Name: Techniek van minimaal invasieve dwarse aorta vernauwing in muizen voor inductie van links ventriculaire hypertrofie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-09-25T12:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 34 s
Description: Leer een minimaal invasieve techniek voor transversale aortaconstrictie bij muizen zonder intubatie. Deze methode vereenvoudigt het protocol en vermindert stress voor de dieren tijdens cardiovasculair onderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Dit werk werd gesteund door een subsidie (N ° 32016) van de Zwitserse cardiovasculaire Stichting RT.

mannelijke C57BL/6J muizen (10 weken, 25 à 30g, n = 60) in dit protocol worden gebruikt. Dieren een humane behandeling met inachtneming van de richtsnoeren geformuleerd door het Franse Ministerie van landbouw en van hoger onderwijs en onderzoek, en alle procedures worden uitgevoerd overeenkomstig de Europese richtlijn van de Raad van de Gemeenschap van 24 November 1986 () 86/609/EEG) en de Franse wetten. Het protocol is goedgekeurd door de &#34; regionale ethische commissie voor dier experimenten CREMEAS &#34; (#2016092816207606).
 1. voorbereiding op de operatie <ol><li>de muizen gedurende een week na aankomst in het dier faciliteit op een 12/12 uur licht/donker cyclus, in standaard kooien, met voedsel (voor details zie de tabel van materialen) en water beschikbaar ad libitum.</li>
	<li>Op de dag van de operatie, plaats de muizen in afzonderlijke kooien een paar minuten vóór de inductie van de anesthesie, teneinde eventuele extra stress bij het dier. Alle chirurgische instrumenten de dag voor de operatie steriliseren.</li>
	<li>Tijdens peritoneally injecteren van een enkelvoudige dosis van een mengsel van ketamine (51.4 mg/kg) en xylazine (3,3 mg/kg) verdund in een zoutoplossing (0,9% NaCl).</li>
	<li>Zorg ervoor dat van de diepte van de narcose door het ontbreken van de teen-retraite reflex.</li>
	<li>Scheren van de nek en borst van het dier met een commercieel beschikbare scheermes en desinfecteren van de geschoren zone met 70% alcohol.</li>
	<li>Het dier op een schone kurk werken pad liggende plaatsen en de poten vast met plakband.</li>
</ol> 2. Chirurgie <ol><li>steriele chirurgische techniek wordt gebruikt in de procedures. In een spontaan ademhaling dier, uitvoeren van een longitudinaal middellijn cervicale snede meer dan 10 mm met een 11-mes van supra-sternale inkeping naar de mid borst om bloot het borstbeen ( Figuur 1).</li>
	<li>Intrekken van de schildklier door het passeren van een 4/0 monofilamenten polypropyleen verblijf hechtdraad met een Crile-hout naald houder en tape aan de werkende pad.</li>
	<li>Scheiden botweg de vooraf tracheale spieren met een micro-chirurgische Tang te ontdekken van de luchtpijp.</li>
	<li>Dia voorzichtig de gladde-tipped micro-chirurgische pincet met de gesloten kaken gebogen over de luchtpijp en achter het borstbeen.</li>
	<li>Door zorgvuldig openen en sluiten van de kaken van de gladde-tipped gebogen microchirurgische verlostang verrichten een botte dissectie onder de vooraf tracheale spieren en achter het borstbeen tot het borstvlies opzijschuiven.</li>
	<li>Begrijpen de juiste supra-clavicular spieren met de gladde-tipped rechtstreeks micro-chirurgische Tang en trek voorzichtig de borst van het dier.</li>
	<li>Schuif de inferieure kaak van het bot nipper onder het borstbeen en het uitvoeren van een 3-4 mm bovenste gedeeltelijke sternotomy ( Figuur 2). Het onderste deel van de mini-sternotomy iets naar links direct.</li>
	<li>Passeren een 7/0 monofilamenten polypropyleen verblijf hechtdraad van binnen naar buiten de tweede intercostale ruimte aan elke kant van de mini-sternotomy met behulp van een micro-chirurgische naald houder. Blijf dicht bij costo-sternale hoek om te voorkomen dat schade aan intercostale en interne thoracale vaartuigen of borstvlies.</li>
	<li>Verspreid de sternale randen met behulp van 7/0 monofilamenten polypropyleen verblijf hechtingen aan elke kant en pas deze aan naar het pad van het werken met plakband.</li>
	<li>Voorzichtig opzij verplaatsen de vooraf tracheale spieren, mediastinale vet en zwezerik met behulp van gladde-tipped gebogen microchirurgische pincet om te visualiseren de aortaboog onder spaarstand vergroting (2-3 X) ( Figuur 3). Bepaalde zorg niet te raken of beschadigen van de pariëtale pleura om te voorkomen dat de ontwikkeling van de pneumothorax.</li>
	<li>Bloot van het zachte weefsel onder de aortaboog door koppelverkoop pincet ( Figuur 4 A) en spreid voorzichtig haar kaken. Bereiden van een tunnel in het zachte weefsel onder de aortaboog met een tweede gelijkmakende Tang door voorzichtig openen en sluiten van de kaken in de weke.</li>
	<li>Geven een segment van 6/0 zijde ligatuur schroefdraad door het oog van een afbinding hulp ( Figuur 4 B) gehouden in de linkerhand onder de aortaboog en het op te halen door koppelverkoop pincet gehouden in de rechterhand tussen de oorsprong van de juiste innominate en linker gemeenschappelijk halsslagaderen ( Figuur 5).</li>
	<li>Knippen van een 27-gauge naald tot een lengte van 5 mm en botte beide uiteinden door hen met een Crile naald houder. De afgestompte 27-gauge naald naast de aortaboog ( Figuur 6) met een gladde-tipped rechtstreeks micro-chirurgische Tang en binden van de hechtdraad gezellig rond de naald en de aorta tussen de juiste innominate en linker gemeenschappelijke halsslagader slagaders met behulp van de twee gelijkmakende verlostang ( Figuur 7). Uitvoeren om te binden zonder speling de hechtdraad, een eerste dubbele knoop gevolgd door vier extra knopen. Ervoor te zorgen dat alle knopen plat zijn.</li>
	<li>Na afbinding, Verwijder snel maar voorzichtig de naald te bereiken een 0,4 mm diameter vernauwing en een reproduceerbare dwarse 65-70% aorta vernauwing.</li>
	<li>Controleren voor hemostase van het zachte weefsel rond de aortaboog, de sternale randen en vooraf tracheale spieren. Resorbeerbare hemostatische gaas zetten waar lekt bloed wordt waargenomen. Verwijder de 7/0 monofilamenten polypropyleen blijven hechtingen gebruikt voor het verspreiden van de sternale randen.</li>
	<li>Geven een eenvoudige 6/0 monofilamenten polypropyleen hechtdraad met de houder van een micro-chirurgische naald van buiten aan binnenkant van de linker tweede intercostale ruimte en vervolgens van binnen naar buiten de juiste tweede intercostale ruimte. Blijf dicht bij costo-sternale hoek om te voorkomen dat schade aan intercostale en interne thoracale vaartuigen of borstvlies.</li>
	<li>Brengen samen de sternale randen door 6/0 polypropyleen monofilament hechtdraad koppelverkoop met een Crile-hout naald houder.</li>
	<li>Sluit de huid met een 5/0 monofilamenten polypropyleen hechtdraad uitgevoerd in één laag met een Crile-hout naald houder.</li>
	<li>Voeren de sham procedure identiek aan de operatie van de vernauwing, maar zonder een hechtdraad rond de aorta koppelverkoop.</li>
</ol> 3. Post-operatieve herstel <ol><li>de dieren nauwlettend. overdracht van de muis naar een individuele kooi en breng dit in een liggend.</li>
	<li>Toestaan de muis te herstellen onder een opwarming van de aarde licht tot volledig wakker (minder dan 1 uur na de verdoving inducerende).</li>
	<li>Voor postoperatieve Analgesie, injecteren 0,1 mg/kg van buprenorfine intraperitoneally. Herhaal subcutane injecties van 0,1 mg/kg van buprenorfine elke 8 h voor de eerste drie dagen zoals aangegeven.</li>
	<li>Plaats van de bediende muizen in standaard kooien (maximaal 3 muizen per korf) en minimum 2 muizen per kooi.</li>
</ol> 4. Hart van oogst <ol><li>op de dag van analyse, euthanaseren de muis met een oplossing van ketamine 300 mg/kg en xylazine 20 mg/kg in een zoutoplossing door intraperitoneale injectie.</li>
	<li>Eerste oogst het bloed van de vena cava inferior en vervolgens via dezelfde lijn injecteren 5 mL van oplossing van 2.6 mM EDTA in een zoutoplossing.</li>
	<li>Oogst van het hart, het verwijderen van de atria en het gewicht van het hart (linker en rechter ventrikel zonder atria).</li>
	<li>Scheiden links van de juiste ventricle met het septum resterende naar het linkerventrikel deel. Wegen beide weefselsteekproeven en bevriezen ze in vloeibare stikstof.</li>
</ol>

<ol><li>Molinari, F., Malara, N., Mollace, V., Rosano, G., Ferraro, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+cardiac+cachexia%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Animal models of cardiac cachexia.</a> Int. J. Cardiol. 219 (15), 105-110 (2016).</li>
<li>Tarnavski, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+surgical+models+in+cardiovascular+research%5BTitle%5D)+AND+%22Methods.+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Mouse surgical models in cardiovascular research.</a> Methods. Mol. Biol. 573, 115-137 (2009).</li>
<li>Verma, S. K., Krishnamurthy, P., Kishore, R., et al. Transverse aortic constriction: a model to study heart failure in small animals. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aVerma%2C+SK+%22Manual+of+Research+Techniques+in+Cardiovascular+Medicine%22">Manual of Research Techniques in Cardiovascular Medicine</a>. Ardehali, H. , Wiley, J., & Sons. 164-169 (2014).</li>
<li>Patten, R. D., Hall-Porter, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small+animal+models+of+heart+failure.+Development+of+novel+therapies%2C+past+and+present%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Heart+Fail%22%5BJournal%5D)">Small animal models of heart failure. Development of novel therapies, past and present.</a> Circ. Heart Fail. 2 (2), 138-144 (2009).</li>
<li>Rockman, H. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Segregation+of+atrial-specific+and+inducible+expression+of+an+atrial+natriuretic+factor+transgene+in+an+in+vivo+murine+model+of+cardiac+hypertrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+USA%22%5BJournal%5D)">Segregation of atrial-specific and inducible expression of an atrial natriuretic factor transgene in an in vivo murine model of cardiac hypertrophy.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 88 (18), Erratum in: Proc. Natl. Acad. Sci. USA Page 9907 8277-8281 (1991).</li>
<li>Barrick, C. J., Rojas, M., Schoonhoven, R., Smyth, S. S., Threadgill, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+response+to+pressure+overload+in+129S1%2FSvImJ+and+C57BL%2F6J+mice%3A+temporal-+and+background-dependent+development+of+concentric+left+ventricular+hypertrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Cardiac response to pressure overload in 129S1/SvImJ and C57BL/6J mice: temporal- and background-dependent development of concentric left ventricular hypertrophy.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 292 (5), 2119-2130 (2007).</li>
<li>Deschepper, C. F., Olson, J. L., Otis, M., Gallo-Payet, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+blood+pressure+and+morphological+traits+in+cardiovascular-related+organs+in+13+different+inbred+mouse+strains%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Appl.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Characterization of blood pressure and morphological traits in cardiovascular-related organs in 13 different inbred mouse strains.</a> J. Appl. Physiol. 97 (1), 369-376 (2004).</li>
<li>Almeida, A. C., van Oort, R. J., Wehrens, X. H. T. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3164086/">Transverse aortic constriction in mice.</a> J. Vis. Exp. (38), April 21 (2010).</li>
<li>Hu, P., Zhang, D., Swenson, L., Chakrabarti, G., Abel, E. D., Litwin, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Minimally+invasive+aortic+banding+in+mice%3A+effects+of+altered+cardiomyocyte+insulin+signaling+during+pressure+overload%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Minimally invasive aortic banding in mice: effects of altered cardiomyocyte insulin signaling during pressure overload.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 285 (3), 1261-1269 (2003).</li>
<li>Faerber, G., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20447656">Induction of heart failure by minimally invasive aortic constriction in mice: Reduced peroxisome proliferator-activated receptor ϒ coactivator levels and mitochondrial dysfunction.</a> J. Thorac. Cardiovasc. Surg. 141 (2), 492-500 (2011).</li>
<li>Andersen, N. M., Tang, R., Li, L., Javan, H., Zhang, X. Q., Selzman, C. H. <a target="_blank" href="http://pubmedcentralcanada.ca/pmcc/articles/PMC3402700/">IKK-β inhibition prevents adaptive left ventricular hypertrophy.</a> J. Surg. Res. 178 (1), 105-109 (2012).</li>
<li>Nemska, S., Monassier, L., Gassmann, M., Frossard, N., Tavakoli, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kinetic+mRNA+profiling+in+a+rat+model+of+left+ventricular+hypertrophy+reveals+early+expression+of+chemokines+and+their+receptors%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Kinetic mRNA profiling in a rat model of left ventricular hypertrophy reveals early expression of chemokines and their receptors.</a> PLoS ONE. 11 (8), 0161273(2016).</li>
<li>Liao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Echocardiographic+assessment+of+LV+hypertrophy+and+function+in+aortic-banded+mice%3A+necropsy+validation%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Echocardiographic assessment of LV hypertrophy and function in aortic-banded mice: necropsy validation.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 282 (5), 1703-1708 (2002).</li>
<li>Stansfield, W. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+a+model+to+independently+study+regression+of+ventricular+hypertrophy%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Surg.+Res%22%5BJournal%5D)">Characterization of a model to independently study regression of ventricular hypertrophy.</a> J. Surg. Res. 142 (2), 387-393 (2007).</li>
<li>Beetz, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ablation+of+biglycan+attenuates+cardiac+hypertrophy+and+fibrosis+after+left+ventricular+pressure+overload%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Mol.+Cell.+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Ablation of biglycan attenuates cardiac hypertrophy and fibrosis after left ventricular pressure overload.</a> J. Mol. Cell. Cardiol. 101, December 145-155 (2016).</li>
</ol>

De auteurs hebben geen conflict van belang om te vermelden.

Het doel van dit protocol is te presenteren van een stap voor stap illustratie van de chirurgische techniek voor minimaal invasieve dwarse aorta vernauwing in muizen. Gedetailleerde technische beschrijving van transversale aorta vernauwing in muizen is gemeld door andere auteurs2,8. Echter, deze onderzoekers chirurgie uitvoeren na intubatie en ventilatie van dieren. Het gebruik van een extra stap van intubatie-ventilatie vergroot de complexiteit en de duur van de...

In het afgelopen jaar, de studie van hartfalen is uitgevoerd in levensvatbare diermodellen1. Vergeleken met grote dierlijke modellen van hartverlamming, hebben kleine dierlijke modellen talrijke potentiële voordelen. Naast lagere kosten van huisvesting en onderhoud zijn kleine dierlijke modellen toegankelijk voor meer onderzoekers als gevolg van de minder complex faciliteiten die nodig zijn2.
Hartfalen Muismodellen biedt veel van dezelfde voordelen als de rat-modellen. Bovendien tot verminderde huisvesting kost3, Muismodellen profiteren van de beschikbaarheid van relevante transgene en knockoutstadia (KO) stammen. De mogelijkheid van cel type-specifieke, afleidbare KO of transgene strategieën maken de muis een waardevol instrument te bestuderen van de pathogenese van hartfalen en te proberen vast te stellen nieuwe therapeutische regimes3.
Onder de muis modellen van hartfalen gebruikt momenteel4, dwarse aorta vernauwing (TAC) die voor het eerst door Rockman5 beschreven werd is het aangewezen model voor het genereren van druk overbelasting-geïnduceerde links ventriculaire hypertrofie (LVH)1 , 3. het grootste voordeel van dit model is de mogelijkheid tot stratificatie van LVH2, hoewel links ventriculaire remodelleren in reactie op TAC is variabel tussen verschillende muis stammen. In het bijzonder, ontwikkelen C57BL/6 muizen snelle LV dilatatie na TAC, die niet met andere stammen4,6,7kan optreden.
Het plotselinge begin van hypertensie bereikt met TAC oorzaken een ongeveer 50% toename in LV massa binnen 2 weken, waardoor snel onderzoeken de activiteit van farmacologische of moleculaire interventies die gericht zijn op de ontwikkeling van LVH4modulerende. De acute inductie van ernstige hypertensie door TAC niet precies het reproduceren van de progressieve links ventriculaire hypertrofie en remodelleren waargenomen in de klinische setting van aorta stenose of arteriële hypertensie. Dit model wordt echter gebruikt door veel onderzoekers te identificeren en aanpassen van nieuwe therapeutische doelen in hartfalen4.
Uitvoeren van TAC in muizen vereist meer chirurgische expertise die nodig is voor andere technieken die worden gebruikt voor het opwekken van LVH en latere hartfalen2. De meeste auteurs uitvoeren deze procedure door intubating en ventileren van de dierlijke2,8, waardoor deze procedure meer veeleisende en tijdrovende en wordt toegevoegd aan de chirurgische lasten voor het dier. Alleen enkele onderzoekers hebben minimaal invasieve TAC gebruikt in hun studie met korte verwijzing naar de chirurgische ingreep9,10,11.
Het doel van dit protocol is te beschrijven stap voor stap een vereenvoudigde en gebruikersvriendelijke techniek van minimaal invasieve dwarse vernauwing van de aorta in muizen, markeren de kritieke fasen van de procedure. Door de volgende belangrijke stappen, kunt een gemakkelijk deze techniek uitvoeren.

<table><tbody><tr><td>Surgical microscope</td><td>Olympus</td><td>SZX2-TR30</td><td></td></tr><tr><td>Razor</td><td>Rowenta</td><td>Nomad TN3650FO</td><td></td></tr><tr><td>Hechtdraad:</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Polypropyleen 7/0</td><td>Ethicon</td><td>BV-1X</td><td></td></tr><tr><td>Polypropyleen 6/0</td><td>BBraun</td><td>C0862061</td><td></td></tr><tr><td>Zijde 6/0 ligatuur&nbsp;</td><td>FST</td><td>18020-60</td><td></td></tr><tr><td>Polypropyleen 4/0</td><td>Ethicon</td><td>8683</td><td></td></tr><tr><td>Polypropyleen 5/0</td><td>Ethicon</td><td>Z303</td><td></td></tr><tr><td>Geneesmiddelen:</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ketamin</td><td>Merial</td><td>Imalg&egrave;ne 1000, LBM154AD</td><td></td></tr><tr><td>Xylazine</td><td>Bayer</td><td>Rompun 2%, KP09PPC</td><td></td></tr><tr><td>Buprenorfine</td><td>Ceva</td><td>Vetergesic, 072013</td><td></td></tr><tr><td>Instrumenten:&nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Botgeveder</td><td>Fine Surgical Tools</td><td>16101-10</td><td></td></tr><tr><td>Ligatuurhulp</td><td>Fine Surgical Tools</td><td>18062-12</td><td></td></tr><tr><td>Knooptang</td><td>Fine Surgical Tools</td><td>18026-10</td><td></td></tr><tr><td>Naaldhouder Crile-Wood</td><td>Fine Surgical Tools</td><td>12003-15</td><td></td></tr><tr><td>Microchirurgietang</td><td>Fine Surgical Tools</td><td>11003-12</td><td></td></tr><tr><td>Microchirurgietang</td><td>Fine Surgical Tools</td><td>11002-12</td><td></td></tr><tr><td>Weefseltang</td><td>Fine Surgical Tools</td><td>11021-12</td><td></td></tr><tr><td>Microchirurgie naaldhouder</td><td>Fine Surgical Tools</td><td>12076-12</td><td></td></tr><tr><td>Microchirurgie schaar</td><td>Fine Surgical Tools</td><td>91501-09</td><td></td></tr><tr><td>Mayo schaar</td><td>Fine Surgical Tools</td><td>14511-15</td><td></td></tr><tr><td>11-bladig mes</td><td>Fine Surgical Tools</td><td>10011-00</td><td></td></tr><tr><td>RNA extractie en qPCR:</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>TriReagent</td><td>Euromedex</td><td>TR-118-200</td><td></td></tr><tr><td>Rneasy Mini kit</td><td>Qiagen</td><td>74704</td><td></td></tr><tr><td>Qubit fluorimetrische RNA-test</td><td>Fisher Scientific</td><td>10034622</td><td></td></tr><tr><td>RNA 6000 Nano kit</td><td>Agilent</td><td>5067-1511</td><td></td></tr><tr><td>High Capacity cDNA kit</td><td>Fisher Scientific</td><td>10400745</td><td></td></tr><tr><td>Taqman Master Mix</td><td>Fisher Scientific</td><td>10157154</td><td></td></tr><tr><td>Taqman BNP primers</td><td>Fisher Scientific</td><td>Mm01255770_g1</td><td></td></tr><tr><td>Taqman ANP primers</td><td>Fisher Scientific</td><td>Mm01255747_g1&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Taqman ACE primers</td><td>Fisher Scientific</td><td>Mm00802048_m1</td><td></td></tr><tr><td>Taqman Col1a1 primers&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>Mm00801666_g1</td><td></td></tr><tr><td>Taqman TGFb primers</td><td>Fisher Scientific</td><td>Mm01178820_m1</td><td></td></tr><tr><td>Taqman Gapdh primers</td><td>Fisher Scientific</td><td>Mm99999915_g1</td><td></td></tr><tr><td>ABIPrism&nbsp; Thermocycler</td><td>Applied Biosystems</td><td>7000</td><td></td></tr><tr><td>Software:</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>GraphPad Prism</td><td>GraphPad</td><td>Prism 7</td><td></td></tr><tr><td>Diervoer</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Complete voeding voor volwassen ratten/muizen</td><td>Safe</td><td>UB220610R</td><td></td></tr></tbody></table>

techniek van minimaal invasieve dwarse aorta vernauwing in muizen voor inductie van links ventriculaire hypertrofie

Technique of Minimally Invasive Transverse Aortic Constriction in Mice for Induction of Left Ventricular Hypertrophy

Transversale aorta vernauwing (TAC) in muizen is een van de meest gebruikte chirurgische technieken voor experimentele onderzoek van druk overbelasting-geïnduceerde ventriculaire hypertrofie (LVH) en de progressie van links naar hartfalen. Deze procedure is in het merendeel van de gerapporteerde onderzoeken uitgevoerd met intubatie en ventilatie van het dier dat maakt het veeleisende en tijdrovende en draagt bij aan de chirurgische lasten aan het dier. Het doel van dit protocol is voor het beschrijven van een vereenvoudigde methode van minimaal invasieve TAC zonder intubatie en ventilatie van muizen. Kritische stappen van de techniek worden benadrukt met het oog op lage sterfte en hoog rendement in inducerende LVH.
Mannelijke C57BL/6 muizen (10-week-oude, 25 à 30 g, n = 60) werden verdoofd met een enkele intraperitoneale injectie van een mengsel van ketamine en xylazine. In een spontaan ademhaling dier na een 3-4 mm bovenste gedeeltelijke sternotomy, een segment van 6/0 zijde hechtdraad schroefdraad door het oog van een afbinding steun werd aangenomen onder de aortaboog en gebonden over een afgestompte 27-gauge naald. Sham bediende dieren onderging de dezelfde chirurgische voorbereiding maar zonder vernauwing van de aorta. De doeltreffendheid van de procedure in het inducerende LVH wordt getuigd door een aanzienlijke toename van het hart/lichaam / gewichtsverhouding. Deze verhouding wordt verkregen dagen 3, 7, 14 en 28 na chirurgie (n = 6-10 in elke groep en elk tijdstip). Met behulp van onze techniek wordt LVH waargenomen in TAC t.o.v. sham dieren vanaf dag 7 tot dag 28. Operatieve en late (meer dan 28 dagen) sterfte zijn beide zeer laag op 1,7%.
Kortom, onze kosteneffectieve techniek van minimaal invasieve TAC in muizen draagt zeer lage operatieve en post-operatieve sterfte en is zeer efficiënt in het inducerende LVH. Het vereenvoudigt de operatieve procedure en vermindert de stam het dier op te zetten. Het kan gemakkelijk worden uitgevoerd door de kritische stappen in dit protocol.

Voortbestaan van de operatieve en laat De operatieve overleven was zeer hoog, 98,3% (59 van 60) voor de hele reeks (TAC en sham bediende dieren). De alleen operatieve dood was te wijten aan een bloeding complicatie in een muis geschaafd voor sham werking. Post-operatieve overleven tijdens de observatieperiode van 28 dagen was ook uitstekend, door 98,3% (58 van 59). Alleen late overlijden postoperatieve in een TAC-muis op dag (D) 16, eventueel van cardiale oorsprong.</p...

Het doel van dit protocol is te beschrijven stap voor stap de techniek van minimaal invasieve dwarse aorta vernauwing (TAC) in muizen. Door eliminatie van intubatie en ventilatie die verplicht is voor de gebruikte standaardprocedure zijn, minimaal invasieve TAC vereenvoudigt de operatieve procedure en vermindert de stam het dier op te zetten.

Techniek van minimaal invasieve dwarse aorta vernauwing in muizen voor inductie van links ventriculaire hypertrofie

Transverse aortic constriction (TAC) in mice is one of the most commonly used surgical techniques for experimental investigation of pressure ...

Het algemene doel van dit protocol is het tot stand brengen van een minimaal invasieve transversale aortaconstrictie bij muizen. Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van kernvragen over de uitvoering van transversale aortaconstrictie bij muizen, zoals het creëren van een doorgang onder de aortaboog. De belangrijkste voordelen van deze techniek zijn dat deze eenvoudig en gebruiksvriendelijk is, en dat het intuberen en ventileren van de muizen overbodig maakt.Ik zal de procedure demonstreren met onze postdoc Simona Nemska, die de presurgische voorbereiding van het dier en de postoperatieve surveillance-stappen zal uitvoeren. Scheer op de dag van de procedure de nek en borst van een geanestheseerde muis en desinfecteer de blootgestelde huid met 70% ethanol. Nadat het passende sedatieniveau via een teenknijptest is bevestigd, wordt het dier in rugligging vastgezet op een schoon kurken werkvlak.Gebruik vervolgens een scalpellames nummer 11 om een longitudinale midline cervicale incisie van 10 millimeter te maken van de suprasternale inkeping tot het midden van de borstkas om het sternum bloot te leggen. Gebruik een Crile-Wood naaldhouder om een 4-0 monofilament polypropyleen hec

technique-minimally-invasive-transverse-aortic-constriction-mice-for

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Dwars aorta vernauwing (TAC) in de muis is een veel gebruikte experimenteel model om de mechanismen die ten grondslag liggen cardiale hypertrofie en hartfalen ontwikkeling te bestuderen. Hier beschrijven we de procedures aan vernauwen de aorta naar een reproduceerbare mate van cardiale hypertrofie in muizen te creëren.

Dwars Aorta Vernauwing in Muizen

De chirurgische procedure gebruikt om experimentele myocardinfarct bij de muis begint met linker thoractomie tussen de derde en vierde ribben om visualiseren het voorste oppervlak van het hart en linker long. De linker coronaire arterie geligeerd, wordt de borst gesloten en de muis mag spontaan herstellen.

Gewijzigd Techniek voor Coronary Artery Ligatie in Muizen

In this video, we demonstrate an experimental protocol for minimally invasive transverse aortic constriction in mice to examine pressure overload-induced heart failure.

Transverse Aortic Arch Banding in Mouse Model: A Minimally Invasive Technique in Mice for Induction of High Pressure in the Left Ventricle

We beschrijven een stapsgewijze procedure voor het creëren van druk overbelasting en linker ventrikel hypertrofie in Wistarratten door vernauwing van de aorta ascendens met een kleine metalen clip. Dit model wordt veel gebruikt voor het bestuderen remodelleren veranderingen tijdens cardiale hypertrofie en voor het identificeren en evalueren van strategieën voor regressie van dergelijke veranderingen.

Oplopend Aorta Vernauwing in ratten voor de schepping van druk overbelasting cardiale hypertrofie Model

Het doel van dit protocol is om niet-invasief beoordelen cardiale structurele en functionele veranderingen in een muismodel van hart-en vaatziekten door dwarse aorta vernauwing, met behulp van B- en M-mode echocardiografie en kleur / pulse wave Doppler imaging.

Beoordeling van Cardiac morfologische en functionele veranderingen in muismodel van Transversale Aorta Vernauwing door Echocardiografie Imaging

Minimaal invasieve dwarse aorta vernauwing (MTAC) behoudt de essentie van de reguliere dwarse aorta vernauwing (TAC), terwijl het elimineren van het gebruik van een ventilator met tracheale intubatie. Het blijkt een zeer wenselijke werkwijze voor high-throughput studies linker ventrikel overbelasting, met name translationele studies.

Minimaal Invasieve Transversale Aorta Vernauwing in Muizen

Hier presenteren we een protocol van Transverse aorta vernauwing (TAC) via een laterale Thoracotomie. Deze techniek is een minimaal invasieve, gesloten borst chirurgische ingreep gericht om overbelasting van de druk en hartfalen in muizen met behulp van TAC laboratorium standaardinstellingen te simuleren.

Een gesloten-borst-Model voor het opwekken van transversale aorta vernauwing in muizen

Hier bieden we een nuttige aanpak voor het bestuderen van het mechanisme van rechter ventriculaire mislukking. Een handiger en efficiënter aanpak van de longslagader vernauwing wordt vastgesteld met behulp van chirurgische instrumenten gemaakt inhouse. Bovendien worden methoden voor het evalueren van de kwaliteit van deze aanpak door echocardiografie en catheterisatie geleverd.

Inductie van rechter ventrikel falen door longslagader vernauwing en evaluatie van rechter ventriculaire functie bij muizen

Hier beschrijven we een stapsgewijs protocol van chirurgische aorta-debanding in het gevestigde muizenmodel van aorta-vernauwing. Deze procedure maakt het niet alleen mogelijk om de mechanismen te bestuderen die ten grondslag liggen aan de linker ventriculaire omgekeerde remodellering en regressie van hypertrofie, maar ook om nieuwe therapeutische opties te testen die myocardherstel kunnen versnellen.

Het bestuderen van Linker Ventriculaire Omgekeerde Remodeling door Aorta Debanding in Knaagdieren

Dit protocol presenteert een verbeterde methode om voorbijgaande myocardhypertrofie met absorbeerbare hechting te verkrijgen, waarbij de afname van linkerventrikelhypertrofie wordt gesimuleerd na het verwijderen van drukoverbelasting. Het kan waardevol zijn voor de studies naar myocardhypertrofische conditionering.

Operatie transversale aortavernauwing met absorbeerbare hechting om voorbijgaande myocardhypertrofie te verkrijgen

Het huidige protocol beschrijft een aangepaste en vereenvoudigde techniek met een minimaal invasieve transversale aortavernauwing (TAC) procedure met behulp van een zelfgemaakt retractor. Deze procedure kan worden uitgevoerd zonder een ventilator of microscoop en introduceert drukoverbelasting, wat uiteindelijk leidt tot harthypertrofie of hartfalen.

Een aangepaste techniek voor transversale aortavernauwing bij muizen

Leer een minimaal invasieve techniek voor transversale aortaconstrictie bij muizen zonder intubatie. Deze methode vereenvoudigt het protocol en vermindert stress voor de dieren tijdens cardiovasculair onderzoek.

Techniek van minimaal invasieve dwarse aorta vernauwing in muizen voor inductie van links ventriculaire hypertrofie

Meer video's verkennen