Name: Inductie en Micro-CT beeldvorming van cerebrale Cavernous misvormingen in Mouse Model (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-09-04T15:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 12 s
Description: Leer de inductie van cerebrale caverneuze malformaties bij neonatale muizen en het meten van de ziektelast met micro-CT. Deze methode biedt een nauwkeurige en efficiënte manier om cerebrovasculaire aandoeningen te bestuderen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De auteurs erkennen de faciliteiten en de wetenschappelijke en technische bijstand van de Sydney microscopie &amp; Microanalyse onderzoek faciliteit (AMMRF) en de Australische centrum voor microscopie &amp; Microanalyse (ACMM) aan de Universiteit van Sydney. Deze studies werden gesteund door de Australian National Health en medische onderzoek Raad (NHMRC) project verlenen 161558 en APP1124011 (XZ).

alle dierenethiek en protocollen werden goedgekeurd door het Sydney lokale gezondheid District Animal Welfare Comité en institutionele Animal Care en gebruik Comité (IACUC) van Tianjin Medizinische Universität. Alle experimenten werden uitgevoerd onder de richtlijnen/reglementen van eeuwfeest Instituut, Universiteit van Sydney en Tianjin Medizinische Universität 1. Inductie van cerebrale Cavernous misvormingen in muismodellen <ol><li>Kruis Cdh5-CreErt2; Ccm2 fl/fl muizen met Ccm2 fl/fl voor het genereren van de nesten met Cdh5-CreErt2; Ccm2 fl/fl (Ccm2 iECKO) pups en littermate besturingselementen (Ccm2 fl/fl). Cdh5-CreErt2 en Ccm2 fl/fl dieren geweest eerder beschreven 19.</li>
	<li>Los 4e in 100% ethanol en opslaan bij-80 ° C in porties van 30 µL (4e concentratie: 10 mg/mL). Op de dag van gebruik, Verdun aliquoted 4e in maïsolie (0,5 mg/mL).</li>
	<li>Intragastrically injecteren 50 µL van 4e (0,5 mg/mL) op neonatale pups bij P1 voor het opwekken van experimentele CCM laesies met een insuline-injectiespuit.</li>
</ol> 2. Proeven van de voorbereiding van Micro-CT Scans <ol><li>euthanaseren van neonatale pups op P8 via kooldioxide verstikking.</li>
	<li>Intra cardiale perfusie door het invoegen van een naald 29-gauge met 3 mL 2% paraformaldehyde in PBS in een 10 mL spuit in de ventrikel van het hart van de muis uitvoeren. 
	Let op: Paraformaldehyde is giftig; adequate bescherming dragen.</li>
	<li>Losmaken het hoofd van het lichaam met behulp van een schaar. Verwijder alle de huid uit het hoofd met behulp van een schaar en afschilferen van de schedel met behulp van de verlostang om te ontleden de hele hersenen.</li>
	<li>Het nemen van beelden van de hersenen met stereomicroscoop op 7.82 x vergroting, 1 x winst, 0.6 gamma en 20 ms belichtingstijd.</li>
	<li>Bevestigen de ontleed hersenen 's nachts met 4% paraformaldehyde in PBS oplossing. 
	Let op: Paraformaldehyde is giftig; adequate bescherming dragen.</li>
	<li>Op de volgende dag, hindbrains met behulp van een verlostang loskoppelen en wassen met PBS oplossing.</li>
	<li>De hindbrains in Lugol Incubeer &#39; s jodiumoplossing voor 48 h.</li>
	<li>Na de incubatie, kort lucht drogen de hindbrains te verwijderen van de overtollige Lugol &#39; s jodiumoplossing.</li>
	<li>Pack de Lugol &#39; s jodium gekleurd hindbrains in 0,65 mL microcentrifuge buizen en zegel compleet met kunststof paraffine film om te voorkomen dat weefsel krimp ( Figuur 2).</li>
	<li>Plaats van microcentrifuge buizen in 5 mL plastic buizen met sponzen te voorkomen dat ze bewegen tijdens scan ( Figuur 2 B).</li>
</ol> 3. Micro-CT Scan van CCM in de hersenen van de muis <ol><li>Verticaal monteren de hindbrain verpakt in een buis op een aluminium houder in het systeem van micro-CT.</li>
	<li>De scannen parameters ingesteld op 540 projecties en 2 s blootstellingstijd met bron voorwaarden van 50 kV en 10 W te verwerven de tomografische datasets (beeld resolutie 9.5 μm/pixel).</li>
	<li>Röntgenfoto's van de scan worden automatisch gereconstrueerd door hardware gebaseerde projectie wederopbouw software geleverd door het systeem van micro-CT, produceren een serie van de afbeelding van 16-bits axiale segmenten (&#34; TXM &#34; bestand).</li>
</ol> 4. Analyse van Micro-CT Datasets <ol><li>het gereconstrueerde beeldbestand openen (&#34; TXM &#34; bestand) in de 3D-analysesoftware en visualiseren van de hersenen met behulp van de &#34; volume rendering &#34; functie.</li>
	<li>Transformeren de hindbrain naar de gewenste oriëntatie, met behulp van de &#34; selectiekader &#34; en &#34; knipvlak &#34; functies.</li>
	<li>Resample het getransformeerde beeld in de uitgebreide modus en het behoud van de grootte van voxel.</li>
	<li>Maken &#34; bewerken nieuwe labelveld &#34; op de getransformeerde afbeelding (4.3) en alleen de hindbrain met behulp van greyscale intensiteit Markeer.</li>
	<li>Toevoegen van de gemarkeerde gebieden en uitvoeren &#34; label analyse &#34; verkrijgen van metingen van de hele hindbrain (d.w.z., totaal volume en gebied). Metingen in een Excel-bestand exporteren.</li>
	<li>Visualiseren met behulp van de hindbrain de &#34; isosurface rendering &#34; functie.</li>
	<li>Maken een andere &#34; bewerken nieuwe labelveld &#34; op de getransformeerde beeld en markeren gebieden met laesies met grijswaarden intensiteit.</li>
	<li>Toevoegen van de gemarkeerde gebieden en uitvoeren &#34; etiket &#34; analyse te verkrijgen van de metingen van de laesies in het hindbrain (dat wil zeggen, totaal volume en gebied). Metingen in een Excel-bestand exporteren.</li>
	<li>Visualiseren van de laesies met behulp van de &#34; genereren van oppervlakte &#34; en &#34; oppervlakte weergave &#34; functies.</li>
	<li>Momentopname van de beelden van de hindbrain op de gewenste oriëntaties of het genereren van een film voor 3D-visualisatie van de laesies.</li>
</ol>

<ol><li>Fischer, A., Zalvide, J., Faurobert, E., Albiges-Rizo, C., Tournier-Lasserve, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+cavernous+malformations%3A+from+CCM+genes+to+endothelial+cell+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Cerebral cavernous malformations: from CCM genes to endothelial cell homeostasis.</a> Trends Mol Med. 19 (5), 302-308 (2013).</li>
<li>Liquori, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mutations+in+a+gene+encoding+a+novel+protein+containing+a+phosphotyrosine-binding+domain+cause+type+2+cerebral+cavernous+malformations%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Hum+Genet%22%5BJournal%5D)">Mutations in a gene encoding a novel protein containing a phosphotyrosine-binding domain cause type 2 cerebral cavernous malformations.</a> Am J Hum Genet. 73 (6), 1459-1464 (2003).</li>
<li>Laberge-le Couteulx, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Truncating+mutations+in+CCM1%2C+encoding+KRIT1%2C+cause+hereditary+cavernous+angiomas%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Genet%22%5BJournal%5D)">Truncating mutations in CCM1, encoding KRIT1, cause hereditary cavernous angiomas.</a> Nat Genet. 23 (2), 189-193 (1999).</li>
<li>Sahoo, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mutations+in+the+gene+encoding+KRIT1%2C+a+Krev-1%2Frap1a+binding+protein%2C+cause+cerebral+cavernous+malformations+%28CCM1%29%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Mol+Genet%22%5BJournal%5D)">Mutations in the gene encoding KRIT1, a Krev-1/rap1a binding protein, cause cerebral cavernous malformations (CCM1).</a> Hum Mol Genet. 8 (12), 2325-2333 (1999).</li>
<li>Denier, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mutations+within+the+MGC4607+gene+cause+cerebral+cavernous+malformations%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Hum+Genet%22%5BJournal%5D)">Mutations within the MGC4607 gene cause cerebral cavernous malformations.</a> Am J Hum Genet. 74 (2), 326-337 (2004).</li>
<li>Bergametti, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mutations+within+the+programmed+cell+death+10+gene+cause+cerebral+cavernous+malformations%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Hum+Genet%22%5BJournal%5D)">Mutations within the programmed cell death 10 gene cause cerebral cavernous malformations.</a> Am J Hum Genet. 76 (1), 42-51 (2005).</li>
<li>McDonald, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+mouse+model+of+cerebral+cavernous+malformations+based+on+the+two-hit+mutation+hypothesis+recapitulates+the+human+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Mol+Genet%22%5BJournal%5D)">A novel mouse model of cerebral cavernous malformations based on the two-hit mutation hypothesis recapitulates the human disease.</a> Hum Mol Genet. 20 (2), 211-222 (2011).</li>
<li>Boulday, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+timing+of+CCM2+loss+influences+cerebral+cavernous+malformations+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Developmental timing of CCM2 loss influences cerebral cavernous malformations in mice.</a> J Exp Med. 208 (9), 1835-1847 (2011).</li>
<li>Chan, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mutations+in+2+distinct+genetic+pathways+result+in+cerebral+cavernous+malformations+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Mutations in 2 distinct genetic pathways result in cerebral cavernous malformations in mice.</a> J Clin Invest. 121 (5), 1871-1881 (2011).</li>
<li>Zheng, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+cavernous+malformations+arise+independent+of+the+heart+of+glass+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Cerebral cavernous malformations arise independent of the heart of glass receptor.</a> Stroke. 45 (5), 1505-1509 (2014).</li>
<li>McDonald, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fasudil+decreases+lesion+burden+in+a+murine+model+of+cerebral+cavernous+malformation+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Fasudil decreases lesion burden in a murine model of cerebral cavernous malformation disease.</a> Stroke. 43 (2), 571-574 (2012).</li>
<li>Maddaluno, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((EndMT+contributes+to+the+onset+and+progression+of+cerebral+cavernous+malformations%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">EndMT contributes to the onset and progression of cerebral cavernous malformations.</a> Nature. 498 (7455), 492-496 (2013).</li>
<li>Gibson, C. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strategy+for+identifying+repurposed+drugs+for+the+treatment+of+cerebral+cavernous+malformation%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Strategy for identifying repurposed drugs for the treatment of cerebral cavernous malformation.</a> Circulation. 131 (3), 289-299 (2015).</li>
<li>Choi, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Micro-CT+Imaging+Reveals+Mekk3+Heterozygosity+Prevents+Cerebral+Cavernous+Malformations+in+Ccm2-Deficient+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Micro-CT Imaging Reveals Mekk3 Heterozygosity Prevents Cerebral Cavernous Malformations in Ccm2-Deficient Mice.</a> PLoS One. 11 (8), 0160833(2016).</li>
<li>Zhou, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+cavernous+malformations+arise+from+endothelial+gain+of+MEKK3-KLF2%2F4+signalling%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Cerebral cavernous malformations arise from endothelial gain of MEKK3-KLF2/4 signalling.</a> Nature. 532 (7597), 122-126 (2016).</li>
<li>Metscher, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MicroCT+for+comparative+morphology%3A+simple+staining+methods+allow+high-contrast+3D+imaging+of+diverse+non-mineralized+animal+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Physiol%22%5BJournal%5D)">MicroCT for comparative morphology: simple staining methods allow high-contrast 3D imaging of diverse non-mineralized animal tissues.</a> BMC Physiol. 9, 11(2009).</li>
<li>Johnson, J. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Virtual+histology+of+transgenic+mouse+embryos+for+high-throughput+phenotyping%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genet%22%5BJournal%5D)">Virtual histology of transgenic mouse embryos for high-throughput phenotyping.</a> PLoS Genet. 2 (4), 61(2006).</li>
<li>Anderson, R., Maga, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Novel+Procedure+for+Rapid+Imaging+of+Adult+Mouse+Brains+with+MicroCT+Using+Iodine-Based+Contrast%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">A Novel Procedure for Rapid Imaging of Adult Mouse Brains with MicroCT Using Iodine-Based Contrast.</a> PLoS One. 10 (11), 0142974(2015).</li>
<li>Zheng, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+regulation+of+the+cerebral+cavernous+malformation+pathway+controls+vascular+stability+and+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Cell%22%5BJournal%5D)">Dynamic regulation of the cerebral cavernous malformation pathway controls vascular stability and growth.</a> Dev Cell. 23 (2), 342-355 (2012).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

CCM is een gemeenschappelijke vasculaire misvormingen buikvliesontsteking tot 0,5% van de personen1. CCM kan optreden in de vorm van sporadische of familiale. Patiënt prognose is vaak onduidelijk als CCM laesies onverwacht scheuren kunnen om beroerte en andere neurologische gevolgen veroorzaken. Op dit moment is de enige behandelingsoptie operatief verwijderen letsels, die vergezeld gaan van een hoog risico.
Menselijke CCM voorwaarden hebben onlangs is gereproduceerd di...

CCM dun zijn ommuurde, vasculaire misvormingen in de hersenen met een prevalentie van maximaal 0,5% in de menselijke populatie1uitgezet. CCM kan worden overgenomen als een dominante stoornis als gevolg van verlies-van-functie mutaties in één van drie genen: CCM1 (aka Krit1), CCM2en CCM3 (ook wel PDCD10genoemd)2,3,4 ,5,6. Deze genen zijn aanwezig in een honkslag signalering complex.
Verschillende modellen ontwikkeld model ziekten bij de mens CCM en begrijpen van de stroomafwaartse trajecten van CCM genen die verantwoordelijk voor CCM7,,8,,9,10 zijn. De meest robuuste model is het voorwaardelijk verwijderen om het even wie van de genen van de Ccm met tamoxifen-afleidbare Cdh5-CreERT2 bij P1 in pasgeboren pups8,10. Deze pups CCM letsels in de hersenen van P6 verder ontwikkelen en een ideaal model voor pre-klinische studies in zoeken naar mechanismen en therapeutische agenten in het behandelen van CCM ziekten worden verwacht.
CCM laesie last in muis hersenen is gemeten voornamelijk door histologie gebaseerde methoden, een aanpak die is zeer tijdrovend en onder voorbehoud van de onderzoeker bias10,11,12. MRI gebaseerde methoden zijn gebruikt om te beoordelen van CCM laesie last in de volwassen muis model9,13. Een gespecialiseerde kleine dierlijke MRI instrument en lange scan-tijd van enkele uren naar girale is echter vereist om een bevredigende oplossing aan het identificeren van CCM laesies. Ook, of MRI kan worden gebruikt voor het detecteren van CCM laesies in neonatale muizen is niet gemeld en resolutie gevoeligheid kan beperken.
Onlangs hebben we een techniek van micro-CT beeld en analyseren van CCM laesie14,15. Dit hoge resolutie, tijd en kosteneffectieve methode drastisch vergroot de waarde van het model van de ziekte CCM in mechanistische en therapeutische studies. Contrast-verbetering, geheel mount kleuring methoden zijn gebruikt voor micro-CT beeldvorming van de zachte weefsels en16,17van de embryo's van de muis. Wij hebben vroeger een osmium gebaseerde kleuring contrast voor micro-CT beeldvorming van CCM letsels in de hersenen14verbeteren. In deze paper, gebruikten we een minder giftig, niet-destructieve, en kosten-efficiënte reagens, een jodium op basis van oplossing Lugoljodium, ter verbetering van contrast voor micro-CT beeldvorming. Jodium kan verspreiden in de hersenen en heeft een hoge affiniteit voor bloed18.
Het gedetailleerd protocol wordt hier gepresenteerd voor de inductie van CCM letsels in een neonatale muismodel samen met de beeldvorming en analyse van CCM laesies met een contrast gebaseerde micro-CT. Deze micro-CT gebaseerde methode biedt kwantitatieve global volumemeting CCM laesie, nauwkeurig identificeert het aantal en de 3D-locatie van CCM letsels in de hersenen van de muis, en sterk vermindert de kosten en tijd verplicht tot fenotype deze dieren.

<table><tbody><tr><td>4-hydroxy tamoxifen</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H6278</td><td>Om Cdh5-CreErt2 te activeren</td></tr><tr><td>Corn oil</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C8267-500ML</td><td>Om 4-hydroxy tamoxifen te verdunnen</td></tr><tr><td>Stereomicroscoop</td><td>Leica</td><td>M205FA</td><td>Om macroscopische beelden te maken</td></tr><tr><td>Lugol's jodiumoplossing</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L6146</td><td>Om monsters te kleuren voor contrast micro-CT</td></tr><tr><td>Kunststof paraffinefolie</td><td>Parafilm</td><td>PM992</td><td>Om monsters te verpakken</td></tr><tr><td>Micro-CT</td><td>Xradia</td><td>MicroXCT-400</td><td>Micro-CT</td></tr><tr><td>3D-rendersoftware</td><td>FEI Visualisatie Wetenschappelijke Groep</td><td>Avizo 3D beeldverwerkingssoftware</td><td>Om micro-CT-scans te analyseren</td></tr></tbody></table>

inductie en micro-ct beeldvorming van cerebrale cavernous misvormingen in mouse model

Induction and Micro-CT Imaging of Cerebral Cavernous Malformations in Mouse Model

Mutaties in het CCM1 (aka KRIT1), CCM2, of CCM3 (aka PDCD10) gene cerebrale cavernous malformatie (CCM) bij de mens veroorzaken. Muismodellen voor CCM ziekte hebben opgericht door tamoxifen geïnduceerde schrapping van Ccm genen in postnatale dieren. Deze Muismodellen bieden waardevolle hulpmiddelen voor het onderzoek naar moleculaire mechanisme en therapeutische benaderingen voor CCM ziekte. Een nauwkeurige en kwantitatieve methode te beoordelen van de laesie lasten en progressie is essentieel voor het benutten van de volledige waarde van deze dierlijke modellen. Hier tonen we de inductie van CCM ziekte in een muismodel en het gebruik van het contrast enhanced X-ray micro computertomografie (micro-CT) methode aan maatregel CCM laesie last in muis hersenen. Op postnatale dag 1 (P1), we gewend 4-hydroxytamoxifen (4e) activeren van Cre recombinase activiteit van de Cdh5-CreErt2-transgenic te klieven van het floxed-allel voor Ccm2. CCM laesies in muis hersenen werden geanalyseerd op P8. Voor micro-CT, werd jodium gebaseerd Lugoljodium oplossing gebruikt om het contrast in hersenweefsel verbeteren. Wij hebben de parameters van de scan geoptimaliseerd en gebruikt een voxel dimensie van 9,5 µm, die leiden tot een minimale grootte van ongeveer 25 µm. Deze resolutie is voldoende voor het meten van CCM laesie volume en aantal wereldwijd en accuraat, en bieden hoge kwaliteit 3D-toewijzing van CCM letsels in de hersenen van de muis. Deze methode verbetert de waarde van de gevestigde Muismodellen te bestuderen van de moleculaire basis en mogelijke therapieën voor CCM en andere cerebrovasculaire ziekten.

Een enkele injectie van 4e bij P1 was voldoende voor het opwekken van CCM laesies in het cerebellum. Lugoljodium jodium contrasteerde micro-CT voldoende gedetecteerd CCM laesies en kan kwantificeren zijn volume en aantal. Gebruik makend van de geoptimaliseerde micro-CT, beeld we CCM laesies in het hindbrains van Ccm2iECKO muizen. Gescande X-ray beelden werden gereconstrueerd voor de productie van de 3D-beelden van de hersenen van de muis, waardoor de visualisatie van ...

Dit protocol toont de inductie van cerebrale cavernous malformatie ziekte in een muismodel en gebruik contrast enhanced micro computertomografie voor het meten van de laesie Last. Deze methode verbetert de waarde van gevestigde Muismodellen te bestuderen van de moleculaire basis en mogelijke therapieën voor cerebrale cavernous misvorming en andere cerebrovasculaire ziekten.

Inductie en Micro-CT beeldvorming van cerebrale Cavernous misvormingen in Mouse Model

Mutations in the CCM1 (aka KRIT1), CCM2, or CCM3 (aka PDCD10) gene cause cerebral cavernous malformation (CCM) in humans. Mouse models of CCM disease have ...

Het algemene doel van deze procedure is om cerebrale caverneuze malformaties bij neonatale muizen te induceren en de ziektelast te meten met behulp van micro-CT. Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van belangrijke vragen in het veld van cerebrale vaatziekten, zoals cerebrale caverneuze malformaties. Het grote voordeel van deze techniek is dat de ziektelast van cerebrale caverneuze malformaties bij neonatale muizenmodellen nauwkeuriger en efficiënter kan worden bepaald in vergelijking met bestaande methoden.Visuele demonstratie van deze methode is cruciaal, omdat het induceren van cerebrale caverneuze malformaties en de stappen voor micro-CT-analyse moeilijk te leren zijn, omdat het ervaring en het gebruik van geavanceerde software vereist. Begin met het oplossen van 4-HT in 100% ethanol tot een concentratie van 10 milligram per milliliter. Bereid 30 microliter alaquads voor en bewaar deze vervolgens bij minus 80 graden Celsius.Op de dag van gebruik, verdun de alaquads met 4-HT in koolzaadolie tot 0,5 milligram per milliliter. Gebruik vervolgens een insulinesyringe om 50 microliter 4-HT intragastrisch te injecteren in P1 neonatale pups om experimentele CCM-laesies te induce

induction-micro-ct-imaging-cerebral-cavernous-malformations-mouse

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Contrast verbeterde kleine dier schip beeldvorming door microCT is een snelle, rendabele en high-throughput techniek voor...

Contrast Enhanced Imaging Schip met behulp van microCT

In dit artikel presenteren we een eenvoudige, praktische techniek voor cerebrovasculaire gieten, dat is eenvoudig uit te voeren en kan worden gebruikt om het imago van de vasculaire boom van de volwassen hersenen van muizen.

Cerebrovasculaire Gieten van de volwassen muis voor 3D Imaging en morfologische analyse

Source: Xavier, A. L. R., et al. Cannula Implantation into the Cisterna Magna of Rodents. J. Vis. Exp. (2018)This video demonstrates the procedure for implanting a cannula into the cisterna magna of an anesthetized mouse. The technique involves guiding a needle-mounted cannula through the dura into the inverted triangular cisterna magna and securing it for targeted delivery into the cerebrospinal fluid.

Cannula Implantation into the Cisterna Magna in a Mouse Model

In this video, a genetically modified mouse pup carrying the Ccm2 gene flanked by loxP sites and Cre recombinase fused to an estrogen receptor is used to induce cerebral cavernous malformations (CCMs). The administration of 4-hydroxytamoxifen activates Cre in endothelial cells, leading to the deletion of Ccm2 and the formation of CCMs in the brain.

Cre-LoxP Mediated Induction of Cerebral Cavernous Malformations in a Mouse Model

Source: Choi, J. P. et al. Induction and Micro-CT Imaging of Cerebral Cavernous Malformations in Mouse Model. J. Vis. Exp. (2017)This video demonstrates the use of micro-CT imaging to visualize cerebral cavernous malformation (CCM) lesions in a mouse brain. It details the steps for sample preparation, imaging, and 3D image reconstruction to evaluate the density and location of CCM lesions in brain tissue.

Contrast-Enhanced Micro-CT Imaging of Cerebral Cavernous Malformation Lesions in a Mouse Brain

Source: Kim, D., et. al. Combined Near-infrared Fluorescent Imaging and Micro-computed Tomography for Directly Visualizing Cerebral Thromboemboli. J. Vis. Exp. (2016)This video demonstrates visualization of cerebral thrombus in mice using micro-computed tomography (micro-CT) imaging. A cerebral thrombus mouse model is injected with fibrin-targeted gold nanoparticles acting as a contrasting agent. The mouse is placed on the bed of a micro-CT machine, and images are acquired from multiple angles.

Visualization of a Cerebral Thrombus in a Mouse Using Micro-Computed Tomography Imaging

Dit protocol beschrijft de toepassing van gecombineerde nabij-infrarood fluorescerende (NIRF) beeldvorming en micro-computertomografie (microCT) voor het visualiseren van cerebrale thromboemboli. Deze techniek maakt de kwantificering van trombus last en evolutie. De NIRF beeldvormende techniek visualiseert fluorescent gelabelde trombus in weggesneden hersenen, terwijl de microCT techniek visualiseert trombus in levende dieren met behulp van goud-nanodeeltjes.

Gecombineerde nabij-infrarood Fluorescent Imaging en Micro-computertomografie voor het direct visualiseren Cerebral Thromboemboli

Het doel van dit artikel is het presenteren van een methode waarmee een 3-dimensionale reconstructie van de cerebrovasculaire boom in muizen nadat micro berekende tomografie en bepaling van de hoeveelheden van hele schip segmenten die kunnen worden gebruikt voor het kwantificeren van cerebrale vasospasm in lymfkliertest modellen van subarachnoïdale bloeding.

Een volumetrische methode voor de kwantificering van cerebrale Vasospasm in een lymfkliertest Model van subarachnoïdale bloeding

Dit artikel beschrijft een eenvoudige methode ter voorbereiding van kleine dierlijke hersenen van micro-CT beeldvorming, in welke letsels kunnen worden gekwantificeerd en elektroden gelegen met hoge precisie in de context van de hele hersenen.

Een Micro-CT-gebaseerde methode voor het karakteriseren van laesies en vinden van elektroden in kleine dierlijke hersenen

Hier presenteren we een protocol om een distaal occlusiemodel van de middelste hersenslagader (dMCAO) op te stellen door middel van transcraniële elektrocoagulatie bij C57BL/6J-muizen en evalueren we het daaropvolgende neurologische gedrag en histopathologische kenmerken.

Inductie van acute ischemische beroerte bij muizen met behulp van de distale occlusietechniek van de middelste slagader

Het protocol beschrijft een methode voor het injecteren van tumorcellen via de percutane punctieroute in cisterna magna die leptomeningeale metastase bij muizen robuust induceert, waardoor trauma en extracraniële tumorbelasting worden verminderd.

Minimaal invasief Cisterna Magna-injectiemodel voor onderzoek naar leptomeningeale metastase bij muizen

Leer de inductie van cerebrale caverneuze malformaties bij neonatale muizen en het meten van de ziektelast met micro-CT. Deze methode biedt een nauwkeurige en efficiënte manier om cerebrovasculaire aandoeningen te bestuderen.

Inductie en Micro-CT beeldvorming van cerebrale Cavernous misvormingen in Mouse Model

Meer video's verkennen