Methodologie voor ontwikkeling van leven tabellen voor sessiele insecten in het veld met de wittevlieg, Bemisia tabaci, in katoen als een modelsysteem

Het algemene doel van deze cohort-gebaseerde levenstabelbenadering is om de sterftecijfers van een insectenpopulatie in het veld direct te kwantificeren en de bron van sterfte te identificeren. Deze methode kan ons helpen om belangrijke vragen te beantwoorden in populatiedynamiek, zoals het begrijpen van factoren die bijdragen aan sterfte in populaties en uiteindelijk de snelheid waarmee populaties groeien en afnemen. Het grote voordeel van deze techniek is dat het direct bronnen en sterftepercentages van meerdere oorzaken meet onder realistische omstandigheden in het veld.

We kwamen voor het eerst op het idee voor deze methode toen we ontdekten dat het insect in zijn onvolwassen stadia immobiel is. Dit stelt ons in staat om het lot van individuele insecten direct te volgen. Het demonstreren van de procedure zal worden uitgevoerd door Isadora Bordini, een afgestudeerde student, en Francisco Bojorquez, een laboratoriumtechnicus.

Maak levenstafels op elk moment tijdens de groei van het gewas zodra er insecten aanwezig zijn. De keuze van wanneer studies worden gestart, zal afhangen van de doelen en objectieven van het onderzoek. Selecteer twee rijen gewas dicht bij het midden van de plot om randeffecten van omliggende percelen of onbebouwde gebieden te minimaliseren.

Markeer het hoofd van elke rij met een draadvlag of een houten paal. Kies een bemonsteringslocatie drie tot vier meter in de rij. Om latere observaties te vereenvoudigen, selecteer één rij om eicohorten vast te stellen en de tweede rij om nimfcohorten vast te stellen.

Een eicohort moet minstens 50 eieren omvatten. Als gevolg van gedrag en plantengroei, zijn de levensstadia van Bemisia tabaci over het algemeen verticaal verdeeld in de luifel met de eieren dicht bij de top en progressief oudere nimfstadia daaronder. Gebruik een 8x loep om naar vers gelegde eieren op de onderkant van bladeren te zoeken.

Idealiter zou de loep een gat in de zijkant moeten hebben waardoor de pen erdoor kan. Zoek één blad met eieren voor elke plant in het onderzoek. Gebruik vervolgens een 15x lens om een zorgvuldigere inspectie uit te voeren.

Eieren worden donkerder naar een geelachtige kleur naarmate ze rijpen, dus verse eieren hebben een helderwitte kleur en vallen op tussen de oudere eieren. Het meest cruciale aspect van dit protocol is om de vers gelegde eieren en vers gevestigde eerste stadium ninfjes correct te identificeren. Het is essentieel dat de levenstabelobservaties aan het begin van elke levensfase beginnen voor nauwkeurige resultaten.

Nadat een ei is gevonden, gebruik een niet-giftige ultrafijne zwarte permanente marker om een kleine cirkel rond het ei te tekenen. Houd de cirkel klein zodat er geen andere eieren binnenin worden gelegd. Markeer op hetzelfde blad maximaal vier eieren in de vier verschillende sectoren.

Op een katoenblad zijn er vier sectoren verdeeld door de belangrijkste bladaders. Selecteer slechts één ei per bladsector. Identificeer het gemarkeerde blad met een kleine lichtgewicht kartonnen tag rond de bladsteel van het blad met notatie voor de plot- of behandelingsnummer, afhankelijk van het experimentele ontwerp.

Bevestig vervolgens een hoog zichtbare vlag dicht bij de bovenkant van de plant. Ga nu verder met het vinden van eieren op de volgende plant verder langs de rij. Leg de cohort vast in één dag.

Onder normale zomercondities in Arizona, zijn de bladeren klaar om te verzamelen in acht tot tien dagen omdat de eieren in vijf tot zeven dagen uitkomen. Pas de verzamelingstijd aan om ervoor te zorgen dat alle gezonde eieren zijn uitgekomen. In het veld zijn eieren te klein om duidelijk de mortaliteit en doodsoorzaken in situ te evalueren.

Daarom worden de oorzaken van mortaliteit zoals ontsporing, predatie of onlevensvatbaarheid bepaald in het laboratorium onder een dissectiemicroscoop. Het is van cruciaal belang om de doodsoorzaak van het ei of ninjf correct te identificeren, omdat dit van invloed is op de ecologische inferenties die kunnen worden getrokken over factoren die de populatiegroei en -regulatie beïnvloeden. Als het ei ontbreekt als gevolg van weersomstandigheden of kauwpredatie, dan is het ontsporen.

Als een ei in een ingestort chorion is veranderd, wordt dit geclassificeerd als predatie. Uitgekomen eieren zien er ook ingestort uit, maar hebben een verticale spleet in het chorion die kan worden gevonden met behulp van een kleine speld. Als een ei niet is uitgekomen, categoriseer het dan als onlevensvatbaar.

Gebruik een 8x loep om naar vers gevestigde eerste stadium ninfjes op de onderkant van bladeren te zoeken. Dergelijke bladeren zullen ongeveer drie tot vijf knooppunten lager zijn vanaf de top van een katoenplant. Wanneer er ninfjes worden gevonden, verifieer hun stadium met behulp van een 15x lens.

Zoek minimaal 50 ninfjes voor elk onderzoek. Selecteer planten die goed verdeeld zijn langs de rij en leg de cohort vast in één dag. Teken zoals eerder een kleine cirkel rond de geïdentificeerde ninjf.

Markeer maximaal vier ninfjes per blad in een ander sector en ga dan door naar de volgende plant. Houd er rekening mee dat vers uitgekomen eerste stadium ninfjes zich enkele centimeters kunnen verplaatsen voordat ze zich vestigen en dit kan een paar uur duren. Gevestigde ninfjes kunnen worden onderscheiden van kruipende ninfjes omdat ze onbeweeglijk zijn, strakker tegen het blad aangedrukt zijn en een meer doorschijnende barnsteenkleur hebben.

Oudere eerste stadium ninfjes lijken gezwollen en turgid naarmate ze dichter bij vervellen komen. Markeer een tag met notatie voor het plot- of behandelingsnummer en bevestig deze aan de bladsteel van het blad. Bevestig vervolgens een hoog zichtbare vlag dicht bij de bovenkant van de plant.

Maak gedetailleerde aantekeningen van de positie van de ninjf, inclusief bladsectorinformatie. Na een uur of twee van het identificeren van ninfjes, controleer ze nogmaals om er zeker van te zijn dat kruipende ninfjes niet zijn omcirkeld. Markeer de gevestigde ninfjes indien nodig opnieuw.

Een tot twee dagen na het vaststellen van de cohort, gebruik een 15x lens om de ontwikkeling van ninfjes te beoordelen en om een doodsoorzaak toe te