Name: Voorbereiding van kruidengeneeskunde: Er-Xian Decoction en Er-Xian-Serum voor In Vivo En In Vitro Experimenten (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-05-31T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 7 s
Description: Leer de gestandaardiseerde bereiding van Er-Xian Decoction voor in vivo en in vitro onderzoek naar botbiologie. Dit protocol gebruikt waterextractie vergelijkbaar met klinische methoden en toepassing bij rattenmodellen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Dit werk werd ondersteund door de National Natural Science Foundation of China (81573992). We bedanken Emily K. Lo en Kathleen DiNapoli voor hun taalbewerkingshulp.

Het protocol volgt de richtlijnen voor dierenwelzijn van de Shanghai University of Traditional Chinese Medicine en is goedgekeurd door het dierproefbedrijf Shanghai Animal Ethics Committee. 1. Protocol I: Bereiding van EXD <ol><li> Berekening <ol><li> Beheer de EXD aan een behandelingsgroep van 10 zes maanden oude vrouwelijke Impressive Control Region (ICR) muizen (0,02 kg / muis), 5 dagen per week gedurende 12 weken. OPMERKING: er zijn in totaal 1.702 EXD&#39;s nodig. Omdat EXD&#39;s in discrete stappen worden gemeten, in de praktijk, 2 EXD&#39;s toedienen. </li><li> Bereken het volume van de toegediende EXD per muis ( dwz V = (0.1418 EXD / kg • dag) * (0,02 kg / muis) * 50 ml / EXD = 0,14 ml / muis • dag). </li></ol></li><li> soaking <ol><li> Zet alle grondstoffen van twee EXD&#39;s ( dwz Curculigo orchioides Gaertn (18 g), Herbaa Epimedii (18 g), Radix Morindae Officinalis (18 g), RAdix Angelicae Sinensis (18 g), Cortex Phellodendri (12 g) en Rhizoma Anemarrhenae (12 g), in totaal 96 g) in een houder met een deksel. OPMERKING: een keramische container wordt aanbevolen. </li><li> Meng de ruwe kruiden met 500 ml gedestilleerd water gedurende 1 uur; Het water moet de kruiden ongeveer een centimeter bedekken. Laat alle kruiden grondig doordrenken. </li></ol></li><li> Eerste waterafkooksel <ol><li> Verhit de kruiden met een gasfornuis of een inductie kookplaat op hoog vermogen tot het water kookt (ongeveer 5 - 10 minuten; de tijdsduur hangt af van de verwarmingsvermogen, de container en de hoeveelheid kruiden en water). Zet de stroom voor 2 uur aan een lage sudder. </li></ol></li><li> Eerste filtratie <ol><li> Dek een glasbeker van 500 ml met regelmatig filterpapier of met gaas en katoen. Giet de afkoeling zorgvuldig door de filter in de beker. Laat de kruiden in de container. </li><li> Breng de resterende kruidenresten terugN het filterpapier naar de container. </li></ol></li><li> Tweede waterafkooksel <ol><li> Voeg gedestilleerd water toe aan de container met de kruiden; Laat het de kruiden ongeveer een centimeter bedekken. </li><li> Herhaal stap 1.3. </li></ol></li><li> Tweede filtratie <ol><li> Herhaal stappen 1.4.1 en 1.4.2. </li><li> Giet de tweede afkooksel in dezelfde beker af. Meng de eerste en tweede deco&#39;s samen. </li></ol></li><li> Concentratie <ol><li> Zet de beker op een gasfornuis met asbestvrij draad gaas tussen hen, verhit de afkooksel met behulp van een lage sudder, en langzaam en continu roeren met een glazen staaf. </li><li> Wanneer de decodering tot 200 ml vermindert, overstappen naar een 500 ml beker. </li><li> Herhaal stap 1.7.1 tot de decodering tot 100 ml vermindert. </li></ol></li><li> Opslag en toediening <ol><li> Breng de geconcentreerde afkoeling over op een steriele glazen fles. Laat het afkoelen tot kamertemperatuurRe (RT). Bewaar bij 4 ° C als u binnen een week of bij -70 ° C gebruikt voor langdurige opslag. </li><li> Met behulp van een zaagnaald, moet u gedurende 12 weken 0,14 ml / muis van de afkooksel aan ovariectomized (OVX) muizen één keer per dag, 5 dagen per week, toedienen. </li></ol></li></ol> 2. Protocol II: Bereiding van EXD-bevattende serum <ol><li> Berekening <ol><li> Bereken de rat-equivalent dosis (RED) met behulp van 0,15 kg als het lichaamsgewicht van elke rat (1 maand oud): dB = (1/60) * (90/100) * (60 / 0,15) 1/3 = 0,111 EXD / kg / dag. OPMERKING: Er zijn 10 ml EXD-bevattende serum nodig om 100 ml kweekmedium (10% EXD-bevattende serum) te bereiden. Er wordt verwacht dat elke rat 2 ml serum levert. Zo zijn 6 ratten (een verlies van 20% in aanmerking genomen) nodig voor EXD-toediening eenmaal per dag gedurende 3 dagen. Het aantal EXD&#39;s is: (0.111 EXD / kg • dag) * (0,15 kg / rat) * (6 ratten) * (3 dagen) = 0.300 EXD. Nogmaals, omdat EXD&#39;s in discrete stappen gemeten worden,Gebruik 1 EXD. </li><li> Bereken het volume van de toegediende EXD per rat ( dat wil zeggen V = (0.111 EXD / kg • dag) * (0,15 kg / rat) * (50 ml / EXD) = 0,83 ml / rat • dag). </li></ol></li><li> soaking <ol><li> Leg de grondstoffen voor 1 EXD in een container met een deksel. Meng de ruwe kruiden in gedistilleerd water gedurende 1 uur; Het water moet de kruiden ongeveer een centimeter bedekken. Laat alle kruiden grondig doordrenken. </li></ol></li><li> Eerste waterafkooksel <ol><li> Verhit de kruiden met behulp van een inductie kookplaat op hoog vermogen tot het water kookt (ongeveer 5 - 10 minuten; de tijdsduur hangt af van de warmtekracht, de container en de hoeveelheid kruiden en water). Zet de stroom voor 2 uur aan een lage sudder. </li></ol></li><li> Eerste filtratie <ol><li> Dek een glasbeker van 500 ml met regelmatig filterpapier of met gaas en katoen. Giet de afkoeling zorgvuldig door de filter in de beker. Laat de kruiden in de container. </li><li&gt; Breng de kruidenresten op het filterpapier terug naar de container. </li></ol></li><li> Tweede waterafkooksel <ol><li> Voeg gedestilleerd water toe aan de container met de kruiden; Laat het de kruiden ongeveer een centimeter bedekken. </li><li> Herhaal stap 2.4. </li></ol></li><li> Tweede filtratie <ol><li> Herhaal stappen 2.5.1 en 2.5.2. </li><li> Giet de tweede afkooksel in dezelfde beker als in stap 2.4.1 en meng de eerste en tweede deco&#39;s samen. </li></ol></li><li> Concentratie <ol><li> Zet de beker op een gasfornuis met asbestvrij draad gaas tussen hen, verwarm de afkoeling met een lage sudder, en langzaam en continu roeren met een glazen staaf. </li><li> Wanneer de decodering tot 100 ml vermindert, overstappen naar een 100 ml beker. </li><li> Herhaal stap 2.7.1 tot de decoctie tot 50 ml vermindert. </li></ol></li><li> Opslag en toediening <ol><li> Breng de geconcentreerde afkoeling in een sterIle glazen fles. Laat het afkoelen naar RT. Bewaar bij 4 ° C als u binnen een week of bij -70 ° C gebruikt voor langdurige opslag. </li><li> Intragastrisch toedienen gedurende 3 dagen 0,83 ml / rat een keer per dag. </li></ol></li><li> EXD-bevattende serumbereiding <ol><li> Verdoof de ratten door intraperitoneale injectie van 300 ml / 100 g 80 mg / kg ketamine en 10 mg / kg xylazine bij 1 uur na de laatste toediening van EXD. Bevestig de juiste verdoving door de nekknijp. </li><li> Verhelder de huid en het buikholte van de rat van de buik naar de onderkant van de thorax met behulp van een scalpel (of een rechtstreekse werkschaar). Maak een snede van lengte en diepte van respectievelijk 5 cm en 0,5 cm. Verplaats de buikviscera naar links met behulp van tissuepapier. </li><li> Verwijder het bindweefsel van de abdominale aorta met behulp van weefselpapier om het vat duidelijk te openbaren. </li><li> Trek het bloed langzaam uit de abdominale aorta met een 10 ml, 22 gauge spuit. Verplaats het naarEen 15 ml steriele buis na het verwijderen van de naald; Een rat kan 8-10 ml bloed produceren. OPMERKING: De rat moet levend zijn ( dwz met de buikspier aorta) wanneer de bloedtekening begint en dood is nadat de tekening is voltooid. </li><li> Klop het bloed in de rechtopstand gedurende 30 - 60 minuten bij kamertemperatuur. Centrifugeer bij 500-600 xg gedurende 20 minuten. Plaats al het supernatant (serum) voorzichtig in een 50 ml steriele buis en meng al het serum (van verschillende dieren) samen. </li><li> Voer warmte-inactivering uit door het serum gedurende 30 minuten in een 56 ° C waterbad te incuberen. Filter het serum met behulp van een spuitfilter met een hydrofiel polyethersulfonmembraan van 0,22 μm poriegrootte. Gebruik het serum vers of berg deze op -20 ° C. </li></ol></li><li> Controleer geneesmiddelbevattende serumbereiding (gebruikt in de controlegroep) <ol><li> Beheer elke rat met hetzelfde volume zoutoplossing (0,83 ml) eenmaal per dag gedurende 3 dagen. De andere stappen zijn hetzelfde als in stap 2.9.</li></ol></li><li> Toepassing <ol><li> Voeg 10 ml EXD-bevattende serum- of geneesmiddelhoudend serum toe aan elk 100 ml medium plus 1% penicilline-streptomycine (PS) 23 . </li></ol></li></ol>

<ol><li>Zhang, L. G., Ouyang, X. W., Wu, T. T., Ni, L. J., Shi, W. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+evaluation+of+in+vitro+effects+and+interactions+of+active+fractions+in+a+Chinese+medicinal+formula+%28Yaotongning+Capsule%29+on+rat+chondrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Ethnopharmacol%22%5BJournal%5D)">Quantitative evaluation of in vitro effects and interactions of active fractions in a Chinese medicinal formula (Yaotongning Capsule) on rat chondrocytes.</a> J Ethnopharmacol. 155 (3), 1424-1432 (2014).</li>
<li>Ogawa, Y., Fujii, Y., Sugiyama, R., Konishi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+the+seven+crude+drug+components+in+the+sleep-promoting+effect+of+Yokukansan%5BTitle%5D)+AND+%22J+Ethnopharmacol%22%5BJournal%5D)">The role of the seven crude drug components in the sleep-promoting effect of Yokukansan.</a> J Ethnopharmacol. 177, 19-27 (2016).</li>
<li>Kim, J. H., Doh, E. J., Lee, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+Medicinal+Categorization+of+Atractylodes+japonica+Koidz.+by+Using+Internal+Transcribed+Spacer+Sequencing+Analysis+and+HPLC+Fingerprinting+Combined+with+Statistical+Tools%5BTitle%5D)+AND+%22Evid+Based+Complement+Alternat+Med%22%5BJournal%5D)">Evaluation of Medicinal Categorization of Atractylodes japonica Koidz. by Using Internal Transcribed Spacer Sequencing Analysis and HPLC Fingerprinting Combined with Statistical Tools.</a> Evid Based Complement Alternat Med. 2016, 2926819(2016).</li>
<li>Sheridan, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+potential+of+metabolic+fingerprinting+as+a+tool+for+the+modernisation+of+TCM+preparations%5BTitle%5D)+AND+%22J+Ethnopharmacol%22%5BJournal%5D)">The potential of metabolic fingerprinting as a tool for the modernisation of TCM preparations.</a> J Ethnopharmacol. 140 (3), 482-491 (2012).</li>
<li>Planas, G. M., Kucacute, J. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/17744732">Contraceptive Properties of Stevia rebaudiana.</a> Science. 162 (3857), 1007(1968).</li>
<li>Tashino, S. "Serum pharmacology" and "serum pharmaceutical chemistry": from pharmacology of Chinese traditional medicines to start a new measurement of drug concentration in blood. Ther Drug Monit Res. 5, 54-64 (1988).</li>
<li>Cao, Y., Liu, F., Huang, Z., Zhang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+effects+of+Guanxin+Shutong+capsule+drug-containing+serum+on+tumor+necrosis+factor-alpha-induced+endothelial+dysfunction+through+nicotinamide+adenine+dinucleotide+phosphate+oxidase+and+the+nitric+oxide+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Ther+Med%22%5BJournal%5D)">Protective effects of Guanxin Shutong capsule drug-containing serum on tumor necrosis factor-alpha-induced endothelial dysfunction through nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase and the nitric oxide pathway.</a> Exp Ther Med. 8 (3), 998-1004 (2014).</li>
<li>Fu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ex+Vivo+Stromal+Cell-Derived+Factor+1-Mediated+Differentiation+of+Mouse+Bone+Marrow+Mesenchymal+Stem+Cells+into+Hepatocytes+Is+Enhanced+by+Chinese+Medicine+Yiguanjian+Drug-Containing+Serum%5BTitle%5D)+AND+%22Evid+Based+Complement+Alternat+Med%22%5BJournal%5D)">Ex Vivo Stromal Cell-Derived Factor 1-Mediated Differentiation of Mouse Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells into Hepatocytes Is Enhanced by Chinese Medicine Yiguanjian Drug-Containing Serum.</a> Evid Based Complement Alternat Med. 2016, 7380439(2016).</li>
<li>Chen, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+serum+pharmacology+in+evaluating+the+antitumor+effect+of+Fuzheng+Yiliu+Decoction+from+Chinese+Medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Chin+J+Integr+Med%22%5BJournal%5D)">Application of serum pharmacology in evaluating the antitumor effect of Fuzheng Yiliu Decoction from Chinese Medicine.</a> Chin J Integr Med. 20 (6), 450-455 (2014).</li>
<li>Sze, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+mechanism%3A+Erxian+Decoction%2C+a+Chinese+medicine+formula%2C+for+relieving+menopausal+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22J+Ethnopharmacol%22%5BJournal%5D)">A novel mechanism: Erxian Decoction, a Chinese medicine formula, for relieving menopausal syndrome.</a> J Ethnopharmacol. 123 (1), 27-33 (2009).</li>
<li>Sze, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+Erxian+decoction%2C+a+Chinese+medicinal+formulation%2C+on+serum+lipid+profile+in+a+rat+model+of+menopause%5BTitle%5D)+AND+%22Chin+Med%22%5BJournal%5D)">Effects of Erxian decoction, a Chinese medicinal formulation, on serum lipid profile in a rat model of menopause.</a> Chin Med. 6, 40(2011).</li>
<li>Zhong, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+randomized%2C+double-blind%2C+controlled+trial+of+a+Chinese+herbal+formula+%28Er-Xian+decoction%29+for+menopausal+symptoms+in+Hong+Kong+perimenopausal+women%5BTitle%5D)+AND+%22Menopause%22%5BJournal%5D)">A randomized, double-blind, controlled trial of a Chinese herbal formula (Er-Xian decoction) for menopausal symptoms in Hong Kong perimenopausal women.</a> Menopause. 20 (7), 767-776 (2013).</li>
<li>Wang, S. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Steroidogenic+effect+of+Erxian+decoction+for+relieving+menopause+via+the+p-Akt%2FPKB+pathway+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J+Ethnopharmacol%22%5BJournal%5D)">Steroidogenic effect of Erxian decoction for relieving menopause via the p-Akt/PKB pathway in vitro and in vivo.</a> J Ethnopharmacol. , (2016).</li>
<li>Lin, L., Wu, S., Tang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%5BClinical+observation+and+experimental+study+of+the+treatment+of+aplastic+anemia+by+warming+and+tonifying+the+spleen+and+kidney%5D%5BTitle%5D)+AND+%22Zhong+Xi+Yi+Jie+He+Za+Zhi%22%5BJournal%5D)">[Clinical observation and experimental study of the treatment of aplastic anemia by warming and tonifying the spleen and kidney].</a> Zhong Xi Yi Jie He Za Zhi. 10 (5), 272-274 (1990).</li>
<li>Nian, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antiosteoporotic+activity+of+Er-Xian+Decoction%2C+a+traditional+Chinese+herbal+formula%2C+in+ovariectomized+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Ethnopharmacol%22%5BJournal%5D)">Antiosteoporotic activity of Er-Xian Decoction, a traditional Chinese herbal formula, in ovariectomized rats.</a> J Ethnopharmacol. 108 (1), 96-102 (2006).</li>
<li>Qin, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antiosteoporotic+chemical+constituents+from+Er-Xian+Decoction%2C+a+traditional+Chinese+herbal+formula%5BTitle%5D)+AND+%22J+Ethnopharmacol%22%5BJournal%5D)">Antiosteoporotic chemical constituents from Er-Xian Decoction, a traditional Chinese herbal formula.</a> J Ethnopharmacol. 118 (2), 271-279 (2008).</li>
<li>Xue, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+HNMR-based+metabonomics+study+of+postmenopausal+osteoporosis+and+intervention+effects+of+Er-Xian+Decoction+in+ovariectomized+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">A HNMR-based metabonomics study of postmenopausal osteoporosis and intervention effects of Er-Xian Decoction in ovariectomized rats.</a> Int J Mol Sci. 12 (11), 7635-7651 (2011).</li>
<li>Lu, X. N., Xu, X. R., Lin, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%5BClinical+observation+of+bushen+er%27xian+decoction+in+treating+premature+ovarian+failure%5D%5BTitle%5D)+AND+%22Zhongguo+Zhong+Xi+Yi+Jie+He+Za+Zhi%22%5BJournal%5D)">[Clinical observation of bushen er'xian decoction in treating premature ovarian failure].</a> Zhongguo Zhong Xi Yi Jie He Za Zhi. 28 (7), 594-596 (2008).</li>
<li>Yu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-angiogenic+activity+of+Erxian+Decoction%2C+a+traditional+Chinese+herbal+formula%2C+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Pharm+Bull%22%5BJournal%5D)">Anti-angiogenic activity of Erxian Decoction, a traditional Chinese herbal formula, in zebrafish.</a> Biol Pharm Bull. 35 (12), 2119-2127 (2012).</li>
<li>Chu, E. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+in+vitro+and+in+vivo+investigation+of+the+antimetastatic+effects+of+a+Chinese+medicinal+decoction%2C+erxian+decoction%2C+on+human+ovarian+cancer+models%5BTitle%5D)+AND+%22Integr+Cancer+Ther%22%5BJournal%5D)">An in vitro and in vivo investigation of the antimetastatic effects of a Chinese medicinal decoction, erxian decoction, on human ovarian cancer models.</a> Integr Cancer Ther. 12 (4), 336-346 (2013).</li>
<li>Zhu, Z., Li, L., Jin, X., Fang, J., Zhang, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Er-Xian+Decoction%2C+a+traditional+Chinese+herbal+formula%2C+intervening+early+in+hypothalamic-pituitary+axis+of+male+rats+with+delayed+puberty%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacogn+Mag%22%5BJournal%5D)">Er-Xian Decoction, a traditional Chinese herbal formula, intervening early in hypothalamic-pituitary axis of male rats with delayed puberty.</a> Pharmacogn Mag. 10 (40), 517-521 (2014).</li>
<li>Miao, M. S. Experimental animals and technology. 1997, Chinese Modical Publisher. Beijing. 145(1997).</li>
<li>Soleimani, M., Nadri, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+protocol+for+isolation+and+culture+of+mesenchymal+stem+cells+from+mouse+bone+marrow%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">A protocol for isolation and culture of mesenchymal stem cells from mouse bone marrow.</a> Nat Protoc. 4 (1), 102-106 (2009).</li>
<li>Lu, S., Huang, J., Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Er-Xian+Decoction+Stimulates+Osteoblastic+Differentiation+of+Bone+Mesenchymal+Stem+Cells+in+Ovariectomized+Mice+and+Its+Gene+Profile+Analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+International%22%5BJournal%5D)">Er-Xian Decoction Stimulates Osteoblastic Differentiation of Bone Mesenchymal Stem Cells in Ovariectomized Mice and Its Gene Profile Analysis.</a> Stem Cells International. 2016, 4079210(2016).</li>
<li>Turner, P. V., Brabb, T., Pekow, C., Vasbinder, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Administration+of+substances+to+laboratory+animals%3A+routes+of+administration+and+factors+to+consider%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Assoc+Lab+Anim+Sci%22%5BJournal%5D)">Administration of substances to laboratory animals: routes of administration and factors to consider.</a> J Am Assoc Lab Anim Sci. 50 (5), 600-613 (2011).</li>
<li>Wu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+determination+of+seven+flavonoids+in+dog+plasma+by+ultra-performance+liquid+chromatography-tandem+mass+spectrometry+and+its+application+to+a+bioequivalence+study+of+bioactive+components+in+Herba+Epimedii+and+Er-Xian+Decoction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pharm+Biomed+Anal%22%5BJournal%5D)">Simultaneous determination of seven flavonoids in dog plasma by ultra-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry and its application to a bioequivalence study of bioactive components in Herba Epimedii and Er-Xian Decoction.</a> J Pharm Biomed Anal. 54 (1), 186-191 (2011).</li>
<li>Hu, Y. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+the+major+chemical+constituents+and+their+metabolites+in+rat+plasma+and+various+organs+after+oral+administration+of+effective+Erxian+Decoction+%28EXD%29+fraction+by+liquid+chromatography-mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Chromatogr%22%5BJournal%5D)">Identification of the major chemical constituents and their metabolites in rat plasma and various organs after oral administration of effective Erxian Decoction (EXD) fraction by liquid chromatography-mass spectrometry.</a> Biomed Chromatogr. 24 (5), 479-489 (2010).</li>
<li>Xue, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+and+interaction+of+icariin%2C+curculigoside%2C+and+berberine+in+er-xian+decoction%2C+a+traditional+chinese+medicinal+formula%2C+on+osteoclastic+bone+resorption%5BTitle%5D)+AND+%22Evid+Based+Complement+Alternat+Med%22%5BJournal%5D)">Effects and interaction of icariin, curculigoside, and berberine in er-xian decoction, a traditional chinese medicinal formula, on osteoclastic bone resorption.</a> Evid Based Complement Alternat Med. , (2012).</li>
<li>Nair, A. B., Jacob, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+practice+guide+for+dose+conversion+between+animals+and+human%5BTitle%5D)+AND+%22J+Basic+Clin+Pharm%22%5BJournal%5D)">A simple practice guide for dose conversion between animals and human.</a> J Basic Clin Pharm. 7 (2), 27-31 (2016).</li>
<li>Xu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+effect+of+the+traditional+Chinese+medicine+xuesaitong+on+intestinal+ischemia-reperfusion+injury+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Clin+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Protective effect of the traditional Chinese medicine xuesaitong on intestinal ischemia-reperfusion injury in rats.</a> Int J Clin Exp Med. 8 (2), 1768-1779 (2015).</li>
<li>Li, Z., Wang, J. On the methods for Chinese herbs serum pharmcology. Zhong Guo Zhong Yi Yao Xing Xi Za Zhi. 9 (2), 5-6 (2002).</li>
<li>Jiang, Y. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+chinese+herbal+drug-containing+serum+for+activating-blood+and+dispelling-toxin+on+ox-LDL-induced+inflammatory+factors%27+expression+in+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Chin+J+Integr+Med%22%5BJournal%5D)">Effect of chinese herbal drug-containing serum for activating-blood and dispelling-toxin on ox-LDL-induced inflammatory factors' expression in endothelial cells.</a> Chin J Integr Med. 18 (1), 30-33 (2012).</li>
<li>Guo, C. Y., Ma, X. J., Liu, Q., Yin, H. J., Shi, D. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%5BEffect+of+Chinese+herbal+drug-containing+serum+for+activating+blood%2C+activating+blood+and+dispelling+toxin+on+TNF-alpha-induced+adherence+between+endothelial+cells+and+neutrophils+and+the+expression+of+MAPK+pathway%5D%5BTitle%5D)+AND+%22Zhongguo+Zhong+Xi+Yi+Jie+He+Za+Zhi%22%5BJournal%5D)">[Effect of Chinese herbal drug-containing serum for activating blood, activating blood and dispelling toxin on TNF-alpha-induced adherence between endothelial cells and neutrophils and the expression of MAPK pathway].</a> Zhongguo Zhong Xi Yi Jie He Za Zhi. 35 (2), 204-209 (2015).</li>
<li>Li, Y., Xia, J. Y., Chen, W., Deng, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+Ling+Qi+Juan+Gan+capsule+drug-containing+serum+on+PDGF-induced+proliferation+and+JAK%2FSTAT+signaling+of+HSC-T6+cells%5D%5BTitle%5D)+AND+%22Zhonghua+Gan+Zang+Bing+Za+Zhi%22%5BJournal%5D)">Effects of Ling Qi Juan Gan capsule drug-containing serum on PDGF-induced proliferation and JAK/STAT signaling of HSC-T6 cells].</a> Zhonghua Gan Zang Bing Za Zhi. 21 (9), 663-667 (2013).</li>
<li>Li, Y. K. [Some issues in methology of Chinese herbs serum pharmcology]. Zhong Yao Xin Yao Yu Lin Chuang Yao Li. 10 (5), 263(1999).</li>
<li>Zhang, L., et al. [A review of Chinese herbs serum pharmcology methodological study]. Nan Jing Zhong Yi Yao Da Xue Xue Bao. 18 (4), 254(2002).</li>
<li>Zhang, D. [Issues and strategies for study of serum pharmcology in oncology]. Zhong Yi Yan Jiu. 17 (5), 13-14 (2004).</li>
</ol>

De auteurs verklaren dat ze geen concurrerende financiële belangen hebben.

In de afgelopen jaren is meer aandacht besteed aan kruidengeneesmiddelen, een soort alternatief geneesmiddel dat al duizenden jaren in de klinische omgeving in de oostelijke wereld is toegepast. Afwijkend van het &quot;bank-tot-bed&quot; -patroon van het moderne medicijn, hebben traditionele kruidengeneeskunde eerst het &#39;bed-to-bench&#39;-patroon nodig om hun mechanismen uit te leggen. Dit kan gevolgd worden door validatie uitgevoerd op de bank en verwerken voor de ontwikkeling van nieuw geoptimaliseerde drugs. Tot ...

De interesse in de studie en toepassing van traditionele kruiden geneeskunde groeit momenteel. In tegenstelling tot moderne medicijnen, waarin chemische ingrediënten zijn bepaald, bevatten kruidenformules sommige onbekende ingrediënten en worden extractieprocessen vereist om de afgifte van hun actieve verbindingen mogelijk te maken. Hoewel veel studies proberen een kleine verbinding te selecteren met een bekende structuur als representatief voor de gehele kruiden- of kruidenformule, kunnen de farmacologische efficiënties noch mechanismen als equivalent 1 , 2 worden beschouwd. Terwijl vingerafdrukken de analyse van de bestanddelen van complexe kruidenformules mogelijk maken, zijn sommige bestanddelen nog niet duidelijk geanalyseerd, wat leidt tot een uitdaging bij het combineren van alle extracten voor studie 3 . De interacties van talrijke bestanddelen / extracten bemiddelen de therapeutische effecten van kruidengeneesmiddelen. Om dit voordeel te behouden, wordt de traditionele extractvorm-decoctIon-wordt nog steeds veel gebruikt in de kliniek. Aangezien de extractieprocedure een grote invloed heeft op de therapeutische werkzaamheid, is een standaard protocol van traditionele waterafkok noodzakelijk, vooral voor in vivo studies 4 , 5 . Aan de andere kant, bij het onderzoeken van farmacologische mechanismen, is de toediening van kruiddekkingen tijdens in vitro of ex vivo studies ook een uitdaging. Het concept van een geneesmiddel bevattend serum werd voor het eerst in 1988 door Tashino voorgesteld 6 . Sindsdien heeft toenemend aantal onderzoekers het toegepast op kruidengeneeskunde 7 , 8 , 9 . Hoewel de methode van geneesmiddel bevattend serum enkele beperkingen heeft, zoals de invloed van bepaalde componenten van het serum, wordt het nog steeds beschouwd als een methode die de fysiologische omstandigheden nauwlettend nabootst. 10 , 11 , 12 , 13 te verlichten. Het is ook toegepast op de behandeling van aplastische anemie 14 , menopauzale osteoporose 15 , 16 , 17 , vroegtijdige ovariale mislukking 18 , borstkanker 19 , eierstokkanker 20 en vertraagde puberteit 21 . Hier presenteren we gedetailleerde protocollen voor de bereiding van zowel de er-xian decoction (EXD) en het geneesmiddel bevattende serum. Daarnaast beschrijven we de toepassing van EXD- en EXD-bevattende serum op muizen-menopauzale osteoporotische modellen. Een EXD bestaat uit 9 g elk van Curculigo orchioides Gaertn , Herbaa Epimedii </eM&gt; Radix Morindae Officinalis en Radix Angelicae Sinensis en 6 g elk van Cortex Phellodendri en Rhizoma Anemarrhenae per volwassen patiënt per dag. De equivalente dosis voor een muis is 0,1418 EXD / kg / dag op basis van de volgende vergelijking 22 : dB = dA * RB / RA * (WA / WB) 1/3 . DA en dB verwijzen naar de dosis per lichaamsgewicht (mg / kg) van respectievelijk de mens en muis. De dosis, in mg / kg, wordt vervangen door het aantal EXD / kg. RA en RB vertegenwoordigen respectievelijk de respectievelijke menselijke lichaamsfactor en muislichaamfactor, die evenredig zijn aan het lichaamsoppervlak (m 2 ) / lichaamsgewicht (kg)) 2/3 (zie tabel 1 ). WA en WB geven het lichaamsgewicht (kg) van de mens en muis aan.

<table><tbody><tr><td>Curculigo orchioides Gaertn (9&thinsp;g), Herbaa Epimedii (9&thinsp;g), Radix Morindae Officinalis (9&thinsp;g), Radix Angelicae Sinensis (9&thinsp;g), Cortex Phellodendri (6&thinsp;g), en Rhizoma Anemarrhenae (6&thinsp;g)</td><td>Kang-qiao Chinese Medicine Yinpian Co. Ltd (Shanghai, CN)</td><td>160922</td><td>EXD-componenten</td></tr><tr><td>Filterpapier</td><td>GElifesciences</td><td>99-103-952</td><td>Filter EXD-decoctie vóór concentratie</td></tr><tr><td>Imprinting Control Region (ICR) muizen</td><td>Shanghai Laboratory Animal Center</td><td>SCXK 2007-0005</td><td>In vivo studie</td></tr><tr><td>Sprague Dawley ratten</td><td>Shanghai Laboratory Animal Center</td><td>SCXK 2007-0005</td><td>EXD-bevattend serumpreparaat</td></tr><tr><td>Spuitfilter</td><td>Millipore</td><td>SLGP033RB</td><td>0,22 &micro;m</td></tr><tr><td>sondeerinjectienaalden (10 ml)</td><td>Shanghai BO Ge handelsverkoopafdeling</td><td>59104274</td><td>Toediening van EXD</td></tr><tr><td>Ketamine (80 mg/kg)&nbsp;</td><td>Fujian Gutian Pharma Co. Ltd</td><td>H35020148</td><td>Anesthesie</td></tr><tr><td>Xylazin (10 mg/kg)</td><td>Sunway Pharma Co. Ltd</td><td>CB07591</td><td>Anesthesie</td></tr><tr><td>Dulbecco&rsquo;s modificatie van Eagle&rsquo;s medium Dulbecco (DMEM) kweekmedium</td><td>Gibco</td><td>12800-116</td><td>DMEM met 2 mM L-glutamine en zonder ribonucleosiden en ribonucleotiden</td></tr><tr><td>Streptomycine</td><td>Sigma</td><td>1277</td><td>100 &micro;g / ml</td></tr><tr><td>Penicilline</td><td>Sigma</td><td>4687</td><td>100 &micro;g / ml</td></tr></tbody></table>

voorbereiding van kruidengeneeskunde: er-xian decoction en er-xian-serum voor<em&gt; in vivo</em&gt; en<em&gt; in vitro</em&gt; experimenten

Preparation of Herbal Medicine: Er-Xian Decoction and Er-Xian-containing Serum for In Vivo and In Vitro Experiments

Traditionele kruidengeneeskunde, een alternatief geneesmiddel in de klinische omgeving, heeft de afgelopen jaren meer aandacht gekregen. Voordat u naar het lichaam overgaat, is er een extra extractieprocedure nodig om de actieve bestanddelen van ruwe kruiden te laten vrijkomen. Waterafkooksel is een klassieke extractie procedure die nog steeds in grote mate gebruikt wordt in de klinische instellingen. Hier voorstellen we een gedetailleerd protocol voor er-xian decoction (EXD) om kruidendecten toe te passen op experimentele studies. De berekening van een dierlijke dosis wordt beschreven, evenals de vier hoofdtrappen van EXD: doordrenken, waterafkooksel, filtratie en concentratie. Daarnaast wordt serum-bevattende EXD geïntroduceerd voor ratten als middel voor in vitro validatie. Hier waren ratten gedurende 3 dagen oraal toegediend met EXD. Bloedmonsters werden vervolgens verzameld, geïnactiveerd, gecentrifugeerd en gefiltreerd. Het serum, verdund met het kweekmedium, kan worden gebruikt om cellen of weefsels te behandelen in vItro. Zo werd bijvoorbeeld EXD toegepast op zowel in vivo als in vitro studies en bleek dat EXD osteogenese verbetert. Dit protocol kan gebruikt worden als referentie voor de bereiding en toepassing van kruidengeneesmiddelen.

Het effect van EXD op de botdichtheid van OVX-muizen Hematoxyline- en eosin- (H &amp; E) -vervaging van de lumbale wervelkolom toont verhoogde bottrabeculae na EXD-behandeling in vivo ( Figuur 1A , rechter paneel) vergeleken met die in de OVX-groep ( Figuur 1A , linker paneel). Figuur 1B toont de representatieve μCT beelden van de 4e lumbale in OVX muizen ( <s...

Hier presenteren we de voorbereiding van een er-xian decoctie (EXD) in vier stappen: ontdooiing, afkooksel, filtratie en concentratie- en de toediening van een bereid EXD-bevattende serum aan ratten aan te tonen. Deze methoden zijn van toepassing op de in vivo en in vitro studie van kruiddekkingen zoals traditionele Chinese geneesmiddelen.

Voorbereiding van kruidengeneeskunde: Er-Xian Decoction en Er-Xian-Serum voor<em&gt; In Vivo</em&gt; En<em&gt; In Vitro</em&gt; Experimenten

Traditional herbal medicine, an alternative medicine in the clinical setting, has received increased attention in recent years. Before delivery to the ...

Het algemene doel van deze procedure is het bereiden van een er-xian decoct, een traditioneel Chinees kruidengemiddel, voor in vivo en in vitro toepassing. Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van kernvragen binnen het veld van de kruidengeneeskunde over de bereiding en toepassing van een traditioneel Chinees geneesmiddel. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat de stappen voor waterextractie vergelijkbaar zijn met die welke in een klinische setting worden gebruikt.Plaats de grondstoffen voor één er-xian decoct in een afgesloten container en voeg voldoende gedestilleerd water toe zodat de kruiden met ongeveer een inch zijn bedekt. Sluit de container met het deksel en laat de ruwe kruiden één uur weken. Verhit de kruiden vervolgens op hoog vermogen met een gasfornuis totdat het water kookt.Zet het vuur laag om te laten sudderen en trek de kruiden gedurende twee uur. Aan het einde van de eerste waterdecocctie wordt een glazen bekerglas van 500 milliliter afgedekt met gaas en watten, waarna alleen de decoctievloeistof voorzichtig door het filter in het bekerglas wordt gegoten. Voeg alle kruidenresten op het filterpapier terug aan de container en voeg voldoende vers

preparation-herbal-medicine-er-xian-decoction-er-xian-containing

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Dit artikel bevat een gedetailleerd protocol voor de voorbereiding van een werkoplossing van Gushukang granulaat voor dierproeven en GSK-submodule die serum voor in vitro experimenten bevat. Dit protocol kan worden toegepast op farmacologische onderzoeken van kruidengeneesmiddelen, alsmede op recepten voor zowel in vivo als in vitro experimenten.

Bereiding van Gushukang (GSK) granulaat voor in vivo en in vitro experimenten

Dit protocol biedt een combinatiestrategie van twee kruiden om gewonde PC12-cellen te behandelen. Het protocol biedt een referentie voor het optimaliseren van de beste toepassingsmodus van de traditionele Chinese geneeskunde (TCM).

Het verkennen van de combinatiestrategie voor twee kruiden om gewonde PC12-cellen te behandelen

In dit protocol werd de schapenolieverwerkingstechnologie van Epimedii folium (EF) geoptimaliseerd door een Box-Behnken experimentele ontwerp-respons oppervlaktemethodologie toe te passen, en het effect van ruwe en geoptimaliseerde watergeëxtraheerde EF op de embryonale ontwikkeling van zebravissen werd voorlopig onderzocht.

Optimalisatie van de Epimedii Folium Mutton-Oil Processing Technology en het testen van het effect ervan op de embryonale ontwikkeling van zebravissen

We beschrijven een algemeen protocol voor in vivo cell tracking met MRI in een muismodel met ex vivo gemerkte cellen. Een typische protocol voor mobiele etikettering, beeldaanwinst verwerking en kwantificering is inbegrepen.

In vivo 19 F MRI voor mobiele Tracking

Deze methode is ontwikkeld met als doel het leveren van een constante geneesmiddeloplossing via de halsslagader, de farmacokinetiek van nieuwe geneesmiddelen evalueren muismodellen.

Halsslagader Infusions voor farmacokinetische en farmacodynamische analyse van Taxanen in Muizen

Hier wordt real-time monitoring van het metabolisme van tumorcellen, gecombineerd met een in vivo kippenembryo chorio-allantoïsche membraan (CAM) model van metastase, gebruikt om nieuwe anti-kanker doelen/middelen te evalueren op hun vermogen om tumorcellen te sensitiviseren voor DNA-beschadigende chemotherapeutica.

Het evalueren van de effectiviteit van Cancer Drug Overgevoeligheid<em&gt; In Vitro</em&gt; En<em&gt; In Vivo</em

Dit protocol beschrijft de stappen die nodig zijn om ex vivo validatie uit te voeren van in vivo nabije-infrarood fluorescentie xenograft beeldvormingsexperimenten bij muizen met behulp van met fluorofoor gelabelde nanolichamen en conventionele antilichamen.

Validatie van Nanobody en antilichamen gebaseerde<em&gt; In Vivo</em&gt; Tumor Xenograft NIRF-imaging Experimenten op muizen, waarbij<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Flowcytometrie en Microscopie

Humane tumor xenotransplantaten zijn gevasculariseerd en geïnfiltreerd door cellen van muizen oorsprong tijdens de groeifase in vivo. Om de voorspanning door deze contaminerende cellen tijdens downstream analyse te omzeilen, hebben wij een methode waardoor uitgebreide depletie van muizencellen door magnetische celsortering.

Uitputting van de Muis Cellen van geënte, humane tumoren verbetert Downstream Analyse van Target Cellen

Hier worden geoptimaliseerde methoden beschreven om in vivo en in vitro modellen van hepatische steatose te genereren en om de steatotische fenotypes en gerelateerde fysiologische parameters te analyseren.

Geoptimaliseerd Analyse van<em&gt; In Vivo</em&gt; en<em&gt; In Vitro</em&gt; Leversteatose

Dit manuscript beschrijft de efficiënte, niet-virale aflevering van miR aan endotheelcellen door een PEI / MNP vector en de magnetisatie. Dus behalve genetische modificatie, deze benadering voor magnetische cellen leiding en MRI detecteerbaarheid. De techniek kan worden gebruikt om de kenmerken van de therapeutische cel producten te verbeteren.

voorbereiding en<em&gt; In Vitro</em&gt; Karakterisering van Magnetische miR-gemodificeerde endotheelcellen

Leer de gestandaardiseerde bereiding van Er-Xian Decoction voor in vivo en in vitro onderzoek naar botbiologie. Dit protocol gebruikt waterextractie vergelijkbaar met klinische methoden en toepassing bij rattenmodellen.

Voorbereiding van kruidengeneeskunde: Er-Xian Decoction en Er-Xian-Serum voor

Meer video's verkennen