Name: Geautomatiseerde ganganalyse in muizen met chronische vernauwing blessure (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-10-17T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 49 s
Description: Leer geautomatiseerde ganganalyse voor neuropathische pijnonderzoek bij muizen met chronische vernauwing blessure. Deze methode meet objectief sensorische functie en helpt analgetica zoals gabapentin te evalueren.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit onderzoek werd gesteund door Chungnam nationale universiteit, Korea Instituut voor oosterse geneeskunde (KIOM) en een subsidie van de Korea Health Technology R &#38; D Project via de Korea gezondheid industrie Development Institute (KHIDI), gefinancierd door het ministerie van volksgezondheid &#38; Welzijn, Republiek Korea (verlenen van nummer: HI15C0007).

alle experimenten werden uitgevoerd overeenkomstig de ethische richtsnoeren van de internationale vereniging voor de studie van pijn en door de institutionele Animal Care en gebruik Comité zijn goedgekeurd op de Chungnam National University ( Daejeon, Zuid-Korea).
 1. inductie van CCI op nervus ischiadicus <ol><li>huis mannelijke ICR muizen met een gewicht van 20-25 g onder een 12u licht/donker cyclus bij gecontroleerde kamertemperatuur (behouden bij 20-25 ° C) en luchtvochtigheid (40-60%), met gratis toegang tot voedsel en water. Een periode van de acclimatisering voor muizen in de dierenverzorgers kamer van ten minste 1 week voor de operatie toestaan.
	<ol><li>Tijdens huisvesting, observeren het uiterlijk en gedrag van de muizen en gebruik geen muizen abnormale motorische activiteit tonen. 
		Opmerking: Één dag voorafgaand aan de operatie CCI, meten de mechanische gevoeligheid van de achterste poot door von Frey filamenten toe te passen en de geautomatiseerde ganganalyse voor normale basislijnwaarden uit te voeren. Wijs de muizen willekeurig aan controle en experimentele groepen.</li>
	</ol></li> <li>Anesthetize op de dag van de operatie, de muizen door het injecteren van 2,2,2-tribromoethanol (250 mg/kg, intraperitoneaal (IP)). 
	Opmerking: Draag persoonlijke beschermingsmiddelen zoals chirurgenjas, handschoenen en masker.
	<ol><li>Weeg 2,5 g van 2,2,2-tribromoethanol en voeg 2-methyl-2-buthanol aan het eindvolume van 5 mL. Bewaar deze oplossing weg van licht (bijvoorbeeld gebruik van een donkere container of in folie wikkelen).</li>
		<li>Toestaan reagentia te ontbinden volledig door verwarming bij 40 ° C en roeren gedurende 10-30 min.</li>
		<li>Voeg gedistilleerd water aan het uiteindelijke volume van 200 mL en roer tot goed gemengd.</li>
		<li>Slaan aliquots bij 4 ° C en in het donker te houden. Na twee weken, de verdoving moet worden vervangen door nieuwe aliquots.</li>
		<li>Injecteren een volume van 20 µL per 1 g lichaamsgewicht. Bijvoorbeeld, als het lichaamsgewicht van de muis 25 g is, geven 500 µL van oplossing. Deze verdoving duurt typisch 1 h. 
		Opmerking: Deze oplossing zal worden giftig bij blootstelling aan licht en/of warmte dus wees voorzichtig om te voorkomen dat blootstelling aan licht en warmte. Een IP-injectie route wordt ten zeerste aanbevolen.</li>
	</ol></li> <li>Wanneer de muis in diepe anesthesie valt, plaatst u deze op de operatietafel met de dorsale zijde omhoog (d.w.z., liggend) en steriliseren van de buitenste halverwege dij gebied van de rechterkant met een 70% alcohol doekje. 
	Opmerking: Diepe verdoving bevestigen door het controleren van het gebrek aan respons te knijpen of druk van de stimulans op de achterste poten of staart.</li>
	<li>De CCI op de juiste ischiadicus zenuw van de muis bewegen.
	<ol><li>Maken van een sneetje op de huid rond het midden dij gebied van 1.0-1.5 cm lengte met een scalpel mes.</li>
		<li>Bot ontleden de bovenbeenspieren met de micro-mosquito hemostat bloot van de nervus ischiadicus.</li>
		<li>De nervus ischiadicus blootgestelde ligate 3 keer met 1.0-1.5 mm intervallen met behulp van een 4-0 chromic catgut hechtdraad. 
		Opmerking: Zorg losse ligations door koppelverkoop van de nervus ischiadicus tot milde schudden wordt weergegeven op de ipsilaterale hind poot. Kreeg de sham-groep van muizen de dezelfde chirurgische opening onder vergelijkbare omstandigheden behalve zonder zenuw afbinding.</li>
	</ol></li> <li>Sluit de chirurgische opening met 3-4 eenvoudige onderbroken hechtingen met 5-0 zijde en steriliseren met Povidon jodium voor desinfectie van de buitenste oppervlakte van chirurgie.</li>
	<li>Na de operatie, plaatst u de muisaanwijzer in een schone kooi op een verwarming pad. Wanneer dieren zijn hersteld van anesthesie, terugsturen naar hun thuis kooi. 
	Opmerking: In deze studie worden antibiotica werden niet gebruikt. De CCI + GBP groep ontvangen IP-gabapentine (GBP) bij een dosis van 50 mg/kg eenmaal daags als positieve controle.</li>
</ol> 2. Meting van de mechanische Allodynia (von Frey Test) Opmerking: de frequentie van de reactie van de terugtrekking op de mechanische stimuli beoordelen met behulp van 1 g van von Frey gloeidraad op de plantaire oppervlak van de ipsilaterale hind paw.
<ol><li>Op elke dag van de test, muizen brengen de gedrags test kamer en acclimatiseren van de muizen in hun eigen huis kooi voor ten minste 30 minuten vóór de test 
	Opmerking: Draag persoonlijke beschermingsmiddelen zoals chirurgenjas, handschoenen en masker.</li>
	<li>Zet de muis in een transparant acryl box op de metalen gaas vloer en de muis voor 30 min. acclimatiseren</li>
	<li>1 g van von Frey gloeidraad zachtjes op de plantaire oppervlak van de achterste poot van toepassing totdat de gloeidraad knik.</li>
	<li>Toepassen gloeidraad stimulatie naar de ipsilaterale hind paw 10 keer met ten minste 10 s intervallen en het resultaat opnemen. 
	Opmerking: In deze studie, het aantal paw terugtrekking reacties van 10 proeven worden weergegeven als percentage van paw terugtrekking frequentie (PWF, %). De von Frey-test werd uitgevoerd om de twee dagen na de operatie van het CCI.</li>
</ol> 3. Uitvoeren van geautomatiseerde ganganalyse Opmerking: het systeem van de analyse van de gang visualiseert elke poot afdrukken terwijl het dier loopt en automatisch verschillende parameters van de gang analyseert, zulke zoals afdrukken, paw paw intensiteit, paslengte, houding fase, stap sequentie, schommel, schommel snelheid, etc. In deze studie, toonden we paw afdrukbereik en één houding na het omzetten van de gegevens in het percentage wijzigen tussen contralaterale links versus ipsilaterale rechts hind poot. Dus, is een resultaat van 50% geeft aan dat de grootte van de poot afdrukken en de duur van paw gebied in contact met de vloer, tussen de linker- en rechterkant hetzelfde zijn. Bovendien, lagere gegevenswaarden bijna 0% aangeven dat zowel de grootte en de duur van het contact in de ipsilaterale hind paw in vergelijking met de contralaterale zijde zijn gedaald (zie paneel B van Figuur 2 en Figuur 3).
<ol><li>Voor acclimatisatie, blijven de muizen binnen het analyseapparaat gait voor 10 min één keer per dag vanaf 5 dagen vóór de operatie CCI. 
	Opmerking: Gait analyse test met inbegrip van de acclimatisatie moet worden uitgevoerd in het donker.</li>
	<li>Brengen de muizen in de test kamer voor ganganalyse en acclimatiseren in hun kooi voor ten minste 30 minuten vóór de test
	<ol><li>Instellen op het tabblad instellingen van het programmamenu, de &#34; loopbrug lengte &#34; aan 30 cm, en de &#34; maximale duur uitvoeren &#34; tot en met 5 s en de &#34; maximale variatie uitvoeren &#34; tot 50%.</li>
		<li>Selecteer een geregistreerde camera van de &#39; setup &#39; tabblad van de &#39; programma &#39; menu.</li>
		<li>Selecteer &#34; overname open &#34; van de &#39; verwerven &#39; tabblad van de &#39; programma &#39; menu.</li>
		<li>Na het statusbericht, klikt u op de &#39; uitlijnen achtergrond &#39; knop om een foto van de achtergrond van de loopbrug leeg (dat wil zeggen, lege).</li>
	</ol></li> <li>Klik op de &#39; beginnen met overname &#39; knop en plaats een muis op de loopbrug; de opname begint automatisch volgens de bewegingen van de muis. 
	Opmerking: Als de muis duidelijk over de loopbrug loopt, het programma automatisch classificeert deze bewegen zoals &#34; Compliant uitgevoerd &#34; met een groen pictogram. Als de software niet detecteren van de voetdruk, de experimentator ziet een rood pictogram en de opname moet herhalen. Ten minste vijf succesvolle compatibele runs zijn nodig voor analyse.</li>
	<li>Na de test, selecteer &#39; classificeren punten &#39; via het tabblad ophaal van de &#39; programma &#39; menu.</li>
	<li>Selecteer de pistes voor analyse en klik op de &#39; automatisch classificeren &#39; knop. 
	Opmerking: Na de classificatie, alle statistische parameters worden automatisch opgeslagen en de experimentator vindt de resultaten door te klikken op &#34; weergave uitgevoerd statistieken &#34; in het menu analyseren.</li>
</ol>

<ol><li>Loeser, J. D., Treede, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Kyoto+protocol+of+IASP+Basic+Pain+Terminology%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">The Kyoto protocol of IASP Basic Pain Terminology.</a> Pain. 137 (3), 473-477 (2008).</li>
<li>Colloca, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuropathic+pain%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Dis+Primers%22%5BJournal%5D)">Neuropathic pain.</a> Nat Rev Dis Primers. 3, 17002(2017).</li>
<li>Vranken, J. H. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20021340">Mechanisms and treatment of neuropathic pain.</a> Cent Nerv Syst Agents Med Chem. 9 (1), 71-78 (2009).</li>
<li>DeLeo, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+a+neuropathic+pain+model%3A+sciatic+cryoneurolysis+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Characterization of a neuropathic pain model: sciatic cryoneurolysis in the rat.</a> Pain. 56 (1), 9-16 (1994).</li>
<li>Kim, S. H., Chung, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+experimental+model+for+peripheral+neuropathy+produced+by+segmental+spinal+nerve+ligation+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">An experimental model for peripheral neuropathy produced by segmental spinal nerve ligation in the rat.</a> Pain. 50 (3), 355-363 (1992).</li>
<li>Seltzer, Z., Dubner, R., Shir, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+behavioral+model+of+neuropathic+pain+disorders+produced+in+rats+by+partial+sciatic+nerve+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">A novel behavioral model of neuropathic pain disorders produced in rats by partial sciatic nerve injury.</a> Pain. 43 (2), 205-218 (1990).</li>
<li>Bennett, G. J., Xie, Y. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+peripheral+mononeuropathy+in+rat+that+produces+disorders+of+pain+sensation+like+those+seen+in+man%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">A peripheral mononeuropathy in rat that produces disorders of pain sensation like those seen in man.</a> Pain. 33 (1), 87-107 (1988).</li>
<li>Dixon, W. J. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/7387124">Efficient analysis of experimental observations.</a> Annu Rev Pharmacol Toxicol. 20, 441-462 (1980).</li>
<li>Bonin, R. P., Bories, C., De Koninck, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simplified+up-down+method+%28SUDO%29+for+measuring+mechanical+nociception+in+rodents+using+von+Frey+filaments%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Pain%22%5BJournal%5D)">A simplified up-down method (SUDO) for measuring mechanical nociception in rodents using von Frey filaments.</a> Mol Pain. 10, 26(2014).</li>
<li>Chaplan, S. R., Bach, F. W., Pogrel, J. W., Chung, J. M., Yaksh, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+assessment+of+tactile+allodynia+in+the+rat+paw%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Quantitative assessment of tactile allodynia in the rat paw.</a> J Neurosci Methods. 53 (1), 55-63 (1994).</li>
<li>Chen, H., Du, J., Zhang, Y., Barnes, K., Jia, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishing+a+Reliable+Gait+Evaluation+Method+for+Rodent+Studies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Establishing a Reliable Gait Evaluation Method for Rodent Studies.</a> J Neurosci Methods. , (2017).</li>
<li>Kang, D. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antinociceptive+Profile+of+Levo-tetrahydropalmatine+in+Acute+and+Chronic+Pain+Mice+Models%3A+Role+of+spinal+sigma-1+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Antinociceptive Profile of Levo-tetrahydropalmatine in Acute and Chronic Pain Mice Models: Role of spinal sigma-1 receptor.</a> Sci Rep. 6, 37850(2016).</li>
<li>Huehnchen, P., Boehmerle, W., Endres, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+paclitaxel+induced+sensory+polyneuropathy+with+%26%2334%3BCatwalk%26%2334%3B+automated+gait+analysis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Assessment of paclitaxel induced sensory polyneuropathy with &#34;Catwalk&#34; automated gait analysis in mice.</a> PLoS One. 8 (10), e76772(2013).</li>
<li>Vrinten, D. H., Hamers, F. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%27CatWalk%27+automated+quantitative+gait+analysis+as+a+novel+method+to+assess+mechanical+allodynia+in+the+rat%3B+a+comparison+with+von+Frey+testing%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">'CatWalk' automated quantitative gait analysis as a novel method to assess mechanical allodynia in the rat; a comparison with von Frey testing.</a> Pain. 102 (1-2), 203-209 (2003).</li>
<li>Martinov, T., Mack, M., Sykes, A., Chatterjea, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+changes+in+tactile+sensitivity+in+the+hind+paw+of+mice+using+an+electronic+von+Frey+apparatus%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Measuring changes in tactile sensitivity in the hind paw of mice using an electronic von Frey apparatus.</a> J Vis Exp. (82), e51212(2013).</li>
<li>Ferland, C. E., Laverty, S., Beaudry, F., Vachon, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gait+analysis+and+pain+response+of+two+rodent+models+of+osteoarthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol+Biochem+Behav%22%5BJournal%5D)">Gait analysis and pain response of two rodent models of osteoarthritis.</a> Pharmacol Biochem Behav. 97 (3), 603-610 (2011).</li>
<li>Mogil, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypolocomotion%2C+asymmetrically+directed+behaviors+%28licking%2C+lifting%2C+flinching%2C+and+shaking%29+and+dynamic+weight+bearing+%28gait%29+changes+are+not+measures+of+neuropathic+pain+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Pain%22%5BJournal%5D)">Hypolocomotion, asymmetrically directed behaviors (licking, lifting, flinching, and shaking) and dynamic weight bearing (gait) changes are not measures of neuropathic pain in mice.</a> Mol Pain. 6, 34(2010).</li>
<li>Ferreira-Gomes, J., Adaes, S., Castro-Lopes, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+movement-evoked+pain+in+osteoarthritis+by+the+knee-bend+and+CatWalk+tests%3A+a+clinically+relevant+study%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pain%22%5BJournal%5D)">Assessment of movement-evoked pain in osteoarthritis by the knee-bend and CatWalk tests: a clinically relevant study.</a> J Pain. 9 (10), 945-954 (2008).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Meting van de mechanische allodynia met behulp van von Frey filamenten is momenteel de meest gebruikte methode van pijn diermodellen om aan te tonen van tactiele overgevoeligheid. Zoals dierlijke modellen voor neuropathische pijn hebben voortgezet worden ontwikkeld, de methodologie van de evaluatie voor de zintuiglijke functie geweest ook verbeterde8,9,10,15. In die verslagen, is er gesuggereer...

Pathologische veranderingen van zenuwstelsel veroorzaakt door trauma, metabole stoornissen, ontsteking, infectie, ischemie, of auto-immune ziekte af en toe leiden tot neuropathische pijn, die is gedefinieerd als een pijn ontstaan als een rechtstreeks gevolg van een letsel of ziekte gevolgen voor de somatosensorische systeem1. Neuropatische pijn is meestal ondraaglijk en helaas, conventionele analgetica over het algemeen niet produceren voldoende pijn verlichting2. Een belangrijk kenmerk van neuropatische pijn bevat spontane en stimulatie-opgeroepen (dat wil zeggen, allodynia en hyperalgesia) pijn. Allodynia is een Nociceptieve reactie die op normaal niet-pijnlijke stimuli, zoals lichte aanraking of warme stimulatie optreedt. Hyperalgesia geeft een verbeterde pijn reactie op schadelijke stimuli van mechanische en/of thermische3. Hoewel deze twee symptomen zowel kritisch afbreuk doen aan de levenskwaliteit van de patiënt, is mechanische allodynia opgeroepen door zachte tactiele stimulatie de meest verzwarende symptoom omdat zachte contact moeilijk is te voorkomen in het dagelijks leven.
Om te onderzoeken het onderliggende mechanisme en nieuwe analgetica voor de behandeling van neuropatische pijn, is de nauwkeurige meting van de respons van de pijn essentieel. Talrijke neuropatische pijn dierlijke modellen hebben ontwikkeld Nociceptieve reacties op de hind paw gebied vanwege haar hoge toegankelijkheid4,5,6,7. Dus, de meeste pijn reactie evaluaties zijn uitgevoerd op de plantaire of dorsale oppervlak van de achterste poot door mechanische stimuli met behulp van speciale instrumenten, zoals von Frey filamenten toe te passen. Een van de meest gebruikte methode is de up en down, methode beschreven door Dixon8 en de latere gemodificeerde versies9,10. Echter zeer bekwaam, ervaren onderzoekers zijn vereist voor het uitvoeren van de test von Frey en de resultaten kunnen subjectief.
Het systeem van de analyse van de geautomatiseerde gang kan onderzoeken neurologische en neuromusculaire aandoeningen door het meten van de diverse parameters van het lopen in de vrij bewegende knaagdieren. In een verscheidenheid van zenuw schade diermodellen, kunnen de mate van Nociceptie en het antinociceptive effect van verschillende behandelingen worden geëvalueerd zonder toevoeging van een pijn stimulatie11,12,13, 14. deze analysesysteem kan detecteren gait van statische en dynamische parameters, zoals: afdrukbereik (het gebied van de volledige paw afdruk die met de vloer contact) paw, paw intensiteit (de gemiddelde intensiteit van de contactmogelijkheden paw-gebied), paslengte (de de afstand tussen opeenvolgende plaatsingen voor de dezelfde paw), houding fase (de duur van de grond contact voor een enkele hind poot), stap sequentie (de volgorde waarin de vier paws zijn geplaatst op de verdieping), swing (de duur van de swing-fase) en snelheid (berekend swing van de paslengte en duur swing en uitgedrukt in pixels per seconde). Deze paper toont de toepassing een analysesysteem en biedt een korte vergelijking van gegevens met de test van de von Frey met chronische vernauwing letsel (CCI) neuropatische muizen.

<table><tbody><tr><td>0.9% Saline</td><td>JW Pharmaceutical</td><td>N/A</td><td>Drager voor geneesmiddelen</td></tr><tr><td>1ml-sering</td><td>BD Plastipak</td><td>300013</td><td>Injectieapparaat</td></tr><tr><td>2, 2, 2-tribromoethanol (97% zuiverheid)</td><td>Sigma</td><td>T48402</td><td>Anestheticum</td></tr><tr><td>2-methyl-2-buthanol (99% zuiverheid)</td><td>Sigma</td><td>152463</td><td>Oplosmiddel voor 2, 2, 2-tribromoethanol</td></tr><tr><td>Catwalk Geautomatiseerd ganganalysesysteem</td><td>Noldus</td><td>N/A</td><td>Automatische analysesoftware van dierlijke gang</td></tr><tr><td>Chromic catgut (4-0 dikte)</td><td>AILEE</td><td>C442</td><td>Ligatuur om chronische constriktie-letsel aan de nervus ischiadicus te maken</td></tr><tr><td>Gabapentin</td><td>Sigma</td><td>Y0001280</td><td>Analgesicum, gebruikt als positieve controlegeneesmiddel in dit onderzoek</td></tr><tr><td>Graefe-tang</td><td>F.S.T</td><td>11051-10</td><td>Chirurgisch instrument</td></tr><tr><td>Verwarmingskussen</td><td>DAESHIN ELECTRONICS</td><td>M-303AT</td><td>Regulering van lichaamstemperatuur</td></tr><tr><td>ICR-muis</td><td>Samtaco</td><td>N/A</td><td>Experimenteel dier</td></tr><tr><td>Mersilk (3-0 dikte)</td><td>ETHICON</td><td>W598H</td><td>Hechtdraad voor chirurgische sluiting van de huid</td></tr><tr><td>Micro-Mosquito</td><td>F.S.T</td><td>13010-12</td><td>Chirurgisch instrument</td></tr><tr><td>Micro-schaar</td><td>F.S.T</td><td>14090-09</td><td>Chirurgisch instrument</td></tr><tr><td>Nadelhouder</td><td>F.S.T</td><td>12002-12</td><td>Chirurgisch instrument</td></tr><tr><td>Povidonjod</td><td>Firson</td><td>N/A</td><td>Ontsmettingsmiddel om infectie na een operatie te voorkomen</td></tr><tr><td>Mesje</td><td>F.S.T</td><td>10010-00 (#10)</td><td>Chirurgisch instrument om een incisie te maken</td></tr><tr><td>Meshandgreep</td><td>F.S.T</td><td>10003-12 (#3)</td><td>Chirurgisch instrument om een incisie te maken</td></tr><tr><td>Von-Frey-filamenten</td><td>North Coast</td><td>NC12775-99</td><td>Meetapparaat om sensorische functie voor mechanische stimulatie te testen</td></tr></tbody></table>

geautomatiseerde ganganalyse in muizen met chronische vernauwing blessure

Automated Gait Analysis in Mice with Chronic Constriction Injury

De von Frey-test is een klassieke methode die wijd verbeid gebruikt is te onderzoeken van de zintuiglijke functie van neuropatische pijn dieren. Nochtans, heeft enkele nadelen zoals subjectieve gegevens en de eis van een geschoolde, ervaren experimentator. Tot op heden, een aantal wijzigingen hebben verbeterd de von Frey-methode, maar heeft nog een paar beperkingen. Recente rapporten hebben gesuggereerd dat ganganalyse meer nauwkeurige en objectieve gegevens van de neuropathische dieren produceert. Dit protocol laat zien hoe uit te voeren van de geautomatiseerde ganganalyse om te bepalen van de mate van neuropatische pijn in muizen. Na enkele dagen van acclimatisering mochten de muizen lopen vrij op de glazen vloer tot verlichting van voetafdrukken. Vervolgens, kwantificering van de voetafdrukken en gait werden uitgevoerd via videoclips met automatische analyse van diverse wandel parameters, zoals gebied van paw print, schommel tijd, hoek van paw, enz.
Het belangrijkste doel van deze studie is om te beschrijven van de methodologie van geautomatiseerde ganganalyse en kort vergelijken met gegevens uit de klassieke zintuiglijke test met von Frey gloeidraad.

Wij hebben de von Frey-test uitgevoerd en geautomatiseerde ganganalyse bij CCI muizen tot 10 dagen na de operatie van het CCI. Herhaalde maatregelen voor twee-weg variantieanalyse (ANOVA) bepaalt de algemene gevolgen voor statistische analyse en Dunnett van post-hoc analyse werd uitgevoerd om te bepalen van de p-waarde tussen de experimentele groepen.
De resultaten die worden weergegeven in Figuur 1...

De precieze evaluatie van pijn reactie in een neuropatische diermodel is cruciaal voor de pathofysiologie van pijn ziekten onderzoeken en ontwikkelen van nieuwe analgetica. Presenteren we een gevoelige en objectieve methode om te bepalen van de zintuiglijke functie van het knaagdier hind paw door een geautomatiseerde gait analysesysteem.

Geautomatiseerde ganganalyse in muizen met chronische vernauwing blessure

The von Frey test is a classical method that has been widely used to examine the sensory function of neuropathic pain animals. However, it has some ...

Het algemene doel van deze procedure is om mechanische allodynie van muizen met een chronische constriktiebeschadiging te analyseren met behulp van een geautomatiseerd ganganalysesysteem. Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van belangrijke vragen op het gebied van pijnonderzoek door sensorische functie na perifere zenuwbeschadiging bij knaagdieren te meten. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat het analysesysteem snel en gemakkelijk te gebruiken is en ook automatisch verschillende gangparameters scoort.Voor dit onderzoek worden mannelijke ICR-muizen gebruikt met een gewicht van 20 tot 25 gram onder standaardomstandigheden gedurende ten minste één week. Selecteer muizen op basis van hun uiterlijk en gedrag. Gebruik geen muizen die abnormale verschijningen of gedrag vertonen zoals haarverlies, littekens en minder beweging.Gebruik de geselecteerde muizen, beginnend vijf dagen voor de operatie, om dagelijks geautomatiseerde ganggegevens te verzamelen om een basismeting te hebben. Eén dag voor de operatie voer de Von Frey-test uit met een draad van één gram op een achterpoot om een basisreactie te krijgen. Balanceer de reacties tussen de verwondingsgroep en de sham-groep.Breng op elke testdag de muizen naar de gedragstestkamer en laat de muizen zich minstens 30 minuten acclimatiseren in hun eigen kooigebied voor de test. Elke tweede dag na de operatie meet u mechanische allodynie met behulp van een Von Frey-test. Plaats de muis in een schone transparante acryldoos op een metalen gaasvloer en laat hem zich 30 minuten acclimatiseren in de doos.Breng vervolgens voorzichtig een Von Frey-draad van één gram aan op de plantaire oppervlakte van de ipsilaterale achterpoot totdat de draad buigt. Herhaal dit stimulatiepatroon 10 keer en observeer terugtrekkingen van de poot. Wacht minimaal 10 seconden tussen de stimulaties.Noteer het aantal terugtrekkingen en scoor hun frequentie voor analyse. Elke tweede dag voert u ook de ganganalysetest uit, die in het donker moet worden gedaan. Laat de muizen opnieuw acclimatiseren in de testkamer in hun kooigebied voor minimaal 30 minuten.Om het ganganalyseapparaat in te stellen, gaat u naar de software-besturing. Stel onder het tabblad instellingen de lengte van de loopband in op 30 centimeter, stel de maximale loopduur in op vijf seconden en stel de maximale loopvariatie in op 50%. Selecteer vervolgens een geregistreerde camera in het tabblad instellingen van het programmamenu en selecteer vervolgens open verwerving in het tabblad verwerven. Klik na de statusmelding op de knop achtergrond opnemen om een achtergrondfoto van de lege loopband te maken.Plaats nu een muis op de loopband en laat hem zich 10 minuten aan het apparaat acclimatiseren. Het apparaat moet altijd met alcohol worden gewassen tussen de muizen. Nadat de muis zich aan het apparaat heeft acclimatiseerd, klikt u op de knop verwerving starten.De opname start automatisch volgens de beweging van de muis. Wanneer de muis duidelijk over de loopband loopt, zal het programma de compliante loop automatisch classificeren met een groene pictogram. Als de software de voetafdrukken niet detecteert, zal een rood pictogram oplichten.Na het verzamelen van minimaal vijf compliante loopt selecteert u de optie runs classificeren in het tabblad verwerven van het programmamenu. Selecteer welke loop moet worden geanalyseerd en klik op de knop automatisch classificeren. De resultaten worden automatisch opgeslagen.Om de resultaten te bekijken, klikt u op loopstatistieken bekijken in het analysemenu. De Von Frey-test en geautomatiseerde ganganalyse werden gebruikt om muizen te beoordelen die de CCI-operatie ondergingen op 10 opeenvolgende dagen postoperatief. De frequentie van pootterugtrekking nam twee dagen na de operatie toe en bleef 10 dagen aanhouden.Dit effect kon aanzienlijk worden verminderd door dagelijkse postoperatieve injecties van gabapentine. Met behulp van de ganganalysesoftware kon de grootte van de afdrukken van de linker- en rechterachterpoot worden vergeleken. Normaal gesproken zijn de gebieden hetzelfde, wat wordt aangegeven door een 50%-waarde.De CCI-operatie had een significant effect op de pootafdruk en dat effect kon significant worden verminderd met gabapentine. De ganganalysesoftware kan ook de verandering in de duur van de enkele stand opmerken wanneer de muis gewicht draagt op slechts één achterpoot. Dit wordt berekend en getoond als een procentuele verandering.Deze metriek toont hetzelfde effect voor de CCI-operatie en gabapentine-behandelingen. Na het bekijken van deze video zou u een goed begrip moeten hebben van hoe u geautomatiseerde ganganalysesystemen bedient en analyseert om de pathofysiologie van neuropathische pijn in diermodellen zoals chronische constriktiebeschadiging te onderzoeken.

automated-gait-analysis-in-mice-with-chronic-constriction-injury

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowetenschap

Kinematische ganganalyse in het sagittale vlak levert zeer nauwkeurige informatie over hoe verkeer wordt uitgevoerd. We beschrijven de toepassing van deze technieken te identificeren gait tekorten voor muizen onderworpen aan auto-immuun-gemedieerde demyelinisatie. Deze methoden kunnen ook worden gebruikt om te karakteriseren gait tekorten voor andere Muismodellen met verminderde motoriek.

Sagittale vlak kinematische ganganalyse in C57BL/6 muizen onderworpen aan MOG35-55 geïnduceerde experimentele Autoimmune encefalomyelitis

In deze studie tonen wij het gebruik van kinematische ganganalyse, gebaseerd op het ventrale vliegtuig imaging als u wilt controleren de subtiele veranderingen in motorische coördinatie alsmede de progressie van neurodegeneratie met het bevorderen van leeftijd in muismodellen (bijvoorbeeld endophilin mutant muis lijnen).

Ganganalyse leeftijd-afhankelijke Motor bijzondere waardeverminderingen in muizen met neurodegeneratie

Hier is een protocol voor het verzamelen en analyseren van driedimensionale kinematica van quadrupedal motoriek bij knaagdieren voor preklinische studies.

3D kinematische Gait-analyse voor preklinische studies bij knaagdieren

Footprint Analysis is een voordelig alternatief voor gedigitaliseerde gang analyseprogramma's voor onderzoekers die bewegings afwijkingen bij muizen kwantificeren. Door zijn snelheid, eenvoud en longitudinale potentiaal is het ideaal voor het gedragsfenotypen van Muismodellen.

Voordelige Gait-analyse voor Gedragsfenotypen van Muismodellen van neuromusculaire ziekte

Geautomatiseerde loopanalyse is een haalbaar hulpmiddel om functioneel herstel te evalueren in knaagdiermodellen van perifere zenuwletsel en dwarslaesie. Hoewel het slechts één opstelling vereist om de motorische functie in verschillende experimentele modellen te beoordelen, is nauwgezette hard- en soft-ware aanpassing en training van de dieren zeer belangrijk.

Geautomatiseerde ganganalyse om functioneel herstel bij knaagdieren met perifere zenuw- of ruggenmergkvochtletsel te beoordelen

We bieden een protocol voor de beoordeling van motorisch gedrag via een gedragstestbatterij bij ratten na ischias zenuwverpletteringsletsel.

Multifactoriële beoordeling van motorisch gedrag bij ratten na unilaterale ischias zenuw crush letsel

Het huidige protocol beschrijft driedimensionale bewegingstracking / evaluatie om de beweging van ratten weer te geven na blootstelling aan een gesimuleerde onbruikomgeving.

Uitgebreid begrip van door inactiviteit geïnduceerde gangverandering bij knaagdieren

Een experimentele pijplijn om het bewegingspatroon van vrij lopende muizen kwantitatief te beschrijven met behulp van de MouseWalker (MW) toolbox wordt geleverd, variërend van initiële video-opnames en tracking tot post-kwantificeringsanalyse. Een dwarslaesiemodel bij muizen wordt gebruikt om het nut van het MW-systeem aan te tonen.

De MouseWalker gebruiken om locomotorische disfunctie te kwantificeren in een muismodel van dwarslaesie

Dit protocol stelt een ratten-achterledemaat-kinematische evaluatiepijplijn op met behulp van een markerloze loopbandtest met deep learning-gedreven multi-joint traject auto-labeling, wat reproduceerbare bewegingskwantificatie mogelijk maakt.

Deep-learning gebaseerde multi-joint synchrone tracking voor objectieve kwantificering van de achterpoot-lokomotorkinematica bij ratten

We presenteren een goedkope, markerloze workflow met DeepLabCut om spontane gang en voortbeweging bij vrij bewegende muizen te kwantificeren. Dit protocol integreert single-camera video-opname, markerloze tracking van anatomische herkenningspunten en het extraheren van ruimtelijke temporale locomotorische parameters, waardoor een niet-invasief en toegankelijk kader wordt geboden voor motorische gedragsanalyse zonder gespecialiseerde apparatuur.

Een goedkope, markerloze DeepLabCut-gebaseerde workflow voor spontane loop- en bewegingsanalyse bij vrij bewegende muizen

Leer geautomatiseerde ganganalyse voor neuropathische pijnonderzoek bij muizen met chronische vernauwing blessure. Deze methode meet objectief sensorische functie en helpt analgetica zoals gabapentin te evalueren.

Geautomatiseerde ganganalyse in muizen met chronische vernauwing blessure

Meer video's verkennen