Name: Meten van Influenza neutraliserende antilichamen reacties op A(H3N2) virussen in menselijke Sera door Microneutralization testen met behulp van MDCK-SIAT1 cellen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-11-22T15:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 9 s
Description: Leer microneutralisatie-assays met MDCK-SIAT1-cellen om neutraliserende antilichaamreacties op H3N2-influenzavirussen in menselijk serum te meten. Deze methode evalueert griepimmuniteit na vaccinatie.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Wij danken Dr. Xiuhua Lu, Dr. Feng Liu en Ms. Ashley Burroughs van de Influenza-divisie van de CDC voor hun kritische evaluatie en bijstand ter voorbereiding van dit manuscript. Wij danken Dr. Adrian Reber van Influenza afdeling van de CDC voor zijn hulp bij de voorbereiding van de grafische vormgeving van Figuur 3. Tot slot bedanken wij Dr. M. Matrosovich, Marburg, Duitsland voor het verstrekken van de MDCK-SIAT1 cellen.

<ol><li>Reber, A., Katz, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunological+assessment+of+influenza+vaccines+and+immune+correlates+of+protection%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Rev+of+Vaccines%22%5BJournal%5D)">Immunological assessment of influenza vaccines and immune correlates of protection.</a> Expert Rev of Vaccines. 12, 519-536 (2013).</li>
<li>Li, C. K., Rappuoli, R., Xu, X. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Correlates+of+protection+against+influenza+infection+in+humans--on+the+path+to+a+universal+vaccine%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+in+Immunol%22%5BJournal%5D)">Correlates of protection against influenza infection in humans--on the path to a universal vaccine?</a> Curr Opin in Immunol. 25, 470-476 (2013).</li>
<li>WHO Global Influenza Surveillance Network. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Manual+for+the+labratory+diagnosis+and+virological+surveillence+of+influenza%22">Manual for the labratory diagnosis and virological surveillence of influenza</a>. , 
 <a target="_blank" href="http://whqlibdoc.who.int/publications/2011/9789241548090_eng.pdf">http://whqlibdoc.who.int/publications/2011/9789241548090_eng.pdf</a> (2011).</li>
<li>Govorkova, E. A., Kodihalli, S., Alymova, I. V., Fanget, B., Webster, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth+and+immunogenicity+of+influenza+viruses+cultivated+in+Vero+or+MDCK+cells+and+in+embryonated+chicken+eggs%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biological+Stand%22%5BJournal%5D)">Growth and immunogenicity of influenza viruses cultivated in Vero or MDCK cells and in embryonated chicken eggs.</a> Dev Biological Stand. 98, discussion 73-34 39-51 (1999).</li>
<li>WHO. Recommended composition of influenza virus vaccines for use in the northern hemisphere influenza season. , 
 <a target="_blank" href="http://www.who.int/influenza/vaccines/virus/recommendations/201703_recommendation.pdf?ua=1">http://www.who.int/influenza/vaccines/virus/recommendations/201703_recommendation.pdf?ua=1</a> 2017-2018 (2017).</li>
<li>Levine, M. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutralizing+Antibody+Responses+to+Antigenically+Drifted+Influenza+A%28H3N2%29+Viruses+among+Children+and+Adolescents+following+2014-2015+Inactivated+and+Live+Attenuated+Influenza+Vaccination%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Vaccine+Immunol+%3A+CVI%22%5BJournal%5D)">Neutralizing Antibody Responses to Antigenically Drifted Influenza A(H3N2) Viruses among Children and Adolescents following 2014-2015 Inactivated and Live Attenuated Influenza Vaccination.</a> Clin Vaccine Immunol : CVI. 23, 831-839 (2016).</li>
<li>Lin, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+characteristics+and+antigenic+properties+of+recently+emerged+subclade+3C.3a+and+3C.2a+human+influenza+A%28H3N2%29+viruses+passaged+in+MDCK+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Influenza+Other+Respir+Viruses%22%5BJournal%5D)">The characteristics and antigenic properties of recently emerged subclade 3C.3a and 3C.2a human influenza A(H3N2) viruses passaged in MDCK cells.</a> Influenza Other Respir Viruses. , (2017).</li>
<li>Lin, Y. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuraminidase+receptor+binding+variants+of+human+influenza+A%28H3N2%29+viruses+resulting+from+substitution+of+aspartic+acid+151+in+the+catalytic+site%3A+a+role+in+virus+attachment%3F%5BTitle%5D)+AND+%22J+of+Virol%22%5BJournal%5D)">Neuraminidase receptor binding variants of human influenza A(H3N2) viruses resulting from substitution of aspartic acid 151 in the catalytic site: a role in virus attachment?</a> J of Virol. 84, 6769-6781 (2010).</li>
<li>Skowronski, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mutations+acquired+during+cell+culture+isolation+may+affect+antigenic+characterisation+of+influenza+A%28H3N2%29+clade+3C.2a+viruses%5BTitle%5D)+AND+%22Euro+Surveillance%22%5BJournal%5D)">Mutations acquired during cell culture isolation may affect antigenic characterisation of influenza A(H3N2) clade 3C.2a viruses.</a> Euro Surveillance. 21, 30112(2016).</li>
<li>Matrosovich, M., Matrosovich, T., Carr, J., Roberts, N. A., Klenk, H. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overexpression+of+the+alpha-2%2C6-sialyltransferase+in+MDCK+cells+increases+influenza+virus+sensitivity+to+neuraminidase+inhibitors%5BTitle%5D)+AND+%22J+of+Virol%22%5BJournal%5D)">Overexpression of the alpha-2,6-sialyltransferase in MDCK cells increases influenza virus sensitivity to neuraminidase inhibitors.</a> J of Virol. 77, 8418-8425 (2003).</li>
<li>Oh, D. Y., Barr, I. G., Mosse, J. A., Laurie, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MDCK-SIAT1+cells+show+improved+isolation+rates+for+recent+human+influenza+viruses+compared+to+conventional+MDCK+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">MDCK-SIAT1 cells show improved isolation rates for recent human influenza viruses compared to conventional MDCK cells.</a> J Clin Microbiol. 46, 2189-2194 (2008).</li>
<li>US Department of Health and Human Services. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Biosafety+in+Microbiological+and+Biomedical+Laboratories%22">Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories</a>. , (2009).</li>
<li>Reed, H. M. <a target="_blank" href="https://academic.oup.com/aje/article-abstract/27/3/493/99616/A-SIMPLE-METHOD-OF-ESTIMATING-FIFTY-PER-CENT?redirectedFrom=PDF">A simple method of estimating fifty percent endpoints.</a> The American Journal of Hygiene. 27, (1938).</li>
<li>Laurie, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((International+Laboratory+Comparison+of+Influenza+Microneutralization+Assays+for+A%28H1N1%29pdm09%2C+A%28H3N2%29%2C+and+A%28H5N1%29+Influenza+Viruses+by+CONSISE%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Vaccine+Immunol+%3A+CVI%22%5BJournal%5D)">International Laboratory Comparison of Influenza Microneutralization Assays for A(H1N1)pdm09, A(H3N2), and A(H5N1) Influenza Viruses by CONSISE.</a> Clinical Vaccine Immunol : CVI. 22, 957-964 (2015).</li>
<li>Lin, Y., Gu, Y., McCauley, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+a+Quantitative+Micro-neutralization+Assay%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp+%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Optimization of a Quantitative Micro-neutralization Assay.</a> J Vis Exp : JoVE. , (2016).</li>
<li>van Baalen, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ViroSpot+microneutralization+assay+for+antigenic+characterization+of+human+influenza+viruses%5BTitle%5D)+AND+%22Vaccine%22%5BJournal%5D)">ViroSpot microneutralization assay for antigenic characterization of human influenza viruses.</a> Vaccine. 35, 46-52 (2017).</li>
<li>WHO. Recommended composition of infleunza virus vaccines for use in the 2015-2016 northern heamisphere infleunza season. , 
 <a target="_blank" href="http://www.who.int/influenza/vaccines/virus/recommendations/2015_16_north/en">http://www.who.int/influenza/vaccines/virus/recommendations/2015_16_north/en</a> 2015-2016 (2015).</li>
<li>WHO. Recommended composition of influenza virus vaccines for use in the 2016-2017 northern hemisphere influenza season. , 
 <a target="_blank" href="http://www.who.int/influenza/vaccines/virus/recommendations/201602_recommendation.pdf?ua=1">http://www.who.int/influenza/vaccines/virus/recommendations/201602_recommendation.pdf?ua=1</a> 2016-2017 (2016).</li>
</ol>

De auteurs melden geen belangenconflict. De bevindingen en conclusies in deze publicatie zijn die van de auteurs, en niet noodzakelijkerwijs de standpunten van de centra voor ziektepreventie en-bestrijding en de preventie en de financiering agentschap.

De bepaling van MN is een van de belangrijkste tests voor influenza serologie gebruikt voor het opsporen van antilichamen reacties na besmetting van de griep of vaccinatie. Titers gegenereerd op basis van MN tests worden vaak gebruikt als de primaire uitkomst van veel griep seroepidemiology studies. MN tests worden ook op grote schaal gebruikt voor sero-diagnose, en de evaluatie van de immunogeniciteit van het vaccin. Internationale inter lab studies zijn uitgevoerd om te vergelijken van MN testen uitgevoerd in meerdere ...

Influenzavirussen blijven morbiditeit en mortaliteit in de menselijke bevolking jaarlijks veroorzaken. HA is de grote oppervlakte glycoproteïne influenza virussen. Neutraliserende antilichamen gericht op HA zijn de belangrijkste immuun mechanisme dat met bescherming voor influenza infecties1,2 correleert. Hemagglutination inhibitie (HI) testen en MN vitrotests zijn twee methoden gebruikte voor het meten van antilichaam reacties in menselijke sera na de infectie of vaccinatie griep3. De HI-test meet antilichaam inhibitie van virus hemagglutination van rode bloedcellen en wordt beschouwd als een surrogaat assay. In tegenstelling tot HI, kan de bepaling van MN direct de niveaus van antilichamen in menselijke sera die neutraliseren van besmetting van de griep in celculturen meten. MDCK cellen worden vaak gebruikt in de isolatie van het virus van de griep en MN testen4.
Influenzavirussen worden voortdurend antigene drift en shift, verwerven van mutaties op HA eiwitten die de receptor bindende specificiteit van virussen veranderen kunnen ondergaan. Sinds 2014 nieuwe clusters van A(H3N2) virussen ontstaan en blijven circuleren tot het huidige seizoen. De meeste van deze virussen behoren tot de genetische groep 3C.2a en 3C.3a gebaseerd op de fylogenetische analyse van de HA-eiwitten. Veel van de circulerende virussen 3C.2a had verminderd vermogen om hemagglutinate van rode bloedcellen en daarmee kunnen niet worden gekenmerkt door HI assays5. Neutralisatie testen moeten worden gebruikt voor het meten van de antilichaam-reacties op deze virussen die niet6 hemagglutinate doen. Bovendien, studies hebben aangetoond dat deze hedendaagse A(H3N2) virussen receptor bindende eigenschappen vergeleken met eerdere A(H3N2) virussen hebben veranderd en hebben de neiging om te accumuleren cultuur aangepast mutaties en polymorfisme bij gepasseerd in in vitro cel culturen7,8,9. Vergeleken met conventionele MDCK cellen, is MDCK-SIAT1 een cellijn ontwikkeld door Matrosovich et al. door de stabiele transfectie MDCK cellen met cDNA van menselijke alpha2, 6-sialtransferase (SIAT1). Deze cellijn spreekt verhoogde hoeveelheden alpha2, 6-sialic galactose wordt en verminderde hoeveelheid alpha2, 3-sialic zuur wordt dan het bovenliggende MDCK cellen10. Cellen van de MDCK-SIAT1 gebleken om isolatie tarieven voor A(H3N2) virussen in vergelijking met MDCK cellen11. Onlangs, Lin et al. gerapporteerd dat onlangs naar voren gekomen 3C.2a en 3C.3a menselijke A(H3N2) influenza virussen, meer trouwe virus replicaties en betere virus infectiviteit werden bereikt wanneer virussen gekweekt in cellijnen van de MDCK-SIAT1 in vergelijking met MDCK cellen7 werden. De MDCK-SIAT1 cellen zijn dus beter geschikt in MN testen te karakteriseren van antilichaam reacties op de recente clusters van A(H3N2) virussen.
Hier beschrijven we een MN-assay cuvetten van de MDCK-SIAT1 voor het meten van antilichaam reacties op hedendaagse 3C.2a en 3C.3a A(H3N2) virussen in menselijke sera. Virussen gegroeid in eieren of cellen kunnen worden gebruikt in deze test. Warmte geïnactiveerd sera met neutraliserende antilichamen worden eerst serieel verdund, vervolgens geïncubeerd met 100 TCID50/goed van A(H3N2) influenzavirus om antilichamen in de sera te binden aan het virus. MDCK-SIAT1 cellen worden vervolgens toegevoegd aan het mengsel van virus-antilichaam en 18-20 h bij 37 ° C, 5% CO2 om het A(H3N2)-virus besmetten MDCK-SIAT1 cellen te repliceren ge¨ uncubeerd. Na een incubatieperiode van overnachting, de platen worden opgelost en de hoeveelheid virus in elk putje wordt gekwantificeerd door een ELISA met anti-influenza A NP monoklonale antilichamen. De detectie van NP geeft aan de aanwezigheid van virusinfectie en het ontbreken van neutraliserende antilichamen. Neutraliserende antilichamen titer wordt gedefinieerd als de reciproque waarde van de hoogste serumverdunning waarmee ≥ 50% remming van de besmettelijkheid van het virus.

<table><tbody><tr><td>Dulbecco&rsquo;s Modified Eagle Medium (DMEM) with high Glucose</td><td>Life Science</td><td>11965</td><td>Een essentieel onderdeel van steriele celcultuur, viruspropagatie en virusverdunningsmedia</td></tr><tr><td>Fetaal bovien serum (FBS)</td><td>Hyclone</td><td>SH30070.03</td><td></td></tr><tr><td>Bovine Serum Albumine (BSA) Fractie V, Protase Vrij</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>3117332001</td><td></td></tr><tr><td>L-Glutamine</td><td>Life Science</td><td>25030-081</td><td></td></tr><tr><td>Natriumpyruvaat</td><td>Life Science</td><td>11360-070</td><td></td></tr><tr><td>Geneticin G-418 disulfaat zout&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A1720-5G&nbsp;&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Life Science</td><td>15630-080</td><td></td></tr><tr><td>Penicilline/Streptomycine</td><td>Life Science</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>Aceton</td><td>VWR</td><td>67-64-1</td><td>Gebruikt op een 80% concentratie</td></tr><tr><td>Fosfaat-Citraat Buffer met Sodium Perboraat&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>SLBF2806V</td><td></td></tr><tr><td>O-Fenyleendiamin Dihydrochloride tablet</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>SLBQ1086V</td><td>1 tablet per 100ml celcultuur kwaliteit water</td></tr><tr><td>Zwavelzuur</td><td>Fisher Scientific</td><td>A510-P500</td><td>Gebruikt 0.5M eindconcentratie</td></tr><tr><td>Ethanol, Gedenatureerd, 4L</td><td>VWR</td><td>EM-AX0422-3</td><td>Gebruikt op een 70% concentratie</td></tr><tr><td>Trypsine-EDTA</td><td>Life Science</td><td>1748048</td><td></td></tr><tr><td>RDE II "Seiken"</td><td>Denka Seiken</td><td>370013</td><td></td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P1379-500ml</td><td></td></tr><tr><td>Anti-NP muis monoklonaal Ab</td><td>Millipore pool</td><td>MAB 8257 MAB 8258</td><td></td></tr><tr><td>Anti-muis IgG HRP&nbsp;</td><td>KPL</td><td>074-1802</td><td></td></tr><tr><td>96-wells platen met platte bodem</td><td>Thermo Scientific</td><td>3455</td><td></td></tr><tr><td>Plate reader</td><td>Molecular Device</td><td>Spectromax 384 plus</td><td></td></tr><tr><td>Celcultuur fles 162 cm2/Vent Cap</td><td>Corning/VWR</td><td>3151</td><td></td></tr></tbody></table>

meten van influenza neutraliserende antilichamen reacties op a(h3n2) virussen in menselijke sera door microneutralization testen met behulp van mdck-siat1 cellen

Measuring Influenza Neutralizing Antibody Responses to A(H3N2) Viruses in Human Sera by Microneutralization Assays Using MDCK-SIAT1 Cells

Neutraliserende antilichamen tegen hemagglutinine (HA) van influenza-virussen worden beschouwd als het belangrijkste immuun mechanisme dat met bescherming van influenza-infecties correleert. Microneutralization (MN) tests worden vaak gebruikt voor het meten van neutraliserende antilichamen reacties in menselijke sera na griepvaccinatie of infectie. Madine Darby Canine Kidney (MDCK) cellen zijn het meest gebruikte cel substraat voor MN testen. Echter op dit moment circuleren 3C.2a en 3C.3a A(H3N2) influenza virussen hebben verworven gewijzigd receptor bindende specificiteit. De cellijn van de MDCK-SIAT1 met verhoogde α-2,6 sialic galactose wordt op het oppervlak heeft bewezen om verbeterde infectiviteit en meer trouw replicaties dan conventionele MDCK cellen voor deze hedendaagse A(H3N2) virussen. Hier beschrijven we een MN assay cuvetten van de MDCK-SIAT1 die is geoptimaliseerd om te kwantificeren van neutraliserende antilichamen titers voor deze hedendaagse A(H3N2) virussen. In dit protocol, worden warmte geïnactiveerd sera met neutraliserende antilichamen eerst serieel verdund, vervolgens geïncubeerd met 100 TCID50/goed van de A(H3N2)-influenzavirussen om antilichamen in de sera te binden aan de virussen. MDCK-SIAT1 cellen worden vervolgens toegevoegd aan het mengsel van virus-antilichaam en 18-20 h bij 37 ° C, 5% CO2 toe A(H3N2) virussen te infecteren MDCK-SIAT1 cellen ge¨ uncubeerd. Na een incubatieperiode van overnachting, platen worden opgelost en de hoeveelheid virus in elk goed wordt gekwantificeerd door een enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) met behulp van anti-griep een nucleoproteïne (NP) monoklonale antilichamen. Neutraliserende antilichamen titer wordt gedefinieerd als de reciproque waarde van de hoogste serumverdunning waarmee ≥50% remming van de besmettelijkheid van het virus.

Bepaling van de besmettelijkheid van het virusvoorraden is de eerste stap in de bepaling van MN. Figuur 2 illustreert de indeling van de plaat om te bepalen van de TCID50 de virusvoorraden. Voor virus bestanden met onbekende infectiviteit, kan het virus worden getitreerd uit meerdere pre verdunningen, bijvoorbeeld zowel 10-2 en 10-3, om te vangen de beste titratiecurve voor het berekenen van de besmettelijkheid van het virus. ...

Influenza neutraliserende antilichamen correleren met bescherming van influenza-infecties. Microneutralization testen meten van neutraliserende antilichamen in menselijke sera en worden vaak gebruikt voor menselijke influenza-serologie. We beschrijven een microneutralization assay cuvetten van de MDCK-SIAT1 voor het meten van neutraliserende antilichamen titers voor hedendaagse 3C.2a en 3C.3a A(H3N2) virussen na griepvaccinatie of infectie.

Meten van Influenza neutraliserende antilichamen reacties op A(H3N2) virussen in menselijke Sera door Microneutralization testen met behulp van MDCK-SIAT1 cellen

Neutralizing antibodies against hemagglutinin (HA) of influenza viruses are considered the main immune mechanism that correlates with protection for ...

Het algemene doel van deze microneutralisatietest is om neutraliserende antilichaamreacties te meten op hedendaagse H3N2 Influenza-virussen in menselijk serum met behulp van MDCK-SIAT1-cellen. Deze methode kan worden gebruikt om belangrijke vragen te beantwoorden om de immuniteit tegen influenza te evalueren. Het kan bijvoorbeeld bepalen of influenzavaccinatie voldoende neutraliserende antilichaamreacties induceert tegen circulerende H3N2-virussen om infectie te voorkomen.Het grote voordeel van deze techniek is dat het MDCK-SIAT1-cellen en microneutralisatietests gebruikt om antilichaamreacties te detecteren op reset antigene clusters van H3N2-influenzavirussen. Virusvoorraden moeten worden gepropageerd tot hoge infectieuze titers voordat ze worden gebruikt in microneutralisatietests. Begin deze procedure met het propageren van AH3N2-virussen in MDCK-SIAT1-cellen, zoals beschreven in het tekstprotocol.Op dag één, ontdooi een flacon virus bij kamertemperatuur en plaats het virus onmiddellijk op ijs. Om het virus te testen bij twee verschillende startverdunningen, voeg eerst 100 microliter virus toe aan 99 milliliter virusverdunning voor de 10:2 voorverdunning. Voeg vervolgens 1 mill

measuring-influenza-neutralizing-antibody-responses-to-h3n2-viruses

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

This video demonstrates Microneutralization assays to measure neutralizing antibodies using Madin-Darby Canine Kidney cells overexpressing α2,6-linked sialic acid in human sera. This assay is often used for influenza human...

A Microneutralization Assay to Measure Neutralizing Antibody Titers in Human Serum

This video demonstrates the imaging-based micro-neutralization assay to analyze the antigenic relations between influenza A and B viruses. It provides a quantitative and visual way to assess the effectiveness of antibodies or other treatments in preventing viral infection.

Analyzing the Antigenic Relationship between Viruses using an Image-Based Microneutralization Assay

This video demonstrates a technique for generating escape variants of neutralizing influenza virus monoclonal antibodies. Antibody-neutralized virus suspension is injected into embryonated chicken eggs to propagate escape variants selectively. This results in a virus population predominantly of escape variants, confirmed via a Hemagglutination assay.

Generation of Influenza Virus Escape Variants against Neutralizing Antibodies

This video demonstrates an assay measuring influenza neuraminidase (NA) inhibiting antibody titers in a serum sample. A serum sample containing antibodies against NA is added to a fetuin-coated microwell plate. Upon adding the virus, the antibodies prevent viral NA from cleaving fetuin and exposing its galactose moiety. A peroxidase-conjugated lectin is then added, which binds to the exposed galactose. The NA-inhibiting antibody titer is determined using a colorimetric test, where a peroxidase...

An Assay to Measure Influenza Neuraminidase Inhibition Antibody Titers

Source:Matthew J Murray1, Gary R McLean2,3, Matthew B Reeves11Institute of Immunity and Transplantation, University College London.2Cellular and Molecular Immunology Research Centre, London Metropolitan University.3National Heart and Lung Institute, Imperial College London.This video demonstrates an immunofluorescence assay designed to measure the neutralization of Human Cytomegalovirus (HCMV). Virus-specific antibodies are mixed with the virus and incubated with human fibroblast cells. The...

An Immunofluorescence Method to Measure the Neutralization of Human Cytomegalovirus

We beschrijven de enzym-gekoppelde lectin-assay (ELLA) voor het meten van influenza-neuraminidase (NA)-remmingsantilichaam-titers in sera. De assay gebruikt pinda-agglutinine om galactoseresiduen te kwantificeren die toegankelijk worden wanneer NA siaalzuur verwijdert van fetuïne-gecoate, 96-well platen.

Meten Influenza neuraminidase Remming antilichaamtiters door Enzyme-linked lectine Assay

Deze studie beschrijft een   -Imaging gebaseerde micro-neutralisatietest de antigene relaties tussen virussen te analyseren. Het protocol maakt gebruik van een flatbed scanner en heeft vier stappen, waaronder titratie titratie kwantificering, neutralisatie, en neutralisatie kwantificering. De test werkt goed met de huidige circulerende influenza A (H1N1) pdm09, A (H3N2) en B-virussen.

Optimalisatie van een kwantitatieve micro-neutralisatie assay

De gepresenteerde protocollen beschrijven het uitvoeren van een hemagglutination inhibitie-test om te kwantificeren van influenza-specifieke antilichamen titers van serummonsters van influenza vaccinontvangers. De eerste bepaling bepaalt optimale virusantigeen concentraties door hemagglutination. De tweede test kwantificeert influenza-specifieke antilichamen titers door inhibitie van de hemagglutination.

Een geoptimaliseerde Hemagglutination inhibitie (HI) Assay te kwantificeren van Influenza-specifieke antilichamen Titers

Influenza A virussen (IAVs) zijn belangrijke menselijke respiratoire pathogenen. Om te begrijpen van de pathogeniteit van IAVs en om de preklinische testen van nieuwe vaccin benaderingen, zijn diermodellen nabootsen menselijke fysiologie vereist. Hier beschrijven we technieken om IAV pathogenese, humorale reacties en vaccin werkzaamheid met behulp van een muismodel van infectie te evalueren.

Influenza-A Virus Studies in een muismodel van infectie

Beschrijven we een methode waarmee we identificeren kritische residuen nodig zijn voor de binding van de mens of lymfkliertest monoclonal antilichamen die gericht zijn op de virale hemagglutinine van influenza A-virussen. Het protocol kan worden aangepast aan andere oppervlakte glycoproteïnen van virus en hun overeenkomstige neutraliserende antilichamen.

Generatie van Escape varianten van het Influenza Virus monoklonale antistoffen neutraliseren

Hier beschrijven we een protocol voor pseudovirusverpakking en het meten van antilichaamneutraliserende activiteit.

Bereiding van pseudo-getypeerde H5-aviaire influenzavirussen met calciumfosfaattransfectiemethode en meting van antilichaamneutraliserende activiteit

Leer microneutralisatie-assays met MDCK-SIAT1-cellen om neutraliserende antilichaamreacties op H3N2-influenzavirussen in menselijk serum te meten. Deze methode evalueert griepimmuniteit na vaccinatie.

Meten van Influenza neutraliserende antilichamen reacties op A(H3N2) virussen in menselijke Sera door Microneutralization testen met behulp van MDCK-SIAT1 cellen (Video) | JoVE Journal

Meten van Influenza neutraliserende antilichamen reacties op A(H3N2) virussen in menselijke Sera door Microneutralization testen met behulp van MDCK-SIAT1 cellen

Meer video's verkennen