Name: Een Unified Methodological Framework voor Vestibular Schwannoma Research (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-06-20T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 43 s
Description: Leer een minimaal manipulatieve methode voor primaire celcultuur van vestibulair schwannoom. Dit protocol behoudt celviabiliteit en maakt testen van therapeutische kandidaten op gekweekte tumorcellen mogelijk.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd ondersteund door het Nationale Instituut voor Doofheid en andere communicatiestoornissen, subsidies R01DC015824 (KMS) en T32DC00038 (ondersteunend JES en SD), het ministerie van Defensie-subsidie ​​W81XWH-14-1-0091 (KMS), de Bertarelli Foundation (KMS) , De Stichting Nancy Sayles Day (KMS), het Lauder Tinnitus Research Center (KMS) en de Barnes Foundation (KMS).

<ol><li>Babu, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vestibular+schwannomas+in+the+modern+era%3A+epidemiology%2C+treatment+trends%2C+and+disparities+in+management%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosurg%22%5BJournal%5D)">Vestibular schwannomas in the modern era: epidemiology, treatment trends, and disparities in management.</a> J Neurosurg. 119 (1), 121-130 (2013).</li>
<li>Gal, T. J., Shinn, J., Huang, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+epidemiology+and+management+trends+in+acoustic+neuroma%5BTitle%5D)+AND+%22Otolaryngol+Head+Neck+Surg%22%5BJournal%5D)">Current epidemiology and management trends in acoustic neuroma.</a> Otolaryngol Head Neck Surg. 142 (5), 677-681 (2010).</li>
<li>Propp, J. M., McCarthy, B. J., Davis, F. G., Preston-Martin, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Descriptive+epidemiology+of+vestibular+schwannomas%5BTitle%5D)+AND+%22Neuro+Oncol%22%5BJournal%5D)">Descriptive epidemiology of vestibular schwannomas.</a> Neuro Oncol. 8 (1), 1-11 (2006).</li>
<li>Stangerup, S. E., Tos, M., Thomsen, J., Caye-Thomasen, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((True+incidence+of+vestibular+schwannoma%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">True incidence of vestibular schwannoma?</a> Neurosurgery. 67 (5), 1335-1340 (2010).</li>
<li>Tos, M., Stangerup, S. E., Caye-Thomasen, P., Tos, T., Thomsen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What+is+the+real+incidence+of+vestibular+schwannoma%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Otolaryngol+Head+Neck+Surg%22%5BJournal%5D)">What is the real incidence of vestibular schwannoma?</a> Arch Otolaryngol Head Neck Surg. 130 (2), 216-220 (2004).</li>
<li>Stangerup, S. E., Caye-Thomasen, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology+and+natural+history+of+vestibular+schwannomas%5BTitle%5D)+AND+%22Otolaryngol+Clin+North+Am%22%5BJournal%5D)">Epidemiology and natural history of vestibular schwannomas.</a> Otolaryngol Clin North Am. 45 (2), 257-268 (2012).</li>
<li>Mahaley, M. S., Mettlin, C., Natarajan, N., Laws, E. R., Peace, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+patterns+of+care+of+brain+tumor+patients+in+the+United+States%3A+a+study+of+the+Brain+Tumor+Section+of+the+AANS+and+the+CNS+and+the+Commission+on+Cancer+of+the+ACS%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Neurosurg%22%5BJournal%5D)">Analysis of patterns of care of brain tumor patients in the United States: a study of the Brain Tumor Section of the AANS and the CNS and the Commission on Cancer of the ACS.</a> Clin Neurosurg. 36, 347-352 (1990).</li>
<li>Carlson, M. L., Link, M. J., Wanna, G. B., Driscoll, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Management+of+sporadic+vestibular+schwannoma%5BTitle%5D)+AND+%22Otolaryngol+Clin+North+Am%22%5BJournal%5D)">Management of sporadic vestibular schwannoma.</a> Otolaryngol Clin North Am. 48 (3), 407-422 (2015).</li>
<li>Dilwali, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sporadic+vestibular+schwannomas+associated+with+good+hearing+secrete+higher+levels+of+fibroblast+growth+factor+2+than+those+associated+with+poor+hearing+irrespective+of+tumor+size%5BTitle%5D)+AND+%22Otol+Neurotol%22%5BJournal%5D)">Sporadic vestibular schwannomas associated with good hearing secrete higher levels of fibroblast growth factor 2 than those associated with poor hearing irrespective of tumor size.</a> Otol Neurotol. 34 (4), 748-754 (2013).</li>
<li>Caye-Thomasen, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((VEGF+and+VEGF+receptor-1+concentration+in+vestibular+schwannoma+homogenates+correlates+to+tumor+growth+rate%5BTitle%5D)+AND+%22Otol+Neurotol%22%5BJournal%5D)">VEGF and VEGF receptor-1 concentration in vestibular schwannoma homogenates correlates to tumor growth rate.</a> Otol Neurotol. 26 (1), 98-101 (2005).</li>
<li>Koutsimpelas, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+VEGF%2FVEGF-R+axis+in+sporadic+vestibular+schwannomas+correlates+with+irradiation+and+disease+recurrence%5BTitle%5D)+AND+%22ORL+J+Otorhinolaryngol+Relat+Spec%22%5BJournal%5D)">The VEGF/VEGF-R axis in sporadic vestibular schwannomas correlates with irradiation and disease recurrence.</a> ORL J Otorhinolaryngol Relat Spec. 74 (6), 330-338 (2012).</li>
<li>Dilwali, S., Roberts, D., Stankovic, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interplay+between+VEGF-A+and+cMET+signaling+in+human+vestibular+schwannomas+and+schwann+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Biol+Ther%22%5BJournal%5D)">Interplay between VEGF-A and cMET signaling in human vestibular schwannomas and schwann cells.</a> Cancer Biol Ther. 16 (1), 170-175 (2015).</li>
<li>Dilwali, S., Kao, S. Y., Fujita, T., Landegger, L. D., Stankovic, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nonsteroidal+anti-inflammatory+medications+are+cytostatic+against+human+vestibular+schwannomas%5BTitle%5D)+AND+%22Transl+Res%22%5BJournal%5D)">Nonsteroidal anti-inflammatory medications are cytostatic against human vestibular schwannomas.</a> Transl Res. 166 (1), 1-11 (2015).</li>
<li>Dilwali, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+validation+of+anti-nuclear+factor-kappa+B+therapy+to+inhibit+human+vestibular+schwannoma+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Oncol%22%5BJournal%5D)">Preclinical validation of anti-nuclear factor-kappa B therapy to inhibit human vestibular schwannoma growth.</a> Mol Oncol. 9 (7), 1359-1370 (2015).</li>
<li>Dilwali, S., Landegger, L. D., Soares, V. Y., Deschler, D. G., Stankovic, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Secreted+Factors+from+Human+Vestibular+Schwannomas+Can+Cause+Cochlear+Damage%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Secreted Factors from Human Vestibular Schwannomas Can Cause Cochlear Damage.</a> Sci Rep. 5, 18599(2015).</li>
<li>Blakeley, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+drug+treatments+for+neurofibromatosis+type+2-associated+vestibular+schwannoma%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Otolaryngol+Head+Neck+Surg%22%5BJournal%5D)">Development of drug treatments for neurofibromatosis type 2-associated vestibular schwannoma.</a> Curr Opin Otolaryngol Head Neck Surg. 20 (5), 372-379 (2012).</li>
<li>Schroeder, R. D., Angelo, L. S., Kurzrock, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NF2%2Fmerlin+in+hereditary+neurofibromatosis+2+versus+cancer%3A+biologic+mechanisms+and+clinical+associations%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">NF2/merlin in hereditary neurofibromatosis 2 versus cancer: biologic mechanisms and clinical associations.</a> Oncotarget. 5 (1), 67-77 (2014).</li>
<li>Schularick, N. M., Clark, J. J., Hansen, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+culture+of+human+vestibular+schwannomas%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Primary culture of human vestibular schwannomas.</a> J Vis Exp. (89), (2014).</li>
<li>Dilwali, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+culture+of+human+Schwann+and+schwannoma+cells%3A+improved+and+simplified+protocol%5BTitle%5D)+AND+%22Hear+Res%22%5BJournal%5D)">Primary culture of human Schwann and schwannoma cells: improved and simplified protocol.</a> Hear Res. , 25-33 (2014).</li>
<li>Brown, C. M., Ahmad, Z. K., Ryan, A. F., Doherty, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estrogen+receptor+expression+in+sporadic+vestibular+schwannomas%5BTitle%5D)+AND+%22Otol+Neurotol%22%5BJournal%5D)">Estrogen receptor expression in sporadic vestibular schwannomas.</a> Otol Neurotol. 32 (1), 158-162 (2011).</li>
<li>Cioffi, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MicroRNA-21+overexpression+contributes+to+vestibular+schwannoma+cell+proliferation+and+survival%5BTitle%5D)+AND+%22Otol+Neurotol%22%5BJournal%5D)">MicroRNA-21 overexpression contributes to vestibular schwannoma cell proliferation and survival.</a> Otol Neurotol. 31 (9), 1455-1462 (2010).</li>
<li>Doherty, J. K., Ongkeko, W., Crawley, B., Andalibi, A., Ryan, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ErbB+and+Nrg%3A+potential+molecular+targets+for+vestibular+schwannoma+pharmacotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Otol+Neurotol%22%5BJournal%5D)">ErbB and Nrg: potential molecular targets for vestibular schwannoma pharmacotherapy.</a> Otol Neurotol. 29 (1), 50-57 (2008).</li>
<li>Aguiar, P. H., Tatagiba, M., Samii, M., Dankoweit-Timpe, E., Ostertag, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+comparison+between+the+growth+fraction+of+bilateral+vestibular+schwannomas+in+neurofibromatosis+2+%28NF2%29+and+unilateral+vestibular+schwannomas+using+the+monoclonal+antibody+MIB+1%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neurochir+%28Wien%29%22%5BJournal%5D)">The comparison between the growth fraction of bilateral vestibular schwannomas in neurofibromatosis 2 (NF2) and unilateral vestibular schwannomas using the monoclonal antibody MIB 1.</a> Acta Neurochir (Wien). 134 (1-2), 40-45 (1995).</li>
<li>Cattoretti, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monoclonal+antibodies+against+recombinant+parts+of+the+Ki-67+antigen+%28MIB+1+and+MIB+3%29+detect+proliferating+cells+in+microwave-processed+formalin-fixed+paraffin+sections%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Monoclonal antibodies against recombinant parts of the Ki-67 antigen (MIB 1 and MIB 3) detect proliferating cells in microwave-processed formalin-fixed paraffin sections.</a> J Pathol. 168 (4), 357-363 (1992).</li>
<li>Hung, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunohistochemistry+study+of+human+vestibular+nerve+schwannoma+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Immunohistochemistry study of human vestibular nerve schwannoma differentiation.</a> Glia. 38 (4), 363-370 (2002).</li>
<li>Archibald, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((B7-H1+expression+in+vestibular+schwannomas%5BTitle%5D)+AND+%22Otol+Neurotol%22%5BJournal%5D)">B7-H1 expression in vestibular schwannomas.</a> Otol Neurotol. 31 (6), 991-997 (2010).</li>
<li>Landegger, L. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+synthetic+AAV+vector+enables+safe+and+efficient+gene+transfer+to+the+mammalian+inner+ear%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">A synthetic AAV vector enables safe and efficient gene transfer to the mammalian inner ear.</a> Nat Biotechnol. 35 (3), 280-284 (2017).</li>
<li>Zinn, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+Silico+Reconstruction+of+the+Viral+Evolutionary+Lineage+Yields+a+Potent+Gene+Therapy+Vector%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">In Silico Reconstruction of the Viral Evolutionary Lineage Yields a Potent Gene Therapy Vector.</a> Cell Rep. 12 (6), 1056-1068 (2015).</li>
<li>Kim, B. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sulforaphane%2C+a+natural+component+of+broccoli%2C+inhibits+vestibular+schwannoma+growth+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Sulforaphane, a natural component of broccoli, inhibits vestibular schwannoma growth in vitro and in vivo.</a> Sci Rep. 6, 36215(2016).</li>
<li>Soares, V. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+vesicles+derived+from+human+vestibular+schwannomas+associated+with+poor+hearing+damage+cochlear+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Neuro+Oncol%22%5BJournal%5D)">Extracellular vesicles derived from human vestibular schwannomas associated with poor hearing damage cochlear cells.</a> Neuro Oncol. 18 (11), 1498-1507 (2016).</li>
<li>Lysaght, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteome+of+human+perilymph%5BTitle%5D)+AND+%22J+Proteome+Res%22%5BJournal%5D)">Proteome of human perilymph.</a> J Proteome Res. 10 (9), 3845-3851 (2011).</li>
<li>Caye-Thomasen, P., Borup, R., Stangerup, S. E., Thomsen, J., Nielsen, F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deregulated+genes+in+sporadic+vestibular+schwannomas%5BTitle%5D)+AND+%22Otol+Neurotol%22%5BJournal%5D)">Deregulated genes in sporadic vestibular schwannomas.</a> Otol Neurotol. 31 (2), 256-266 (2010).</li>
<li>Schulz, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+importance+of+nerve+microenvironment+for+schwannoma+development%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol%22%5BJournal%5D)">The importance of nerve microenvironment for schwannoma development.</a> Acta Neuropathol. 132 (2), 289-307 (2016).</li>
<li>Torres-Martin, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+profiling+in+vestibular+schwannomas+shows+critical+deregulation+of+microRNAs+and+upregulation+in+those+included+in+chromosomal+region+14q32%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Global profiling in vestibular schwannomas shows critical deregulation of microRNAs and upregulation in those included in chromosomal region 14q32.</a> PLoS One. 8 (6), e65868(2013).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Dit manuscript beschrijft een verenigd methodologisch kader voor VS-onderzoek, waarin de gelijktijdige verwerking van menselijke VS- en GAN-monsters wordt beschreven voor downstream onderzoeksoepassingen. Aangezien VS-onderzoek de leeftijd van precisie geneeskunde oplevert, kan het opstellen van hetzelfde monster in formulieren die veel onderzoeksvragen kunnen beantwoorden, de detectie van moleculaire, cellulaire, genetische en proteomische inzichten die specifiek zijn voor individuele patiënten, mogelijk maken. <p ...

Vestibulaire schwannomen (VS&#39;s) zijn de meest voorkomende neoplasma&#39;s van de cerebellopontinehoek, gediagnosticeerd bij 1 op elke 100.000 individuen. Hoewel niet-metastatische, beïnvloeden deze tumoren een levenskwaliteit van een patiënt 1 , 2 , 3 , 4 , 5 , 6 ernstig. Geïnteresseerden leven meestal met gehoorverlies, tinnitus en een gevoel van gehoorvervulling. Symptomen worden steeds meer belemmerend aangezien de tumor groeit, waardoor balansproblemen, gelaatsverlamming en vermindering van andere craniale zenuwfuncties ontstaan. Levensbedreigende complicaties als gevolg van hersenstam compressie kunnen ook 7 opleveren. Beheersopties voor VS zijn in wezen beperkt tot waakzaam wachten op statische tumoren en stereotactische radiotherapie of chirurgische resectie voor groeiende tumoren <sUp class = &quot;xref&quot;&gt; 8. De chirurgische verwijdering van deze tumoren in onderzoeksgebonden ziekenhuizen biedt de mogelijkheid om vers tumorweefsel te verzamelen en te analyseren die tijdens de patiëntenoperaties worden verzameld. Een specifieke chirurgische benadering van VS, de translabyrinthine resectie, kan zelfs toegang bieden tot waardevolle menselijke zintuiglijke epithelium uit het binnenoor en periliem. Omdat VS&#39;s voortkomen uit een perifere sensorische zenuw ( dwz de vestibulaire zenuw), is het belangrijk om VS-geassocieerde waarnemingen te vergelijken met die afgeleid van een passende controlevenuwe, zoals de menselijke grote auriculaire zenuw (GAN). Gezonde GAN&#39;s worden regelmatig geofferd tijdens parotidectomies of nekdissecties en kunnen gebruikt worden als robuuste modellen voor gezonde Schwann-celfysiologie 9 . Omdat er geen FDA-goedgekeurde geneesmiddelen zijn voor de behandeling of preventie van sporadische VS, is het essentieel dat onderzoekers de onderliggende moleculaire mecha verduidelijkenNismen van de ziekte ter identificatie van therapeutische doelen. Proteïnen die zijn aangetoond dat ze een rol spelen in de VS-pathogenese, omvatten merlin, vasculaire endotheliale groeifactor (VEGF), cyclooxygenase 2 (COX-2), nucleaire factor kappa B (NF-KB), tumornekrosefactor alfa (TNF-alpha) , Epidermale groeifactorreceptor (EGFR) en verwante signaleringsmoleculen 10 , 11 , 12 , 13 , 14 , 15 , 16 , 17 . Recente vooruitgang heeft uitgebreid en verbeterde protocollen voor het verzamelen, verwerken, culturen en stroomafwaarts onderzoek van primaire humane vestibulaire schwannomen en gezonde zenuwweefsels 18 , 19 . De meeste bestaande protocollen zijn echter ontworpen om de voorbereiding op te nemenAtion van dergelijke weefsels voor een enkele stroomafwaartse onderzoeksaanvraag ( dwz alleen celcultuur). Dit artikel bevat een uniforme methodologische kader voor de gelijktijdige verwerking van een enkelvoudig primair menselijk VS- of GAN-monster voor meerdere downstream toepassingen: celtype-specifieke cultuur, eiwit-extractie, RNA-behoud, insameling van tumorenecretie en weefselfixatie. Dit werk bevat ook details over de chirurgische insameling en verwerking van menselijke cerebrospinale vloeistof (CSF) en periliem tijdens transplantabyrinthine VS resectie, aangezien deze nauw verwante weefsels kunnen dienen als belangrijke bronnen van biomarkers voor VS. Tenslotte presenteert dit protocol stappen voor de virale transductie van primaire menselijke VS-cellen in cultuur als een nieuwe toepassing van dit weefsel voor gebruik bij gentherapie.

<table><tbody><tr><td>BioCoat Poly-D-Lysine/Laminin 12 mm #1 German Glass Coverslip</td><td>Corning</td><td>354087</td><td>Of bereid coverslips met Corning Laminin (CB-40232) en Cultrex Poly-L-Lysine (3438-100-01)</td></tr><tr><td>CELLSTAR 15 mL Centrifuge Tubes, Conical bottom, Graduation, Sterile</td><td>Greiner Bio-One</td><td>188161</td><td></td></tr><tr><td>CELLSTAR 50 mL Centrifuge Tubes, Conical bottom, Graduation, Sterile</td><td>Greiner Bio-One</td><td>227261</td><td></td></tr><tr><td>CELLSTAR Cell Culture Dish, 60 mm</td><td>Greiner Bio-One</td><td>628160</td><td></td></tr><tr><td>Collagenase from Clostridium histolyticum, Sterile-filtered</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C1639</td><td></td></tr><tr><td>Costar 24 Well Clear TC-Treated Multiple Well Plates, Sterile</td><td>Corning</td><td>3526</td><td></td></tr><tr><td>DAPI (4',6-Diamidino-2-Phenylindole, Dihydrochloride)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>D1306</td><td></td></tr><tr><td>DMEM, high glucose, pyruvate, no glutamine, 500 mL</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>10313-039</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F-12, 500 mL</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11320-033</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #3 Forceps, Dumoxel</td><td>Fine Science Tools</td><td>11231-30</td><td>Autoclaveer voor gebruik</td></tr><tr><td>Dumont #5 Forceps, Standard tip, Inox</td><td>Fine Science Tools</td><td>11251-20</td><td>Autoclaveer voor gebruik</td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum, qualified, USDA-approved regions, 500 mL</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>10437-028</td><td>Aliquot in 50 mL buizen en bewaar in -20&deg;C vriezer</td></tr><tr><td>Hyaluronidase from Bovine Testes, Type I-S, Lyophilized Powder</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H3506</td><td></td></tr><tr><td>Millex-GP Syringe Filter Unit, 0.22 &micro;m, polyethersulfone, 33 mm, steriele</td><td>EMD Millipore</td><td>SLGP033RS</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyde, Reagent Grade, Crystalline</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P6148</td><td>Voor gebruik: stel standaard werkprocedures in op basis van protocollen die online beschikbaar zijn</td></tr><tr><td>PBS, pH 7.4, 500 mL</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>10010-023</td><td>Autoclaveer voor gebruik</td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin (10.000 U/mL), 100 mL</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>PhosSTOP Fosfatase Inhibitor Tablets</td><td>Roche</td><td>04906845001</td><td></td></tr><tr><td>Pierce Protease Inhibitor Tablets</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>88666</td><td></td></tr><tr><td>Pipetten en pipettentips, 5/10/25 mL</td><td>Variabel</td><td>Variabel</td><td></td></tr><tr><td>Plastic Homogenization Pestel voor 1,5/2,0 mL Microtubes</td><td>E&amp;K Scientific</td><td>EK-10539</td><td></td></tr><tr><td>PrecisionGlide Needles, 27 G x 1 1/2 in</td><td>BD</td><td>301629</td><td></td></tr><tr><td>RIPA Buffer</td><td>Boston BioProducts</td><td>BP-115</td><td></td></tr><tr><td>RNAlater (RNA stabilisatieoplossing)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>AM7021</td><td></td></tr><tr><td>Safe-Lock Microcentrifugebuizen, Polypropylene, 0,5 mL</td><td>Eppendorf</td><td>022363719</td><td>Autoclaveer voor gebruik</td></tr><tr><td>Safe-Lock Microcentrifugebuizen, Polypropylene, 1,5 mL</td><td>Eppendorf</td><td>022363204</td><td>Autoclaveer voor gebruik</td></tr><tr><td>Saline - 0,9% Natriumchloride Injectie, bacteriostatic, 20 mL</td><td>Hospira</td><td>0409-1966-05</td><td></td></tr><tr><td>Scalpel Blades - #15</td><td>Fine Science Tools</td><td>10015-00</td><td></td></tr><tr><td>Schuknecht Suction Tube 24 gauge</td><td>Bausch & Lomb</td><td>N1698 42</td><td>Bruikbaar voor de chirurgische benadering (naast gangbare otologische chirurgische instrumenten) en bijv. een blauwe chirurgische marker</td></tr><tr><td>Specimen Container, OR steriele, 4OZ</td><td>Medline</td><td>DYND30331H</td><td></td></tr><tr><td>Stemi 2000-C Stereo Microscope</td><td>Zeiss</td><td>000000-1106-133</td><td></td></tr><tr><td>Syringe/Needle Combination, Luer-Lok Tip, 5 mL, 22 G x 1 in.</td><td>BD</td><td>309630</td><td></td></tr><tr><td>Tuberculin Syringe Only, Slip tip, 1 mL</td><td>BD</td><td>309659</td><td></td></tr><tr><td>Tuberculin Syringe Only, Slip tip, 3 mL</td><td>BD</td><td>309656</td><td></td></tr><tr><td>Ultrasonic homogenizer, 4710 Series, CV18 probe</td><td>Cole-Parmer</td><td>CP25013</td><td></td></tr></tbody></table>

een unified methodological framework voor vestibular schwannoma research

A Unified Methodological Framework for Vestibular Schwannoma Research

Vestibulaire schwannomen zijn de meest voorkomende neoplasma&#39;s van de cerebellopontinehoek, die 6-8% van alle intracraniale groeizen vormen. Hoewel deze tumoren sensorineuraal gehoorverlies veroorzaken in 95% van de getroffen individuen, blijven de moleculaire mechanismen die tot dit gehoorverlies leiden, onduidelijk. Dit artikel schetst de stappen in ons laboratorium om de inzameling en verwerking van diverse primaire menselijke weefselmonsters te vergemakkelijken voor downstream onderzoeksapplicaties die integraal zijn bij de studie van vestibulaire schwannomen. Specifiek beschrijft dit werk een verenigd methodologisch kader voor de verzameling, verwerking en cultuur van Schwann- en schwannomacellen uit chirurgische monsters. Dit is geïntegreerd met parallelle verwerkingsstappen die nu essentieel zijn voor huidig ​​onderzoek: de verzameling van tumor- en zenuwafscheidingen, het behoud van RNA en de extractie van eiwitten uit verzamelde weefsels, de fixatie van weefsel voor de bereiding van secties, eenD de blootstelling van primaire humane cellen aan adeno-geassocieerde virussen voor toepassing op gentherapie. Daarnaast benadrukt dit werk de translabyrinthine chirurgische benadering om deze tumor te verzamelen als een unieke kans om menselijk zintuiglijk epitheel van het binnenoor en periliem te verkrijgen. Tips voor het verbeteren van de experimentele kwaliteit worden verstrekt en gemeenschappelijke valkuilen worden gemarkeerd.

Primaire menselijke VS-cellen in cultuur, zoals vastgesteld in sectie 5, kunnen in veel downstream-onderzoeksaanvragen als informatieve modellen voor ziekteverwante processen worden behandeld ( Figuur 1 ). Gezonde Schwann-cellen die in sectie 6 zijn gekweekt, geven een direct en leerzaam vergelijkingspunt. Zoals hieronder uiteengezet, zijn uitgebreide gegevens van VS&#39;s en GAN&#39;s verwerkt volgens dit verenigde methodologische kader beschikbaar in meerd...

Het doel van dit protocol is het samenstellen en verwerken van menselijke chirurgische monsters voor meerdere downstream toepassingen in vestibulaire schwannoma- en Schwann-celonderzoek.

Een Unified Methodological Framework voor Vestibular Schwannoma Research

Vestibular schwannomas are the most common neoplasms of the cerebellopontine angle, making up 6-8% percent of all intracranial growths. Though these ...

Het algemene doel van deze procedure is het verwerken van een menselijk vestibulair schwannoommonster, ontvangen vanuit de operatiekamer, voor primaire celkweek en het verzamelen van tumorscheidingen. Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van kernvragen in het onderzoek naar vestibulaire schwannomen, zoals de beste manier om een primair menselijk tumormonster te ontvangen, te bewaren en te verwerken voor gebruik in meerdere biomoleculaire assays. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat er gebruik wordt gemaakt van een minimaal manipulatieve kweekmethode om primaire menselijke vestibulaire schwannoomcellen te vermeerderen.De implicaties van deze techniek strekken zich uit tot de therapie voor vestibulair schwannoom, omdat veelbelovende therapeutische kandidaten direct op gekweekte cellen kunnen worden getest. Begin met het overbrengen van de monstercontainer met het vers geoogste vestibulair schwannoom- of grote auriculaire zenuwmonster van het ijs dat werd gebruikt voor transport vanuit de operatiekamer naar een laminaire flowkast in het laboratorium. Gebruik steriele pincetten om het monster voorzichtig over te brengen naar de eerste van drie 1,5 milliliter buisjes gevuld met 1,4 milliliter PBS.Sluit elke buis zodra deze het specimen bevat en schud voorzichtig om te wassen. Plaats het monster in een droge petrischaal van 60 millimeter en gebruik een pincet om al het dode weefsel in gebieden met prominente bloedvaten te verwijderen. Gebruik een pincet of een scalpellamella om het monster te verdelen in afzonderlijke stukken voor RNA-preservering, eiwitextractie, verzameling van secreties, fixatie en celkweek.Breng het stuk van het specimen dat bestemd is voor celkweek over naar een nieuwe kweekschaal van 60 millimeter met vijf tot acht milliliter koud aangevuld DMEM F12-medium. Plaats het stuk vestibulaire schwannoom of grote oorzenuw dat bestemd is voor de verzameling van secreties in een lege buis van 1,5 milliliter. Begin met het pipetteren van 500 microliters DMEM zonder FBS-supplement in twee buizen van 1,5 milliliter.De eerste buis wordt gebruikt om de tumorscheidingen op te vangen en de tweede buis dient als bijbehorende controle. Plaats een van de buizen met DMEM op een gekalibreerde digitale weegschaal. Zet de weegschaal op nul, plaats het stuk monster dat bestemd is voor het opvangen van de scheidingen in de buis en weeg dit.Noteer het resultaat, dat het gewicht van enkel het weefsel vertegenwoordigt. Pas onder een laminaire flowkast het volume DMEM in de buis aan naar 100 µL per 10 mg van het monster. Plaats de buis met het weefselmonster en de bijbehorende controle in de incubator.Incubeer gedurende ten minste 72 uur om biologisch bruikbare hoeveelheden tumor- of zenuwsecretieën te verzamelen. Gebruik na een incubatie van 72 uur een pipet van één milliliter om het medium dat de secretie bevat uit het monster te verwijderen. Om herhaalde vries-dooi-cycli te voorkomen, wordt het medium in nieuwe buisjes verdeeld in aliquoten, afhankelijk van de geplande downstream-analyse.Bewaar het oorspronkelijke weefselstuk, de secreties en de controle DMEM in een vriezer van -80 °C tot de verdere toepassingen worden gestart. Begin de kweekprocedure door met een pincet in elke hand het weefsel van het vestibulaire schwannoom te verdelen in stukjes van ongeveer 1 mm³. Aspireer vervolgens het medium en de tumorstukjes met een serologische pipet van 10 mm en breng de gehele inhoud over naar een conische buis van 15 ml.Centrifuge gedurende drie minuten bij 1000G bij 25 °C. Bereid tijdens het centrifugeren het disintegratiemedium voor door 4,7 milliliters aangevuld DMEM F12-medium te combineren met 250 microliters collagenase en 50 microliters hyaluronidase in een 60 millimeter kweekschaal. Na centrifugatie vormen de tumorstukjes een pellet op de bodem van de conische buis.Pipette het supernatant voorzichtig af en gooi dit weg. Voeg vervolgens twee milliliters vers bereid desintegratiemedium met enzymen toe aan het tumorpalet. Pipetteer meerdere keren op en neer om het weefsel te mobiliseren en breng het daarna over naar de 60 millimeter kweekschaal.Plaats de kweekschaal gedurende 18 uur in de incubator. Verwarm de volgende dag DMEM F12-medium, aangevuld met 10% FBS en 1% penicilline-streptomycine, in een waterbad van 37 °C. Haal de schaal met de vestibulair schwannoomkweek uit de incubator en breng deze over naar de laminaire flowkast. Aspireer het kweekmedium met een 22 gauge naald bevestigd aan een spuit van 6 ml en breng dit over naar een nieuwe conische buis van 15 ml.Centrifugeer vijf minuten bij 1000G bij 37 degree celsius. Plaats ondertussen met steriele pincetten het benodigde aantal met polydelycine en laminine gecoate glazen dekglasjes in een 24-wells kweekplaat. Van een tumor van één centimeter kubus kunnen 24 tot 32 wells worden gekweekt, waardoor voor de meeste kleinere tumoren een planning van acht tot 16 wells met kweekcellen passend is.Gooi na centrifugatie het supernatant weg en resuspendeer de resterende celpellet in het voorverwarmde medium, zodat er één milliliter cel-suspensie per geplande well beschikbaar is. Gebruik een serologische pipette van vijf milliliter om twee milliliter cel-suspensie op te zuigen en breng één milliliter hiervan over in een well van de 24-wellplaat. Ga door met het opzuigen en overbrengen van het medium met tumorcellen, waarbij in stappen van twee milliliter wordt opgezogen waarvan één milliliter in elke geplande well wordt gedeponeerd, totdat de tumorcel-suspensie gelijkmatig over alle voorbereide wells is verdeeld.Plaats de 24-wells plaat overnight in de incubator bij 37 °C. Controleer de plaat de volgende dag; indien er aanzienlijk debris op de bodem van de wells wordt waargenomen, vervang dan voorzichtig het medium in elke well door nieuw aangevuld DMEM F12-kweekmedium, waarbij u er op let dat de adherente cellen niet worden losgemaakt. Indien er geen debris aanwezig is, plaats de plaat terug in de incubator en vervang het medium voor het eerst op dag vijf en daarna elke drie dagen.Deze brightfield-afbeelding illustreert het typische organisatorische patroon van vestibularis-schwannoomcellen in cultuur. Deze immunofluorescentie-afbeeldingen van een primaire menselijke vestibularis-schwannoomcultuur zijn genomen na 48 uur blootstelling aan GFP-expresserende ink 80, weergegeven in het groen. De rode fluorescentie is afkomstig van phalloidine F-actine immunokleuring, die het cytoskelet kleurt, en de blauwe fluorescentie is DAPI, waarmee de nucleus wordt gekleurd.De inzet is een afbeelding met een hogere vergroting van een regio uit de afbeelding met een lage vergroting. Tijdens het uitvoeren van deze procedure is het belangrijk om te noteren op welke tijdstippen het secretiemonster en het cultuurmonster in de incubator zijn geplaatst, om ervoor te zorgen dat de volgende stappen na de juiste incubatieperioden worden uitgevoerd. Na deze procedure kunnen andere methoden zoals virale transductie, fixatie, immunofluorescentie, medicijnbehandeling en RNA-extractie worden toegepast om aanvullende vragen te beantwoorden, zoals hoe verschillende virussen in cellen tot expressie komen of hoe de genexpressie verandert na een medicijnbehandeling.Na de ontwikkeling heeft deze techniek de weg vrijgemaakt voor onderzoekers op het gebied van vestibulair schwannoom-onderzoek om te verkennen hoe primaire menselijke cellen reageren op verschillende geneesmiddelen bij levende patiënten die een operatie hebben ondergaan.

a-unified-methodological-framework-for-vestibular-schwannoma-research

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kankeronderzoek

Een methode wordt beschreven om driedimensionale vestibulo oculaire reflex (3D VOR) bij mensen met het zes graden van vrijheid (6DF) motion simulator te meten. De versterking en uitlijning van de 3D hoekige VOR een directe maat voor de kwaliteit van vestibulaire functie. Representatieve gegevens over gezonde proefpersonen worden...

Drie dimensionaal Vestibulaire oculaire reflex testen met behulp van een Six Degrees of Freedom Motion Platform

Vestibulaire Schwannomas (VSS) niet-maligne tumoren van Schwann-cellen (SC) oorsprong, geassocieerd met mutaties in het NF2 tumor suppressor gen. Wij rapporteren een reproduceerbare, efficiënt protocol voor primaire menselijke VS celcultuur die het mogelijk maakt voor moleculaire en cellulaire experimentele manipulatie en analyse en recapituleert de heterogene aard van de ziekte bij de mens.

Primaire cultuur van de mens Vestibular Schwannomen

Om te evalueren van de morfologische veranderingen van de hersenzenuwen zoals verlies van neurale is structuren of zwelling van de craniale zenuwen in de ziekte van Menière van (MD) of in gezonde personen in vivo, een protocol van evaluatie ontwikkeld met behulp van magnetische resonantie beeldvorming (MRI) . Extra MRI gebaseerde bevestiging van MD werd uitgevoerd.

In Vivo Morfometrische analyse van menselijke craniale zenuwen met behulp van magnetische resonantie beeldvorming in Menière de ziekte oren en normaal gehoor oren

Een nieuwe revalidatie methode wordt voorgesteld voor het opnieuw balanceren van het vestibulaire systeem bij patiënten met asymmetrische responsen, die bestaat uit unidirectionele rotaties naar de zwakkere kant. Door het direct wijzigen van de vestibulaire traject in plaats van het verbeteren van de multisensorische aspecten van compensatie, asymmetrie kan worden genormaliseerd binnen 1-2 sessies en blijvende effecten vertonen.

Met behulp van unidirectionele rotaties te verbeteren vestibulaire systeem asymmetrie bij patiënten met vestibulaire dysfunctie

De perceptie van de zwaartekracht wordt vaak bepaald door de subjectieve visuele verticale in het hoofd rechtop positie. De aanvullende beoordeling bij kopkantelen van ± 15° en ± 30° in het rolvlak zorgt voor een verhoogd informatiegehalte voor de detectie van verminderde graviceptieve waarneming.

Beoordeling van statische graviceptieve perceptie in het roll-plane met behulp van de subjectieve visuele verticale paradigma

In dit artikel beschrijven we de experimentele opstelling, het materiaal en de procedures om reflexieve oogbewegingen, zelfbewegingsperceptie en cognitieve taken onder magnetische vestibulaire stimulatie te beoordelen, evenals de anatomische oriëntatie van de vestibulaire organen, in een 7 Tesla magnetische resonantietomografie (7T-MRT) scanner.

Het meten van de invloed van magnetische vestibulaire stimulatie op nystagmus, zelfbewegingsperceptie en cognitieve prestaties in een 7T MRT

Hier beschrijven we een techniek voor het oogsten van menselijke vestibulaire eindorganen onder fysiologische omstandigheden tijdens labyrinthectomie en hun analyse met behulp van immunokleuring.

Oogst van vestibulaire eindorganen onder fysiologische omstandigheden tijdens labyrinthectomie

De methodologie onderzocht visuele en vestibulaire bijdragen aan blikstabilisatie tijdens optokinetische rotaties en rotaties van het hele lichaam. Stimulaties werden uitgevoerd door middel van visuele, vestibulaire en visuovestibulaire onderzoeken. Torsie-oogbewegingswinst en nystagmusfrequenties dienden als indicatoren voor het subcorticale doorgeven van sensorisch-specifieke bewegingsinformatie naar de reflexieve hersenstamrespons voor elke proef.

Eye-tracking gebruiken om het relatieve belang van visuele en vestibulaire input voor de verwerking van subcorticale bewegingen in het rolvlak te beoordelen

De behandeling van geïsoleerde recidiverende longkanker in een eerder bestraald veld is uitdagend. Hier beschrijven we een endobronchiale echografie (EBUS)-geleide cisplatine-injectie voor de behandeling van patiënten met gelokaliseerde longkankerrecidive in een eerder bestraald veld.

Endobronchiale Echogeleide Intratumoral injectie van cisplatine voor de behandeling van geïsoleerde Mediastinale Herhaling van longkanker

Muizen die het Colon-26 (C26) carcinoom dragen, vertegenwoordigen een klassiek model van kankercachexie. Progressieve spierverlies treedt op in combinatie met tumorgroei, overexpressie van spierspecifieke ubiquitine ligasen en verminderingen in spierdoorsnede. Vetverlies wordt ook waargenomen. Cachexie wordt op een tijdsafhankelijke manier bestudeerd met toenemende ernst van vermageringsverschijnselen.

De Colon-26 carcinoom Tumor-dragende Mouse als een model voor de studie van kankercachexia

Leer een minimaal manipulatieve methode voor primaire celcultuur van vestibulair schwannoom. Dit protocol behoudt celviabiliteit en maakt testen van therapeutische kandidaten op gekweekte tumorcellen mogelijk.

Een Unified Methodological Framework voor Vestibular Schwannoma Research

Meer video's verkennen