Name: Laser Microirradiation om te studeren In Vivo cellulaire reacties op eenvoudige en complexe DNA-schade (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-01-31T12:30:00.000+00:00
Duration: 10 min 44 s
Description: Leer laser microirradiatie om DNA-schade te induceren en celreacties in vivo te bestuderen. Deze methode maakt real-time analyse van reparatiefactor-dynamiek en schadeherkenning op hoge resolutie mogelijk.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Wij danken Dr. Akira Yasui bij Universiteit van Tohoku, Japan voor het GFP-NTH1 expressie plasmide, en Dr. Eros Lazzerini Denchi aan het The Scripps Research Institute, La Jolla, Californië voor de TRF2-YFP en EGFP-53BP11220-1711 expressie plasmiden. Dit werk werd gesteund door de Air Force Office voor wetenschappelijk onderzoek (FA9550-04-1-0101) en de Beckman Laser Institute Inc Foundation (M.W.B), de Ford Foundation Fellowship van de nationale Academie van Wetenschappen (aan B.A.S), en NSF MCB-1615701 en CRCC CTR-17-426665 (naar K. Y.).

De auteurs hebben niets te onthullen.

De voordelen van het gebruik van laser microirradiation voor DDR onderzoek zijn:
1. het is haalbaar voor het opwekken van verschillende typen en hoeveelheden DNA schade van eenvoudige strand einden aan complexe DNA-beschadiging op te sporen verschillende reparatie factoren op het DNA beschadigen sites door de laser bestraling parameters aan te passen. Het is ook mogelijk om meerdere keren in de dezelfde celkern schade toebrengen, teneinde de trans effecten (zoals in <strong class="xfi...

In Vivo DNA schade signalering is niet goed begrepen In vivo, is DNA complexvorm met histonen en andere factoren aan formulier chromatine vezels. Regulering van de structuur van de chromatine is van het allergrootste belang voor DNA-metabolisme. Bijvoorbeeld, is de Histon variant H2AX phosphorylated door Ataxie Teleangiëctasie gemuteerd (ATM) en andere kinases volgende dubbel-strand (DSB) inductie breekt, en is belangrijk voor DSB schade signaal versterking, alsmede het verstrekken van een docking site voor andere factoren. Verspreiding van schade signalering en reparatie traject keuze lijken te kritisch worden beïnvloed door lokale chromatine structuur bij schade sites1. Een aantal chromatine remodeling factoren, histone chaperones en Histon wijzigen enzymen inderdaad schade sites worden gerekruteerd en zijn belangrijk voor efficiënte DNA-reparatie, benadrukken het belang van chromatine verordening in de DDR en2 reparatie , 3 , 4. bovendien schade site clustering of herpositioneren werd waargenomen in gist en drosophila5,6,7,8, die doet denken aan Herlokalisatie van gene loci in de subnuclear compartiment gene verordening9,10is gekoppeld. Recente studies in muizen en menselijke cellen bleek ook mobilisatie van DSB sites, welke invloeden trouw en traject keuze11,12 repareren. Dit leidt tot de mogelijkheid dat DDR/reparatie ook worden nauw met nucleaire architectuur, organisatie van de chromatine van hogere-orde en chromosoom dynamiek in de celkern verbonden kan. Het is dus een kritische studie van de DDR en herstelprocessen in het kader van de endogene nucleaire omgeving in een levende cel om te begrijpen van de korte - en lange termijn gevolgen van DNA-beschadiging high-resolution methoden te ontwikkelen.
Kritische rol van PAR Polymerase (PARP) in het meten van de omvang en de soort schade en het regelen van eiwit vergadering op de Site van de schade PARP1 is een DNA nick sensor snel geactiveerd door DNA-schade die een cruciale rol in DNA reparatie13 speelt. PARP1 was oorspronkelijk gedacht te functioneren samen met X-Ray repareren Cross aanvulling 1 (XRCC1) ter vergemakkelijking van de base excision repair (BER), maar recente studies onthullen haar rol in andere DNA repair pathways, met inbegrip van DSB reparatie14. PARP1 gebruik nicotinamide adenine dinucleotide (NAD+) geactiveerd als substraat om ADP-ribosylate meerdere doel eiwitten, met inbegrip van zelf. Dit enzym en andere familieleden hebben aangetrokken veel aandacht in de afgelopen jaren als PARP-remmers als veelbelovende therapeutische geneesmiddelen voor kanker opgedoken. Hoewel de PARP-remmers bleken aanvankelijk te worden effectief in het borstkankergen (BRCA)-gemuteerd borstkankercellen, er is nu een overvloed aan bewijs voor de gevolgen daarvan in mono- en combinatie therapieën samen met DNA beschadigen agenten/bestraling tegen een breed spectrum van kanker met mutaties niet beperkt tot BRCA15,16,17,18,19,20.
Op moleculair niveau, werd PARP activering getoond om te spelen belangrijke rol bij het organiseren van de structuur van de lokale chromatine op schade sites. PAR-afhankelijke aanwerving van chromatin wijziging enzymen vergemakkelijkt DSB reparatie en dicteert herstel traject keuzes, suggereren de belangrijke steigers rol van PAR wijziging op schade sites. 13,21,22,23,24,25,26,27,28,29, 30,31 we onlangs aangetoond de uitsluiting van p53-bindend-proteïne 1 (53BP1) tegen schade door PAR 32, bieden een alternatieve verklaring voor 53BP1-afhankelijke hyperactivering van niet-homologe endjoining (sites NHEJ) door de PARP-remmer en het benadrukken van het belang van PARP in DSB repareren traject keuze33,34. PARP1 ook factoren rechtstreeks PARylates en is van invloed op de activiteit van meerdere DNA repair14.
Met behulp van Laser Microirradiation als een instrument om te studeren DDR/reparatie In Vivo Laser microirradiation tot sub micron wijzigingen op afzonderlijke chromosomen werd eerst beschreven in 196935 en herzien in detail in 198136. Enkele decennia later, laser microirradiation bleek voor het opwekken van DNA-beschadiging op een gedefinieerde submicrometer regio in de celkern, en bleek te zijn een waardevolle techniek te studeren aanwervings- en wijzigingen van verschillende factoren aan DNA laesies in vivo 13 , 37 , 38 , 39 , 40 , 41. deze methode maakt de ontdekking van de factoren die geen aparte bestraling-geïnduceerde foci (IRIF vormen) bij schade sites39,42. Het is ook mogelijk om te onderzoeken de spatio dynamiek van chromatine structurele wijzigingen zowel op schade plaatsen en in de rest van de kern. Wij zorgvuldig ten opzichte van de DDRs die zijn geïnduceerd door verschillende laser-systemen en de inbreng van de bevoegdheden om te evalueren van de relatie tussen het type van DNA-schade en de microirradiation voorwaarden32,43,44, 45. De afwijkende werving patronen van 53BP1 en Telomere Herhaal bindende factor 2 (TRF2) werden waargenomen in de vorige laser schade studies, die vormde de basis voor de terugkerende zorg voor de "niet-fysiologische" aard van de laser-veroorzaakte schade46 ,47,48,49. We vonden dat deze duidelijk verschillen nu kon worden verklaard door differentiële PARP signalering die meters de hoeveelheid en complexiteit van geïnduceerde schade32. We bevestigd dat: 1) laser-microirradiated cellen (zelfs na hoge input-power bestraling) in interfase in een schade checkpoint controle-afhankelijke manier worden gearresteerd en levensvatbaar blijven (minstens tot 48 h)32,50; en 2) reparatie factor werving/wijzigingen getrouw recapituleren die waargenomen met de behandeling met conventionele DNA schadelijke stoffen en DSB inductie door enzym32,39,42, 44,,50,51,52. Deze resultaten is groot voorstander van de fysiologische relevantie van het bestuderen van laser schade-geïnduceerde cellulaire reacties.

<table><tbody><tr><td>Ti:Sapphire NIR pulsed femtosecond laser Mira-900</td><td>Coherent Inc.</td><td>Mira 900</td><td></td></tr><tr><td>Inverted microscope&nbsp;</td><td>Carl Zeiss</td><td>Axiovert 200M</td><td></td></tr><tr><td>63X/1.4 NA objective</td><td>Zeiss</td><td>APOCHROMAT Ph3&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Compact Rotation Stage&nbsp;</td><td>Newport Corp</td><td>PR50PP</td><td></td></tr><tr><td>Temperature Controller</td><td>Warner</td><td>TC-344B</td><td></td></tr><tr><td>Heating System</td><td>Ibidi&nbsp;</td><td>10918</td><td></td></tr><tr><td>Gas Incubation System</td><td>Ibidi&nbsp;</td><td>11920</td><td></td></tr><tr><td>Laser Power and Energy Meter (RoHS)</td><td>Coherent</td><td>FieldMaxII-TOP&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>ORCA-R2 Digital CCD Camera</td><td>Hamamatsu</td><td>C10600</td><td></td></tr><tr><td>LSM 510 META Laser Scanning Microscopes</td><td>Carl Zeiss</td><td></td><td></td></tr><tr><td>100X/1.3 NA Zeiss Plan APO</td><td>Carl Zeiss</td><td></td><td></td></tr><tr><td>35mm Gridded Dishes&nbsp;</td><td>MatTek</td><td>P35G-1.5-14-CGRD-D</td><td></td></tr><tr><td>PtK2 kidney epithelial cells</td><td>ATCC</td><td>CCL 56&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>HeLa cells</td><td>ATCC</td><td>CCL-2</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Life Technologies</td><td>11885-092</td><td></td></tr><tr><td>CO2-Independent Medium&nbsp;</td><td>Life Technologies</td><td>18045-088</td><td></td></tr><tr><td>Advanced MEM&nbsp;</td><td>Life Technologies</td><td>12492-013</td><td>aangevuld met L-Glutamine, 4% FBS</td></tr><tr><td>penicillin/streptomycin</td><td>Fisher Scientific</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>L-Glutamine</td><td>Fisher Scientific</td><td>25030081</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>Omega Scientific</td><td>FB-02</td><td></td></tr><tr><td>Thymidine&nbsp;</td><td>&nbsp;SIGMA</td><td>T9250</td><td></td></tr><tr><td>serum free media&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; (Opti-MEM I Reduced Serum Media)</td><td>Fisher Scientific</td><td>11058021</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Cycolbutance pyrimidine dimer (CPD) (muis)</td><td>Kamiya Biomedical Company</td><td>MC-062</td><td></td></tr><tr><td>Anti-XRCC1 (muis )</td><td>Gene Tex Inc</td><td>GTX72311</td><td></td></tr><tr><td>Anti-53BP1 (konijn)</td><td>Santa Cruz Biotech</td><td>sc-22760</td><td></td></tr><tr><td>Anti-CtIP (konijn)</td><td>Abcam</td><td>ab70163</td><td></td></tr><tr><td>Anti-PAR polymeren (muis)</td><td>Enzo Life Sciences</td><td>BML-SA216-0100</td><td></td></tr><tr><td>Anti-PAR (konijn)</td><td>Trevigen</td><td>4336-BPC-100</td><td></td></tr><tr><td>Anti-TRF2 (muis)</td><td>Novus Biological&nbsp;</td><td>NB100-56506</td><td></td></tr><tr><td>Anti 6-4PP (muis)</td><td>Kamiya Biomedical</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Anti-Rad21 (Konijn)&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; (voor cohesine detectie)</td><td>gegenereerd in Yokomori (KY) lab</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Anti-Rad51 (Konijn)</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>SC-8349</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Ku70 (muis)</td><td>&nbsp;Novus Biologicals</td><td>NB100-102</td><td></td></tr><tr><td>8-oxiguanine&nbsp;</td><td>Trevigen, Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Anti-PARP1&nbsp; (Konijn)&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;</td><td>gegenereerd in KY lab</td><td></td><td>ref 43</td></tr><tr><td>&nbsp;Anti-hCAPG (Konijn)&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; (voor condensine detectie)</td><td>gegenereerd in KY lab</td><td></td><td>ref 42</td></tr><tr><td>Cy3 AffiniPure Donkey Anti-Rabbit IgG</td><td>&nbsp;Jackson ImmunoResearch Inc</td><td>711-165-152</td><td></td></tr><tr><td>Donkey Anti-Mouse Alexa Fluor 488 IgG</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A-21202</td><td></td></tr><tr><td>HiPerFect siRNA Transfection Reagent</td><td>Qiagen</td><td>301705</td><td></td></tr><tr><td>Lipofectamine 2000 Transfection Reagent</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11668019</td><td></td></tr><tr><td>GFP-SMC1 stabiele cellijn&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;</td><td>gegenereerd in KY lab</td><td></td><td>ref 49&nbsp;</td></tr><tr><td>GFP-NEIL2 stabiele cellijn</td><td>gegenereerd in KY lab</td><td></td><td>ref 54</td></tr><tr><td>GFP-NTH1 stabiele cellijn</td><td>gegenereerd in KY lab</td><td></td><td>ref 32</td></tr><tr><td>GFP-SMC1 plasmid</td><td>gegenereerd in KY lab</td><td></td><td></td></tr><tr><td>GFP-Ku plasmid</td><td>gegenereerd in KY lab</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Anti-MDC1 (konijn)</td><td>&nbsp;Novus Biologicals</td><td>NB100&ndash;395</td><td></td></tr><tr><td>Anti-gH2AX (konijn)</td><td>&nbsp;Millipore</td><td>07&ndash;164</td><td></td></tr><tr><td>EGFP-53BP1(1220-1711) PtK2 stabiele cellijn</td><td>gegenereerd in Berns lab</td><td></td><td>ref 32</td></tr><tr><td>TRF2-YFP PtK2 stabiele cellijn</td><td>gegenereerd in Berns lab</td><td></td><td>ref 32</td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Sigma</td><td>D2650-100ML</td><td></td></tr><tr><td>PARG remmer</td><td>Trevigen</td><td>4680-096-03</td><td></td></tr><tr><td>DNA&ndash;PKcs remmer NU7026&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>N1537</td><td></td></tr><tr><td>ATM remmer KU55933</td><td>&nbsp;Calbiochem</td><td>118500</td><td></td></tr><tr><td>Olaparib&nbsp;</td><td>Apexbio Technology</td><td>A4154</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyde&nbsp;</td><td>ELECTRON MICROSCOPY SCIENC MS</td><td>100503-916 (EA)</td><td></td></tr><tr><td>Quantity One 1-D Analysis Software Version 4.6.9</td><td>Bio-Rad</td><td>SOFT-LIT-70-9600-Q1-469PC&nbsp;</td><td>beeldanalyseprogramma</td></tr><tr><td>Excel</td><td>microsoft</td><td></td><td>spreadsheetprogramma</td></tr><tr><td>Triton X100</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP151-500</td><td>detergens</td></tr><tr><td>Dulbecco's phosphate-buffered saline (DPBS) 10X zonder calcium en magnesium</td><td>Fisher Scientific</td><td>14200166</td><td>verdun tot 1X&nbsp;</td></tr></tbody></table>

laser microirradiation om te studeren in vivo cellulaire reacties op eenvoudige en complexe dna-schade

Laser Microirradiation to Study In Vivo Cellular Responses to Simple and Complex DNA Damage

DNA-beschadigingen induceert specifieke signalering en reparatie reacties in de cel, die is van cruciaal belang voor de bescherming van de integriteit van het genoom. Laser microirradiation werd een waardevol experimentele instrument te onderzoeken de DNA schade reactie (DDR) in vivo. Hierdoor real-time hoge resolutie eencellige analyse van macromoleculaire dynamiek in reactie op laser-veroorzaakte schade beperkt tot een submicrometer regio in de celkern. Verschillende laser omstandigheden zijn echter gebruikt zonder waardering van verschillen in de soorten schade veroorzaakte. Dientengevolge, de aard van de schade is vaak niet goed gekenmerkt of gecontroleerd, waardoor de schijnbare tegenstrijdigheden in de aanwerving of wijziging profielen. We toonden aan dat verschillende bestraling voorwaarden (d.w.z., verschillende golflengten evenals verschillende input bevoegdheden (irradiances) van een femtoseconde (fs) nabij-infrarood (NIR) laser) proteïne assembly's van verschillende DDR en reparatie geïnduceerde. Dit weerspiegelt het soort DNA schade geproduceerd. Dit protocol beschrijft hoe titratie van laser ingangsvermogen toestaat inductie van verschillende hoeveelheden en complexiteit van de DNA-beschadiging, die gemakkelijk kan worden gecontroleerd door detectie van base en crosslinking schade, differentiële poly (ADP-ribose) (PAR) signalering, en traject-specifieke reparatie factor assemblages op schade sites. Nadat de schade-voorwaarden zijn vastgesteld, is het mogelijk om te onderzoeken van de effecten van verschillende schade complexiteit en differentiële schade signalering en uitputting van de upstream factor(en) op enige factor van belang.

PtK2 cuvetten stabiel uiting van EGFP-53BP11220-1711 of -TRF2-YFP, werd laser ingangsvermogen titratie uitgevoerd om te bepalen van de optimale voorwaarde voor hun werving (Figuur 1)32.
Op hoge input-vermogen laser schade sites, de aanzienlijke clustering van BPR (crosslinking schade meestal gegenereerd door ultraviolet (UV) schade) evenals GFP-NTH1 DNA-glycosylase die specifiek base schade herkent werden waargenomen. Daarnaast w...

Het doel van dit protocol is te beschrijven hoe laser microirradiation voor het opwekken van verschillende soorten DNA-beschadiging, met inbegrip van relatief eenvoudige strand einden en complexe schade, aan de studie van DNA schade signalering en reparatie factor montage op schade sites in vivo .

Laser Microirradiation om te studeren In Vivo cellulaire reacties op eenvoudige en complexe DNA-schade

DNA damage induces specific signaling and repair responses in the cell, which is critical for protection of genome integrity. Laser microirradiation ...

Het algemene doel van dit protocol is om te beschrijven hoe laser-microbestraling kan worden gebruikt om verschillende typen DNA-schade op te wekken, waaronder enkelstrengsbreuken en complexe schade, om DNA-schadesignalering en de assemblage van reparatiefactoren in vivo te bestuderen. In de jaren 60 en 70 richtten we een laserstraal via een microscoop, die u achter mij ziet, waardoor we een klein gebied van een chromosoom konden beschadigen. De cel delde en overleefde, en we konden niet begrijpen waarom.Nou, 40 jaar later gebruiken we deze methode nu om selectief DNA-herstel te bestuderen, en dat is wat u vandaag zult zien. Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van kernvragen in het veld van DNA-herstel, zoals hoe DNA-schade wordt herkend en verwerkt en hoe het schadesignaal zich in de cel verspreidt. Laser-microbestraling maakt real-time, hoge-resolutie analyse op enkelcelniveau mogelijk van macromoleculaire dynamiek als reactie op DNA-schade beperkt tot een gebied van enkele micrometers binnen de celkern.Verschillende lasercondities zijn echter gebruikt zonder rekening te houden met de verschillen in de veroorzaakte typen schade, wat leidde tot inconsistenties in cellulai

laser-microirradiation-to-study-vivo-cellular-responses-to-simple

Research

JoVE Journal

Genetics

Genetica

Lasers worden vaak gebruikt in studies van de cellulaire respons op DNA-schade. Echter, ze genereren lesies waarvan de afstand, frequentie en botsingen met replicatievorken worden zelden gekenmerkt. We beschrijven een benadering die de bepaling van deze parameters laser gelokaliseerde crosslinks tussen de strengen mogelijk maakt.

Single Molecule Analyse van de Laser Gelokaliseerde Psoralen Adducten

Laser microirradiation is een nuttig instrument voor onderzoek naar DNA-herstel in levende cellen. Een methodologische aanpak voor het gebruik van UVA lasers voor het opwekken van verschillende DNA laesies wordt weergegeven. We hebben een methode voor het lokale microirradiation die de normale celcyclus; onderhoudt geoptimaliseerd zo doorloop bestraalde cellen mitose.

Geavanceerde confocale microscopie technieken om te studeren van eiwit-eiwitinteractie en kinetiek op DNA laesies

Confocale fluorescentie microscopie en laser micro-bestraling aanbod tools voor inducerende DNA-beschadiging en het toezicht op de reactie van DNA reparatie eiwitten in geselecteerde sub nucleaire gebieden. Deze techniek is onze kennis van schade detectie, signalering en werving aanzienlijk vooruitgegaan. Dit manuscript toont deze technologieën te onderzoeken van een- en tweepersoonskamers strand break repair.

Toepassing van Laser-Micro-bestraling voor onderzoek van enkele en dubbele Strand Break Repair in zoogdiercellen

Een systeem voor het opwekken van laesies op de gedefinieerde regio sub nucleaire's vereist studeren DNA schade reparatie kinetiek. Beschrijven we een methode om gelokaliseerde double-stranded einden met behulp van een laser-scanner confocal microscoop uitgerust met een 405 nm laser maken en leveren van geautomatiseerde procedures om te kwantificeren van de dynamiek van reparatie factoren bij deze letsels.

Onderzoek van eiwit werving aan DNA laesies met behulp van 405 Nm Laser-Micro-bestraling

Dit protocol beschrijft een niet-invasieve methode om S-fase cellen efficiënt te identificeren voor downstream microscopiestudies, zoals het meten van DNA-reparatie eiwitrekrutering door lasermicrobestraling.

Laser micro-bestraling om DNA-rekrutering tijdens de S-fase te bestuderen

We beschrijven een robuuste gen vervangende strategie om de vuiligheid schimmel Ustilago maydis genetisch te manipuleren. Dit protocol wordt uitgelegd hoe u deletiemutanten genereren om infectie fenotypes onderzoeken. Kan worden uitgebreid tot genen in elke gewenste wijze, bijvoorbeeld wijzigen door toevoeging van een sequentie die codeert voor een fluorescerend eiwit tag.

Genetische Manipulatie van de Plant Pathogeen<em&gt; Ustilago maydis</em&gt; Om Fungal Biology and Plant Microbe Interactions Studie

Gerichte DNA-schade kan worden bereikt door een DNA-beschadigend middel aan een triplex-vormend oligonucleotide (TFO) te koppelen. Met behulp van gemodificeerde TFO's kunnen DNA-schade-specifieke eiwitassociatie en DNA-topologiemodificatie in menselijke cellen worden bestudeerd door het gebruik van gemodificeerde chromatine-immunoprecipitatie-assays en DNA-superspiralisatie-assays zoals hier beschreven.

Tools om de rol van de Architectural eiwit HMGB1 Bestudeer in de verwerking van Helix vervormen, site-specifieke DNA InterStrand Crosslinks

Bestaande methoden voor het modificeren van planten hebben een beperkte toepasbaarheid. De nieuwe peptide-afgeleide technologie die hier wordt voorgesteld, belooft zowel eenvoud als efficiëntie in de introductie van exogeen eiwit of genen in de gewenste intracellulaire compartimenten van intacte planten.

-Peptide afgeleide methode om genen en eiwitten Across Cellulaire en organellen Barriers in Planten Transport

Hier beschrijven we een chromatine immunoprecipitation (ChIP) en ChIP-seq de protocol van de voorbereiding van de bibliotheek voor het genereren van wereldwijde epigenomic profielen van lage-overvloed kip embryonale monsters.

Chromatine Immunoprecipitation (ChIP) Protocol voor lage-overvloed embryonale monsters

Hier presenteren we de nematode Caenorhabditis elegans als een veelzijdig hostmodel aan de studie van microbiële interactie.

De Nematode Caenorhabditis Elegans - een veelzijdig In Vivo -Model om te studeren van Host-microbe interacties

Leer laser microirradiatie om DNA-schade te induceren en celreacties in vivo te bestuderen. Deze methode maakt real-time analyse van reparatiefactor-dynamiek en schadeherkenning op hoge resolutie mogelijk.

Laser Microirradiation om te studeren In Vivo cellulaire reacties op eenvoudige en complexe DNA-schade

Meer video's verkennen