td>Mediatech, Inc.</td><td>25-055-CV</td><td>Bereiding van polyfenolextracten</td></tr><tr><td>Sonicator</td><td>QSonica, LLC</td><td>Q125</td><td>Bereiding van celextracten</td></tr><tr><td>SOD2</td><td>Enzo Life Sciences, Inc.</td><td>ADI-SOD-110-F</td><td>Primair antilichaam (1:1000)</td></tr><tr><td>Triton-X-100</td><td>Sigma-Aldrich, Inc.</td><td>X100</td><td>Western blots</td></tr><tr><td>Whatman #2-filterpapier</td><td>GE Healthcare, Inc.</td><td>28317-241</td><td>Bereiding van polyfenolextracten</td></tr></tbody></table>

extractie en zuivering van polyfenolen uit bevroren gedroogde bessenpoeder voor de behandeling van vasculaire gladde spiercellen<em&gt; in vitro</em

Extraction and Purification of Polyphenols from Freeze-dried Berry Powder for the Treatment of Vascular Smooth Muscle Cells In Vitro

Epidemiologische studies geven aan dat verhoogde flavonoïdale inname correleert met verminderde sterfte door hart- en vaatziekten (CVD) in de Verenigde Staten (VS) en Europa. Bessen worden in de VS veel gebruikt en hebben een hoge polyfenolische inhoud. Polyfenolen zijn aangetoond dat ze met veel moleculaire doelen interageren en veel positieve biologische functies uitoefenen, waaronder antioxidant, anti-inflammatoire en cardioprotectieve effecten. Polyfenolen geïsoleerd van blackberry (BL), framboos (RB) en zwarte frambozen (BRB) verminderen oxidatieve stress en cellulaire senescentie in reactie op angiotensine II (Ang II). Dit werk geeft een gedetailleerde omschrijving van het protocol dat wordt gebruikt om de polyfenol extracten uit vriesgedroogde bessen te bereiden. Polyfenol-extracties uit bevroren gedroogde bessenpoeder werden uitgevoerd met behulp van 80% waterige ethanol en een met behulp van ultrasoon geassisteerde extractiemethode. Het ruwe extract werd verder gezuiverd en gefractioneerd onder toepassing van chloroform en ethylacetaat,respectievelijk. De effecten van zowel ruwe als gezuiverde extracten werden getest op vasculaire gladde spiercellen (VSMC&#39;s) in cultuur.

Er is eerder aangetoond dat polyphenol-extracten geïsoleerd van BL, RB en BRB de senescentie van VSMC&#39;s verminderen in reactie op Ang II 21 . Er is aangetoond dat deze gezuiverde polyfenol extracten Ang II signalering moduleren door de fosforylering van Akt, p38 Mitogen-Activated Protein Kinase (MAPK) en ERK1 / 2 te reduceren. BL voorkomt senescentie door de expressie van het NADPH-oxidase (Nox) 1 te verminderen, een enzym dat superoxideanionen produceert en s...

In dit werk wordt een stap-voor-stap methode beschreven om polyphenolrijke extracten uit gevriesdroogd bessenpoeder te bereiden. Daarnaast biedt het een grondige beschrijving van hoe deze polyphenol-rijke extracten in celkweek kunnen worden gebruikt in aanwezigheid van vasculaire gladde spiercellen (VSMC&#39;s) van het peptidehormoon-angiotensine II (Ang II).

Extractie en zuivering van polyfenolen uit bevroren gedroogde bessenpoeder voor de behandeling van vasculaire gladde spiercellen<em&gt; In Vitro</em

Epidemiological studies indicate that increased flavonoid intake correlates with decreased mortality due to cardiovascular diseases (CVD) in the United ...

Het algemene doel van dit protocol is het bieden van een eenvoudige en reproduceerbare methode voor de extractie en zuivering van plantpolyfenolen die in de toekomst kunnen worden gebruikt om cellen te behandelen. Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van belangrijke vragen over de rol van functionele voedingsmiddelen bij de menselijke gezondheid en ziekten. Deze op ethanol gebaseerde en ultrasone ondersteunde polyfenolextractie is een eenvoudige en reproduceerbare methode die een hoger polyfenolenrendement mogelijk maakt.Het gebruik van chloroform maakt de verwijdering van suikers, vetzuren, eiwitten en andere moleculen mogelijk, terwijl ethylacetaat fractionering van polyfenolen mogelijk maakt. Deze geconcentreerde polyfenolextracten kunnen vervolgens in vitro en in vivo worden gebruikt om de effecten van polyfenolen en hun werkingsmechanismen op verschillende weefsels te bestuderen, waaronder het cardiovasculaire systeem, zoals hier beschreven. Bereid ter voorbereiding op deze procedure de reagentia voor zoals uiteengezet in het tekstprotocol.Weeg vervolgens 10 gram gevriesdroogd bramenpoeder af. Voeg het bessenpoeder toe aan een ronde kolf van één liter die 100 milliliters van 80% waterige ethanol bevat. Plaats de kolf in een ultrasoon bad bij 25 degrees Celsius.Sonicate het mengsel gedurende 20 minuten bij 42 kilohertz en 135 watts onder voortdurende stikstofspoeling en gedempt licht. Gebruik daarna een gekoelde Büchnertrechter met vacuümafzuiging om het mengsel te filteren door een filterpapier nummer twee. Spoel de filterkoek na met 50 milliliters 100%ethanol.Bewaar het filtraat en voeg de filterkoek toe aan een ronde bodemkolf van één liter die 100 milliliters 80% waterige ethanol bevat. Herhaal vervolgens het extractieproces door het mengsel te soniceren, te filteren en te wassen. Combineer de twee filtraten in een ronde bodemkolf die 50 milliliters 80% waterige ethanol bevat.Verdampt het oplosmiddel met een rotatieverdamper bij 62 °C en 50 rpm. Ga hiermee door totdat de ethanol niet meer verdampt. Breng het monster vervolgens over naar een conische buis van 50 milliliter.Inject stikstofgas aan de bovenkant van de buis gedurende 10 minuten om alle resterende ethanol te laten verdampen. Vries het monster gedurende ten minste 24 uur in bij -80 °C. Vriesdroog het monster vervolgens gedurende ongeveer acht uur bij -50 °C.Bewaar de monsters bij -20 °C tot het moment van gebruik. Begin met het wegen van de gevriesdroogde geëxtraheerde monsters. Voeg ongeveer 20 mL chloroform toe aan een bekerglas van 100 mL met het monster.Meng de oplossing gedurende vijf minuten met een roerplaat. Giet het mengsel vervolgens in een scheitrechter. Laat het ruwe extract één uur bezinken bij kamertemperatuur.Verwijder daarna de onderste laag en verzamel de waterige laag in een schoon bekerglas. Voeg twee volumes ethylacetaat toe aan het bekerglas. Roer het mengsel vijf minuten lang bij kamertemperatuur met een magnetische roerstaaf.Gebruik vervolgens een gekoelde Buchner-trechter met vacuümafzuiging om het mengsel te filteren door filterpapier nummer twee. Breng het gefilterde monster over naar een rondbodemkolf. Verdampt de ethylacetaat gedurende 30 minuten met een rotatieverdamper bij 62 °C en 50 rpm.Vriesdroog het monster hierna acht uur lang bij -50 °C. Overbreng het monster naar een conische buis van 50 ml en bewaar deze bij -20 °C tot gebruik. Giet na het cultiveren van de gladde spiercellen van de vaten het kweekmedium af en was de cellen tweemaal met fosfaatgebufferde zoutoplossing.Voeg vervolgens vier milliliter PBS en twee milliliter 0,25% Trypsin-EDTA toe. Incubeer in een kooldioxide-incubator bij 37 graden Celsius gedurende vijf minuten. Breng de cellen daarna over naar een centrifugebuis van 15 milliliter die twee milliliter volledig medium bevat.Centrifugeer bij 1.100 ×g gedurende vijf minuten. Verwijder het supernatant en resuspendeer de celpellet in één milliliter PBS. Tel de cellen met behulp van een hemocytometer.Zaai vervolgens 50 000 cellen per well in zes-well kweekplaten. Laat de cellen groeien tot 90% confluentie in volledig medium met 10% foetaal runderserum. Bereid het behandelmedium voor zoals beschreven in het tekstprotocol en bewaar dit bij vier graden Celsius.Voeg vervolgens 10 mg van het ruwe of gezuiverde extract toe aan 1 ml gewoon DMEM om een voorraadoplossing van 10 mg/mL te bereiden. Bewaar de voorraadoplossing in aliquots van 200 µL bij -20 °C. Voeg daarna 2 ml behandelmedium, bestaande uit 0,5% foetaal runderserum en de gewenste concentratie van de voorraadoplossing, toe aan de cellen.Incubeer gedurende drie dagen bij 37 °C in een bevochtigde 5% CO2-incubator. Indien er vervolgens wordt behandeld met hormonen of groeifactoren, laat de cellen dan minimaal 24 uur uithongeren door te incuberen in behandelmedium met 0,5% foetaal runderserum. Voeg na het uithongeren het gewenste hormoon toe en vervang het behandelmedium elke 24 uur gedurende drie dagen, zoals gedetailleerd in het tekstprotocol.Was vervolgens de behandelde cellen twee keer met koud PBS. Lyseer de cellen op ijs met behulp van 200 µL lysisbuffer. Verzamel het cellulysaat met celschrapers en breng dit over naar een microcentrifugebuisje van 1,5 mL.Incubeer het verzamelde lysaat 20 minuten op ijs, waarbij elke vijf minuten wordt gevortext. Sonicate daarna de celextracten met drie pulsen van 125 watt gedurende elk 10 seconden, met een pauze van twee seconden tussen elke puls. Meet de eiwitconcentratie met een eiwitassay-reagens bij 595 nanometer.Meng 50 µg proteïne met lysisbuffer om een maximaal totaal volume van 50 µL te verkrijgen. Voeg 16 µL van een 4x Laemmli-monsterbuffer toe. Verhit de monsters vervolgens vijf minuten bij 75 °C.Scheid de monsters in 10% SDS-PAGE-gels en breng deze over op PVDF-membranen voor Western blot-analyse met specifieke antilichamen. In deze studie wordt een extractie op basis van ethanol gebruikt om de verschillende niveaus van fenolzuur en flavonoïden te identificeren die aanwezig zijn in ruwe en gezuiverde polyphenol-extracten van bramen. Hoewel het zuiveringsproces de niveaus van galluszuur of p-koumarzuur niet significant heeft veranderd, verhoogde het wel de niveaus van 3-O-caffeoylquininezuur van 170,5 naar 235,3 ppm en van quercetine van 24,5 naar 95 ppm.Daarentegen gingen ferulzuur en rutine verloren tijdens de zuivering van het ruwe extract. Na de extractie werden VSMC's gedurende drie dagen geïncubeerd in 50 tot 500 µg/mL van respectievelijk het ruwe of gezuiverde bramenextract in medium dat 0,5% foetaal kalfsserum bevatte. Beide extracten bleken effectief in het verminderen van de basale fosforylering van ERK.Het blijkt echter dat het gezuiverde extract bij 100 µg/mL een sterke downregulatie veroorzaakt, terwijl voor het ruwe extract 400 tot 500 µg/mL vereist is. Dit suggereert dat de grotere efficiëntie van het gezuiverde extract bij het remmen van ERK-fosforylering te danken is aan de hogere concentraties polyphenolverbindingen. Daarna worden VSMC's gedurende 24 uur behandeld met 200 µg/mL gezuiverd bramenextract vóór de toevoeging van 100 nM angiotensine II. Zoals eerder is gerapporteerd, vermindert het polyphenolextract uit bramen de door angiotensine II geïnduceerde ERK-fosforylering, maar vertoont het geen effect op de expressie van catalase of SOD2.Zodra de methode onder de knie is, kan de extractie van polyfenolen in enkele uren worden voorbereid. Deze techniek kan onderzoekers op het gebied van functionele voeding helpen om de rol van polyfenolen in vitro en in diermodellen te onderzoeken. Na het bekijken van deze video zou u in staat moeten zijn om polyfenolen uit fruit en groenten te extraheren en te zuiveren, en de polyfenolextracten te gebruiken om cellen in kweek te behandelen.We hebben deze methode gebruikt om de rol van bramenpolyfenolen aan te tonen bij het voorkomen van veroudering van gladde spiercellen in de aortavaten. Dit is van groot belang, aangezien de veroudering van het vaatstelsel een belangrijke risicofactor is voor de ontwikkeling van hart- en vaatziekten.

extraction-purification-polyphenols-from-freeze-dried-berry-powder

Research

JoVE Journal

Chemistry

Scheikunde

Bioassays ontworpen om te controleren van de ontwikkeling van een schimmel pathogeen, Colletotrichum fioriniae, in aanwezigheid van bosbessen of cranberry floral extracten op glas coverslips worden hier beschreven. Water-, chloroform en veld regenwater - gebaseerd floral extractie technieken zijn gedetailleerd en inzicht in hoe deze informatie kan worden toegepast.

Colletotrichum fioriniae Ontwikkeling in Water en Chloroform gebaseerde Blueberry en Cranberry Floral extracten

We hebben een protocol geoptimaliseerd voor het isoleren en zuiveren van Murine cardiale pericytes voor fundamenteel onderzoek en onderzoek naar hun biologie en therapeutisch potentieel.

Isolatie en zuivering van Murine cardiale Pericytes

We presenteren een protocol voor de extractie van Murine cerebrale pericytes. Gebaseerd op een antibioticum-vrije verrijkings georiënteerde pericyte extractie, is dit protocol een waardevol hulpmiddel voor in vitro studies die een hoge zuiverheid en hoge opbrengst bieden, waardoor het aantal gebruikte proefdieren afneemt.

Een hoge Uitvoermethode om cerebrale Pericytes van de muis te isoleren

Het doel van dit protocol is om fenolische metabolieten in plasma te detecteren met behulp van een semi-gerichte chromatografie-massaspectrometriemethode.

Semi-gerichte ultra-high-performance chromatografie gekoppeld aan massaspectrometrie analyse van fenolische metabolieten in plasma van oudere volwassenen

Vasculaire reacties van arteriële pulmonale circulatie kunnen worden onderzocht met behulp van intrapulmonale slagader (IPA) en vasculaire gladde spiercellen (VSMC's). De huidige studie beschrijft de isolatie van IPA in detail en de protocollen die worden gebruikt voor het onderzoeken van vasorelaxatie als reactie op fysiologische stimuli.

Isolatie van intrapulmonale slagader en gladde spiercellen om vasculaire reacties te onderzoeken

Het huidige protocol beschrijft een geïntegreerde strategie voor het verkennen van de belangrijkste doelen en mechanismen van Fructus Phyllanthi tegen hyperlipidemie op basis van netwerkfarmacologievoorspelling en metabolomics-verificatie.

Netwerk farmacologie voorspelling en metabolomics validatie van het mechanisme van fructus phyllanthi tegen hyperlipidemie

Hier introduceren we een stabiliteitsevaluatiemethode op basis van meerdere lichtverstrooiingstechnologie om de stabiliteit van traditionele Chinese geneeskunde-extracten te evalueren.

Multiple Light Scattering gebruiken om de stabiliteit van Phyllanthus emblica L. Extracten verkregen met verschillende extractiemethoden te onderzoeken

Dit protocol beschrijft het gebruik van een op polyol gebaseerde microgolf-ondersteunde extractiemethode voor het extraheren van fenolische verbindingen en natuurlijke antioxidanten, wat een praktische en ecologisch duurzame benadering vertegenwoordigt voor de ontwikkeling van kant-en-klare extracten.

Microgolf-geassisteerde extractie van fenolische verbindingen en antioxidanten voor cosmetische toepassingen met behulp van technologie op basis van polyol

Dit protocol beschrijft een hoge doorverbonden colorimetrische methode die is gebaseerd op de vorming van een complex tussen jodium en ketens van glucose moleculen in zetmeel. Jodium vormt complexen met zowel amylose en lange ketens binnen amylopectine. Na de toevoeging van jodium aan een zetmeelmonster, de maximale absorptie van amylose en amylopectine optreedt bij 620 en 550 nm respectievelijk. De amylose / amylopectine verhouding kan worden geschat uit de verhouding tussen de 620 en 550 nm...

Rapid High Throughput Amylose Bepaling in gevriesdroogde aardappelknol Samples

DNA origami is een krachtige methode voor het fabriceren van nauwkeurige objecten op nanoschaal door het zelfsamenstellen van DNA-moleculen te programmeren. Hier beschrijven we een protocol voor het vouwen van een bio-responsieve robot uit DNA origami, de zuivering en negatieve kleuring voor transmissie-elektronenmicroscopische beeldvorming (TEM).

Vouwen en Karakterisatie van een Bio-responsieve Robot van DNA Origami

Leer een eenvoudige methode voor extractie en zuivering van polyfenolen uit bevroren bessenpoeder met ethanol en ultrasoon. Deze techniek ondersteunt cardiovasculair onderzoek naar celbiologische effecten op vasculaire gladde spiercellen.

Extractie en zuivering van polyfenolen uit bevroren gedroogde bessenpoeder voor de behandeling van vasculaire gladde spiercellen In Vitro (Video) | JoVE Journal

Extractie en zuivering van polyfenolen uit bevroren gedroogde bessenpoeder voor de behandeling van vasculaire gladde spiercellen

Meer video's verkennen