Name: Met behulp van Laser Doppler Imaging en toezicht voor het analyseren van ruggenmerg microcirculatie in Rat (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-05-30T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 28 s
Description: Leer laser Doppler beeldvorming en monitoring voor het meten van lokale bloedstroom en zuurstofsaturatie in het ruggenmerg van ratten. Deze methode helpt onderzoekers microcirculatie te bestuderen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De auteurs hebben geen bevestigingen.

Dierlijke protocollen waarbij proefdieren gevolgd door de National Institutes of Health (NIH) vastgestelde richtsnoeren en door de Animal Care en gebruik Comité van kapitaal medische universiteit zijn goedgekeurd.
De procedures van de invoering van SCI en meten van BF van het ruggenmerg met behulp van laser Doppler apparatuur hieronder beschreven werden gebruikt in een gepubliceerde studie1.
1. voorbereiding voor de operatie
<ol><li>Bereiden pentobarbital natrium oplossing 3% (m/v) in een zoutoplossing en beheren op de dosis van 35 mg/kg. Let op: pentobarbital natrium is een gereguleerde stof. Gedetailleerde registers moeten worden bewaard en oplossingen op een veilige, vergrendelde locatie opgeslagen.</li>
	<li>Steriliseren van apparatuur en voor te bereiden op operatie gebied.<ol>
<li>Reinigen van de apparatuur van de operatie met de volgende stappen: 75% ethanol schoonmaken, dan autoclaaf bij 121 ° C gedurende 30 minuten, daarna drogen in een oven van 60 ° C's nachts. Steriliseren het operatie gebied met 75% alcohol.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. voorbereiding van de Rat voor chirurgie
<ol><li>Anesthetize de rat met een intraperitoneale injectie pentobarbital natrium (35 mg/kg). De gehele procedure moeten 30-40 min met inbegrip van chirurgie, BF metingen en hechtingen.</li>
	<li>Scheren het ruggedeelte van de rat uit de onderrug aan de hals. Het haar moet zo kort mogelijk worden gesneden. Plaats de rat op een 40 ° C verwarming pad te handhaven van een constante lichaamstemperatuur.</li>
</ol>3. laminectomie en de hersenschudding aan het ruggenmerg
Opmerking: Voer stappen 3.1 tot 3.6 laminectomie uit alleen voor de sham-groep, om.
<ol><li>Plaats de dierlijke dorsale zijde omhoog. Steriliseren het geschoren deel met jodium gevolgd door 75% alcohol met behulp van steriele katoenen ballen. Een huid incisie (4 cm) met de scalpel te maken over de laminectomie site die betrekking hebben op borstwervels T7 aan T11.</li>
	<li>Knippen en de bijgevoegde spieren aan beide zijden van T8 naar T10 bloot de spinous processen, de laminae en de facetgewrichten.</li>
	<li>Gebruik de scalpel om insnijdingen dat de kruising tussen T10 en T11 worden verbroken. Verder bloot het kruispunt door zorgvuldig door de ontrafeling van de spier laag weg om het bot bloot te stellen.</li>
	<li>Gebruik de schaar om te verder wissen spier uit de buurt van de lamina en rond de stam met kleine knipsels. Hiermee opent u een kleine ruimte tussen de wervels op T10 en T11 (figuur 1A). Langzaam en subtiel één hemostatische pincet invoegen door deze kloof en breken van de stam (figuur 1B). Zorg dat de kromming van de verlostang is altijd lateraal, gepositioneerd weg van het snoer. Herhaal aan de andere kant.</li>
	<li>Blootstellen van het ruggenmerg (Figuur 1 c) en trek voorzichtig de lamina afbreken. Zorg dat u niet elke vrije of gekartelde botfragmenten om achter te laten.</li>
	<li>Herhaal de procedure voor het verder Verwijder T9 en T8 laminae.</li>
	<li>Het dier naar het botslichaam apparatuur tabel verplaatsen en gebruik het paar van Adson verlostang gekoppeld aan de tabel om te stabiliseren van het dier wervelkolom door klemmen op het spinous-proces van T7 en T11, dan aanpassen van de verlostang om het rechttrekken van de rug (Figuur 1 d).</li>
	<li>Zet het dier onder het botslichaam, streven de staking staaf naar het midden van de blootgestelde ruggenmerg en verlagen van de staaf naar binnen 3-5 mm van het oppervlak van het ruggenmerg.</li>
	<li>De effect-parameters zoals de effect-kracht (160 KD) en Nadruktijd (1 s)<ol>
<li>Induceren van het GCB door te klikken op de knop "Start Experiment" op de software-interface, klik "ja" op de volgende interface het effect automatisch wordt gestart. Na de botsing zal de software de werkelijke gegevens van het effect naast het instellen van parameters weergeven, Controleer de gegevens en om ervoor te zorgen dat het was dicht bij het punt van de instelling (figuur 1E). Opmerking: Een typische sign voor het welslagen van het experiment was een korte periode van onvrijwillige tail swing en ledematen beweging na de botsing. Prikkels aan de staart om te controleren voor ledemaat reflectie kunnen ook worden gedaan. Locomotor beoordeling zoals de Basso, Beattie en Bresnahan (BBB) motorische schaal22,23 is echter noodzakelijk om de doeltreffendheid van de veroorzaakte schade.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. laser Doppler scannen
<ol><li>Zie de Tabel van materialen voor de details van de laser Doppler scanner gebruikt in deze studie. Als u wilt scannen het blootgestelde ruggenmerg, door de rat dorsale zijde omhoog op een zwarte, niet-reflecterende achtergrond te plaatsen.</li>
	<li>
Scanparameters instellen: Open de scansoftware, klikt u op "Maatregel" invoeren van de grafische gebruikersinterface van meting en klik op de knop "Scanner setup" openen van de interface van scanner setup. Als u wilt scannen kleine gebieden zoals in dit experiment, selecteer "Hoge resolutie" onder de "Scan grootte en weergaveopties" voor een fijne scanmodus met een hogere resolutie (256 × 256 punten die betrekking hebben op 4 × 10 cm2) (figuur 2A). Klik op de optie "Afbeelding scannen" om te controleren de scannen planimetrische weergave (figuur 2B).</li>
	<li>Klik op de "Video en afstand" optie om te controleren de live video beeld. Plaats de scanner 10-13 cm boven de chirurgische venster en verplaats de achtergrond met het dier naar center het blootgestelde ruggenmerg op het scannen venster (figuur 2C).</li>
	<li>De functie "auto verre" prima het scannen hoogte aanpassen, Let op dat de hoogte van het scannen moet consistent worden gehouden in alle maten in de experiment figuur 2C.</li>
	<li>Met een nonreflective cover met een venster waarmee werkmapberekeningen alleen het chirurgische gebied om verder te minimaliseren achtergrond en markeren van het dier richting.</li>
	<li>Op de "Herhaal scannen", stelt u het aantal scans (we gebruiken in dit geval 8 herhalen scans) Klik op "OK" om te openen de Herhaal scan-interface. Klik op de startknop om te beginnen met het scannen en het hele proces duurt ongeveer 3-4 min (figuur 2D).</li>
</ol>5. laser Doppler toezicht
<ol><li>We gebruikten een scanner monitor met VP3 botte naald einde levering sonde monitor BF en SO2 na verloop van tijd. Bevestig de Laser Doppler sonde loodrecht op een stereotaxic instrument voor het instellen van de bewakingsapparatuur.</li>
	<li>Opgemaakt de rat aan de dorsale zijde van de stereotaxic apparaat, het dier met een klein stukje piepschuim wanneer dat nodig is om het level van de blootgestelde ruggenmerg onderlaag.</li>
	<li>Het verlagen van de sonde naar het ruggenmerg naar monitor BF. Opmerking: Stap 5.3 is cruciaal voor de reproduceerbaarheid van de meting als het gegevens-lezingen gevoelig voor de druk toegepast op de sonde zijn, dus extra voorzichtigheid is vereist om niet over - of onder - position de sonde.<ol>
<li>Controleer de incisie en verwijder een buitensporige vloeistof of bloed met behulp van een steriele wattenschijfje.</li>
		<li>Gebruik van het apparaat de X- en Y-as om te zoeken van de sonde tot 2 mm rostraal van het middelpunt van de blootgestelde ruggenmerg of laesie wijs en de centrale ader te voorkomen.</li>
		<li>Gebruik de Z-as te langzaam lager de sonde naar het niveau alleen raakt het oppervlak van het ruggenmerg. De sonde moet enkel raken het oppervlak van het ruggenmerg maar niet zo los in staat stellen een fel licht om te ontsnappen aan de kant van het contactpunt.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Gegevens opnemen
	<ol>
<li>Open de data acquisitie software, klik op de knop "nieuw experiment" het openen van het installatie-interface. Onder de "Algemene" optie voor de configuratie van het systeem controleren en klik op "Next" (figuur 3A), Selecteer in de Display-Setup het kanaal voor BF and SO2 op. Klik op "Next" (figuur 3B).</li>
		<li>Input bestandsinformatie en klik op "Next" (Figuur 3 c) invoeren van de interface van de opname van de gegevens, klik op de groene driehoek knop om te beginnen met opgenomen gegevens van de sonde (figuur 3D).</li>
		<li>Zodra het signaal stabiel, record gegevens gedurende 8 opeenvolgende minuten is. Dan til de sonde en het dier te verwijderen uit stereotaxic apparaat suture de incisie en zet het dier in post-operatieve zorg.</li>
	</ol>
</li>
</ol>6. hechtingen en na bewerking zorg
<ol><li>Suture van de snede: een hechtdraad naald in de spier aan beide zijden van de incisie invoegen. Haal de draad door, de weefsels trekken samen, waardoor die betrekking hebben op de blootgestelde ruggenmerg op de site van verwijderde laminae. Met behulp van de houder van de naald, trek de hele draad door, formulier drie square knopen en trim de draad als dicht bij de knopen mogelijk.</li>
	<li>Suture van de huid met 3-4 square knopen op dezelfde manier als het hechten van de snede en trim de draden ongeveer 1 cm vanaf de knopen.</li>
	<li>Plaats de rat op zijn kant in zijn kooi, vermijden van contact tussen de chirurgie-site en de onderkant van de kooi. Kooien moeten worden gelegd op de verwarming pads.</li>
	<li>Volgen het dier totdat het wakker uit narcose om ervoor te zorgen geen na chirurgie bloeden en dat de hechtingen gesloten blijven.</li>
	<li>Subcutaan injecteren Benzyl penicilline natrium in rat voor 3 dagen na de operatie, 120 mg/kg per dag. Intraperitoneally injecteren buprenorfine (0,05 mg/kg) onmiddellijk na de chirurgie en elke 6 uur na chirurgie voor 1 dag.</li>
	<li>Om te controleren of de dieren toegang hebben tot voldoende voedsel en water, water flessen met uitgebreide waterspuwers passen en voedsel dicht bij het dier in de kooi zetten. Opmerking: We uitgevoerd BBB beoordelingsschaal voor evaluatie van de motorische functie van stuk van de dierlijke 24u na schade uit te sluiten van dieren met een BBB-score boven 0, dus ervoor te zorgen dat het dier was verlamd door de veroorzaakte schade.</li>
	<li>Na chirurgie, handmatige leeg van de urineblaas bieden door zachtjes druk uit te oefenen op de buik tweemaal daags, indien nodig.</li>
</ol>

<ol><li>Jing, Y. L., Bai, F., Chen, H., Dong, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Meliorating+microcirculatory+with+melatonin+in+rat+model+of+spinal+cord+injury+using+laser+Doppler+flowmetry%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroreport%22%5BJournal%5D)">Meliorating microcirculatory with melatonin in rat model of spinal cord injury using laser Doppler flowmetry.</a> Neuroreport. 27 (17), 1248-1255 (2016).</li>
<li>Jing, Y. L., Bai, F., Chen, H., Dong, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Melatonin+prevents+blood+vessel+loss+and+neurological+impairment+induced+by+spinal+cord+injury+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Spinal+Cord+Med%22%5BJournal%5D)">Melatonin prevents blood vessel loss and neurological impairment induced by spinal cord injury in rats.</a> J Spinal Cord Med. , 1-8 (2016).</li>
<li>Han, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rescuing+vasculature+with+intravenous+angiopoietin-1+and+alpha+v+beta+3+integrin+peptide+is+protective+after+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">Rescuing vasculature with intravenous angiopoietin-1 and alpha v beta 3 integrin peptide is protective after spinal cord injury.</a> Brain. 133 (Pt 4), 1026-1042 (2010).</li>
<li>Gerzanich, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((De+novo+expression+of+Trpm4+initiates+secondary+hemorrhage+in+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">De novo expression of Trpm4 initiates secondary hemorrhage in spinal cord injury.</a> Nat Med. 15 (2), 185-191 (2009).</li>
<li>Phillips, J. P., Cibert-Goton, V., Langford, R. M., Shortland, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perfusion+assessment+in+rat+spinal+cord+tissue+using+photoplethysmography+and+laser+Doppler+flux+measurements%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomedical+Optics%22%5BJournal%5D)">Perfusion assessment in rat spinal cord tissue using photoplethysmography and laser Doppler flux measurements.</a> Journal of Biomedical Optics. 18 (3), 037005(2013).</li>
<li>Garcia-Lopez, P., Martinez-Cruz, A., Guizar-Sahagun, G., Castaneda-Hernandez, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+spinal+cord+injury+changes+the+disposition+of+some%2C+but+not+all+drugs+given+intravenously%5BTitle%5D)+AND+%22Spinal+Cord%22%5BJournal%5D)">Acute spinal cord injury changes the disposition of some, but not all drugs given intravenously.</a> Spinal Cord. 45 (9), 603-608 (2007).</li>
<li>Brown, A., Nabel, A., Oh, W., Etlinger, J. D., Zeman, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perfusion+imaging+of+spinal+cord+contusion%3A+injury-induced+blockade+and+partial+reversal+by+%CE%B22-agonist+treatment+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurosurgery-Spine%22%5BJournal%5D)">Perfusion imaging of spinal cord contusion: injury-induced blockade and partial reversal by β2-agonist treatment in rats.</a> Journal of Neurosurgery-Spine. 20 (2), 164-171 (2014).</li>
<li>Olive, J. L., McCully, K. K., Dudley, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+flow+response+in+individuals+with+incomplete+spinal+cord+injuries%5BTitle%5D)+AND+%22Spinal+Cord%22%5BJournal%5D)">Blood flow response in individuals with incomplete spinal cord injuries.</a> Spinal Cord. 40 (12), 639-645 (2002).</li>
<li>Yamada, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spinal+cord+blood+flow+and+pathophysiological+changes+after+transient+spinal+cord+ischemia+in+cats%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Spinal cord blood flow and pathophysiological changes after transient spinal cord ischemia in cats.</a> Neurosurgery. 42 (3), 626-634 (1998).</li>
<li>Gordeeva, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular+Pathology+of+Ischemia%2FReperfusion+Injury+of+Rat+Small+Intestine%5BTitle%5D)+AND+%22Cells+Tissues+Organs%22%5BJournal%5D)">Vascular Pathology of Ischemia/Reperfusion Injury of Rat Small Intestine.</a> Cells Tissues Organs. , (2017).</li>
<li>Liu, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insulin+treatment+restores+islet+microvascular+vasomotion+function+in+diabetic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Diabetes%22%5BJournal%5D)">Insulin treatment restores islet microvascular vasomotion function in diabetic mice.</a> J Diabetes. , (2016).</li>
<li>Drain, L. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDrain%2C+L+%22The+laser+Doppler+technique%22">The laser Doppler technique</a>. , Wiley, USA. (1980).</li>
<li>Rajan, V., Varghese, B., van Leeuwen, T. G., Steenbergen, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Review+of+methodological+developments+in+laser+Doppler+flowmetry%5BTitle%5D)+AND+%22Lasers+Med+Sci%22%5BJournal%5D)">Review of methodological developments in laser Doppler flowmetry.</a> Lasers Med Sci. 24 (2), 269-283 (2009).</li>
<li>Dohare, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+neuroprotective+properties+of+the+superoxide+dismutase+mimetic+tempol+correlate+with+its+ability+to+reduce+pathological+glutamate+release+in+a+rodent+model+of+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Free+Radic+Biol+Med%22%5BJournal%5D)">The neuroprotective properties of the superoxide dismutase mimetic tempol correlate with its ability to reduce pathological glutamate release in a rodent model of stroke.</a> Free Radic Biol Med. 77, 168-182 (2014).</li>
<li>Bai, H. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pre-treatment+with+LCZ696%2C+an+orally+active+angiotensin+receptor+neprilysin+inhibitor%2C+prevents+ischemic+brain+damage%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Pre-treatment with LCZ696, an orally active angiotensin receptor neprilysin inhibitor, prevents ischemic brain damage.</a> Eur J Pharmacol. 762, 293-298 (2015).</li>
<li>Vertiz-Hernandez, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((L-arginine+reverses+alterations+in+drug+disposition+induced+by+spinal+cord+injury+by+increasing+hepatic+blood+flow%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">L-arginine reverses alterations in drug disposition induced by spinal cord injury by increasing hepatic blood flow.</a> J Neurotrauma. 24 (12), 1855-1862 (2007).</li>
<li>Garcia-Lopez, P., Martinez-Cruz, A., Guizar-Sahagun, G., Castaneda-Hernandez, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+spinal+cord+injury+changes+the+disposition+of+some%2C+but+not+all+drugs+given+intravenously%5BTitle%5D)+AND+%22Spinal+Cord%22%5BJournal%5D)">Acute spinal cord injury changes the disposition of some, but not all drugs given intravenously.</a> Spinal Cord. 45 (9), 603-608 (2007).</li>
<li>Li, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Post+pressure+response+of+skin+blood+flowmotions+in+anesthetized+rats+with+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Microvasc+Res%22%5BJournal%5D)">Post pressure response of skin blood flowmotions in anesthetized rats with spinal cord injury.</a> Microvasc Res. 78 (1), 20-24 (2009).</li>
<li>Boyle, N. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scanning+laser+Doppler+is+a+useful+technique+to+assess+foot+cutaneous+perfusion+during+femoral+artery+cannulation%5BTitle%5D)+AND+%22Critical+Care%22%5BJournal%5D)">Scanning laser Doppler is a useful technique to assess foot cutaneous perfusion during femoral artery cannulation.</a> Critical Care. 3 (4), 95-100 (1999).</li>
<li>Emmanuel, A. V., Chung, E. A. L., Kamm, M. A., Middleton, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relationship+between+gut-specific+autonomic+testing+and+bowel+dysfunction+in+spinal+cord+injury+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Spinal+Cord%22%5BJournal%5D)">Relationship between gut-specific autonomic testing and bowel dysfunction in spinal cord injury patients.</a> Spinal Cord. 47 (8), 623-627 (2009).</li>
<li>Sheu, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combination+of+cilostazol+and+clopidogrel+attenuates+rat+critical+limb+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Combination of cilostazol and clopidogrel attenuates rat critical limb ischemia.</a> J Transl Med. 10, 164(2012).</li>
<li>Basso, D. M., Beattie, M. S., Bresnahan, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Graded+histological+and+locomotor+outcomes+after+spinal+cord+contusion+using+the+NYU+weight-drop+device+versus+transection%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Neurology%22%5BJournal%5D)">Graded histological and locomotor outcomes after spinal cord contusion using the NYU weight-drop device versus transection.</a> Experimental Neurology. 139 (2), 244-256 (1996).</li>
<li>Basso, D. M., Beattie, M. S., Bresnahan, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Sensitive+and+Reliable+Locomotor+Rating-Scale+for+Open-Field+Testing+in+Rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">A Sensitive and Reliable Locomotor Rating-Scale for Open-Field Testing in Rats.</a> Journal of Neurotrauma. 12 (1), 1-21 (1995).</li>
<li>Oberg, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+motion--a+disturbance+in+the+laser-Doppler+blood+flow+signal%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Technol+Health+Care%22%5BJournal%5D)">Tissue motion--a disturbance in the laser-Doppler blood flow signal?</a> Technol Health Care. 7 (2-3), 185-192 (1999).</li>
<li>Tenland, T., Salerud, E. G., Nilsson, G. E., Oberg, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+and+temporal+variations+in+human+skin+blood+flow%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Microcirc+Clin+Exp%22%5BJournal%5D)">Spatial and temporal variations in human skin blood flow.</a> Int J Microcirc Clin Exp. 2 (2), 81-90 (1983).</li>
<li>Kernick, D. P., Tooke, J. E., Shore, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+biological+zero+signal+in+laser+Doppler+fluximetry+-+origins+and+practical+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Pflugers+Arch%22%5BJournal%5D)">The biological zero signal in laser Doppler fluximetry - origins and practical implications.</a> Pflugers Arch. 437 (4), 624-631 (1999).</li>
<li>Rudolph, A. M., Heymann, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+circulation+of+the+fetus+in+utero.+Methods+for+studying+distribution+of+blood+flow%2C+cardiac+output+and+organ+blood+flow%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">The circulation of the fetus in utero. Methods for studying distribution of blood flow, cardiac output and organ blood flow.</a> Circ Res. 21 (2), 163-184 (1967).</li>
<li>Dubory, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contrast+Enhanced+Ultrasound+Imaging+for+Assessment+of+Spinal+Cord+Blood+Flow+in+Experimental+Spinal+Cord+Injury%5BTitle%5D)+AND+%22Jove-Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Contrast Enhanced Ultrasound Imaging for Assessment of Spinal Cord Blood Flow in Experimental Spinal Cord Injury.</a> Jove-Journal of Visualized Experiments. (99), e52536(2015).</li>
<li>Kuliga, K. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamics+of+Microvascular+Blood+Flow+and+Oxygenation+Measured+Simultaneously+in+Human+Skin%5BTitle%5D)+AND+%22Microcirculation%22%5BJournal%5D)">Dynamics of Microvascular Blood Flow and Oxygenation Measured Simultaneously in Human Skin.</a> Microcirculation. 21 (6), 562-573 (2014).</li>
<li>Li, Z. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Post+pressure+response+of+skin+blood+flowmotions+in+anesthetized+rats+with+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Microvascular+Research%22%5BJournal%5D)">Post pressure response of skin blood flowmotions in anesthetized rats with spinal cord injury.</a> Microvascular Research. 78 (1), 20-24 (2009).</li>
<li>Muck-Weymann, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Respiratory-dependent+laser-Doppler+flux+motion+in+different+skin+areas+and+its+meaning+to+autonomic+nervous+control+of+the+vessels+of+the+skin%5BTitle%5D)+AND+%22Microvasc+Res%22%5BJournal%5D)">Respiratory-dependent laser-Doppler flux motion in different skin areas and its meaning to autonomic nervous control of the vessels of the skin.</a> Microvasc Res. 52 (1), 69-78 (1996).</li>
<li>Stefanovska, A., Bracic, M., Kvernmo, H. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wavelet+analysis+of+oscillations+in+the+peripheral+blood+circulation+measured+by+laser+Doppler+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Ieee+Transactions+on+Biomedical+Engineering%22%5BJournal%5D)">Wavelet analysis of oscillations in the peripheral blood circulation measured by laser Doppler technique.</a> Ieee Transactions on Biomedical Engineering. 46 (10), 1230-1239 (1999).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Een paar details moeten opgemerkt worden bij het uitvoeren van dit protocol. Ten eerste, het proces van anesthesie en chirurgie moet worden uitgevoerd zo snel en elegant mogelijk om te minimaliseren van de geïntroduceerde stress bij het dier. Verklein de verstoring van de resultaten en het dier in een relatief rustige en stabiele staat te houden. Ten tweede moet meer aandacht uitgaan naar het bloeden tijdens de meting met behulp van laser Doppler apparatuur omdat bloed potentieel met de lezing interfereren kon. Tot slot,...

Het weefsel van het ruggenmerg is zeer gevacuoliseerd en zeer gevoelig aan hypoxie geïnduceerd door dwarslaesie (SCI). Onze eerdere studies is gebleken dat de doorbloeding van het ruggenmerg aanzienlijk werd verlaagd na hersenschudding schade1,2, die kunnen worden gerelateerd aan het tekort aan motor functie. Recente studies hebben aangetoond dat de integriteit van bloedvaten na SCI goed gecorreleerd zijn met de verbetering van de sensorische motorische functie3 is. Er werd gemeld dat verbeterde vasculariteit witte stof, niet indirect leidt tot verbeterde functie4zou kunnen redden. Daarom leek het onderhoud van het ruggenmerg na letsel perfusie van primair belang voor het behoud van de haalbaarheid en functionaliteit.
De effecten van verschillende behandelingen op de perfusie na SCI zijn bestudeerd door talrijke onderzoekers met behulp van een verscheidenheid van technieken in experimentele modellen van SCI5,6,7. Laser Doppler, als een gevestigde techniek, was ongetwijfeld een handige methode voor het kwantificeren van de perfusie van verschillende dierlijke en menselijke studies8,9,10,11. De techniek is gebaseerd op de meting van de Doppler shift12 geïnduceerd door rode bloedcellen te verplaatsen naar het verhelderend licht. Sinds de commercialisering van de techniek in de vroege jaren 1980, grote vooruitgang geboekt in lasertechnologie, glasvezel en signaalverwerking voor het meten van de perfusie door laser Doppler instrumenten13, waardoor LDF in een betrouwbare technologie.
In de huidige studie, werden beide methoden van laser Doppler meting toegepast om te evalueren van de bloedstroom (BF) in de spinale koorden van concussive ratten. Vanwege de noninvasive aard van de technologie en de eenvoudige installatie biedt ons protocol een gevoelige, snelle en betrouwbare methode voor BF metingen van het ruggenmerg. Met deze methode kunt en wat nog belangrijker is, longitudinaal onderzoek naar de post concussive SCI BF zonder dierlijke offer op elk tijdstip.
Vanwege de mogelijkheid om te beoordelen van de BF van het weefsel en snelle veranderingen in de perfusie tijdens de stimulatie, is het mogelijk om de toepassing van dit protocol om te evalueren van cerebrale BF14,15 , alsmede het meten van andere weefsels zoals lever16, 17, huid18,19en20van de darm. In het model van een rat van voorbijgaande occlusie van de middelste cerebrale slagader, werden de laser Doppler lezingen gebruikt om de juiste verlaging van het tarief van de BF tot niveaus die worden verwacht in de ischemische penumbra-14. Bij ratten die kritische ledemaat ischemie (CLI) inductie hebben ondergaan, werd laser Doppler scannen hind-limb BF vóór en na de ingreep CLI om en te observeren tijdens verschillende perioden na behandeling21toegepast. Bovendien, afhankelijk de biologische beschikbaarheid en metabole Goedkeuringvande sommige drugs van hepatische BF, die werd ontdekt door LDF16. Daarom kon LDF veel worden gebruikt in experimentele model, farmacokinetische en farmacodynamische evaluatie.

<table><tbody><tr><td>Laser Doppler Line Scanner</td><td>Moor Instruments</td><td>moorLDLS2</td><td></td></tr><tr><td>Laser Doppler Monitor</td><td>Moor Instruments</td><td>moorVMS-LDF</td><td></td></tr><tr><td>Probe voor Monitor</td><td>Moor Instruments</td><td>VP3</td><td>Blunt needle end delivery probe</td></tr><tr><td>Impactor</td><td>Precision Systems and Instrumentation</td><td>IH-0400</td><td></td></tr><tr><td>Phenobarbital natrium</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P3761</td><td></td></tr><tr><td>Buprenorfine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B-908</td><td></td></tr><tr><td>Spuit</td><td>Becton Dickinson Medica (s) Pte.Ltd</td><td>300841</td><td></td></tr><tr><td>Chirurgische hechtnaalden met draad</td><td>Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products Co., Ltd</td><td></td><td>18T0329 (batchnummer) /4-0</td></tr><tr><td>Schaar</td><td>Operatie-instrumentenfabriek van Shanghai Medical Instrument Co., Ltd.</td><td>J11030 4#</td><td></td></tr><tr><td>Mesjes voor schaar</td><td>Operatie-instrumentenfabriek van Shanghai Medical Instrument Co., Ltd.</td><td>J12130 20#</td><td></td></tr><tr><td>Oogheelkundige pincetten</td><td>Operatie-instrumentenfabriek van Shanghai Medical Instrument Co., Ltd.</td><td>JD1040</td><td></td></tr><tr><td>Hemostatische pincetten</td><td>Operatie-instrumentenfabriek van Shanghai Medical Instrument Co., Ltd.</td><td>J31050</td><td></td></tr><tr><td>Benzylpenicilline natrium</td><td>North China Pharmaceutical Co., Ltd</td><td></td><td>F6072116 (batchnummer)</td></tr><tr><td>75% alcohol</td><td>Dezhou Anjie Gaoke desinfectieproducten Co., Ltd</td><td></td><td>150421R (batchnummer)</td></tr><tr><td>Jodium</td><td>Shandong Lierkang Medical Technology Co., Ltd</td><td></td><td>20170102 (batchnummer)</td></tr><tr><td>Raad</td><td>Laboratoriumdiercentrum, The Academy of Millitery Medical Sciences</td><td></td><td>Sprague-Dawly (rattenstam)</td></tr></tbody></table>

met behulp van laser doppler imaging en toezicht voor het analyseren van ruggenmerg microcirculatie in rat

Using Laser Doppler Imaging and Monitoring to Analyze Spinal Cord Microcirculation in Rat

Laser Doppler flowmetrie (LDF) is een noninvasive methode voor het meten van bloed stroom (BF), waardoor het beter voor het meten van microcirculatory veranderingen van het ruggenmerg. In dit artikel was ons doel om het gebruik van zowel Laser Doppler Beeldvorming en toezicht voor het analyseren van de verandering van BF na dwarslaesie. Zowel de laser Doppler-imagescanner en de sonde/monitor wordt voor elke uitlezing werkten. De gegevens van LDPI verstrekt een lokale distributie van BF, die gaf een overzicht van perfusie rond de site van de schade en het toegankelijk voor vergelijkende analyse van BF onder verschillende locaties gemaakt. Door intens de indringende oppervlakte te meten over een periode van tijd, werd een gecombineerde sonde gebruikt om tegelijk meten de BF en zuurstof saturatie van het ruggenmerg, tonen algemene ruggenmerg perfusie en zuurstoftoevoer. LDF zelf heeft een aantal beperkingen, zoals de relatieve flux, gevoeligheid voor beweging en biologische nul signaal. Echter, de technologie is toegepast in de klinische en experimentele studie vanwege de eenvoudige installatie en snelle meting van BF.

LDPI werd gebruikt voor het meten van BF in het ruggenmerg, die langs de rostraal-caudal as van het ruggenmerg werd gekwantificeerd door de winning van lineaire profielen (Figuur 4). Figuur 5A en 5B van de figuur vertegenwoordigen de flux beeldvorming van het ruggenmerg van de sham-Fractie en SCI groep, respectievelijk. Figuur 5C en figuur 5D</strong...

Hier presenteren we een combinatie van laser Doppler perfusie imaging (LDPI) en lokale bloed stromen en zuurstof verzadiging (SO2), evenals een gestandaardiseerde procedure voor de invoering van ruggenmerg laser Doppler perfusie toezicht (LDPM) voor het meten van spinal cord trauma's op rat.

Met behulp van Laser Doppler Imaging en toezicht voor het analyseren van ruggenmerg microcirculatie in Rat

Laser Doppler flowmetry (LDF) is a noninvasive method for blood flow (BF) measurement, which makes it preferable for measuring microcirculatory ...

Het algemene doel van deze procedure is het presenteren van een combinatie van laser-doppler-imaging en monitoring om lokale bloedstroom en zuurstofverzadiging in het ruggenmerg te meten, evenals een gestandaardiseerde procedure voor het veroorzaken van ruggenmergtrauma bij een rat. Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van kernvragen op het gebied van microcirculatie, zoals de wijze waarop de bloedstroom in de loop van de tijd wordt herverdeeld en de impact hiervan op het omliggende gebied na letsel aan het ruggenmerg. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat we door het gebruik van zowel laser-doppler-imaging als een monitoringsapparaat snel gegevens kunnen verkrijgen over de lokale distributie van de bloedstroom en de variatie in de bloedstroom over een bepaalde periode, wat een geavanceerdere analyse van de bloedstroom in het problematische gebied mogelijk maakt.Begin met het controleren of de geanestheseerde rat zich in een chirurgisch vlak van anesthesie bevindt door te controleren op de afwezigheid van een reactie op een knijpreflex in de teen. Scheer het dorsale gebied van de rat van de onderrug tot aan de nek. Plaats de rat vervolgens met de rugzijde naar

using-laser-doppler-imaging-monitoring-to-analyze-spinal-cord

Research

JoVE Journal

Behavior

Gedrag

This video demonstrates the placement of a laser Doppler needle probe in the spinal cord of a porcine model. This helps in the continuous quantification of blood supply to the spinal cord, an important assessment in spinal cord injury.

Laser Doppler Needle Probe Insertion: A Technique for Real-time Quantification of Blood Flow within the Spinal Cord in a Porcine Model

Cerebrale perfusie controle is aangetoond dat de nauwkeurigheid van ischemische beroerte modellen te verbeteren. Technische moeilijkheden beperken vaak het gebruik van dit essentieel instrument voor cerebrovasculaire onderzoek. In deze video wordt een geoptimaliseerd systeem getoond op een of meerdere locaties hemodynamische bewaking verkrijgen tijdens intraluminale middelste cerebrale slagader occlusie in ratten.

Geoptimaliseerde Systeem voor cerebrale perfusie Monitoring in het Rat Stroke Model van intraluminale midden cerebrale slagader occlusie

Contrastverbeterde echografie is een betrouwbaar in-vivo hulpmiddel voor het kwantificeren van de bloedstroom in het ruggenmerg in een experimenteel model van ruggenmergletsel bij ratten. Dit artikel bevat een uitgebreid protocol voor de toepassing van deze techniek in combinatie met een contusiemodel van thoraxaal ruggenmergletsel.

Contrast Enhanced Imaging Ultrasound voor de Beoordeling van Spinal Cord Blood Flow in Experimentele Spinal Cord Injury

Dit manuscript wordt beschreven in vitro videomicroscopie protocollen voor de beoordeling van de vasculaire functie in rat weerstand van de cerebrale bloedvaten. Het manuscript wordt ook beschreven technieken voor het evalueren van microvessel dichtheid met fluorescently geëtiketteerde lectine en weefsel perfusie met behulp van Laser Doppler flowmetrie.

Evaluatie van vasculaire controlemechanismen met behulp van videomicroscopie van geïsoleerde resistentie slagaders van ratten

Dit artikel demonstreert het gebruik van laser doppler flowmetrie om te evalueren van het vermogen van de cerebrale circulatie te autoreguleren de bloedtoevoer tijdens verlagingen van de arteriële bloeddruk.

Evaluatie van cerebrale bloedstroom autoregulatie in de rat met behulp van laser doppler flowmetrie

De microcirculatie van het ruggenmerg speelt een cruciale rol bij dwarslaesie. De meeste methoden laten geen real-time beoordeling van de microcirculatie van het ruggenmerg toe, wat essentieel is voor de ontwikkeling van microcirculatiegerichte therapieën. Hier stellen we een protocol voor met behulp van Laser-Doppler-Flow Needle-sondes in een groot diermodel van ischemie / reperfusie.

Real-time beoordeling van ruggenmergmicroperfusie in een varkensmodel van ischemie / reperfusie

Hier wordt een minimaal invasieve chirurgische ingreep getoond, waarbij de laser-Doppler-sonde op de schedel wordt geplaatst over het distale gebied van de middelste hersenslagader (MCA), een periorbitale locatie die geschikt is voor ratten en muizen, om de bloedstroom te beoordelen tijdens voorbijgaande MCA-occlusie.

Periorbitale plaatsing van een laserdoppler-sonde voor monitoring van de cerebrale bloedstroom voorafgaand aan occlusie van de middelste hersenslagader in knaagdiermodellen

Om de cerebrale bloedstroomregulatie in vivo te bestuderen, zijn traditionele farmacologische methoden invasief en beschadigen ze vaak de schedel, dura en leptomeninges. In dit werk hebben we een minimaal invasieve techniek ontwikkeld die nano-injectorgeleide intracisternale magna (ICM) injectie combineert met beeldvorming met laserspikkelcontrast, waardoor de integriteit van de schedel en leptomeninges behouden blijft.

Gepaarde Cisterna Magna-nano-injectie en laserspikkelcontrastbeeldvormingstest om cerebrale bloedstroomregulatie in vivo te bestuderen

Een laser-speckle contrast beeldvormingssysteem werd gebruikt om de veranderingen in de microvasculaire bloedstroom van de nier te monitoren tijdens unilaterale nierischemie-reperfusie na de resectie van de rechternier bij muizen.

Microvasculaire perfusie gemonitord met laserspeckle contrastbeeldvorming tijdens nierischemie - reperfusieschade bij muizen

In dit artikel wordt beschreven hoe u amygdala-activiteit op te nemen met magneto (MEG). Naast dit artikel wordt beschreven hoe u trace vreesconditionering zonder bewustzijn, een taak die de amygdala activeert voeren. Het zal betrekking hebben op 3 thema's: 1) Het ontwerpen van een trace paradigma conditioning behulp achteruit maskeren om het bewustzijn te manipuleren. 2) Opnemen hersenen tijdens de taak met behulp van magneto-activiteit. 3) Met behulp van de bron beeldvorming om signaal van...

Hoe te amygdala activiteit detecteren met Magneto Source Imaging gebruik

Leer laser Doppler beeldvorming en monitoring voor het meten van lokale bloedstroom en zuurstofsaturatie in het ruggenmerg van ratten. Deze methode helpt onderzoekers microcirculatie te bestuderen.

Met behulp van Laser Doppler Imaging en toezicht voor het analyseren van ruggenmerg microcirculatie in Rat

Meer video's verkennen