Name: Verplaatsen naar boven: Een eenvoudig en flexibel In Vitro driedimensionale invasie Assay Protocol (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-03-12T13:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 14 s
Description: Leer een geïnverteerde verticale invasie-assay om migratie en invasie van zeldzame, gevoelige kankercellen in 3D te kwantificeren. Deze methode behoudt de celmicro-omgeving en ondersteunt screening van farmaca tegen metastase.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Dit werk werd gesteund door de National Institutes of Health (NIMHD-G12MD007581) door het RCMI-centrum voor milieu en gezondheid aan Jackson State University en het Amerikaanse ministerie van defensie, idee Award 11-1-0205.

Opmerking: Dit protocol wordt beschreven in McArdle et al. 11. een tijdlijn wordt gegeven in Figuur 1.
1. bereiding van de cultuur-plaat
<ol><li>De 35-mm cultuur schotel met een 10 mm glas-bodem goed met 1 mL 1 M zoutzuur (HCl) voor 15 min te verlagen van de hydrophobicity van de glas-bodem wassen.</li>
	<li>Wassen van de cultuur-plaat tweemaal met 1 mL fosfaat buffer zoutoplossing (PBS) om zich te ontdoen van alle de HCl.</li>
	<li>Wassen van de cultuur-plaat twee keer met 1 mL 70% ethanol.</li>
	<li>Spoel de cultuur plaat met 1 mL van de cel specifieke voedingsbodem (hier, gebruik α-MEM aangevuld met 10% warmte geïnactiveerd FBS en 1% niet-essentiële aminozuren). Opmerking: De plaat van de behandelde cultuur met het kweekmedium kan worden opgeslagen in de CO2 incubator met een luchtbevochtiger bij 37 ° C tot de volgende dag.</li>
	<li>De cellen (MSCs en MCF-7 samen cultuur) in de behandelde glazen-bodem goed van de 35-mm cultuur schotel aan 100% confluentie groeien. Samen cultuur 35.000 MSC cellen en 75.000 van MCF7 cellen gedurende 24 uur.</li>
</ol>2. voorbereiding van de collageen-gel
<ol><li>De tips van de micropipet gebruikt voor de collageen-gel in de vriezer pipetteren om te voorkomen dat de polymerisatie van het collageen bij contact opslaan. Opmerking: Dit is de meest kritische stap.</li>
	<li>Bepalen van een volume van rat staart collageen ik moet worden gebruikt op basis van de concentratie van de collageen-voorraad. 100 µL van collageen gel voorbereiden op deze bepaling. Opmerking: Hoge concentratie van rat staart collageen die ik voorraad werkt beter. Bepaal het volume van 10 x de Dulbecco bewerkt Eagle's Medium moet worden gebruikt voor het verdunnen van de collageen dienovereenkomstig.</li>
	<li>Combineren op ijs rat staart collageen I (3.8 µg/mL stockoplossing), 10 x Dulbecco bewerkt Eagle's Medium en 1 x cel kweekmedium aangevuld met 2% foetale runderserum en de juiste chemoattractant om een eindconcentratie van collageen van 2,4 mg/mL.</li>
	<li>Voeg toe aan het mengsel 4,5% natriumbicarbonaat oplossing voor het neutraliseren van de collageen-gel. Opmerking: Het volume van natriumbicarbonaat oplossing toegevoegd kan variëren afhankelijk van de exacte pH van de andere reagentia. Het is het beste om te testen het mengsel met pH strips zorgen voor neutraal oplossing, of gebruik maken van een pH-indicator in het kweekmedium.</li>
	<li>80 µL van het mengsel van collageen lag over de cellen binnen de glazen-bodem goed van de cultuur-schotel.</li>
	<li>Laat de gel collageen te polymeriseren gedurende 30 min. in een incubator CO2 met een luchtbevochtiger bij 37 ° C.</li>
	<li>Bedek de collageen gel met 2 mL cel medium met verminderde serum (2%) en Incubeer de cellen bij 37 ° C in een incubator van de CO-2 met een luchtbevochtiger voor 24, 48 of 72 uur. Let op: De plaat moet worden behandeld met zorg om te voorkomen dat de collageen-gel loskoppelen van de glazen bodem.</li>
</ol>3. voorbeeld van voorbereiding van collageen gel met behulp van een rat staart collageen voorraad van 3.8 µg /mL
<ol><li>Op het ijs, combineren 114.5 µL van rat staart collageen, 16.6 µL van 10 x DMEM en 33.1 µL cultuurmedium met de chemoattractant.</li>
	<li>Het mengsel van de collageen met 14.0 µL van natriumbicarbonaat te neutraliseren.</li>
	<li>Zoals in stap 2.5 blijven.</li>
</ol>4. beeldvorming van de cellen
<ol><li>Verwijder voorzichtig het medium van de schotel.</li>
	<li>Spoel zachtjes de gel met 1 mL PBS.</li>
	<li>Herstellen van de cellen met 1 mL van 4% paraformaldehyde gedurende 15 minuten.</li>
	<li>Wassen van de cellen tweemaal met 1 mL PBS.</li>
	<li>Vlek van de cellen met de DAPI oplossing (100 ng/mL) gedurende 20 minuten bij kamertemperatuur.</li>
	<li>Het imago van de cellen met behulp van een confocal microscoop op verschillende locaties en 400 µm z-stapel afbeeldingen van elke locatie in 16 µm stappen te nemen. De Microscoop gebruikt heeft een schijf scannen eenheid waarmee confocal geschikt zijn met behulp van een wit licht, arc excitatie bron. Gebruik een 20 X lens gebruikt met numerieke maaswijdte van 0,75.</li>
	<li>Reconstrueren beelden.<ol>
<li>Open beelden voor een bepaalde gel (ongeveer 25 foto's) en een afbeeldingsstapel maken door te klikken op beeld → stapels → beelden te stapelen. De eerste afbeelding overeenkwam met de onderkant van de gel (z = 0 µm), het tweede beeld kwam overeen met de eerste stap in de richting van de z (z = 16 µm), de derde afbeelding overeenkwam met de tweede stap in de richting van de z (z = 32 µm). Elke kern op elke afbeelding diepte te beoordelen en de diepte waarop de kern werd in scherpste beeld als de diepte van de invasie van dat bepaalde cel aanwijzen.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Friedl, P., Brocker, E. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+biology+of+cell+locomotion+within+three-dimensional+extracellular+matric%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol+Life+Sci%22%5BJournal%5D)">The biology of cell locomotion within three-dimensional extracellular matric.</a> Cell Mol Life Sci. 57, 41-64 (2000).</li>
<li>Bissell, M. J., Rizki, A., Mian, I. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+architecture%3A+the+ultimate+regulator+of+breast+epithelial+function%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Tissue architecture: the ultimate regulator of breast epithelial function.</a> Curr Opin Cell Biol. 15, 753-762 (2003).</li>
<li>Friedl, P., Wolf, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumour-cell+invasion+and+migration%3A+diversity+and+escape+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Tumour-cell invasion and migration: diversity and escape mechanisms.</a> Nat Rev Cancer. 3, 362-374 (2003).</li>
<li>Yarrow, J. C., Perlman, Z. E., Westwood, N. J., Mitchison, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+high-throughput+cell+migration+assay+using+scratch+wound+healing%2C+a+comparison+of+image-based+readout+methods%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">A high-throughput cell migration assay using scratch wound healing, a comparison of image-based readout methods.</a> BMC Biotechnol. 4, 21(2004).</li>
<li>Wolf, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Compensation+mechanism+in+tumor+cell+migration%3A+mesenchymal-amoeboid+transition+after+blocking+of+pericellular+proteolysis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Compensation mechanism in tumor cell migration: mesenchymal-amoeboid transition after blocking of pericellular proteolysis.</a> J Cell Biol. 160, 267-277 (2003).</li>
<li>Sahai, E., Marshall, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differing+modes+of+tumour+cell+invasion+have+distinct+requirements+for+Rho%2FROCK+signalling+and+extracellular+proteolysis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Differing modes of tumour cell invasion have distinct requirements for Rho/ROCK signalling and extracellular proteolysis.</a> Nat Cell Biol. 5, 711-719 (2003).</li>
<li>Kam, Y., Guess, C., Estrada, L., Weidow, B., Quaranta, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+circular+invasion+assay+mimics+in+vivo+invasive+behavior+of+cancer+cell+lines+and+distinguishes+single-cell+motility+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Cancer%22%5BJournal%5D)">A novel circular invasion assay mimics in vivo invasive behavior of cancer cell lines and distinguishes single-cell motility in vitro.</a> BMC Cancer. 8, 198(2008).</li>
<li>Staton, C. A., Reed, M. W., Brown, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+critical+analysis+of+current+in+vitro+and+in+vivo+angiogenesis+assays%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Exp+Pathol%22%5BJournal%5D)">A critical analysis of current in vitro and in vivo angiogenesis assays.</a> Int J Exp Pathol. 90, 195-221 (2009).</li>
<li>Poujade, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collective+migration+of+an+epithelial+monolayer+in+response+to+a+model+wound%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">Collective migration of an epithelial monolayer in response to a model wound.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 104, 15988-15993 (2007).</li>
<li>Noubissi, F. K., Harkness, T., Alexander, C. M., Ogle, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apoptosis-induced+cancer+cell+fusion%3A+a+mechanism+of+breast+cancer+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">Apoptosis-induced cancer cell fusion: a mechanism of breast cancer metastasis.</a> FASEB J. 29, 4036-4045 (2015).</li>
<li>McArdle, T. J., Ogle, B. M., Noubissi, F. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+In+Vitro+Inverted+Vertical+Invasion+Assay+to+Avoid+Manipulation+of+Rare+or+Sensitive+Cell+Types%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cancer%22%5BJournal%5D)">An In Vitro Inverted Vertical Invasion Assay to Avoid Manipulation of Rare or Sensitive Cell Types.</a> J Cancer. 7, 2333-2340 (2016).</li>
<li>Noubissi, F. K., Ogle, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+Cell+Fusion%3A+Mechanisms+Slowly+Unravel%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Cancer Cell Fusion: Mechanisms Slowly Unravel.</a> Int J Mol Sci. 17, (2016).</li>
<li>Meyvantsson, I., Beebe, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+culture+models+in+microfluidic+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">Cell culture models in microfluidic systems.</a> Annu Rev Anal Chem. 1, 423-449 (2008).</li>
<li>Hooper, S., Marshall, J. F., Sahai, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+cell+migration+in+three+dimensions%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+In+Enzymol%22%5BJournal%5D)">Tumor cell migration in three dimensions.</a> Methods In Enzymol. 406, 625-643 (2006).</li>
<li>Yang, C., Tibbitt, M. W., Basta, L., Anseth, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanical+memory+and+dosing+influence+stem+cell+fate%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Materials%22%5BJournal%5D)">Mechanical memory and dosing influence stem cell fate.</a> Nat Materials. 13, 645-652 (2014).</li>
</ol>

De auteurs hebben verklaard dat er geen concurrerende belang bestaat.

Hier beschrijven we een eenvoudig omgekeerde verticale invasie assay die handig is voor een aantal celtypes, met inbegrip van cellen die zeldzaam en/of afhankelijk van hun communicatie zijn. In dit 3D invasie assay, cellen blijven in hun oorspronkelijke communicatie en worden gedekt door de collageen-gel met een chemoattractant. De cellen vervolgens migreren en binnen te dringen in het collageen. In deze test, kunnen de cellen worden gekleurd en gemakkelijk gecontroleerd binnen de gel. De eenvoud en de reproduceerbaarhei...

De beweeglijkheid van de cel is een normale ontwikkelings- en fysiologische proces van cellen. Veranderingen in het patroon en het vermogen van de cellen om te migreren en binnenvallen zijn echter geassocieerd met pathologische voorwaarden, met inbegrip van inflammatoire ziekten en kanker uitzaaiingen1,2,3. Metastase is aantoonbaar de meest slecht begrepen aspect van kanker. Om het metastaseren, moet kankercellen degraderen van de extra-cellulaire matrix (ECM), binnenvallen het lokale weefsel- en intravasate. Zodra in omloop, de kankercellen naar de verre site verspreiden zullen, extravasate en secundaire tumoren vormen. Dus de mogelijkheid van cellen te degraderen de ECM, te migreren en te vallen is gerelateerd aan hun gemetastaseerde potentieel. Verschillende benaderingen zijn ontwikkeld om te analyseren en te kwantificeren van de mogelijkheden voor migratie en invasie van cellen. De meest gebruikte benaderingen omvatten de wond genezing assay, time-lapse microscopie, en de bepaling van Boyden kamer. De wond genezing assay4 en tijd vervallen microscopie zijn eenvoudige en gemakkelijke testen die zou voorontwerp inzicht geven in cel migratie. Beide zijn echter 2D testen die komen niet overeen met de 3D-omgeving waarin cellen in vivo zijn. Studies hebben aangetoond dat de cellen anders op een 3D-omgeving in vergelijking met een 2D één5,6 reageren. Bovendien zijn wond helende testen moeilijk te reproduceren en te8,9van de7,van de kwantitatieve resultaten opleveren. De cel uitsluiting Zone-bepaling, die een 3D-wijziging van de wond genezing assay is, is een meer fysiologisch relevante test maar het is niet geschikt voor cellen lage aantal zoals hybride cellen ten gevolge van cell fusion evenementen10,11 .
De bepaling van de kamer Boyden is een 3-dimensionale test waarmee de relevante microenvironments voor cellulaire studies. Nochtans, vereist het cellen uit hun oorspronkelijke communicatie moet worden verwijderd en de bovenste kamer van de Boyden assay systeem om te migreren en vallen naar beneden richting het chemoattractant met medium worden gestort. Deze 3D-aanpak is niet geschikt in het analyseren van het migratie en invasie vermogen van cellen kwetsbaar voor hun communicatie en/of beperkt in nummer10,11,12. Een nieuwere benadering cel migratie en invasie te analyseren is de microfluidic kleurovergang kamer assay13. Hoewel geschikte en betrouwbare migratie en invasie studies, deze test is duurder en technisch uitdagend kon worden voor een typische laboratorium. Hier beschrijven we een eenvoudig omgekeerde verticale invasie assay die compatibel is met veel celtypen, met inbegrip van cellen gevoelig voor hun communicatie en/of beperkt in aantal. Deze test werd aangepast van het protocol door Hooper et al. voorgestelde 14. in deze test, de cellen blijven in hun oorspronkelijke communicatie en hun migratie en invasie wordt gecontroleerd als zij zich verplaatsen naar boven in de collageen-gel met een chemoattractant11. Deze test is reproduceerbaar en is geoptimaliseerd en gevalideerd in de schotel 35-mm cultuur. Het kan worden aangepast aan verschillende assay omstandigheden waaronder verschillende cel cultuur maten, verschillende matrices of kracht van hechting, en verschillende chemoattractants. Deze test kan dienen als een in vitro -platform voor eerste screening in de drug discovery-proces.

<table><tbody><tr><td>MatTek P35G-1.5-10C</td><td>MatTek Corporation, Ashland, MA</td><td>P35G-1.5-10-C</td><td>mattek glass bottom dishes</td></tr><tr><td>Rat tail collagen I</td><td>Corning, Corning, NY, USA</td><td>354236</td><td>Collageengel</td></tr><tr><td>Hydrochloric acid</td><td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO 63178 USA</td><td>H1758</td><td>HCl</td></tr><tr><td>Phosphate buffered saline</td><td>Thermo Fisher Scientific Inc., Whaltham, MA, USA</td><td>10010023</td><td>PBS</td></tr><tr><td>10X Dulbecco's Modified Eagle's Medium</td><td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO 63178 USA</td><td>D2429</td><td>10X DMEM</td></tr><tr><td>Sodium bicarbonate</td><td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO 63178 USA</td><td>S5761</td><td>NaHCO3</td></tr><tr><td>Confocal Fluorescent microscope</td><td>Olympus America, Center Valley, PA, USA</td><td>Olympus IX81</td><td>Confocal&nbsp; microscoop</td></tr><tr><td>Defined Fetal Bovine Serum</td><td>GE Healthcare Life Sciences HyClone Laboratories, Utah, USA</td><td>SH30070.03</td><td>FBS</td></tr><tr><td>Ti:Sapphire multi-photon laser scanning microscope</td><td>Prarie Technologies, Sioux Falls, SD, USA</td><td>40x NA 0.8 objective</td><td>MPLSM</td></tr><tr><td>Imaris software</td><td>Bitplane Inc. Zurich, CH</td><td>Imaris 7.5.2</td><td>Imaris software</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO 63178, USA</td><td>D9542</td><td>DAPI</td></tr><tr><td>Paraformaldehyde</td><td>Thermo Fisher Scientific Inc., Whaltham, MA, USA</td><td>50980487</td><td>PFA</td></tr><tr><td>&alpha;-minimum essential medium</td><td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO 63178, USA</td><td>M0894</td><td></td></tr><tr><td>MDA-MB-231</td><td>ATCC; Manassas, VA, USA</td><td>HBT-22</td><td></td></tr><tr><td>MSC</td><td>Trivedi and Hematti, 2007</td><td></td><td></td></tr><tr><td>20X lens UPLAPO</td><td>Olympus America, Center Valley, PA, USA</td><td>36-064</td><td>Olympus UPLSAPO 20X Objective</td></tr></tbody></table>

verplaatsen naar boven: een eenvoudig en flexibel in vitro driedimensionale invasie assay protocol

Moving Upwards: A Simple and Flexible In Vitro Three-dimensional Invasion Assay Protocol

Hoewel 3D invasie testen hebben ontwikkeld, blijft de uitdaging om te bestuderen van cellen zonder de integriteit van hun communicatie. Traditionele 3D testen zoals de kamer van Boyden vereisen dat cellen worden verplaatst van de oorspronkelijke locatie van de cultuur en verplaatst naar een nieuwe omgeving. Niet alleen is dit de cellulaire processen die inherent is aan de communicatie verstoren, maar het leidt vaak tot een verlies van cellen. Deze problemen zijn vooral een uitdaging bij de behandeling van cellen die zeldzaam, of uiterst gevoelig zijn voor hun communicatie zijn. Hier beschrijven we de ontwikkeling van een 3D invasie assay die beide zorgen vermijdt. In deze test, cellen zijn vergulde binnen een klein goed en een ECM-matrix met een chemoattractant bovenop de cellen wordt gelegd. Dit vereist geen verplaatsing van de cel, en laat de cellen binnen te vallen naar boven in de matrix. In deze test, kan cel invasie, alsmede de morfologie van de cel worden beoordeeld binnen de collageen-gel. Met behulp van deze test, karakteriseren wij de invasieve capaciteit van zeldzame en gevoelige cellen; de hybride cellen als gevolg van de fusie tussen borstkankercellen MCF7 en mesenchymale/Multipotente cellen stamcellen/stroma (MSCs).

We hebben gebruik gemaakt van een 35-mm cultuur schotel met een glazen bodem en rat staart collageen I bij het ontwikkelen en optimaliseren van een 3D-invasie in vitro assay protocol. Met behulp van deze test, we toonden dat borst kankercellen MCF7 en MSC cellen kunnen binnenvallen in de collageen-gel op een gemiddelde afstand van 0,04 ± 1.8 µm en 41.3 ± 76.0 µm respectievelijk na 48u wanneer IGF1 (18,6 ng/mL) werd gebruikt als chemoattractant (Figuur 2</stro...

Dit protocol beschrijft een omgekeerde verticale invasie-bepaling die kan worden gebruikt om het kwantificeren van de mogelijkheden voor migratie en invasie van cellen in een driedimensionale omgeving met behoud van de cel-communicatie. Deze test is geschikt voor zeldzame en/of gevoelige cellen.

Verplaatsen naar boven: Een eenvoudig en flexibel In Vitro driedimensionale invasie Assay Protocol

Although 3D invasion assays have been developed, the challenge remains to study cells without affecting the integrity of their microenvironment. ...

Het algemene doel van deze invasie-assay is om de migratie- en invasieve capaciteiten van zeldzame en gevoelige cellen in een 3D-omgeving te kwantificeren zonder de cellen uit hun micro-omgeving te verplaatsen. Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van sleutelvragen op het gebied van kankeronderzoek over de invasiecapaciteit van gevoelige en of oray-gebeurtenissen, zoals een fusieproduct van kankercellen. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat de cellen worden geanalyseerd in hun oorspronkelijke micro-omgeving met behulp van een 3D-instelling.De implicaties van deze techniek reiken tot de therapie van kanker omdat het kan worden gebruikt om farmacologische middelen te screenen die in staat zijn om de invasie en metastase van kankercellen te remmen. Visuele demonstratie van deze techniek is cruciaal. Aspirate in de temperatuur en pH van het collageenmengsel beïnvloedt de polymerisatie en ruw handelen veroorzaakt dat het gel loslaat.Begin door een 35 millimeter kweekschotel met een 10 millimeter glazen bodemput met één milliliter een molaire zoutzuur te behandelen om de hydrofobiciteit van het glas te verlagen. Na 15 minuten, was de plaat twee keer met één millili

moving-upwards-simple-flexible-vitro-three-dimensional-invasion-assay

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kankeronderzoek

Deze video laat zien hoe cel invasie te meten door middel van celkweek voegt met behulp van een fluorescentie-gebaseerde methodiek.

Een In vitro FluoroBlok Tumor Invasion Assay

Modellen van de tumorcel invasie in drie-dimensionale extracellulaire matrix beter aansluiten bij...

Modeling and Imaging 3-Dimensionale Collectief Cell Invasion

Vaak gebruikt, zijn zeer toegankelijk methoden voor de behandeling van cel migratie en invasie in vitro beschreven. De eerste methode is de cel wondsluiting assay die celmotiliteit meet. De tweede methode is de transwell migratie en invasie assay die de chemotactische en invasieve vermogen van cellen beoordeelt.

In vitro cel-migratie en invasie assays

Dit artikel geeft gedetailleerde methodologieën voor het gebruik van driedimensionale (3D) assays om borstkanker cel invasie kwantificeren. Concreet bespreken we het nodig om dergelijke assays procedures, kwantificering en gegevensanalyse, alsook werkwijzen voor het verlies van membraan integriteit die ontstaat wanneer cellen binnendringen onderzoeken.

Kwantificering van de Breast Cancer Cell Invasiviteit met een drie-dimensionale (3D) Model

Invasie van omliggende normale weefsels is een typerend kenmerk van kwaadaardige tumoren. We bieden hier een eenvoudige, semi-geautomatiseerde microplaattest van invasie in een natuurlijke 3D biomatrix die met een aantal modellen van gevorderde menselijke kankers is geëxemplifeerd.

Driedimensionale (3D) Tumor Spheroid Invasion Assay

Deze methode evalueert de invasie van kankercellen uit sferoïden in een omringende 3D-matrix.  Sferoïden worden gegenereerd via de hanging drop-kweekmethode en vervolgens ingebed in een matrix bestaande uit basement membraanmaterialen en type I collageen.  Invasie uit de sferoïden wordt vervolgens gemonitord.

Een Cancer Cell Sferoïde Assay om Invasion beoordelen in een 3D-instelling

Epitheliële naar mesenchymale overgang (EMT) maakt het mogelijk dat kankers invasief worden. Om EMT te onderzoeken, wordt een op neurale stamcellen (NSC) gebaseerd in vitro model beschreven dat vrij is van serum en enzymen. Dit gestandaardiseerde systeem maakt een kwantitatieve en kwalitatieve beoordeling van celmigratie, gen- en eiwitexpressie mogelijk. Het model is geschikt voor geneesmiddelontdekking.

Een enzym en Serum-free neurale stamcel Cultuur Model voor EMT Investigation Geschikt voor Drug Discovery

De processen die blaas kanker invasie vertegenwoordigen mogelijkheden voor biomerker en therapeutische ontwikkeling. Hier presenteren we een blaas kanker invasie model waarin 3D-cultuur tumor spheroïden, time-lapse beeldvorming en confocale microscopie. Deze techniek is handig voor het definiëren van de kenmerken van de invasieve proces en voor het screenen van therapeutische agenten.

3D-celcultuur voor het bestuderen van de invasie en evalueren van Therapeutics in blaaskanker

Het huidige protocol beschrijft een geïntegreerde methode onderzoek naar kanker cel migratie en invasie op één platform in real-time, het verstrekken van een gemakkelijk reproduceerbaar zijn en tijd-efficiënte optie te bestuderen van de cel mobiliteit en morfologie.

Een eenvoudige migratie/invasie Workflow met behulp van een geautomatiseerde Live-cel Imager

Deze test maakt gebruik van embryonale stamcellen van muizen gedifferentieerd in embryoïde lichamen gekweekt in 3D-collageengel om de biologische processen te analyseren die kiemende angiogenese in vitro beheersen. De techniek kan worden toegepast voor het testen van medicijnen, het modelleren van ziekten en voor het bestuderen van specifieke genen in de context van deleties die embryonaal dodelijk zijn.

In vitro Driedimensionale kiemtest van angiogenese met behulp van embryonale stamcellen van muizen voor vaatziektemodellering en drugstests

Invasie is een belangrijk biologisch fenomeen bij de ontwikkeling en progressie van kanker. Dit proces wordt beïnvloed door niet-neoplastische cellen en componenten van de micro-omgeving van de tumor. Het doel van deze studie is het beschrijven van een alternatieve methode voor het analyseren van tumorcelinvasie in vitro met behulp van driedimensionale (3D) culturen.

Alternatieve strategie om in vitro celinvasie van 3D-culturen te analyseren

Leer een geïnverteerde verticale invasie-assay om migratie en invasie van zeldzame, gevoelige kankercellen in 3D te kwantificeren. Deze methode behoudt de celmicro-omgeving en ondersteunt screening van farmaca tegen metastase.

Verplaatsen naar boven: Een eenvoudig en flexibel In Vitro driedimensionale invasie Assay Protocol

Meer video's verkennen