Name: Een Morfometrische en cellulaire analysemethode voor de lymfkliertest mandibulaire Condyle (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-01-11T12:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 7 s
Description: Leer morfometrische en cellulaire analyse van de mandibulaire condyle bij muizen. Deze methode combineert radiografie en histologie om structurele veranderingen door compressieve belasting te evalueren.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

De auteurs bedank Dr. David Rowe voor het vriendelijk verstrekken de transgene muizen en Li Chen voor de histologische bijstand.
Het onderzoek in deze publicatie gerapporteerd werd gesteund door het nationale Instituut van Dental & craniofaciale onderzoek van de National Institutes of Health onder Award nummer K08DE025914 en door de Amerikaanse vereniging van orthodontische Stichting Sumit Yadav.

<ol><li>LeResche, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology+of+Temporomandibular+Disorders%3A+Implications+for+the+Investigation+of+Etiologic+Factors%5BTitle%5D)+AND+%22Crit+Rev+Oral+Biol+Med%22%5BJournal%5D)">Epidemiology of Temporomandibular Disorders: Implications for the Investigation of Etiologic Factors.</a> Crit Rev Oral Biol Med. 8 (3), 291-305 (1997).</li>
<li>Chen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+functional+loading+causes+differential+effects+in+the+subchondral+bone+and+condylar+cartilage+in+the+temporomandibular+joint+from+young+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Osteoarthr+Cartil%22%5BJournal%5D)">Altered functional loading causes differential effects in the subchondral bone and condylar cartilage in the temporomandibular joint from young mice.</a> Osteoarthr Cartil. 17 (3), 354-361 (2009).</li>
<li>Pirttiniemi, P., Kantomaa, T., Sorsa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+decreased+loading+on+the+metabolic+activity+of+the+mandibular+condylar+cartilage+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Orthod%22%5BJournal%5D)">Effect of decreased loading on the metabolic activity of the mandibular condylar cartilage in the rat.</a> Eur J Orthod. 26 (1), 1-5 (2004).</li>
<li>Chavan, S. J., Bhad, W. A., Doshi, U. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+temporomandibular+joint+changes+in+Twin+Block+and+Bionator+appliance+therapy%3A+a+magnetic+resonance+imaging+study%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Orthod%22%5BJournal%5D)">Comparison of temporomandibular joint changes in Twin Block and Bionator appliance therapy: a magnetic resonance imaging study.</a> Prog Orthod. 15 (57), (2014).</li>
<li>Dutra, E. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+and+Matrix+Response+of+the+Mandibular+Condylar+Cartilage+to+Botulinum+Toxin%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Cellular and Matrix Response of the Mandibular Condylar Cartilage to Botulinum Toxin.</a> PLoS ONE. 11 (10), 0164599(2016).</li>
<li>Benjamin, M., Ralphs, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biology+of+fibrocartilage+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Int+Rev+Cytol%22%5BJournal%5D)">Biology of fibrocartilage cells.</a> Int Rev Cytol. 233, 1-45 (2004).</li>
<li>Shen, G., Darendeliler, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Adaptive+Remodeling+of+Condylar+Cartilage-+A+Transition+from+Chondrogenesis+to+Osteogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Dent+Res%22%5BJournal%5D)">The Adaptive Remodeling of Condylar Cartilage- A Transition from Chondrogenesis to Osteogenesis.</a> J Dent Res. 84 (8), 691-699 (2005).</li>
<li>Utreja, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+and+matrix+response+of+temporomandibular+cartilage+to+mechanical+loading%5BTitle%5D)+AND+%22Osteoarthr+Cartil%22%5BJournal%5D)">Cell and matrix response of temporomandibular cartilage to mechanical loading.</a> Osteoarthr Cartil. 24 (2), 335-344 (2016).</li>
<li>Kaul, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Effect+of+Altered+Loading+on+Mandibular+Condylar+Cartilage%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">The Effect of Altered Loading on Mandibular Condylar Cartilage.</a> PLoS ONE. 11 (7), 0160121(2016).</li>
<li>Dyment, N. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-Throughput%2C+Multi-Image+Cryohistology+of+Mineralized+Tissues%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">High-Throughput, Multi-Image Cryohistology of Mineralized Tissues.</a> J Vis Exp. , e54468(2016).</li>
<li>Kawamoto, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+a+new+adhesive+film+for+the+preparation+of+multi-purpose+fresh-frozen+sections+from+hard+tissues%2C+whole-animals%2C+insects+and+plants%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Histol+Cytol%22%5BJournal%5D)">Use of a new adhesive film for the preparation of multi-purpose fresh-frozen sections from hard tissues, whole-animals, insects and plants.</a> Arch Histol Cytol. 66 (2), 123-143 (2003).</li>
<li>Hayman, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tartrate-resistant+acid+phosphatase+%28TRAP%29+and+the+osteoclast%2Fimmune+cell+dichotomy%5BTitle%5D)+AND+%22Autoimmunity%22%5BJournal%5D)">Tartrate-resistant acid phosphatase (TRAP) and the osteoclast/immune cell dichotomy.</a> Autoimmunity. 41 (3), 218-223 (2008).</li>
</ol>

De auteurs hebben geen concurrerende financiële belangen.

Dit manuscript beschreven methoden voor de meting van Morfometrische en cellulaire analyse van lymfkliertest mandibulaire condyles en kaken. De radiografische Morfometrische metingen kunnen ook worden gebruikt voor het analyseren van andere beenderen van kleine proefdieren. Bovendien, de cellulaire analyse (cel kwantificering en kraakbeen afstand mapping) zijn niet beperkt tot de knaagdieren mandibulaire condyle, maar kan worden gebruikt voor het kwantificeren van de histologische secties van talrijke weefsels.
<p cl...

Het TMJ is een unieke dragende gezamenlijke gelegen craniofaciale regio en van fibrokraakbeen wordt gevormd. De MCC van de TMJ is essentieel voor gemeenschappelijke functie, met inbegrip van de onbelemmerde kaak verkeer tijdens het spreken en masticating, maar het wordt meestal beïnvloed door degeneratieve ziekten, met inbegrip van artrose1. Het TMJ heeft de capaciteit aan te passen aan externe stimuli en laden, wijzigingen leiden tot structurele en cellulaire veranderingen aan de componenten van de MCC2,3,4,5. De dragende eigenschappen van de MCC kunnen worden verklaard door de interactie tussen de onderdelen daarvan, met inbegrip van water, het collageen-netwerk, en de dichtbevolkte verpakt proteoglycans. De MCC heeft vier verschillende cellulaire zones die uitdrukking geven aan verschillende soorten collageen en niet-collageen eiwitten: 1) de oppervlakkige of articulaire zone; 2) de proliferatieve zone, samengesteld uit ongedifferentieerde mesenchymale cellen en die reageert op het laden van eisen; 3) de prehypertrophic zone, samengesteld uit volwassen chondrocyten uiting van collageen type 2; en 4) de hypertrofische zone, de regio waar de hypertrofische chondrocyten uiting van collageen type 10 sterven en het ondergaan van verkalking. De niet-gemineraliseerde regio is rijk aan proteoglycans waarmee de weerstand tegen druksterkte krachten6.
Er is continu mineralisatie in de hypertrofische zone van de MCC, waar de overgang van chondrogenesis naar osteogenesis optreedt, de robuuste minerale structuur van het subchondrale bot van de mandibulaire condyle7te garanderen. Cellulaire veranderingen in de unmineralized en gemineraliseerde gebieden uiteindelijk leiden tot morfologische en structurele veranderingen in de mandibulaire condyle en onderkaak. Onderhoud van de homeostase van alle cellulaire regio's van de MCC en de mineralisatie van de subchondrale gedeelte zijn essentieel voor de gezondheid, de draagkracht en de integriteit van de TMJ.
De meerdere collageen transgeen muismodel (zoals beschreven door Utreja et al.) 8 is een geweldig hulpmiddel gebruiken om wijzigingen in collageen expressie begrijpen omdat alle transgenen zijn uitgedrukt in de MCC. Voor een diepgaande histologische evaluatie, worden histologisch vlekken gebruikt om te studeren matrix depositie, mineralisatie, celproliferatie, en apoptose, evenals eiwit expressie in de cel van de verschillende lagen van de MCC.
In dit worden manuscript, histologisch en Morfometrische analyses gebruikt voor het evalueren van de cellulaire en structurele veranderingen in het MCC en subchondrale bot van de mandibulaire condyle van muizen. Daarnaast wordt een cel kwantificering, voor het analyseren van fluorescerende histologische beelden en voor het toewijzen van lichte Microscoop dia's, beschreven. De druksterkte statische TMJ laden methode, waardoor cellulaire en morfologische veranderingen op het MCC en subchondrale bot9, wordt ook geïllustreerd voor het valideren van onze methoden.
De hier beschreven methoden kunnen worden gebruikt om te bepalen Morfometrische en histologische veranderingen in de mandibulaire condyle en onderkaak van knaagdieren of andere regio's in endochondral ossificatie en de morfologie van extra gemineraliseerde weefsels te analyseren.

<table><tbody><tr><td>MX20 Radiografiesysteem</td><td>Faxitron X-Ray LLC&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Digimizer Beeldsoftware&nbsp;</td><td>MedCalc Software</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Shandon Cryomatrix inbeddingshars</td><td>Thermo Scientific</td><td>6769006</td><td></td></tr><tr><td>Handmatige microscoop Axio Imager Z1</td><td>Carl Zeiss</td><td>208562</td><td></td></tr><tr><td>geel fluorescerend eiwitfilter&nbsp; - EYFP</td><td>Chroma Technology Corp</td><td>49003</td><td></td></tr><tr><td>cyaan fluorescerend eiwitfilter - ECFP</td><td>Chroma Technology Corp</td><td>49001</td><td></td></tr><tr><td>rood fluorescerend eiwitfilter - Cy5</td><td>Chroma Technology Corp</td><td>49009</td><td></td></tr><tr><td>natriumacetaat watervrij</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S2889</td><td></td></tr><tr><td>natrium L-tartraat dibasisch dihydraat&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>228729</td><td></td></tr><tr><td>natriumnitriet&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>237213</td><td></td></tr><tr><td>ELF97 substraat</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>E6600</td><td></td></tr><tr><td>ClickiT EdU Alexa Fluor 594 HCS-kit</td><td>Life Technologies</td><td>C10339&nbsp;</td><td>bevat EdU (5-ethynyl-2'-deoxyuridine)&nbsp;</td></tr><tr><td>DAPI (4',6-Diamidino-2-fenylindole, dihydrochloride)</td><td>Thermo Scientific</td><td>D1306</td><td></td></tr><tr><td>Natriumfosfaat dibasisch&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S3264</td><td></td></tr><tr><td>Natriumfosfaat monobasisch&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>71505</td><td></td></tr><tr><td>Toluidine Blauw O&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T3260</td><td></td></tr><tr><td>Adobe Photoshop&nbsp;</td><td>Adobe Systems Incorporated</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fosfaat gebufferde zoutoplossing (PBS)</td><td>Research Products International</td><td>P32080-100T</td><td></td></tr><tr><td>CNA Beta III Nikkelvrije draad</td><td>Ortho Organizers, Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>GraphPad Prism&nbsp;</td><td>GraphPad Software, Inc.</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

een morfometrische en cellulaire analysemethode voor de lymfkliertest mandibulaire condyle

A Morphometric and Cellular Analysis Method for the Murine Mandibular Condyle

Het kaakgewricht (TMJ)-gewricht heeft de capaciteit aan te passen aan externe prikkels, en laden van wijzigingen kan invloed hebben op de positie van condyles, alsook de structurele en cellulaire componenten van de mandibulaire Condylaire kraakbeen (MCC). Dit manuscript wordt beschreven methoden voor het analyseren van deze veranderingen en een methode voor het wijzigen van het laden van de TMJ in muizen (dat wil zeggen, druksterkte statische TMJ laden). De structurele evaluatie geïllustreerd hier is een eenvoudige Morfometrische-aanpak die gebruikt de Digimizer-software en wordt uitgevoerd in de röntgenfoto's van kleine beenderen. Bovendien, de analyse van cellulaire verandert leiden tot wijzigingen in collageen expressie, bot remodelleren, celdeling en Proteoglycaan distributie in het MCC wordt beschreven. De kwantificering van deze wijzigingen in histologische afdelingen - door het tellen van de positieve fluorescerende pixels met behulp van software en het meten van de afstand toewijzing image & gekleurd gebied met Digimizer - wordt ook aangetoond. De methoden die hier worden weergegeven zijn niet beperkt tot de lymfkliertest TMJ, maar kon worden gebruikt op de extra botten van kleine proefdieren en in andere regio's van endochondral ossificatie.

Beschrijvende statistiek werden te onderzoeken van de verdeling van de Morfometrische metingen (mandibulaire lengte, Condylaire lengte, Condylaire breedte) en histologische analyses uitgevoerd. Resultaten werden vergeleken tussen de geladen groep (dat wil zeggen, muizen onderworpen aan druksterkte laden met de beta titanium lente) en de controlegroep (dat wil zeggen, bijpassende besturingselement muizen die niet elke procedure ontvangen). Statistisch significante verschi...

Dit manuscript presenteert methoden voor het analyseren van Morfometrische en cellulaire veranderingen binnen de mandibulaire condyle van knaagdieren.

Een Morfometrische en cellulaire analysemethode voor de lymfkliertest mandibulaire Condyle

The temporomandibular joint (TMJ) has the capacity to adapt to external stimuli, and loading changes can affect the position of condyles, as well as the ...

Het algemene doel van dit experiment is om de effecten van compressiebelasting in het mandibulaire condylaire kraakbeen van muizen te observeren met behulp van morfometrische metingen in röntgenfoto's en histologische analyse. Deze metrieken kunnen helpen bij het beantwoorden van kernvragen over de structurele en cellulaire veranderingen binnen de mandibulaire condyl van knaagdieren. Het belangrijkste voordeel van de hier getoonde techniek is dat deze kan worden gebruikt om andere kleine bot- of gewrichtsstructuren bij dieren te analyseren.Zorg voor geïsoleerde, gedissecteerde kaken van muizen die klaar zijn voor gebruik voor dit protocol. Plaats de kaken in een röntgenkabinet op een Petrischaal. Maak vervolgens röntgenfoto's bij 26 kilovolt gedurende vijf seconden.Open nu de afbeeldingen in de analyse-software om morfometrische metingen uit te voeren. Gebruik eerst de eenheidsknop om de schaalbalk in te stellen. Selecteer vervolgens zes anatomische punten met markerstijl 2.Selecteer eerst de meest posterieure punten van het mandibulaire condylus als punt één. Selecteer vervolgens het incisura-proces voor punt twee. Selecteer daarna het diepste punt van de incisura mandibulae voor

a-morphometric-cellular-analysis-method-for-murine-mandibular

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Cel organisatie van craniofaciale botten is al lang de hypothese, maar niet direct zichtbaar. Multispectrale cell labeling en in vivo levende   beeldvorming maakt visualisatie van de dynamische cel gedrag in de zebravis onderkaak. Hier hebben we detail het protocol te manipuleren Zebrabow transgene vis en direct waar te nemen cel intercalatie en morfologische veranderingen van chondrocyten in de Meckel's kraakbeen.

Visualisatie van Chondrocyte Intercalatie en Directional Proliferatie via Zebrabow Klonale Cell Analysis in het Embryonale Meckel&#39;s Kraakbeen

Vele biologische structuren ontbreken gemakkelijk definieerbare bezienswaardigheden, waardoor het moeilijk is om de moderne morfometrische methoden toe te passen. Hier tonen we methoden om de muis baculum (een bot in de penis), waaronder dissectie en microCT scannen, gevolgd door computationele werkwijzen semi-monumenten die worden gebruikt om de grootte en vorm kwantificeren variatie definiëren bestuderen.

Dissection, MicroCT Scanning en Morfometrische Analyses van de Baculum

Presenteren we een methode voor de beoordeling van de ruimtelijke omvang van verwonding/dood van de cel op het gewrichtsoppervlak van intact lymfkliertest gewrichten na toepassing van gecontroleerde mechanische belastingen of effecten. Deze methode kunt u nagaan hoe artrose, genetische factoren en/of verschillende laden regimes van invloed zijn op de kwetsbaarheid van in situ chondrocyten worden gebruikt.

Visualisatie in real time en analyse van chondrocyten letsel als gevolg van mechanische belasting in volledig Intact lymfkliertest kraakbeen explantaten

Dit protocol beschrijft de laser Capture micro dissectie voor de isolatie van kraakbeen en bot uit verse bevroren delen van de muis embryo. Kraakbeen en botten kunnen snel worden gevisualiseerd door Cresylacetaat-Violet kleuring en precies worden verzameld om RNA van hoge kwaliteit te leveren voor transcriptomische analyse.

Laser Capture Microdissectie van de muis embryonale kraakbeen en bot voor genexpressie analyse

We presenteren een protocol voor het genereren van orthodontische tandbeweging bij muizen en methoden voor 3D-visualisatie van de collageenvezels en bloedvaten van parodontale ligament zonder sectioning.

3D Beeldvorming van PDL Collageenvezels tijdens Orthodontische Tandbeweging in Mandibular Murine Model

Het huidige protocol beschrijft de gecontroleerde microblade krassen op het oppervlak van het gewrichtskraakbeen na het destabiliseren van de muizenknie door het snijden van het mediale miniscotibiale ligament. Dit diermodel presenteert een versnelde vorm van artrose (OA) die geschikt is voor het bestuderen van osteofytvorming, osteosclerose en pijn in een vroeg stadium.

Destabilisatie van het mediale meniscus- en kraakbeenkrab murinemodel van versnelde artrose

Dit protocol demonstreert stapsgewijze details over het extraheren van de mandibulaire eerste kies in de muis. Het biedt een alternatieve methode voor onderzoekers die zich richten op kaakbotgenezing en -regeneratie.

De oprichting van een Murine Mandibular Molar Extraction Socket Healing Model

Hier demonstreren we stap voor stap een hanteerbaar, orthodontisch tandbewegingsprotocol dat wordt uitgevoerd op een maxillair model van muizen. Met de expliciete uitleg van elke stap en visuele demonstratie kunnen onderzoekers dit model onder de knie krijgen en met een paar aanpassingen toepassen op hun experimentele behoeften.

Het opstellen van een maxillair orthodontisch model bij muizen

Dit protocol presenteert een uitgebreide en efficiënte methode voor het analyseren van mandibulaire botreparatie. We beschrijven een reproduceerbare techniek voor niet-gestabiliseerde mandibulaire fractuur in een muismodel, waarmee het proces van endochondraal botherstel kan worden geanalyseerd met minimale weefselschade en botverlies.

Minder invasieve techniek voor niet-gestabiliseerde mandibulaire fractuur in muismodellen

Hier presenteren we een protocol voor het bestuderen van orthodontische tandbeweging (OTM), dat dient als een geschikt model voor het onderzoeken van de mechanismen van botaanpassing, wortelresorptie en de reactie van botcellen op mechanische stimuli. Deze uitgebreide gids biedt gedetailleerde informatie over het OTM-model, het verkrijgen van microcomputertomografie en de daaropvolgende analyse.

Orthodontische tandbeweging bij muizen bestuderen

Hier beschrijven we in detail een methode, die is gebaseerd op microcomputertomografie, om 3D-modellen van craniomaxillofaciale botten bij muizen te segmenteren en te meten, voor een betere beoordeling van de craniomaxillofaciale botontwikkeling bij muizen dan wat mogelijk is met de huidige methoden.

Analyse van craniomaxillofaciale misvormingen bij muizen met behulp van driedimensionale microcomputertomografie

Leer morfometrische en cellulaire analyse van de mandibulaire condyle bij muizen. Deze methode combineert radiografie en histologie om structurele veranderingen door compressieve belasting te evalueren.

Een Morfometrische en cellulaire analysemethode voor de lymfkliertest mandibulaire Condyle

Meer video's verkennen