Name: Oprichting van een waardevolle Mimic de ziekte van Alzheimer in diermodel van het Rat door Intracerebroventricular injectie van luminantie bèta Amyloid proteïne (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-07-29T12:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 27 s
Description: Leer een betrouwbaar diermodel van de ziekte van Alzheimer opzetten bij ratten door intracerebroventriculaire injectie van Aβ25-35 met aluminiumtrichloride. Deze methode maakt onderzoek naar geheugenstoornissen en neuronale pathologie mogelijk.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Het project werd ondersteund door de Hebei provinciale Natural Science Foundation (nr. C2009001007, H2014406048), het provinciale bestuur van Hebei van traditionele Chinese geneeskunde (nr. 05027), en het belangrijkste onderwerp bouwproject van Hebei provinciaal College, China.

Deze procedure was overeenkomstig de verordeningen of Experimental dier Administration afgegeven door het Braziliaanse Comité van wetenschap en technologie van China op 31 oktober 198811. Wetenschappers moeten richtsnoeren vastgesteld en goedgekeurd door hun institutionele en nationale dierlijke regelgevende organisaties.
Opmerking: Dier en regenten: vier-maand-oude mannelijke Sprague-Dawley ratten (300-350 g) voor dit experiment werden meegedeeld. Alle ratten werden gehuisvest in groepen (vier of vijf per kooi) bij een temperatuur van 23 ± 1 ° C met een 12-h licht-donker cyclus. Voedsel en water werden beschikbaar ad libitum. De ratten werden geacclimatiseerd aan de huisvestingsomstandigheden voor 7 dagen voordat de procedure werd uitgevoerd. Aβ25-35 werd ontbonden in een 1% DMSO zoutoplossing tot 1 mg/mL en sonicated gedurende 5 minuten in een ultrasone oscillator totdat volledig is opgelost. AlCl3 en RHTGF-β1 ontbonden in een zoutoplossing op 1% en 0,1 mg/mL, respectievelijk. Congo rood, zilvernitraat en andere chemische stoffen waren van p.a. en werden gekocht uit gewone commerciële bronnen.
1. de chirurgische Procedure
Opmerking: 20 mannelijke Sprague-Dawley ratten werden microinjected met luminantie Aβ in de laterale ventrikel en anterodorsal thalamus nucleus en uitgeroepen tot de luminantie Aβ-testgroep. Een ander 20 ratten werden onderworpen aan dezelfde bewerking maar 0,1% DMSO zoute microinjection ontvangen en uitgeroepen tot de groep van sham bediende.
<ol><li>De ratten met 100% Isofluraan anaesthetize bij inademing en vervolgens beperken op een hersenen Stereotaxic apparaat.</li>
	<li>Scheren van de vacht op het hoekpunt van het hoofd met een chirurgische schaar en desinfecteren met iodophor. Dan dekken wegwerp chirurgische handdoek op het hoofd.</li>
	<li>Maak een incisie op de hoofdhuid langs de mediane longitudinale snuituil met chirurgische bistouries en schaar.</li>
	<li>Scheiden van het subcutane weefsel en fascia, veeg het schedel-calvarium met een steriele droge katoen om het bloeden te stoppen, en de bregma met een viltstift markeren.</li>
	<li>Verwijzen naar de Rat hersenen Stereotaxic kaart12; gezien de bregma als het punt van oorsprong, markeert de drie punten, de anterodorsal thalamus nucleus (ad) (posterior (P): 2.0 mm aan de bregma, laterale (L): 1.4 mm aan de middellijn) voor injecterende RHTGF-β1 en tot vaststelling van een schroef, de laterale ventrikel (LV) gebied ( posterior (P): 0.8 mm tot het bregma; laterale (L): 2.0 mm aan de middellijn) voor injecterende Aβ25-35 en AlCl3, en de tweede schroef vaststelling van plaats (Front (F): 2.0 mm aan de bregma, laterale (L): 1,5 mm aan de middellijn).</li>
	<li>Zachtjes boorgaten drie 1 mm doorsnede met een flexibele bot boor, aangewezen op de bovenstaande drie punten van schedel (1.5. stap). Schroef niet dieper dan nodig is om te voorkomen dat steken van het hersenweefsel.</li>
	<li>Stoppen met het bloeden en reinig het oppervlak van de schedel herhaaldelijk met steriele droge katoen.</li>
	<li>Invoegen van een naald die is gekoppeld aan de micro-injectie pomp, naar de hersenen op 4.6 mm diepte en zachtjes injecteren 1 μL RHTGF-β1 (10 ng) in het gebied van de advertentie. Naald 2 min blijven na injectie en langzaam Trek de naald (aanvullende bestand 1).</li>
	<li>De twee schroeven vast in de schedel, aangewezen in de punten van de advertentie en de tweede schroef tot vaststelling van de plaats van de schedel (die waren aangewezen op 1.5. stap) met een kleine schroevendraaier. Schroef niet dieper dan nodig is om te voorkomen dat steken van het hersenweefsel.</li>
	<li>Monteren van de canule implantatie systeem (aanvullende bestand 2), de dummy canule in de gids canule invoegen na desinfectie door hoge druk.</li>
	<li>Invoegen de canule gids roestvrij stalen buizen naar de hersenen bij 4.6 mm in LV gebied door het gat van de schedel (aanvullende bestand 3), met de hulp van de canule houder van ratten stereotaxic apparaat.</li>
	<li>Mix het gebit basismateriaal met gebit basis water op de verhouding van 1,5 g per 1 mL, zetten de pasta ter dekking van de gids canule kunststof voetstuk en de twee schroeven voor het immobilizing van de canule gids en tot dekking van de gehele huid incisie voor het vermijden van de huidinfectie.</li>
	<li>Anaesthetize op dag 2 van de operatie, de ratten met Isofluraan inhalatie met behulp van de kleine dier verdoving Machine. Trekken uit de dummy canule, de interne canule invoegen de canule gids en schroef de fixing schroef om de interne canule immobiliseren.</li>
	<li>De polyethyleen buis die de pomp microinjection is gekoppeld ingesteld op de interne canule en reguleren van de snelheid van de injectie tot 1 l/min. Microinject de Aβ25-35 of AlCl3 aan de LV.</li>
	<li>Microinject 4 μg (1 μL) Aβ25-35 daags gedurende 14 dagen in de ochtend en 3 μL AlCl3 (1%) daags gedurende 5 dagen in de middag onder Isofluraan verdoving.</li>
	<li>5 min wachten na afwerking van de injectie, zachtjes trekken uit de interne canule en opnieuw invoegen van de dummy canule in de gids canule.</li>
	<li>Op dag 15 post ontmantelen chirurgie (die overeenkomt met de laatste dag van de injectie van Aβ25-35) de canule implantatie systeem. Zachtjes de basis materiële vaste gebit met een chirurgische schaar en pincet te verwijderen, draai de twee schroeven, trek de canule gids en ontsmetten van de wond met betadine. Vul het gat van de schedel met botcement en suture van de huid met een eenvoudige onderbroken hechtdraad methode.</li>
	<li>Uitvoeren van de dezelfde bewerking met de groep van sham bediende en microinject van 0,1% DMSO zoutoplossing.</li>
	<li>
Postoperatieve verpleegkunde
	<ol>
<li>Huis 2 ratten per kooi na operatie en dienen als voedsel voor 30 dagen. Opmerking: 18 ratten in de groep sham bediende overleefd (90% slagingspercentage van operatie) en 19 ratten in de luminantie-Aβ testgroep overleefd (95% slagingspercentage van operatie).</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. screening voor succesvolle Model ratten en beoordeling van ruimtelijke geheugen met Morris Water Maze
<ol><li>
Morris water maze Opmerking: De Morris water maze werd gebruikt voor het beoordelen van de rat ruimtelijke geheugen13. De Morris water maze is een circulaire tank van roestvrij staal met diameter van 120 cm en 50 cm diepte. De water doolhof test werd uitgevoerd, op basis van het paradigma van de "gold standards" in Behavioral Neuroscience beschreven door J. Nunez14.<ol>
<li>Het zwembad water met enkele druppels voedselkleuring zwart.</li>
		<li>Handhaven van de diepte van het water bij 31.5 cm en de temperatuur van 23 ± 1 ° C.</li>
		<li>Het instellen van een platform van de circulaire transparant plexiglas 1,5 cm onder het wateroppervlak.</li>
		<li>Beweren dat alle ruimtelijke signalen rond het water labyrint onveranderlijk tijdens de water doolhof proeven.</li>
		<li>Verdeel het zwembad in 4 gelijke kwadranten door denkbeeldige lijnen voor beschrijvende gegevens collectie.</li>
		<li>Plaats de verborgen platform in het eerste Kwadrant (Q1) van water doolhof.</li>
		<li>De rat zwemmen gedrag (gemeten door de latency, traject of kruisingsgetal) vastleggen door middel van een videocamera, over het water labyrint gekoppeld aan een computer gebaseerde grafische analytische software.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Screening voor succesvolle model ratten aan de luminantie Aβ-testgroep
	<ol>
<li>Op dag 45 van de operatie, voeren de Morris water maze training gedurende 4 opeenvolgende dagen scherm voor succesvolle model ratten met geheugen bijzondere waardevermindering te verzamelen van de screening verhouding (SR). Opmerking: De SR wordt gedefinieerd als de gemiddelde latentie van elke luminantie Aβ behandeld rat en de schijnvertoning bediende groep van ratten te vinden van de verborgen platform onder het water oppervlak op dag 4 van water doolhof van opleiding. "A" is de gemiddelde latentie van elke luminantie Aβ behandeld rat te vinden van de verborgen platform en "B" is de gemiddelde latentie van de sham bediende groep van ratten te vinden van de verborgen platform, op dag 4 van water maze opleiding, in de volgende vergelijking: <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/56157/56157eq1.jpg"> Toen SR groter dan 0,2 voor één luminantie Aβ behandeld rat was, werd de rat beschouwd als een succesmodel rat met verminderde geheugen van luminantie Aβ behandeld rat15. De intra-day geheugenprestaties werd berekend op de gegevens van 2 proeven door de gemiddelde waarde van ratten te vinden van de verborgen platform. Het proces van de Morris water maze test werd zodanig ontworpen dat de ratten werden toegestaan om te zwemmen in het waterreservoir doolhof en zoek naar de verborgen platform binnen 60 s. Als een rat kwam niet erachter de verborgen platform binnen 60 s, dan de rat werd gelegd op het platform met de hand van de experimentator. Wanneer een rat bereikt op het verborgen perron (zelfstandig of begeleid), de rat was laat blijven er voor 20 s. Vervolgens de rat werd verwijderd uit de tank en toegestaan een fysieke herstel voor 10 s tussen de 2 proeven.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. neuron onderzoek
<ol><li>Op dag 86 post chirurgie, onder Isofluraan verdoving, euthanaseren de ratten door onthoofding (Figuur 1).</li>
	<li>De hersenen zetten ijs en voorzichtig het scheiden van de twee hemisferen op de raphe. Neem de linker hemisfeer van de optiek chiasma en de moeilijke situatie in 4% formaldehyde voor lichte microcopy observatie van neuron haematoxyline en eosine (HE), Congo rood of zilvernitraat vlek (Zie secties 4-6). De rechter hersenhelft hippocampus CA1 gebied in 2,5% Glutaaraldehyde voor elektron microcopy observatie (afdeling 7) vast te stellen.</li>
	<li>De hersenen voor de licht/elektron microcopy bereiding van de monsters, als eerder beschreven16,17te verwerken.</li>
</ol>4. neuron HE kleuring
<ol><li>Deparaffinize elke dia (elk 20 min) met kleurovergang alcohol (100%, 95%, 90%, 80% en 70% alcohol) met gedestilleerd water in een zuurkast.</li>
	<li>Vlek voor 3 min met haematoxyline (0,5% m/v), en daarna spoelen met leidingwater de ongebonden kleurstof uit dia's verwijderen.</li>
	<li>Spoel met 0,1%-zoutzuur in alcohol voor 1 s tot het verwijderen van de kleur van onbevlekt kernen.</li>
	<li>Dompel onder in 0,5% ammoniakoplossing gedurende 2 min. tot de achtergrond draait licht blauw.</li>
	<li>Vlek voor 1 min met 1% eosine.</li>
	<li>Dehydrateren voor 5 min met kleurovergang alcohol (70%, 80%, 90%, 95% en 100% alcohol).</li>
	<li>Schakel in xyleen en mount met harsachtige montage medium.</li>
	<li>Observeren en tellen van de levende neuronen van de kleuring per 0,125 mm in de middelste CA1 van de hippocampus en per 0.0352 mm,2 in de hersenschors bij een vergroting van 400 x met een optische Microscoop door een persoon die aan de proefopzet verblind.</li>
</ol>5. Congo rode kleuring voor keuring van Neuron Aβ last
<ol><li>Deparaffinize elke dia (20 min) met kleurovergang alcohol (100%, 95%, 90%, 80% en 70% alcohol) met gedestilleerd water in een zuurkast.</li>
	<li>Vlek voor 20 min met Congo rood werkoplossing (0,5 g Congo rood, 80 mL methylalcohol, 20 mL glycerinum).</li>
	<li>Spoel in gedestilleerd water gedurende 5 minuten.</li>
	<li>Snel onderscheid met alkalische 80% alcohol (0.2 g alcohol per 100 mL kaliumhydroxideoplossing) voor 3 s.</li>
	<li>Spoel tweemaal, elk voor 5 min met gedestilleerd water.</li>
	<li>Counterstain in Gill Haematoxyline gedurende 3 minuten.</li>
	<li>Spoel in leidingwater gedurende 2 minuten.</li>
	<li>Duik in het water van ammoniak (Voeg een paar druppels ammoniumhydroxide leidingwater en meng goed) voor 30 s of totdat de secties blauw draaien.</li>
	<li>Spoel in leidingwater voor 5 min.</li>
	<li>Dehydrateren met kleurovergang alcohol (70%, 80%, 90%, 95% en 100% alcohol).</li>
	<li>Schakel in xyleen en mount met harsachtige montage medium.</li>
	<li>Observeren en tellen van de cellen gekleurd met Congo rood bij een vergroting van 400 x, met een optische Microscoop door een persoon die aan de proefopzet verblind.</li>
</ol>6. zilvernitraat kleuring voor keuring van Neuron NFT vorming
<ol><li>Deparaffinize elke dia (20 min) met kleurovergang alcohol (100%, 95%, 90%, 80% en 70% alcohol) met gedestilleerd water in een zuurkast.</li>
	<li>Dompel onder in de 20% zilvernitraat, oplossing en overkoepelende agent voor 20 min in het donker.</li>
	<li>Wassen in gedistilleerd water tweemaal, 5 min. voor elke keer.</li>
	<li>Dompel onder in zilveren ammoniumhydroxide-oplossing. Ammoniumhydroxide-oplossing vallen 20% zilvernitraat, oplossing, en voeg toe totdat de oplossing van turbiditeit tot verduidelijking gaat. Gelijktijdig, roer de oplossing om met een roerstaaf gedurende 15 minuten en zet dan in de 1% verdunde ammoniak hydroxide gedurende 2 minuten.</li>
	<li>Plaats de dia in de ontwikkelingslanden werkoplossing gedurende 3-7 minuten totdat het zwarte blok in het axon kan worden waargenomen.</li>
	<li>Onderdompelen in de 0,1% verdunde ammoniakoplossing voor 1 min en vervolgens spoel met water voor 1 min.</li>
	<li>Vervreemden met 5% natrium thiosulfate gedurende 2 minuten en dan afspoelen met water gedurende 5 minuten.</li>
	<li>Dehydrateren met kleurovergang alcohol (70%, 80%, 90%, 95% en 100% alcohol).</li>
	<li>Schakel in xyleen en mount met harsachtige montage medium.</li>
	<li>Observeren en registreren van de cel voor zilvernitraat vlek bij een vergroting van 400 x met een optische Microscoop door een persoon die aan de proefopzet verblind.</li>
</ol>7. hippocampal Neuron ultrastructuur meting
<ol><li>Snijd de rat hippocampus CA1 in verschillende kubussen (1 x 1 x 1 mm3) en plaatst u in 2,5% Glutaaraldehyde gedurende 2 uur bij 4 ° C.</li>
	<li>Spoel de kubussen met PBS drie keer (pH 7,2, 10 min. voor elke keer).</li>
	<li>Corrigeer de kubussen in 1% osmic zuur gedurende 2 uur bij 4 ° C.</li>
	<li>Spoel de kubussen in dubbel gedestilleerd water 3 x (10 min voor elke keer).</li>
	<li>Dehydrateren met kleurovergang alcohol 70%, 50% en 90% (10 min voor elk), 100% twee keer (15 min voor elke keer).</li>
	<li>Vervangen door propyleenoxide twee keer (15 min voor telkens), propyleen oxide: hars op 1:1 (60 min voor telkens bij kamertemperatuur) en propyleen oxide: hars 1:4 (60 min voor telkens bij kamertemperatuur). Geniet in hars (120 min, bij kamertemperatuur).</li>
	<li>Insluiten in EPON 812 en polymeriseren (5 h/35 ° C, 5 h/60 ° C, 5 h/80 ° C).</li>
	<li>Snij de semithin secties (1 µm), vlek door methyleenblauw en lokaliseren onder de Microscoop.</li>
	<li>Vlekken van de ultra-dunne secties (50 nm) met uranyl-o-acetaat en lead citraat.</li>
	<li>Onderzoeken onder een elektronenmicroscoop JEM-1400 en verzamelen beelden.</li>
</ol>

<ol><li>Robinson, M., Lee, B. Y., Hane, F. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+Progress+in+Alzheimer%27s+Disease+Research%2C+Part+2%3A+Genetics+and+Epidemiology%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Alzheimers.+Dis%22%5BJournal%5D)">Recent Progress in Alzheimer's Disease Research, Part 2: Genetics and Epidemiology.</a> J. Alzheimers. Dis. , (2017).</li>
<li>Hane, F. T., Lee, B. Y., Leonenko, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+Progress+in+Alzheimer%27s+Disease+Research%2C+Part+1%3A+Pathology%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Alzheimers+Dis%22%5BJournal%5D)">Recent Progress in Alzheimer's Disease Research, Part 1: Pathology.</a> J. Alzheimers Dis. , (2017).</li>
<li>Perl, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuropathology+of+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Mt.+Sinai.+J.+Med%22%5BJournal%5D)">Neuropathology of Alzheimer's disease.</a> Mt. Sinai. J. Med. 77, 32-42 (2010).</li>
<li>Wu, X. G., Wang, S. S., Miao, H., Cheng, J. J., Zhang, S. F., Shang, Y. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scutellaria+barbata+flavonoids+alleviate+memory+deficits+and+neuronal+injuries+induced+by+composited+A%CE%B2+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Brain+Funct%22%5BJournal%5D)">Scutellaria barbata flavonoids alleviate memory deficits and neuronal injuries induced by composited Aβ in rats.</a> Behav. Brain Funct. 12, 33-43 (2016).</li>
<li>Guo, K., Wu, X. G., Miao, H., Cheng, J. J., Cui, Y. D., Shang, Y. Z. Regulation and mechanism of Scutellaria bartata flavonoids on apopotosis of cortical neurons and cytochondriome induced by composited Aβ. Chin Hosp Pharm J. 35, 1994-1999 (2015).</li>
<li>Guo, K., Miao, H., Wang, S. S., Cheng, J. J., Shang, Y. Z. <a target="_blank" href="http://manu28.magtech.com.cn/zgblsl/EN/10.3969/j.issn.1000-4718.2016.12.005">Scutellaria barbata flavonoids inhibits NFT aggregation and regulatory mechanism in rats induced by composited Aβ.</a> Chin. J. Pathophysio. 32, 2147-2156 (2016).</li>
<li>Hou, X. C., et al. Scutellaria Barbata flavonoids inhibit the brain's Aβ and NFT abnormal generation and affect the related enzymes expression in rats induced by composited Aβ. Chin J New Drugs. , Accepted (2017).</li>
<li>Zhao, H. X., Guo, K., Cui, Y. D., Wu, X. G., Shang, Y. Z. <a target="_blank" href="http://www.cjpp.net/EN/abstract/abstract18539.shtml">Effect of Scutellaria barbata flavonoids on abnormal changes of Bcl-2, Bax, Bcl-xL and Bak protein expression in mitochondrial membrane induced by composite Aβ25-35.</a> Chin J Pathophysiol. 30, 2262-2266 (2014).</li>
<li>Cheng, J. J., et al. Flavonoid extract from Scutellaria stem and leaf attenuates composited Aβ- induced memory impairment and apoptosis in rats. Chin.J. New Drugs. 25, 2627-2636 (2016).</li>
<li>Fang, F., Yan, Y., Feng, Z. H., Liu, X. Q., Wen, M., Huang, H. Study of Alzheimer's disease model induced multiple factors. Chongqing Med. 36, 146-151 (2007).</li>
<li>Regulations for the Administration of Affairs Concerning Experimental Animals. The Ministry of Science and Technology of the People's Republic of China. , 10-31 (1988).</li>
<li>Bao, X. M., Shu, S. Y. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBao%2C+XM+%22The+stereotaxic+atlas+of+the+rat+brain%22">The stereotaxic atlas of the rat brain</a>. , People's medical publishing house. (1991).</li>
<li>Morris, R. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/6471907">Developments of a water-maze procedure for studying spatial learning in the rats.</a> J. Neurosic. Methods. 11, 47-60 (1984).</li>
<li>Nunez, J. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2872979/">Morris Water Maze Experiment.</a> J. Vis. Exp. (19), e897(2008).</li>
<li>Yu, J. C., Liu, C. Z., Zhang, X. Z., Han, J. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acupuncture+improved+cognitive+impairment+caused+by+multi-infarct+dementia+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol.+%26+Behav%22%5BJournal%5D)">Acupuncture improved cognitive impairment caused by multi-infarct dementia in rats.</a> Physiol. & Behav. 86, 434-441 (2005).</li>
<li>Shang, Y. Z., Miao, H., Cheng, J. J., Qi, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+amelioration+of+total+flavonoids+from+stems+and+leaves+of+Scutellaria+baicalensis+Georgi+on+cognitive+deficits%2C+neuronal+damage+and+free+radicals+disorder+induced+by+cerebral+ischemia+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Biol.+Pharm.+Bull%22%5BJournal%5D)">Effects of amelioration of total flavonoids from stems and leaves of Scutellaria baicalensis Georgi on cognitive deficits, neuronal damage and free radicals disorder induced by cerebral ischemia in rats.</a> Biol. Pharm. Bull. 29, 805-810 (2006).</li>
<li>Song, H. R., Cheng, J. J., Miao, H. J., Shang, Y. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scutellaria+flavonoid+supplementation+reverses+ageing-related+cognitive+impairment+and+neuronal+changes+in+aged+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Inj%22%5BJournal%5D)">Scutellaria flavonoid supplementation reverses ageing-related cognitive impairment and neuronal changes in aged rats.</a> Brain Inj. 23, 146-153 (2009).</li>
<li>Wang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+RAS+inhibitors+Poricoic+Acid+ZG+and+Poricoic+Acid+ZH+attenuate+renal+fibrosis+via+a+Wnt%2F%CE%B2-Catenin+patheway+and+targeted+phosphorylation+of+smad3+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22J+Agric+Food+Chem%22%5BJournal%5D)">Novel RAS inhibitors Poricoic Acid ZG and Poricoic Acid ZH attenuate renal fibrosis via a Wnt/β-Catenin patheway and targeted phosphorylation of smad3 signaling.</a> J Agric Food Chem. 66, 1828-1842 (2018).</li>
<li>Pini, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain+atrophy+in+Alzheimer%27s+Disease+and+aging%5BTitle%5D)+AND+%22Ageing+Res.+Rev%22%5BJournal%5D)">Brain atrophy in Alzheimer's Disease and aging.</a> Ageing Res. Rev. 30, 25-48 (2016).</li>
<li>Ubhi, K., Masliah, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alzheimer%27s+disease%3A+recent+advances+and+future+perspectives%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Alzheimers+Dis%22%5BJournal%5D)">Alzheimer's disease: recent advances and future perspectives.</a> J. Alzheimers Dis. 33, 85-94 (2013).</li>
<li>Guo, K. <a target="_blank" href="NULL">Scutellaria barbata flavonoids inhibite NFTs aggregation, tau protein phosphorylation and the regulated mechanism of related enzymes in rats induced by composited Aβ</a>. , Master's thesis (2016).</li>
<li>Shang, Y. Z. <a target="_blank" href="NULL">Effects and Mechanism of Scutellaria Barbata Flavonoids on Rat's Memory Impairment Induced by Compound Aβ25-35</a>. , Doctoral Thesis (2013).</li>
<li>Zussy, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alzheimer%27s+disease+related+markers%2C+cellular+toxicity+and+behavioral+deficits+induced+six+weeks+after+oligomeric+amyloid-%CE%B2+peptide+injection+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Alzheimer's disease related markers, cellular toxicity and behavioral deficits induced six weeks after oligomeric amyloid-β peptide injection in rats.</a> PLoS One. 8, 1-20 (2013).</li>
<li>Walton, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aluminum+involvement+in+the+progression+of+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Alzheimers+Dis%22%5BJournal%5D)">Aluminum involvement in the progression of Alzheimer's disease.</a> J. Alzheimers Dis. 35, 7-43 (2013).</li>
<li>Neils-Strunjas, J., Groves-Wright, K., Mashima, P., Harnish, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dysgraphia+in+Alzheimer%27s+disease%3A+a+review+for+clinical+and+research+purposes%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Speech+Lang+Hear+Res%22%5BJournal%5D)">Dysgraphia in Alzheimer's disease: a review for clinical and research purposes.</a> J. Speech Lang Hear Res. 49, 1313-1330 (2006).</li>
<li>Morley, J. E., Farr, S. A., Kumar, V. B., Armbrecht, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+SAMP8+mouse%3A+a+model+to+develop+therapeutic+interventions+for+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Pharm+Des%22%5BJournal%5D)">The SAMP8 mouse: a model to develop therapeutic interventions for Alzheimer's disease.</a> Curr Pharm Des. 18, 1123-1130 (2012).</li>
<li>Puzzo, D., Gulisano, W., Palmeri, A., Arancio, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rodent+models+for+Alzheimer%27s+disease+drug+discovery%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opin+Drug+Discov%22%5BJournal%5D)">Rodent models for Alzheimer's disease drug discovery.</a> Expert Opin Drug Discov. 10, 703-711 (2015).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Het is algemeen bekend dat het verlies van leren en geheugen zijn belangrijke klinische symptomen bij AD patiënten2. De hier beschreven procedure is een in vivo methode om te studeren van AD; We hebben het aangepast van een eerder gepubliceerde protocol dat een medicijn om te verlichten geheugen tekorten en neuronale verwondingen in een rat model4getest. Ons protocol biedt belangrijke informatie te verkrijgen van waardevolle gegevens, alsmede een hoog overlevingspercentage van dieren die met succes model werking, geheugen tekorten, neuron verwondingen, Aβ last en NFT depositie, om na te bootsen AD (in het huidige experiment, de overlevingskans en succesvolle model tarief van operatie zijn meer dan 90%). Deze succesvolle model ratten werden gebruikt voor het meten van hun ruimtelijk geheugen met de Morris water maze test. Het plaatsende proces van navigatie gevonden dat de luminantie Aβ rat geheugen overname waardevermindering; kan veroorzaken de sonde trial gevonden dat de luminantie Aβ rat geheugen bewaren afnemen kan; en de omkering trial gevonden dat de luminantie Aβ kan resulteren in rat opnieuw leren bijzondere waardevermindering. Deze Morris water maze testgegevens laten zien dat de luminantie Aβ rat ruimtelijke geheugen kan veroorzaken. Globaal, injecteren van ratten intracerebroventricularly met Aβ25-35 in combinatie met AlCl3 en TGF-β1 gemaakt een haalbaar en geloofwaardig in vivo AD-achtige diermodel voor het laboratorium.
Eerdere studies hebben aangetoond dat de hersenvolume in AD patiënten 10% lager is dan die van gezonde personen is. Verschillende atrophies kunnen worden gevonden in de cerebrale hemisfeer door visuele waarneming. De mate van atrofie van de corticale is positief gerelateerd aan de geheugen bijzondere waardevermindering19. In de histologie verstoren het grote aantal neuron verlies en ernstige morfologische pathologie direct de geheugenfunctie in AD patiënten20. In de huidige studie, licht/elektronen microscopische observatie gevonden dat de ratten microinjected met luminantie Aβ dramatische neuropathologische veranderingen, met inbegrip van neuron verlies en verstoring van de neuronale en subcellular structuur weergegeven. Dit resultaat bevestigt de rat ruimtelijke geheugen stoornis geïnduceerd door luminantie Aβ, en is vergelijkbaar met de staat van AD patiënten.
Het is algemeen bekend dat de hersenen Aβ lasten en NFT aggregatie worden beschouwd als de meest belangrijke eigenschappen van de histopathogenic in AD. Ze kunnen vernietigen de neuronale structuur, verstoren de neurale signalen verstoren de neuronale functie en resulteren in geavanceerde dementie17. De huidige diermodel gevonden Aβ last en NFT aggregatie in de hersenen, die eens met de AD-patiënt staat. Daarom kunnen de huidige neuron verwondingen bij ratten geïnduceerd door luminantie Aβ neuronale pathologie en behandeling strategie van advertentie te studeren als een model worden gebruikt.
Hieronder vindt u voorbeelden van het screenen van de effecten van de drug in AD rat modellen: Zhao et al., meldde dat beide flavonoïden uit Scutellaria stengels en bladeren (SSF) en Scutellaria barbata (SBF) verzachten kan rat geheugen waardevermindering en apoptosis geïnduceerd door luminantie Aβ8,-9. Guo et al., ook gemeld dat SBF kunt remmen NFT aggregatie en overmatige fosforylatie van tau eiwit aan Ser199, Ser214, Ser202, Ser404 en Thr231 kant, en verminderen van GSK-3β, CDK5 en PKA eiwit en mRNA uitdrukking in luminantie Aβ behandelde ratten21 . Gelijktijdig, Shang et al., ook gemeld dat SBF de Astrocyt en microglia proliferatie, en lagere Aβ1-40, Aβ1-42 onderdrukken kunt, en β-site APP enzym 1 (BACE1) splijten mRNA uitdrukking in de hersenen van luminantie Aβ22 ratten. Op basis van de bovenstaande resultaten, is onze diermodel voordelig over andere AD-achtig model, waarbij meer neuronale functie en structuur stoornis.
Met betrekking tot andere AD-achtig model, één intracerebroventricular injectie van Aβ ratten kan rat geheugen tekorten, neuron verlies en neurogliocyte proliferatie, maar kan of kan niet Aβ en NFT afzetting23. Ratten blootgesteld aan hoge dosis Al lijken te hebben een hoog slagingspercentage, mimic AD en een kosteneffectieve diermodel, met geheugen bijzondere waardevermindering, neuron verlies, neurogliocyte proliferatie, en seniele plaque (SP) en NFT aggregatie in de hersenen. Echter de hoge dosis Al rat lever verwondingen kan veroorzaken en anorexia, vergezeld met daalde gewicht24. De leeftijd rat is een ander AD-achtig model. De leeftijd ratten aantonen dat geheugen tekorten, pathologische veranderingen van de neuronale structuur/onderbouw, lipofuscin afzetting, maar zonder Aβ last en NFT aggregatie. Ratten van meer dan 24 maanden oud worden beschouwd als leeftijd voor dit model, en dus het vergt een langere periode van voeden en daarom de kosten hoger17,25. SAMP8 en APP transgene muizen zijn de dichtstbijzijnde mimic AD en ze zijn de meest ideale modellen voor het onderzoeken van AD. Maar beide dierlijke modellen zijn hoger geprijsd en zijn beperkt tot gebruik in de laboratorium26,27. Vergeleken met de bovenstaande diermodellen, heeft ons model voor luminantie Aβ behandeld diermodel een lagere kosten en hoge prestaties, waardoor het een ideaal hulpmiddel voor de studie van AD.
Kortom, intracerebroventricular injectie van Aβ25-35 gecombineerd met AlCl3 en TGF-β1 aan ratten biedt een waardevolle in vivo diermodel voor een beter begrip van het ruimtelijke geheugen bijzondere waardevermindering, neuronale verwondingen Aβ last en NFT depositie onderliggende AD. Dit model biedt een snelle en relatief eenvoudige experimenteel protocol met een hoge dier overleven tarief en hoge model succesvol tarief voor operatie, evenals een hoge mate van overlapping, waaruit bleek te zijn economischer. De huidige diermodel is een effectieve model om na te bootsen AD en zelf verder kunt valideren door wordt gebruikt om na te bootsen verschillende andere ziekten.

Het is algemeen bekend dat AD een chronische en progressieve neurodegeneratieve ziekte, met geleidelijke geheugenverlies als de belangrijkste klinische syndroom is. In de algemene pathologie is er zenuwweefsel atrofie, neuron synapse verlies, alsmede neuronale subcellular structuur en functie aandoeningen, die allemaal bij de ontwikkeling en de klinische manifestatie van AD1,2 betrokken zijn. Het is gemeld dat wanneer dieren geïnjecteerd met Aβ intracerebroventricularly waren, sommige neurotoxische gebeurtenissen in de hersenen waarbij neuron verlies, verstoring van de calcium-homeostase, neuron apoptosis en reactieve zuurstof soorten overproductie3. Echter meerdere factoren betrokken zijn bij de pathogenese van AD en is daarom essentieel om een beter model van AD.
Een gedetailleerd protocol wordt hier beschreven voor de vaststelling van een in vivo mimic advertentie model door intracerebroventricular injectie van Aβ25-35 en AlCl3, gecombineerd met anterodorsal thalamus nucleus injectie van RHTGF-β1 ratten. Deze rat modelhighly bootst menselijke neuronale functie en histopathogenesis van advertentie, met inbegrip van geheugen bijzondere waardevermindering, neuron verlies en schade van de structuur, apoptosis, intracellulaire Aβ last en NFT aggregatie4,5,6 , 7 , 8 , 9. the AlCl3 de gedeponeerde Aβ voorkomt vorming van oplosbare Aβ, en de RHTGF-β1 kunt gedeponeerde Aβ productie te bevorderen en vergemakkelijken van AD voorval10. Deze aanval van verschillende factoren kan het neuron is in overeenstemming met de multi pathogenese van AD.
Het hele experiment overspannen 86 dagen: afbeelding 1 ziet u een tijdlijn van het experimentele ontwerp, met de punt van de tijd van dierlijke chirurgie, diermodel screening, dierlijke ruimtelijke geheugentest en bereiding van de monsters. Op de eerste dag van de operatie, was RHTGF-β1 microinjected in de anterodorsal thalamus nucleus. Op de tweede dag van de operatie, waren Aβ25-35 en AlCl3 microinjected in het laterale ventrikel dagelijks voor 14 opeenvolgende dagen in de ochtend en 5 opeenvolgende dagen in de middag, respectievelijk. Alle ratten mochten herstellen voor 45 dagen na de operatie. De Morris water maze werd gebruikt om het scherm voor succesvolle model ratten met geheugen bijzondere waardevermindering en te beoordelen van ratten ruimtelijke geheugen. De ratten onderging 4 opeenvolgende dagen van water maze training met 2 proeven per dag, en op dag 4 van de opleiding, de ratten werden geëvalueerd met de Morris water maze prestaties geheugen bijzondere waardevermindering heeft ondergaan. Alle ratten bleef 37 dagen na de screening diermodel worden gevoed. Het ruimtelijke geheugen van ratten werd getest in de Morris water maze meer dan 7 opeenvolgende dagen, vanaf dag 79 tot 85 dag na de operatie. Alle ratten werden opgeofferd door onthoofding op dag 86 voor de bereiding van de monsters van de hersenen.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56157/56157fig1.jpg"> Figuur 1. Tijdlijn van de proefopzet. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56157/56157fig1large.jpg">Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.</a>

<table><tbody><tr><td>Sprague-Dawley rat</td><td>Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd, China</td><td>SCXK(Jing) 2012-0001</td><td>300&ndash;350 g</td></tr><tr><td>Morris water maze</td><td>Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical Research Institute, China</td><td>Nee</td><td></td></tr><tr><td>Movable small animal anesthesi</td><td>RWD Life Science Co., Ltd. China</td><td>R580</td><td></td></tr><tr><td>Brain Stereotaxic Apparatus</td><td>RWD Life Science Co., Ltd. China</td><td>68001</td><td></td></tr><tr><td>Flexible bone drill</td><td>Shanghai Soft Long Technology Development Co., Ltd. China</td><td>BW-sD908</td><td></td></tr><tr><td>Transmission electron microscope</td><td>Japan Co., Ltd. Japan</td><td>JEM-1400</td><td></td></tr><tr><td>Two channel microinjection pump</td><td>RWD Life Science Co., Ltd. China</td><td>RWD202</td><td></td></tr><tr><td>EM microtome</td><td>Hitachi Co., Ltd. China</td><td>H-7650</td><td></td></tr><tr><td>Dummy cannula</td><td>RWD Life Science Co., Ltd. China</td><td>62001</td><td>0.D.0.64&times;I.D.0.0.45mm/M3.5 http://www.rwdls.com/English/Product/3985102014.html</td></tr><tr><td>Guide cannula</td><td>RWD Life Science Co., Ltd. China</td><td>62101</td><td>0.D.0.40mm/M3.5</td></tr><tr><td>Internal cannula</td><td>RWD Life Science Co., Ltd. China</td><td>62201</td><td>0.D.0.41&times;I.D.0.25mm/<img alt="Special" src="/files/ftp_upload/56157/special01.jpg"/>M3.5</td></tr><tr><td>Tighten the nut</td><td>RWD Life Science Co., Ltd. China</td><td>62501</td><td>0.D.5.5mm/L7.5mm/M3.5</td></tr><tr><td>Fixing screw</td><td>RWD Life Science Co., Ltd. China</td><td>62514</td><td>M1.2&times;L2.0mm(100BAO)</td></tr><tr><td>The screwdriver</td><td>RWD Life Science Co., Ltd. China</td><td>62999</td><td>45*1mm</td></tr><tr><td>PE Tubing</td><td>RWD Life Science Co., Ltd. China</td><td>62302</td><td></td></tr><tr><td>Amyloid beta 25-35</td><td>Sigma Aldrich Co. USA</td><td>SCP0002-5MG</td><td></td></tr><tr><td>Recombinant human transforming growth factor-&beta;1</td><td>PeproTech Inc. USA</td><td>100-21</td><td></td></tr><tr><td>Aluminium trichloride</td><td>Tianjin Kemiou Chemical Reagent Co., Ltd. China</td><td>3011080</td><td></td></tr><tr><td>Congo red</td><td>Tianjin Kemiou Chemical Reagent Co., Ltd. China</td><td>3010016</td><td></td></tr><tr><td>Silver nitrate</td><td>Sinopharm Chcmical Reagent Co., Ltd. China</td><td>20150720</td><td></td></tr><tr><td>Denture base material</td><td>Shanghai New Century Dental Materials Co., Ltd. China</td><td>20170609</td><td></td></tr></tbody></table>

oprichting van een waardevolle mimic de ziekte van alzheimer in diermodel van het rat door intracerebroventricular injectie van luminantie bèta amyloid proteïne

Establishment of a Valuable Mimic of Alzheimer's Disease in Rat Animal Model by Intracerebroventricular Injection of Composited Amyloid Beta Protein

De ziekte van Alzheimer (AD) is een onomkeerbaar, progressieve hersenen ziekte die langzaam geheugen vernietigt en gaat vergezeld van neuron verlies en structuur wijzigen. Met de toename van AD patiënten wereldwijd, is de pathologie en behandeling van de ziekte een focus in de internationale farmaceutische industrie geworden. De oprichting van het dierlijk model na te bootsen AD in het laboratorium is dus van groot belang.
Hier beschrijven we een gedetailleerd protocol voor de vaststelling van een nabootsen van AD in een rat dier model al intracerebroventricular injectie van amyloid beta eiwit 25-35 (Aβ25-35) gecombineerd met aluminium titaantrichloride (AlCl3) en de thalamus nucleus anterodorsal injectie van recombinante menselijke groeifactor-β1 (RHTGF-β1) om ratten te transformeren. De verwante markeringen van AD werden gemeten, met inbegrip van: ruimtelijk geheugen, neuronale structuur en substructuur neuronale Aβ en neurofibrillary klitten (NFT) productie. Dit model rat toont ruimtelijke geheugen bijzondere waardevermindering, neuronale structuur en substructuur pathologische veranderingen neuron intracellulaire Aβ last en NFT aggregatie, en biedt een nauwe nabootsen van de neuronale structuur en functie wanorde die van klinische AD patiënten. Dus, de gepresenteerde AD rat modelprovides een waardevolle in vivo -instrument voor het verkennen van de neuronale functie, neuronale pathologie en drug screening van AD.

Dit is een protocol om na te bootsen van de ziekte van Alzheimer bij ratten door evaluatie van ruimtelijke geheugen verzwakking, neuronale pathologische veranderingen, neuronale bèta amyloid proteïne (Aβ) lasten en neurofibrillary klitten aggregatie, geïnduceerd door de injectie van Aβ25-35 gecombineerd transformeren met aluminium titaantrichloride en recombinante menselijke groeifactor-β1.

Oprichting van een waardevolle Mimic de ziekte van Alzheimer in diermodel van het Rat door Intracerebroventricular injectie van luminantie bèta Amyloid proteïne

Alzheimer&#39;s disease (AD) is an irreversible, progressive brain disease that slowly destroys memory and is accompanied by neuron loss and structure ...

Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van kernvragen binnen het vakgebied van neurodegeneratieve ziekten, zoals de ziekte van Alzheimer. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat het de ziekte van Alzheimer nabootst in het ratmodel door intracerebroventriculaire injectie van A-beta 25 tot 35, in combinatie met aluminiumtrichloride en recombinant menselijk transforming growth factor bèta één. Daarnaast biedt het een snel en relatief eenvoudig experimenteel protocol met een hoge overlevingskans van de dieren, een hoog succespercentage van het model, alsmede een hoge reproduceerbaarheid, wat economischer is gebleken.De implicaties van deze techniek strekken zich uit tot het screenen van de werkzaamheid van geneesmiddelen tegen AD, omdat dit diermodel geheugenstoornissen en neuronale verstoringen vertoont die nauw aansluiten bij de toestand van AD-patiënten. De procedure zal worden gedemonstreerd door Cheng Jianjun, een technicus uit mijn laboratorium. Begin bij een geanestheseerde rat met het afknippen van de vacht op de vertex van de kop met een chirurgische schaar en desinfecteer vervolgens met iodofoor.Maak vervolgens met chirurgische bistouries en scharen een incisie in de hoofdhuid langs de mediane longitudinale calvaria. Scheid het subcutane weefsel en de fascia, veeg het schedeldak af met 0,3% waterstofperoxide en markeer het bregma met een markerpen. Markeer daarna drie punten: de anterodorsale thalamuskern voor het injecteren van RHTGF beta one en het vastzetten van één schroef, het gebied van het laterale ventrikel, of LV, voor het injecteren van A-beta 25-35 en AICI3, en tot slot de tweede plaats voor het vastzetten van de schroef.Boor voorzichtig drie gaten van één millimeter diameter met een flexoire botboor op de drie gemarkeerde punten op de schedel. Stop de bloeding en reinig het schedeloppervlak herhaaldelijk met steriel droog watten. Plaats vervolgens een naald, verbonden met de microinjectiepomp, tot een diepte van 4,2 millimeter in de hersenen en injecteer voorzichtig één microliter RHTGF beta one in het ad-gebied.Houd de micro-injectienaald twee minuten na injectie op zijn plaats. Trek deze vervolgens langzaam uit. Bevestig de twee schroeven in de schedel, op de eerder gemarkeerde punten, met een kleine schroevendraaier.Na het plaatsen van de schroeven wordt het systeem voor canule-implantatie geassembleerd door eerst de dummy-canule in de geleidecanule te plaatsen, nadat deze 24 uur lang is gedesinfecteerd door onderdompeling in 75% alcohol. Plaats vervolgens de geleidecanule van roestvrij staal in de hersenen tot een diepte van 4,6 millimeter in het LV-gebied via het gat in de schedel, met behulp van een canulehouder op het stereotaxische apparaat van de rat. Meng daarna het kunstgebitbasis-materiaal met kunstgebitbasis-water in een verhouding van 1,5 gram per één milliliter.Breng de pasta aan om de plastic voet van de geleidecanule en de twee schroeven voor het immobiliseren van de geleidecanule te bedekken. Dek de gehele huidincisie af om een huidinfectie te voorkomen. Trek de volgende dag de dummycanule eruit en voer de interne canule in de geleidecanule in.Draai de fixeschroef aan om de interne canule te immobiliseren. Plaats de polyethyleenbuis die de microinjectiepomp met de interne canule verbindt en stel de injectiesnelheid in op 1 µL per minuut. Microinjecteer de A-beta 25-35 in de LV. Wacht vijf minuten na afloop van de injectie en trek de interne canule voorzichtig uit.Plaats vervolgens de dummy-canule opnieuw in de geleidecanule. Verwijder op dag 15 na de operatie het canule-implantatiesysteem door het uitgeharde kunstgebitmateriaal met een chirurgische schaar en pincet te verwijderen en de wond te desinfecteren met iodofoor. Vul tot slot het gat in de schedel op met botcement en hecht de huid met een eenvoudige onderbroken hechtingstechniek.Begin met het zwart kleuren van het poolwater met een zwarte voedingskleurstof. Houd de waterdiepte op 31,5 centimeter en de temperatuur op 23 plus of min één graad Celsius. Plaats vervolgens een circulair, transparant plexiglas platform van 1,5 centimeter onder het wateroppervlak.Verdeel vervolgens het bassin met denkbeeldige lijnen in vier gelijke kwadranten voor de verzameling van beschrijvende gegevens. Plaats het verborgen platform in het eerste kwadrant, of Q1, van het waterdoolhof. Leg ten slotte het zwemgedrag van de rat vast met een videocamera boven het waterdoolhof, gekoppeld aan een computergestuurde grafische analyse-software.Deze resultaten geven aan dat de sham-geopereerde groep ratten altijd vrij zwom, terwijl de ratten uit de groep die behandeld was met samengestelde A-beta in de Morris water maze altijd rond de rand van het bassin zwommen als onderdeel van adaptief zwemgedrag. Gedurende de vier dagen van screening op ratten met een geheugenstoorningsmodel vertoonden alle ratten een progressieve afname in de tijd die nodig was om het verborgen platform te vinden. Bovendien waren de latenties van de groep die behandeld was met samengestelde A-beta om het verborgen platform te vinden significant langer dan die van de sham-geopereerde groep, wat aantoont dat samengestelde A-beta de stoornis in het opnieuw aanleren van het geheugen bij ratten kan versterken.In de proef voor geheugenretentie na één dag vertoonde de gecombineerde A-beta-behandelde groep een kortere zwemtijd, een kleinere zwemafstand en een lager aantal oversteken binnen 60 seconden, vergeleken met de schijngeopereerde groep. Tot slot was, naast de pathologische veranderingen, het aantal neuronen in de hippocampus en de cerebrale cortex ook significant verminderd in de gecombineerde A-beta-behandelde groep vergeleken met de schijngeopereerde groep. Zodra men deze techniek beheerst, kan deze in 20 tot 30 minuten worden voltooid indien deze correct wordt uitgevoerd.Tijdens het uitvoeren van deze procedure is het belangrijk om ervoor te zorgen dat de geleide canule niet loskomt van de hersenschroef. Na deze procedure kunnen andere methoden, zoals een doolhoftest, worden uitgevoerd om aanvullende vragen te beantwoorden, bijvoorbeeld of het gesimuleerde AD-model succesvol was. Na de ontwikkeling van deze techniek werd de weg vrijgemaakt voor onderzoekers in het veld van de neurowetenschappen om neurodegeneratieve ziekten in vivo te bestuderen.Na het bekijken van deze video zou u een goed begrip moeten hebben van hoe u succesvolle mimic-AD-diermodellen opzet via intracerebroventriculaire injectie van A-beta 25 tot 35 in combinatie met aluminiumtrichloride en recombinant humaan transforming growth factor beta one bij ratten. Vergeet niet dat werken met polymethylmethacrylaat extreem gevaarlijk kan zijn, en dat er altijd voorzorgsmaatregelen moeten worden genomen, zoals het dragen van maskers en handschoenen, bij het uitvoeren van deze procedure.

establishment-valuable-mimic-alzheimer-s-disease-rat-animal-model

Research

JoVE Journal

Behavior

Gedrag

Een van de pathologische kenmerken van AD is de vorming van amyloïde eiwit β positief neuritische plaques. In dit protocol beschrijven we twee methoden om seniele plaques op te sporen in transgene muizen die model AD: immunohistochemische detectie met behulp van de ABC-en DAB-methode en fluorescerende detectie met behulp van thioflavin S kleuringsmethode.

Detectie van neuritische plaques in de ziekte van Alzheimer Mouse Model

This video demonstrates the procedure of injecting monomeric amyloid peptides into the forebrain of adult zebrafish to generate amyloid toxicity, mimicking the neuronal damage seen in Alzheimer's...

Establishing an Alzheimer&#39;s Disease Model in Zebrafish Brain Through Amyloid Peptide Injection

This video demonstrates the procedure for injecting amyloid-beta peptides, aluminum chloride, and a neuroinflammatory growth factor, which collectively aids in toxic amyloid plaque formation in the hippocampus region. This causes memory impairment in the rat, characteristic of Alzheimer's disease.

Establishing an Alzheimer's Disease Rat Model Through an Amyloid-Beta Peptide Injection

This video demonstrates the precise stereotaxic infusion of amyloid beta into the dentate gyrus to establish a mouse model of Alzheimer's disease. Accurate coordinate determination and controlled delivery of amyloid beta proteins result in neuronal degradation, disrupting memory processing and contributing to Alzheimer's disease development.

Direct Stereotaxic Brain Infusion of Amyloid-Beta Proteins for an Alzheimer's Disease Model

Hier presenteren we een protocol voor directe stereotactische herseninfusie van amyloid-beta. Deze methodologie biedt een alternatief in vivo muismodel om de kortetermijneffecten van amyloid-beta op hersenneuronen aan te pakken.

Stereotaxische Infusion van Oligomere amyloid-beta in de Mouse Hippocampus

De co-morbide ziekte van Alzheimer (AD) en beroerte aandoening in een nieuw model te onderzoeken, zijn drie gedrag taken beschreven die zowel motorische controle en cognitieve gedrag te evalueren. Deze taken zijn onder andere de bundel-walk taak, cilinder taak en Morris water doolhof.

Motor en hippocampus Dependent Ruimtelijke Learning and Reference geheugen Assessment in een transgeen ratmodel van de ziekte van Alzheimer met Stroke

De amyloid-β (Aß) -injected diermodel kan de toediening van een bepaalde hoeveelheid en de soort van Ap-fragmenten en vermindert de individuele verschillen binnen elke studiegroep. Dit protocol beschrijft de intracerebroventriculaire (ICV) injectie van Ap zonder stereotactische instrumenten, waardoor de productie van Alzheimer-achtige gedragsafwijkingen bij normale muizen.

Intracerebroventriculaire Injectie van amyloid-β peptiden in normale muizen om acuut induceren Alzheimer-achtige cognitieve tekorten

Om de effecten van Aβo in vivo te bestuderen, ontwikkelden we een model op basis van herhaalde hippocampische infusies van oplosbare Aβo gekoppeld aan continue infusie van Aβo-antilichaam (6E10) in de hippocampus met behulp van osmotische pompen om het neurotoxische effect van Aβo tegen te gaan.

Neurodegeneratie in een diermodel van chronische Amyloid-beta oligomeer infusie wordt tegengewerkt door antilichaambehandeling doordrongen osmotische pompen

We ontwikkelden een methode voor kwantitatieve 3D in silico modellering (q3DISM) van cerebrale amyloid-β (Aß) fagocytose door mononucleaire fagocyten in diermodellen van de ziekte van Alzheimer. Deze methode kan worden gegeneraliseerd voor de kwantificering van vrijwel elke fagocytische gebeurtenis in vivo.

kwantitatieve 3D In Silico Modeling (q3DISM) van cerebrale amyloid-beta Phagocytosis in diermodellen van de ziekte van Alzheimer

Dit protocol illustreert een cel inkapseling methode door snelle fysieke gelatie van alginaat om cellen te immobiliseren. Verkregen microbeads laten gecontroleerde en aanhoudende secretie van amyloid-β toe na verloop van tijd en kunnen worden gebruikt om de effecten van uitgescheiden amyloid-β in in vitro en in vivo modellen te bestuderen.

Vervaardiging van amyloid-β-afscheidende alginaat Microbeads voor gebruik bij de modellering van de ziekte van Alzheimer

Leer een betrouwbaar diermodel van de ziekte van Alzheimer opzetten bij ratten door intracerebroventriculaire injectie van Aβ25-35 met aluminiumtrichloride. Deze methode maakt onderzoek naar geheugenstoornissen en neuronale pathologie mogelijk.

Oprichting van een waardevolle Mimic de ziekte van Alzheimer in diermodel van het Rat door Intracerebroventricular injectie van luminantie bèta Amyloid proteïne (Video) | JoVE Journal

Oprichting van een waardevolle Mimic de ziekte van Alzheimer in diermodel van het Rat door Intracerebroventricular injectie van luminantie bèta Amyloid proteïne

Meer video's verkennen