Name: Oplosbaarheid van hydrofobe bestanddelen in waterige oplossing met behulp van combinaties van het zelf monteren van Peptide en aminozuur (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-09-20T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 8 s
Description: Leer hoe je hydrofobe verbindingen oplost in waterige oplossingen met zelf-assemblerende peptiden en aminozuren. Deze methode verbetert de oplosbaarheid zonder giftige co-oplosmiddelen te gebruiken.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk wordt ondersteund door de Canadese instituten van gezondheidsonderzoek, exploitatiesubsidies voor MOP-42546 en MOP-119514.

1. bereiding van de oplossingen van de Amino Acid <ol><li>voorbereiden en label twee 50 mL conische centrifuge buizen voor elk aminozuur (een voor elk voor beide &#34; lage &#34; en &#34; hoge &#34; concentraties).</li>
	<li>Bereiden een grote 2 L kolf met gezuiverde water (18.2 MΩ·cm bij 25 ° C).</li>
	<li>Berekent het bedrag van elk aminozuur (in gram) te bereiken van de gewenste concentraties, en de juiste hoeveelheid aminozuur wegen in hun respectieve 50 mL centrifuge buizen met behulp van een spatel. 
	Opmerking: Voor de &#34; hoge &#34; concentratie van de twee negatief geladen aminozuren, PBS wordt gebruikt in plaats van water. We kunnen niet hun concentraties als gevolg van hun oplosbaarheid in laag water, en het gebruik van PBS in plaats van water helpt om de lage pH verhogen. Bovendien werden de berekeningen van de concentratie verkregen met behulp van een eindvolume van 40 mL voor elke aminozuur-oplossing. Alle aminozuur concentraties zijn beschreven in tabel 3. Zorg ervoor dat te spoelen van de spatel tussen aminozuren om verontreiniging te voorkomen. Het is raadzaam een water spoelen, gevolgd door af te vegen met 70% ethanol.</li>
	<li>Voeg toe 40 mL van gezuiverd water (of PBS) in elke 50 mL-buis met behulp van een precisiepipet serologische. Cap buizen en vortex of schud krachtig tot het is opgelost. Water bad ultrasoonapparaat (kamertemperatuur, 130 W, 40 kHz) kan ook worden gebruikt om te helpen in het proces van de oplosbaarheid. 
	Opmerking: De volgende aminozuur oplossingen zijn gevoelig voor licht en moet worden bedekt met aluminiumfolie: tryptofaan, fenylalanine, en tyrosine (die bestaan uit aromatische ring-achtige structuren) en cysteïne (reactieve - SH groeperen).</li>
</ol> 2. Bereiding van de oplossingen van SAP-AA <ol><li>bereiden 20 mL Scintillatie flesjes voor het het zelf samenstellen van peptiden. Voor een bepaalde zelfassemblerende peptide, bereiden een flesje per bereid aminozuur oplossing (elke combinatie zal worden gemaakt in een aparte flesje).</li>
	<li>Met behulp van een hoge prestaties analytische balans (met een leesbaarheid tot 0.1 mg of minder), wegen ongeveer 1 ± 0,2 mg van peptide in de bodem van elke flacon. Na het wegen van het GLB en het exacte gewicht van de peptide op de cap.</li>
	<li>Het juiste volume van aminozuur oplossing (bereid in afdeling 1) Pipetteer in elke flacon met peptide, om te komen tot de gewenste concentratie van het zelf monteren van peptide (0,1 mg/mL voor lange peptides met een lengte van 16 aminozuren, of 0,2 mg/mL voor Kortere peptides met een lengte van 8 aminozuren).</li>
	<li>Sonicate gedurende 10 minuten in een water bad ultrasoonapparaat (130 W, 40 kHz) bij kamertemperatuur, ervoor te zorgen de oplossingen binnen de flesjes worden volledig ondergedompeld in het waterbad.</li>
</ol> 3. Voorbereiding van Drug-DMSO of Drug-Ethanol voorraad oplossingen <ol><li>combineren 1 mg van drug (in dit geval, curcumine met 100% DMSO), en een ander 1 mg met 100% ethanol maken twee stamoplossingen. 
	Opmerking: We toegevoegd 200 µL van DMSO en 400 µL ethanol te maken van DMSO-curcumine en ethanol-curcumine voorraden die 5 mg/mL en 2,5 mg/mL, respectievelijk als gevolg van verschillende oplosbaarheid in elke oplosmiddel werden; het is echter belangrijk op te merken dat de concentratie van de voorraad moet worden aangepast afhankelijk van de hydrofobe drug van belang. Factoren zoals drug oplosbaarheid en effectieve biologische concentratie zijn belangrijk bij het bepalen van deze waarde. Ook, houd er rekening mee dat de voorraad zal worden verdund 100-fold en 50-fold in DMSO en ethanol formuleringen, respectievelijk, in combinatie met SAP-AA oplossingen (zie punt 4). Het kan zijn voorkeur voor te bereiden van een groter volume van voorraad afhankelijk van het aantal formuleringen vereist &#8211; in dit geval meer dan 1 mg drug zou worden gebruikt. De voorraad kan worden achtergelaten bij-20 ° C; dooi op ijs en vortex vóór gebruik.</li>
	<li>Vortex flesjes voor 15 s tot volledig los van de drug.</li>
</ol> 4. Voorbereiding van drugs formuleringen <ol><li>voorbereiden duidelijk, 1,5 mL microcentrifuge buizen voor elke formulering. Zorg ervoor dat u label buizen met de beoogde zelf monteren peptide, aminozuur (en concentratie), en co-solvent.</li>
	<li>Voeg toe 10 µL van Drug-DMSO voorraad of 20 µL Drug-Ethanol voorraad buizen van passende microcentrifuge.</li>
	<li>Toevoegen 990 µL van SAP-AA zure oplossingen naar de juiste label microcentrifuge buizen met Drug-DMSO voorraad en 980 µL naar scripts die Drug-Ethanol voorraad. Dit levert 1 mL drugs formuleringen met 1% DMSO of 2% ethanol. 
	Opmerking: De uiteindelijke concentratie van alle curcumine formuleringen was 0,5 mg/mL volgens het protocol. Nogmaals, dit zal variëren wanneer met behulp van andere hydrofobe verbindingen en/of beginnen met een verschillende voorraad concentratie (zie stap 3.1)</li> <li>Vortex krachtig gedurende 30 s en toestaan van formuleringen te rusten voor 30 min.</li></ol>
 5. Oplosbaarheid testen <ol><li>na de rusttijd, vortex krachtig nogmaals voor 30 s.</li>
	<li>Centrifugeer de formuleringen bij 14,220 x g gedurende 1 min.</li>
	<li>Analyseren van de onderkant van de microcentrifuge-buizen voor neerslag (door visualisatie).</li>
</ol>

<ol><li>Holmes, T. C., de Lacalle, S., Su, X., Liu, G., Rich, A., Zhang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extensive+neurite+outgrowth+and+active+synapse+formation+on+self-assembling+peptide+scaffolds%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.+S.+A%22%5BJournal%5D)">Extensive neurite outgrowth and active synapse formation on self-assembling peptide scaffolds.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 97 (12), 6728-6733 (2000).</li>
<li>Davis, M. E., Motion, J. P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Injectable+self-assembling+peptide+nanofibers+create+intramyocardial+microenvironments+for+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Injectable self-assembling peptide nanofibers create intramyocardial microenvironments for endothelial cells.</a> Circulation. 111 (4), 442-450 (2005).</li>
<li>Matson, J. B., Stupp, S. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-assembling+peptide+scaffolds+for+regenerative+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Commun%22%5BJournal%5D)">Self-assembling peptide scaffolds for regenerative medicine.</a> Chem. Commun. 48 (1), 26-33 (2012).</li>
<li>Tatman, P. D., Muhonen, E. G., Wickers, S. T., Gee, A. O., Kim, E., Kim, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-assembling+peptides+for+stem+cell+and+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Biomater.+Sci%22%5BJournal%5D)">Self-assembling peptides for stem cell and tissue engineering.</a> Biomater. Sci. 4 (4), 543-554 (2016).</li>
<li>Keyes-Baig, C., Duhamel, J., Fung, S. -Y., Bezaire, J., Chen, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-assembling+peptide+as+a+potential+carrier+of+hydrophobic+compounds%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Chem.+Soc%22%5BJournal%5D)">Self-assembling peptide as a potential carrier of hydrophobic compounds.</a> J. Am. Chem. Soc. 126 (24), 7522-7532 (2004).</li>
<li>Kumar, P., Pillay, V., Modi, G., Choonara, Y. E., du Toit, L. C., Naidoo, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-assembling+peptides%3A+implications+for+patenting+in+drug+delivery+and+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Recent+Pat.+Drug+Deliv.+Formul%22%5BJournal%5D)">Self-assembling peptides: implications for patenting in drug delivery and tissue engineering.</a> Recent Pat. Drug Deliv. Formul. 5 (1), 24-51 (2011).</li>
<li>Wang, H., Yang, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Short-peptide-based+molecular+hydrogels%3A+novel+gelation+strategies+and+applications+for+tissue+engineering+and+drug+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Nanoscale%22%5BJournal%5D)">Short-peptide-based molecular hydrogels: novel gelation strategies and applications for tissue engineering and drug delivery.</a> Nanoscale. 4, 5259-5267 (2012).</li>
<li>French, K. M., Somasuntharam, I., Davis, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-assembling+peptide-based+delivery+of+therapeutics+for+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Drug+Deliv.+Rev%22%5BJournal%5D)">Self-assembling peptide-based delivery of therapeutics for myocardial infarction.</a> Adv. Drug Deliv. Rev. 96, 40-53 (2016).</li>
<li>Zhang, S., Holmes, T., Lockshin, C., Rich, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spontaneous+assembly+of+a+self-complementary+oligopeptide+to+form+a+stable+macroscopic+membrane%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.+S.+A%22%5BJournal%5D)">Spontaneous assembly of a self-complementary oligopeptide to form a stable macroscopic membrane.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 90 (8), 3334-3338 (1993).</li>
<li>Bowerman, C. J., Nilsson, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-assembly+of+amphipathic+%CE%B2-sheet+peptides%3A+insights+and+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Biopolymers%22%5BJournal%5D)">Self-assembly of amphipathic β-sheet peptides: insights and applications.</a> Biopolymers. 98 (3), 169-184 (2012).</li>
<li>Amidon, G., Lennernäs, H., Shah, V., Crison, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+theoretical+basis+for+a+biopharmaceutic+drug+classification%3A+the+correlation+of+in+vitro+drug+product+dissolution+and+in+vivo+bioavailability%5BTitle%5D)+AND+%22Pharm.+Res%22%5BJournal%5D)">A theoretical basis for a biopharmaceutic drug classification: the correlation of in vitro drug product dissolution and in vivo bioavailability.</a> Pharm. Res. 12 (3), 413-420 (1995).</li>
<li>Shi, Y., Porter, W., Merdan, T., Li, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+advances+in+intravenous+delivery+of+poorly+water-soluble+compounds%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opin.+Drug+Deliv%22%5BJournal%5D)">Recent advances in intravenous delivery of poorly water-soluble compounds.</a> Expert Opin. Drug Deliv. 6 (12), 1261-1282 (2009).</li>
<li>Bawa, R., Fung, S. -Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-assembling+peptide-based+nanoparticles+enhance+cellular+delivery+of+the+hydrophobic+anticancer+drug+ellipticine+through+caveolae-dependent+endocytosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nanomedicine%22%5BJournal%5D)">Self-assembling peptide-based nanoparticles enhance cellular delivery of the hydrophobic anticancer drug ellipticine through caveolae-dependent endocytosis.</a> Nanomedicine. 8 (5), 647-654 (2012).</li>
<li>Liu, J., Zhang, L., Yang, Z., Zhao, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Controlled+release+of+paclitaxel+from+a+self-assembling+peptide+hydrogel+formed+in+situ+and+antitumor+study+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Nanomed%22%5BJournal%5D)">Controlled release of paclitaxel from a self-assembling peptide hydrogel formed in situ and antitumor study in vitro.</a> Int. J. Nanomed. 6, 2143-2153 (2011).</li>
<li>Wu, Y., Sadatmousavi, P., Wang, R., Lu, S., Yuan, Y., Chen, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-assembling+peptide-based+nanoparticles+enhance+anticancer+effect+of+ellipticine+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Nanomed%22%5BJournal%5D)">Self-assembling peptide-based nanoparticles enhance anticancer effect of ellipticine in vitro and in vivo.</a> Int. J. Nanomed. 7, 3221-3233 (2012).</li>
<li>Fung, S. Y., Yang, H., et al. <a target="_blank" href="http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/adfm.200800860/abstract">Self-Assembling Peptide as a Potential Carrier for Hydrophobic Anticancer Drug Ellipticine: Complexation, Release and In Vitro Delivery.</a> Adv. Funct. Mater. 19 (1), 74-83 (2009).</li>
<li>Fung, S. -Y., Oyaizu, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+potential+of+nanoscale+combinations+of+self-assembling+peptides+and+amino+acids+of+the+Src+tyrosine+kinase+inhibitor+in+acute+lung+injury+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">The potential of nanoscale combinations of self-assembling peptides and amino acids of the Src tyrosine kinase inhibitor in acute lung injury therapy.</a> Biomaterials. 32 (16), 4000-4008 (2011).</li>
<li>Pacheco, S., Kanou, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Formulation+of+hydrophobic+therapeutics+with+self-assembling+peptide+and+amino+acid%3A+A+new+platform+for+intravenous+drug+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Control.+Release%22%5BJournal%5D)">Formulation of hydrophobic therapeutics with self-assembling peptide and amino acid: A new platform for intravenous drug delivery.</a> J. Control. Release. 239, 211-222 (2016).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

In de formulering procedure zijn er verschillende kritische stappen en punten te overwegen bij het oplossen. Ten eerste, als we met diverse componenten en concentraties werken, meerdere vortex stappen in het gehele protocol zorgen ervoor dat alle concentraties uniforme en correcte. Enkele van de oplossingen van de hoge-concentratie, hydrofoob aminozuur kan nog niet worden volledig ontbonden na vortexing, en in dit geval, zij krachtig kunnen worden geschud met de hand om te helpen in het proces. Ook is het essentieel dat ...

Sappen zijn een klasse van biomaterialen die uitgebreid als 3D steigers in regeneratieve geneeskunde1,,2,,3,4zijn bestudeerd. Meer recentelijk echter, hebben ze benut als voertuigen voor de levering van therapeutics vanwege hun unieke biologische eigenschappen5,6,7,8. Sappen natuurlijk samenvoegen tot stabiele nanostructuren9, waardoor een middel van drug inkapselen en bescherming. Sappen zijn amphipathic, bestaat uit een specifiek patroon van hydrofobe en hydrofiele aminozuur wordt herhaald, rijden hun zelf-assemblage9,10 en het toestaan van hen om te dienen als een medium tussen hydrofobe en hydrofiele omgevingen. Bijgevolg voor de klinische levering van hydrofobe medicijnen – die hebben extreem lage biologische beschikbaarheid en de opname in het lichaam door gebrek aan oplosbaarheid in waterige omgevingen11,12 -sappen zijn veelbelovend als een levering voertuig. Bovendien, hun volgorde patroon ook impliceert dat SAPs rationeel kunnen worden ontworpen en gebouwd om te maximaliseren van de compatibiliteit met een bepaalde drug of samengestelde (dat wil zeggen, op basis van functionele groepen) en oplosbaarheid maar ook verdere assistentie.
Sappen zijn toegepast als effectieve drug leverende voertuigen in vele in vitro en in vivo instellingen13,14,15,16. Zij hebben ook aangetoond grote veiligheid en biocompatibiliteit. Echter, als gevolg van lage osmolariteit van SAP-drugs preparaten, ze niet worden gebruikt voor intraveneuze injecties in klinische instellingen13. Gezien deze terughoudendheid, hebben we onlangs een strategie die sappen met aminozuur oplossingen combineert om het gebruik van giftige co oplosmiddelen en verhoging van de osmolariteit van de formulering, ontwikkeld en daarom klinische relevantie. We kiest om te gebruiken aminozuren zijn de bouwstenen van sappen, zijn al klinisch geaccepteerde, en in combinatie met sappen, ze hydrofobe drug oplosbaarheid verhogen terwijl het verminderen van de hoeveelheid SAP vereist17,18.
We hebben onderzocht SAP-AA combinaties als een veralgemeende platform voor hydrofobe drug oplosbaarheid en latere levering door een pijpleiding scriptingregel screening te maken en toe te passen op de Src-remmer, PP2, als een model hydrofobe compound. In dit proces onderzochten we het effect van het wijzigen van de onderdelen van de formulering-uiteindelijk testen 6 verschillende sappen, alle 20 aminozuren op 2 verschillende concentraties (laag en hoog, laag gebaseerd op concentraties in bestaande klinische toepassingen, en hoge concentraties waren 2 x, 3 x of 5 x de klinische concentratie op basis van de maximale oplosbaarheid van elk aminozuur in water), en 2 verschillende co oplosmiddelen – en geselecteerde combinaties die ontbindend PP2 voor verdere analyse. De formulering van deze drug bewezen effectief als een drug leveringsvoertuig in celkweek, evenals in vivo modellen met behulp van zowel intratracheale en intraveneuze overheidsdiensten. Ook onze werkzaamheden aangeraakt op de veelzijdigheid van SAP-AA combinaties in solubilizing meerdere, structureel-verschillende hydrofobe bestanddelen in waterige omgevingen; in het bijzonder de drugs rottlerin en curcumine18. Dit manuscript schetst de SAP-AA formulering methode en de analyse van curcumine oplosbaarheid als een voorbeeld van de primaire stap in onze screening-pijplijn. Dit protocol biedt een eenvoudige, reproduceerbare manier naar scherm voor de optimale combinaties van de SAP-AA, die los van een bepaalde hydrofobe verbinding.

<table><tbody><tr><td>EAK16-I</td><td>CanPeptide Inc.</td><td>Aangepast peptide</td><td>Sequence: AEAKAEAKAEAKAEAK, N-terminus acetylering en C-terminus amidering, >95% puur door HPLC</td></tr><tr><td>EAK16-II</td><td>CanPeptide Inc.</td><td>Aangepast peptide</td><td>Sequence: AEAEAKAKAEAEAKAK, N-terminus acetylering en C-terminus amidering, >95% puur door HPLC</td></tr><tr><td>EAK16-IV</td><td>CanPeptide Inc.</td><td>Aangepast peptide</td><td>Sequence: AEAEAEAEAKAKAKAK, N-terminus acetylering en C-terminus amidering, >95% puur door HPLC</td></tr><tr><td>EFK8-II</td><td>CanPeptide Inc.</td><td>Aangepast peptide</td><td>Sequence: FEFEFKFK, N-terminus acetylering en C-terminus amidering, >95% puur door HPLC</td></tr><tr><td>A6KE</td><td>CanPeptide Inc.</td><td>Aangepast peptide</td><td>Sequence: AAAAAAKE, N-terminus acetylering en C-terminus amidering, >95% puur door HPLC</td></tr><tr><td>P6KE</td><td>CanPeptide Inc.</td><td>Aangepast peptide</td><td>Sequence: PPPPPPPKE, N-terminus acetylering en C-terminus amidering, >95% puur door HPLC</td></tr><tr><td>Alanine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A7469-100G</td><td>L-Alanine</td></tr><tr><td>Isoleucine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I7403-100G</td><td>L-Isoleucine</td></tr><tr><td>Leucine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L8912-100G</td><td>L-Leucine</td></tr><tr><td>Methionine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M5308-100G</td><td>L-Methionine</td></tr><tr><td>Proline</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P5607-100G</td><td>L-Proline</td></tr><tr><td>Valine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>V0513-100G</td><td>L-Valine</td></tr><tr><td>Phenylalanine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P5482-100G</td><td>L-Phenylalanine</td></tr><tr><td>Tryptophan</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8941-100G</td><td>L-Tryptophan</td></tr><tr><td>Tyrosine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8566-100G</td><td>L-Tyrosine</td></tr><tr><td>Glycine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G8790-100G</td><td>L-Glycine</td></tr><tr><td>Asparagine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A4159-100G</td><td>L-Asparagine</td></tr><tr><td>Glutamine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G8540-100G</td><td>L-Glutamine</td></tr><tr><td>Serine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A7219-100G</td><td>L-Serine</td></tr><tr><td>Threonine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8441-100G</td><td>L-Threonine</td></tr><tr><td>Histidine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H6034-100G</td><td>L-Histidine</td></tr><tr><td>Lysine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L5501-100G</td><td>L-Lysine</td></tr><tr><td>Arginine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A8094-100G</td><td>L-Arginine</td></tr><tr><td>Aspartic Acid</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A7219-100G</td><td>L-Aspartic Acid</td></tr><tr><td>Glutamic Acid</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G8415-100G</td><td>L-Glutamic Acid</td></tr><tr><td>Cysteine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C7352-100G</td><td>L-Cysteine</td></tr><tr><td>Dimethyl Sulfoxide</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D4540-500ML</td><td>DMSO</td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>277649-100ML</td><td>Anhydrous</td></tr><tr><td>Curcumin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>08511-10MG</td><td>Hydrofobe drug, curcumin</td></tr><tr><td>Rottlerin</td><td>EMD Millipore</td><td>557370-10MG</td><td>Hydrofobe drug, rottlerin</td></tr><tr><td>PP2</td><td>Enzo&nbsp;</td><td>BML-EI297-0001</td><td>Hydrofobe drug, PP2</td></tr><tr><td>Scintillatievialen</td><td>VWR</td><td>2650-66022-081</td><td>Borosiliculaatglas, met schroefdop, 20 mL. Vialen voor het wegen van peptide.</td></tr><tr><td>Falcon 50 mL Conische Centrifugatiebuizen</td><td>VWR</td><td>352070</td><td>Polypropyleen, steriele, 50 mL. Voor aminozuuroplossingen.</td></tr></tbody></table>

oplosbaarheid van hydrofobe bestanddelen in waterige oplossing met behulp van combinaties van het zelf monteren van peptide en aminozuur

Solubility of Hydrophobic Compounds in Aqueous Solution Using Combinations of Self-assembling Peptide and Amino Acid

Zelfassemblerende peptiden (SAPs) zijn veelbelovend voertuigen voor de levering van hydrofobe therapeutics voor klinische toepassingen; de eigenschappen van hun amphipathic laten ontbinden hydrofobe bestanddelen in het waterige milieu van het menselijk lichaam. Zelfassemblerende peptide oplossingen hebben echter slechte bloed compatibiliteit (b.v., lage osmolariteit), belemmeren hun klinische toepassing via intraveneuze overheidsdiensten. We hebben onlangs een veralgemeende platform ontwikkeld voor hydrofobe drug delivery, die sappen met aminozuur oplossingen (SAP-AA combineert) te verbeteren van de drug oplosbaarheid en formulering osmolariteit te bereiken van de eisen voor klinische toepassingen te verhogen. Deze formulering strategie werd grondig getest in het kader van drie structureel verschillende hydrofobe verbindingen – PP2, rottlerin en curcumine-om aan te tonen van de veelzijdigheid. Bovendien, we onderzocht effecten van formulering onderdelen wijzigen door het analyseren van 6 verschillende sappen, 20 natuurlijk bestaande aminozuren bij lage en hoge concentraties, en twee verschillende co oplosmiddelen dimethylsulfoxide (DMSO) en ethanol. Onze strategie bleek effectief in het optimaliseren van onderdelen voor een bepaalde hydrofobe drug en therapeutische functie van de geformuleerde remmer, PP2, werd waargenomen, zowel in vitro als in vivo. Dit manuscript schetst onze algemene formulering-methode met behulp van SAP-AA combinaties voor hydrofobe verbindingen, en analyse van oplosbaarheid als een eerste stap naar potentiële gebruik van deze formuleringen in meer functionele studies. Wij omvatten van representatieve oplosbaarheid resultaten voor de formulering van de hydrofobe samengestelde, curcumine, en bespreken hoe onze methodologie fungeert als een platform voor toekomstige biologische studies en ziekte modellen.

Voor de hydrofobe drug, curcumine, geproduceerd we formuleringen met behulp van alle 20 bestaande natuurlijk aminozuren in lage concentraties, in combinatie met slechts één SAP, EAK16-II, als een bewijs-van-principe. We testten ook formuleringen met behulp van DMSO zowel ethanol als co oplosmiddelen. In totaal produceerde dit 40 curcumine formuleringen, elk met verschillende onderdelen. Het is belangrijk op te merken dat we onze eerdere studies met behulp van de Src-remmer, PP2, meer opti...

Dit protocol beschrijft een klinisch-middelen uit het oplossen van de hydrofobe bestanddelen in een waterige omgeving met behulp van combinaties van het zelf monteren van peptide en aminozuur oplossingen. Onze methode is opgelost een belangrijke beperking van hydrofobe therapeutics, die veilig en efficiënt vervoermiddel oplosbaarheid en levering methoden in klinische instellingen.

Oplosbaarheid van hydrofobe bestanddelen in waterige oplossing met behulp van combinaties van het zelf monteren van Peptide en aminozuur

Self-assembling peptides (SAPs) are promising vehicles for the delivery of hydrophobic therapeutics for clinical applications; their amphipathic ...

Het algemene doel van deze methode is het verhogen van de oplosbaarheid van hydrofobe verbindingen in waterige oplossingen voor potentiële toepassing in klinische omgevingen. Deze methode pakt een belangrijke beperking in het medische veld aan, namelijk het gebrek aan gebruik van hydrofobe verbindingen in klinische settings vanwege hun slechte oplosbaarheid in waterige systemen zoals het bloed. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat hydrofobe verbindingen kunnen worden opgelost in waterige oplossingen zonder significant gebruik van toxische cosolventen.Label eerst voor elk aminozuur twee conische centrifugebuizen van 50 liter. Bereid een grote kolf van twee liter met gezuiverd water voor. Bereken de hoeveelheid van elk aminozuur voor de gewenste concentraties en weeg met een spatel de juiste hoeveelheden aminozuren af in de betreffende centrifugebuizen.Voeg met een serologische pipette 40 milliliters gezuiverd water toe aan elke centrifugebuis. Vortex de monsters na het afsluiten van de buizen tot ze zijn opgelost. Weeg met een analytische balans met hoge precisie ongeveer één plus of min 0.2 milligrams peptide af in de bodem van een scintillatieflacon van 20 millilite

solubility-hydrophobic-compounds-aqueous-solution-using-combinations

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Een eenvoudige en algemene handleiding peptoïde synthese methode waarbij basisuitrusting en de handel verkrijgbare reagentia wordt geschetst, zodat peptoids gemakkelijk worden gesynthetiseerd in de meeste laboratoria. De synthese, zuivering en karakterisatie van een amfifiele peptoïde 36mer wordt beschreven, evenals de zelf-assemblage in zeer geordende nanosheets.

Vaste-fase-Submonomer Synthese van peptoïde polymeren en hun zelf-assemblage in zeer geordende nanosheets

Dit document beschrijft de vorming van sterk geordende peptide-gebaseerde structuren door het spontane proces van zelfassemblage. De werkwijze maakt gebruik van commercieel verkrijgbare peptiden en gemeenschappelijke laboratoriumapparatuur. Deze techniek kan worden toegepast op een grote verscheidenheid aan peptiden en kan leiden tot de ontdekking van nieuwe peptiden gebaseerde samenstellingen.

Vorming van Bestelde Biomoleculaire structuren door de zelf-assemblage van korte peptiden

De synthese van peptide polyamine gebaseerde amfifielen (PPA) is een grote uitdaging wegens de aanwezigheid van meerdere amine stikstofatomen, waarvoor oordeelkundig gebruik om groepen te maskeren deze reactieve functionaliteiten te beschermen. In deze paper beschrijven we een facile methode voor de bereiding van deze nieuwe klasse van zelfassemblerende moleculen.

Facile Protocol voor de synthese van het zelf monteren van Peptide Polyamine gebaseerde amfifielen (PPA) en verwante biomaterialen

Een protocol voor de synthese van een 1,2-dithiolane gemodificeerde peptide en de karakterisatie van de supramoleculaire structuren die voortvloeien uit de peptide zelf-assemblage.

Synthese en karakterisering van 1,2-Dithiolane gemodificeerde zelfassemblerende Peptides

Dit protocol beschrijft een efficiënte methode om een nanoemulsion voor een oliezuurgehalte acids-platinum(II) conjugate gestabiliseerd met een lysine-tyrosine-fenylalanine (KYF)-tripeptide synthetiseren. De nanoemulsion vormen onder zachte synthetische voorwaarden via zelf-assemblage van de KYF en de geconjugeerde.

Een Tripeptide-gestabiliseerde Nanoemulsion van oliezuur

Een protocol wordt gepresenteerd voor de synthese van informatie-gecodeerde peptoid oligomeren en voor de sequentie-gerichte zelfassemblage van deze peptoids in moleculaire ladders met behulp van amines en aldehyden als dynamische covalente reactant paren en Lewis zure zeldzame aarde metalen triflates als multi-role reagentia.

Synthese van informatiedragende Peptoids en hun reeks-geleide Dynamische Covalent Zelfassemblage

We rapporteren een protocol voor het produceren van een hybride lipide membraan op de water/lucht interface door het smeren van de lipide bilayer met koper (II) 2,9,16,23-tetra-tert-butyl-29H,31H-phthalocyanine (CuPc) moleculen. Het resulterende hybride lipidemembraan heeft een lipide/CuPc/lipide sandwichstructuur. Dit protocol kan ook worden toegepast op de vorming van andere functionele nanomaterialen.

Self-Assembly van hybride lipid membranen doped met hydrofobe organische moleculen op de Water / Air Interface

Dit artikel bevat protocollen voor het ontwerp en de zelfassemblage van nanostructuren van gamma-gemodificeerde peptide nucleïnezuur oligomeren in organische oplosmiddelmengsels.

Zelfassemblage van gamma-gemodificeerde peptide nucleïnezuren in complexe nanostructuren in organische oplosmiddelmengsels

Dit protocol presenteert drie snelle en eenvoudige bereidingsmethoden die omgevingsomstandigheden gebruiken om de zelfassemblage van peptiden tot hydrogels op gang te brengen. Daarnaast wordt de karakterisering van peptidehydrogels beschreven, wat aantoont dat mechanisch stabiele peptidehydrogels onder deze eenvoudige omstandigheden kunnen worden gevormd.

Bereiding van mechanisch stabiele, zelf geassembleerde peptiden, hydrogels

Bepaling van maaglediging Niet-invasieve...

Beoordeling van de maaglediging in niet-obese diabetische muizen met behulp van een [<sup&gt; 13</sup&gt; C]-octaanzuur ademtest

Leer hoe je hydrofobe verbindingen oplost in waterige oplossingen met zelf-assemblerende peptiden en aminozuren. Deze methode verbetert de oplosbaarheid zonder giftige co-oplosmiddelen te gebruiken.

Oplosbaarheid van hydrofobe bestanddelen in waterige oplossing met behulp van combinaties van het zelf monteren van Peptide en aminozuur (Video) | JoVE Journal

Oplosbaarheid van hydrofobe bestanddelen in waterige oplossing met behulp van combinaties van het zelf monteren van Peptide en aminozuur

Meer video's verkennen