Name: Stereological raming van de Dopaminerge Neuron nummer in de muis Substantia Nigra met behulp van de optische Fractionator en standaard microscopie apparatuur (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-09-01T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 19 s
Description: Leer stereologische schatting van dopaminerge neuronen in de muis substantia nigra met standaard microscopie. Deze methode biedt een betrouwbare aanpak voor preklinisch Parkinsononderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De auteurs zijn Keali Röhm, Louisa Frieß en Heike Menzel erkentelijk voor hun deskundige technische bijstand; aan Helga Brünner voor de verzorging van de dieren; en Chistopher S. Ward voor de productie- en distributieactiviteiten van de optische disector raster plugin voor de ImageJ software.

<ol><li>Ip, C. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AAV1%2F2-induced+overexpression+of+A53T-alpha-synuclein+in+the+substantia+nigra+results+in+degeneration+of+the+nigrostriatal+system+with+Lewy-like+pathology+and+motor+impairment%3A+a+new+mouse+model+for+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol+Commun%22%5BJournal%5D)">AAV1/2-induced overexpression of A53T-alpha-synuclein in the substantia nigra results in degeneration of the nigrostriatal system with Lewy-like pathology and motor impairment: a new mouse model for Parkinson's disease.</a> Acta Neuropathol Commun. 5 (1), 11(2017).</li>
<li>Ip, C. W., Beck, S. K., Volkmann, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymphocytes+reduce+nigrostriatal+deficits+in+the+6-hydroxydopamine+mouse+model+of+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neural+Transm+%28Vienna%29%22%5BJournal%5D)">Lymphocytes reduce nigrostriatal deficits in the 6-hydroxydopamine mouse model of Parkinson's disease.</a> J Neural Transm (Vienna). 122 (12), 1633-1643 (2015).</li>
<li>West, M. J., Slomianka, L., Gundersen, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unbiased+stereological+estimation+of+the+total+number+of+neurons+in+thesubdivisions+of+the+rat+hippocampus+using+the+optical+fractionator%5BTitle%5D)+AND+%22Anat+Rec%22%5BJournal%5D)">Unbiased stereological estimation of the total number of neurons in thesubdivisions of the rat hippocampus using the optical fractionator.</a> Anat Rec. 231 (4), 482-497 (1991).</li>
<li>Schmitz, C., Hof, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Design-based+stereology+in+neuroscience%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Design-based stereology in neuroscience.</a> Neuroscience. 130 (4), 813-831 (2005).</li>
<li>Tieu, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+guide+to+neurotoxic+animal+models+of+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Perspect+Med%22%5BJournal%5D)">A guide to neurotoxic animal models of Parkinson's disease.</a> Cold Spring Harb Perspect Med. 1 (1), e009316(2011).</li>
<li>Abercrombie, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estimation+of+nuclear+population+from+microtome+sections%5BTitle%5D)+AND+%22Anat+Rec%22%5BJournal%5D)">Estimation of nuclear population from microtome sections.</a> Anat Rec. 94, 239-247 (1946).</li>
<li>Rose, R. D., Rohrlich, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Counting+sectioned+cells+via+mathematical+reconstruction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Counting sectioned cells via mathematical reconstruction.</a> J Comp Neurol. 263 (3), 365-386 (1987).</li>
<li>Weibel, E. R., Gomez, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+principle+for+counting+tissue+structures+on+random+sections%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">A principle for counting tissue structures on random sections.</a> J Appl Physiol. 17, 343-348 (1962).</li>
<li>West, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Design-based+stereological+methods+for+counting+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Design-based stereological methods for counting neurons.</a> Prog Brain Res. 135, 43-51 (2002).</li>
<li>Keuker, J. I., Vollmann-Honsdorf, G. K., Fuchs, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+to+use+the+optical+fractionator%3A+an+example+based+on+the+estimation+of+neurons+in+the+hippocampal+CA1+and+CA3+regions+of+tree+shrews%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res+Brain+Res+Protoc%22%5BJournal%5D)">How to use the optical fractionator: an example based on the estimation of neurons in the hippocampal CA1 and CA3 regions of tree shrews.</a> Brain Res Brain Res Protoc. 7 (3), 211-221 (2001).</li>
<li>Mouton, P. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+age+and+lipopolysaccharide+%28LPS%29-mediated+peripheral+inflammation+on+numbers+of+central+catecholaminergic+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Aging%22%5BJournal%5D)">The effects of age and lipopolysaccharide (LPS)-mediated peripheral inflammation on numbers of central catecholaminergic neurons.</a> Neurobiol Aging. 33 (2), e427-e436 (2012).</li>
<li>Barreto, G. E., Sun, X., Xu, L., Giffard, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Astrocyte+proliferation+following+stroke+in+the+mouse+depends+on+distance+from+the+infarct%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Astrocyte proliferation following stroke in the mouse depends on distance from the infarct.</a> PLoS One. 6 (11), e27881(2011).</li>
<li>Robinson, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microstructural+and+microglial+changes+after+repetitive+mild+traumatic+brain+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Res%22%5BJournal%5D)">Microstructural and microglial changes after repetitive mild traumatic brain injury in mice.</a> J Neurosci Res. 95 (4), 1025-1035 (2017).</li>
<li>Paxinos, G., Franklin, K. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPaxinos%2C+G+%22The+mouse+brain+in+stereotaxic+coordinates%22">The mouse brain in stereotaxic coordinates</a>. , Academic Press. (2001).</li>
<li>Rasband, W. Grid_Overlay.java. , Available from:
 <a target="_blank" href="https://imagej.nih.gov/ij/plugins/graphic-overlay.html">https://imagej.nih.gov/ij/plugins/graphic-overlay.html</a> (2010).</li>
<li>De Vos, K. cell_counter.jar. , Available from:
 <a target="_blank" href="https://imagej.nih.gov/ij/plugins/cell-counter.html">https://imagej.nih.gov/ij/plugins/cell-counter.html</a> (2010).</li>
<li>Baquet, Z. C., Williams, D., Brody, J., Smeyne, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparison+of+model-based+%282D%29+and+design-based+%283D%29+stereological+methods+for+estimating+cell+number+in+the+substantia+nigra+pars+compacta+%28SNpc%29+of+the+C57BL%2F6J+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">A comparison of model-based (2D) and design-based (3D) stereological methods for estimating cell number in the substantia nigra pars compacta (SNpc) of the C57BL/6J mouse.</a> Neuroscience. 161 (4), 1082-1090 (2009).</li>
<li>Fu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+cytoarchitectonic+and+chemoarchitectonic+analysis+of+the+dopamine+cell+groups+in+the+substantia+nigra%2C+ventral+tegmental+area%2C+and+retrorubral+field+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Struct+Funct%22%5BJournal%5D)">A cytoarchitectonic and chemoarchitectonic analysis of the dopamine cell groups in the substantia nigra, ventral tegmental area, and retrorubral field in the mouse.</a> Brain Struct Funct. 217 (2), 591-612 (2012).</li>
<li>German, D. C., Manaye, K. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Midbrain+dopaminergic+neurons+%28nuclei+A8%2C+A9%2C+and+A10%29%3A+three-dimensional+reconstruction+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Midbrain dopaminergic neurons (nuclei A8, A9, and A10): three-dimensional reconstruction in the rat.</a> J Comp Neurol. 331 (3), 297-309 (1993).</li>
<li>Smeyne, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+the+Effects+of+MPTP+and+Paraquat+on+Dopaminergic+Neurons+and+Microglia+in+the+Substantia+Nigra+Pars+Compacta+of+C57BL%2F6+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Assessment of the Effects of MPTP and Paraquat on Dopaminergic Neurons and Microglia in the Substantia Nigra Pars Compacta of C57BL/6 Mice.</a> PLoS One. 11 (10), e0164094(2016).</li>
</ol>

C. W. I. heeft gediend op wetenschappelijke boards voor Merz geneesmiddelen, LLC en TEVA; ontvangst van subsidiegelden voor reizen van Ipsen, Merz Pharmaceuticals, LLC en Allergan, Inc.; en spreker honoraria van Merz, TEVA en Allergan, Inc. heeft ontvangen buiten het ingezonden werk. J. V. heeft gediend als consultant voor Boston Scientific, Medtronic en AbbVie en honoraria van Medtronic, Boston Scientific AbbVie, Bial, Allergan en GlobalKinetics buiten het ingezonden werk heeft ontvangen.

Stereology begint met de verwerking van het weefsel. De seriële snijden van SN weefsel moet zorgvuldig worden uitgevoerd om te voorkomen dat het verlies van secties tijdens de stereological analyse. Daarnaast is een essentiële stap ter gelegenheid van een halfrond teneinde te onderscheiden van het recht van de links SN bij het uitvoeren van stereology. Plaatsen van een klein gaatje in het bovenste deel van de hersenstam gegenereerd de beste resultaten in de gepresenteerde studie. Bovendien, sinds het werken met de optisc...

De kwantificering van de neuronale cel nummer is cruciaal in de pre-klinische van Parkinson onderzoek om te bepalen van het niveau van neurodegeneratie binnen de substantia nigra (SN)1,2. De onbevooroordeelde stereological schatting van het aantal cellen in een gebied van belang wordt beschouwd als de gouden standaard3,4,5.
Vóór de komst van onpartijdige stereology, was het aantal neuronen in secties beoordeeld door het manipuleren van de getelde cel profielen om te corrigeren voor de variabele waarschijnlijkheid dat neuronen in zicht in een sectie komen. Een van de meest gebruikte methoden was de correctie van de graven van de gekwantificeerde cel beschreven door Abercrombie6. Deze methode geprobeerd rekening dat cellen meer dan één keer kunnen worden gekwantificeerd, als fragmenten van dezelfde cel in aangrenzende dunne secties worden gevonden. Daarom, Abercrombie en andere auteurs gegenereerd vergelijkingen die veronderstellingen over de vorm, grootte en oriëntatie van de getelde cellen7,8 vereist. Deze aannames waren echter meestal niet gerealiseerd en dus geleid tot systematische fouten en divergentie van de werkelijke celaantal (dat wil zeggen, bias). Bovendien kon de bias niet verlaagd worden door aanvullende monsters3.
Voor de stereological schatting van cel nummers met behulp van de optische fractionator, worden wiskundige beginselen toegepast om direct de cel nummers direct in een gedefinieerde, 3-dimensionale volume schatten. Het voordeel van deze methode is dat het geen veronderstellingen over de vorm, grootte en oriëntatie van de cellen wordt geteld. Dus de geschatte cel nummers zijn dichter bij de werkelijke waarden en dichter als de grootte van de steekproef (dat wil zeggen, onbevooroordeelde)3 toeneemt. Omdat vele regels moeten worden gevolgd bij het gebruik van stereology om te houden van de methode onbevooroordeelde, kant-en-klare commerciële stereology systemen zijn ontwikkeld (Zie voor herziening, Schmitz en Hof, 20054). Gespecialiseerde stereology systemen implementeren ontwerp gebaseerde stereological methoden met een vooraf gedefinieerd sondes en bemonsteringsplannen voor stereological evaluaties die tot onafhankelijkheid van vorm, grootte, ruimtelijke verdeling en oriëntatie van leiden de cellen die moeten worden geanalyseerd4,9. Echter zijn commercieel verkrijgbare stereology systemen duur; deze kan uitvoering in nieuw onderzoek beperken.
Het doel van deze studie was het ontwikkelen van een bruikbare techniek voor de ontwerp-gebaseerd stereological schatting van Dopaminerge cel graven in de muis SN, dienst van de optische fractionator methode en met behulp van standaard microscopie apparatuur (dat wil zeggen, licht Microscoop, standaard Microscoop software en een gemotoriseerde x, y, z toneel). Hiervoor is een geleidelijke gids op hoe verwerken muis hersenweefsel en hoe te schatten SN cel nummers met behulp van ontwerp gebaseerde onbevooroordeelde stereology gepresenteerd. Bovendien worden de sjablonen voor de berekening van de geschatte cel nummers en coëfficiënten van fout (CE) geleverd.
De hier beschreven methode is niet beperkt tot de analyse van de SN, maar kan worden aangepast voor gebruik in andere anatomisch gedefinieerde regio's van de muis of rat hersenen. Bijvoorbeeld, is onbevooroordeelde stereology gebruikt voor het schatten van de neuronale cel nummers in de hippocampus10 en de locus coeruleus11. Celtypes dan neuronen, zoals astrocyten12 en microglia13, kunnen daarnaast ook worden beoordeeld. Deze methode kan dus nuttig aan wetenschappers die willen implementeren onbevooroordeelde stereology in hun onderzoek, maar zijn niet bereid om te besteden een heleboel geld voor de aankoop van een stereology systeem.

<table><tbody><tr><td>Paxinos mouse atlas</td><td></td><td></td><td>The Mouse Brain George Paxinos Keith B.J.FranklinCopyright @2001 by Academic Press CD Rom designet &amp; created by Paul Halasz</td></tr><tr><td>brain matrix slicer mouse</td><td>Zivic Instruments</td><td>BSMAS 001-1</td><td></td></tr><tr><td>paraformaldehyde</td><td>Merck</td><td>1040051000</td><td></td></tr><tr><td>sucrose /D(+) Saccharose</td><td>Roth</td><td>4621.1</td><td></td></tr><tr><td>isopentane</td><td>Roth</td><td>3927.1</td><td></td></tr><tr><td>glycerol</td><td>Merck</td><td>1040931000</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Sigma Aldrich</td><td>32205-1L</td><td></td></tr><tr><td>Naam</td><td>Bedrijf</td><td>Catalogusnummer</td><td>Opmerkingen</td></tr><tr><td>fosfaat gebufferde zoutoplossing ingrediënten:</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>natriumchloride</td><td>Sigma Aldrich</td><td>31434-1KG-R</td><td></td></tr><tr><td>kaliumdihydrogeenfosfaat</td><td>Merck</td><td>1048731000</td><td></td></tr><tr><td>di-natriumwaterstoffosfaatdihydraat</td><td>Merck</td><td>1065801000</td><td></td></tr><tr><td>kaliumchloride</td><td>Merck</td><td>1049360500</td><td></td></tr><tr><td>normaal geitenserum</td><td>Dako</td><td>X0907</td><td></td></tr><tr><td>rundeserumalbumine</td><td>Sigma</td><td>A4503-100G</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma Aldrich</td><td>X100-100ml</td><td>detergent</td></tr><tr><td>3,3-Diaminobenzidine-tetrahydrochloor/DAB-tabletten 10mg pH 7,0</td><td>Kem En Tec</td><td>4170</td><td></td></tr><tr><td>H2O2/ Waterstofperoxide 30%</td><td>Merck</td><td>1072090250</td><td></td></tr><tr><td>avidine/biotinereagens</td><td>Thermo Scientific</td><td>32050</td><td>Standaard Ultra Gevoelige ABC-kleuringskit, 1:100</td></tr><tr><td>konijn anti-muis tyrosinehydroxylase-antilichaam</td><td>abcam</td><td>Ab112</td><td>1:1000</td></tr><tr><td>gebiotineerde geiten-anti-konijn IgG H+L</td><td>Vector Laboratories</td><td>BA-1000</td><td>1:100</td></tr><tr><td>StereoInvestigator versie 11.07</td><td>MBF</td><td></td><td></td></tr><tr><td>BX53-microscoop</td><td>Olympus</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Visiview</td><td>Visitron Systems GmbH</td><td>3.3.0.2</td><td></td></tr><tr><td>Axiophot2</td><td>Zeiss</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ImageJ-software</td><td>NIH</td><td>Versie 4.7</td><td></td></tr><tr><td>Tissue-TEK OCT</td><td>Sakura</td><td>4583</td><td></td></tr><tr><td>droog ijs</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>rasteroverlay-plug-in</td><td>Wayne Rasband</td><td></td><td>https://imagej.nih.gov/ij/plugins/graphic-overlay.html</td></tr><tr><td>celteller-plug-in</td><td>Kurt de Vos</td><td></td><td>https://imagej.nih.gov/ij/plugins/cell-counter.html).&nbsp;</td></tr><tr><td>optische dissector-macro</td><td>Christopher Ward</td><td></td><td></td></tr><tr><td>C57Bl/6N mannelijke muizen</td><td>Charles River, Duitsland</td><td></td><td></td></tr><tr><td>SuperFrost Plus gecoate objectglaasjes</td><td>Langenbrinck, Duitsland</td><td></td><td></td></tr><tr><td>25G-naald Microlance 3</td><td>BD</td><td>300400</td><td></td></tr><tr><td>REGLO Analoge infusiepomp</td><td>Ismatec</td><td>ISM 829</td><td></td></tr><tr><td>StereoInvestigator-systeem</td><td></td><td></td><td>StereoInvestigator versie 11.07</td></tr><tr><td>BX53-microscoop</td><td></td><td></td><td>BX53-microscoop</td></tr><tr><td>zelf gesorteerd stereologisch</td><td></td><td></td><td>Visiview</td></tr><tr><td>Axiophot2</td><td></td><td></td><td>Axiophot2</td></tr></tbody></table>

stereological raming van de dopaminerge neuron nummer in de muis substantia nigra met behulp van de optische fractionator en standaard microscopie apparatuur

Stereological Estimation of Dopaminergic Neuron Number in the Mouse Substantia Nigra Using the Optical Fractionator and Standard Microscopy Equipment

In pre-klinische van Parkinson onderzoek is analyse van het nigrostriatal-darmkanaal, met inbegrip van de kwantificering van de Dopaminerge neuron verlies in de substantia nigra, essentieel. Voor het inschatten van de totale Dopaminerge neuron nummer, onbevooroordeelde stereology met behulp van de optische fractionator-methode wordt momenteel beschouwd als de gouden standaard. Omdat de theorie achter de optische fractionator methode complex is en stereology moeilijk is te bereiken zonder gespecialiseerde apparatuur, bestaan verschillende verkrijgbare volledige stereology systemen die de benodigde software bevatten, zuiver tellen de redenen voor de cel. Sinds de aankoop van een gespecialiseerde stereology setup is niet altijd haalbaar is, om vele redenen, dit verslag wordt een methode beschreven voor de stereological schatting van Dopaminerge neuronale cel met behulp van standaard microscopie apparatuur telt, met inbegrip van een lichte Microscoop, een gemotoriseerd tabel object (x, y, z vliegtuig) met beeldbewerkingssoftware, en een computer voor analyse. Een stapsgewijze uitleg wordt gegeven over het uitvoeren van stereological kwantificering met behulp van de methode van de optische fractionator en voorgeprogrammeerde bestanden voor de berekening van de geschatte cellen worden geleverd. Om te beoordelen van de juistheid van deze methode, werd een vergelijking met gegevens die zijn verkregen uit een commercieel verkrijgbare stereology apparaat uitgevoerd. Vergelijkbare cel nummers werden gevonden met behulp van dit protocol en de stereology apparaat, dus het aantonen van de precisie van dit protocol voor onbevooroordeelde stereology.

Met behulp van de onderhavige methode, het geschatte aantal TH + Dopaminerge neuronen in het recht SN varieerden tussen 7,363 en 7,987 cellen en, in de linker SN, tussen 7,446 en 7,904 cellen. Zo was het gemiddelde aantal Dopaminerge neuronen (± SEM) 7,647 ± 83 cellen voor het recht SN en 7,675 ± 66 voor links SN. De berekende CE voor elk dier was lager dan 0,08 (bereik: 0.073-0.079) (Figuur 7). Om na te gaan van de vergelijkbaarheid van deze methode met comm...

Dit werk presenteert een stapsgewijze protocol voor de onbevooroordeelde stereological schatting van Dopaminerge neuronale cel nummers in de muis substantia nigra met behulp van standaard microscopie apparatuur (dat wil zeggen, een lichte Microscoop, een tabel van de gemotoriseerde object (x, y, z vliegtuig), en publiek domein-software voor digitale beeldanalyse.

Stereological raming van de Dopaminerge Neuron nummer in de muis Substantia Nigra met behulp van de optische Fractionator en standaard microscopie apparatuur

In pre-clinical Parkinson&#39;s disease research, analysis of the nigrostriatal tract, including quantification of dopaminergic neuron loss within the ...

Het algemene doel van dit protocol is om de op ontwerp gebaseerde stereologische schatting van het aantal dopaminerge cellen in de SN van de muis te beschrijven met behulp van standaard microscopieapparatuur. Deze methode is nuttig voor het schatten van het aantal dopaminerge neuronen in de substantia nigra van de muis voor preklinisch onderzoek naar de ziekte van Parkinson met gebruik van onbevooroordeelde, op ontwerp gebaseerde stereologie. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat deze kan worden uitgevoerd met standaard microscopieapparatuur, zonder dat er een commercieel beschikbare complete stereologie-opstelling nodig is.Louisa Friez, een technicus uit mijn laboratorium, zal de procedure demonstreren. Begin met het plaatsen van een met paraformaldehyde gefixeerd muizenbrein in een brain matrix en maak een snede op 0,74 millimeter caudaal van bregma. Breng het caudale deel van het brein, inclusief de SN, over in 4% PFA in 0,1 M en fixeer dit gedurende de nacht bij 4 °C.Vervang de volgende dag de PFA door 30% sucrose in 0,1 molar PBS en incubeer het monster nog twee dagen bij vier graden Celsius voor cryoprotectie. Wanneer de hersenen na twee dagen naar de bodem van

stereological-estimation-dopaminergic-neuron-number-mouse-substantia

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowetenschap

Dit protocol beschrijft hoe u synaps nummer zowel in gedissocieerde neuronale cultuur en in de hersenen secties met behulp van immunocytochemie kwantificeren. Met behulp van vak-specifieke antilichamen, we label presynaptische terminals alsmede ten aanzien sites van postsynaptische specialisatie. We definiëren synapsen als punten van colocalization tussen de signalen die door deze markers.

Het kwantificeren van Synapsen: een immunocytochemie-gebaseerde test te Synapse Number Kwantificeer

This video demonstrates the process of quantifying alpha-synuclein accumulation in embryonic mouse dopamine neurons pre-treated with alpha-synuclein pre-formed fibrils. It outlines the steps for fixing, staining, and quantifying the dopamine neurons containing alpha-synuclein aggregates using immunofluorescence.

Studying Alpha-Synuclein Accumulation in Primary Embryonic Mouse Dopamine Neurons

Source: Olesen, M. V., et al. The Optical Fractionator Technique to Estimate Cell Numbers in a Rat Model of Electroconvulsive Therapy. J. Vis. Exp. (2017). The video demonstrates the technique for quantifying newly generated neurons in brain tissue. Hippocampal tissue slices containing Bromodeoxyuridine (BrdU)-labeled neurons were stained using immunohistochemistry and subsequently quantified across the tissue thickness using the optical fractionator technique.

Quantifying Newly Generated Neurons in Rat Brain Tissue Using the Optical Fractionator Technique

Dit protocol beschrijft twee verschillende omgevingsmanipulaties en een gelijktijdig protocol voor herseninfusie om omgevingsgeïnduceerde hersenveranderingen te bestuderen die ten grondslag liggen aan adaptief gedrag en hersenherstel bij volwassen muizen.

Milieu Modulaties van het aantal dopaminesysteem Neuronen in volwassen muizen

Bij de ziekte van Parkinson (PD), substantia nigra (SNC) dopaminerge neuronen degenereren, waardoor motorische stoornissen. Hier melden wij een protocol voor het kweken van ventrale middenhersenen neuronen van een muis tot expressie eGFP gedreven door een tyrosine hydroxylase (TH) promotor sequentie, het oogsten van individuele fluorescerende neuronen uit de culturen, en het meten van hun transcriptoom met behulp van RNA-seq.

Betrouwbare identificatie van de levens- dopaminerge neuronen in de middenhersenen Cultures Met behulp van RNA Sequencing en TH-promotor-driven eGFP Expression

Hier presenteren we een stereologische methode, de optische fractionator, gebruikt om de vorming van nieuwe neuronen te kwantificeren, en hun overleving, in de rathippocampus na elektroconvulsieve stimulatie. Bij correcte implementatie zorgt de gevoeligheid en efficiëntie van stereologische methoden voor een nauwkeurige schatting met een vaste en vooraf bepaalde precisie.

De optische fractioneringstechniek om cijfers te berekenen in een ratmodel van elektroconvulsieve therapie

Identificatie van dopamine D1-alpha receptor in de nucleus accumbens is van cruciaal belang voor de verduidelijking van de D1-receptor dysfunctie tijdens een ziekte van het centrale zenuwstelsel. Wij uitgevoerd een roman RNA in situ hybridisatie assay om te visualiseren single molecules van RNA in een specifieke hersenen gebied.

Identificatie van Dopamine D1-Alpha Receptor binnen knaagdier Nucleus Accumbens door een innovatieve RNA In Situ de technologie van de opsporing

Hier beschrijven we een kwantitatieve benadering bij de vaststelling van de verdeling van een synaptic eiwit ten opzichte van een marker eiwit met immunofluorescentie kleuring, confocal microscopie en computer-gebaseerde analyse.

Kwantificeren van de heterogene verdeling van een Synaptic proteïne in de hersenen van de muis met immunofluorescentie

Neuronale vezel lengte binnen een driedimensionale structuur van een hersengebied is een betrouwbare parameter om specifieke neuronale structurele integriteit of degeneratie te kwantificeren. Dit artikel beschrijft een stereologische kwantificeringsmethode om cholinerge vezellengte binnen de kernbasisvan Meynert bij muizen als voorbeeld te meten.

Stereologische schatting van cholinerge vezel lengte in de kern Basalis van Meynert van de muis hersenen

Hier presenteren we een gedetailleerd protocol om neuronale α-synucleinaccumulatie in primaire muis dopamine neuronen te bestuderen. Fosforyleerde α-synuclein aggregaten in neuronen worden geïnduceerd met voorgevormde α-synucleinfibrils. Geautomatiseerde beeldvorming van immunofluorescently gelabelde cellen en onbevooroordeelde beeldanalyse maken dit robuuste protocol geschikt voor medium-to-high doorvoerscreening van geneesmiddelen die α-synucleinaccumulatie remmen.

Het bestuderen van voorgevormde Fibril Geïnduceerde α-Synuclein Accumulatie in primaire embryonale muis Midbrain Dopamine Neuronen

Hier presenteren we een geautomatiseerde methode voor semi-kwantitatieve bepaling van dopaminerge neuron nummer in de rat substantia nigra pars compacta.

Semi-kwantitatieve bepaling van dopaminerge neurondichtheid in de substantia Nigra van knaagdiermodellen met behulp van geautomatiseerde beeldanalyse

Leer stereologische schatting van dopaminerge neuronen in de muis substantia nigra met standaard microscopie. Deze methode biedt een betrouwbare aanpak voor preklinisch Parkinsononderzoek.

Stereological raming van de Dopaminerge Neuron nummer in de muis Substantia Nigra met behulp van de optische Fractionator en standaard microscopie apparatuur (Video) | JoVE Journal

Stereological raming van de Dopaminerge Neuron nummer in de muis Substantia Nigra met behulp van de optische Fractionator en standaard microscopie apparatuur

Meer video's verkennen