Name: Een geautomatiseerde snelle iteratieve negatieve Geotaxis Assay voor het analyseren van volwassen klimmen gedrag in een Drosophila Model van neurodegeneratie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-09-12T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 52 s
Description: Leer een geautomatiseerde negatieve geotaxis-assay om klimgedrag te analyseren bij volwassen Drosophila met neurodegeneratie. Deze methode biedt inzicht in bewegingsstoornissen en ondersteunt onderzoek naar mogelijke therapieën.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Wij danken de Bloomington voorraad Center en de Vienna Drosophila RNAi Center voor vliegen voorraden. Het octrooi voor het RING-apparaat behoort tot Shanghai Advanced Research institute, Chinese Academie van Wetenschappen. Aanvragen voor de RflyDetection-software moet worden gedaan om Fu-de Huang (Zie Auteur lijst). Dit werk werd gesteund door subsidies van nationale Basic Research programma van China (973 programma 2013CB945602) en nationale Natural Science Foundation van China (31270825 en 31171043). Wij danken Ho lab leden voor discussie en commentaar.

1. vliegen collectie <ol><li>handhaven de vliegen op standaard vliegen voedsel bij 25 ° C, luchtvochtigheid van 70%, en een 12/12 uur licht/donker cyclus.</li>
	<li>Verzamelen UAS-Dicer2; DDC-GAL4 vliegen virginsunder kooldioxide (CO 2) verdoving.</li>
	<li>Steken deze maagden naar 2 dag oud volwassen mannelijke vliegen de volgende genotypen uitvoering: UAS-mCD8GFP (control), auxR 16182 (aux RNAi) auxGFP (aux overexpressie), en auxR 16182; auxGFP (redden), met een man: vrouw verhouding van 1:2.</li>
	<li>Apart verzamelen nieuw eclosed mannetjes en vrouwtjes in 3 flesjes voor elke groep per experiment, 10 vliegen te plaatsen in elke regelmatig vliegen flesje met standaard voedsel op 25 ° C.</li>
	<li>Afhankelijk van het experiment, houd de verzamelde vliegt tot 35 dagen en ze gebruiken voor automatische analyse van de RING op dag 5, 15, 25 en 35.</li>
</ol> 2. Geautomatiseerde RING Assay <ol><li>Transfer 10 verzamelde vliegen (unisex) per genotype in elk ampul, dan beveiligen de flacon met een schroef. Analyseren van controle vliegen en vliegen uitvoering van verschillende genotypen samen voor elke set van experimenten (t/m 10 flesjes gelijktijdig, 10 vliegen in elk flesje).</li>
	<li>Zet de digitale camera voor het apparaat geplaatst en start de opname eenmaal vliegen zijn alle geladen en klaar.</li>
	<li>Na 1 min. voor vliegen te vestigen in flesjes, zet de stap controller waarmee de bestuurder stap; dit schijven de kleine elektrische motor waarmee de hendel gekoppeld, zodat het opeenvolgend stijgt en het apparaat 4 keer in 2 kranen s. Zie Figuur 1.
	<ol><li>Na te tikken, er rekening mee dat de vliegen beginnen te stijgen van de muur. Zorgen dat opname blijft.</li>
	</ol></li> <li>De synchronisatie zoals beschreven in stap 2.3 in 60-s interval voor opeenvolgende trials van 3 tot en met 5 herhalen.</li>
	<li>Herhaal het experiment voor 5, 15, 25 en 35 dagen oude vliegen. Uitvoering van ten minste 3 onafhankelijke experimenten voor elke groep, elk experiment met ten minste 30 verzamelde vliegt (3 flesjes).</li>
</ol> 3. Data-analyse <ol><li>de video-opnamen in de computer importeren.</li>
	<li>Een momentopname van de video op 6 s na te tikken, voor elk afzonderlijk experiment.</li>
	<li>De momentopname afbeelding importeren in de software van RflyDetection (Zie Figuur 2), met behulp van de &#39; bestand &#39; menu.</li>
	<li>De bovenste en onderste basislijnen van de flacon juist met behulp van de basislijn-pictogram op de werkbalk en vervolgens de cursor ter gelegenheid van de basislijnen van het bovenste en onderste op de afbeelding instellen.</li>
	<li>Het aantal vliegen per flacon (bijv, 10 hier) ingevoerd de &#39; Flys in rect &#39; veld en flacon lengte (b.v. 14 cm hier) in de &#39; buis hoogte &#39; veld aan de balie van de instellingen.
	<ol><li>Opmerking dat de individuele fly posities ontdekt en gelabeld met puntjes op het scherm voor elke flacon. 
		Opmerking: Figuur 2 geeft de standpunten van alle menu knop klikken.</li>
	</ol></li> <li>Nota van dat de software automatisch de klimmen afstand voor elke fly bepaalt en de gemiddelde waarden van 10 vliegen in elk flesje in een tabel aan de rechterzijde geeft. (Zie Figuur 2)</li>
	<li>Het klimmen nummer met statistische software (b.v., Prism) voor verdere statistische analyse verwerken.</li>
	<li>Dit moment de gegevens als ± SEM. betekenen</li>
	<li>Berekenen van de p-waarden van belang (aangegeven met sterretjes, * p &#60; 0,05, ** p &#60; 0,01, *** p &#60; 0.001) met one-way ANOVA met Bonferroni meerdere vergelijking test</li>
</ol>

<ol><li>Ali, Y. O., Escala, W., Ruan, K., Zhai, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assaying+locomotor%2C+learning%2C+and+memory+deficits+in+Drosophila+models+of+neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Assaying locomotor, learning, and memory deficits in Drosophila models of neurodegeneration.</a> J Vis Exp. (49), (2011).</li>
<li>Nichols, C. D., Becnel, J., Pandey, U. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+to+assay+Drosophila+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Methods to assay Drosophila behavior.</a> J Vis Exp. (61), (2012).</li>
<li>Madabattula, S. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+Analysis+of+Climbing+Defects+in+a+Drosophila+Model+of+Neurodegenerative+Disorders%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Quantitative Analysis of Climbing Defects in a Drosophila Model of Neurodegenerative Disorders.</a> J Vis Exp. (100), e52741(2015).</li>
<li>Podratz, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+automated+climbing+apparatus+to+measure+chemotherapy-induced+neurotoxicity+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Fly+%28Austin%29%22%5BJournal%5D)">An automated climbing apparatus to measure chemotherapy-induced neurotoxicity in Drosophila melanogaster.</a> Fly (Austin). 7 (3), 187-192 (2013).</li>
<li>Gargano, J. W., Martin, I., Bhandari, P., Grotewiel, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+iterative+negative+geotaxis+%28RING%29%3A+a+new+method+for+assessing+age-related+locomotor+decline+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Gerontol%22%5BJournal%5D)">Rapid iterative negative geotaxis (RING): a new method for assessing age-related locomotor decline in Drosophila.</a> Exp Gerontol. 40 (5), 386-395 (2005).</li>
<li>Liu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+rapid+iterative+negative+geotaxis+assay+and+its+use+in+a+genetic+screen+for+modifiers+of+Abeta%2842%29-induced+locomotor+decline+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci+Bull%22%5BJournal%5D)">Automated rapid iterative negative geotaxis assay and its use in a genetic screen for modifiers of Abeta(42)-induced locomotor decline in Drosophila.</a> Neurosci Bull. 31 (5), 541-549 (2015).</li>
<li>Shen, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SH2B1+is+Involved+in+the+Accumulation+of+Amyloid-beta42+in+Alzheimer%27s+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Alzheimers+Dis%22%5BJournal%5D)">SH2B1 is Involved in the Accumulation of Amyloid-beta42 in Alzheimer's Disease.</a> J Alzheimers Dis. 55 (2), 835-847 (2017).</li>
<li>Song, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auxilin+Underlies+Progressive+Locomotor+Deficits+and+Dopaminergic+Neuron+Loss+in+a+Drosophila+Model+of+Parkinson%27s+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Auxilin Underlies Progressive Locomotor Deficits and Dopaminergic Neuron Loss in a Drosophila Model of Parkinson's Disease.</a> Cell Rep. 18 (5), 1132-1143 (2017).</li>
<li>Zhang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Downregulation+of+RBO-PI4KIII%CE%B1+Facilitates+A%CE%B242+Secretion+and+Ameliorates+Neural+Deficits+in+A%CE%B242-Expressing+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Downregulation of RBO-PI4KIIIα Facilitates Aβ42 Secretion and Ameliorates Neural Deficits in Aβ42-Expressing Drosophila.</a> J Neurosci. 37 (19), 4928-4941 (2017).</li>
<li>Riemensperger, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+single+dopamine+pathway+underlies+progressive+locomotor+deficits+in+a+Drosophila+model+of+Parkinson+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">A single dopamine pathway underlies progressive locomotor deficits in a Drosophila model of Parkinson disease.</a> Cell Rep. 5 (4), 952-960 (2013).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

De geautomatiseerde RING test hier beschreven maakt een analyse van de high-throughput van vliegen negatieve geotaxis gedrag voor honderden vliegen gelijktijdig. Eerder bestaande strategieën voor het analyseren van volwassen klimmen opmerkingen van een enkele vliegen in een individuele flesje betrekken en vliegen positie handmatig wordt gedetecteerd met het blote oog. Deze nogal vervelend proces kan soms verkeerd lezen of verkeerde interpretatie van gegevens, alsook arbeidsintensief werk. Onze geautomatiseerde RING test ...

Een scala aan protocollen en methoden zijn ontwikkeld voor het analyseren van Drosophila volwassen klimmen gedrag. Nogal moeizaam, de traditionele analyse meestal gaat brengen van een interne vlieg in een individuele flesje en maakt gebruik van een handmatige kracht te vliegen naar beneden boren voor synchronisatie1,2,3,4. Het is vervelend en tijdrovend, ongeschikt voor grote high-throughput studies, en mogelijke variaties van de handmatige kracht gebruikt om de kraan naar beneden de vliegen evenals andere beperkingen heeft. Ter verbetering van de bepaling, werd een snelle iteratieve negatieve Geotaxis (RING) test ontwikkeld waardoor high-throughput analyse over talrijke vliegen op de dezelfde tijd5. De bepaling vereist echter nog steeds een handmatig om kracht te synchroniseren vliegen actie. Onze versie van de RING assay, herzien op de vorige assay, bevat een metalen base hosting meerdere vliegen-bevattende flesjes automatisch gecontroleerd door een elektromotor om te vliegen synchronisatie6rijden. Bij opname, de vlieg klimmen onmiddellijk na de synchronisatie is geregistreerd dan geanalyseerd met behulp van een zelf ontworpen software. Onze geautomatiseerde RING assay heeft geëlimineerd de vervelende en arbeidsintensieve proces in het verzamelen van gegevens uit een enkele fly, een tegelijk, en de data-acquisitie proces efficiënter ingeschakeld. Daarnaast is de geautomatiseerde RING assay werkzaam zijn in een aantal studies het ophelderen van het mechanisme onderliggende ziekte van Alzheimer en de ziekte van Parkinson's, het valideren van de aanpak met hoog rendement7,8,9 .
In dit artikel tonen we de geautomatiseerde RING bepaling met behulp van de DDC-Gal4 gedreven RNAi vliegen. DDC-Gal4 is een Gal4 lijn speciaal uiten in Dopaminerge (DA) en serotonerge neuronen, aldus vertegenwoordigt een geweldig hulpmiddel voor het analyseren van de doel-gen effecten geassocieerd met motorische tekorten begeleidende neurodegeneratie10. Daarnaast nemen we UAS-Dicer2, een vlieg lijn die RNAi efficiëntie verbetert, voor het genereren van de UAS-Dicer2; DDC-Gal4 gereedschap lijn. Het RNAi vliegen we kiezen om te gebruiken is de auxilin (aux) RNAi v16182 (auxR16182), een gen die wij hebben eerder aangeduid als u wilt vertonen een effect op motorische activiteit8vliegen. auxGFP vliegen zijn ook bereid voor het analyseren van de gevolgen voor de aux overexpressie. We zullen laten zien hoe met de automatische bepaling van de RING te meten vliegen negatieve geotaxis, de resultaten presenteren en bespreken eventuele consequenties van de resultaten verkregen.

<table><tbody><tr><td>Forma Environmental Chamber</td><td>Thermo</td><td>3949</td><td></td></tr><tr><td>Carbon dioxide cylinders</td><td>FuLian GAS Technology</td><td>GB/T6052</td><td></td></tr><tr><td>HDR-Camcorder</td><td>SONY</td><td>HDR-CX220E</td><td></td></tr><tr><td>Binocular stereomicroscope</td><td>Xin Zhen</td><td>SMZ-168BL</td><td></td></tr><tr><td>Electronic scales</td><td>MinQiao</td><td>SL1002N</td><td></td></tr><tr><td>Refrigerator</td><td>Haier</td><td>SC-350</td><td></td></tr><tr><td>Agar-agar powder</td><td>Sinopharm</td><td>10000561</td><td></td></tr><tr><td>Glucose</td><td>Sinopharm</td><td>10010518</td><td></td></tr><tr><td>Corn meal</td><td>Sinopharm</td><td>5464654</td><td></td></tr><tr><td>Brown sugar</td><td>LiuCaiYuan</td><td>45467936</td><td></td></tr><tr><td>Instant dry yeast</td><td>AB MAURI</td><td>20886</td><td></td></tr><tr><td>AuxR16182</td><td>VDRC</td><td>7187</td><td></td></tr><tr><td>UAS-Dicer2</td><td>Bloomington</td><td>24650</td><td></td></tr><tr><td>UAS-mCD8GFP</td><td>Bloomington</td><td>32185</td><td></td></tr><tr><td>DDC-Gal4</td><td></td><td></td><td>Een geschenk van Fude Huang</td></tr><tr><td>AuxGFP</td><td></td><td></td><td>Een geschenk van Henry Chang</td></tr></tbody></table>

een geautomatiseerde snelle iteratieve negatieve geotaxis assay voor het analyseren van volwassen klimmen gedrag in een drosophila model van neurodegeneratie

An Automated Rapid Iterative Negative Geotaxis Assay for Analyzing Adult Climbing Behavior in a Drosophila Model of Neurodegeneration

Neurodegeneratieve aandoeningen worden vaak geassocieerd met een progressief verlies van beweging vermogen, verminderde levensduur en leeftijd-afhankelijke neurodegeneratie. Om te begrijpen van het mechanisme van deze cellulaire gebeurtenissen en hun causale relaties met elkaar, Drosophila melanogaster, met zijn verfijnde genetische tools en diverse gedrags functies, worden gebruikt als ziekte modellen voor de beoordeling van neurodegeneratieve fenotypen. Hier beschrijven we een hoge gegevensdoorvoer methode voor het analyseren van Drosophila volwassen negatieve geotaxis gedrag, als indicatie voor de mogelijke motor gebreken neurodegeneratie is gekoppeld. Een geautomatiseerde machine is ontworpen en ontwikkeld tot vliegen synchronisatie station met behulp van een eerste elektrische impuls, waardoor later de opname van negatieve geotaxis gedrag in een loop van seconden tot minuten. Beelden van de video-digitaal opnamen worden vervolgens verwerkt met de zelf ontworpen RflyDetection software om statistische gegevens te manipuleren. Anders dan de bepaling van de handmatig gecontroleerde negatieve geotaxis op basis van één vliegen, dit nauwkeurige, snelle en hoge-doorvoer protocol staat data-acquisitie van meer dan honderden vliegen tegelijk, bieden een efficiënte aanpak om vooraf onze inzicht in het onderliggende mechanisme van motorische tekorten neurodegeneratie is gekoppeld.

Dit artikel demonstreert het gebruik van een automatische bepaling van de RING bij de beoordeling van vliegen negatieve geotaxis gedrag. In tegenstelling tot de vorige RING assay, onze assay bevat een geautomatiseerde apparaat dat voorziet in een elektrische kracht om te synchroniseren van vliegen actie en tot honderden vliegen analyseert gelijktijdig (Figuur 1). Analyse van Dicer2; DDC &#62; auxR16182 vliegen toonde een leeftijd-afhankel...

Dit stapsgewijze protocol analyseert Drosophila negatieve geotaxis gedrag met behulp van een geautomatiseerd systeem van meerdere cilinders die honderden vliegen en synchroniseert hun optreden door een elektromotor. Bij synchronisatie, is vliegen negatieve geotaxis gedrag vehiculumcontrolegroep, digitaal opgenomen en geanalyseerd met behulp van de zelf ontworpen RflyDetection software.

Een geautomatiseerde snelle iteratieve negatieve Geotaxis Assay voor het analyseren van volwassen klimmen gedrag in een Drosophila Model van neurodegeneratie

Neurodegenerative diseases are frequently associated with a progressive loss of movement ability, reduced life span, and age-dependent neurodegeneration. ...

Het algemene doel van deze geautomatiseerde snelle, iteratieve negatieve geotaxis-test is om de tekortkomingen in het klimmen van volwassen Drosophila die geassocieerd zijn met neurodegeneratie te analyseren. Deze methode kan helpen om belangrijke vragen in het neurologische veld te beantwoorden, zoals het mechanisme van locomotieve tekortkomingen die geassocieerd zijn met neurodegeneratie. Het grote voordeel van deze techniek is dat de klimactiviteit van vliegen op een geautomatiseerde en professionele manier kan worden geanalyseerd.De implicaties van deze techniek reiken tot de therapie en diagnose van neurodegeneratie, omdat neurodegeneratieve ziekten vaak geassocieerd zijn met een progressieve vermindering van de bewegingscapaciteit en een verkortte levensduur en ouderdomsgerelateerde neurodegeneratie. We hadden eerst het idee voor deze methode. We wilden de locomotieve activiteit van volwassen Drosophila nauwkeuriger meten.Om de vliegen te verzamelen, begint u door de vliegen op standaard vliegenvoer te houden bij 25 graden Celsius, 70% vochtigheid en een cyclus van 12 uur licht, 12 uur donker. Verzamel UAS-Dicer2 DDC-GAL4 vrouwelijke vliegen onder koolstofdioxide-anesthesie. Kruis de vrouwtjes met twee dagen oude volwassen mannelijke vliegen met de volgende genotypen, met een verhouding van mannetjes tot vrouwtjes van een-op-twee.Verzamel afzonderlijk nieuw uitgeslopen mannetjes en vrouwtjes in drie flesjes voor elke groep per experiment, met 10 vliegen in elk regulier vliegflesje met standaardvoedsel. Zet de flesjes vervolgens op 25 graden Celsius. Om de geautomatiseerde RING-test uit te voeren, zet u 10 verzamelde unisex vliegen per genotype in elk flesje.Bevestig vervolgens de fles met een schroef. Analyseer controlevliegen en vliegen met verschillende genotypen samen voor elke set experimenten. Zet de digitale camera aan die voor het apparaat staat en start de opname zodra de vliegen zijn geladen en klaar zijn.De camera moet horizontaal worden geplaatst en op een goede afstand van het RING-apparaat om de posities van alle vliegen op een relatief nauwkeurige locatie vast te leggen. Laat de vliegen een minuut de tijd om zich in de flesjes te nestelen, zet vervolgens de stapcontroller aan die de stapdriver bestuurt. Dit drijft de kleine elektromotor aan om de bevestigde hendel te besturen, zodat deze achtereenvolgens stijgt en het apparaat vier keer in twee seconden tikt.Na het tikken van het apparaat, merk op dat de vliegen beginnen de muur op te klimmen. Terwijl de opname nog loopt, herhaalt u de synchronisatie zoals net gedemonstreerd, in intervallen van 60 seconden voor drie tot vijf opeenvolgende proeven. Herhaal het experiment voor vijf, 15, 25 en 35 dagen oude vliegen.Voer minstens drie onafhankelijke experimenten uit voor elke groep voor elk experiment, met minimaal 30 verzamelde vliegen of drie flesjes. Om de gegevens te analyseren, importeer de opgenomen video in de computer. Voor elke proef, neem een momentopname van de video zes seconden na het tikken.Gebruik in de R-fly detectiesoftware het menubestand om de momentopname afbeelding te importeren. Gebruik vervolgens het basislijnpictogram op de werkbalk om de bovenste en onderste basislijnen van de fles precies in te stellen en gebruik vervolgens de cursor om de bovenste en onderste basislijnen op de afbeelding te markeren. Voer in het instellingenveld het aantal vliegen per fles in en voer in het veld Buishoogte de lengte van de fles in.Individuele vliegposities worden voor elke fles gedetecteerd en gelabeld met stipjes op het scherm. Merk op dat in een tabel op het rechterpaneel de software automatisch de klimafstand voor elke vlieg bepaalt en de gemiddelde waarden weergeeft van 10 vliegen in elke fles. Presenteer de gegevens als het gemiddelde plus of min SEM.Bereken de P-waarden van significantie met behulp van een eenrichtings ANOVA met een Bonferroni-test voor meerdere vergelijkingen. Analyse van Dicer2-vliegen met behulp van de geautomatiseerde RING-test gepresenteerd in deze video toonde een leeftijdsafhankelijke afname van de klimafstand in een tijdsbestek van zes seconden voor zowel mannelijke als vrouwelijke vliegen, wat suggereert dat aux-expressie in dopaminerge of DA-neuronen cruciaal is voor de locomotorische activiteit van vliegen. De klimcapaciteit lijkt niet te worden beïnvloed door auxGFP-overexpressie in DA-neuronen en co-expressie van auxR en auxGFP in DA-neuronen gered van het RNAi-fenotype.Eenmaal onder de knie, kan dit in twee tot drie uur worden gedaan als het goed wordt uitgevoerd. Dit ontwikkelen is nu een manier voor onderzoekers op het gebied van neurowetenschappen om neurodegeneratie in Drosophila melanogaster te onderzoeken. Vergeet niet dat het werken met elektrische RING-apparaten uiterst gevaarlijk kan zijn en dat elke bevestiging stevig moet worden vastgemaakt en zorgvuldig moet worden gecontroleerd voordat u deze procedure uitvoert.

an-automated-rapid-iterative-negative-geotaxis-assay-for-analyzing

Research

JoVE Journal

Behavior

Gedrag

Gedrag assays voor het meten van motorische functies, leren en geheugen capaciteiten...

Het testen van Beweegwijzer, leren en geheugen Tekortkomingen in Drosophila Modellen van Neurodegeneratie

Drosophila melanogaster is een genetisch en gedragsmatig soepel model systeem dat is gebruikt om de moleculaire en cellulaire basis van een groot aantal belangrijke biologische processen meer dan een eeuw een begrip. Drosophila goed is benut om inzicht te krijgen in de genetische basis van vlieg gedrag.

Methoden om Assay Drosophila Gedrag

Deze video beschrijft een eenvoudige methode om vliegbeweging te kwantificeren en toont de uitgevoerde klimtest.  De vliegklimtest is een algemene test van de motorische functie die afhankelijk is van een negatieve geotaxis-respons.

Fly Climbing Assay: een methode om algemene voortbeweging in Drosophila melanogaster te testen

Hier beschrijven we twee testen die zijn opgericht om leeftijdsafhankelijke neurodegeneratie van de dopaminerge (DA) neuronen studeren...

Het beoordelen Neurodegenerative Fenotypes in<em&gt; Drosophila</em&gt; Dopaminerge neuronen reduceert door Klimmen Testen en Whole Brain Immunokleuring

Drosophila melanogaster zijn nuttig bij het ​​bestuderen van genetische of ecologische manipulaties die gedrag zoals spontane motorische activiteit beïnvloeden. Hier beschrijven we een protocol dat monitoren met infrarood stralen en data analyse software om spontane bewegingsactiviteit kwantificeren gebruikt.

Bepaling van de Spontane bewegingsactiviteit in<em&gt; Drosophila melanogaster</em

We presenteren een geoptimaliseerde, goedkope en betrouwbare negatieve geotaxistest in Drosophila melanogaster als model voor neurodegeneratieve aandoeningen. Omdat deze test gevoeliger is voor lichte locomotieve defecten, zal deze helpen bij het screenen op mogelijke genetische interacties en doelwitten voor geneesmiddelen.

Kwantitatieve Analyse van Klimmen Defecten in een Drosophila model van neurodegeneratieve aandoeningen

De bepaling van het eiland is een relatief nieuwe, rendabele test die kan worden gebruikt voor het evalueren van de fundamentele motorische gedrag van Drosophila melanogaster. Dit manuscript wordt beschreven algoritmen voor automatische gegevensverwerking en objectieve kwantificering van eiland assay gegevens, waardoor dit een gevoelige en high-throughput uitlezing voor grote genetische of farmacologische schermen assay.

High-throughput analyse van Locomotor gedrag in de Drosophila eiland Assay

We presenteren een protocol met een voorwaartse genetische benadering van het scherm voor mutanten die neurodegeneratie in Drosophila melanogastertentoonstellen. Het bevat een klim test, histologie analyse, genmapping en DNA-sequencing om uiteindelijk nieuwe genen te identificeren die verband houden met het neuroprotectie proces.

In vivo genetisch scherm naar voren om nieuwe neuroprotectieve genen in Drosophila melanogaster te identificeren

Het huidige protocol beoordeelt de locomotorische activiteit van Drosophila door de beweging van vliegen in een handgemaakte arena te volgen en te analyseren met behulp van open-source software Fiji, compatibel met plug-ins om pixels van elk frame te segmenteren op basis van high-definition video-opname om parameters van snelheid, afstand, enz. Te berekenen.

Een eenvoudige techniek om locomotorische activiteit in Drosophila te testen

Het protocol presenteert een high-throughput, kosteneffectieve methode voor het beoordelen van neurotoxiciteit in de fruitvlieg door middel van de kwantificering van locomotorische disfunctie als alternatief voor traditionele zoogdiermodellen. Het heeft tot doel de neurotoxische effecten van farmaceutische verbindingen, milieuagentia of genetische modificaties te evalueren met behulp van een gevoelig, reproduceerbaar en ethisch gunstig model.

Gedragsanalyse van locomotorische disfunctie bij Drosophila melanogaster als uitlezing voor neurotoxiciteit

Leer een geautomatiseerde negatieve geotaxis-assay om klimgedrag te analyseren bij volwassen Drosophila met neurodegeneratie. Deze methode biedt inzicht in bewegingsstoornissen en ondersteunt onderzoek naar mogelijke therapieën.

Een geautomatiseerde snelle iteratieve negatieve Geotaxis Assay voor het analyseren van volwassen klimmen gedrag in een Drosophila Model van neurodegeneratie (Video) | JoVE Journal

Een geautomatiseerde snelle iteratieve negatieve Geotaxis Assay voor het analyseren van volwassen klimmen gedrag in een Drosophila Model van neurodegeneratie

Meer video's verkennen