Name: De 4-vaartuig Steekproef Aanpak bij Integratieve Studies van Menselijke Placentale Fysiologie In Vivo (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-08-02T12:30:00.000+00:00
Duration: 12 min 17 s
Description: Leer de 4-vaartuig bloedafnamemethode voor integratief onderzoek naar humane placentafysiologie in vivo. Deze techniek combineert bloedmonsters, echografie en weefselanalyse.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Eerst en vooral bedanken we de moeders die deelnamen aan dit project. Vervolgens erkennen we al het personeel dat de bemonsteringsprocedure, de anesthesioloog, de verpleegkundige anesthesioloog en de chirurgische verpleegkundigen heeft geholpen en vergemakkelijkt. Het project zou niet mogelijk zijn geweest zonder financiering van de Regionale Gezondheidsinstantie Zuidoost-Noorwegen en de Noorse Adviesgroep Vrouwengezondheid, Universiteit van Oslo en lokale financiering van het Universitair Ziekenhuis van Oslo.

De studie werd goedgekeurd door de gegevensbeschermingsambtenaren van het Universitair Ziekenhuis van Oslo en het regionale comité voor medische en gezondheidsnavorsingsethiek, Zuid-Noorwegen 2419/2011. Alle deelnemers hebben een schriftelijke geïnformeerde toestemming ondertekend bij opname. 1. Voorbereidingen OPMERKING: een tijdlijn voor de procedures is omschreven in figuur 1 . <img alt="Figuur 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55847/55847fig1.jpg" /> Figuur 1 : Flowchart waarin de timing en het personeel betrokken zijn in de 4-vaartmonsteringsprocedure. Eén kleur vertegenwoordigt één persoon. Gedetailleerde beschrijving van de methode is gegeven in het protocol. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55847/55847fig1large.jpg" target="_blank">Klik hier om een ​​grotere versie van deze figuur te bekijken.</a> <ol><li> Personeel <ol><lI&gt; Zorg ervoor dat alle benodigde medewerkers beschikbaar zijn: een hoogwaardige specialist in fetische geneeskunde die de ultrasone metingen uitvoert, twee verloskundigen die de operatie uitvoeren, een verloskundige en twee verpleegkundigen die de monsters verzamelen, een assistent die de bloedgasanalyses behandelt en een assistent die de Andere monsters achtereenvolgens en direct na de verzameling. OPMERKING: bij een meer geavanceerde verzameling van placenta weefsel is een extra persoon verplicht. </li></ol></li><li> uitrusting <ol><li> Bereid de apparatuur voor, 50 ml ijskoude 1 M fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS), 25 ml koude RNA stabiliserende oplossing en 5 x 0,5 ml optimale snijtemperatuurverbinding (OCT). Benoem de vacutainers en buizen. Zie voorlopige lijst van apparatuur. </li></ol></li></ol> 2. Moederlijke kenmerken <ol><li> Noteer de klinische en niet-klinische eigenschappen van de moeder bij opname en herhaal relevante vragen en ikAsurements, inclusief gewicht, op het moment van levering. Noteer de duur van de vastenperiode voorafgaand aan de keizersnede en eventuele hypotensive episodes die tijdens de operatie plaatsvinden. Opmerking: Inclusief de minimale materiële klinische dataset die is gerapporteerd in een recente publicatie van Global Gravity CoLaboratory (COLAB). Dit artikel bevat ook enkele zeer belangrijke aspecten bij het kiezen van studiepopulaties en moet worden aangepakt tijdens het plannen van de studie 18 . </li><li> Overweeg paternal karakteristieken, inclusief etniciteit, leeftijds- en lichaamsmassa index (BMI). </li></ol> 3. Echografie <ol><li> Doe het Doppler echografieonderzoek op de dag van de aflevering, met de vrouwen in een vastende toestand. Voer het onderzoek uit tijdens een periode van foetale stoornis, waarbij de vrouw in semi-rugleuning staat, zijt zij een beetje zijdelings tegenover het gebied van belang om de compressie van de aorta en vena cava te vermijden. Monitor de uitvoer inTenslotte door de mechanische en thermische indices op het display. </li><li> Naaldvlies <ol><li> Visualiseer de navelvlies in een sagittale of schuine transectie van de foetale buik. Meet de diameter van het inwendige vaartuig in het rechte gedeelte van de intra-abdominale navelvlies, vóór eventuele zichtbare takken. Gebruik regelmatige B-modus en visualiseer het vat in een loodrechte hoekhoek voor diametermetingen en houd een aantal optimale frames voor latere metingen om het effect van veranderingen in de pulsatiele diameter te minimaliseren. <ol><li> Herhaal de maten vijf tot tien keer 19 . </li></ol></li><li> Op dezelfde plek gebruik Doppler-echografie en pas de sonde aan om zo weinig mogelijk een inspronghoek te krijgen (altijd &lt;30 °) om de gemiddelde snelheid (TAMX) te meten. Verkrijg de snelheid over een periode van 3 - 5 s (niet-pulserende stroming). </li></ol></li><li> Uterine arterie <ol><li> Gebruik DopplerEchografie om de uterine arterie te visualiseren als het de buitenste iliac arterie overschrijdt, onmiddellijk nadat het uit de inwendige iliaire slagader vertakt. Stel de sonde op deze site aan om een ​​lage invalshoek te krijgen (altijd &lt;30 °) en meet TAMX. Verkrijg de snelheid als de gemiddelde snelheid van drie hartcycli. </li><li> Aangezien het onwaarschijnlijk is om een ​​loodrechte hoek te krijgen op dezelfde plaats als TAMX wordt gemeten, volg het schip distaal om een ​​juiste hoek te krijgen voor diametermetingen zo dicht bij de plaatsen met diametermetingen als haalbaar. Uitsluit de diametermetingen als er zichtbare vaten vertrekken voor deze site, zoals geëvalueerd door Doppler ultrasound. <ol><li> Gebruik regelmatige B-modus en visualiseer het vat in een loodrechte hoekhoek voor diametermetingen en houd een aantal optimale frames voor latere metingen om het effect van veranderingen in de pulsatiele diameter te minimaliseren. </li><li> Herhaal de maten vijf tot tien keer 19 . </li></ol></<html> li&gt; </ol></li><li> Let op de positie van de placenta. </li></ol> 4. 4-vaten Bloedmonsterneming OPMERKING: De tijdlijn voor de procedures is omschreven in figuur 1 en een overzicht van de monsters is geïllustreerd in figuur 2 . <img alt="Figuur 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55847/55847fig2.jpg" /> Figuur 2 : Schematische illustratie van de Placental Vasculature en de bemonsteringssites. In de 4-vaten bemonsteringsmethode worden bloedmonsters getrokken uit de baarmoederader, de radiale slagader (als proxy voor de baarmoederartherapie) en de navelstrengaders en ader. Bloedstroom in de baarmoederartherapie en de navelvlies wordt gemeten door middel van echografie. Weefselmonsters uit de placenta worden verzameld. Illustratie: Øystein H. Horgmo, Universiteit van Oslo.5847fig2large.jpg &quot;target =&quot; _ blank &quot;&gt; Klik hier om een ​​grotere versie van deze figuur te zien. <ol><li> Veiligheidsprocedures <ol><li> Zorg voor alle medewerkers in het operatie theater met handschoenen, chirurgische scrubpakken, maskers en hoofdkleding. </li><li> Breng de chirurgen en onderzoekspersoneel in contact met het operatieveld met chirurgische scrubpakken, maskers, hoofddeksels, jurken en dubbele handschoenen. Glazen zijn optioneel. </li><li> Personeel verlenen van de bloedmonsters met handschoenen. </li><li> Zorg voor personeel die de placenta monsters verwerkt met handschoenen en chirurgisch masker. Homogenisatie vereist het gebruik van kappen. </li></ol></li><li> Voorbereiding in de operatie theater <ol><li> Geef een briefing en geef de apparatuur aan aan alle medewerkers die de bemonstering zullen helpen voor het begin van de operatie. </li><li> Adresseer de anesthesioloog en anesthesiologieverpleegkundige die zal helpen bij de noodzakelijke perifere arteriële en veneuze toegang en ervoor zorgen datGeen vloeistoffen worden intraveneus gegeven voor het monsterneming. </li><li> Geef drie spuiten (10 ml) zonder naalden aan de persoon die bij het antecubitale aderproef en twee spuiten (een 20 ml en een 10 ml) en een bloedgasspuit (met heparine) bij de persoon die bij de radiale slagader helpt, helpen. </li><li> Maak twee steriele spuiten (20 ml), vijf steriele spuiten (10 ml), drie &quot;vlindernaalden&quot; en twee bloedgasspuiten voor het operatieveld. </li></ol></li><li> Toegang tot bloedvaten. <ol><li> Volg de standaard procedure voor de keizersnede om perifere intraveneuze (iv) toegang te waarborgen. OPMERKING: De antekubitale ader is de voorkeur omdat het gemakkelijker is om monsters uit deze site te trekken. </li><li> Plaats de radiale slagader bij de pols door middel van echografie of door palpatie. Na 0,5 ml subcutane lidocaïne analgesie, plaats een arteriële lijn in de radiale slagader. Verlaat de bemonstering van deze site in geval van drie mislukte invoegingen, ofAls de vrouw pijn ervaart tijdens de invoeging. OPMERKING: Voer de chirurgische procedure van keizersnede uit volgens de standaard procedure. Alleen de aanpassingen die nodig zijn voor de bemonsteringsprocedure worden hieronder onderstreept. </li></ol></li><li> Moederbloedmonsters OPMERKING: Verkrijg alle drie de bloedmonsters van de moeder (baarmoeder, radiale slagader en antecubitale ader) tegelijk voor de baarmoederinsnijding. <ol><li> Voor de baarmoederader, na het openen van de buikholte, gebruik een retractor om de buikwand op te heffen en de hoofdtakken van de baarmoedervenen op de anterolaterale zijden van de baarmoeder bloot te leggen. Verkrijg bloed van de baarmoedertakken aan de zijkant als de placenta wanneer mogelijk of gebruik de meest prominente venexplexus als de placenta zich in de baarmoederbalk bevindt. <ol><li> Voeg een vlindernaald in op een bloedgasspuit in de baarmoedervlies met een hoek van ongeveer 30 graden en bloed door middel van zachte aspiratie om te vermijdenhemolyse. Terwijl u de iv-positie van de vlindernaald zorgvuldig vastzet, vervang de gevulde bloedgasspuit met een 20 ml en een 10 ml spuit achtereenvolgens. OPMERKING: Optimale toegang wordt het beste verzekerd wanneer u aan de contralaterale zijde van de gekozen baarmoederader staat. </li></ol></li><li> Voor de radiale slagader aspireren van de intra-arteriële lijn. Gooi de eerste 5 ml weg en haal vervolgens 3 ml in de injectiespuit voor de bloedgasanalyses, gevolgd door 3 ml in twee spuiten (20 + 10 ml). </li><li> Voor de antekubitale ader, aspireren voorzichtig van de intraveneuze katheter. Gooi de eerste 5 ml weg en haal dan 30 ml in drie spuiten (10 ml) af. </li><li> Voer een laatste inspectie van de steekproefplaats op de baarmoederaf voordat u de buik begint te sluiten. </li></ol></li><li> Voetbloedmonsters <ol><li> Als het kind geboren is, haal het bloed onmiddellijk uit de navelstreng, zonder de navelstreng te klemmen of de placenta te leveren. Begin witH de spuit voor bloedgasanalyse en volg eventueel met drie 10 ml spuiten. </li><li> Wanneer de arteriële monsters zijn bevestigd, klem het koord vast en breng het kind naar de vroedvrouw voordat u het monster uit de navelvlies (bloedgas en 20 + 10 ml injectiespuiten) verzamelt. OPMERKING: Verkrijg alle navelmixmonsters binnen enkele seconden van de levering en met de placenta in situ, tenzij het spontaan is losgemaakt. </li><li> Volg de Noorse aanbevelingen over de late klemmen. In geval van een verdrietig kind, klem en snijd het snoer meteen en de hand het kind aan de vroedvrouw en de neonatoloog. </li></ol></li><li> Hantering van bloedmonsters <ol><li> Zet de bloedgasspuiten op ijs terwijl u de rest van de bloedmonsters voorbereidt en analyseer ze binnen 5 minuten in een bloedgasanalysator. </li><li> Breng de bloedmonsters onmiddellijk over naar vacutainers en plaats de plasma buizen 1 tot 2 minuten op een tuimelaar voordat u ze op ijs zet. Laat de serumbuizen op de arbeidAtorische bank om 30 minuten te vestigen. OPMERKING: Dit is een kritische stap in de procedure die extra aandacht vereist, omdat monsters uit alle vijf locaties tegelijkertijd moeten worden voorbereid om goede kwaliteit te waarborgen. </li><li> Centrifugeer de plasmamonsters zo snel mogelijk en binnen 30 minuten bij 6 ° C, 2.500 xg gedurende 20 minuten. </li><li> Na 30 minuten centrifugeer de serummonsters bij kamertemperatuur gedurende 10 minuten bij 2.500 x g. </li><li> Aliquot de supernatanten zorgvuldig aan 2 ml cryobuizen, waarbij 0,5 ml van de supernatant boven de pellet wordt gelaten om bloedplaatjesvrij plasma te waarborgen. </li><li> Bewaar de monsters bij -80 ° C. </li></ol></li></ol> 5. Inzameling van Placentale Weefsel <ol><li> Zet de placenta zo spoedig mogelijk na een aflevering op een ijskoelde dissectiebak. Foto en meet de langste diameter en de diameter op 90 graden. </li><li> Weeg de placenta. </li><li> Noteer het gewicht, de twee diameters, elke gRoss pathologie, aantal vaten in het koord en het tijdsinterval van de aflevering tot wanneer de placenta op ijs was geplaatst. OPMERKING: Stuur de placenta naar patologisch onderzoek als klinisch aangegeven. </li><li> Plaats de placenta met het moederoppervlak naar boven en identificeer 4 - 5 bemonsteringsplaatsen die willekeurig in elk kwadrant van de placenta zijn gelegen, waarbij gebieden van frank pathologie voorkomen worden. Verwijder de decidua met behulp van een schaar om 3 - 5 mm van het moederoppervlak af te snijden. Verzamel een 1 - 2 cm 3 stuk wild weefsel uit elke site. </li><li> Was het verzamelde weefsel zachtjes in 50 ml koude 1M PBS. Verdeel in verschillende stukken van elke steekproefplaats en aliquot. Opmerking: De grootte van de placenta-stukken zal afhangen van de geplande analyses. </li><li> Voeg aliquots van 0,1 - 0,5 cm 3 weefselmonsters toe aan 5 cryobuizen en snap in vloeibare stikstof. </li><li> Voeg kleine stukken van 0,1 - 0,2 cm 3 aan de buis toe met 25 ml RNA stabilisatieoplossing. Opslaan bij 46, C gedurende 24 uur, verwijder de RNA-stabilisatieoplossing en vervang deze. Bevriezen. </li><li> Voeg stukken 0,5 cm 3 aan de 5 cryobuizen toe met 0,5 ml OCT, vul de OCT op, meng en vries. </li><li> Bewaar de monsters bij -80 ° C tot analyse. OPMERKING: Burton et al. Biedt een uitstekend overzicht van de praktische aspecten van de steekproeven, afhankelijk van de geplande analyses. 20 Overweeg het resterende weefsel voor de isolatie van de microveuze en basale membranen te bereiden en om decidueel weefsel te verzamelen door middel van vacuümzuigtechniek. 21 , 22 </li></ol> 6. Neonatale kenmerken <ol><li> Noteer de neonatale eigenschappen, waaronder Apgar-score (1, 5 en 10 min), geslacht, gewicht, lengte, zwangerschapstijd en toegang tot pasgeboren intensieve zorg eenheid (lengte en uitkomst van verblijf). </li><li> Overweeg het meten van de neonatale lichaamsamenstelling door antropometrische metingen, luchtverplaatsingMentale plethysmograaf of dubbele röntgenabsorptiometrie. 23 , 24 </li></ol> 7. Berekeningen <ol><li> Veronderstel een soortgelijke bloed samenstelling in de radiale en uterine arterie en bereken het uteroplacente arteriovenous concentratieverschil. Uteroplacental arteriovenous concentratieverschil = C A - C V Variabel veneuze arteriële concentratieverschil = C v - C a Waar C concentreert met abonnementen: A, de radiale slagader; V, de baarmoeder ader; V de navelvlies en a, de navelstrengader. </li><li> Bereken de volume bloedstroom, ml / min (Q): <img alt="Vergelijking 1" src="/files/ftp_upload/55847/55847eq1.jpg" /> Waar D de diameter van het vat is (cm), is TAMX de gemiddelde snelheid van de gemiddelde snelheid en h is de coëfficiënt voor het ruimtelijke bloedsnelheidsprofiel. Gebruik 0,5 als de coëfficiënt voor de navelvlies en0,6 voor de baarmoederslagader 25 , 26 . </li><li> Bereken de opname van de placenta en los volgens Fick&#39;s principe: Uteroplacale opname = ( C A - C V ) x Qm Fetale opname = ( C v - C a ) x Qf Abonnementen: m, moeder en f, foetus. </li></ol>

<ol><li>Jansson, T., Powell, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+the+placenta+in+fetal+programming%3A+underlying+mechanisms+and+potential+interventional+approaches%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Sci+%28Lond%29%22%5BJournal%5D)">Role of the placenta in fetal programming: underlying mechanisms and potential interventional approaches.</a> Clin Sci (Lond). 113 (1), 1-13 (2007).</li>
<li>Hanson, M. A., Gluckman, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+developmental+conditioning+of+later+health+and+disease%3A+physiology+or+pathophysiology%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Rev%22%5BJournal%5D)">Early developmental conditioning of later health and disease: physiology or pathophysiology.</a> Physiol Rev. 94 (4), 1027-1076 (2014).</li>
<li>Guttmacher, A. E., Spong, C. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+human+placenta+project%3A+it%27s+time+for+real+time%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Obstet+Gynecol%22%5BJournal%5D)">The human placenta project: it's time for real time.</a> Am J Obstet Gynecol. 213, 4 Suppl 3-5 (2015).</li>
<li>Battaglia, F. C., Regnault, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Placental+transport+and+metabolism+of+amino+acids%5BTitle%5D)+AND+%22Placenta%22%5BJournal%5D)">Placental transport and metabolism of amino acids.</a> Placenta. 22 (2-3), 145-161 (2001).</li>
<li>Hay, W. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Placental-fetal+glucose+exchange+and+fetal+glucose+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Trans+Am+Clin+Climatol+Assoc%22%5BJournal%5D)">Placental-fetal glucose exchange and fetal glucose metabolism.</a> Trans Am Clin Climatol Assoc. 117, 321-339 (2006).</li>
<li>Woollett, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Review%3A+Transport+of+maternal+cholesterol+to+the+fetal+circulation%5BTitle%5D)+AND+%22Placenta%22%5BJournal%5D)">Review: Transport of maternal cholesterol to the fetal circulation.</a> Placenta. 32, Suppl 2 218-221 (2011).</li>
<li>Prenton, M. A., Young, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Umbilical+vein-artery+and+uterine+arterio-venous+plasma+amino+acid+differences+%28in+the+human+subject%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Obstet+Gynaecol+Br+Commonw%22%5BJournal%5D)">Umbilical vein-artery and uterine arterio-venous plasma amino acid differences (in the human subject).</a> J Obstet Gynaecol Br Commonw. 76 (5), 404-411 (1969).</li>
<li>Cetin, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasma+and+erythrocyte+amino+acids+in+mother+and+fetus%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Neonate%22%5BJournal%5D)">Plasma and erythrocyte amino acids in mother and fetus.</a> Biol Neonate. 60 (2), 83-91 (1991).</li>
<li>Filshie, G. M., Anstey, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+distribution+of+arachidonic+acid+in+plasma+and+tissues+of+patients+near+term+undergoing+elective+or+emergency+Caesarean+section%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Obstet+Gynaecol%22%5BJournal%5D)">The distribution of arachidonic acid in plasma and tissues of patients near term undergoing elective or emergency Caesarean section.</a> Br J Obstet Gynaecol. 85 (2), 119-123 (1978).</li>
<li>Haberey, P. P., Schaefer, A., Nisand, I., Dellenbach, P. The fate and importance of fetal lactate in the human placenta -a new hypothesis. J Perinat Med. 10 (2), 127-129 (1982).</li>
<li>Prendergast, C. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glucose+production+by+the+human+placenta+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Placenta%22%5BJournal%5D)">Glucose production by the human placenta in vivo.</a> Placenta. 20 (7), 591-598 (1999).</li>
<li>Metzger, B. E., Rodeck, C., Freinkel, N., Price, J., Young, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplacental+arteriovenous+gradients+for+glucose%2C+insulin%2C+glucagon+and+placental+lactogen+during+normoglycaemia+in+human+pregnancy+at+term%5BTitle%5D)+AND+%22Placenta%22%5BJournal%5D)">Transplacental arteriovenous gradients for glucose, insulin, glucagon and placental lactogen during normoglycaemia in human pregnancy at term.</a> Placenta. 6 (4), 347-354 (1985).</li>
<li>Zamudio, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypoglycemia+and+the+origin+of+hypoxia-induced+reduction+in+human+fetal+growth%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Hypoglycemia and the origin of hypoxia-induced reduction in human fetal growth.</a> PLoS One. 5 (1), 8551(2010).</li>
<li>Holme, A. M., Roland, M. C., Lorentzen, B., Michelsen, T. M., Henriksen, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Placental+glucose+transfer%3A+a+human+in+vivo+study%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Placental glucose transfer: a human in vivo study.</a> PLoS One. 10 (2), 0117084(2015).</li>
<li>Holme, A. M., Roland, M. C., Henriksen, T., Michelsen, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+uteroplacental+release+of+placental+growth+factor+and+soluble+Fms-like+tyrosine+kinase-1+in+normal+and+preeclamptic+pregnancies%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Obstet+Gynecol%22%5BJournal%5D)">In vivo uteroplacental release of placental growth factor and soluble Fms-like tyrosine kinase-1 in normal and preeclamptic pregnancies.</a> Am J Obstet Gynecol. 215 (6), 781-782 (2016).</li>
<li>Paasche Roland, M. C., Lorentzen, B., Godang, K., Henriksen, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Uteroplacental+arterio-venous+difference+in+soluble+VEGFR-1+%28sFlt-1%29%2C+but+not+in+soluble+endoglin+concentrations+in+preeclampsia%5BTitle%5D)+AND+%22Placenta%22%5BJournal%5D)">Uteroplacental arterio-venous difference in soluble VEGFR-1 (sFlt-1), but not in soluble endoglin concentrations in preeclampsia.</a> Placenta. 33 (3), 224-226 (2012).</li>
<li>Brar, H. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Uteroplacental+unit+as+a+source+of+elevated+circulating+prorenin+levels+in+normal+pregnancy%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Obstet+Gynecol%22%5BJournal%5D)">Uteroplacental unit as a source of elevated circulating prorenin levels in normal pregnancy.</a> Am J Obstet Gynecol. 155 (6), 1223-1226 (1986).</li>
<li>Myatt, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strategy+for+standardization+of+preeclampsia+research+study+design%5BTitle%5D)+AND+%22Hypertension%22%5BJournal%5D)">Strategy for standardization of preeclampsia research study design.</a> Hypertension. 63 (6), 1293-1301 (2014).</li>
<li>Kiserud, T., Rasmussen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+repeat+measurements+affect+the+mean+diameter+of+the+umbilical+vein+and+the+ductus+venosus%5BTitle%5D)+AND+%22Ultrasound+Obstet+Gynecol%22%5BJournal%5D)">How repeat measurements affect the mean diameter of the umbilical vein and the ductus venosus.</a> Ultrasound Obstet Gynecol. 11 (6), 419-425 (1998).</li>
<li>Burton, G. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimising+sample+collection+for+placental+research%5BTitle%5D)+AND+%22Placenta%22%5BJournal%5D)">Optimising sample collection for placental research.</a> Placenta. 35 (1), 9-22 (2014).</li>
<li>Illsley, N. P., Wang, Z. Q., Gray, A., Sellers, M. C., Jacobs, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+preparation+of+paired%2C+syncytial%2C+microvillous+and+basal+membranes+from+human+placenta%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta%22%5BJournal%5D)">Simultaneous preparation of paired, syncytial, microvillous and basal membranes from human placenta.</a> Biochim Biophys Acta. 1029 (2), 218-226 (1990).</li>
<li>Staff, A. C., Ranheim, T., Khoury, J., Henriksen, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+contents+of+phospholipids%2C+cholesterol%2C+and+lipid+peroxides+in+decidua+basalis+in+women+with+preeclampsia%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Obstet+Gynecol%22%5BJournal%5D)">Increased contents of phospholipids, cholesterol, and lipid peroxides in decidua basalis in women with preeclampsia.</a> Am J Obstet Gynecol. 180 (3), Pt 1 587-592 (1999).</li>
<li>Catalano, P. M., Thomas, A. J., Avallone, D. A., Amini, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anthropometric+estimation+of+neonatal+body+composition%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Obstet+Gynecol%22%5BJournal%5D)">Anthropometric estimation of neonatal body composition.</a> Am J Obstet Gynecol. 173 (4), 1176-1181 (1995).</li>
<li>Ellis, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Body-composition+assessment+in+infancy%3A+air-displacement+plethysmography+compared+with+a+reference+4-compartment+model%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Clin+Nutr%22%5BJournal%5D)">Body-composition assessment in infancy: air-displacement plethysmography compared with a reference 4-compartment model.</a> Am J Clin Nutr. 85 (1), 90-95 (2007).</li>
<li>Haugen, G., Kiserud, T., Godfrey, K., Crozier, S., Hanson, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Portal+and+umbilical+venous+blood+supply+to+the+liver+in+the+human+fetus+near+term%5BTitle%5D)+AND+%22Ultrasound+Obstet+Gynecol%22%5BJournal%5D)">Portal and umbilical venous blood supply to the liver in the human fetus near term.</a> Ultrasound Obstet Gynecol. 24 (6), 599-605 (2004).</li>
<li>Acharya, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+validation+of+uterine+artery+volume+blood+flow+measurement+by+Doppler+ultrasonography+in+pregnant+sheep%5BTitle%5D)+AND+%22Ultrasound+Obstet+Gynecol%22%5BJournal%5D)">Experimental validation of uterine artery volume blood flow measurement by Doppler ultrasonography in pregnant sheep.</a> Ultrasound Obstet Gynecol. 29 (4), 401-406 (2007).</li>
<li>Wu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glutamate-glutamine+cycle+and+exchange+in+the+placenta-fetus+unit+during+late+pregnancy%5BTitle%5D)+AND+%22Amino+Acids%22%5BJournal%5D)">Glutamate-glutamine cycle and exchange in the placenta-fetus unit during late pregnancy.</a> Amino Acids. 47 (1), 45-53 (2015).</li>
<li>Tuckey, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progesterone+synthesis+by+the+human+placenta%5BTitle%5D)+AND+%22Placenta%22%5BJournal%5D)">Progesterone synthesis by the human placenta.</a> Placenta. 26 (4), 273-281 (2005).</li>
<li>Simmons, M. A., Meschia, G., Makowski, E. L., Battaglia, F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fetal+metabolic+response+to+maternal+starvation%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Res%22%5BJournal%5D)">Fetal metabolic response to maternal starvation.</a> Pediatr Res. 8 (10), 830-836 (1974).</li>
<li>Simmons, M. A., Jones, M. D., Battaglia, F. C., Meschia, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insulin+effect+on+fetal+glucose+utilization%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Res%22%5BJournal%5D)">Insulin effect on fetal glucose utilization.</a> Pediatr Res. 12 (2), 90-92 (1978).</li>
<li>Bujold, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+supporting+that+the+excess+of+the+sVEGFR-1+concentration+in+maternal+plasma+in+preeclampsia+has+a+uterine+origin%5BTitle%5D)+AND+%22J+Matern+Fetal+Neonatal+Med%22%5BJournal%5D)">Evidence supporting that the excess of the sVEGFR-1 concentration in maternal plasma in preeclampsia has a uterine origin.</a> J Matern Fetal Neonatal Med. 18 (1), 9-16 (2005).</li>
<li>Jansson, T., Aye, I. L., Goberdhan, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+emerging+role+of+mTORC1+signaling+in+placental+nutrient-sensing%5BTitle%5D)+AND+%22Placenta%22%5BJournal%5D)">The emerging role of mTORC1 signaling in placental nutrient-sensing.</a> Placenta. 33, Suppl 2 23-29 (2012).</li>
<li>Cetin, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Placental+transport+of+amino+acids+in+normal+and+growth-restricted+pregnancies%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Obstet+Gynecol+Reprod+Biol%22%5BJournal%5D)">Placental transport of amino acids in normal and growth-restricted pregnancies.</a> Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol. 110, Suppl 1 50-54 (2003).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

<html> De bemonstering methode van placenta 4-vaten is relevant voor drie hoofddoeleinden. Ten eerste kan het worden gebruikt om te bestuderen hoe specifieke stoffen door de placenta aan de moederzijde worden opgevangen en eventueel overgebracht worden naar de navelstroming en de foetus, zoals aangetoond door onze glucose- en aminozuurstudies. Ten tweede is de methode zeer relevant voor het bestuderen van stoffen die door de placenta zijn geproduceerd en worden vrijgegeven aan de moeder- of foetale circulaties, zoals bli...

Volgens de National Institutes of Health, USA, is de placenta het minst begrepen orgaan in het menselijk lichaam 1 , 2 , 3 . Het is moeilijk om de menselijke placenta in vivo te openen en te bestuderen zonder onethische risico&#39;s op de lopende zwangerschap op te leggen. Studies van placenta functie in de mens zijn daarom grotendeels gebaseerd op in vitro en ex vivo modellen. De meeste van de vorige in vivo studies van placenta transport en metabolisme zijn uitgevoerd in dieren 4 , 5 , 6 . Aangezien de structuur en de functies van de placenta echter sterk verschillen tussen soorten, moet extrapolatie van de resultaten van dieren naar mensen met voorzichtigheid worden gedaan. Slechts een paar kleinere menselijke in vivo onderzoeken hebben de placentale en foetale opname onderzocht en vervoerd onder normale fysiologischeAlle omstandigheden, en niemand heeft de geïntegreerde overdracht van verscheidene verbindingen 7 , 8 , 9 , 10 , 11 , 12 , 13 onderzocht. Deze fundamentele studies illustreren dat in vivo studies van de menselijke placenta haalbaar zijn en dat ze verschillende doeleinden kunnen dienen. In de eerste plaats kunnen huidige concepten van placenta-functies die hoofdzakelijk afkomstig zijn van in vitro , ex vivo en dierstudies in een menselijke omgeving worden getest en aldus nieuw en meer specifiek inzicht verschaffen aan de menselijke placenta. Ten tweede kunnen eigenschappen van de dysfunctionele placenta geassocieerd met afwijkende foetale groei, preeclampsie, moederdiabetes, metabolisch syndroom en andere materiële metabolische stoornissen beter worden gekenmerkt. Ten derde bieden menselijke in vivo studies de mogelijkheid om diagnoses te ontwikkelenTic en predictieve instrumenten van de placenta functie. Op deze achtergrond streven we naar een uitgebreide verzameling fysiologische gegevens om de menselijke placenta functie in vivo te onderzoeken . Tijdens een geplande keizersnede exploiteren we de intraabdominale toegang tot de baarmoedervlies om bloedmonsters van de inkomende en uitgaande vaten op de moeder- en foetale zijkanten van de placenta te verzamelen (de bemonsteringsmethode met 4 vaten). Deze monsters worden gebruikt om de gepaarde arteriovenous concentratieverschillen van voedingsstoffen en andere stoffen 14 te berekenen. Daarnaast meten we de volumeblodstroom aan beide zijden van de placenta door middel van echografie. Bijgevolg kan placentale en foetale opname van elke verbinding worden gekwantificeerd. Verder is het mogelijk om stoffen die vrijkomen van de placenta aan de materiële en foetale circulaties 15 , 16 , 17 te bepalen . Wanneer combinerenD met klinische parameters van moeder en kind, en analyses van placenta en andere relevante weefsels, heeft deze methode het spannende potentieel om veel aspecten van placenta functies in vivo in dezelfde moederfostusparen te integreren.

<table><tbody><tr><td>Maternal body composition</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Impedantieschaal</td><td>Tanita</td><td></td><td>of vergelijkbaar</td></tr><tr><td>Ultrageluidmetingen&nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sequoia 512 echografietoestel</td><td>Acuson</td><td></td><td>uitgerust met een gebogen transducer met kleur en pulsewave Doppler (frequentiebandbreedte 2 - 6 MHz)</td></tr><tr><td>Bloeddempers</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Arerial canule</td><td>BD Medical</td><td>682245</td><td>of vergelijkbaar</td></tr><tr><td>20 cc Excentrische Luer Tip Spuit zonder naald</td><td>Termo</td><td>SS-20ES</td><td>of vergelijkbaar. 3 nodig.</td></tr><tr><td>10 cc Excentrische Luer Tip Spuit zonder naald</td><td>Termo</td><td>SS-10ES</td><td>of vergelijkbaar. 9 nodig.</td></tr><tr><td>5 cc 6% Luer Spuit zonder naald</td><td>Termo</td><td>SS-05S1</td><td>of vergelijkbaar. 2 nodig.</td></tr><tr><td>Arterial bloedgas spuit&nbsp;</td><td>Radiometer Medical</td><td></td><td>of vergelijkbaar. 4 nodig.</td></tr><tr><td>Steriele gevleugelde naald verbonden met flexibele slang, 21 gauge</td><td>Greiner Bio-One</td><td>450081</td><td>(bedoeld voor eenmalig gebruik). 3 nodig.</td></tr><tr><td>Vacutainer buis 6 mL EDTA&nbsp;</td><td>Greiner Bio-One</td><td>456043</td><td>of vergelijkbaar. Label met monsterlocatie. 10 nodig.</td></tr><tr><td>Vacutainer buis 5 mL LH Lithium Heparine Separator</td><td>Greiner Bio-One</td><td>456305</td><td>of vergelijkbaar. Label met monsterlocatie. 5 nodig.</td></tr><tr><td>Vacutainer buis 6 mL Serum Clot Activator&nbsp;</td><td>Greiner Bio-One</td><td>456089</td><td>of vergelijkbaar. Label met monsterlocatie. 5 nodig.</td></tr><tr><td>Vacutainer buis 3 mL&nbsp; 9NC Coagulatie natriumcitraat 3,2%</td><td>Greiner Bio-One</td><td>454334</td><td>of vergelijkbaar. Label met monsterlocatie. 5 nodig.</td></tr><tr><td>Cryogene flesjes, 2,0 mL</td><td>Corning</td><td>430488</td><td>of vergelijkbaar. Label met monsterlocatie, serum/type plasma en ID. 90 nodig.</td></tr><tr><td>Gemarkeerde trays om de spuiten te vervoeren</td><td></td><td></td><td>om de bloedmonsters in de operatiekamer te vervoeren</td></tr><tr><td>Rocker</td><td></td><td></td><td>voor zachtjes mengen van de monsters</td></tr><tr><td>IJs</td><td></td><td></td><td>in een styrofoam doos</td></tr><tr><td>Vloeibare stikstof</td><td></td><td></td><td>in een geschikte container</td></tr><tr><td>Placenta monsters</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Metalen lade</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>IJs</td><td></td><td></td><td>in een styrofoam doos</td></tr><tr><td>Gekalibreerd weegschaal</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Metalen liniaal</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>1 M Fosfaat gebufferde zoutoplossing</td><td>Sigma</td><td>D1408</td><td>of vergelijkbaar. Verdun 10 M tot&nbsp; 1 M voor gebruik</td></tr><tr><td>RNA stabilisatie oplossing</td><td>Sigma</td><td>R0901-500ML&nbsp;</td><td>of vergelijkbaar</td></tr><tr><td>Optimale Snij Temperatuur (O.C.T.) compound</td><td>vwr</td><td>361603E</td><td>of vergelijkbaar</td></tr><tr><td>Cryogene flesjes, 2,0 mL</td><td>Corning</td><td>430488</td><td>of vergelijkbaar. Label met monsterlocatie. inhoud en ID. 10 nodig.</td></tr><tr><td>Centrifugebuizen, conische bodem 50 mL</td><td>Greiner Bio-One</td><td>227.285</td><td>of vergelijkbaar. Label met "RNA later", monsterlocatie en ID. 2 nodig.</td></tr><tr><td>Vloeibare stikstof</td><td></td><td></td><td>in een geschikte container</td></tr><tr><td>Fetal body composition</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Gekalibreerd weegschaal</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Meetlint</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

de 4-vaartuig steekproef aanpak bij integratieve studies van menselijke placentale fysiologie<em&gt; in vivo</em

The 4-vessel Sampling Approach to Integrative Studies of Human Placental Physiology In Vivo

De menselijke placenta is zeer ontoegankelijk voor onderzoek, terwijl het nog steeds in de utero staat . Het huidige begrip van de humane placenta fysiologie in vivo is derhalve grotendeels gebaseerd op dierstudies, ondanks de grote diversiteit tussen de soorten in de anatomie van de placenta, de hemodynamica en de duur van de zwangerschap. De overgrote meerderheid van menselijke placenta studies zijn ex vivo perfusie studies of in vitro trofoblast studies. Hoewel in vitro studies en diermodellen essentieel zijn, is extrapolatie van de resultaten van dergelijke studies naar de menselijke placenta in vivo onzeker. We streven ernaar om menselijke placenta fysiologie in vivo op termijn te bestuderen en een gedetailleerd protocol van de methode te presenteren. Het gebruik van de intraabdominale toegang tot de baarmoeder ader net voor de baarmoeder incisie tijdens de geplande keizersnede verzamelen we bloedmonsters van de inkomende en uitgaande vaten op de moeder- en foetale zijkanten van de placenta. Bij het combineren van conCentratiemetingen uit bloedmonsters met volumeblodstroommetingen, kunnen we de plaatselijke en foetale opname kwantificeren en vrijkomen van een verbinding. Bovendien kunnen plasentale weefselmonsters uit dezelfde moeder-fetusparen metingen inleveren van transportdichtheid en -activiteit en andere aspecten van placentale functies in vivo . Door dit integratieve gebruik van de 4-vaten bemonsteringsmethode kunnen we in vivo een aantal van de huidige concepten van overdracht en metabolisme van de placenta-nutriënten testen, zowel bij normale als pathologische zwangerschappen. Bovendien maakt deze methode de identificatie van door de placenta uitgescheiden stoffen aan de moedercirculatie mogelijk, wat een belangrijke bijdrage kan leveren aan het zoeken naar biomarkers van placenta dysfunctie.

De bemonsteringsmethode met 4 vaten is van toepassing in de klinische praktijk en we hebben succesvolle bloedmonsters verkregen uit 209 moeder- / zuigelingenparen. In 128 van deze hebben we ook bereikt om de volume bloedstroom te meten. Volledige sampling van 4 vaten en goede kwaliteitsmetingen van zowel moeder- als foetale vaten werden verkregen in 70 moeder-fetusparen ( Figuur 3 ). Daarnaast hebben we tot nu toe bloed- en placenta-monsters verzameld van 30...

Wij presenteren een gedetailleerde methode om de menselijke placenta fysiologie in vivo op termijn te bestuderen. De methode combineert bloedmonsterneming van de inkomende en uitgaande vaten op de moeder- en foetale zijkanten van de placenta met ultrasone metingen van volume bloedstroom en placenta weefselmonstering.

De 4-vaartuig Steekproef Aanpak bij Integratieve Studies van Menselijke Placentale Fysiologie<em&gt; In Vivo</em

The human placenta is highly inaccessible for research while still in utero. The current understanding of human placental physiology in vivo is therefore ...

Het algemene doel van deze procedure is om de menselijke placentafunctie in vivo te bestuderen met behulp van verschillende methoden, die samen zorgen voor de verzameling van uitgebreide en integratieve gegevens over de fysiologie van de menselijke foetale placenta. Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van kernvragen over de menselijke placentafysiologie, zoals de rol van de placenta in de interactie tussen moeder en foetus. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat het mogelijk maakt om huidige concepten van placentale overdracht, opname en secretie bij mensen in vivo te testen.De extrapolatie van experimentele studies naar mensen wordt belemmerd door de grote verschillen tussen dieren en mensen in de anatomie van de placenta, de duur van de zwangerschap en zwangerschapscomplicaties. Hoewel deze methode inzicht kan geven in het placentametabolisme en de overdracht van voedingsstoffen, kan ze ook worden toegepast om de afgifte van verbindingen door de placenta te bestuderen bij zowel gezonde als gecompliceerde zwangerschappen, zoals pre-eclampsie. Deze methode vereist een nauwkeurig gecoördineerde samenwerking tussen verschillende medisch specialisten, verpleegkundigen en onderzoekers.De sleutel tot succes is een strikte planning, waarbij de moeder en haar baby constant centraal staan. Deze grafiek illustreert de tijdlijn en het personeel dat nodig is om de monsters te verkrijgen. Elke persoon die helpt bij de monstername wordt weergegeven door een andere kleur.Dit protocol bestaat uit de gecombineerde toepassing van drie methoden om de menselijke placentafysiologie te bestuderen. Ten eerste wordt de volumestroom in de arteria uterina en de vena umbilicalis bepaald via echografie. Ten tweede worden tijdens een keizersnede bloedmonsters verzameld uit de instromende en uitstromende vaten aan de maternale en foetale zijde van de menselijke placenta.Vervolgens worden monsters van het placentaweefsel verzameld voor analyse. Begin hiermee door de vrouw in een semi-rugliggende positie te helpen, licht zijwaarts gekanteld tegenover het gebied van belang, om compressie van de aorta en de vena cava te voorkomen. Visualiseer tijdens een periode van foetale rust de navelvene in een sagittale of schuine doorsnede van de foetale buik en meet de interne vatdiameter in een recht gedeelte van de intra-abdominale navelvene vóór eventuele zichtbare vertakkingen.Gebruik de reguliere B-modus en visualiseer het vat in een loodrechte insonatiehoek voor diametermetingen en bewaar meerdere optimale frames voor latere metingen om het effect van pulserende diameterveranderingen te minimaliseren. Herhaal de metingen vijf tot 10 keer. Pas op dezelfde locatie de probe aan en gebruik Doppler-echografie om een zo laag mogelijke insonatiehoek te verkrijgen om de tijdgemiddelde maximale snelheid of TAMX te meten.Bepaal de snelheid over een periode van drie tot vijf seconden. Gebruik vervolgens Doppler-echografie om de arteria uterina te visualiseren op het punt waar deze de arteria iliaca externa kruist, direct nadat deze aftakt van de arteria iliaca interna. Pas de probe op deze locatie aan om een lage insonatiehoek te verkrijgen en meet de TAMX.Bepaal de snelheid als de gemiddelde snelheid over drie hartcycli. Volg het vat distaal om een correcte hoek te verkrijgen voor diameter-metingen, zo dicht mogelijk bij de locaties van de TAMX-metingen. Het is uitdagend om de volumetrische bloedstroom in de uterusarteria te meten, omdat het onwaarschijnlijk is dat een loodrechte hoek wordt bereikt op dezelfde locatie waar de TAMX wordt gemeten.Vaten die vertakken tussen de twee meetpunten kunnen leiden tot uitsluiting van de diametermetingen. Bereid de oplossingen, buizen en apparatuur voor om vóór aanvang van de operatie bloedafname uit vier vaten uit te voeren. Geef vervolgens een briefing en overhandig de apparatuur aan al het personeel dat zal assisteren bij de afname.Plaats, naast de standaard perifere intraveneuze toegang, een arterielijn in de arteria radialis. De vena cubitalis is bij voorkeur omdat het gemakkelijker is om vanuit deze locatie monsters te nemen. Open vervolgens de buikholte en gebruik een retractor om de buikwand op te tillen en de hoofdtakken van de venae uterinae aan de anterolaterale zijden van de uterus bloot te leggen.Identificeer indien mogelijk een tak van de vena uterina aan dezelfde zijde als de placenta, of de meest prominente veneuze plexus van de placenta indien deze zich in de middellijn van de uterus bevindt. Wanneer een geschikte vena uterina is geïdentificeerd, instrueert u het assistent personeel om bloedmonsters af te nemen uit de arteria radialis en de vena antecubitalis. Plaats gelijktijdig, onder een hoek van 30 graden, een butterfly-naald op een bloedgasspuit in de vena uterina en neem bloed af via voorzichtige aspiratie.Terwijl de IV-positie van de vlinder naald zorgvuldig wordt vastgehouden, laat u een assistent de gevulde bloedgasspuit vervangen door een spuit van 20 milliliter. Volg dit onmiddellijk op met een spuit van 10 milliliter. Gooi bij afname uit de arteria radialis of de vena antecubitalis de eerste vijf milliliter weg en aspireer vervolgens drie milliliter in een heparinespuit voor bloedgasanalyses.Aspirer vervolgens 30 milliliter uit elke locatie. Wanneer het kind is geboren, begint men met een spuit voor bloedgasanalyse en wordt er onmiddellijk bloed geaspireerd uit de navelarterie zonder de navelstreng af te klemmen of de placenta te laten uitdrijven. Volg dit indien mogelijk met drie spuiten van 10 milliliter.Zodra de arteriële monsters zijn veiliggesteld, dient de navelstreng te worden afgeklemd en doorgesneden voordat er monsters uit de vena umbilicalis worden genomen, waarbij alle navelstrengmonsters worden verkregen terwijl de placenta in situ is. De methode met vier vaten vereist gecoördineerde bloedafname in combinatie met een snelle verwerking van monsters van vijf verschillende locaties tegelijkertijd. Let goed op de arteria umbilicalis, aangezien deze gevoelig is voor contractie, hemolyse en coagulatie.Voer een laatste inspectie uit van de bemonsteringsplaats op de vena uterina voordat u begint met het sluiten van de buikholte. Plaats alle bloedgasspuiten op ijs en analyseer de monsters binnen vijf minuten met een bloedgasanalyser. Overbreng de bloedmonsters onmiddellijk naar vacutainers en schud de plasmapuizjes gedurende één tot twee minuten voordat u ze op ijs plaatst.Centrifugeer de plasmaproeven zo snel mogelijk en binnen 30 minuten bij 2.500 ×g en zes graden Celsius gedurende 20 minuten. Verdeel vervolgens de supernatanten zorgvuldig in aliquoten over cryotubes van twee milliliter. Analyseer de bloedmonsters op de gewenste stoffen en voer de berekeningen van de placentaire overdracht uit volgens het tekstprotocol.Leg de placenta zo snel mogelijk na de bevalling plat op een met ijs gekoelde dissectieschaal. Noteer het gewicht van het weefsel, evenals de langste diameter en de diameter loodrecht op de eerste meting. Noteer vervolgens eventuele macroscopische pathologie en het aantal vaten in de navelstreng.Plaats de placenta met het maternale oppervlak naar boven en identificeer vier tot vijf bemonsteringsplaatsen die willekeurig over elk kwadrant van de placenta zijn verspreid. Gebruik een schaar om de decidua te verwijderen door drie tot vijf millimeter van het maternale oppervlak weg te snijden. Neem vervolgens van elke plaats een stukje villeus weefsel van één tot twee kubieke centimeter.Was het verzamelde weefsel voorzichtig met 50 milliliter koude, één molar PBS. Verdeel het weefsel vervolgens in meerdere stukjes van elke bemonsteringsplaats en verdeel deze in aliquoten. Voeg aliquoten van 0,1 tot 0,5 centimeter kubieke weefselmonsters toe aan vijf cryotubes en vries de monsters snel in met vloeibare stikstof.Voeg kleine stukjes, met een grootte van 0,1 tot 0,2 centimeter kubiek, toe aan eerder voorbereide buisjes die 25 milliliter RNA-stabilisatieoplossing bevatten. Voeg voor histologische studies stukjes van 0,5 centimeter kubiek toe aan vijf cryobuisjes met 0,5 milliliter OCT, vul aan met OCT en meng vervolgens de inhoud van de buisjes. Vries de monsters in bij negatief 80 graden Celsius tot aan verdere analyse.Bloedmonsters van 209 moeder-zuigelingparen zijn succesvol verkregen met de vier-vaten bemonsteringsmethode. In 128 van de monsters is de volumetrische bloedstroom gemeten. Volledige vier-vaten bemonstering en kwalitatief goede flowmetingen van zowel de maternale als de foetale vaten werden verkregen bij 70 moeder-foetusparen.De vier-vatenbenadering is gebruikt om placentale overdracht te bestuderen, zoals hier geïllustreerd aan de hand van glucose. Er werden significante arterioveneuze glucoseverschillen gevonden aan beide zijden van de placenta, wat wijst op een in vivo utero-placentaire opname van 0,29 millimol per liter en een foetale opname van 0,54 millimol per liter. Er werd een mediane umbilicale veneuze flow van 196,2 milliliter per minuut gemeten.Met behulp van het principe van Fick werd een mediane foetale glucose-opname uit de navelsnoercirculatie van 0,10 millimol per minuut berekend. Met de vier-vatenmethode werd de placentaire opname van glutaminezuur bestudeerd, wat van belang is als brandstof in metabole routes en voor de foetaal-placentaire interconversie van aminozuren. De placentaire opname van glutaminezuur uit zowel de navelsnoer- als de maternale circulatie werd waargenomen.De in vivo afgifte van progesteron door de placenta bij term werd eveneens gemeten en er werd een significante afgifte van progesteron in de maternale circulatie vastgesteld, wat aantoont hoe de placentaire four-vessel sampling-methode kan worden gebruikt om stoffen te detecteren die door de placenta worden afgegeven. Bij het uitvoeren van deze procedure is het belangrijk te benadrukken dat metingen van het bloedvolume door een specialist in de foetale geneeskunde moeten worden uitgevoerd met ervaring in dit type sonografie om nauwkeurige metingen te verkrijgen. Na deze procedure kunnen de bloedmonsters worden geanalyseerd om de placentaire overdracht en opname of afgifte van de betreffende stof te bestuderen, of het nu gaat om nutriënten, metabolieten, signaleringsmoleculen, exosomen, afvalstoffen, geneesmiddelen of toxines.Verder kan analyse van de placenta-monsters aanvullende vragen beantwoorden over transportregulatie en placentametabolisme. In zijn geheel demonstreert dit protocol hoe gecoördineerde verzamelingen van volumestroommetingen van het bloed, bloed- en weefselmonsters kunnen worden gerealiseerd om een integraal in vivo model te verkrijgen voor het bestuderen van de menselijke placentafysiologie. Na het bekijken van deze video zou een gynaecoloog een goed begrip moeten hebben van hoe arterioveneuze bloedmonsters veilig kunnen worden afgenomen aan beide zijden van de menselijke placenta tijdens een keizersneding.

the-4-vessel-sampling-approach-to-integrative-studies-human-placental

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

We hebben de placenta als een belangrijk hematopoietische organen tijdens de ontwikkeling. Wij vonden dat hematopoietische stamcellen (HSC's) zijn beide gegenereerd en uitgebreid in de placenta in unieke microenvironmental niches. We beschrijven hier experimentele technieken die nodig zijn voor isolatie en visualisatie van HSC in de muis placenta.

Isolatie en analyse van hematopoietische stamcellen uit de placenta

Bepaling van de Transport Rate van xenobiotica en nanomaterialen via de placenta met de<em&gt; Ex vivo</em&gt; Human placentaperfusie Model

Een eenvoudige methode om primaire humane placenta (villi) en decidua orgaankweken vast is beschreven. Villous en deciduale orgel culturen zijn van onschatbare waarde tools voor het bestuderen van de pathogenese bij de mens maternale-foetale interface. Infectie met de facultatief intracellulaire bacterie Listeria monocytogenes wordt aangetoond.

Menselijke placenta en deciduale Organ culturen om infecties bij de moeder op foetus Interface Studie

Deze studie geeft een protocol voor het omkeerbare weefsel clearing, immunokleuring, 3D-rendering en analyse van vasculaire netwerken in menselijke placenta villi monsters over de volgorde van 1-2 mm,3.

Driedimensionale weergave en analyse van Immunolabeled, verduidelijkt menselijke placenta Villous vasculaire netwerken

Beschrijven we een systeem dat gebruik maakt van drie methoden voor evaluatie van de veiligheid en effectiviteit van placenta-gerichte drug delivery: in vivo imaging als u wilt controleren nanoparticle accumulatie, hoge-frequentie echografie placenta en foetale ontwikkeling te volgen , en HPLC te kwantificeren drug levering aan weefsel.

Uitgebreide evaluatie van de effectiviteit en veiligheid van Placenta-gerichte Drug Delivery met behulp van drie aanvullende methoden

Hier wordt een protocol van ex vivo moeder-foetale vasculaire doorbloeding aangeboden om de toediening van een test artikel in de moeder vasculatuur mogelijk te maken en om de placentale overdracht van xenobiotische deeltjes of farmacologische agentia te evalueren in aanvulling op wijzigingen in placentale fysiologie.

Ex vivo doorbloeding van de knaagdieren placenta

Hier is een protocol voor het kweken van placenta-explantaten onder constante stroomomstandigheden. Deze aanpak verbetert traditionele statische villeuze kweeksystemen door de replicatie van dynamische fysiologische omgevingen mogelijk te maken.

Ex Vivo Placenta Explant Flow Culture - De dynamische omstandigheden in de baarmoeder nabootsen

Dit protocol beschrijft de voorbereiding van menselijke placentaweefselexplants die worden gekweekt aan een lucht-vloeistofinterface voor de studie van virale infecties.

Ex vivo Kweek van menselijke placenta-explants voor de studie van virale overdracht over de maternale-foetale interface

Tal van studies met behulp van maag-bypass rat modellen zijn onlangs uitgevoerd om de onderliggende fysiologische mechanismen van Roux-en-Y gastric bypass-operaties te ontdekken. Dit artikel beoogt aan te tonen en de technische en experimentele details van onze gepubliceerde gastric bypass rat model te bespreken voordelen en beperkingen van deze experimentele programma te begrijpen.

Roux-en-Y Gastric Bypass operatie bij ratten

Humane tumor xenotransplantaten zijn gevasculariseerd en geïnfiltreerd door cellen van muizen oorsprong tijdens de groeifase in vivo. Om de voorspanning door deze contaminerende cellen tijdens downstream analyse te omzeilen, hebben wij een methode waardoor uitgebreide depletie van muizencellen door magnetische celsortering.

Uitputting van de Muis Cellen van geënte, humane tumoren verbetert Downstream Analyse van Target Cellen

Leer de 4-vaartuig bloedafnamemethode voor integratief onderzoek naar humane placentafysiologie in vivo. Deze techniek combineert bloedmonsters, echografie en weefselanalyse.

De 4-vaartuig Steekproef Aanpak bij Integratieve Studies van Menselijke Placentale Fysiologie

Meer video's verkennen