Name: Een eenvoudige benadering voor het opwekken van experimentele Autoimmune Neuritis in C57BL/6 muizen voor functionele en neuropathologische evaluaties (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-11-09T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 30 s
Description: Leer een eenvoudige methode om experimentele auto-immuun neuritis op te wekken bij C57BL/6 muizen voor functionele en neuropathologische evaluaties. Dit protocol ondersteunt onderzoek naar perifere neuropathie.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

DGG is een NHMRC Peter Doherty en Multiple sclerose onderzoek Australië (MSRA) vroege carrière Fellow. JLF wordt ondersteund door een MSRA Postdoctoral Fellowship. Dit werk werd gesteund door de Australian National Health en medische onderzoek Raad (NHMRC) project #APP1058647 aan JX verlenen.

alle procedures die hier worden beschreven zijn goedgekeurd door het Florey-Instituut voor Neurowetenschappen en geestelijkegezondheid (Melbourne hersenen centrum) dier ethisch comité en volg de Australische gedragscode voor het gebruik van dieren voor wetenschappelijk Doeleinden.
 1. EAN inductie Opmerking: EAN kan met succes worden opgewekt bij mannelijke C57BL/6 muizen leeftijd tussen 6-8 weken. Het inductie-protocol duurt 9 dagen in totaal. Dag 0 verwijst naar de dag van de eerste immunisatie. Voor dit protocol, injecties werden uitgevoerd onder verdoving (zie stap hieronder 1.1.2).
<ol><li>Op dag -1: <ol><li>bereiden de toxine Pertussis (Zie Tabel van materialen) oplossing van 1.6 µg/mL met behulp van de steriele 0,1 M muis-isotone fosfaat gebufferde zoutoplossing (MT-PBS).</li>
		<li>Afstomping met Isofluraan: <ol><li>plaats van de muis (C57BL/6, man, 6-8 weken) in de zaal afstomping en aanpassen van de stroom van zuurstof aan 1 L/min.</li>
			<li>Zet de vaporizer Isofluraan, aanpassen tot 2,5% voor afstomping, en monitor ademhaling en wacht gedurende 2 minuten, of totdat de primaire reflexen (hoornvlies en hind-limb) zijn niet meer responsieve</li></ol>
		</li> <li>De muis uit de zaal afstomping verwijderen en beheren van 250 µL van de bovenstaande Pertussis toxine oplossing via een intraperitoneaal (i.p.) injectie met een 0,5 mL injectiespuit met een naald 30 1/2 G.</li>
		<li>De injecteerbare entmateriaal voorbereiden immunisatie: <ol><li>voorbereiden oplossing A met 2 mg/mL oplossing van P0 180-199 peptide (met &#62; 98% zuiverheid, volgorde S-S-K-R-G-R-Q-T-P-V-L-Y-A-M-L-D-H-S-R-S) in een zoutoplossing 0,9%.</li>
			<li>Voorbereiden Oplossing B met 20 mg/mL oplossing van Mycobacterium tuberculosis (Zie Tabel van materialen) in Freund &#39; s compleet adjuvans (FCA, bestaande uit: 15% mannide monoolate + 85% van paraffineolie en 0,5 mg/mL van gedroogde gedood en gedroogde M Mycobacterium butyricum).</li>
			<li>Om de laatste entmateriaal voor het injecteren, combineren van gelijk volume delen van oplossingen A en B in een kraal klopper en meng ze tegen een maximumsnelheid voor 1 minuut bij kamertemperatuur. 
			Opmerking: Oplossingen A en B kunnen worden gehouden als voorraad en opgeslagen bij 4 ° C voor maximaal een maand maar het gecombineerde definitieve entmateriaal moet vers worden bereid op de dag van de muis injectie.</li>
		</ol></li></ol></li> <li>Op dag 0, 50 µL van het entmateriaal (voorbereiding beschreven in stap 1.1.4) beheren in een muis via een subcutane injectie met behulp van een naald 23 G. 
	Opmerking: De injectie kan worden geplaatst tussen de schouderbladen, of tussen de hind-limb en staart over het caudal dorsum.</li>
	<li>Op dag 1, de Pertussis toxine oplossing van 1.2 µg/mL (in MT-PBS) maken en beheren van 250 µL in een muis via i.p. injectie met een 0,5 mL injectiespuit met een naald 30 1/2 G.</li>
	<li>Op dag 3, herhaal stap 1.3 hierboven. 
	Opmerking: Voorraad oplossingen A en B kunnen worden samengesteld en opgeslagen op 4 ˚C voor een maximum van één maand. Echter, de laatste injecteerbare entmateriaal, geproduceerd door het combineren van stamoplossingen A en B, moet gebeuren op de dag van de injectie.</li>
	<li>Beheren op dag 8, 50 µL van het entmateriaal (beschreven in stap 1.1.4 voorbereiding) in een muis via een subcutane injectie (zie stap 1.2 hierboven), op de dezelfde injectieplaats zoals in stap 1.2 (voor elk dier)</li></ol>
 2. klinische scoren <ol><li>voeren klinische scoren uit dagelijkse beginnen op dag 0.</li>
	<li>Geven elke muis een score van 0, 1, 2, 3 of 4 volgens de gepubliceerde criteria 4. Zie tabel 1 voor het scoren van klinische EAN. 
	Opmerking: Voor consistentie, moet worden getracht te scoren muizen tegelijk dagelijks door de dezelfde onderzoeker.</li>
</ol> 3. Motor functie beoordeling Opmerking: de prestaties van de motor in parallel met klinische scoren voor de dezelfde cohort van dieren wordt beoordeeld. Het motor functie beoordeling apparaat moet worden aangesloten op een computer dat heeft een gait functie imaging systeem (Zie Tabel van materialen) geïnstalleerd. Het is ook aanbevolen dat alle muizen worden beoordeeld moeten worden gewend aan de lopende taak vóór EAN inductie. Om dit te doen, praktijk loopt (2 test sessies per muis) worden uitgevoerd drie dagen voorafgaand aan ziekte inductie (dag -3).
<ol><li>Zet de motor functie beoordeling toestellen en de switch op de lichte toets.</li>
	<li>Scruff de muis stevig en inkt zijn voeten door het verlagen van het op een container gevuld met rode inkt terwijl haar staart. 
	Opmerking: Deze stap is vereist voor de stam C57BL/6, maar kan worden overgeslagen als de stam van een muis met een witte jas-kleur wordt gebruikt.</li>
	<li>Plaatst u de muisaanwijzer in het compartiment lopen en de snelheid van de loopband op 15 cm instellen/s.</li>
	<li>Draaien op de loopband en op de &#34; record &#34; knop vast te leggen van de draaiende beweging van de muis met behulp van de functie van de gait imaging systeem (Zie Tabel of Materials).</li>
	<li>Gebruiken een timer en meten van elke lopen voor 36 s. Na 36 s, opname stoppen en stop de loopband. 
	Opmerking: Muizen die niet met succes van de lopende taak voor dit interval s 36 voltooien worden beschouwd te hebben gefaald.</li>
	<li>Slaat het videobestand in de aangewezen map.</li>
	<li>Herhaal de bovenstaande stappen voor elke muis worden beoordeeld. De muizen met dezelfde lopende taak om de 3 dagen testen.</li>
	<li>Analyseren de bewerkte video bestanden met behulp van software voor gait functieparameters (Zie Tabel of Materials). 
	Opmerking: De details van hoe te analyseren verschillende motor parameters verschillen onder software zo gelieve te verwijzen naar de fabrikant &#39; s instructie vóór de analyse. Te krijgen van de histologische bewijs van axonale en myeline schade via immunohistochemistry of elektronenmicroscopie, dierlijke weefsels op de elke fase post motor functie beoordeling afhankelijk van de specifieke doelstellingen van het onderzoek kunnen worden genomen.</li>
</ol>

<ol><li>Newswanger, D. L., Warren, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guillain-Barre+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Am+Fam+Physician%22%5BJournal%5D)">Guillain-Barre syndrome.</a> Am Fam Physician. 69 (10), 2405-2410 (2004).</li>
<li>Ruiz, E., Ramalle-Gomara, E., Quinones, C., Martinez-Ochoa, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trends+in+Guillain-Barre+syndrome+mortality+in+Spain+from+1999+to+2013%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Trends in Guillain-Barre syndrome mortality in Spain from 1999 to 2013.</a> Int J Neurosci. 126 (11), 985-988 (2016).</li>
<li>Walling, A. D., Dickson, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guillain-Barre+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Am+Fam+Physician%22%5BJournal%5D)">Guillain-Barre syndrome.</a> Am Fam Physician. 87 (3), 191-197 (2013).</li>
<li>Gonsalvez, D. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Functional+and+Neuropathological+Testing+Paradigm+Reveals+New+Disability-Based+Parameters+and+Histological+Features+for+P0180-199-Induced+Experimental+Autoimmune+Neuritis+in+C57BL%2F6+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuropathol+Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">A Functional and Neuropathological Testing Paradigm Reveals New Disability-Based Parameters and Histological Features for P0180-199-Induced Experimental Autoimmune Neuritis in C57BL/6 Mice.</a> J Neuropathol Exp Neurol. 76 (2), 89-100 (2017).</li>
<li>Berg, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guillain-Barre+syndrome%3A+pathogenesis%2C+diagnosis%2C+treatment+and+prognosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Neurol%22%5BJournal%5D)">Guillain-Barre syndrome: pathogenesis, diagnosis, treatment and prognosis.</a> Nat Rev Neurol. 10 (8), 469-482 (2014).</li>
<li>Koller, H., Schroeter, M., Kieseier, B. C., Hartung, H. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+inflammatory+demyelinating+polyneuropathy--update+on+pathogenesis%2C+diagnostic+criteria+and+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Neurol%22%5BJournal%5D)">Chronic inflammatory demyelinating polyneuropathy--update on pathogenesis, diagnostic criteria and therapy.</a> Curr Opin Neurol. 18 (3), 273-278 (2005).</li>
<li>Griffin, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathology+of+the+motor-sensory+axonal+Guillain-Barre+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Neurol%22%5BJournal%5D)">Pathology of the motor-sensory axonal Guillain-Barre syndrome.</a> Ann Neurol. 39 (1), 17-28 (1996).</li>
<li>Taylor, W. A., Hughes, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+allergic+neuritis+induced+in+SJL+mice+by+bovine+P2%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuroimmunol%22%5BJournal%5D)">Experimental allergic neuritis induced in SJL mice by bovine P2.</a> J Neuroimmunol. 8 (2-3), 153-157 (1985).</li>
<li>Zou, L. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((P0+protein+peptide+180-199+together+with+pertussis+toxin+induces+experimental+autoimmune+neuritis+in+resistant+C57BL%2F6+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Res%22%5BJournal%5D)">P0 protein peptide 180-199 together with pertussis toxin induces experimental autoimmune neuritis in resistant C57BL/6 mice.</a> J Neurosci Res. 62 (5), 717-721 (2000).</li>
<li>Miletic, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((P0%28106-125%29+is+a+neuritogenic+epitope+of+the+peripheral+myelin+protein+P0+and+induces+autoimmune+neuritis+in+C57BL%2F6+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuropathol+Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">P0(106-125) is a neuritogenic epitope of the peripheral myelin protein P0 and induces autoimmune neuritis in C57BL/6 mice.</a> J Neuropathol Exp Neurol. 64 (1), 66-73 (2005).</li>
<li>Hafer-Macko, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+motor+axonal+neuropathy%3A+an+antibody-mediated+attack+on+axolemma%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Neurol%22%5BJournal%5D)">Acute motor axonal neuropathy: an antibody-mediated attack on axolemma.</a> Ann Neurol. 40 (4), 635-644 (1996).</li>
<li>Griffin, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+nodal+changes+in+the+acute+motor+axonal+neuropathy+pattern+of+the+Guillain-Barre+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurocytol%22%5BJournal%5D)">Early nodal changes in the acute motor axonal neuropathy pattern of the Guillain-Barre syndrome.</a> J Neurocytol. 25 (1), 33-51 (1996).</li>
</ol>

De auteurs hebben geen conflicten van belang met betrekking tot dit werk.

Dit verslag schetst een eenvoudige methode om te induceren EAN met behulp van de P0180-199 peptide in C57BL/6 muizen, waardoor de kwantificering van belangrijke neuropathologische en functionele tekorten in muizen geïnduceerde met EAN. Verschillende bij het protocol van de EAN-inductie hier beschreven is het gebruik van verdoving tijdens het uitvoeren van de immunisatie injecties. Het gebruik van Isofluraan verdoving verbetert sterk de mogelijkheid om ervoor te zorgen dat het totale volume van entmateriaal sub...

Melding gemaakt van perifere neuropathieën kunnen genetische oorsprong of verworven, met de verworven neuropathieën hebben beide metabole, ischemische, inflammatoire of giftige neerslagmiddelen. Deze ziekten zijn ook nuttig ingedeeld als axonale of demyelinative oorsprong. De meest voorkomende verworven demyeliniserende melding gemaakt van perifere neuropathieën Acute inflammatoire demyeliniserende polyneuropathie (AIDP zijn, ook bekend als het syndroom van Guillain-Barré, GBS) en chronische inflammatoire demyeliniserende polyneuropathie (CIDP)1, 2 , 3 , 4; beide zijn pathogenetically gekenmerkt door een auto-immune reactie gericht tegen de myelineschede, waardoor demyelinisatie van de perifere zenuwen. In deze ziekten, geactiveerde T-cellen Kruis het bloed zenuw barrière en genereren een immune reactie binnen de PNS. Activering van macrofagen binnen de zenuw dan veroorzaakt demyelinisatie via fagocytische aanval direct noch indirect via secreted inflammatoire mediatoren, resulterend in klinische handicaps zoals verlamming en sensorische dysfunctie5. Terwijl demyelinated axonen de mogelijkheid om te worden remyelinated na demyelinisatie behouden, remyelination wordt vaak vertraagd of onvolledig, resulterend in de gevoeligheid van de naakte axonen tot onherstelbare schade, welke is de belangrijkste oorzaak van permanente klinische handicap. Op dit moment de meest effectieve behandelingen zijn immunomodulerende, maar ondanks hun werkzaamheid, in veel gevallen het herstel is vaak traag en ~ 25% patiënten beleeft resterende functionele tekorten die aanzienlijk hun levenskwaliteit6verminderen, 7.
EAN is een veel gebruikte diermodel van demyeliniserende perifere neuropathie die waardevolle inzichten in de pathogenese en een middelen ter beoordeling van nieuwe therapeutische agenten4heeft. Dit model kan worden opgewekt in verschillende soorten zoals konijnen, ratten, muizen en cavia's, en wordt veroorzaakt door immunisatie met neurogene antigenen. Echter, uiteindelijk de succesvolle EAN-inductie hangt af van een passende immuunrespons voor ziekte optreden. Gezien de soorten (en intersite-species/stam) variaties in immune functie, hebben meerdere combinaties van antigenen en hulpstoffen ontwikkeld om met succes het induceren van EAN. In termen van lymfkliertest genetische hulpmiddelen is de C57BL/6 de meest gebruikte; de traditionele P2 eiwit peptide 57-81 (P257-81) waardoor de ziekte in de voor de ziekte vatbare SJL muis stam8 is echter niet in staat om illegale pathogenese leidt tot functionele tekorten in de stam van de C57BL/6. Gelukkig, overgevoeligheid paradigma's met behulp van de P0106-125 of P0180-199 peptides, geleverd in adjuvans gecombineerd met de injectie van pertussis toxine kunt overwinnen deze barrière, waardoor geavanceerde genetische hulpmiddelen om te worden gebruikt in de lymfkliertest EAN model.
Hier wordt een eenvoudige methode voor de inductie van EAN in de C57BL/6 muizen gepresenteerd. Daarnaast vindt u een gedetailleerde aanpak om te evalueren van de functionele en neuropathologische tekorten die is gekoppeld aan de ziekte. De P0180-199 peptide9 werd gekozen boven de P057-81 alternatieve10. Het P0180-199 model is beschreven voor de productie van minder ernstige klinische symptomen in vergelijking met de alternatieve P057-81 10, en daarom kunnen weerstaan van de invoering van potentieel schadelijke genetische verstoringen, herstellen van chirurgische procedures (zoals osmotische pomp implantatie), en is vatbaar voor loopband gait functie4testen. Echter kunnen de loopband gait functie tests en histologische protocollen beschreven hier gemakkelijk worden toegepast bij de studie van de ziekte in een P057-81 geïnduceerde variant.

<table><tbody><tr><td>C57BL/6, male, 6-8 weken oud</td><td>Australian Bioresources Cenre, WA, Australië</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pertussis toxin</td><td>List Biological Laboratories, Inc., CA, VS</td><td>#181</td><td></td></tr><tr><td>0.1 M muis-isotone fosfaat gebufferde zoutoplossing (MT-PBS)</td><td></td><td></td><td>Laboratoria hebben hun eigen protocol.</td></tr><tr><td>Isofluraan</td><td>Pharmachem, QLD, Australië</td><td></td><td>Laboratoria hebben hun eigen protocol voor toediening.</td></tr><tr><td>P0180&ndash;199 peptide</td><td>Wuxi Nordisk Biotech Co. Lt. SHG, CHN</td><td></td><td>P0180&ndash;199, sequentie S&ndash;S&ndash;K&ndash;R&ndash;G&ndash;R&ndash; Q&ndash;T&ndash;P&ndash;V&ndash;L&ndash;Y&ndash;A&ndash;M&ndash;L&ndash;D&ndash;H&ndash;S&ndash;R</td></tr><tr><td>In warmte gedode Mycobacterium tuberculosis (stam H37RA)</td><td>Difco, MI, VS</td><td>#231141</td><td></td></tr><tr><td>Freund's compleet adjuvans (FCA)</td><td>Difco, MI, VS</td><td>#263910</td><td></td></tr><tr><td>16% Paraformaldehyde (PFA)</td><td>Electron Microscopy Services</td><td>#15710</td><td>Verdun tot 4% PFA op de dag van weefselverzameling.</td></tr><tr><td>25% glutaraldehyd</td><td>ProSciTech Pty Ltd, QLD, Australië</td><td>#11-30-8</td><td>Verdun tot 2,5% glutaraldehyde op de dag van fixatie.</td></tr><tr><td>Natriumazid</td><td>Chem-Supply Pty Ltd, SA, Australië</td><td>SL189</td><td>Maak 10% (w/v) stock in 0.1M MT-PBS. Gebruik op 0,03% (v/v).</td></tr><tr><td>Sucrose</td><td>Chem-Supply Pty Ltd, SA, Australië</td><td>SA030</td><td>Gebruik op 30% (w/v).</td></tr><tr><td>Optimum snijtemperatuur (OCT) medium</td><td>Sakura Finetek, CA, VS</td><td>#4583</td><td></td></tr><tr><td>Normaal ezelsserum</td><td>Merck Millipore, MA, VS</td><td>#S30-100</td><td>Gebruik als antilichaamverdunning op 10% (v/v) of een andere concentratie bepaald door het eigen laboratorium.</td></tr><tr><td>Triton-X 100</td><td>Sigma Aldrich, MI, VS</td><td>#90o2-31-1</td><td>Gebruik in antilichaamverdunning op 0,3% (v/v) of een andere concentratie bepaald door het eigen laboratorium.</td></tr><tr><td>konijn anti-amyloïde precursor eiwit (APP)</td><td>Invitrogen (Life Technologies), CA, VS</td><td>S12700</td><td>Gebruikt op 1:400 of titrateer in eigen lab.</td></tr><tr><td>konijn anti-contactin-geassocieerd eiwit-1 (Caspr)</td><td>Gift van Prof Elior Peles, Wiezmann Institute of Science, Israël</td><td></td><td>Gebruikt op 1:500 of titrateer in eigen lab.</td></tr><tr><td>Geschikte Alexa Fluor-geconjugeerde secundaire antilichamen</td><td>Molecular Probes (Life Technologies), OR, VS</td><td>Verschillende</td><td>Gebruik op 1:200 of titrateer in eigen lab. De keuze van de soort waarin het antilichaam is opgewekt en de gekozen Alexa Fluor ligt ter beslissing van elk laboratorium.</td></tr><tr><td>Waterige montageoplossing</td><td>Dako (Agilent), CA, VS</td><td>#S3023</td><td>Elk laboratorium heeft zijn eigen voorkeur.</td></tr><tr><td>Naam</td><td>Bedrijf</td><td>Catalogusnummer</td><td>Opmerkingen</td></tr><tr><td>Uitrusting</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>0,5 mL spuit met 301/2 g naalden</td><td>BD</td><td>#326105</td><td></td></tr><tr><td>23 g naalden</td><td>BD</td><td>#305143</td><td></td></tr><tr><td>Rode inktpatroon</td><td></td><td></td><td>Elke rode inktpatroon of rood voedselkleurstof kan worden gebruikt om de voeten van de dieren te markeren.</td></tr><tr><td>DigiGate-apparaat (inclusief loopband)</td><td>eMouse Specifics Inc. Framingham, MA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DigiGate Imaging System</td><td>eMouse Specifics Inc. Framingham, MA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Stopwatch</td><td></td><td></td><td>Elke timer mag worden gebruikt.</td></tr><tr><td>DigiGait 8 Software</td><td>eMouse Specifics Inc. Framingham, MA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dissectiemicroscoop</td><td>Zeiss</td><td></td><td>Elke geschikte dissectiemicroscoop mag worden gebruikt.</td></tr><tr><td>Gelaaide glazen</td><td>Superfrost Plus, Lomb Scientific Pty Ltd</td><td>SF41296SP</td><td></td></tr><tr><td>Cryostat</td><td>Leica</td><td></td><td>Elke geschikte cryostaat mag worden gebruikt.</td></tr><tr><td>Perfusieapparatuur en dissectie-instrumenten</td><td></td><td></td><td>Laboratoria hebben hun eigen perfusieprotocollen.</td></tr><tr><td>Ondoorzichtige bevochtigde kamer</td><td></td><td></td><td>Laboratoria kunnen hun eigen produceren met een ondoorzichtige plastic container.</td></tr><tr><td>PAP-pen</td><td>GeneTex (VS)</td><td></td><td>Wax potlood of oppervlaktespanning kan ook worden gebruikt om een kuiltje rond het weefselsegment te maken.</td></tr><tr><td>Confocale microscoop</td><td>Zeis LSM780</td><td></td><td>Elke confocale microscoop met geschikte laserlijnen mag worden gebruikt.</td></tr><tr><td>FIJI/Image J</td><td>National Institutes of Health</td><td></td><td>Beschikbaar via www.fiji.sc</td></tr></tbody></table>

een eenvoudige benadering voor het opwekken van experimentele autoimmune neuritis in c57bl/6 muizen voor functionele en neuropathologische evaluaties

A Simple Approach to Induce Experimental Autoimmune Neuritis in C57BL/6 Mice for Functional and Neuropathological Assessments

Experimentele autoimmune neuritis (EAN) is een goed gewaardeerd experimentele model van perifere demyeliniserende auto-immuunziekten. EAN ziekte wordt veroorzaakt door het immuniseren van muizen met neurogene peptiden aan direct een inflammatoire aanval naar onderdelen van het perifere zenuwstelsel (PNS). Recente ontwikkelingen hebben de inductie van EAN in de relatief resistent C57BL/6 muis lijn met behulp van myeline eiwit nul (P0)106-125 of P0180-199 peptiden geleverd in adjuvans gecombineerd met de injectie van pertussis toxine ingeschakeld. De capaciteit voor het opwekken van EAN in de stam van de C57BL/6 kunt voor het gebruik van de vele genetische hulpmiddelen die bestaan op de achtergrond van deze muis en dus de geavanceerde studie van de pathogenese van de ziekte en de ondervraging van de mechanistische actie van roman therapeutics in combinatie met transgene benaderingen. In deze studie tonen we een eenvoudige benadering van EAN met behulp van de P0180-199 peptide in C57BL/6 muizen met succes te induceren. Ook schetsen wij een protocol voor de beoordeling van functionele tekorten die zich bij dit model wordt begeleid door een matrix van neuropathologische kenmerken voordoen. Dit model is dus een krachtig experimenteel model om te bestuderen van de pathogenese van menselijke perifere demyeliniserende neuropathieën en voor het bepalen van de werkzaamheid van potentiële therapieën die gericht zijn op bevordering van myeline reparatie en bescherming tegen schade aan de zenuwen in auto-immuunziekten neuritis.

P0180-199 peptide geïnduceerde EAN in C57BL/6 muizen leidt tot een monofasische ziekte met klinische score begin van 6 dagen post eerste immunisatie (dpi) en maximale score ernst is waargenomen vanaf 25 dpi gevolgd door sommige klinische score verbetering van 40 dpi duur (Figuur 1)4,9. In termen van gait functie, muizen begint te falen bij een eenvoudige lopende taak zo spoedig 6 dpi, en do...

Dit verslag schetst een eenvoudige benadering om succesvol experimentele autoimmune neuritis (EAN) met behulp van de myeline proteïne nul peptide180-199 (P0) in combinatie met de Freund compleet adjuvans en kinkhoest toxine. We presenteren een verfijnde paradigma staat nauwkeurig de beoordeling van de omvang van functionele tekorten en Neuropathologie die zich voordoen in deze EAN.

Een eenvoudige benadering voor het opwekken van experimentele Autoimmune Neuritis in C57BL/6 muizen voor functionele en neuropathologische evaluaties

Experimental autoimmune neuritis (EAN) is a well-appreciated experimental model of autoimmune peripheral demyelinating diseases. EAN disease is induced by ...

Het algemene doel van deze procedure is om succesvol Experimentele Auto-immuun Neuritis of EAN te induceren in een muismodel voor de functionele en pathologische analyse van het ziekteproces. Het EAN-model kan worden gebruikt om sleutelvragen met betrekking tot perifere neuropathie aan te pakken. Het is ook een prachtig model om mogelijk de werkzaamheid van nieuwe therapeutische middelen te onderzoeken.Het grote voordeel van deze aanpak is dat het een eenvoudig en objectief functioneel testparadijg biedt dat kan worden toegepast bij het gebruik van het EAN-model in de muis. De procedure wordt vandaag gedemonstreerd door Sang Won Yoo, die een bachelorstudent is in het neurotrofine en myelinebiologielab aan de Universiteit van Melbourne. Drie dagen voor de ziekte-inductie, zet het apparaat voor motorfunctiebeoordeling aan en schakel de lichtknop in.Pak de muis op en laat hem op een bak met rood voedselkleurstof zakken. Plaats de muis in het loopgedeelte en stel de snelheid van de loopband in op 15 centimeter per seconde. Zet de loopband aan en klik op opnemen om het gangfunctiebeeldsysteem te gebruiken om de loopbeweging van de muis gedurende 36 seconden vast te leggen.Na 36 seconden

a-simple-approach-to-induce-experimental-autoimmune-neuritis-c57bl6

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowetenschap

The video demonstrates the induction of experimental autoimmune encephalomyelitis in a mouse model by injecting a combination of myelin oligodendrocyte glycoproteins and inactivated Mycobacterium tuberculosis. The model enables researchers to study disease mechanisms and test therapeutic interventions.

Induction of Experimental Autoimmune Encephalomyelitis in a Mouse Model

This video demonstrates the method of inducing experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) by injecting myelin-derived peptides with an adjuvant to activate autoreactive T cells, which migrate to the brain. Pertussis toxin is administered to increase blood-brain barrier permeability, allowing these T cells and other immune cells to enter the brain. These immune cells cause demyelination, leading to impaired nerve transmission and development of EAE.

Generation of Experimental Autoimmune Encephalomyelitis in a Mouse Model

In this video, a mouse model of multiple sclerosis is established using experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE). The mouse is injected with an emulsion containing a neuronal peptide and an adjuvant, triggering an immune response that activates autoreactive T cells. This is followed by an injection of pertussis toxin (PTX) to increase blood-brain barrier permeability, allowing the autoreactive T-cells to infiltrate the brain. This infiltration initiates a signaling cascade that...

This video demonstrates the process of assessing motor dysfunction in a mouse model through the administration of Pertussis toxin and an inoculum containing myelin-mimicking peptides and adjuvants, followed by treadmill tests to assess motor function and evaluate the resulting nerve damage due to immune activation and demyelination.

Assessing Motor Function in an Experimental Autoimmune Neuritis Mouse Model

De transplantatie van neurale stamcellen / progenitorcellen (NPC) houdt grote beloften in de regeneratieve neurologie. De systemische toediening van NPCs is in efficiënte, lage invasief en therapeutisch zeer effectief protocol om stamcellen te leveren in de hersenen en ruggenmerg van knaagdieren en niet-menselijke primaten die door experimentele chronische inflammatoire schade aan het centrale zenuwstelsel.

Systemische Injectie van neurale stamcellen / progenitorcellen in Muizen met chronische EAE

Dit manuscript beschrijft de methoden voor inductie en scoren van het experimentele auto-immuunencefalomyelitis (EAE) model, samen met de beoordeling van immuunceldistributie en mRNA-cytokineniveaus in lymfeklieren, milt, bloed en ruggenmerg met behulp van flowcytometrie en kwantitatieve PCR, respectievelijk, in verschillende fasen van de ziekte.

Inductie van experimentele auto-immune Encefalomyelitis in Muizen en evaluatie van de ziekte-afhankelijke Verdeling van immuuncellen in verschillende weefsels

Dit protocol beschrijft hoe te bepalen of farmacologische behandelingen voor experimentele auto-immuun encefalomyelitis CNS-bescherming vertonen als gevolg van het onderdrukken van immuuncel-infiltratie of neuroprotectief zijn tijdens de aanval van immuuncel-infiltratie.

Het bepalen van onderdrukking van het immuunsysteem versus CNS Bescherming voor farmacologische interventies bij auto-Demyelinisatie

De getoonde techniek voor in vivo bioluminescentie levende en nabije infrarood beeldvorming van optische neuritis en encefalitis bij de experimentele autoimmune encefalomyelitis (EAE) model voor multiple sclerose in SJL / J muizen.

Bioluminescentie en nabij-infrarood beeldvorming van oogzenuwontsteking en hersenontsteking in de EAE Model van Multiple Sclerose in Muizen

Hier presenteren we protocollen om te onderzoeken op bijzondere waardeverminderingen van de neurovasculaire eenheid tijdens de experimentele autoimmune encefalomyelitis in vivo. Wij ingaan specifiek op het bepalen van de bloed - hersenbarrière permeabiliteit en gelatinase activiteit die betrokken zijn bij migratie van leukocyten in de glia-limitans.

Visualiseren van de waardevermindering van het endotheel en gliale belemmeringen van de neurovasculaire eenheid tijdens de experimentele Autoimmune encefalomyelitis In Vivo

Het huidige protocol beschrijft de inductie van experimentele auto-immune encefalomyelitis in een muismodel met behulp van myeline oligodendrocytenglycoproteïne en het monitoren van het ziekteproces met behulp van een klinisch scoresysteem. Experimentele auto-immuun encefalomyelitis-gerelateerde symptomen worden geanalyseerd met behulp van muis femur micro-computertomografie analyse en open veld test om het ziekteproces uitgebreid te beoordelen.

Inductie- en diverse beoordelingsindicatoren van experimentele auto-immuun encefalomyelitis

Om experimentele auto-immune encefalomyelitis, een diermodel van multiple sclerose, te induceren, worden muizen geïmmuniseerd met een water-in-olie-emulsie die een autoantigeen bevat en het adjuvans van Freund compleet maakt. Hoewel er verschillende protocollen bestaan voor de bereiding van deze emulsies, wordt hier een snel, eenvoudig en gestandaardiseerd homogenisatieprotocol voor emulsievoorbereiding gepresenteerd.

Een snelle, eenvoudige en gestandaardiseerde homogenisatiemethode om antigeen / adjuvante emulsies voor te bereiden voor het induceren van experimentele auto-immune encefalomyelitis

Leer een eenvoudige methode om experimentele auto-immuun neuritis op te wekken bij C57BL/6 muizen voor functionele en neuropathologische evaluaties. Dit protocol ondersteunt onderzoek naar perifere neuropathie.

Een eenvoudige benadering voor het opwekken van experimentele Autoimmune Neuritis in C57BL/6 muizen voor functionele en neuropathologische evaluaties (Video) | JoVE Journal

Een eenvoudige benadering voor het opwekken van experimentele Autoimmune Neuritis in C57BL/6 muizen voor functionele en neuropathologische evaluaties

Meer video's verkennen