Name: Intrasplenic transplantatie van hepatocyten na gedeeltelijke Hepatectomy in KNIPOOG. SCID muizen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-02-10T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 24 s
Description: Leer een protocol voor partiële hepatectomie en intrasplenische transplantatie van hepatocyten bij NOD.SCID muizen. Deze methode ondersteunt onderzoek naar celtherapieën voor leverfalen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd gesteund door de core subsidie ontvangen van de afdeling van de biotechnologie, van de Indiase regering aan de nationale Instituut van immunologie, New Delhi. Dr. Bhattacharjee de huidige adres is een divisie van gastro-enterologie, leverziekten en voeding, Children's Hospital Los Angeles.

Procedures gepresenteerd in dit protocol zijn goedgekeurd door de institutionele dier ethisch comité van het nationale Instituut van immunologie, New Delhi. De seriële referentienummer van de goedkeuring is IAEC #319/13.
Opmerking: Er zijn uitstekende middelen op algemene chirurgie procedures20 en specifieke protocollen voor knaagdieren chirurgie21. Voor degenen die dierlijke chirurgie doen voor de eerste keer, is het aanbevolen om uitgebreid praktijk chirurgische ingrepen op dummies voordat op dieren.
1. voorbereiding
<ol><li>Voorafgaand aan het experiment, door steriele fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS) of zoute klaar te houden.</li>
	<li>Monteren van een chirurgie kit met schaar, getande pincet weefsel pincet, katoen, wattenstaafjes, nylon draden en verschillende micro naald houders. Autoclaaf de chirurgie kit. Speciale zorg moet worden genomen als een KNIPOOG immuun-gecompromitteerd. SCID muis is opgenomen in het protocol.</li>
	<li>Uitvoeren van de volledige experimentele procedure, vanaf de voorbereiding tot het einde van de operatie, de bio-veiligheid klasse I kabinet.</li>
	<li>Weeg een KNIPOOG. SCID muis van 6-8 weken oud voorafgaand aan de operatie. Muizen met een gewicht van tussen de 14-18 g worden gebruikt in deze studie.</li>
	<li>Het scheren van de bovenste centrale en hypochondrisch abdominale regio van de muis met de tondeuse. Toepassing van haar crème gelijkmatig in de hele regio verwijderen met een spatel om volledig de bijgesneden haren te verwijderen. Verwijder de haren voorzichtig met behulp van een stuk natte steriele katoen na 2-5 min.</li>
	<li>Plaatst u de muisaanwijzer in de zaal Isofluraan en ontgrendelen van de klep van de zuurstof cilinder. Het handhaven van de zuurstof stroom met de snelheid van 4 L/min en de verdamping Isofluraan 4% voor het opwekken van de verdoving.<ol>
<li>Zorg ervoor dat de muis correct heeft zijn verdoofd door zachte teen knijpen.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Plaats een bord chirurgie binnen een bioveiligheid kabinet. Plaats het dier op het bord van de operatie, zodat het ventrale gedeelte van de muis boven ligt en het voorste gedeelte van de muis in de neus kegel aangesloten op de voorziening van Isofluraan en zuurstof wordt geplaatst.</li>
	<li>Vermindering van de verdamping Isofluraan tot 2% en gedurende de chirurgische procedure handhaven.</li>
	<li>Desinfecteren van de huid van de muis en het steriliseren door af te vegen met 70% ethanol gedrenkte steriele katoen.</li>
</ol>2. de chirurgische Procedure
<ol><li>
Gedeeltelijke Hepatectomy
	<ol>
<li>Maak een dwarse snede van ongeveer 1 cm in de huid net onder het borstbeen, loodrecht aan de xiphoid process en parallel aan de ribbenkast, met behulp van rechte operationele schaar.</li>
		<li>De huid is aangesloten met de buikspier laag in de nabijheid van de ingesneden gebied met pincet of steriele bevochtigd katoen tips onderscheid maken tussen huid en buikspier laag zachtjes te scheiden. Geniet de intradermale regio met PBS met behulp van steriele katoen tips te onttrekken aan uitdroging.</li>
		<li>Het gebied van de linker kwab soepel bloot doordat een dwarse incisie door de peritoneale laag net onder de xiphoid. Gebruik twee bevochtigd katoen tips om bloot en de linker kwab van de lever op te heffen.</li>
		<li>Plaats een van de tips van katoen op de buik kant van het deelstuk uitmaakt, en plaats nog een katoen-tip aan de kant van het middenrif. Zachtjes druk op de tip geplaatst naar het middenrif, en geven een glijdende duw door het andere uiteinde op te heffen van de linker kwab van de lever.</li>
		<li>Glijden van een nylondraad met een lus door de opgeheven linker kwab, en schuif de lus naar de basis van de linker kwab dichtbij de Hilus met behulp van de micro-pincet of katoen tips. Voorzichtig duw de nylon draad lus aan de basis van de linker kwab.</li>
		<li>Twee uiteinden van de nylondraad over de bovenkant van de linker kwab met behulp van een naald-houder van de microchirurgie en de micro verlostang binden. Maak twee extra knopen aan de andere kant.</li>
		<li>Ontleden uit de gebonden kwab met de hulp van schaar. Probeer niet te snijden zeer dicht bij de wol. In het geval dat de procedure duurt meer dan 5 min, houd de peritoneale Holte en organen vochtig met steriele PBS te vermijden uitdroging als gevolg van vocht verlies.</li>
		<li>Naai het buikvlies via continue hechten een 4-0 Catgut hechtdraad. Vervolgens sluit de huid door discontinue wordt zo spoedig mogelijk.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Cell Transplantation Opmerking: De GFP waarin hepatocyten werden geïsoleerd van transgene GFP muizen (C57BL/6-Tg (UBC-GFP) 30 Scha/J), volgens de procedure die wordt beschreven door Lee et al. 22 en Shen et al. 23 hepatocyte-achtige cellen (NeoHep) van menselijke oorsprong onderscheiden van monocyten24 werden ook gebruikt voor transplantatie. Cellen die verkregen uit andere bronnen kunnen echter ook worden gebruikt in het protocol.<ol>
<li>Schorten 0,2 miljoen levensvatbare cellen in ongeveer 50 µL van Iscove van bewerkt Dulbecco Medium (IMDM) en het gecombineerd in een 1 mL insuline spuit afgetopt met 30G naald. Houd de injectiespuit koude door deze te plaatsen op het ijs.</li>
		<li>Plaats de muis op een manier die het linkergedeelte van de laterale gezichten omhoog richting de persoon uitvoeren van chirurgie. Identificeer de milt gebied en dwars het ontleden van de huid in de buurt van de hypochondrisch regio, gevolgd door een korte incisie door de peritoneale laag wil bloot van de milt.</li>
		<li>Zachtjes til de milt en houdt dat het buiten de holte met de hulp van twee PBS bevochtigd katoen tips.</li>
		<li>De milt zorgvuldig met twee katoen tips in de ene hand houd, en plaats de naald van de spuit precies verticaal aan de milt. Zachtjes doorboren de milt en de naald druk zeer langzaam binnen; de naald moet niet dieper dan 2 mm krijgen.</li>
		<li>Duw de zuiger van de spuit langzaam te injecteren van de cellen in de milt. Na de transplantatie, houd de naald van de spuit stabiel en verwijder het langzaam van de milt te voorkomen bloeden of verlies van cellen.</li>
		<li>Na het plaatsen van de milt terug in de peritoneale holte met de tips van katoen, vlakbij de peritoneale laag continu wordt met een 4-0 Catgut hechtdraad. Naai de huid met met de dezelfde hechtdraad. Vermijd het gebruik van wond clips voor het sluiten van de huid; in plaats daarvan, sluit u dit door een 4-0 hechtdraad. De wond clips beperken de natuurlijke beweging van de muis, en vaak clips worden losse en snel komen.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. post-operatieve zorg
<ol><li>Veeg na het sluiten van de huid, de omgeving van zowel de hechtdraad sites met jodiumoplossing (betadine) met behulp van een steriele katoen-tip.</li>
	<li>Injecteren van een dosis antibiotica cefotaxime zoals 600 mg/kg (meestal 12 mg cefotaxime in 100 µL van zoutoplossing/muis) intraperitoneally lichaamsgewicht met behulp van de 1 mL spuit.</li>
	<li>Geven dagelijkse doses van pijnstillende Meloxicam als 1 mg/kg lichaamsgewicht (meestal 12 µg Meloxicam in 100 µL van zoutoplossing/muis) aan het dier intraperitoneally, maximaal drie dagen na de operatie.</li>
	<li>Na voltooiing van de operatie, de stroom van Isofluraan gas stoppen en plaatst u de muisaanwijzer weer in het individueel geventileerde kooi.</li>
</ol>4. euthanization and Characterizations
<ol><li>Na de experimentele eindpunten (1 dag en 10 dagen na chirurgie), euthanaseren de muizen volgens de richtlijnen van de institutionele dierenethiek.</li>
	<li>Het verzamelen van bloed door terminaal het verbloeden van de dieren, de oogbeschadigingen en/of terminal plexus prikken.</li>
	<li>Serum uit het bloed te isoleren.</li>
</ol>

<ol><li>Nussler, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Present+status+and+perspectives+of+cell-based+therapies+for+liver+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Present status and perspectives of cell-based therapies for liver diseases.</a> J. Hepatol. 45 (1), 144-159 (2006).</li>
<li>Ponder, K. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+hepatocytes+migrate+to+liver+parenchyma+and+function+indefinitely+after+intrasplenic+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Mouse hepatocytes migrate to liver parenchyma and function indefinitely after intrasplenic transplantation.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 88 (4), 1217-1221 (1991).</li>
<li>Kokudo, N., Horimoto, H., Ishida, K., Takahashi, S., Nozawa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Allogeneic+hepatocyte+and+fetal+liver+transplantation+and+xenogeneic+hepatocyte+transplantation+for+Nagase%27s+analbuminemic+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplant%22%5BJournal%5D)">Allogeneic hepatocyte and fetal liver transplantation and xenogeneic hepatocyte transplantation for Nagase's analbuminemic rats.</a> Cell Transplant. 5 (5 Suppl 1), S21-S22 (1996).</li>
<li>Christ, B., Bruckner, S., Stock, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatic+transplantation+of+mesenchymal+stem+cells+in+rodent+animal+models%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Hepatic transplantation of mesenchymal stem cells in rodent animal models.</a> Methods Mol. Biol. 698, 315-330 (2011).</li>
<li>Fox, I. J., Roy-Chowdhury, J. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/15158325">Hepatocyte transplantation.</a> J. Hepatol. 40 (6), 878-886 (2004).</li>
<li>Glanemann, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+of+monocyte-derived+hepatocyte-like+cells+%28NeoHeps%29+improves+survival+in+a+model+of+acute+liver+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Surg%22%5BJournal%5D)">Transplantation of monocyte-derived hepatocyte-like cells (NeoHeps) improves survival in a model of acute liver failure.</a> Ann. Surg. 249 (1), 149-154 (2009).</li>
<li>Rahman, T. M., Hodgson, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+acute+hepatic+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Exp.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Animal models of acute hepatic failure.</a> Int. J. Exp. Pathol. 81 (2), 145-157 (2000).</li>
<li>Zhang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Granulocyte+colony-stimulating+factor+treatment+ameliorates+liver+injury+and+improves+survival+in+rats+with+D-galactosamine-induced+acute+liver+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol.+Lett%22%5BJournal%5D)">Granulocyte colony-stimulating factor treatment ameliorates liver injury and improves survival in rats with D-galactosamine-induced acute liver failure.</a> Toxicol. Lett. 204 (1), 92-99 (2011).</li>
<li>Gardner, C. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+nitric+oxide+in+acetaminophen-induced+hepatotoxicity+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Role of nitric oxide in acetaminophen-induced hepatotoxicity in the rat.</a> Hepatology. 27 (3), 748-754 (1998).</li>
<li>Nardo, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Successful+treatment+of+CCL4-induced+acute+liver+failure+with+portal+vein+arterialization+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Proc%22%5BJournal%5D)">Successful treatment of CCL4-induced acute liver failure with portal vein arterialization in the rat.</a> Transplant Proc. 38 (4), 1187-1189 (2006).</li>
<li>Sathyasaikumar, K. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fulminant+hepatic+failure+in+rats+induces+oxidative+stress+differentially+in+cerebral+cortex%2C+cerebellum+and+pons+medulla%5BTitle%5D)+AND+%22Neurochem.+Res%22%5BJournal%5D)">Fulminant hepatic failure in rats induces oxidative stress differentially in cerebral cortex, cerebellum and pons medulla.</a> Neurochem. Res. 32 (3), 517-524 (2007).</li>
<li>Wu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laennec+protects+murine+from+concanavalin+A-induced+liver+injury+through+inhibition+of+inflammatory+reactions+and+hepatocyte+apoptosis%5BTitle%5D)+AND+%22Biol.+Pharm.+Bull%22%5BJournal%5D)">Laennec protects murine from concanavalin A-induced liver injury through inhibition of inflammatory reactions and hepatocyte apoptosis.</a> Biol. Pharm. Bull. 31 (11), 2040-2044 (2008).</li>
<li>Kaur, G., Tirkey, N., Chopra, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beneficial+effect+of+hesperidin+on+lipopolysaccharide-induced+hepatotoxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicology%22%5BJournal%5D)">Beneficial effect of hesperidin on lipopolysaccharide-induced hepatotoxicity.</a> Toxicology. 226 (2-3), 152-160 (2006).</li>
<li>Rupertus, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Major+but+not+minor+hepatectomy+accelerates+engraftment+of+extrahepatic+tumor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Exp.+Metastasis%22%5BJournal%5D)">Major but not minor hepatectomy accelerates engraftment of extrahepatic tumor cells.</a> Clin. Exp. Metastasis. 24 (1), 39-48 (2007).</li>
<li>Selden, C., Casbard, A., Themis, M., Hodgson, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+long-term+survival+of+syngeneic+hepatocytes+in+rat+peritoneum%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplant%22%5BJournal%5D)">Characterization of long-term survival of syngeneic hepatocytes in rat peritoneum.</a> Cell Transplant. 12 (6), 569-578 (2003).</li>
<li>Tang, T. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+donor+hepatocytes+and%2For+splenocytes+pre-injection+in+reducing+islet+xenotransplantation+rejection%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatobiliary.+Pancreat.+Dis.+Int%22%5BJournal%5D)">The role of donor hepatocytes and/or splenocytes pre-injection in reducing islet xenotransplantation rejection.</a> Hepatobiliary. Pancreat. Dis. Int. 2 (3), 344-350 (2003).</li>
<li>Goto, Y., Ohashi, K., Utoh, R., Yamamoto, M., Okano, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatocyte+transplantation+through+the+hepatic+vein%3A+a+new+route+of+cell+transplantation+to+the+liver%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplant%22%5BJournal%5D)">Hepatocyte transplantation through the hepatic vein: a new route of cell transplantation to the liver.</a> Cell Transplant. 20 (8), 1259-1270 (2011).</li>
<li>Gabelein, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intrasplenic+or+subperitoneal+hepatocyte+transplantation+to+increase+survival+after+surgically+induced+hepatic+failure%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+Surg.+Res%22%5BJournal%5D)">Intrasplenic or subperitoneal hepatocyte transplantation to increase survival after surgically induced hepatic failure?</a> Eur. Surg. Res. 41 (3), 253-259 (2008).</li>
<li>Bhattacharjee, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autologous+NeoHep+Derived+From+Chronic+Hepatitis+B+Virus+Patients%27+Blood+Monocytes+by+Upregulation+of+cMET+Signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Transl.+Med%22%5BJournal%5D)">Autologous NeoHep Derived From Chronic Hepatitis B Virus Patients' Blood Monocytes by Upregulation of cMET Signaling.</a> Stem Cells Transl. Med. , (2016).</li>
<li><a target="_blank" href="http://www.who.int/surgery/publications/s16383e.pdf">Basic surgical skills. Emergency and Essential Surgical Care (EESC) programme</a>. , http://www.who.int/surgery/publications/s16383e.pdf (2017).</li>
<li>Pritchett-Corning, K. R., Luo, Y., Mulder, G. B., White, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Principles+of+rodent+surgery+for+the+new+surgeon%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Principles of rodent surgery for the new surgeon.</a> J. Vis. Exp. (47), (2011).</li>
<li>Lee, S. M., Schelcher, C., Demmel, M., Hauner, M., Thasler, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+human+hepatocytes+by+a+two-step+collagenase+perfusion+procedure%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Isolation of human hepatocytes by a two-step collagenase perfusion procedure.</a> J. Vis. Exp. (79), (2013).</li>
<li>Shen, L., Hillebrand, A., Wang, D. Q., Liu, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+primary+culture+of+rat+hepatic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Isolation and primary culture of rat hepatic cells.</a> J. Vis. Exp. (64), (2012).</li>
<li>Bhattacharjee, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autologous+NeoHep+Derived+from+Chronic+Hepatitis+B+Virus+Patients%27+Blood+Monocytes+by+Upregulation+of+c-MET+Signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Transl.+Med%22%5BJournal%5D)">Autologous NeoHep Derived from Chronic Hepatitis B Virus Patients' Blood Monocytes by Upregulation of c-MET Signaling.</a> Stem Cells Transl. Med. 6 (1), 174-186 (2017).</li>
<li>Hori, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simple+and+sure+methodology+for+massive+hepatectomy+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Simple and sure methodology for massive hepatectomy in the mouse.</a> Ann. Gastroenterol. 24 (4), 307-318 (2011).</li>
<li>Hori, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simple+and+reproducible+hepatectomy+in+the+mouse+using+the+clip+technique%5BTitle%5D)+AND+%22World+J.+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Simple and reproducible hepatectomy in the mouse using the clip technique.</a> World J. Gastroenterol. 18 (22), 2767-2774 (2012).</li>
<li>Vidal, I., Richert, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+nude+mouse+as+model+for+liver+deficiency+study+and+treatment+xenotransplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Hepatol%22%5BJournal%5D)">The nude mouse as model for liver deficiency study and treatment xenotransplantation.</a> Int. J. Hepatol. , 1400147(2012).</li>
<li>Mitchell, C., Willenbring, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+reproducible+and+well-tolerated+method+for+2%2F3+partial+hepatectomy+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Protoc%22%5BJournal%5D)">A reproducible and well-tolerated method for 2/3 partial hepatectomy in mice.</a> Nat. Protoc. 3 (7), 1167-1170 (2008).</li>
<li>Ahmed, S. U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+subcutaneous+and+intrahepatic+human+hepatocellular+carcinoma+xenografts+in+immunodeficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Generation of subcutaneous and intrahepatic human hepatocellular carcinoma xenografts in immunodeficient mice.</a> J. Vis. Exp. (79), e50544(2013).</li>
<li>Krikri, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laparoscopic+vs.+open+abdominal+surgery+in+male+pigs%3A+marked+differences+in+cortisol+and+catecholamine+response+depending+on+the+size+of+surgical+incision%5BTitle%5D)+AND+%22Hormones+%28Athens%29%22%5BJournal%5D)">Laparoscopic vs. open abdominal surgery in male pigs: marked differences in cortisol and catecholamine response depending on the size of surgical incision.</a> Hormones (Athens). 12 (2), 283-291 (2013).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Gedeeltelijke hepatectomy is een gevestigde techniek voor behandelende lever regeneratie en buitensporige hepatectomy is gemeld na te bootsen de AHF model. Dierlijke modellen van AFH behoren knaagdieren, met name muizen, tot de meest onderzochte model. Om op te halen van een model van de lever schade bij muizen, tot een 70% hepatectomy is gemeld met een goede overleving tarief25,26. Echter in naakt en andere immunodeficiëntie muis, een 70% hepatectomy is gemeld a...

Op dit moment wordt hepatocyte transplantatie voorgesteld als een alternatief voor hele orgaantransplantatie voor behandelen patiënten met ernstige leveraandoeningen. Het is van mening dat patiënten op hele orgaantransplantatie1kan overbruggen. Naast de allogene hepatocyten2, worden xenogene hepatocyten3 en hepatocyten afgeleid van stamcellen4 ook onderzocht in diermodellen. In deze context, de homing en engraftment is potentieel van de getransplanteerde cellen in de ontvanger een belangrijk criterium voor celtherapie gebaseerd in acute hepatische insufficiëntie (AHF).
Voor het onderzoeken van de transplantatie van hepatocyten of hepatocyte-achtige cellen5, is AHF gemaakt in een diermodel door chirurgische6 of farmacologische7 procedures, gevolgd door het transplanteren van de cellen. Te maken van een dierlijk model van AHF door farmacologische reagentia, vele hepatotoxine zoals d-galactosamine8paracetamol9tetrachloorkoolstof10, thioacetamide11, Concanavalin A12, lipopolysaccharide13 , enz., zijn gebruikt. In deze lijst elk reagens genereert een unieke reeks van functies voor AHF, maar helaas geen enkele reagens bootst de menselijke AFH. Bovendien, de AFH geïnduceerd door hepatotoxine lang duurt, waardoor dieren onder chronische stress, en reproduceerbare resultaten zijn moeilijk te verkrijgen.
Aan de andere kant, de chirurgische ingreep van gedeeltelijke hepatectomy (PHx) is vaardigheid afhankelijk, en reproduceerbare resultaten zijn eenvoudig te verkrijgen na het ontwikkelen van de vereiste vaardigheden. Om te induceren AHF door chirurgische ingreep alleen, is resectie van meer dan 70% van de lever vereist; echter getransplanteerde minder dan een 70% hepatectomy kan nog steeds worden gebruikt om de studie van engraftment en verspreiding van cellen in de lever voor het analyseren van hun therapeutische capaciteit tijdens leverschade14. De transplantatie van hepatocyten geweest uitgevoerd post hepatectomy via het buikvlies15, staart ader16, hepatische ader17of de milt18. Op dit moment, zijn hepatische ader infusie en intrasplenic transplantatie van hepatocyten de aangewezen procedures, zoals ze gemakkelijker zijn te reproduceren.
In dit document, hebben we een procedure voor een gedeeltelijke hepatectomy van 30% in KNIPOOG beschreven. SCID (NOD. CB17-Prkdcscid/J) muizen waarin de linker kwab van de lever is weggesneden. Het wordt gevolgd door transplantatie van 0,2 miljoen GFP waarin muis (C57BL/6-Tg (UBC-GFP) 30Scha/J) hepatocyten evenals menselijke oorsprong NeoHep19 in de milt. Deze procedure leidt tot engraftment van de getransplanteerde cellen in de lever. Deze procedure is de minst invasieve en een minimaal pijnlijke techniek.

<table><tbody><tr><td>Gas Anesthesia System</td><td>Ugo Basile; Italy</td><td>211000</td><td></td></tr><tr><td>Weighing machine</td><td>Goldtech ; India</td><td></td><td>Local Procurement</td></tr><tr><td>Biological safety cabinet ( Class I)</td><td>Kartos international;&nbsp; India</td><td></td><td>Local Procurement</td></tr><tr><td>Hair Trimmer</td><td>Panasonic ;&nbsp; Japan&nbsp;</td><td>ER-GY10&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Straight operating scissor with sharp /sharp blades</td><td>Major Surgicals; India</td><td></td><td>Local Procurement</td></tr><tr><td>Forceps with Serrations</td><td>Major Surgicals; India</td><td></td><td>Local Procurement</td></tr><tr><td>Micro needle holders&nbsp; straight &amp; curved&nbsp;</td><td>Mercian ;&nbsp; England&nbsp;</td><td>BS-13-8</td><td></td></tr><tr><td>1 ml insulin syringe with 30G *5/16 needles&nbsp;</td><td>Dispo Van; India</td><td></td><td></td></tr><tr><td>1 ml syringe with 26 G * 1/2 needle</td><td>BD ; US&nbsp;</td><td>REF 303060</td><td></td></tr><tr><td>Nylon Threads&nbsp;&nbsp;</td><td>Mighty ; India</td><td></td><td>(1-0) Local Procurement</td></tr><tr><td>MERSUTURES 4-0 Sterilised Surgical Needled Suture</td><td>Ethicon, Johnson &amp; Johnson, India</td><td>NW 5047</td><td></td></tr><tr><td>TRUGUT 76 cm 4-0 absorbable surgical suture</td><td>Sutures India Pvt. Ltd; India</td><td>SN 5048</td><td>Sterilised Surgical Needled Suture Catgut Chromic</td></tr><tr><td>Cotton Buds</td><td>Pure Swabs Pvt Ltd ;&nbsp; India</td><td></td><td>Local Procurement</td></tr><tr><td>Surgical Tape</td><td>3M India ; India</td><td>1530-1</td><td>Micropore Surgical Tape</td></tr><tr><td>Microtome</td><td>Histo-Line Laboratories, Italy</td><td>MRS3500</td><td></td></tr><tr><td>Shandon Cryotome E Cryostat</td><td>Thermo Electron Corporation ; US</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Confocal laser scanning microscope</td><td>Carl Zeiss ; Germany&nbsp;</td><td>LSM 510 META</td><td></td></tr><tr><td>Bright Field Microscope</td><td>Olympus, Japan</td><td>LX51</td><td></td></tr><tr><td>Automated analyser</td><td>Tulip, Alto Santracruz, India</td><td>Screen Maaster 3000</td><td>Biochemical analyser for liver functional test</td></tr><tr><td>Flow Cytometer</td><td>BD ; US&nbsp;</td><td>BD FACSverse</td><td>Assesment of presence of cells post transplantation</td></tr><tr><td>Veet hair removal cream&nbsp;</td><td>Reckitt Benckiser, India</td><td></td><td></td></tr><tr><td>FORANE</td><td>Abbott ; US</td><td></td><td>isoflurane USP 99.9%&nbsp;</td></tr><tr><td>Taxim</td><td>AlKem ; India</td><td></td><td>cefotaxime sodium injection</td></tr><tr><td>Povidone-Iodine solution&nbsp;</td><td>Win-Medicare;&nbsp; India</td><td></td><td>Betadine</td></tr><tr><td>Paraformaldehyde</td><td>Himedia; India</td><td>GRM 3660</td><td></td></tr><tr><td>Iscove's Modified Dulbecco's Medium (IMDM)</td><td>Life technologies, Thermo Fisher scientific ; US</td><td>12200-036</td><td></td></tr><tr><td>Sucrose</td><td>Sigma ; US</td><td>S0389</td><td></td></tr><tr><td>Tissue-Tek</td><td>Sakura; US</td><td>25608-930</td><td>O.C.T compound</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Himedia; India</td><td>MB 097</td><td></td></tr><tr><td>anti-Albumin goat Polyclonal</td><td>Thermo Scientific,Pierce, US</td><td>PA126081</td><td></td></tr><tr><td>anti-connexin 32/GJB1 Polyclonal</td><td>abcam, UK</td><td>ab64609-500</td><td></td></tr><tr><td>antiGFP rabbit polyclonal&nbsp;</td><td>Santa Cruz biotechnology; US</td><td>SC 8334</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 594 donkey anti-goat</td><td>&nbsp;Molecular Probes, Thermo Fisher Scientific ;&nbsp; US</td><td>A11058</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 donkey anti-sheep</td><td>&nbsp;Molecular Probes, Thermo Fisher Scientific ;&nbsp; US</td><td>A11015</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 594 chicken anti rabbit</td><td>&nbsp;Molecular Probes, Thermo Fisher Scientific ;&nbsp; US</td><td>A21442</td><td></td></tr><tr><td>Goat anti rabbit IgG HRP</td><td>Invitrogen, Thermo Fisher Scientific; US&nbsp;</td><td>65-6120</td><td></td></tr><tr><td>anti-Ki67 antibody</td><td>abcam, UK</td><td>ab15580</td><td></td></tr><tr><td>Antigen Unmasking Solution, Citric acid base</td><td>Vector laboratories, US</td><td>H-3300</td><td></td></tr><tr><td>ProLong Diamond antifade mountant</td><td>Life technologies, Thermo Fisher scientific ; US</td><td>P36966</td><td></td></tr><tr><td>SGOT (ASAT) KIT</td><td>Coral Clinical System, India</td><td></td><td></td></tr><tr><td>SGPT (ALAT) KIT</td><td>Coral Clinical System, India</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Alkaline Phosphatase Kit (DEA)</td><td>Coral Clinical System, India</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Hematoxylin Solution, Mayer's</td><td>Sigma ; US</td><td>MHS16</td><td></td></tr><tr><td>Eosin Y solution, alcoholic</td><td>Sigma ; US</td><td>HT110132</td><td></td></tr><tr><td>DPX Mountant&nbsp;</td><td>Sigma ; US</td><td>6522</td><td></td></tr><tr><td>Melonex (Pain Killer)</td><td>Intas Pharmaceuticals Ltd; India</td><td></td><td>Meloxicam injection&nbsp;</td></tr><tr><td>DAB enhanced liquid substrate system tetrahydrochloride</td><td>Sigma ; US</td><td>D3939</td><td></td></tr></tbody></table>

intrasplenic transplantatie van hepatocyten na gedeeltelijke hepatectomy in knipoog. scid muizen

Intrasplenic Transplantation of Hepatocytes After Partial Hepatectomy in NOD.SCID Mice

Gedeeltelijke hepatectomy is een veelzijdig en reproduceerbare methode lever regeneratie en het effect van cellen gebaseerde therapeutics in verscheidene pathologische condities te studeren. Gedeeltelijke hepatectomy vergemakkelijkt ook de verhoogde engraftment en de verspreiding van getransplanteerde cellen door versnelde neovascularization en cel migratie naar de lever. Hier beschrijven we een eenvoudig protocol voor het uitvoeren van 30% hepatectomy en transplantatie van cellen in de milt van een nietzwaarlijvige diabetische/ernstige gecombineerde immunodeficiëntie knik. SCID (NOD. CB17-Prkdcscid/j) muis.
In deze procedure zijn twee kleine incisies gemaakt. De eerste incisie wordt bloot en resect de linker kwab van de lever, en een andere kleine incisie wordt gemaakt om de milt voor de intrasplenic transplantatie van cellen bloot te stellen. Deze procedure is niet vereist geen gespecialiseerde chirurgische vaardigheden en deze kan worden voltooid in 5-7 minuten met minder stress en pijn, sneller herstel en beter overleven. We hebben aangetoond dat de transplantatie van hepatocyten geïsoleerd van een groen fluorescente proteïne (GFP) uiting van de muis (transgene C57BL/6-Tg (UBC-GFP) 30Scha/J), evenals de hepatocyte als cellen van menselijke oorsprong (NeoHep) in gedeeltelijk hepatectomized knik. SCID muizen.

Hepatocyte proliferatie na 30% gedeeltelijke hepatectomy: De proliferatie van hepatocyten in de resterende lever na 30% hepatectomy werd onderzocht door immunohistochemische (IHC) kleuring voor een cel proliferatie marker, Ki-67. Eendaagse post hepatectomy, de muizen waren euthanized, de resterende lever kwabben waren weggesneden en paraffine secties werden verkregen. De secties zijn gekleurd met Ki-67 antilichaam, gevolgd door etikettering met horseradish peroxidase (HRP) geconjugeerd secundair antilich...

We hebben een protocol voor het uitvoeren van gedeeltelijke hepatectomy (PHx) en cel transplantatie via milt in KNIPOOG beschreven. SCID (NOD. CB17-Prkdcscid/j) muizen. In dit protocol wordt een incisie gemaakt bloot en resect de linker kwab van de lever, gevolgd door een andere snede voor intrasplenic transplantatie van cellen.

Intrasplenic transplantatie van hepatocyten na gedeeltelijke Hepatectomy in KNIPOOG. SCID muizen

Partial hepatectomy is a versatile and reproducible method to study liver regeneration and the effect of cell based therapeutics in various pathological ...

Voor de behandeling van patiënten met acuut leverfalen is hepatocyttransplantatie een alternatief voor een volledige organtransplantatie. Partiële hepatectomie wordt gebruikt als techniek voor het opwekken van AHF. Daarnaast wordt het ook ingezet om celintegratie en proliferatie tijdens celgebaseerde therapie te onderzoeken.De muis is een van de meest bestudeerde modellen voor het uitvoeren van een hepatectomie voor dergelijke doeleinden. In deze video tonen we een procedure voor een partiële hepatectomie, gevolgd door transplantatie van hepatocyten in de milt van een NOD. SCID-muis.Voordat u begint, dient u er zeker van te zijn dat u de nodige goedkeuring heeft van de relevante commissie voor dierethiek om het experiment uit te voeren. In deze procedure maken we twee kleine incisies. De eerste incisie is voor een partiële leverhepatectomie; deze is ongeveer één centimeter lang en wordt net onder het xiphoid proces gemaakt om de lever bloot te leggen.Voor het transplanteren van cellen wordt een andere, kleinere incisie gemaakt aan de linker laterale zijde om de milt van het dier bloot te leggen. De voordelen hiervan zijn dat het leidt tot minder trauma en pijn voor het dier, een sneller herstel en een overlevingspercentage van bijna honderd procent. Bovendien vereist deze procedure geen gespecialiseerde chirurgische vaardigheden en kan deze snel worden voltooid in vijf tot zeven minuten.In deze video demonstreert u de transplantatie van hepatocyt-achtige cellen, genaamd NeoHep, en hepatocyten geïsoleerd uit een transgene GFP-muis in een gedeeltelijk hepatectomerte NOD.SCID-muis. De procedure beperkt zich niet tot het type cellen voor transplantatie.Alle chirurgische instrumenten en PBS werden zorgvuldig geautoclaveerd en klaargezet voorafgaand aan de operatie. Weeg de muis. Voor deze procedure worden NOD.SCID-muizen van zes tot acht weken oud met een gewicht tussen de veertien en achttien gram gebruikt.Scheer het centrale, bovenste en linker gedeelte van de buik van de muis. Breng om het getrimde haar te verwijderen ontharingscrème aan over het geschoren gebied. Wacht vier tot vijf minuten en verwijder het haar voorzichtig.Zet de klep van de zuurstofcilinder open. Plaats de muis in de isofluraankamer. Stel de zuurstofflow in op vier liter per minuut.Stel de isofluraanverdamping in op vier procent voor het induceren van de anesthesie. Controleer of de muis correct is geanestheseerd door voorzichtig in de teen te knijpen. Plaats een operatieplank in een biologische veiligheidskabinet.Plaats het dier op de operatieplank zodanig dat de ventrale zijde van de muis naar boven is gericht en het anterieure deel van de muis in de neuskegel is geplaatst die is aangesloten op de toevoer van isofluraan en zuurstof. Verlaag de isofluraan-verdamping naar 2% om de anesthesie in stand te houden. Desinfecteer de huid door deze af te vegen met steriel watten gedrenkt in 70% ethanol.Maak een transversale incisie van ongeveer één centimeter in de huid net onder het borstbeen, loodrecht op het xiphoïd en parallel aan de borstkas. Scheid voorzichtig de huid en het peritoneum nabij de incisie. Maak een transversale incisie door de peritoneale laag net onder het xiphoïd om de linkerlob van de lever bloot te leggen.Twee bevochtigde wattenstaafjes zullen worden gebruikt. Plaats één van de wattenstaafjes aan de abdominale zijde van de incisie en plaats het andere wattenstaafje aan de zijde van het diafragma. Druk nu voorzichtig op de punt die richting het diafragma is geplaatst en geef met de andere punt een glijdende duw om de linkerlob van de lever op te tillen.Plaats met de micro-dissectievuurpincet een lus van zijden draad op de basis van de linker laterale lob dicht bij de leverhilus. Schuif de zijden draad na het lichtjes aantrekken van de knoop zo ver mogelijk naar de basis van de leverlob. Trek de knoop strak en plaats twee aanvullende knopen aan de andere zijde.Knip de afgebonden lob door met een microschirgische schaar. Deze afbeelding toont het resterende deel van de linkerlob na resectie. Hecht het peritoneum met een doorlopende hechting met een 4-0 Catgut absorbeerbare hechtdraad.Sluit de huid met discontinue of onderbroken hechtingen met behulp van dezelfde 4-0 Catgut absorbeerbare hechtdraad. Breng Betadine aan in de nabijheid van de hechtingen. Houd de hepatocyten of NeoHep gesuspendeerd in 50 µL IMDM gereed in een 1 mL insulinespuit met een naald van 29 gauge.Plaats de muis zodanig dat het linker laterale gedeelte naar boven is gericht. Lokaliseer de miltregio en ontleed de huid transversaal. Maak een snede van twee tot drie millimeter in de peritoneale laag om de milt bloot te leggen.Plaats de milt tussen twee vochtige wattenstaafjes en til deze voorzichtig op. Steek de naald voorzichtig in de miltcortex en breng de celsuspensie in de milt aan. Sluit het peritoneum met een continue hechting met een 4-0 hechtdraad en sluit de huid met onderbroken hechtingen.Breng Betadine aan op de hechtingen. Injecteer honderd µL saline intraperitoneaal met twaalf mg antibioticum Cefotaxime. Injecteer honderd µL saline intraperitoneaal met twaalf µg van het analgeticum Meloxicam.Dit dient gedurende drie dagen na de operatie dagelijks te worden toegediend. Sluit de isofluraanverdamper en plaats de muis in de kooi. Het dier zal binnen enkele seconden weer bij bewustzijn zijn.De proliferatie van hepatocyten in de lever na vierentwintig uur na een hepatectomie van dertig procent werd onderzocht door middel van immunohistochemische kleuring van leversecties met Ki-67, wat een marker voor celproliferatie is. Na het kleuren van deze secties werd een met mierikswortelperoxidase geconjugeerd anti-Ki-67 secundair antilichaam gebruikt voor detectie, en werd diaminobenzidine als substraat gebruikt om de bruine kleur te ontwikkelen. De nucleus werd tegengekleurd met hematoxyline.Op deze afbeelding zijn de bruin gekleurde cellen Ki-67-positieve prolifererende hepatocyten. Tien dagen na transplantatie werd de muis geëuthanaseerd en is de lever onderzocht. Hier wordt een representatieve afbeelding getoond.Van de geregenereerde lever werden de rechter laterale lob, de rechter mediale lob en de linker mediale lobben gereseceerd en werden coupes van vijf micron verkregen. Deze coupes werden gekleurd met primaire konijn polyklonale anti-GFP en secundaire anti-konijn Alexa Fluor 594 antilichamen. De nucleus werd tegengekleurd met DAPI.Deze afbeelding toont het homing-proces van hepatocyten die groen fluorescent eiwit tot expressie brengen, wat hier als rood zichtbaar is. Wanneer hepatocyt-achtige cellen van menselijke oorsprong, genaamd NeoHep, werden getransplanteerd, observeerden we de expressie van humaan Albumine en humaan Connexine 32 in de leversecties van de ontvangende hepatectomiseerde muis. Tien dagen na de operatie bevestigde de biochemische analyse van door de lever uitgescheiden enzymen in het serum dat de spiegels van aspartaataminotransferase, alanineaminotransferase en alkalische fosfatase waren hersteld naar normale waarden.Op dezelfde manier liet het histologisch onderzoek van leversecties via haematoxylin- en eosinekleuring tien dagen na de operatie geen afwijkingen zien, wat duidt op een correct herstel van de lever. Het is belangrijk om enkele voorzorgsmaatregelen te nemen. Probeer de knoop van de nylon draad aan de basis van de leverkwab te plaatsen.Vergeet niet om twee extra strakke knopen aan de tegenovergestelde zijde te maken en probeer niet te dicht bij de draad te knippen. Voor het transplanteren van cellen in de milt moet de naald precies verticaal worden ingebracht en mag deze niet dieper dan twee millimeter gaan. Vermijd het gebruik van wondklemmen voor het sluiten van de huid.Sluit de wond in plaats daarvan met een hechtdraad van maat 4-0. Wondclips beperken de natuurlijke beweging van de muis en vaak raken clips los en vallen ze zeer snel uit. Nadat u het dier terug in de kooi heeft geplaatst, kunt u enkele stukjes steriele cornflakes in de kooi leggen en steriel water met 5% glucose aanbieden.Als u geen eerdere ervaring heeft met dierchirurgie, oefen dan de partiële leverhepatectomie en transplantatie afzonderlijk bij normale immuuncompetente muizen en voer beide procedures vervolgens uit bij één enkel dier. Voer de procedures bij immunodeficiënte NOD.SCID-muizen pas uit nadat een overlevingspercentage van honderd procent bij immuuncompetente muizen is bereikt.

intrasplenic-transplantation-hepatocytes-after-partial-hepatectomy

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

De transplantatie van muis neurale stamcellen (NSCs) in het ruggenmerg van muizen met gevestigde demyelinisatie is gedetailleerd. De voorbereiding van NSCs, is de laminectomie van de thoracale wervel 9 (T9), en de transplantatie van NSCs geschetst, samen met de pre-en post-operatieve zorg van de muizen.

Chirurgische Transplantatie van Mouse neurale stamcellen in het ruggenmerg van muizen geïnfecteerd met neurotrope Mouse Hepatitis Virus

This video demonstrates a method for generating a dual humanized mouse model with a human immune system and liver cells. It involves transplanting human liver cells and hematopoietic stem and progenitor cells into a transgenic immunodeficient mouse via intrasplenic injection, leading to engraftment of liver cells and development of human immune cells.

Developing a Humanized Mouse Model with Human Liver Cells and Immune Cells

Menselijke tumorxenotransplantaten in immunodeficiënte muizen zijn waardevolle instrumenten om kanker biologie studeren. Specifieke protocollen voor subcutane en intrahepatische xenograften uit menselijke hepatocellulair carcinoom cellen of tumorfragmenten genereren worden beschreven. Leverregeneratie geïnduceerd door gedeeltelijke hepatectomie in ontvangende muizen wordt gepresenteerd als een strategie om intrahepatische engraftment vergemakkelijken.

Generatie van subcutane en Intrahepatic Human Hepatocellular carcinoom Xenografts in immunodeficiënte muizen

Hier presenteren we een nieuw model van een gehumaniseerde muizenlever, gegenereerd in Alb-toxinereceptor-gemedieerde cel-knockout (TRECK)/SCID-muizen na de transplantatie van onvolgroeide en uitbreidbare menselijke hepatische stamcellen.

Genereren van een gehumaniseerd muis lever met behulp van menselijke lever stamcellen

Hier presenteren we een nieuwe methode voor gedeeltelijke resectie van de linker hepatische kwab bij neonatale (dag 0) muizen. Dit nieuwe protocol is geschikt voor de studie van acute lever schade en letsel reactie in de neonatale instelling.

Gedeeltelijke lobulair Hepatectomy: Een chirurgische Model voor morfologische lever regeneratie

Hier presenteren we een protocol voor het genereren van een menselijke lever chimeer muismodel van familiale hypercholesterolemie met behulp van menselijke geïnduceerde pluripotente stamcel afkomstige hepatocyten. Dit is een waardevol model voor het testen van nieuwe therapieën voor hypercholesterolemie.

Een familiale hypercholesterolemie menselijke lever chimeer muismodel met behulp van geïnduceerde pluripotente stamcel afkomstige hepatocyten

Dit protocol biedt een betrouwbare methode om gehumaniseerde muizen te vestigen met zowel menselijk immuunsysteem als levercellen. Dubbele gereconstitueerde immunodeficiënte muizen bereikt via intrasplenische injectie van humane hepatocyten en CD34+ hematopoietische stamcellen zijn vatbaar voor humaan immunodeficiëntie virus-1 infectie en even leverschade zoals waargenomen in HIV-geïnfecteerde patiënten.

Oprichting van de dubbele gehumaniseerde TK-nog muis model voor HIV-geassocieerde lever pathogenese

Hier beschrijven we de ontwikkeling van een klinisch relevant muriene model van leverkanker die de typische immuunkenmerken van hepatocellulaire kanker (HCC) recapituleren.

Een oncogene hepatocyte-geïnduceerde Orthotopic muis model van hepatocellulaire kanker ontstaan in de setting van leverontsteking en fibrose

Met lipiden beladen hepatocyten zijn inherent aan leverregeneratie, maar gaan meestal verloren bij centrifugatie van dichtheidsgradiënt. Hier presenteren we een geoptimaliseerd celisolatieprotocol dat steatotische hepatocyten behoudt, wat representatieve populaties van regenererende hepatocyten oplevert na gedeeltelijke hepatectomie bij muizen.

Isolatie van regenererende hepatocyten na gedeeltelijke hepatectomie bij muizen

In dit protocol bespreken we de implementatie van een model van succesvolle orthotope levertransplantatie (OLT) bij muizen. Daarnaast worden ook adjuvantia besproken om de doorgankelijkheid van het transplantaat verder te analyseren na succesvolle OLT in een muis, met name met behulp van microcomputertomografie (microCT)-scans.

Succesvolle orthotope levertransplantatie bij muizen met behulp van microcomputertomografie-angiografie

Het muismodel van gedeeltelijke 2/3 (66%) hepatectomie is goed beschreven in de literatuur, maar meer uitgebreide hepatectomieën die het klein-voor-grootte-syndroom na levertransplantatie nabootsen, zijn zelden gebruikt. We beschrijven een uitgebreide hepatectomieprocedure van 78% in een muismodel die resulteert in ongeveer 50% postoperatieve letaliteit bij gezonde muizen.

Uitgebreide hepatectomie van 78% in een chirurgisch muismodel

Leer een protocol voor partiële hepatectomie en intrasplenische transplantatie van hepatocyten bij NOD.SCID muizen. Deze methode ondersteunt onderzoek naar celtherapieën voor leverfalen.

Intrasplenic transplantatie van hepatocyten na gedeeltelijke Hepatectomy in KNIPOOG. SCID muizen

Meer video's verkennen