Name: Transplantatie van Schwann cellen binnen PVDF-TrFE Conduits verbeelde Rat ruggenmerg stronken ter bevordering van de regeneratie van het Axon over de kloof overbruggen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-11-03T12:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 5 s
Description: Leer hoe je een conduit met Schwann-cellen en injecteerbare matrix plaatst om een brug te vormen tussen doorgesneden ruggenmergstompels bij ratten. Deze methode bevordert axonregeneratie en functioneel herstel na ruggenmergletsel.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Wij wil bedanken de virale Vector en dier Cores bij het Project van de Miami tot verlamming van de remedie voor produceren de lenti-GFP-virus en bieden dierenverzorgers, respectievelijk, de histologie en Imaging Cores voor het gebruik van de cryostaat, confocal microscoop, en fluorescente microscoop met Stereo-Detective. Financiering werd verstrekt door NINDS (09923), DOD (W81XWH-14-1-0482) en NSF (DMR-1006510). M.B. Bunge is de Christine E Lynn Distinguished Professor of Neuroscience.

vrouwelijke volwassen Fischer ratten (180-200 g lichaamsgewicht) volgens de NIH en USDA richtlijnen zijn ondergebracht. De institutionele Animal Care en gebruik Comité (IACUC) van de Universiteit van Miami alle dierlijke procedures afgekeurd.
 1. pre transplantatie voorbereiding <ol><li>Conduit voorbereiding.
	<ol><li>Gesneden de leiding tot 5 mm in lengte met een #10 mes onder een Microscoop ontleden. 
		Opmerking: De inwendige diameter van de leiding is tussen 2.4-2.7 mm; de buitendiameter is tussen 2.5-2.8 mm.</li>
		<li>Vouwen de leiding zachtjes langs de longitudinale kant ( figuur 1A). Snijd vier kleine incisies over 0.4 mm lang en ten minste 1 mm van de openingen van de leiding en ongeveer 1 mm uit elkaar met behulp van rechte rand Vannas schaar ( figuur 1B).
		<ol><li>Ontvouwen van de leiding ( Figuur 1 c) en snijd tussen twee incisies langs dezelfde kant maken twee vensters naast elkaar ( Figuur 1 d). Zorgen dat de Vensters kunnen worden geopend en goed Onbesneden langs gesloten.</li>
		</ol></li> <li>De leidingen in 75% ethanol voor 25 min in een petrischaal 10-cm steriliseren. Spoel de leidingen eens voor 4 min met 1 x fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS) en de leidingen met steriel pincet overbrengen in een nieuwe 10-cm petrischaal. Spoel de slangen tweemaal met 1 x PBS voor elke 25 min.</li>
		<li>Bewaren de leidingen in 1 x PBS tot chirurgie. 
		Opmerking: Veel leidingen kunnen tegelijk worden gesteriliseerd. De leidingen worden opgeslagen in aparte steriele 1,5 mL centrifuge buizen om hen te houden steriele.</li>
	</ol></li> <li>Groen fluorescente proteïne (GFP)-voorbereiding van de cel van Schwann (SC) <ol><li>bereiden gezuiverde SC culturen van de tibiale zenuwen van volwassen vrouwelijke Fischer ratten als eerder beschreven 43. Bij de voltooiing van deze stap, plaat het SCS systeem op poly-L-lysine (PLL)-gecoat 10-cm petrischalen en handhaven in D10 / 3M medium; Deze SCs zijn gedefinieerd als passage 0. 
		Opmerking: D10 / 3M medium is samengesteld uit de volgende: 10% foetale runderserum (FBS), 1% penicilline-streptomycine (pen/strep), 20 µg Mo/mL hypofyse extract, 2 µM forskolin, 2,5 nM heregulin in Dulbecco &#39; s bewerkt Eagle &#39; s medium (DMEM).</li>
		<li>Vullen met vers D10 / 3M medium (7 mL/10-cm petrischaal) elke 3 tot 4 dagen.</li>
		<li>Split SC cultuur zodra zij 70-80% samenvloeiing tot.
		<ol><li>Verwijderen medium en spoel tweemaal met Hank &#39; s evenwichtig zoutoplossing (HBSS) zonder calcium of magnesium.</li>
			<li>Voeg 5 mL van 0,25% trypsine/EDTA aan elke petrischaal 10-cm en incubeer gedurende 5 minuten bij kamertemperatuur (RT).</li>
			<li>Voeg 5 mL van D10 medium (10% FBS en 1% pen/strep in DMEM) in een centrifugebuis van 50 mL te neutraliseren trypsine.</li>
			<li>Pipet zachtjes de trypsine/EDTA oplossing in de Petri schotel meermaals loskoppelen van SCs. Verwijder de celsuspensie van de schotel en plaats deze in de centrifugebuis bereid in de vorige stap. Spoel de schotel met 5 mL D10 voedingsbodem en leg deze in de centrifugebuis te maximaliseren cel oogst.</li>
			<li>Centrifugeren van de cellen bij 370 x g gedurende 5 min bij 4 o C. Verwijder het supernatant en resuspendeer de cellen in 4 mL D10/3 M medium voor elke petrischaal split.</li>
			<li>Afzien 1 mL SC schorsing en 6 mL D10 / 3M voedingsbodem in een petrischaal 10-cm; elke petrischaal split zal resulteren in 4 petrischalen. Deze SCs zijn gedefinieerd als passage 1.</li>
			<li>Vullen met vers D10 / 3M medium de dag na de beplating en elke 3-4 dagen na plating.</li>
			<li>Eens de SCs bereiken van 70-80% samenvloeiing, herhaal stap 1.2.3.1 te 1.2.3.6. Het SCS systeem zijn nu bij passage 2.</li>
		</ol></li> <li>Transduce van de SCs 50% samenvloeiing eens te bereiken, met een lentivirale vector codering GFP in D10 / 3M medium's nachts bij een veelheid van infectie van 30 zoals eerder beschreven 44 , 45 .</li>
		<li>Vullen met vers D10 / 3M medium, de volgende dag en elke 3-4 dagen na plating.</li>
		<li>Zodra het GFP-SCs bereiken 70-80% samenvloeiing, herhaal stap 1.2.3.1 te 1.2.3.5 maar resuspendeer de GFP-SCs in 6 mL D10 voedingsbodem in plaats daarvan. 15 µL van GFP-SC schorsing afzien in een centrifugebuis 1,5 mL en voeg 15 µL van 0.4% trypan blauw-oplossing. Flick de centrifugebuis zachtjes en afzien van 10 µL van het mengsel in een kamer van de dia van cel-tellen.
		<ol><li>Plaats van de dia in een geautomatiseerde cel teller en bepalen van de celdichtheid.</li>
		</ol></li> <li>Centrifugeren van de cellen bij 370 x g gedurende 5 min bij 4 o C. Verwijder de bovendrijvende substantie, resuspendeer met 1,5 mL bevriezing medium voor elke 3 x 10 6 GFP-SCs. Doseer 1,5 mL GFP-SC schorsing in een cryogene flacon, en bevriezing bij -80 o C gedurende ten minste 24 uur voordat hij naar de vloeibare stikstof voor opslag. 
		Opmerking: Bevriezing medium: 25% FBS en 8% dimethylsulfoxide in DMEM.</li>
		<li>Ontdooien GFP-SCs één week voor de operatie.
		<ol><li>Voeg toe 10 mL D10 medium in een centrifugebuis 50 mL.</li>
			<li>Ontdooien flesjes van bevroren GFP-SCs in waterbad bij 37 o C totdat gedeeltelijk ontdooid.</li>
			<li>Verwijderen van het GFP-SC-schorsing van de cryogene flacon en leg deze in de centrifugebuis van 50 mL bereid in 1.2.8.1. Pipet zachtjes de oplossing op en neer herhaaldelijk.</li>
			<li>Centrifugeren van de cellen bij 370 x g gedurende 5 min bij 4 o C. Verwijder het supernatant en resuspendeer de cellen in 4 mL D10/3 M medium voor elke flacon ontdooid.</li>
			<li>Afzien 2 mL GFP-SC schorsing en 5 mL D10 / 3M voedingsbodem in een petrischaal 10-cm; elke flacon zou moeten resulteren in 2 petrischalen. Het GFP-SCs worden gedefinieerd als de passage 3. 
			Opmerking: Een 10-cm petrischaal meestal levert ongeveer 8 x 10 6 GFP-SCs na één week.</li>
		</ol></li> <li>Op de dag van de operatie, herhaal stap 1.2.6. Gebruik de celdichtheid berekend in stap 1.2.10.</li>
		<li>Doseer aliquots van 3 x 10 6 GFP-SCs in steriele 1,5 mL centrifuge buizen op basis van de celdichtheid berekend op basis van stap 1.2.9. Centrifugeer het GFP-SC aliquots bij 370 x g gedurende 5 min bij 4 o C en verwijder de bovendrijvende substantie. 1 mL van DMEM/F12 medium toevoegen aan elk aliquot en centrifuge op 370 x g. 
		Opmerking: Elk dier ontvangt 3 x 10 6 GFP-SCs. Medium met serum is tot deze stap gebruikt met GFP-SCs.</li>
		<li>Houden GFP-SCs op ijs tot het tijdstip van de transplantatie.</li>
	</ol></li></ol> 2. Voltooien transect op thoracale Level 8 (T8) <ol><li>dierlijke voorbereiding operatie <ol><li>verdoving een vrouwelijke Fischer rat (180-200 g) met een intraperitoneale injectie van ketamine (60 mg/kg lichaamsgewicht) en xylazine (5 mg/kg lichaamsgewicht). De diepte van de verdoving voordat u verdergaat met de volgende stap te controleren door het controleren van de teen knijpen en in het oog van de knipperende reacties.</li>
		<li>De achterkant van de rat met een elektrische clipper scheren en veeg de huid met 70% ethanol. Ophthalmic smeermiddel toepassen op beide ogen. Het dier overbrengen in de operatie tafel op een verwarming pad te handhaven van de lichaamstemperatuur op ongeveer 37 o C. plaats het dier op een broodje zodat de wervels gemakkelijk toegankelijk zijn. 
		Opmerking: Het broodje kan worden gemaakt van papieren handdoek of 2 in x2 in gaas die kan worden gesteriliseerd. Grotere rollen worden aanbevolen wanneer T7-T9 moet worden plat op de top van de roll.</li>
	</ol></li> <li>T7 aan T9 laminectomie <ol><li>Zoek de mijlpaal voor de T9-T11 spinous processen. 
		Opmerking: De kloof tussen T9, T10 en T11 zijn klein in vergelijking met andere segmenten ikn de regio. Na het plaatsen van de rat op het broodje, T9-T11 spinous processen zal voelen als een kleine driehoekige hobbel via de huid.</li>
		<li>Maakt een incisie middellijn 4 tot 5 cm van de huid met behulp van een mes van de #10 van T4 naar T11. Maak een kleine incisie in de oppervlakkige vetlaag met gebogen schaar met stompe uiteinden te ontleden de vet. 
		Opmerking: Andere soorten instrumenten kunnen worden gebruikt om te scheiden van het vet maar gebogen schaar met stompe uiteinden de meest effectieve en minst invasieve methode voor vet scheiding inschakelen.</li>
		<li>Zoeken de T7 T9 spinous processen met behulp van de achterzijde van het mes #10. Houd de spier op over T4 met een botte Tang en maak een incisie in de spier langs elke kant van de wervels van T6-T10. Maak de snede zo dicht mogelijk bij de wervels mogelijk te maken van een schone opening en minimale letsel aan het dier.</li>
		<li>Isoleren van elke individuele proces van het spinous van T7 tot T9 door het snijden van de spieren en ligamenten tussen T6 T7, T7 en T8, T8 en T9, en T9 en T10 met een mes #10.</li>
		<li>Gebruiken een rongeur om te verwijderen van alle spieren en ligamenten op de laminae van T7 naar T9. De spieren en ligamenten als lateraal mogelijk verwijderen totdat de kloof tussen de dwarsuitsteeksels van de T7 te T9 zichtbaar zijn.</li>
		<li>Verwijder de T9 spinous proces met een rongeur. Houd de T8 spinous proces met botte pincet en lift zachtjes te verheffen de T9 lamina bij de kleine opening tussen de processen T9 en T10.</li>
		<li>Verwijder de lamina vanaf de opening en rostrally met een rongeur op T9 verplaatsen. Verwijder de lamina lateraal zoveel mogelijk; de dorsale wortels zichtbaar moeten zijn na de laminectomie.</li>
		<li>Zodra de lamina verwijderd is, herhaal het proces voor T8 en T7. 
		Opmerking: Tijdens de laminectomie, gebruik absorptie spears om bloed te verwijderen terwijl het voortdurend met de laminectomie. Als er overmatige bloeding optreedt, plaatst u een gecomprimeerde spons aan de site bloeden en voeg zout om te helpen met de bloedstolling.</li>
	</ol></li> <li>Transect in T8 <ol><li>plaats van het oprolmechanisme rond T7 aan T9. Zodra alle van de laminae zijn verwijderd, ervoor te zorgen dat de kloof tussen de dwarsuitsteeksels zichtbaar, vooral op T8 zijn. Ook het onderzoeken van de botten langs de lengte aan beide zijden tussen T7 aan T9 om ervoor te zorgen dat er geen naar buiten uitstekende botfragmenten. 
		Opmerking: Deze kloof op T8 is belangrijk voor het uitvoeren van de volledige transect. De wervels langs de lengte moeten worden verwijderd voor gemakkelijker conduit inbrengen.</li>
		<li>Knip de dorsale en ventrale wortels boven en onder met behulp van de T8 schuin voorjaar schaar. Voeg zout toe aan het ruggenmerg en wacht tot het bloed stollen. Opmerking: deze stap is belangrijk voor het juiste conduit inbrengen.</li>
		<li>Plaats van de schuine voorjaar schaar boven het ruggenmerg in de kloof tussen de dwarsuitsteeksels op T8 en maken een cut te volledig verbreken het ruggenmerg. Plaats een klein stukje van samengeperst schuim in de resulterende 2-2.5 mm kloof en zout toevoegen aan het gebied onmiddellijk.</li>
	</ol></li></ol> 3. Conduit invoeging <ol><li>tijdens het wachten voor de afgehakte snoer stompen hemostase bereiken, neem een geleider uit 1 x PBS. De absorptie driehoeken in dunne lange stukken gesneden en plaats hen in de leiding te verwijderen overtollige PBS. Controleer dat de voorgesneden ramen openstaan.</li>
	<li>Verwijderen zoutoplossing en bloed met behulp van dunne lange stukken van absorptie driehoeken. Til de twee stronken van het ruggenmerg met behulp van een microspatula om te zorgen voor een goede scheiding. Zachtjes til de rostraal stomp met de microspatula en de leiding over de stomp glijden met de ramen tegenover zichzelf. Ervoor zorgen dat de gehele stomp wordt ingevoegd en er geen overtollige bloeden in de conduit.</li>
	<li>Zachtjes til de caudal stomp en het andere uiteinde van de leiding over de stomp glijden. Zorg ervoor dat de gehele stomp wordt ingevoegd en de Vensters op het dorsale oppervlak ( figuur 2A).</li>
</ol> 4. Cel van Schwann / injecteerbare Matrix (zie tabel van materialen) voorbereiding en injectie <ol><li>tijdens het wachten voor de afgehakte snoer hemostase bereiken, verwijder het medium boven de GFP-SC pellet (bereid in stap 1.2). Resuspendeer de GFP-SCs in 10 µl van koude DMEM/F12. Voeg 10 µl van koude injecteerbare gel om de celsuspensie en meng goed door herhaald pipetteren. Houd van het GFP-SC/DMEM/F12/injectable matrix mengsel op ijs totdat conduit invoeging is voltooid.</li>
	<li>Als u zeker bent dat de Vensters op de dorsale oppervlak zijn open ( figuur 2A), 20 µl van het mengsel van de matrix GFP-SC/DMEM/F12/injectable te injecteren in de leiding via een van de voorgesneden windows 46 met behulp van een westelijke vlek laden uiteinde en een micropipet. Als het mengsel van SC/DMEM/F12/injectable matrix moet de leiding overvol, verwijder de overmaat met absorptie driehoeken. Sluit de Vensters na injectie; wordt is niet noodzakelijk ( figuur 2B).</li>
</ol> 5. Wond sluiting en postoperatieve zorg <ol><li>hechtdraad de spier lagen en de oppervlakkige vet lagen. Reinigen van de huid met 70% ethanol en dan nieten (bijvoorbeeld met behulp van de wond clips) de huid sluiten. De dieren in een thermisch gereglementeerde incubator houden totdat ze bewustzijn herwinnen. Breng de dieren terug in de kooien. Water voorzien van een lange vultrechter en voedsel pellets plaats op het beddengoed voor gemakkelijke toegang.</li>
	<li>Beheren buprenorfine (0,1 mg/kg lichaamsgewicht) twee keer per dag gedurende 3 dagen subcutaan starten onmiddellijk na de operatie om pijn te verminderen. Injecteren gentamycine (5 mg/kg lichaamsgewicht) subcutaan eenmaal per dag gedurende 7 dagen onmiddellijk na de operatie ter voorkoming en vermindering van de infectie. 10 mL lactated Ringers oplossing injecteren subcutaan tweemaal per dag gedurende 7 dagen voor hydratatie.</li>
	<li>Leeg blazen functioneren handmatig tweemaal per dag tot blaas als resultaat gegeven. Als blaasontsteking optreedt, vervolgens beheren 10 mL zoutoplossing subcutaan tot urine duidelijk wordt. Als er geen verbetering in twee dagen, injecteren gentamycine (5 mg/kg lichaamsgewicht, eenmaal per dag) subcutaan tot de urine duidelijk wordt.</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

De meest kritische stap in het creëren van een effectieve transect model is het doorsnijden van het ruggenmerg in één of twee delen. Een 2-2.5 mm kloof tussen de rostraal en caudal ruggenmerg stompen moet aanwezig zijn op de site van transect. De drie meest waarschijnlijke redenen voor dergelijke een kloof niet weergegeven zijn (1) de dorsale/ventrale wortels niet correct verwijderd, (2) de ventrale dura niet adequaat is verwijderd, en/of (3) het dier was niet goed gepositioneerd op de rol geplaatst onder haar.
<p cl...

Spinal cord injury reparatie is een complex en uitdagend probleem dat een strategie van de combinatorische behandeling met betrekking tot vergt, bijvoorbeeld, het gebruik van cellen en een biomaterial te voorzien van een gunstige communicatie voor getransplanteerde cel functie en axon herstel op de site van letsel. Hemisection1,2,3,4,5,6,7,8,9 en volledige transect10 ,11,12,13,14,15,16,17,18,19 ,20,21,22 modellen worden vaak gebruikt om te beoordelen van de effecten van de biomaterial gebaseerde "passerelle" therapieën. Het voordeel van het gebruik van een hemisection model is dat het meer stabiliteit voor de "passerelle" constructie in vergelijking met volledige transect biedt. In de hemisection modellen is het echter moeilijk te bewijzen van axon regeneratie als resultaat van de toegepaste therapeutische methode als gevolg van de aanwezigheid van bespaard weefsel. Het volledige transect model is de meest rigoureuze methode om aan te tonen van axon regeneratie.
Diverse natuurlijke en synthetische materialen zijn bestudeerd voor gebruik als een injecteerbare gel, een pre-gevormde gel in kneuzingen of hemisection modellen, of als een gestructureerde conduit in hemisection geplaatst of voltooien transect modellen (gedetailleerd in de beoordelingen23 , 24 , 25). in situ gelerend van een mengsel van injecteerbare matrix/SC maakt een meer tolerante interface tussen de transplantatie, het snoer van de gastheer voor axon kruising26,27 ten opzichte van vooraf gegeleerde matrix/SC implantaten 5 , 18 , 19 , 28. in situ gelerend de matrix contour rond de onregelmatige host-interfaces, overwegende dat een meer rigide en gestructureerde conduit of een minder vormbare pre-gevormde gel kon niet toegestaan. Een gestructureerde conduit biedt vaak contact begeleiding en implantaat stabiliteit in tegenstelling tot een injecteerbare matrix. De protocollen die hier gepresenteerd beschrijven een chirurgische ingreep die maakt gebruik van zowel een injecteerbare kelder membraan-matrix (bijvoorbeeld matrigel, zie die de Tabel van materialen, bedoeld als injecteerbare matrix hier) en een gestructureerde conduit te evalueren van axon regeneratie in de meest rigoureuze ruggenmerg letsel model.
Electrospun poly-vinylidenedifluoride-trifluoroethylene (PVDF-TrFE) uitgelijnd vezelig holle leidingen worden gebruikt in onze experimentele aanpak. PVDF-TrFE is een piëzo-elektrische polymeer dat genereert een voorbijgaande lading wanneer mechanisch vervormd en is aangetoond dat het bevorderen van de uitbreiding en de axon regeneratie van de neurite zowel in vitro29,30 en in vivo 31. Electrospinning is een gemeenschappelijk steiger fabricage methode die kan snel produceren betrouwbare vezelig steigers met behulp van een verscheidenheid van polymeren met controleerbare eigenschappen zoals uitlijning van de vezels, de diameter van de vezel en dikte van de steiger voor neurale en andere toepassingen32,33,34.
Talrijke studies van rat SCs getransplanteerd in ruggenmerg letsel sites hebben aangetoond dat behandeling werkzaamheid5,9,18,19,20,21 ,26. Deze transplantaties zijn neuroprotectieve voor weefsel rondom de laesie, laesie holte verkleinen, en bevorderen van axon regeneratie in de laesie/transplantatie site en de myelinisering van de geregenereerde axonen. Menselijke SCs autologously kunnen worden getransplanteerd, een voordeel in vergelijking met de meeste andere neurale-gerelateerde cellen24. Na een biopsie van de perifere zenuwen, SCs kunnen worden geïsoleerd en gezuiverd en zal verspreiden tot het gewenste bedrag voor transplantatie in mensen. Autologe transplantatie van de SC voor ruggenmerg gewonde patiënten is bewezen veilig in Iran35,36,,37,38, China39,40, en de Verenigde Staten41,42. SCs staan bekend om afscheiden van talrijke neurotrophic factoren en extracellulaire matrix eiwitten belangrijk voor de groei van de axon en een essentiële rol te spelen bij axon regeneratie na perifere zenuw verwonding. Ons doel hier is om te beschrijven van methoden die conduit ontwerpen onderzoeken kunnen ter verbetering van de resultaten van SC transplantatie in een volledige rat ruggenmerg transect model.

<table><tbody><tr><td>Cryogenic vials</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>5000-0020</td><td></td></tr><tr><td>10 cm Petri dish</td><td>VWR</td><td>25382-428</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco's modified Eagle's medium: nutrient mixture F-12</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>11039-021</td><td>"DMEM/F12" in protocol.</td></tr><tr><td>Penicillin-streptomycin</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>15140-122</td><td>"Pen/Strep" in protcol.</td></tr><tr><td>Fetal bovine serum</td><td>Hyclone</td><td>SH300-70-03</td><td>"FBS" in protocol.</td></tr><tr><td>Pituitary extract</td><td>Biomedical Technologies</td><td>BT-215</td><td></td></tr><tr><td>Forskolin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F6886</td><td></td></tr><tr><td>Heregulin</td><td>R&amp;D Systems</td><td>396-HB/CF</td><td></td></tr><tr><td>Poly L-lysine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P2636</td><td>"PLL" in protocol.</td></tr><tr><td>Dulbecco's modified Eagle's medium</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>11965-092</td><td>"DMEM" in protocol.</td></tr><tr><td>Hank's balanced salt solution</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>14170-112</td><td>"HBSS" in protocol.</td></tr><tr><td>Tryspin-EDTA</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>15400-054</td><td></td></tr><tr><td>Female Fischer rat (160-180g)</td><td>Envigo</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vannas scissor, straight</td><td>FST</td><td>15018-10</td><td></td></tr><tr><td>Ketamine</td><td>Vedco Inc</td><td>5098976106</td><td>100 mg/ml</td></tr><tr><td>Xylazine</td><td>Lloyd Inc</td><td>AnaSed</td><td>20 mg/ml</td></tr><tr><td>Gentamycin</td><td>APP Pharmaceuticals</td><td>NDC 63323-010-02</td><td>Kan van elk merk zijn.</td></tr><tr><td>Micro Spatula</td><td>FST</td><td>10089-11</td><td>Kan van elk merk zijn.</td></tr><tr><td>Curved scissors with blunt end</td><td>FST</td><td>14017-18</td><td>Kan van elk merk zijn.</td></tr><tr><td>Blunt forceps</td><td>FST</td><td>11006-12</td><td>Kan van elk merk zijn.</td></tr><tr><td>rongeur</td><td>FST</td><td>16121-14</td><td>Kan van elk merk zijn.</td></tr><tr><td>Angled spring scissors</td><td>FST</td><td>15006-09</td><td>Kan van elk merk zijn.</td></tr><tr><td>Absorption triangles</td><td>FST</td><td>18105-03</td><td>Kan van elk merk zijn.</td></tr><tr><td>Gelfoam</td><td>Henry Schein</td><td>9083300</td><td>"Compressed foam" in protocol.</td></tr><tr><td>#10 blades</td><td>Sklar</td><td>06-3010</td><td>Kan van elk merk zijn.</td></tr><tr><td>Matrigel</td><td>Corning</td><td>354234</td><td>"Injectable matrix" in protocol.</td></tr><tr><td>Chicken anti-green fluorescent protein antibody</td><td>Millipore</td><td>AB16901</td><td></td></tr><tr><td>Mouse RT97 hybridoma antibody</td><td>DSHB</td><td>RT97</td><td></td></tr><tr><td>Rabbit anti-neurofilament antibody</td><td>Encor Biotechnology, Inc</td><td>PRCA-NF-H</td><td></td></tr><tr><td>Polyclonal Rabbit anti-Glial Fibrillary Acidic Protein antibody</td><td>Dako</td><td>Z033401</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 goat anti-chicken IgG (H+L)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>A-11039</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 546 goat anti-rabbit IgG (H+L)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>A-11035</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 647 goat anti-rabbit IgG (H+L)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>A-21244</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 647 goat anti-mouse IgG (H+L)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>A-21236</td><td></td></tr><tr><td>Confocal Microscopy</td><td>Nikon</td><td>clsi</td><td></td></tr></tbody></table>

transplantatie van schwann cellen binnen pvdf-trfe conduits verbeelde rat ruggenmerg stronken ter bevordering van de regeneratie van het axon over de kloof overbruggen

Transplantation of Schwann Cells Inside PVDF-TrFE Conduits to Bridge Transected Rat Spinal Cord Stumps to Promote Axon Regeneration Across the Gap

Onder de verschillende modellen voor dwarslaesie bij ratten, wordt de kneuzingen model het vaakst gebruikt omdat het is het meest voorkomende type van menselijke dwarslaesie. Het volledige transect model, is hoewel niet als klinisch relevant als het model van kneuzingen, de meest rigoureuze method to evaluate methode axon regeneratie. In het model van kneuzingen is het moeilijk te onderscheiden van geregenereerde van gekiemde of bespaard axonen als gevolg van de aanwezigheid van het resterende weefsel post schade. In het volledige transect model is een "passerelle" methode nodig om de leemte opvullen en continuïteit maken vanuit de rostraal de caudal stompen om te evalueren van de doeltreffendheid van de behandelingen. Een betrouwbare "passerelle" operatie is essentieel voor het testen van resultaat maatregelen door het verminderen van de variabiliteit als gevolg van de chirurgische methode. De hier beschreven protocollen worden gebruikt voor het bereiden van Schwann cellen (gcv) en leidingen voorafgaand aan de transplantatie, volledige transect van het ruggenmerg thoracale niveau 8 (T8), invoegen van de leiding en SCs transplantatie in de leiding. Deze aanpak maakt ook gebruik van in situ gelerend van een injecteerbare kelder membraan matrix met SC transplantatie waarmee verbeterde axon groei over de rostraal en caudal interfaces met het weefsel van de gastheer.

Het doel van het gebruik van deze chirurgische techniek is om het gebruik van een gestructureerde conduit en injecteerbare matrix dat SC functie na transplantatie in voltooide verbeelde spinal koorden maximaliseert te evalueren. Drie weken na de transplantatie, de dieren zijn geperfundeerd met 4% paraformaldehyde en de spinale kolommen zijn grove ontleed en vastgesteld in de dezelfde fixeerspray voor een andere 24 h. Het ruggenmerg is vervolgens ontleed en de monsters voor de cryostaat Sa...

Dit artikel beschrijft een techniek om het invoegen van een holle buis tussen de stronken van de ruggenmerg na volledige transect en vullen met cellen van Schwann (gcv) en injecteerbare kelder membraan matrix bevorderen van axon regeneratie over de kloof te overbruggen.

Transplantatie van Schwann cellen binnen PVDF-TrFE Conduits verbeelde Rat ruggenmerg stronken ter bevordering van de regeneratie van het Axon over de kloof overbruggen

Among various models for spinal cord injury in rats, the contusion model is the most often used because it is the most common type of human spinal cord ...

Het algemene doel van deze chirurgische interventieprocedure is het gebruik van een conduit gevuld met Schwanncellen en een injecteerbare matrix om een brug te slaan tussen volledig doorgesneden ruggenmergstompen, om zo axonale regeneratie over de brug te bevorderen. Ons doel is om een letselplaats in het ruggenmerg van de rat te overbruggen om de functie te herstellen. Het letsel dat we gebruiken is het creëren van een volledige transectiekloof.Alleen door dit type letsel te gebruiken, kunnen we met zekerheid stellen dat de axonen zijn geregenereerd wanneer we deze op de plaats van het letsel aantreffen. De brug die we gebruiken is een polymeerkanaal dat Schwanncellen bevat, aangezien Schwanncellen essentieel zijn voor de regeneratie van axonen. In deze video laten we zien hoe een dergelijke brug in een volledige transectiekloof kan worden geplaatst.Onderzoekers die nieuw zijn met deze methode zullen oefening nodig hebben, aangezien de volledige transectie van het ruggenmerg en het inbrengen van het conduit uitdagend kunnen zijn voor beginners. Gebruik vóór het begin van de procedure een mesje nummer 10 om het conduit op vijf millimeter af te snijden. Indien gewenst kan dit ook on

transplantation-schwann-cells-inside-pvdf-trfe-conduits-to-bridge

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Traumatisch letsel aan het ruggenmerg verstoort de communicatie met de hersenen. Voor het herstellen van verloren connectiviteit we gebruik maken van een perifere zenuw graft om een ​​substraat te bieden voor het regenereren van vezels in combinatie met neurotrofe factoren en matrix-modulerende remmende enzymen om moleculen te verwijderen om lange afstand groei te bevorderen.

De combinatie van Peripheral Nerve enten en Matrix Modulation aan de benadeelde Rat Spinal Cord Repair

Take an anesthetized rat with an exposed intact right sciatic nerve, which controls leg movement and sensation.Excise a nerve segment, creating a gap, severing the neuronal axons, and disrupting signal transmission.The severed distal axons deteriorate, detaching specialized nerve-repair or Schwann cells.Suture a bionic conductive nerve scaffold, a soft tube with microchannels, to the epineurium, the nerve’s outer layer, at both cut ends.Implant paired electrodes near the nerve ends, passing...

Nerve Repair Using a Bionic Conductive Scaffold Combined with Electrical Stimulation

Source: Lee, Y., et.al. Transplantation of Schwann Cells Inside PVDF-TrFE Conduits to Bridge Transected Rat Spinal Cord Stumps to Promote Axon Regeneration Across the Gap. J. Vis. Exp. (2017)This video demonstrates the use of a piezoelectric polymer conduit seeded with Schwann cells to promote axon regeneration in a transected rat spinal cord. The conduit provides structural guidance, while its bioelectric properties stimulate neurite outgrowth. Schwann cells within the conduit secrete...

Schwann Cell-Seeded Conduits for Axonal Regeneration After Spinal Cord Injury

Fibrine matrices bevattende groeifactoren zijn gebruikt om geënte neurale stamcellen behouden in locaties volledig ruggenmerg doorsnijding. Geënte cellen volledig gevuld de laesie holte en gedifferentieerd in meerdere neurale celtypes, waaronder neuronen die axons verlengd gastheer ruggenmerg over lange afstanden.

Bevordering van Survival en differentiatie van neurale stamcellen met fibrine en groeifactor Cocktails na Ernstige Spinal Cord Injury

We presenteren een protocol voor het gebruik van een radio-telemetriesysteem cardiovasculaire parameters T4 ruggenmerg doorgesneden ratten acht weken na hersenstam embryonale neurale stamcel transplantatie in de laesie te nemen. Telemetrie is een geavanceerde techniek om de cardiovasculaire functie in bewuste vrij bewegende ruggemerglaesie ratten nauwkeurig te evalueren.

Een radio-telemetrische systeem om de cardiovasculaire functie bij ratten met Spinal Cord doorsnijding en embryonale neurale stamcellen Enten Monitor

Dwarslaesie is een traumatische aandoening die ernstige morbiditeit en hoge sterfte veroorzaakt. In dit werk beschrijven we in detail een kneuzing model van dwarslaesie bij muizen, gevolgd door een transplantatie van neurale stamcellen.

Neurale stamceltransplantatie bij Experimentele Contusive Model van Spinal Cord Injury

Ernstige verwondingen van het ruggenmerg resulteren vaak in weefseldefekten. Er worden twee mogelijkheden beschreven om dergelijke openingen succesvol te overbruggen om weefseladaptatie, regeneratieve reacties en functionele verbetering bij ratten te bevorderen via implantatie van een mechanisch microconnector-systeem na acute verwonding en vijf weken na volledige doorknipping van het ruggenmerg.

Experimentele Strategieën om Grote Tissue Hiaten in de Gewonde Spinal Cord brug na Acute en chronische Letsel

Hier presenteren we een in vivo techniek voor genoverdracht naar Schwann-cellen (SC's) in de wetenschappelijke nervus ischiadicus bij knaagdieren. Deze eenvoudige techniek is nuttig voor het onderzoeken van signaalmechanismen die betrokken zijn bij de ontwikkeling en instandhouding van myeliniserende SC's.

In vivo genoverdracht naar Schwann cellen in het knaagdier heupzenuw door elektroporatie

Electroporation is een effectieve aanpak te leveren van genen van belangen in cellen. Door deze aanpak in vivo toe te passen op de neuronen van volwassen muis achterwortelganglia ganglion (DRG), beschrijven we een model voor het bestuderen van axon regeneratie in vivo.

Behandelende zoogdieren Axon regeneratie: In Vivo Electroporation van volwassen muis achterwortelganglia Ganglion

Deze video toont de orthotope aorta transplantatie model als een eenvoudig model om de ontwikkeling van transplantatie vasculopathie (TVP) studie bij ratten.

Orthotope Aorta Transplantatie: Een Rat Model voor de ontwikkeling van chronische vasculopathie Study

Leer hoe je een conduit met Schwann-cellen en injecteerbare matrix plaatst om een brug te vormen tussen doorgesneden ruggenmergstompels bij ratten. Deze methode bevordert axonregeneratie en functioneel herstel na ruggenmergletsel.

Transplantatie van Schwann cellen binnen PVDF-TrFE Conduits verbeelde Rat ruggenmerg stronken ter bevordering van de regeneratie van het Axon over de kloof overbruggen (Video) | JoVE Journal

Transplantatie van Schwann cellen binnen PVDF-TrFE Conduits verbeelde Rat ruggenmerg stronken ter bevordering van de regeneratie van het Axon over de kloof overbruggen

Meer video's verkennen