Name: Bouw en evaluatie van een lymfkliertest Calvarial osteolyse Model door blootstelling aan CoCrMo deeltjes in aseptische losraken (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-02-17T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 46 s
Description: Leer het bouwen van een murien calvarium osteolyse model met CoCrMo deeltjes voor orthopedisch onderzoek naar aseptische losraken. Deze methode helpt onderzoekers celinteracties en botresorptie in vivo bestuderen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Deze studie werd ondersteund door de nationale Natural Science Foundation van China (81572111), de Clinical Science en technologie Project Stichting van de oostelijke provincie Jiangsu (BL2012002), de wetenschappelijke onderzoek Project van Nanjing (201402007), de natuurwetenschappen Stichting van de provincie Jiangsu (BK20161385), en de speciale stichting van Chinese medische arts Association (2015COS0810).

Alle methoden die hier worden beschreven zijn goedgekeurd door de institutionele Animal Care en gebruik Comité (IACUC) van Nanjing universiteit.
1. CoCrMo Particle voorbereiding
<ol><li>Opvragen CoCrMo deeltjes met behulp van een kunstmatig hoog-vacuüm drie-elektrode gelijkstroom-4. Plaats CoCrMo legering in het instrument onder 10-3 Pa vacuüm, 0,04 MPa argon en waterstof 3:2 (v/v), en 650 A kathode huidige.</li>
	<li>Meet de diameter van de CoCrMo deeltjes.<ol>
<li>1 mg CoCrMo deeltjes in 1,5 mL watervrij ethanol toevoegen.</li>
		<li>Resuspendeer CoCrMo deeltjes in watervrij ethanol door ultrasone schudden bij 28 kHz en 600 W gedurende 5 minuten.</li>
		<li>Een druppel (ongeveer 20 µL) van de toepassing van de resulterende schorsing voor de objectieve tabel van een transmissie-elektronenmicroscoop (TEM). Serie TEM foto's bij 200 kV versnelling spanning en 0,24 nm resolutie vastleggen.</li>
		<li>De meegeleverde software gebruiken voor het berekenen van de gemiddelde diameter en deeltje grootteverdeling in TEM microfoto.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Decontaminatie van endotoxines<ol>
<li>Autoclaaf 50 g van deeltjes gedurende 15 minuten staan bij 121 ° C en 15 psi.</li>
		<li>Detecteren van endotoxines door een kwantitatieve Limulus Amebocyte Lysate (LAL) Assay (< 0,25% EU/mL werd geacht om aan te geven van endotoxinen afwezigheid)5.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Resuspendeer de deeltjes in een met fosfaat gebufferde zoutoplossing (PBS) met een concentratie van 50 mg/mL stockoplossing6.</li>
</ol>2. bouw van het Model Calvarial osteolyse
<ol><li>Anesthetize 6 weken oude C57BL/J6 muizen (zes muizen per groep) withpentobarbital (50 mg/kg). Gebruik de snuifje-test om te beoordelen van het niveau van de verdoving. Voorkomen van ogen met normale zout drogen.</li>
	<li>Muizen in de vatbaar positie plaatsen. Verwijder de vacht op de schedel met een scheerapparaat en desinfecteren van de huid met behulp van medische katoenen ballen met 75% ethanol.</li>
	<li>Voor de lokalisatie van de punt, twee punten, waaronder de middelpunten tussen de twee ogen en oren, respectievelijk te identificeren. Vervolgens bepalen de lijn tussen de twee bovenstaande punten, en de huid langs de bovenstaande regel incise met een schaar (figuur 1A).</li>
	<li>Verwijder de craniale beenvlies uit de snuituil met een scalpel (figuur 1B)6.</li>
	<li>Sutuur (geologie) huid aan beide uiteinden voorzien van eenvoudige onderbroken hechtdraad.</li>
	<li>Maak een hechtdraad lijn door het midden van de incisie zonder knopen. Houd de twee uiteinden van de hechtdraad lijn.</li>
	<li>Insluiten 50 µL van het CoCrMo deeltje schorsing (50 mg/mL, in PBS) in het midden van de calvarias (Figuur 1 c)2.</li>
	<li>Knoop de laatste steek binnen eenvoudig onderbroken hechtdraad (Figuur 1 d).</li>
	<li>Muizen gedurende nog eens 2 weken.</li>
</ol>3. evaluatie van Calvarial osteolyse Model door het scannen van Micro-CT
<ol><li>De muizen met kooldioxide te offeren. Decapitate de muizen in het horizontale vlak. Verwijder het hersenweefsel binnen en de huid en vacht buiten. Oogst van de calvarias voor verdere experimenten.</li>
	<li>Zachtjes opruimen al het zachte weefsel op de snuituil met een pincet. De calvarias in PBS 24 h vóór micro-CT scan de gewiste calvarias in 4% paraformaldehyde op 4 ° C voor 24 h. Immerse vaststellen.</li>
	<li>Analyseren van de muizen-calvarias met hoge resolutie micro-CT bij een isometrische resolutie van 18 µm en X-ray energie instellingen van 45 kV en 550 mA.</li>
	<li>Het gedrag van drie-dimensionale reconstructie van micro-CT data met de software.</li>
	<li>Kwalitatieve en kwantitatieve analyse.<ol>
<li>Selecteer eerst de vierkante streek rond de middellijn hechtdraad als de regio van belang.</li>
		<li>Ten tweede, het meten van de botmineraaldichtheid (BMD), bone volume/totaal volume (BV/TV), trabecular nummer (Tb.N), trabecular dikte (Tb.Th), trabecular scheiding/afstand (Tb.Sp) en percentage van totale porositeit met de meegeleverde software voor micro-CT.</li>
		<li>Ten derde, vergelijk de drie groepen voor verschillende metingen door one-way ANOVA. Toepassing voor post-hoc analyse van variantie, Bonferroni methode2.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. evaluatie van Calvarial osteolyse Model door H & E kleuring
<ol><li>Decalcify snuituil monsters in 15% Dinatriumethyleendiaminetetra-azijnzuuroplossing (NA2EDTA)-PBS bij 4 ° C. Veranderen de ontkalking oplossing elke dag voor 3 weken.</li>
	<li>De ontkalkte monsters inbedden in paraffine voor een 2 x 1 cm x 1 cm kubus en snijd ze in 2 µm secties op het gebied van deeltjes depositie.</li>
	<li>Vlekken van de secties met haematoxyline en eosine7zoals hiervoor is beschreven.</li>
	<li>De lichte microscopie van microfoto van de algehele pathomorphism vastleggen.</li>
</ol>

<ol><li>Dong, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antisense+oligonucleotide+targeting+TNF-alpha+can+suppress+Co-Cr-Mo+particle-induced+osteolysis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Orthop+Res%22%5BJournal%5D)">Antisense oligonucleotide targeting TNF-alpha can suppress Co-Cr-Mo particle-induced osteolysis.</a> J Orthop Res. 26 (8), 1114-1120 (2008).</li>
<li>Deng, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SIRT1+protects+osteoblasts+against+particle-induced+inflammatory+responses+and+apoptosis+in+aseptic+prosthesis+loosening%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomater%22%5BJournal%5D)">SIRT1 protects osteoblasts against particle-induced inflammatory responses and apoptosis in aseptic prosthesis loosening.</a> Acta Biomater. 49, 541-554 (2017).</li>
<li>Langlois, J., Hamadouche, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+animal+models+of+wear-particle+osteolysis%5BTitle%5D)+AND+%22Int+Orthop%22%5BJournal%5D)">New animal models of wear-particle osteolysis.</a> Int Orthop. 35 (2), 245-251 (2011).</li>
<li>Wang, P., Zhao, F. X., Zhang, Z. Z. <a target="_blank" href="https://www.researchgate.net/publication/287666498_Preparation_of_ultrafine_silver_powders_by_DC_arc_plasma">Preparation of ultrafine zinc powders by DC arc plasma evaporation method.</a> Chinese Journal of Nonferrous Metals. 21 (9), 2236-2241 (2011).</li>
<li>Wang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+fibroblast+expression+of+RANKL+in+CoCrMo-particle-induced+osteolysis+is+mediated+by+ER+stress+and+XBP1s%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomater%22%5BJournal%5D)">The fibroblast expression of RANKL in CoCrMo-particle-induced osteolysis is mediated by ER stress and XBP1s.</a> Acta Biomater. 24, 352-360 (2015).</li>
<li>Wang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autophagy+mediated+CoCrMo+particle-induced+peri-implant+osteolysis+by+promoting+osteoblast+apoptosis%5BTitle%5D)+AND+%22Autophagy%22%5BJournal%5D)">Autophagy mediated CoCrMo particle-induced peri-implant osteolysis by promoting osteoblast apoptosis.</a> Autophagy. 11 (12), 2358-2369 (2015).</li>
<li>Wang, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Particle-induced+osteolysis+mediated+by+endoplasmic+reticulum+stress+in+prosthesis+loosening%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Particle-induced osteolysis mediated by endoplasmic reticulum stress in prosthesis loosening.</a> Biomaterials. 34 (11), 2611-2623 (2013).</li>
<li>Yang, S. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adeno-associated+virus-mediated+osteoprotegerin+gene+transfer+protects+against+particulate+polyethylene-induced+osteolysis+in+a+murine+model%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Rheum%22%5BJournal%5D)">Adeno-associated virus-mediated osteoprotegerin gene transfer protects against particulate polyethylene-induced osteolysis in a murine model.</a> Arthritis Rheum. 46 (9), 2514-2523 (2002).</li>
<li>Liu, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autophagy+mediated+TiAl%286%29V%284%29+particle-induced+peri-implant+osteolysis+by+promoting+expression+of+TNF-alpha%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">Autophagy mediated TiAl(6)V(4) particle-induced peri-implant osteolysis by promoting expression of TNF-alpha.</a> Biochem Biophys Res Commun. 473 (1), 133-139 (2016).</li>
<li>Wang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ER+Stress+Mediates+TiAl6V4+Particle-Induced+Peri-Implant+Osteolysis+by+Promoting+RANKL+Expression+in+Fibroblasts%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">ER Stress Mediates TiAl6V4 Particle-Induced Peri-Implant Osteolysis by Promoting RANKL Expression in Fibroblasts.</a> PLoS One. 10 (9), e0137774(2015).</li>
<li>Wang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TiAl6V4+particles+promote+osteoclast+formation+via+autophagy-mediated+downregulation+of+interferon-beta+in+osteocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomater%22%5BJournal%5D)">TiAl6V4 particles promote osteoclast formation via autophagy-mediated downregulation of interferon-beta in osteocytes.</a> Acta Biomater. 48, 489-498 (2017).</li>
<li>Chen, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lycorine+suppresses+RANKL-induced+osteoclastogenesis+in+vitro+and+prevents+ovariectomy-induced+osteoporosis+and+titanium+particle-induced+osteolysis+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Lycorine suppresses RANKL-induced osteoclastogenesis in vitro and prevents ovariectomy-induced osteoporosis and titanium particle-induced osteolysis in vivo.</a> Sci Rep. 5, 12853(2015).</li>
<li>Neuerburg, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+calcitonin+receptor+signalling+in+polyethylene+particle-induced+osteolysis%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomater%22%5BJournal%5D)">The role of calcitonin receptor signalling in polyethylene particle-induced osteolysis.</a> Acta Biomater. 14, 125-132 (2015).</li>
<li>Catelas, I., Jacobs, J. J. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20415362">Biologic activity of wear particles.</a> Instr Course Lect. 59, 3-16 (2010).</li>
<li>Liu, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+biological+response+to+nanometre-sized+polymer+particles%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomater%22%5BJournal%5D)">The biological response to nanometre-sized polymer particles.</a> Acta Biomater. 23, 38-51 (2015).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Er zijn twee belangrijkste methoden voor slijtage deeltje-geïnduceerde osteolyse in muizen: de lucht-etui-model en het model van calvarial osteolyse. Het model van de lucht-zakje, is een subcutaan gegenereerde lucht-etui eerst gevestigd, gevolgd door slijtage deeltje invoering en implantatie in het bot weefsel8. De muur zakje bootst het beenvlies in aseptische losraken. Bot-implantatie is echter nonvascular met geen biologische activiteit, waardoor het moeilijk te beoordelen van directe interactie...

Aseptische losmaken is de meest voorkomende oorzaak van totale heup artroplastiek (THA) en totale knie-artroplastiek (TKA) falen, waarvoor herziening chirurgie1. Het onderliggende mechanisme blijft echter onduidelijk2. Een lange follow-up is nodig voor de detectie van deeltje-geïnduceerde osteolyse, wiens optreden zeldzaam is; dus is het uitdagend om te verkennen zijn pathogenese in klinische gevallen. Vandaar, verdere studies gericht op complexe cellulaire en weefsel mechanismen vereisen dat zowel in vivo experimenten in deeltje-geïnduceerde osteolyse modellen en in vitro tests in cellen gerelateerde tot bone homeostase3dragen. Een geldige diermodel is belangrijk in de gevolgen van slijtage deeltjes voor botverlies, bewijze voor het verder cellulaire assays onthullen.
Een lymfkliertest calvarial osteolyse model gebouwd door blootstelling aan CoCrMo deeltjes is een doeltreffende en geldige methode voor de beoordeling van de interacties tussen deeltjes en verschillende cellen in aseptische losraken. In dit model veroorzaken CoCrMo deeltjes calvarial osteolyse door inducerende ontsteking cytokinen in macrofagen, activeren osteoclasten osteoblast proliferatie remmen en bevordering van osteoblast apoptosis.
Het duurt slechts twee weken om dit model. Osteolyse kan worden gevisualiseerd en gekwantificeerd door de haematoxyline en eosine (H & E) kleuring en micro berekend tomografie (micro-CT)2. Bovendien, heeft dit model een relatief lage kosten, en transgene en knockoutstadia muis modellen kunnen worden gebruikt om een groot aantal verbindingen op verschillende doses3scherm.
De procedure voor het vaststellen en evalueren van dit model is eenvoudig. Eerst werden CoCrMo deeltjes verkregen door hoog-vacuüm drie-elektrode gelijkstroom en geresuspendeerde in-fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS) met een concentratie van 50 mg/mL. Vervolgens werd 50 µL van de resulterende schorsing toegepast op het midden van de lymfkliertest snuituil na scheiding van de craniale beenvlies door scherpe dissectie. De muizen werden opgeofferd na twee weken, en snuituil monsters zijn geoogst; kwalitatieve en kwantitatieve analyses werden uitgevoerd door H & E kleuring van andmicro-CT.
Een lymfkliertest calvarial osteolyse model gebouwd door blootstelling aan CoCrMo deeltjes is een ideaal hulpmiddel voor de beoordeling van de interacties tussen deeltjes CoCrMo en verschillende cellen, zoals macrofagen, fibroblasten en botcellen osteoclasten, in aseptische losraken.

<table><tbody><tr><td>CoCrMo legering van prothese</td><td>Waldemar Link GmbH &amp; Co</td><td>GEMINI MK II</td><td>Grondstof om CoCrMo nanodeeltjes te verkrijgen</td></tr><tr><td>Gemaakte hoogvacuüm drie-elektrode gelijkstroom</td><td>College of Materials Science &amp; Engineering, Nanjing University of Technology</td><td></td><td>Zelf ontworpen machine</td></tr><tr><td>6 weken oude mannelijke C57BL/6J muizen</td><td>Model animal research center van Nanjing University</td><td>N000013</td><td></td></tr><tr><td>100% Ethanol</td><td>Nanjing Reagent</td><td>C0691514023</td><td>Solvent van CoCrMo nanodeeltjes voor transmissie-elektronenmicroscoop scanning</td></tr><tr><td>1.5 ml Microcentrifuge buisjes</td><td>Taizhou Weierkang Medical Supplies co., LTD</td><td>W603</td><td></td></tr><tr><td>Microanalytische balans</td><td>Shenzhen Qun long Instrument Equipment Co., LTD</td><td>EX125DZH</td><td></td></tr><tr><td>Ultrasone shaker</td><td>Shanghai Yuhao scientific instrument co., LTD</td><td>YH-200DH</td><td>Om CoCrMo nanodeeltjes te suspenderen</td></tr><tr><td>Transmissie-elektronenmicroscoop</td><td>FEI</td><td>Tecnai G20</td><td></td></tr><tr><td>SimplePCI software</td><td>Compix Inc.</td><td>6.6 versie</td><td>Om de gemiddelde diameter en deeltjesgrootteverdeling te berekenen.</td></tr><tr><td>Hoge sterilisatiepan</td><td>QIULONGYIQI</td><td>KYQL-100DS</td><td>Om endotoxine te decontamineren</td></tr><tr><td>Limulus Amebocyte Lysate (LAL) Assay</td><td>Charles River</td><td>R13025</td><td>Om endotoxine te detecteren&nbsp;</td></tr><tr><td>15 ml Microcentrifuge buisjes</td><td>Taizhou Suyi Medical</td><td>B122</td><td></td></tr><tr><td>Fosfaat-buffered saline</td><td>Boster Biological Technology</td><td>AR0030</td><td>Solvent van CoCrMo nanodeeltjes stockoplossing</td></tr><tr><td>Pentobarbital Natrium</td><td>Sigma</td><td>P3761</td><td>Om muizen te verdoven</td></tr><tr><td>Normale zoutoplossing</td><td>SACKLER</td><td>SR8572EP-15</td><td>Om uitdroging van muizenogen te voorkomen</td></tr><tr><td>75% Ethanol</td><td>Nanjing Reagent</td><td>C0691560275</td><td>Desinfectie</td></tr><tr><td>Medische katoenen bal</td><td>Shuitao</td><td>1278298933</td><td>Desinfectie</td></tr><tr><td>Shaver</td><td>Kemei</td><td>KM-3018</td><td>Om de vacht te scheren</td></tr><tr><td>Schaar</td><td>RWD LIFE SCIENCE</td><td>S12005-10</td><td>Om de huid in te snijden</td></tr><tr><td>Hechtdraad</td><td>RWD LIFE SCIENCE</td><td>F34001-01</td><td>Om de huid te hechten</td></tr><tr><td>Naaldhouder</td><td>RWD LIFE SCIENCE</td><td>F33001-01</td><td>Om de huid te hechten</td></tr><tr><td>Naald</td><td>RWD LIFE SCIENCE</td><td>R14003-12</td><td>Om de huid te hechten</td></tr><tr><td>Vessel forceps</td><td>RWD LIFE SCIENCE</td><td>F22003-09</td><td>Om de huid te hechten</td></tr><tr><td>Scalpel</td><td>RWD LIFE SCIENCE</td><td>S31010-01</td><td>Om de calvaria te verzamelen</td></tr><tr><td>Pincet</td><td>RWD LIFE SCIENCE</td><td>F12006-10</td><td>Om de calvaria te verzamelen</td></tr><tr><td>100 &micro;L pipetten</td><td>Eppendorf</td><td>3120000240</td><td>Om deeltjessuspensie in de calvatias in te bedden</td></tr><tr><td>100 &micro;L pipette tips</td><td>AXYGEN</td><td>T-200-Y</td><td>Om deeltjessuspensie in de calvatias in te bedden</td></tr><tr><td>5 ml Microtubes</td><td>Taizhou Weierkang Medical Supplies co., LTD</td><td>W621</td><td></td></tr><tr><td>4% Paraformaldehyde</td><td>Servicebio</td><td>G1101</td><td>Fixatie</td></tr><tr><td>Micro Computed Tomography&nbsp;</td><td>SkyScan</td><td>SkyScan1176</td><td></td></tr><tr><td>Ethyleen Diamine Tetraacetic Acid</td><td>Servicebio</td><td>G1105</td><td>Decalcificatie</td></tr><tr><td>Paraffin</td><td>Servicebio</td><td>#0001</td><td></td></tr><tr><td>Paraffine slijpmachine</td><td>Leica</td><td>RM2125RTS</td><td></td></tr><tr><td>Glazen dia</td><td>Servicebio</td><td>G6004</td><td></td></tr><tr><td>Dekglas</td><td>Servicebio</td><td>200</td><td></td></tr><tr><td>HE-kleuring kit</td><td>Servicebio</td><td>#1-5</td><td>HE-kleuring</td></tr><tr><td>Lichtmicroscoop</td><td>Nikon</td><td>E200</td><td></td></tr></tbody></table>

bouw en evaluatie van een lymfkliertest calvarial osteolyse model door blootstelling aan cocrmo deeltjes in aseptische losraken

Construction and Evaluation of a Murine Calvarial Osteolysis Model by Exposure to CoCrMo Particles in Aseptic Loosening

Slijtage deeltje-geïnduceerde osteolyse is een belangrijke oorzaak van aseptische losraken artroplastiek mislukking, maar het onderliggende mechanisme is onduidelijk. Als gevolg van lange follow-up nodig voor de detectie en sporadisch voorkomen, is het uitdagend om te beoordelen van de pathogenese ofparticle-geïnduceerde osteolyse in klinische gevallen. Vandaar, optimale dierlijke modellen zijn vereist voor verdere studies. De lymfkliertest model van calvarial osteolyse opgericht door blootstelling aan CoCrMo deeltjes is een effectieve en geldig instrument voor de beoordeling van de interacties tussen deeltjes en verschillende cellen in aseptische losraken. In dit model, werden CoCrMo deeltjes eerst verkregen door hoog-vacuüm drie-elektrode gelijkstroom en geresuspendeerde in een met fosfaat gebufferde zoutoplossing met een concentratie van 50 mg/mL. Vervolgens werd 50 µL van de resulterende schorsing toegepast op het midden van de lymfkliertest snuituil na scheiding van de craniale beenvlies door scherpe dissectie. Na twee weken, de muizen werden opgeofferd en snuituil exemplaren zijn geoogst; kwalitatieve en kwantitatieve evaluaties werden uitgevoerd door de haematoxyline en eosine-kleuring en micro computertomografie. De sterke punten van dit model zijn eenvoud van de procedure, kwantitatieve evaluatie van botverlies, snelheid van osteolyse ontwikkeling, potentiële gebruik transgene of knock-out modellen, en een relatief lage prijs. Dit model kan echter niet worden gebruikt om te beoordelen van de mechanische kracht en chronische effecten van deeltjes in de aseptische losraken. Lymfkliertest calvarial osteolyse model gegenereerd door blootstelling aan CoCrMo deeltjes is een ideaal hulpmiddel voor de beoordeling van de interacties tussen slijtage deeltjes en verschillende cellen, bijvoorbeeld, macrofagen, fibroblasten, botcellen en osteoclasten, in aseptische losraken.

De in-house geproduceerde nanoschaal CoCrMo deeltjes werden ongeveer 50 nm (3.56 standaardfout) in diameter, zoals gekwantificeerd door TEM (Figuur 2). Na Gasbedwelming met behulp van de muis calvarias CoCrMo deeltjes, de dieren (n = 6 per groep) twee weken voor een ander werden gehandhaafd. Binnen de twee weken, de calvarial incisie volledig genezen was, en de hechtdraad kan vallen. Een lokale infectie of nonunion mei bot verlies beoordeling beïnvloeden. Na ...

Dit manuscript beschrijft een model lymfkliertest calvarial osteolyse door blootstelling aan CoCrMo deeltjes, die een ideale diermodel vormt voor de beoordeling van de interacties tussen deeltjes van slijtage en verschillende cellen in aseptische losraken.

Bouw en evaluatie van een lymfkliertest Calvarial osteolyse Model door blootstelling aan CoCrMo deeltjes in aseptische losraken

Wear particle-induced osteolysis is a major cause of aseptic loosening in arthroplasty failure, but the underlying mechanism remains unclear. Due to long ...

Het algemene doel van deze procedure is het opzetten en evalueren van het murine calvariale osteolysemodel door blootstelling aan kobalt-chroom-molybdeen-nanodeeltjes. Door slijtagepartikels geïnduceerde osteolyse is een belangrijke oorzaak van aseptische loslating bij het falen van arthroplastiek, maar de onderliggende mechanismen hiervan zijn onduidelijk. Vanwege de lange follow-upduur en het sporadische voorkomen is het moeilijk om de pathogenese van aseptische loslating in klinische gevallen te onderzoeken.Daarom is een slijtage-diermodel noodzakelijk voor verder onderzoek. In ons laboratorium is een muismodel voor calvariale osteolyse, opgebouwd met kobaltslegeringsdeeltjes, een effectief model om de pathogenese van aseptische loslating te bestuderen. Dit wordt bereikt door eerst nanoscopische kobalt-chroom-molybdeendeeltjes te genereren uit een kobaltslegeringsprothese en deze vervolgens te resuspenderen in phosphate buffer saline met een concentratie van 15 mg/mL.De volgende stap is het bepalen van de incisiepositie op een lijn tussen de twee middenpunten tussen de ogen en de oren, respectievelijk. Verwijder vervolgens het craniële periosteum van het calvarium door middel va

construction-evaluation-murine-calvarial-osteolysis-model-exposure-to

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Dit protocol beschrijft de isolatie van vet-afgeleide stromale cellen van lipoaspirate en de oprichting van een 4 mm kritische grootte calvarial defect aan het skelet regeneratie te evalueren.

Reparatie van een kritische grootte Calvarial Defect Model Met behulp van Adipose-afgeleide stromale cellen geoogst uit Lipoaspirate

Hoewel muismodellen onschatbare hulpmiddelen zijn voor botweefselengineering, zijn modellen van lange botdefecten schaars. Deze behoefte motiveerde de ontwikkeling van het huidige protocol dat een vergrendelingsplaat met vier schroeven en een speciale jig gebruikt om een reproduceerbare, femorale, kritisch-grootte defect met lage morbiditeit uit te voeren en te stabiliseren.

Oprichting van een Segmentale Femorale Critical-size Defect Model in Muizen gestabiliseerd door plaatosteosynthese

Adipositas-afgeleide stromale cellen kunnen nuttig zijn voor het ontwerpen van nieuw weefsel uit de eigen cellen van een patiënt. We presenteren een protocol voor de isolatie van een subpopulatie van humane adipositas-afgeleide stromale cellen (ASC's) met een verhoogd osteogeen potentieel, gevolgd door toepassing van de cellen in een in vivo calvariaal genezingsassay.

Rapid Isolatie van BMPR-IB + Adipose-afgeleide stromacellen voor gebruik in een calvarial Defect Healing Model

Hier presenteren we een protocol om te visualiseren bloedvat vorming in vivo en in real-time in 3D steigers door multiphoton microscopie. Angiogenese in genetisch gemodificeerde steigers werd bestudeerd in een lymfkliertest calvarial kritische bot defect model. Meer nieuwe bloedvaten werden ontdekt in de behandelde groep dan in besturingselementen.

Visualiseren van angiogenese door Multiphoton microscopie In Vivo in genetisch gemodificeerde 3D-PLGA/nHAp steiger voor Calvarial kritische bot Defect reparatie

De ex vivo cultuur van botexplants kan een waardevol instrument zijn voor de studie van de botfysiologie en de mogelijke evaluatie van geneesmiddelen bij botremodellering en botziekten. Het gepresenteerde protocol beschrijft de voorbereiding en cultuur van calvarias geïsoleerd van pasgeboren muizen schedels, evenals de toepassingen ervan.

Het meten van bot remodelleren en recreëren van de Tumor-Bone Microenvironment Met behulp van Calvaria Co-cultuur en Histomorphometrie

Hier presenteren we een chirurgisch protocol bij konijnen met als doel om botsubstitutie materialen te beoordelen in termen van botregeneratie capaciteiten. Door het gebruik van PEEK cilinders bevestigd op konijn schedels, osteogelei ding, osteoinductie, osteogenesis en vasculogenese geïnduceerd door de materialen kunnen worden geëvalueerd op levende of geëdoseerde dieren.

Calvariaal model van bot augmentatie in konijn voor beoordeling van botgroei en neovascularisatie in Botsubstitutie materialen

Dit protocol beschrijft de detectie van CCL5-gemedieerde periostale skeletstamcelmigratie in realtime met behulp van levende intravitale microscopie van dieren.

Real-time beeldvorming van CCL5-geïnduceerde migratie van periosteale skeletstamcellen bij muizen

Hier presenteren we een protocol om de schacht van het dijbeen van Wistar albinoratten iatrogenisch te breken en de ontwikkeling van het eelt op te volgen. Dit femur osteotomiemodel kan onderzoekers helpen het proces van fractuurgenezing te evalueren en te bestuderen hoe een medicijn de genezing van fracturen kan beïnvloeden.

Protocol voor het ontwikkelen van een femur osteotomie model bij Wistar Albino ratten

Dit protocol demonstreert stapsgewijze details over het extraheren van de mandibulaire eerste kies in de muis. Het biedt een alternatieve methode voor onderzoekers die zich richten op kaakbotgenezing en -regeneratie.

De oprichting van een Murine Mandibular Molar Extraction Socket Healing Model

Hier presenteren we een protocol voor het creëren van een doosholtedefect in femurdiafyseweefsel van ratten. Dit model kan de prestaties van biomaterialen onder biomechanische stress beoordelen en mechanismen van botregeneratie onderzoeken die verband houden met intramembraneuze osteogenese.

Het creëren van een doosholtedefectmodel in het corticale bot van rattenfemora

Het beenmergletselmodel bij muizen is een nuttig hulpmiddel voor het bestuderen van postnatale osteogenese door middel van intramembraneuze ossificatie. Dit vereenvoudigde chirurgische protocol beschrijft de beenmergablatieprocedure voor stroomafwaartse beoordeling van nieuwe botvorming en cellulaire reacties na verwonding.

Verbeterde methodologie voor het bestuderen van postnatale osteogenese via intramembraneuze ossificatie in een beenmergletselmodel bij muizen

Leer het bouwen van een murien calvarium osteolyse model met CoCrMo deeltjes voor orthopedisch onderzoek naar aseptische losraken. Deze methode helpt onderzoekers celinteracties en botresorptie in vivo bestuderen.

Bouw en evaluatie van een lymfkliertest Calvarial osteolyse Model door blootstelling aan CoCrMo deeltjes in aseptische losraken

Meer video's verkennen