Dissectie van de alvleesklier muis voor histologisch analyse en metabole profilering

Het hoofddoel van dit video-artikel is om gedetailleerde visuele instructies te bieden voor de dissectie van een pancreas van een muis. De instructies zijn bedoeld voor onderzoekers die muismodellen van menselijke pancreasziekten bestuderen en de pancreas van de muis via dissectie moeten oogsten voor histologische analyse of metabole profilering. Het video-artikel biedt daarnaast gedetailleerde instructies voor het uitvoeren van een terminale bloedafname via een hartpuncturprocedure.

Er wordt een operatietafel getoond met de benodigde materialen. Deze omvatten één glazen pot met deksel, één 15 mL falcon tube, één chirurgische schaar, één knijpfles met 70% ethanol, twee schuimplaten, twee pincetten, twee 1 mL spuiten met een 21 gauge naald, twee 50 mL falcon tubes, één centrifugebuis, één cryovial, vier chirurgische gazen, tien spelden, een dispenser met sterilisatiedoekjes en een naaldcontainer. Er wordt de tafel voor na de operatie getoond met de benodigde materialen.

Deze omvatten één analytische balans, één Dewar van vier liter met vloeibare stikstof, een ondiepe Dewar met brede opening, een drijvend microbuisjesrek, één schaar voor chirurgisch gebruik, twee pincetten, vijf cryo-buisjes en een dispenser met steriele doekjes. Om euthanasie uit te voeren, wordt de muis eerst in de glazen pot geplaatst die een gaasje bevat gedrenkt in enkele druppels isofluraan, en vervolgens afgedekt met het deksel tot de muis bewusteloos wordt, wat doorgaans ongeveer één minuut duurt. De muis wordt vervolgens uit de glazen pot gehaald en er wordt een voetknijptest uitgevoerd om er zeker van te zijn dat de muis geen ongemak kan ervaren.

Als de pootknijptest mislukt, wordt de muis teruggeplaatst in de glazen pot en wordt het deksel teruggeplaatst totdat de pootknijptest succesvol kan worden uitgevoerd. Plaats de muis op zijn rug, fixeer de ledematen van de muis op het chirurgische schuimbord en bevochtig de ventrale zijde van de muis met 70% ethanol. Knijp de vacht nabij de urethra-opening samen met de pincet en trek deze voorzichtig omhoog.

Maak een incisie door de buikholte, beginnend bij de urethrale opening, over de middellijn omhoog en eindigend bij de kin. Grijp bij het beginpunt van de eerste incisie één zijde van de vacht vast en maak een tweede incisie naar beneden en diagonaal richting de achterpoot. Herhaal deze handeling op dezelfde wijze aan de tegenovergestelde zijde.

Lokaliseer het hart om de terminale hartpunctie uit te voeren. Pak hiervoor het sternum vast met de pincet en snijd in het diafragma. Snijd vervolgens snel omhoog door de ribbenkast en verwijder het weggesneden gedeelte om het kloppende hart bloot te leggen.

Zodra het hart is gelokaliseerd, verwijdert u het pericardium en voert u de terminale hartpunctie uit met de spuit. Voor een optimale bloedafname gebruikt u de zuiger van de naald om de pompactie van het hart na te bootsen en voorkom dat u te snel trekt. Breng het bloed over in de centrifugebuis en gooi de spuit weg in de container voor scherpe voorwerpen.

Nadat de hartpunctie is uitgevoerd, vindt de euthanasie plaats door de verbindingen van het hart te verwijderen. Lokaliseer de maag aan de linkerzijde van de muis. De pancreas heeft het uiterlijk van diffuus, lichter gekleurd weefsel dat vastzit aan de maag en het duodenum, en langs de gehele dunne en dikke darm loopt en vastzit aan de milt.

Begin de pancreas voorzichtig te scheiden van de maag en het duodenum met behulp van de pincet. Ga door met het scheiden van de pancreas van de dunne darm, beginnend bij de secties van het jejunum en ileum en uiteindelijk tot aan het caecum en de dikke darm. Positioneer de pincet bij het caecum opnieuw en ga door met het scheiden van de pancreas langs het resterende colon in de richting van het rectum.

Op dit punt is het handig om het gedeelte van de maag tot aan het gebied van de dikke darm direct voorafgaand aan het rectum door te snijden en te verwijderen. Lokaliseer de pancreas en de vastgehechte milt. Schuif de pancreas naar de rechterkant van de muis.

Doorsnij de resterende verbindingen tussen de pancreas en de borstholte om de pancreas en de aangrenzende milt volledig los te maken. Verwijder de pancreas en spreid deze uit voor onderzoek. Indien gewenst kunnen op dit punt andere organen worden verwijderd.

Na de extractie worden de monsters naar het postoperatieve gebied verplaatst. Elk orgaan wordt gewogen en vervolgens in het respectievelijke cryovial geplaatst. Noteer alle waargenomen onregelmatigheden.

Zodra de organen in de cryovials zitten, plaatst u deze in het drijvende microbuisjesrek en vervolgens in de Dewar met vloeibare stikstof. Na het snel invriezen moeten de organen voor langdurige bewaring worden opgeslagen bij minus 80 graden Celsius. Alle gebruikte dissectie-instrumenten moeten worden gedesinfecteerd met de steriliserende doekjes.

De falcon-buis met het met isofluraan gedrenkte chirurgische gaasje moet worden afgesloten. Het chirurgische gaasje op het schuimrubberen bord moet worden vervangen door een nieuw chirurgisch gaasje. De delen van de muis die niet zijn verzameld, moeten worden afgevoerd volgens het beleid voor dierlijke afvalverwerking van de instelling.

De volgende items moeten dienovereenkomstig worden behandeld. Zodra deze items correct zijn opgeslagen, kan een verscheidenheid aan experimenten worden uitgevoerd, waaronder, maar niet beperkt tot, fluorescentiemicroscopie, hematoxyline- en eosinehistologie, immunohistochemie, massaspectrometrie en nucleaire magnetische resonantiespectroscopie. Aangezien de pancreas een primair orgaan is voor metabole activiteit en insulineproductie, maakt deze procedure het mogelijk om de fysiologische kenmerken te behouden.

Door de pancreas te isoleren, kan er in de toekomst analyse worden uitgevoerd op het monster. Deze procedure maakt het mogelijk om interacties met andere weefsels binnen hetzelfde organisme en binnen hetzelfde tijdsbestek te vergelijken en te bestuderen.