Name: Dissectie van de alvleesklier muis voor histologisch analyse en metabole profilering (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-08-19T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 21 s
Description: Leer de dissectie van de alvleesklier bij muizen voor histologische analyse en metabole profilering. Deze methode omvat terminale bloedafname via hartpunctie en is essentieel voor onderzoek naar pancreasaandoeningen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

MAK erkent steun voor dit werk van de National Institutes of Health / National Cancer Institute verlenen nummer - 1R15CA152985-01A1. Dit project heeft ook ondersteund door de Miami University Undergraduate Research Award Program, de Miami University Doctor-Undergraduate mogelijkheden voor Scholarship Program en de Miami University zomerprogramma geleerden.

de procedures uitgevoerd in de video hieronder beschreven zijn goedgekeurd door de institutionele Animal Care en gebruik Comité (IACUC) aan de Universiteit van Miami.
 1. voorbereiding en stimulans Test <ol><li>stellen twee verschillende gebieden voor de chirurgische ingreep, de operatietafel en de tabel na operatie. Etappe van beide gebieden met alle materialen en keukengerei die nodig zijn.
	<ol><li>De operationele fase tabel onder een geventileerde kap. De tabel met de apparatuur op een wijze waarmee de continue en onbelemmerde uitoefening van de procedure regelen.</li>
		<li>Tot stand brengen van een postoperatieve tabel in dezelfde kamer en in de buurt van de hoofdtabel van operatie. Beide tabellen als steriele omgevingen gedurende de hele procedure handhaven.</li>
	</ol></li> <li>Plaats van de volgende handelingen uit op de operatietafel leveringen: een glazen pot met deksel, een tube van 15 mL, één paar chirurgische schaar, een squeeze fles van 70% ethanol, twee schuim platen, twee pincet, twee 1 mL 21 gauge spuiten, twee buizen van 50 mL, een centrifugebuis , een cryogene flacon, vier chirurgische pads, tien pinnen, een dispenser van steriliserende doekjes en een container slijpsel.</li>
	<li>Plaats de volgende leveringen op de tafel na bewerking: een analytische balans, een 4 L dewar van vloeibare stikstof, een ondiepe brede mond dewar, een drijvende microtube rack, één paar chirurgische scharen, twee pincet, vier cryogene flesjes en een dispenser voor steriele doekjes.</li>
	<li>Vul een 50 mL en één tube van 15 mL tot 75% volume met formaline.</li>
	<li>Met behulp van een pin in elke hoek, brengt een chirurgische aanvullen tot een geschatte 30 x 30 cm foam board om te dienen als de dissectie van bestuur. Gebruik de resterende vier pinnen tijdens de operatie. Bereiden van een kleinere Raad van bestuur van schuim met een chirurgische pad voor het overbrengen van de organen naar de tabel post-op. 
	Let op: Isofluraan (99,9%) is een giftige chemische, en in een vent kap moet worden gebruikt om ervoor te zorgen het maximale niveau van veiligheid van het opruimen van afval verdoving gas 8. Aanvullende informatie over de risico's voor onderzoekers die is gekoppeld aan het gebruik van de methode van de open neerzetten met behulp van Isofluraan kan worden gevonden in een artikel door Taylor en Mook 8.</li>
	<li>Plaats een chirurgische pad in de glazen pot en de weken met een paar druppels van Isofluraan (99,9%) en plaats een papieren handdoek over de bovenkant om te voorkomen dat direct contact van de muis met de Isofluraan. Ook het gebruik van een chirurgische pad lijn van de resterende buis en geniet met een paar druppels van Isofluraan en plaats een extra pad over de bovenkant om te voorkomen dat rechtstreeks contact tussen de muis en de Isofluraan.</li>
	<li>Pour vloeibare stikstof in de ondiepe brede mond dewar totdat het maximum vullen lijn is bereikt.</li>
	<li>Plaats de muis geselecteerd voor dissectie in de narcose kamer, dat wil zeggen de glazen pot met een zeem gedrenkt met een paar druppels Isofluraan (99,9%) bedekt met deksel, ~ 1 min. 
	Opmerking: Deze tijd varieert van muis tot muis. Zodra de muis bewusteloos is, verwijderen uit de kamer en plaats deze op het operationele bord.</li>
	<li>Oriënteren de muis zodat het liegt ventrale zijde omhoog en met haar hoofd weg van de wetenschapper wees. Plaats van het hoofd in de buis bekleed met een chirurgische pad gedrenkt met een paar druppels van Isofluraan (99,9%) en een stimulans test uitvoeren door een snuifje van de voet om ervoor te zorgen dat de muis niet reageert op prikkels.
	<ol><li>Als deze test mislukt en de muis op de voet snuifje proef antwoordt, herhaalt u stap 1.8.</li>
	</ol></li></ol> 2. Eerste snede hart doorprikken en euthanasie <ol><li>Pin van de ledematen van de muis aan de chirurgische schuim van bestuur en de ventrale zijde van de muis met 70% ethanol nat.</li>
	<li>Knijpen de vacht/huid in de buurt van de urethrale opening met een tang en trek iets omhoog. Maak een incisie met de chirurgische schaar via de buikholte van de urethrale openstelling, de middellijn beginnend en eindigend op de kin.
	<ol><li>In de buurt van het beginpunt van de oorspronkelijke incisie, één zijde van de vacht/huid te grijpen met de pincet en maken een andere snede met de schaar naar beneden en diagonaal naar de achterste poot.</li>
		<li>Herhaal dit op dezelfde wijze aan de overkant. 
		Opmerking: De vacht/huid maken een grotere opening naar beneden kan worden gespeld, maar is niet noodzakelijk.</li>
	</ol></li> <li>Zoek het hart en het hartzakje, oftewel de OSS rond het hart, om te voorkomen dat de verstopping van de naald van de spuit verwijderen.
	<ol><li>Pak het hartzakje met de pincet en snijd het met de schaar. Uitvoeren van het hart-lek door zorgvuldig de naald van de spuit in het kloppend hart en langzaam beginnen te trekken van de plunjer.</li>
		<li>Voor optimale bloedinzameling, gebruiken de plunjer van de naald om te bootsen de pompwerking van het hart en voorkomen te snel tekenen. 
		Opmerking: Doorgaans ongeveer 1 mL bloed kunnen worden verzameld.</li>
		<li>Na het voltooien van de collectie van het bloed, het bloed te verjagen in de centrifugebuis en gooi de injectiespuit in de container slijpsel.</li>
		<li>Na de punctie van het hart wordt uitgevoerd, euthanasie uitvoeren door het verwijderen van de bijlagen die het hart aansluiten. 
		Opmerking: Heparine, een anti-coagulant, is niet toegevoegd aan de spuit in deze procedure voorafgaand aan de punctie hart om het bloed te stollen voor serum collectie in deze specifieke studie. Echter, als de onderzoeker voorkomen dat de bloedstolling wilde voor het verzamelen van plasma, heparine konden worden toegevoegd aan de spuit vóór het hart-lek.</li>
	</ol></li> <li>Als de studie genotypering van de muis omvat, een gedeelte van het oor met de schaar snip en plaats in een centrifugebuis voor de verificatie van een genotype.</li></ol>
 3. extractie van de pancreas <ol><li>Zoeken de maag aan de linkerzijde van de muis. Begin zachtjes (teneinde scheuren) scheiden van de alvleesklier van de maag en de twaalfvingerige darm met behulp van twee pincet. 
	Opmerking: Wanneer het loskoppelen van de alvleesklier van de maag en darmen, het is heel belangrijk dat de verlostang zachtjes begeleiden de alvleesklier weefsel uit de buurt van de organen te niet verpletteren of scheur de alvleesklier met de pincet zijn gebruikt.
	<ol><li>Blijven om te scheiden van de alvleesklier van de dunne darm jejunum en ileum secties, en tot slot van het caecum van de dikke darm.</li>
	</ol></li> <li>Op het caecum, verplaatsen de verlostang en afscheiding van de alvleesklier langs de resterende colon naar het rectum blijven. 
	Opmerking: Op dit punt, het is handig om te knippen en het gedeelte van de maag naar de regio van de dikke darm onmiddellijk voorafgaand aan het rectum verwijderen.</li>
	<li>Zoek de alvleesklier en milt gekoppeld. Schuif de alvleesklier naar de rechterkant van de muis. De resterende verbindingen tussen de alvleesklier en de borstholte scheidt met de Tang volledig los van de alvleesklier en aaneensluitend milt.</li>
	<li>Verwijderen van de alvleesklier en het verspreid voor onderzoek. Laat de milt gekoppeld aan de alvleesklier voor identificatiedoeleinden.
	<ol><li>Verwijderen alle bindweefsel, vet en mesenterische weefsel uit de alvleesklier. 
		Opmerking: Dit weefsel is witter in kleur en dus gemakkelijk kan worden onderscheiden van de alvleesklier weefsel dat is pinker in kleur. Dit is vooral belangrijk als de hele alvleesklier moet worden verwijderd. Bijvoorbeeld, als de alvleesklier moet worden afgewogen en vergeleken met lichaamsgewicht of tussen groepen van dieren. In de Ptf1a cre / +; LSL-Kras G12D / + muismodel, specifiek in de oudere maanden hard vezelig alvleesklier weefsel aanwezig kon zijn. In dit geval moet zorgvuldige verwijdering van de alvleesklier worden uitgevoerd, zoals de darmen kunnen worden geïnterlinieerd in tumor weefsel. In geavanceerde gevallen, abnormale milt en lever weefsel kunnen ook aanwezig zijn.</li>
	</ol></li> <li>Desgewenst verwijderen andere organen op dit punt.</li></ol>
 4. gegevensverzameling en -opslag <ol><li>na extractie van de organen, de monsters te verplaatsen naar de postoperatieve ruimte voor behoud.</li>
	<li>Wegen elk orgaan en plaats hen in hun respectieve cryogene flacon. 
	Opmerking: langs with de massa van elke steekproef, onregelmatigheden moeten worden geregistreerd voor toekomstige verwijzing.</li>
	<li>Zodra de organen worden gewogen, plaats ze in de vloeibare stikstof voor module bevriezing.</li>
	<li>Na module bevriezing, slaan de organen bij-80 ° C voor langetermijnopslag.</li>
	<li>Plaatst de formaline opgeslagen monsters op de top van de Bank 's nachts en de volgende ochtend veranderen hun oplossing van formaline naar 70% ethanol. 
	Opmerking: Deze monsters moeten worden bewaard bij 4 ° C voor langetermijnopslag.</li>
	<li>Voor langdurige opslag, bevriezen de punch van het bloed en oor bij-80 ° C.. Toestaan voor de verzameling van het serum uit het bloed, het bloed te stollen voor 30 min dan het centrifugeren. Het gedeelte van de serum met behulp van een precisiepipet verwijderen en op te slaan op -80 ° C.</li>
</ol> 5. Clean Up <ol><li>Sanitize alle de dissectie tools met de steriliserende doekjes. GLB de buis bekleed met de Isofluraan geweekt chirurgische pad. Vervang de chirurgische pad op het bord van schuim met een verse chirurgische zeem. Beschikken over de delen van de muis die niet werden verzameld per de faciliteit &#39; s dierlijke verwijdering beleid.</li>
</ol>

<ol><li>Fesinmeyer, M. D., Austin, M. A., Li, C. I., De Roos, A. J., Bowen, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differences+in+Survival+by+Histologic+Type+of+Pancreatic+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Epidemiol+Biomarkers+Prev%22%5BJournal%5D)">Differences in Survival by Histologic Type of Pancreatic Cancer.</a> Cancer Epidemiol Biomarkers Prev. 14 (7), 1766-1773 (2005).</li>
<li>Jackson-Grusby, L. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/12154411">Modeling cancer in mice.</a> Oncogene. 21 (35), 5504-5514 (2002).</li>
<li>Heid, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+requirement+of+Rac1+in+a+mouse+model+of+pancreatic+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Early requirement of Rac1 in a mouse model of pancreatic cancer.</a> Gastroenterology. 141 (2), 719-730 (2011).</li>
<li>Hingorani, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preinvasive+and+invasive+ductal+pancreatic+cancer+and+its+early+detection+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+cell%22%5BJournal%5D)">Preinvasive and invasive ductal pancreatic cancer and its early detection in the mouse.</a> Cancer cell. 4 (6), 437-450 (2003).</li>
<li>Shi, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((KRAS2+Mutations+in+Human+Pancreatic+Acinar-Ductal+Metaplastic+Lesions+Are+Limited+to+Those+with+PanIN+Implications+for+the+Human+Pancreatic+Cancer+Cell+of+Origin%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">KRAS2 Mutations in Human Pancreatic Acinar-Ductal Metaplastic Lesions Are Limited to Those with PanIN Implications for the Human Pancreatic Cancer Cell of Origin.</a> Mol Cancer Res. 7 (2), 230-236 (2009).</li>
<li>LaConti, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+serum+metabolomics+profiles+associated+with+malignant+progression+in+the+KrasG12D+mouse+model+of+pancreatic+ductal+adenocarcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Genomics%22%5BJournal%5D)">Distinct serum metabolomics profiles associated with malignant progression in the KrasG12D mouse model of pancreatic ductal adenocarcinoma.</a> BMC Genomics. 16 (1), 1-10 (2015).</li>
<li>Ludwig, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surveying+the+serologic+proteome+in+a+tissue-specific+kras%28G12D%29+knockin+mouse+model+of+pancreatic+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Proteomics%22%5BJournal%5D)">Surveying the serologic proteome in a tissue-specific kras(G12D) knockin mouse model of pancreatic cancer.</a> Proteomics. 16 (3), 516-531 (2016).</li>
<li>Taylor, D. K., Mook, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isoflurane+Waste+Anesthetic+Gas+Concentrations+Associated+with+the+Open-Drop+Method%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Assoc+Lab+Anim+Sci%22%5BJournal%5D)">Isoflurane Waste Anesthetic Gas Concentrations Associated with the Open-Drop Method.</a> J Am Assoc Lab Anim Sci. 48 (1), 61-64 (2009).</li>
<li>Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+sample+collection+in+small+laboratory+animals%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pharmacol+Pharmacother%22%5BJournal%5D)">Blood sample collection in small laboratory animals.</a> J Pharmacol Pharmacother. 1 (2), 87-93 (2010).</li>
<li>Li, D. S., Yuan, Y. H., Tu, H. J., Liang, Q. L., Dai, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+protocol+for+islet+isolation+from+mouse+pancreas%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">A protocol for islet isolation from mouse pancreas.</a> Nature Protocols. 4 (11), 1649-1652 (2009).</li>
<li>Auer, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+frozen+tissue+storage+conditions+on+the+integrity+of+RNA+and+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Biotech+Histochem%22%5BJournal%5D)">The effects of frozen tissue storage conditions on the integrity of RNA and protein.</a> Biotech Histochem. 89 (7), 518-528 (2014).</li>
<li>Ma, J., Leung, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Limbic+System+Participates+in+Mediating+the+Effects+of+General+Anesthetics%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropsychopharmacology%22%5BJournal%5D)">Limbic System Participates in Mediating the Effects of General Anesthetics.</a> Neuropsychopharmacology. 31, 1177-1192 (2006).</li>
<li>Ijichi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aggressive+pancreatic+ductal+adenocarcinoma+in+mice+caused+by+pancreas-specific+blockade+of+transforming+growth+factor-%CE%B2+signaling+in+cooperation+with+active+Kras+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Dev%22%5BJournal%5D)">Aggressive pancreatic ductal adenocarcinoma in mice caused by pancreas-specific blockade of transforming growth factor-β signaling in cooperation with active Kras expression.</a> Genes Dev. 20 (22), 3147-3160 (2006).</li>
<li>Abiatari, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Moesin-dependent+cytoskeleton+remodelling+is+associated+with+an+anaplastic+phenotype+of+pancreatic+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Moesin-dependent cytoskeleton remodelling is associated with an anaplastic phenotype of pancreatic cancer.</a> J Cell Mol Med. 14 (5), 1166-1179 (2010).</li>
<li>Goodpaster, A. M., Romick-Rosendale, L. E., Kennedy, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((a+Statistical+significance+analysis+of+nuclear+magnetic+resonance-based+metabonomics+data%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+biochemistry%22%5BJournal%5D)">a Statistical significance analysis of nuclear magnetic resonance-based metabonomics data.</a> Analytical biochemistry. 401, 134-143 (2010).</li>
<li>Yadav, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Idiopathic+Tumefactive+Chronic+Pancreatitis%3A+Clinical+Profile%2C+Histology%2C+and+Natural+History+After+Resection%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Idiopathic Tumefactive Chronic Pancreatitis: Clinical Profile, Histology, and Natural History After Resection.</a> Clin Gastroenterol Hepatol. 1 (2), 129-135 (2003).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Betekenis ten opzichte van bestaande methoden Terwijl andere informele video's van muis dissecties bestaan, deze video artikel levert de eerste professionele kwaliteit, peer reviewed, visuele demonstratie van alle gedetailleerde stappen nodig zijn voor de extractie en het oogsten van de alvleesklier muis door dissectie10 . Met de alvleesklier wordt een hoofdorgel voor metabole activiteit en insuline zorgt productie, dissectie en oogsten van de alvleesklier voor het behoud van d...

De muis heeft ontpopt als een belangrijke diermodel voor menselijke pancreatic kanker1,2. In de Ptf1acre / +; LSL-KrasG12D / + muismodel, de Kristen rat Sarcoom (K-Ras) oncogen is geactiveerd uitsluitend in de alvleesklier, resulterend in de inleiding van voorstadia laesies in de alvleesklier, bekend als de alvleesklier geest neoplasias (PanINs), dat de vooruitgang aan alvleesklier ductaal adenocarcinomas, kortweg PDACs3. Deze muis modelsysteem biedt een van de beste beschikbare dierlijke modellen voor menselijke alvleesklierkanker4,5, met het bijkomende voordeel dat de PanINs ontstaan binnen de eerste vijf maanden van het leven en vaak vooruitgang PDAC binnen een Eén jaar4,5, overwegende dat alvleesklierkanker vaakst bij de mens 60-70 jaar oud optreedt.
Extractie van de alvleesklier door dissectie van de Ptf1acre / +; LSL-KrasG12D / + muizen op verschillende leeftijden voorziet in gedetailleerde longitudinale histopathologisch onderzoek van de ontwikkeling van kanker in de alvleesklier, variërend van de vroegste stadia van de PanIN de progressie tot PDAC3,4 , 5. de alvleesklier oogsten op leeftijden variërend van vijf tot vijftien maanden kan ook worden gebruikt om te bereiden weefsel extracten te karakteriseren van mondiale veranderingen in de alvleesklier4 metabolisme die zich tijdens de overgang van gezond naar zieke weefsel voordoen 6,7.
Dit artikel presenteert een complete visuele gids voor de stappen die nodig zijn voor het uitvoeren van een muis alvleesklier extractie en worden richtlijnen gegeven voor de opslag van een alvleesklier voor verdere analyse. Deze handleiding zullen even waardevol zijn voor individuen uitvoeren van onderzoek naar andere alvleesklier ziekten, met inbegrip van type I diabetes, en met name nuttig voor studenten en onderzoekers nieuw voor onderzoek waarbij oogsten moeten van het gebruik van de alvleesklier van de muis dissectie voor metabole profilering of histologische analyses.

<table><tbody><tr><td>Glass Jar&nbsp;</td><td>Corning</td><td>3140-150</td><td>Het glazen potje dat in de video is gebruikt, is niet meer verkrijgbaar.&nbsp; Dit is de vervanger.</td></tr><tr><td>Lid of Glass Jar</td><td>Corning</td><td>9985-150</td><td>Het glazen potje deksel dat in de video is gebruikt, is niet meer verkrijgbaar.&nbsp; Dit is de vervanger.</td></tr><tr><td>15 mL Falcon Tubes</td><td>Fisher Scientific</td><td>339650</td><td></td></tr><tr><td>Surgical Scissors</td><td>Fisher Scientific</td><td>9201</td><td></td></tr><tr><td>Squeeze bottle&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>03-409-10DD</td><td></td></tr><tr><td>100% Ethanol</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-032-103</td><td></td></tr><tr><td>Formalin</td><td>Fisher Scientific</td><td>245-684</td><td></td></tr><tr><td>Foam Boards</td><td>Therapak</td><td>562908</td><td></td></tr><tr><td>Forceps</td><td>Fisher Scientific</td><td>200205SHN</td><td></td></tr><tr><td>1 mL 21G Syringes</td><td>BD Biosciences</td><td>309624</td><td></td></tr><tr><td>50 mL Falcon Tubes</td><td>Fisher Scientific</td><td>339652</td><td></td></tr><tr><td>2.0 mL Microcentrifuge Tubes&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>02-681-258</td><td></td></tr><tr><td>Surgical Pads</td><td>Fisher Scientific</td><td>S67011</td><td></td></tr><tr><td>T-Pins Length:&nbsp; 2"&nbsp;</td><td>Advance Store Products</td><td>X32T-05</td><td></td></tr><tr><td>Sterilizing Wipes</td><td>Professional Disposables International Inc.</td><td>Q85084</td><td></td></tr><tr><td>Sharps Container</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-827-122</td><td></td></tr><tr><td>Analytical Balance</td><td>Marshall Scientific</td><td>ME-AE200</td><td></td></tr><tr><td>4L Dewar</td><td>Taylor-Wharton</td><td>4LD</td><td></td></tr><tr><td>Shallow Wide Mouth Dewar</td><td>Fisher Scientific</td><td>F3087-V</td><td></td></tr><tr><td>Floating Microtube Rack</td><td>VWR</td><td>60986-100</td><td></td></tr><tr><td>Cryogenic Vial 1.2 mL, Sterile</td><td>Fisher Scientific</td><td>10-500-25</td><td></td></tr><tr><td>Isothesia (Isoflurane)&nbsp;</td><td>Henry Schein Animal Health</td><td>050033</td><td></td></tr><tr><td>Liquid Nitrogen</td><td>Wright Brothers</td><td>NIT-60-XX</td><td></td></tr><tr><td>Mouse Kras Strain</td><td>The Jackson Laboratory</td><td>OO8179</td><td></td></tr><tr><td>Mouse Cre Strain</td><td>MMRRC</td><td>OOO435-UNC</td><td></td></tr></tbody></table>

dissectie van de alvleesklier muis voor histologisch analyse en metabole profilering

Dissection of the Mouse Pancreas for Histological Analysis and Metabolic Profiling

We hebben onderzocht de alvleesklier specifieke transcriptiefactor, 1a cre-recombinase; Lox-stop-lox-Kristen rat Sarcoom, glycine aan asparaginezuur op de 12 codon (Ptf1acre / +; LSL-KrasG12D / +) stam muis als een model van menselijke pancreatic kanker. Het doel van onze lopende onderzoeken is het identificeren van de roman metabole biomarkers van pancreatic kanker progressie. Wij hebben uitgevoerd metabole profilering van urine, ontlasting, bloed, en alvleesklier weefsel extracten, evenals histologische analyses van de alvleesklier om de progressie van kanker te regisseren. De alvleesklier muis is niet een welomschreven solide orgel als bij de mens, maar is veeleer een diffuus gedistribueerde weke delen, dat is niet gemakkelijk geïdentificeerd door personen onbekend met interne anatomie van de muis of door personen die weinig of geen ervaring uitvoeren hebben muis orgel dissecties. Het doel van dit artikel is bedoeld als een gedetailleerde stapsgewijze visuele demonstratie bij beginners in de verwijdering van de alvleesklier muis door dissectie. Dit artikel moet vooral waardevol voor studenten en onderzoekers nieuw onderzoek waarvoor het oogsten van de alvleesklier muis door dissectie voor metabole profilering of histologische analyses.

Figuur 1 toont een overzicht van de operationele omgeving en Figuur 2 toont de post operatie gebied. Terwijl deze instelling de minimale hoeveelheid materiaal biedt en enscenering, individuen verkiezen kunnen om te veranderen dit best aan individuele behoeften. Het protocol moet worden geoptimaliseerd volgens de specifieke behoeften van het experiment. Deze procedure wordt uitgevoerd op een wijze die het leven van een muis, die g...

Dit video artikel vindt u een uitgebreide demonstratie van de procedures die nodig zijn om met succes de alvleesklier van een muis door dissectie voor histologisch analyse en metabole profilering.

Dissectie van de alvleesklier muis voor histologisch analyse en metabole profilering

We have been investigating the pancreas specific transcription factor, 1a cre-recombinase; lox-stop-lox- Kristen rat sarcoma, glycine to aspartic acid at ...

Het hoofddoel van dit video-artikel is om gedetailleerde visuele instructies te bieden voor de dissectie van een pancreas van een muis. De instructies zijn bedoeld voor onderzoekers die muismodellen van menselijke pancreasziekten bestuderen en de pancreas van de muis via dissectie moeten oogsten voor histologische analyse of metabole profilering. Het video-artikel biedt daarnaast gedetailleerde instructies voor het uitvoeren van een terminale bloedafname via een hartpuncturprocedure.Er wordt een operatietafel getoond met de benodigde materialen. Deze omvatten één glazen pot met deksel, één 15 mL falcon tube, één chirurgische schaar, één knijpfles met 70% ethanol, twee schuimplaten, twee pincetten, twee 1 mL spuiten met een 21 gauge naald, twee 50 mL falcon tubes, één centrifugebuis, één cryovial, vier chirurgische gazen, tien spelden, een dispenser met sterilisatiedoekjes en een naaldcontainer. Er wordt de tafel voor na de operatie getoond met de benodigde materialen.Deze omvatten één analytische balans, één Dewar van vier liter met vloeibare stikstof, een ondiepe Dewar met brede opening, een drijvend microbuisjesrek, één schaar voor chirurgisch gebruik, twee pincetten, vijf cryo-buisjes en een dispenser met steriele doekjes. Om euthanasie uit te voeren, wordt de muis eerst in de glazen pot geplaatst die een gaasje bevat gedrenkt in enkele druppels isofluraan, en vervolgens afgedekt met het deksel tot de muis bewusteloos wordt, wat doorgaans ongeveer één minuut duurt. De muis wordt vervolgens uit de glazen pot gehaald en er wordt een voetknijptest uitgevoerd om er zeker van te zijn dat de muis geen ongemak kan ervaren.Als de pootknijptest mislukt, wordt de muis teruggeplaatst in de glazen pot en wordt het deksel teruggeplaatst totdat de pootknijptest succesvol kan worden uitgevoerd. Plaats de muis op zijn rug, fixeer de ledematen van de muis op het chirurgische schuimbord en bevochtig de ventrale zijde van de muis met 70% ethanol. Knijp de vacht nabij de urethra-opening samen met de pincet en trek deze voorzichtig omhoog.Maak een incisie door de buikholte, beginnend bij de urethrale opening, over de middellijn omhoog en eindigend bij de kin. Grijp bij het beginpunt van de eerste incisie één zijde van de vacht vast en maak een tweede incisie naar beneden en diagonaal richting de achterpoot. Herhaal deze handeling op dezelfde wijze aan de tegenovergestelde zijde.Lokaliseer het hart om de terminale hartpunctie uit te voeren. Pak hiervoor het sternum vast met de pincet en snijd in het diafragma. Snijd vervolgens snel omhoog door de ribbenkast en verwijder het weggesneden gedeelte om het kloppende hart bloot te leggen.Zodra het hart is gelokaliseerd, verwijdert u het pericardium en voert u de terminale hartpunctie uit met de spuit. Voor een optimale bloedafname gebruikt u de zuiger van de naald om de pompactie van het hart na te bootsen en voorkom dat u te snel trekt. Breng het bloed over in de centrifugebuis en gooi de spuit weg in de container voor scherpe voorwerpen.Nadat de hartpunctie is uitgevoerd, vindt de euthanasie plaats door de verbindingen van het hart te verwijderen. Lokaliseer de maag aan de linkerzijde van de muis. De pancreas heeft het uiterlijk van diffuus, lichter gekleurd weefsel dat vastzit aan de maag en het duodenum, en langs de gehele dunne en dikke darm loopt en vastzit aan de milt.Begin de pancreas voorzichtig te scheiden van de maag en het duodenum met behulp van de pincet. Ga door met het scheiden van de pancreas van de dunne darm, beginnend bij de secties van het jejunum en ileum en uiteindelijk tot aan het caecum en de dikke darm. Positioneer de pincet bij het caecum opnieuw en ga door met het scheiden van de pancreas langs het resterende colon in de richting van het rectum.Op dit punt is het handig om het gedeelte van de maag tot aan het gebied van de dikke darm direct voorafgaand aan het rectum door te snijden en te verwijderen. Lokaliseer de pancreas en de vastgehechte milt. Schuif de pancreas naar de rechterkant van de muis.Doorsnij de resterende verbindingen tussen de pancreas en de borstholte om de pancreas en de aangrenzende milt volledig los te maken. Verwijder de pancreas en spreid deze uit voor onderzoek. Indien gewenst kunnen op dit punt andere organen worden verwijderd.Na de extractie worden de monsters naar het postoperatieve gebied verplaatst. Elk orgaan wordt gewogen en vervolgens in het respectievelijke cryovial geplaatst. Noteer alle waargenomen onregelmatigheden.Zodra de organen in de cryovials zitten, plaatst u deze in het drijvende microbuisjesrek en vervolgens in de Dewar met vloeibare stikstof. Na het snel invriezen moeten de organen voor langdurige bewaring worden opgeslagen bij minus 80 graden Celsius. Alle gebruikte dissectie-instrumenten moeten worden gedesinfecteerd met de steriliserende doekjes.De falcon-buis met het met isofluraan gedrenkte chirurgische gaasje moet worden afgesloten. Het chirurgische gaasje op het schuimrubberen bord moet worden vervangen door een nieuw chirurgisch gaasje. De delen van de muis die niet zijn verzameld, moeten worden afgevoerd volgens het beleid voor dierlijke afvalverwerking van de instelling.De volgende items moeten dienovereenkomstig worden behandeld. Zodra deze items correct zijn opgeslagen, kan een verscheidenheid aan experimenten worden uitgevoerd, waaronder, maar niet beperkt tot, fluorescentiemicroscopie, hematoxyline- en eosinehistologie, immunohistochemie, massaspectrometrie en nucleaire magnetische resonantiespectroscopie. Aangezien de pancreas een primair orgaan is voor metabole activiteit en insulineproductie, maakt deze procedure het mogelijk om de fysiologische kenmerken te behouden.Door de pancreas te isoleren, kan er in de toekomst analyse worden uitgevoerd op het monster. Deze procedure maakt het mogelijk om interacties met andere weefsels binnen hetzelfde organisme en binnen hetzelfde tijdsbestek te vergelijken en te bestuderen.

dissection-mouse-pancreas-for-histological-analysis-metabolic

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Het volgende protocol schetst het proces van het pancreas dissectie voor virtuele slice beeldvorming, en de daaropvolgende kwantificering van alle GFP-gelabelde beta-cellen in de gehele alvleesklier.

In situ kwantificering van beta-celmassa in Muizen

This video describes the technique of differentiating pancreatic acinar cells to ductal cells in ex vivo 3D culture. This helps to understand the mechanisms regulating the acinar-to-ductal metaplasia (ADM), a key process in the early development of pancreatic cancer.

Acinar-to-Ductal Metaplasia Induction: A Method to Study Acinar Cell to Ductal Cell Differentiation in 3D Ex Vivo Culture

Het testen in vitro β-celfunctie met geïsoleerde eilandjes van Langerhans muis is een belangrijke component in de studie van diabetes pathofysiologie en therapie. Terwijl veel downstream applicaties beschikbaar zijn, dit protocol beschrijft specifiek de meting van intracellulaire cyclische adenosine monofosfaat (cAMP) als een essentiële parameter bepalen van β-cel functie.

Een methode voor muis eilandjes van Langerhans Isolatie en intracellulaire cAMP Bepaling

We presenteren hier een protocol voor de isolatie van eilandjes uit het muismodel van type 2 diabetes, Leprdb en details van een live-cel assay voor het meten van insulinesecretie uit intacte eilandjes dat gebruikmaakt van 2 foton microscopie.

LepR<sup&gt; Db</sup&gt; Mouse Model van Type 2 Diabetes: eilandjes van Langerhans Isolatie en live-cell 2-Photon Imaging van intacte Eilandjes

Hier beschrijven we een werkwijze voor het isoleren van cellen in de pancreas micro uit embryonale, neonatale en volwassen muis weefsel, gericht op het isoleren van mesenchymale cellen. Deze methode maakt profilering cel genexpressie en secretie eiwitten om de extrinsieke signalen die pancreas ontwikkeling, functie en tumorigenese reguleren helderen.

Isoleren en analyseren van cellen van de pancreas mesenchym door flowcytometrie

Beschrijven we een methode voor de isolatie van de endocriene cellen uit embryonale, Neonatale en postnatale pancreases gevolgd door eencellige RNA sequencing. Met deze methode kunt analyses van de ontwikkeling van de alvleesklier endocriene bloedlijn, cel heterogeniteit en transcriptomic dynamiek.

Eencellige Transcriptomic Analyses van muis alvleesklier endocriene cellen

Primaire acinaire cel isolatie, eiwit expressie of activiteit modulatie, cultuur en stroomafwaarts toepassingen zijn heel nuttig in de ex vivo studie van acinaire-naar-ductaal metaplasie (ADM), een vroege evenement in de ontwikkeling van alvleesklierkanker.

Nabootsen en manipuleren van de alvleesklier acinaire-naar-ductaal metaplasie in 3-dimensionale celcultuur

Chronische pancreatitis (CP) is een ziekte die wordt gekenmerkt door ontsteking en fibrose van de alvleesklier, vaak geassocieerd met hardnekkige buikpijn. Dit artikel richt zich op het verfijnen van de techniek om een muismodel van CP te genereren via galweginfusie met 2,4,6 -trinitrobenzeensulfonzuur (TNBS).

Een muismodel voor chronische pancreatitis via galweg TNBS-infusie

Deze studie presenteert de toepassing van levende pancreasweefselplakken op de studie van eilandjesfysiologie en eiland-immuuncelinteracties.

Observeren van eilandjesfunctie en eiland-immuuncelinteracties in levende pancreasweefselplakken

Metaplastische cellen van de alvleesklier zijn voorlopers van kwaadaardige cellen die aanleiding geven tot pancreastumoren. Het isoleren van intacte levensvatbare alvleeskliercellen is echter een uitdaging. Hier presenteren we een efficiënte methode voor dissociatie van pancreasweefsel. De cellen kunnen vervolgens worden gebruikt voor single-cell RNA-sequencing (scRNA-seq) of voor twee- of driedimensionale co-culturing.

Dissectie van pancreasweefsel om levensvatbare afzonderlijke cellen te isoleren

Dit protocol beschrijft de isolatie van endotheelcellen van muizen uit de hele alvleesklier.

Isolatie van endotheelcellen van de pancreas van muizen

Leer de dissectie van de alvleesklier bij muizen voor histologische analyse en metabole profilering. Deze methode omvat terminale bloedafname via hartpunctie en is essentieel voor onderzoek naar pancreasaandoeningen.

Dissectie van de alvleesklier muis voor histologisch analyse en metabole profilering

Meer video's verkennen