September 20th, 2017
Dit protocol beschrijft een klinisch-middelen uit het oplossen van de hydrofobe bestanddelen in een waterige omgeving met behulp van combinaties van het zelf monteren van peptide en aminozuur oplossingen. Onze methode is opgelost een belangrijke beperking van hydrofobe therapeutics, die veilig en efficiënt vervoermiddel oplosbaarheid en levering methoden in klinische instellingen.
Het algemene doel van deze methode is om de oplosbaarheid van hydrofobe verbindingen in waterige oplossingen te verhogen voor potentiële toepassing in klinische omgevingen. Deze methode lost een belangrijke beperking in de medische wereld op, namelijk het gebrek aan gebruik van hydrofobe verbindingen in klinische omgevingen vanwege hun slechte oplosbaarheid in waterige systemen zoals het bloed. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat hydrofobe verbindingen kunnen worden opgelost in waterige oplossingen zonder enig significant gebruik van giftige co-solventen.
Label eerst twee 50 liter kegelcentrifugebuizen voor elk aminozuur. Bereid een grote fles van twee liter met gezuiverd water. Na het berekenen van de hoeveelheid van elk aminozuur voor de gewenste concentraties, weeg de juiste hoeveelheden aminozuren in de respectieve centrifugebuizen met een spatel.
Gebruik een seriologische pipet en voeg 40 milliliter gezuiverd water toe aan elke centrifugebuis. Na het sluiten van de buizen, vortex de monsters tot ze zijn opgelost. Gebruik een hoogwaardige analytische weegschaal en weeg ongeveer een plus min 0,2 milligram peptide in de bodem van een 20 milliliter scintillatieglas.
Noteer het exacte gewicht van het peptide op de dop en schroef de dop op het glas. Pipet vervolgens het juiste volume aminozuuroplossing in elk glas om de gewenste concentratie van zelf-assemblerend peptide te bereiken. Soniceer de monsters gedurende 10 minuten in een waterbad-sonicator op kamertemperatuur en zorg ervoor dat de oplossingen in het glas volledig in het waterbad zijn ondergedompeld. Bereid twee medicijnvoorraadoplossingen voor door een milligram van het gewenste medicijn te combineren met de juiste hoeveelheid DMSO en nog eens een milligram van het medicijn met ethanol.
Vortex vervolgens beide oplossingen gedurende 15 seconden om het medicijn volledig op te lossen. Label daarna 1,5 milliliter micro-centrifugebuizen voor elke formulering met het zelf-assemblerende peptide, aminozuur en co-solvent. Voeg 10 microliter van de DMSO-voorraadoplossing van het medicijn of 20 microliter van de ethanol-voorraadoplossing van het medicijn toe aan de juiste micro-centrifugebuizen.
Voeg vervolgens 990 microliter van de zelf-assemblerende peptide-aminozuuroplossing toe aan de micro-centrifugebuizen die de DMSO-voorraadoplossing van het medicijn bevatten. Voeg 980 microliter van de peptide-aminozuuroplossing toe aan de micro-centrifugebuizen die de ethanol-voorraadoplossing van het medicijn bevatten. Vortex alle medicijnformuleringen krachtig gedurende 30 seconden.
Dek vervolgens af met aluminiumfolie en laat de formuleringen 30 minuten staan voordat u de oplosbaarheid test. Na 30 minuten, vortex de formuleringen krachtig gedurende 30 seconden. Centrifugeer vervolgens de formuleringen gedurende één minuut bij 14.220 keer G.
Na centrifugatie, inspecteer visueel de bodem van de micro-centrifugebuizen op precipitatie. Van de 40 formuleringen die in deze studie zijn getest, hebben er zeven met succes het hydrofobe medicijn curcumin opgelost. Twee belangrijke trends werden geïdentificeerd door de formuleringen te groeperen op componenten.
Ethanol lijkt een betere co-solvent te zijn voor het oplossen van curcumin, en positief geladen aminozuren, lysine en arginine lijken optimale componenten te zijn voor het oplossen van curcumin. Het is interessant om de kleurverandering op te merken voor formuleringen die arginine en lysine bevatten, die aantonen dat curcumin is opgelost in de alkalische toestand. Eenmaal onder de knie, kan deze techniek in twee tot drie uur worden uitgevoerd met de juiste apparatuur en als de aminozuuroplossing vooraf is bereid.
Volgens deze procedure kunnen oplosbare medicijnformuleringen verder worden getest in vitro en in vivo om de biologische werkzaamheid of veiligheid van het opgeloste medicijn direct te beoordelen en te vergelijken. Na de ontwikkeling ervan, heeft deze formuleringsmethode de weg gebaand voor in vivo-toediening van een hydrofobe stockremmer genaamd PP@ voor de preventie van acute longbeschadiging. Na het bekijken van deze video, zou u een goed begrip moeten hebben van hoe u een zelf-assemblerend peptide en aminozuurcombinatie kunt toepassen om een willekeurig hydrofoob medicijn op te lossen.
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
Dit protocol beschrijft een methode voor het oplossen van hydrofobe verbindingen in waterige omgevingen met behulp van zelfassemblante peptiden en aminozuren. Deze aanpak gaat in op de uitdaging van slechte oplosbaarheid van hydrofobe therapeutische middelen in klinische toepassingen.
Poor aqueous solubility of hydrophobic compounds remains a major barrier to clinical translation of promising therapeutics, limiting their use in drug discovery pipelines. This SAP-AA formulation strategy addresses this challenge by enabling solubilization without toxic co-solvents, supporting early-stage target validation and lead optimization. The method enhances formulation osmolarity and biocompatibility, positioning it for integration into preclinical development workflows where solubility-driven attrition is a key risk factor.
The SAP-AA method fits within the early discovery continuum, supporting hit-to-lead progression by solving solubility bottlenecks that impede biological evaluation.