Name: Synthese van monocyt-targeting Peptide Amfifiel micellen voor beeldvorming van atherosclerose (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-11-17T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 1 s
Description: Leer de synthese van monocyt-targeting peptide-amfifiele micellen voor beeldvorming van atherosclerose. Deze methode verbetert de specificiteit voor het onderscheiden van vroege en late stadia van atherosclerotische laesies.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De auteurs wil erkennen de financiële steun van de University of Southern California, de National Heart, Lung, en Blood Institute (NHLBI), R00HL124279, Eli en jongevrouw brede Innovation Award en de L.K. Whittier Stichting Non-kanker Translationeel onderzoek Award toegekend aan EJC. De auteurs bedanken het centrum voor elektronenmicroscopie en belichten, Center of Excellence in NanoBiophysics Center of Excellence voor moleculaire karakterisering en Translational Imaging Center aan de University of Southern California voor bijstand in instrumentale opstellingen.

Opmerking: Lees de MSDS voor reagentia en volg alle chemische veiligheidsmaatregelen zoals vereist door de lokale instelling.
1. bereiding van MCP-1 PAMs
<ol><li>
Voorbereiding van MCP-1 peptide
	<ol>
<li>Weeg 0,25 mmol van Fmoc-L-Lys (Boc)-Wang in een reactievat (RV). Spoel de kant van de RV met 5 mL dimethylforamide (DMF) in een chemische zuurkast.</li>
		<li>Laden van de RV op een geautomatiseerde benchtop peptide synthesizer. Belasting voorverpakte aminozuur flesjes, N '- CYNFTINRKISVQRLASYRRITSS - C', van de C aan N-terminus. Omvatten een lege vial eind voor de definitieve deprotection stap. Opmerking: Een gecodeerde peptide met opeenvolging, N '- CNNSIIRSKQVLRSTRYFRSATYK - C', kan ook worden gesynthetiseerd met behulp van hetzelfde protocol.</li>
		<li>Zodra synthese wordt gebeëindigd, overbrengen in de peptiden op hars van de RV de Scintillatie flacon met 2-3 mL methanol totdat alle van de harsen zijn overgebracht. Nadat de hars is gezonken aan de onderkant, verwijdert u de methanol supernatant en verdampen de resterende tot droog. Vacuüm droog voor een extra 2 h of 's nachts bij kamertemperatuur.</li>
		<li>Maakt 12 mL decollete oplossing met trifluoracetic zuur (TFA):ethanedithiol:water:triisopropylsilane op 94:2.5:2.5:1 vol % in een chemische zuurkast. Swirl de splitsingsproducten oplossing om ervoor te zorgen dat het gelijkmatig is gemengd. Let op: Omdat triisopropylsilane en ethanedithiol zijn lucht-gevoelig, argon purge voorraad flesjes van triisopropylsilane en ethanedithiol voor 1 min vóór persoonsgebonden terug.</li>
		<li>Plaats de synthese vaartuig (SV) op een arm shaker door klemmen in de buurt van de onderste helft van de SV. Breng peptide-hars aan de SV met 2 mL decollete oplossing totdat alle van de peptide-harsen worden overgebracht.</li>
		<li>Wassen van de zijkanten van de AVP met 3 mL decollete. Sluit de dop van de AVP en schudden bij 300 oscillaties/min gedurende 4 uur.</li>
		<li>Weeg een centrifugebuis lege 50 mL. Het opnemen van de massa.</li>
		<li>Na 4 uur, drain de gekloofd peptide-oplossing van de SV in de centrifugebuis 50 mL. Spoel de SV verschillende malen met de resterende splitsingsproducten-oplossing.</li>
		<li>Verdampen gekloofd peptide oplossing met stikstof tot er minder dan 4 mL resterende in de centrifugebuis.</li>
		<li>Voeg 36 mL ijskoud ether aan de peptide-gekloofd oplossing.</li>
		<li>Vortex is de oplossing tot het volledig witte of gele. Centrifugeer bij 3000 x g gedurende 5 min bij 4 ° C en de bovendrijvende vloeistof decanteren.</li>
		<li>Voeg toe 40 mL ijskoud ether aan de buis. Vortex en bewerk opnieuw ultrasone trillingen ten. Herhaal het proces van centrifugeren. Giet het supernatant.</li>
		<li>Droog de ruwe PA pellet met stikstof gas zuiveren tot de ether zichtbaar is verdampt.</li>
		<li>Voeg 20 mL tweemaal gedestilleerd water, vortex, en bewerk ultrasone trillingen ten totdat de peptide volledig is opgelost in de oplossing.</li>
		<li>Bevriezen van de oplossing en lyophilize tot droge.</li>
		<li>Zodra de peptide is opgedroogd, weeg de massa van de centrifugebuis met de ruwe peptide. Los van de ruwe peptide in 5 mg/mL water.</li>
		<li>Los op 25 mg ruwe MCP-1 peptide in 5 mL tweemaal gedestilleerd water om een totale concentratie van 5 mg/mL. Zuiveren van de ruwe MCP-1 peptide door krachtige vloeibare chromatografie (HPLC) met behulp van 0,1% TFA in water (oplosmiddel A) en 0,1% TFA in acetonitril (oplosmiddel B) als mobiele fasen in een C8 omgekeerde-phase kolom. De 5 mL van de peptide injecteren de HPLC. Opmerking: De eerste mobiele fase bestond uit 100% oplosmiddel A bij een debiet van 9.0 mL/min. afname oplosmiddel A langzaam tot 30% in 27 min en houd deze op deze compositie voor 3 min. terugkeer het verloop moet 100% oplosmiddel een meer dan 3 min en wachtruimte tegelijk deze compositie voor 1 min te geven een totale run-time van 34 min. houden de kolomtemperatuur op 55 ° C. Gebruik van een positief ion bronmodus voor de analyse. Formic acid kan worden gebruikt in plaats van TFA, als TFA te zuur voor de HPLC-kolom is. Het wordt aanbevolen dat de organische oplosmiddelen samenstelling oprit snelheid mag niet hoger zijn dan 2%/min voor betere scheiding.</li>
		<li>Analyseren van elke fractie met behulp van spectrometrie van de massa van de desorptiekinetiek/ionisatie (MALDI) laser matrix-bijgewoonde voor de verwachte product m/z op 2,890. Opmerking: Los α-cyano-4-hydroxycinnamic zuur bij 1 mg/mL in acetonitril/water (50:50 vol %) als de matrix-oplossing. Ter plaatse 0,75 µL van matrix oplossing op de MALDI-bord, gevolgd door 0,75 µL van elke fractie. De analyse met behulp van een positieve reflecterende ion-modus op een massale bereik van 500-5.000 Da uitvoeren.</li>
		<li>Product breuken combineren, afblazen acetonitril, bevriezen en lyophilize gezuiverde peptiden tot droog.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Voorbereiding voor MCP-1 PA
	<ol>
<li>Een 1.1 molaire overmaat van 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine-N-[amino(polyethylene glycol)-2000] DSPE-PEG (2000)-maleimide naar peptide in aparte Scintillatie flesjes te bereiden. Ontbinden van beide verbindingen in tweemaal gedestilleerd water te maken ~ 15 mg/mL. Bewerk ultrasone trillingen ten gedurende 15 minuten of totdat de beide oplossingen zijn volledig duidelijk. Opmerking: DSPE-PEG (2000)-Cy5 wordt gesynthetiseerd met behulp van hetzelfde protocol met DSPE-PEG (2000)-amine en N-hydroxysuccinimide (NHS) ester-matiemaatschappij Cy5, met uitzondering van stap 1.2.3, waar de pH van de oplossing wordt aangepast tot 8,5.</li>
		<li>DSPE-PEG (2000)-maleimide oplossing aan de peptide-oplossing toevoegen. Vortex en bewerk ultrasone trillingen ten.</li>
		<li>Er 1 bij optellen M NaOH dropwise (1 µL) tegelijk, totdat de pH van de oplossing 7 is.</li>
		<li>Stikstof purge oplossing voor 5 min. Roer de oplossing om 's nachts.</li>
		<li>Bevriezen van de oplossing en lyophilize tot droge.</li>
		<li>Zodra het ruwe product is opgedroogd, Los de solid in 5 mg/mL water.</li>
		<li>Zuiveren met HPLC zoals hierboven beschreven. Opmerking: Unconjugated peptide en DSPE-PEG(2000) moet elueren tussen 15-30% organische concentratie (vol %), terwijl DSPE-PEG (2000)-MCP-1 conjugaat moet elueren tussen 40-50% organische concentratie.</li>
		<li>Analyseren van elke fractie met behulp van de Spectrometrie van de massa van de MALDI voor de overeenkomstige m/z. DSPE-PEG (2000)-MCP-1 een globale m/z-piek op 5,760 moet. Opmerking: 2,5-dihydroxybenzoic zuur het best gebruiken als de matrix voor DSPE-PEG (2000)-MCP-1 met MALDI.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Vergadering van MCP-1 PAMs
	<ol>
<li>Los 1,75 mg MCP-1 PAs met 3 mL methanol in een 1-dram-flesje. Bewerk ultrasone trillingen ten totdat de MCP-1 PA volledig is opgelost. Opmerking: Cy5 amfifielen kunnen worden opgenomen in een molaire verhouding van 10:90 MCP-1 PA voor beeldbewerkingstoepassingen.</li>
		<li>Verdampen de methanol onder stikstof in een cirkelmotie terwijl de resterende methanol spoelen van de kant van de flacon totdat een uniforme film wordt gevormd bij de bodem van de ampul. Vacuüm droog de film's nachts.</li>
		<li>De film met 3 mL water of fosfaat buffer hydrate zoutoplossing (PBS) om een 100 µM-oplossing van MCP-1 PAMs te maken. Zachtjes vortex en bewerk ultrasone trillingen ten de oplossing tot duidelijk. Incubeer bij 80 ° C gedurende 30 minuten. Opmerking: De verhoogde temperatuur is aangetoond dat de zelf-assemblage proces versnellen en kunt het peptide onderdeel te vormen van de meest stabiele secundaire structuur, terwijl het verlagen van de kritische micel concentratie (CMC)42,43.</li>
		<li>De resulterende dispersie tot kamertemperatuur afkoelen.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. karakterisering van MCP-1 PAMs
<ol><li>
Dynamische lichtverstrooiing (DLS) en zeta potentiële
	<ol>
<li>Plaats 100 µM MCP-1 PAM of gecodeerde PAM in een cuvet volgens de instructies van de Distributielijsten of zeta potentieel instrument. Opmerking: DLS en zeta potentiële cuvettes kunnen verschillen op basis van de instructies van het instrument.</li>
		<li>Equilibreer het instrument tot kamertemperatuur. Meet de grootte en oppervlakte last van de PAM.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Transmissie-elektronenmicroscopie (TEM)
	<ol>
<li>Voeg 7 µL van 50 µM MCP-1 PAM of gecodeerde PAM op een raster TEM geschorst binnen een zelfsluitend pincetten voor 5 min. Wick weg de druppel met een delicate taak doekje.</li>
		<li>Voeg 7 µL van het water voor het wassen van het raster. Pit weg de druppel.</li>
		<li>Voeg 7 µL van 1 wt % phosphotungstic zuur voor 2 min. Wick weg de druppel. Herhaal stap 2.2.2.</li>
		<li>Droog het TEM-raster vóór TEM analyse.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Circulair dichroïsme (CD) spectroscopie
	<ol>
<li>Zet de stikstof voor 5-10 min voorafgaand aan het gebruik van het instrument.</li>
		<li>300 µL van blanco (water of PBS) in cuvette plaatsen.</li>
		<li>Meten van spectra op 190-265 nm, 0,2 mm-weglengte met een 1 s integratie tijd, en een 1 nm bandbreedte bij kamertemperatuur. Verzamelen 3 wordt gerepliceerd.</li>
		<li>Maatregel 100 µM MCP-1 peptide, MCP-1 PAM, krabbelde peptide en krabbelde PAM onder dezelfde voorwaarde in stap 2.3.3 beschreven. Aftrekken van de blanco.</li>
		<li>Grootte van de gegevens met behulp van een lineaire interpolatie van polylysine basis spectra.</li>
		<li>Uitschakelen van het instrument. Wacht 10 minuten vóór het uitschakelen van de stikstof.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. in Vitro analyse van MCP-1 PAMs
<ol><li>
In vitro biocompatibiliteit
	<ol>
<li>Cultuur en uitbreiden van de WEHI 274.1 lymfkliertest monocyten in Dulbecco van bewerkt Eagle Medium aangevuld met 10% foetale runderserum (FBS), 1% penicilline-streptomycine en 0.05 mM 2-mercaptoethanol in 37 ° C minder dan 5% CO,2 naar passage 5. Opmerking: WEHI 274.1 zijn schorsing cellen. Wanneer kweken, moet de media worden aangevuld om 2-3 dagen.</li>
		<li>Pipetteer monocyten in de media in een centrifugebuis steriele 50 mL. Centrifugeer bij 300 x g gedurende 5 min bij 4 ° C.</li>
		<li>De oude media gecombineerd en resuspendeer in 10 mL verse media in de centrifugebuis. Meng langzaam tot cellen zijn gelijkmatig verdeeld in de media. Telt de cellen met behulp van trypan blauw kleuring en een hemocytometer.</li>
		<li>Verdun cellen zodanig dat er 4.000 monocyten per 90 µL van media per putje. Voeg 90 µL van cellen in wells van een 96-wells-plaat. Incubeer gedurende 24 uur. Opmerking: Vermijd het gebruik van de putjes op de buitenste rand van de plaat om te voorkomen dat verschillen in de verdamping en thermische veranderingen in de plaat. Vul de exterieur putten met 100 µL PBS.</li>
		<li>Ontbinden 0,15 µmol MCP-1 peptide, MCP-1 PAM, gecodeerde peptide of vervormd-PAM in 150 µL PBS in afzonderlijke, gesteriliseerde microcentrifuge buizen. Uitvoeren van seriële verdunning zodat 65 µL van 1, 10 en 100 µM van elk monster.</li>
		<li>Voeg 10 µL PBS voor elke concentratie in putten met WEHI 274.1 (total volume: 100 µL per goed, 6 lijnen, 96 totale wells). Incubeer gedurende 72 uur.</li>
		<li>Voeg 10 µL (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium) (MTS) in elk putje. Incubeer gedurende 1 uur.</li>
		<li>Analyseren van de extinctie met behulp van een afleesapparaat op 490 nm of op basis van instructies van de fabrikant.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
In vitro micel bindende
	<ol>
<li>Zaad 500.000 monocyten in elk putje van de plaat van een 6-well in 2 mL zuiver media met 100 µM Cy5-geëtiketteerden MCP-1 PAM (10:90 molaire ratio van DSPE-PEG (2000)-Cy5 en MCP-1 PA). Incubeer gedurende 1 uur.</li>
		<li>WEHI 274.1 verzamelen door centrifugeren bij 300 x g gedurende 5 min bij 4 ° C. De media gecombineerd.</li>
		<li>Resuspendeer en wassen van de cellen in 2 mL PBS. Centrifugeer bij 300 x g gedurende 5 min bij 4 ° C. De PBS gecombineerd. Herhaal het wasproces met 2 mL PBS. De PBS gecombineerd.</li>
		<li>Voeg toe 2 mL koude 4% paraformaldehyde de cellen vast te stellen. Incubeer bij kamertemperatuur gedurende 10 minuten.</li>
		<li>Pipetteer de vaste cellen op een steriele glazen dekglaasje aan binnen putjes van de plaat van een 6-well. Centrifugeer bij 400 x g gedurende 5 min.</li>
		<li>Verwijder de paraformaldehyde. Wassen en spoel met 2 mL PBS eens. Resuspendeer met 1 mL PB Opmerking: Wanneer spoelen, niet te verstoren de cellen op het dekglaasje aan.</li>
		<li>10 µL van 90% glycerol in PBS op een dia plaatsen Gebruik een naald en pincet te halen van het dekglaasje aan. Droog de rand van het dekglaasje aan. Voorzichtig Schakel het dekglaasje aan op een dia naar beneden.</li>
		<li>Zachtjes verzegel de rand van het dekglaasje aan met duidelijke nagellak. Plaats in de koelkast totdat klaar voor imaging.</li>
		<li>Gebruik een confocale laser scanning microscoop (CLSM) geïnstalleerd met lasers voor Cy5 op λexcitatie = 650 nm.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Mozaffarian, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+Disease+and+Stroke+Statistics-2016+Update%3A+A+Report+From+the+American+Heart+Association%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Heart Disease and Stroke Statistics-2016 Update: A Report From the American Heart Association.</a> Circulation. 133 (4), e38-e60 (2016).</li>
<li>Falk, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenesis+of+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Coll.+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Pathogenesis of atherosclerosis.</a> J. Am. Coll. Cardiol. 47 (8, Suppl. C), C7-C12 (2006).</li>
<li>Rahmani, M., Cruz, R. P., Granville, D. J., McManus, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Allograft+Vasculopathy+Versus+Atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">Allograft Vasculopathy Versus Atherosclerosis.</a> Circ. Res. 99 (8), 801-815 (2006).</li>
<li>Luis, A. J. <a target="_blank" href="https://www.nature.com/nature/journal/v407/n6801/full/407233a0.html">Atherosclerosis.</a> Nature. 407 (6801), 233-241 (2000).</li>
<li>Libby, P., Ridker, P. M., Hansson, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progress+and+challenges+in+translating+the+biology+of+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+%28London%2C+U.+K%29%22%5BJournal%5D)">Progress and challenges in translating the biology of atherosclerosis.</a> Nature (London, U. K). 473 (7347), 317-325 (2011).</li>
<li>Boring, L., Gosling, J., Cleary, M., Charo, I. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decreased+lesion+formation+in+CCR2-%2F-+mice+reveals+a+role+for+chemokines+in+the+initiation+of+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+%28London%29%22%5BJournal%5D)">Decreased lesion formation in CCR2-/- mice reveals a role for chemokines in the initiation of atherosclerosis.</a> Nature (London). 394 (6696), 894-897 (1998).</li>
<li>Szmitko, P. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+Markers+of+Inflammation+and+Endothelial+Cell+Activation%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">New Markers of Inflammation and Endothelial Cell Activation.</a> Circulation. 108 (16), 1917-1923 (2003).</li>
<li>Deshmane, S. L., Kremlev, S., Amini, S., Sawaya, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monocyte+Chemoattractant+Protein-1+%28MCP-1%29%3A+An+Overview%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Interferon+Cytokine+Res%22%5BJournal%5D)">Monocyte Chemoattractant Protein-1 (MCP-1): An Overview.</a> J. Interferon Cytokine Res. 29 (6), 313-326 (2009).</li>
<li>Chung, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monocyte-Targeting+Supramolecular+Micellar+Assemblies%3A+A+Molecular+Diagnostic+Tool+for+Atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Healthcare+Mater%22%5BJournal%5D)">Monocyte-Targeting Supramolecular Micellar Assemblies: A Molecular Diagnostic Tool for Atherosclerosis.</a> Adv. Healthcare Mater. 4 (3), 367-376 (2015).</li>
<li>Chung, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+and+therapeutic+peptides+in+nanomedicine+for+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Biol+Med+%28Maywood%29%22%5BJournal%5D)">Targeting and therapeutic peptides in nanomedicine for atherosclerosis.</a> Exp Biol Med (Maywood). 241 (9), 891-898 (2016).</li>
<li>Sanz, J., Fayad, Z. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+of+atherosclerotic+cardiovascular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+%28London%2C+U.+K.%29%22%5BJournal%5D)">Imaging of atherosclerotic cardiovascular disease.</a> Nature (London, U. K.). 451 (7181), 953-957 (2008).</li>
<li>Tarkin, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://circres.ahajournals.org/content/118/4/750">Imaging Atherosclerosis.</a> Circ. Res. 118 (4), 750-769 (2016).</li>
<li>Hennerici, M., Baezner, H., Daffertshofer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasound+and+arterial+wall+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cerebrovasc+Dis%22%5BJournal%5D)">Ultrasound and arterial wall disease.</a> Cerebrovasc Dis. 17 Suppl 1, 19-33 (2004).</li>
<li>Nissen, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+intravascular+ultrasound+to+characterize+coronary+artery+disease+and+assess+the+progression+or+regression+of+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Application of intravascular ultrasound to characterize coronary artery disease and assess the progression or regression of atherosclerosis.</a> Am J Cardiol. 89 (4A), 24B-31B (2002).</li>
<li>Khalil, M. M., Tremoleda, J. L., Bayomy, T. B., Gsell, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+SPECT+Imaging%3A+An+Overview%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Imaging%22%5BJournal%5D)">Molecular SPECT Imaging: An Overview.</a> Int J Mol Imaging. 2011, 796025(2011).</li>
<li>Lerakis, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+of+the+vulnerable+plaque%3A+noninvasive+and+invasive+techniques%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Med+Sci%22%5BJournal%5D)">Imaging of the vulnerable plaque: noninvasive and invasive techniques.</a> Am J Med Sci. 336 (4), 342-348 (2008).</li>
<li>Sun, Z. H., Rashmizal, H., Xu, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+imaging+of+plaques+in+coronary+arteries+with+PET+and+SPECT%5BTitle%5D)+AND+%22J+Geriatr+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Molecular imaging of plaques in coronary arteries with PET and SPECT.</a> J Geriatr Cardiol. 11 (3), 259-273 (2014).</li>
<li>Godin, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emerging+applications+of+nanomedicine+for+the+diagnosis+and+treatment+of+cardiovascular+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Pharmacol.+Sci%22%5BJournal%5D)">Emerging applications of nanomedicine for the diagnosis and treatment of cardiovascular diseases.</a> Trends Pharmacol. Sci. 31 (5), 199-205 (2010).</li>
<li>Branco de Barros, A. L., Tsourkas, A., Saboury, B., Cardoso, V. N., Alavi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emerging+role+of+radiolabeled+nanoparticles+as+an+effective+diagnostic+technique%5BTitle%5D)+AND+%22EJNMMI+Res%22%5BJournal%5D)">Emerging role of radiolabeled nanoparticles as an effective diagnostic technique.</a> EJNMMI Res. 2 (1), 31-39 (2012).</li>
<li>Jayagopal, A., Linton, M. F., Fazio, S., Haselton, F. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insights+into+atherosclerosis+using+nanotechnology%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Atheroscler.+Rep%22%5BJournal%5D)">Insights into atherosclerosis using nanotechnology.</a> Curr. Atheroscler. Rep. 12 (3), 209-215 (2010).</li>
<li>Khodabandehlou, K., Masehi-Lano, J. J., Poon, C., Wang, J., Chung, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+cell+adhesion+molecules+with+nanoparticles+using+in+vivo+and+flow-based+in+vitro+models+of+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Biol+Med+%28Maywood%29%22%5BJournal%5D)">Targeting cell adhesion molecules with nanoparticles using in vivo and flow-based in vitro models of atherosclerosis.</a> Exp Biol Med (Maywood). 242 (8), 799-812 (2017).</li>
<li>Trent, A., Marullo, R., Lin, B., Black, M., Tirrell, M. <a target="_blank" href="http://pubs.rsc.org/en/content/articlelanding/sm/2011/c1sm05862b#!divAbstract">Structural properties of soluble peptide amphiphile micelles.</a> Soft Matter. 7 (20), 9572-9582 (2011).</li>
<li>Hartgerink, J. D., Beniash, E., Stupp, S. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peptide-amphiphile+nanofibers%3A+A+versatile+scaffold+for+the+preparation+of+self-assembling+materials%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Peptide-amphiphile nanofibers: A versatile scaffold for the preparation of self-assembling materials.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 99 (8), 5133-5138 (2002).</li>
<li>Missirlis, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+the+Peptide+Secondary+Structure+on+the+Peptide+Amphiphile+Supramolecular+Structure+and+Interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Effect of the Peptide Secondary Structure on the Peptide Amphiphile Supramolecular Structure and Interactions.</a> Langmuir. 27 (10), 6163-6170 (2011).</li>
<li>Zhong, L., Johnson, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Environment+affects+amino+acid+preference+for+secondary+structure%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.+S.+A%22%5BJournal%5D)">Environment affects amino acid preference for secondary structure.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 89 (10), 4462-4465 (1992).</li>
<li>Shimada, T., Lee, S., Bates, F. S., Hotta, A., Tirrell, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wormlike+Micelle+Formation+in+Peptide-Lipid+Conjugates+Driven+by+Secondary+Structure+Transformation+of+the+Headgroups%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Phys.+Chem.+B%22%5BJournal%5D)">Wormlike Micelle Formation in Peptide-Lipid Conjugates Driven by Secondary Structure Transformation of the Headgroups.</a> J. Phys. Chem. B. 113 (42), 13711-13714 (2009).</li>
<li>Missirlis, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Linker+Chemistry+Determines+Secondary+Structure+of+p5314-29+in+Peptide+Amphiphile+Micelles%5BTitle%5D)+AND+%22Bioconjugate+Chem%22%5BJournal%5D)">Linker Chemistry Determines Secondary Structure of p5314-29 in Peptide Amphiphile Micelles.</a> Bioconjugate Chem. 21 (3), 465-475 (2010).</li>
<li>Elbert, D. L., Hubbell, J. A. <a target="_blank" href="http://www.annualreviews.org/doi/abs/10.1146/annurev.ms.26.080196.002053">Surface treatments of polymers for biocompatibility.</a> Annu. Rev. Mater. Sci. 26, 365-394 (1996).</li>
<li>Xue, Y., O'Mara, M. L., Surawski, P. P. T., Trau, M., Mark, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+Poly%28ethylene+glycol%29+%28PEG%29+Spacers+on+the+Conformational+Properties+of+Small+Peptides%3A+A+Molecular+Dynamics+Study%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Effect of Poly(ethylene glycol) (PEG) Spacers on the Conformational Properties of Small Peptides: A Molecular Dynamics Study.</a> Langmuir. 27 (1), 296-303 (2011).</li>
<li>Canalle, L. A., Loewik, D. W. P. M., van Hest, J. C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polypeptide-polymer+bioconjugates%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Soc.+Rev%22%5BJournal%5D)">Polypeptide-polymer bioconjugates.</a> Chem. Soc. Rev. 39 (1), 329-353 (2010).</li>
<li>Hamley, I. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PEG-Peptide+Conjugates%5BTitle%5D)+AND+%22Biomacromolecules%22%5BJournal%5D)">PEG-Peptide Conjugates.</a> Biomacromolecules. 15 (5), 1543-1559 (2014).</li>
<li>Acar, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-assembling+peptide-based+building+blocks+in+medical+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Drug+Delivery+Rev%22%5BJournal%5D)">Self-assembling peptide-based building blocks in medical applications.</a> Adv. Drug Delivery Rev. , (2016).</li>
<li>Busseron, E., Ruff, Y., Moulin, E., Giuseppone, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Supramolecular+self-assemblies+as+functional+nanomaterials%5BTitle%5D)+AND+%22Nanoscale%22%5BJournal%5D)">Supramolecular self-assemblies as functional nanomaterials.</a> Nanoscale. 5 (16), 7098-7140 (2013).</li>
<li>Barrett, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/acsbiomaterials.6b00422">Modular Peptide Amphiphile Micelles Improving an Antibody-Mediated Immune Response to Group A Streptococcus.</a> ACS Biomater. Sci. Eng. 3 (2), 144-152 (2017).</li>
<li>Toughrai, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduction-Sensitive+Amphiphilic+Triblock+Copolymers+Self-Assemble+Into+Stimuli-Responsive+Micelles+for+Drug+Delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Macromol.+Biosci%22%5BJournal%5D)">Reduction-Sensitive Amphiphilic Triblock Copolymers Self-Assemble Into Stimuli-Responsive Micelles for Drug Delivery.</a> Macromol. Biosci. 15 (4), 481-489 (2015).</li>
<li>Swirski, F. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monocyte+accumulation+in+mouse+atherogenesis+is+progressive+and+proportional+to+extent+of+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.+S.+A%22%5BJournal%5D)">Monocyte accumulation in mouse atherogenesis is progressive and proportional to extent of disease.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 103 (27), 10340-10345 (2006).</li>
<li>Kashiwagi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Association+of+monocyte+subsets+with+vulnerability+characteristics+of+coronary+plaques+as+assessed+by+64-slice+multidetector+computed+tomography+in+patients+with+stable+angina+pectoris%5BTitle%5D)+AND+%22Atherosclerosis+%28Amsterdam%2C+Neth%29%22%5BJournal%5D)">Association of monocyte subsets with vulnerability characteristics of coronary plaques as assessed by 64-slice multidetector computed tomography in patients with stable angina pectoris.</a> Atherosclerosis (Amsterdam, Neth). 212 (1), 171-176 (2010).</li>
<li>Chung, E. J., Tirrell, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+Advances+in+Targeted%2C+Self-Assembling+Nanoparticles+to+Address+Vascular+Damage+Due+to+Atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Healthcare+Mater%22%5BJournal%5D)">Recent Advances in Targeted, Self-Assembling Nanoparticles to Address Vascular Damage Due to Atherosclerosis.</a> Adv. Healthcare Mater. 4 (16), 2408-2422 (2015).</li>
<li>Cassetta, L., Pollard, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+immunosurveillance%3A+role+of+patrolling+monocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Cancer immunosurveillance: role of patrolling monocytes.</a> Cell Res. 26 (1), 3-4 (2016).</li>
<li>Williams, C. B., Yeh, E. S., Soloff, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor-associated+macrophages%3A+unwitting+accomplices+in+breast+cancer+malignancy%5BTitle%5D)+AND+%22NPJ+Breast+Cancer%22%5BJournal%5D)">Tumor-associated macrophages: unwitting accomplices in breast cancer malignancy.</a> NPJ Breast Cancer. 2, (2016).</li>
<li>Richards, D. M., Hettinger, J., Feuerer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monocytes+and+Macrophages+in+Cancer%3A+Development+and+Functions%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Microenviron%22%5BJournal%5D)">Monocytes and Macrophages in Cancer: Development and Functions.</a> Cancer Microenviron. 6 (2), 179-191 (2013).</li>
<li>Schick, M. J. <a target="_blank" href="http://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/j100803a013">Effect of temperature on the critical micelle concentration of nonionic detergents. Thermodynamics of micelle formation.</a> J. Phys. Chem. 67 (9), 1796-1799 (1963).</li>
<li>Marullo, R., Kastantin, M., Drews, L. B., Tirrell, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peptide+contour+length+determines+equilibrium+secondary+structure+in+protein-analogous+micelles%5BTitle%5D)+AND+%22Biopolymers%22%5BJournal%5D)">Peptide contour length determines equilibrium secondary structure in protein-analogous micelles.</a> Biopolymers. 99 (9), 573-581 (2013).</li>
<li>Hilbich, C., Kisters-Woike, B., Reed, J., Masters, C. L., Beyreuther, K. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/1453457">Substitutions of hydrophobic amino acids reduce the amyloidogenicity of Alzheimer's disease βA4 peptides.</a> J. Mol. Biol. 228 (2), 460-473 (1992).</li>
<li>Trevino, S. R., Scholtz, J. M., Pace, C. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amino+Acid+Contribution+to+Protein+Solubility%3A+Asp%2C+Glu%2C+and+Ser+Contribute+more+Favorably+than+the+other+Hydrophilic+Amino+Acids+in+RNase+Sa%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Amino Acid Contribution to Protein Solubility: Asp, Glu, and Ser Contribute more Favorably than the other Hydrophilic Amino Acids in RNase Sa.</a> J. Mol. Biol. 366 (2), 449-460 (2007).</li>
<li>Kim, S. W., Shi, Y. Z., Kim, J. Y., Park, K. N., Cheng, J. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overcoming+the+barriers+in+micellar+drug+delivery%3A+Loading+efficiency%2C+in+vivo+stability%2C+and+micelle-cell+interaction%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opin+Drug+Delivery%22%5BJournal%5D)">Overcoming the barriers in micellar drug delivery: Loading efficiency, in vivo stability, and micelle-cell interaction.</a> Expert Opin Drug Delivery. 7 (1), 49-62 (2010).</li>
<li>Rangel-Yagui, C. O., Pessoa, A. Jr, Tavares, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Micellar+solubilization+of+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Pharm.+Pharm.+Sci%22%5BJournal%5D)">Micellar solubilization of drugs.</a> J. Pharm. Pharm. Sci. 8 (2), 147-163 (2005).</li>
<li>Batrakova, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fundamental+relationships+between+the+composition+of+pluronic+block+copolymers+and+their+hypersensitization+effect+in+MDR+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Pharm.+Res%22%5BJournal%5D)">Fundamental relationships between the composition of pluronic block copolymers and their hypersensitization effect in MDR cancer cells.</a> Pharm. Res. 16 (9), 1373-1379 (1999).</li>
<li>Chen, L. J., Lin, S. Y., Huang, C. C. <a target="_blank" href="http://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/jp9804345?journalCode=jpcbfk">Effect of Hydrophobic Chain Length of Surfactants on Enthalpy-Entropy Compensation of Micellization.</a> J. Phys. Chem. B. 102 (22), 4350-4356 (1998).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

MCP-1 PAMs zijn een veelbelovende moleculaire beeldvorming platform, bestaande uit een hydrofiele targeting peptide en hydrofobe staart die de zelf samengestelde aard van de nanoparticle drijft. Deze micel monocyt-targeting kan bereid worden door eenvoudige synthese en zuivering stappen van het MCP-1 peptide en DSPE-PEG (2000)-MCP-1. PAMs hebben vele gunstige kenmerken voor in vivo moleculaire beeldvorming zoals hun zelf-assemblage onder milde voorwaarden, intrinsieke biologische afbreekbaarheid en structurele e...

Cardiovasculaire aandoeningen moeten nog worden de belangrijkste doodsoorzaken wereldwijd met ongeveer 17,3 miljoen doden wereldwijd1. Cardiovasculaire aandoeningen zijn bijgedragen door atherosclerose, een toestand waarin plaques in de slagaders, waardoor remmende bloed en zuurstof stroom aan de cellen van het lichaam,2,3 opbouwen. De progressie van aderverkalking houdt de verdikking en de verharding van de slagaders door een ontstekingsreactie, onregelmatige lipide metabolisme en plaque-opbouw, leidt tot plaque breuk en myocardiaal infarct4,5. Endotheliale cellen express cytokines en hechting moleculen, waaronder MCP-1, dat zich aan de C-C chemokine receptor (CCR2 bindt) gevonden op het oppervlak van de monocyten6,7,8. Geoxideerde cholesterol omgezet in monocyten macrofagen in de vroege fase van de vorming van de plaque, die de ontstekingsreactie in de regio versterkt en leidt tot weefsel schade en de vorming van onstabiele of kwetsbare plaques9, 10.
Traditioneel, wordt atherosclerose geëvalueerd door de beoordeling van luminal stenose door de anatomische geschikt zijn met behulp van angiografie of echografie11,12. Deze methoden kunnen echter alleen bepalen ernstige vernauwing van de arteriële muur en niet het beginstadium van atherosclerose, als eerste plaque groei arteriële remodelleren veroorzaakt voor het onderhouden van de grootte van de slagader en bloed stroom tarief12,13, 14. Daarom, angiograms underrepresent atherosclerose prevalentie. Bovendien berekend noninvasive beeldvormingstechnieken zoals één foton emissie tomografie, positron emissie tomografie en magnetische resonantie beeldvorming zijn onlangs gebruikt om plaque morfologie karakteriseren als zij eerste details bieden kunnen en karakterisering van plaques. Echter, deze modaliteiten zijn vaak beperkt door het gebrek aan gevoeligheid, ruimtelijke resolutie, of vereisen het gebruik van ioniserende straling, waardoor imaging plaque progressie in verschillende stadia veel meer uitdagende15,16, 17. Een imaging bezorgingssysteem dat specifiek plaques in verschillende stadia van atherosclerose zou identificeren moet nog worden ontwikkeld.
Nanodeeltjes hebben aangetoond een opkomende platform voor in-vivo plaque targeting en diagnostiek18,19,20,21. In het bijzonder zijn PAMs voordelig vanwege hun chemische diversiteit en de mogelijkheid om een verscheidenheid van wordt, composities, maten, vormen en oppervlakte functionalization22tegemoet te komen. Peptide amfifielen (BK) bestaan uit een hydrofiele, peptide "headgroup" gekoppeld aan een hydrofobe staart, die doorgaans lipiden; deze structuur amfifiele verleent zelfassemblerende mogelijkheden en zorgt voor een multivalent weergave van peptiden op het oppervlak van het deeltje22,23,24. De headgroups peptide kan invloed hebben op de vorm van de deeltjes via vouwen en waterstof binding tussen peptiden25. Peptiden die spatel door β-sheet interactie is aangetoond dat het vormen van een verlengde micellen, terwijl α-Helix bevestiging beide bolvormig en verlengde micellen22,23,24, vormen kan 25,26,27. Polyethyleenglycol (PEG) linkers die schild van de oppervlakte lading van de peptide kunnen worden geplaatst tussen de hydrofiele peptide en de hydrofobe staart van PAMs, verbetering van de beschikbaarheid van de nanoparticle in de systemische circulatie28, 29 , 30 , 31. PAMs zijn ook voordelig omdat ze biocompatibel en is aangetoond dat ze hebben een breed scala aan toepassingen32,33. De oplosbaarheid in water van micellen biedt een voordeel ten opzichte van andere nanoparticle-gebaseerde systemen zoals bepaalde polymere nanodeeltjes die niet oplosbaar is in water en moeten worden opgeschort in solubilizers voor injecties34. Bovendien, maakt de mogelijkheid om PAMs die demonteren maken in reactie op een specifieke stimuli PAMs een aantrekkelijke kandidaat voor gecontroleerde intracellulaire drug delivery35.
Door binding aan de receptor CCR2 en zich ophopen in de aortaboog, werden PAMs eerder ontwikkeld voor monocyt gericht op voor het controleren van de verschillende stadia van atherosclerotische laesies in de aorta9. In ApoE- / - muizen, monocyt accumulatie verhoogt proportioneel plaque progressie36. Bovendien bleek dat patiënten met breuk-gevoelig, alsnog plaques hogere hoeveelheden monocyten37 bevatten. De wijziging van PAMs te nemen MCP-1 is daarom nuttig, omdat het zorgt voor meer doelgerichtheid specificiteit en differentiatie tussen atherosclerotische laesies van de vroege - en late-stadium. Deze proof-of-concept studies ook verifiëren dat PAMs zijn veilig genoeg om te worden pre-clinically gebruikt en worden leeggemaakt renally38. Aangezien monocyten en ontsteking karakteristiek voor andere ziekten zijn, hebben MCP-1 PAMs het potentieel om te worden gebruikt voor therapeutische en diagnostische toepassingen in andere ziekten buiten atherosclerose8,39,40 , 41.
Hierin, rapporteren we de fabricage van uiterst schaalbare en zelf gemonteerd MCP-1 PAMs dat aangetoond van het deeltje optimale omvang, oppervlakte lading en selectieve richten aan monocyten voor verbeterde beeldbewerkingstoepassingen in atherosclerose.

<table><tbody><tr><td>1,2-ethanedithiol</td><td>VWR</td><td>E0032</td><td>voor peptide synthese</td></tr><tr><td>10 mL wegwerpbare serologische pipetten</td><td>VWR</td><td>89130-898</td><td>voor celkweek</td></tr><tr><td>15 mL centrifugebuizen, polypropyleen</td><td>VWR</td><td>89401-566</td><td>voor verschillende toepassingen</td></tr><tr><td>2,5-dihydroxybenzoëzuur, 99%</td><td>Fisher Scientific</td><td>AC165200050</td><td>voor MALDI</td></tr><tr><td>25 mL wegwerpbare serologische pipetten</td><td>VWR</td><td>89130-900</td><td>voor celkweek</td></tr><tr><td>2-Mercaptoethanol, 50 mM</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>31350010</td><td>voor celkweek</td></tr><tr><td>5 mL wegwerpbare serologische pipetten</td><td>VWR</td><td>89130-896</td><td>voor celkweek</td></tr><tr><td>50 mL centrifugebuizen</td><td>VWR</td><td>89039-658</td><td>voor verschillende toepassingen</td></tr><tr><td>75 cm2 kweekfles</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-680-65</td><td>voor celkweek</td></tr><tr><td>75 mL reactievaatje</td><td>Protein Technologies</td><td>3000005</td><td>voor peptide synthese</td></tr><tr><td>96-wells celkweekplaat</td><td>VWR</td><td>40101-346</td><td>voor MTS assay</td></tr><tr><td>Acetonitril, HPLC-kwaliteit</td><td>Fisher Scientific</td><td>A998SK-4</td><td>voor HPLC-zuivering</td></tr><tr><td>Borosilicaatglas, 1 dram</td><td>VWR</td><td>66011-041</td><td>voor PAM-synthese</td></tr><tr><td>Borosilicaatglas pipet, lange tips</td><td>VWR</td><td>14673-043</td><td>voor verschillende toepassingen</td></tr><tr><td>Dekglas, 0,16-0,19 mm, 22 x 22 mm</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-542B</td><td>voor confocale microscopie</td></tr><tr><td>Cy5 amine</td><td>Abcam</td><td>ab146463</td><td>voor peptide conjugatie</td></tr><tr><td>Di-ethylether, ACS-kwaliteit</td><td>Fisher Scientific</td><td>E138-1</td><td>voor peptide precipitatie</td></tr><tr><td>Weggewerpbare spuiten, 20 mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-817-54</td><td>voor HPLC-zuivering</td></tr><tr><td>Dubbele neubauer getelde hemocytometers</td><td>VWR</td><td>63510-13</td><td>voor celtelling</td></tr><tr><td>DSPE-PEG(2000) amine</td><td>Avanti</td><td>880128P</td><td>voor peptide conjugatie</td></tr><tr><td>DSPE-PEG(2000) maleimide</td><td>Avanti</td><td>880126P</td><td>voor peptide conjugatie</td></tr><tr><td>DSPE-PEG(2000)-NHS ester&nbsp;</td><td>Nanocs</td><td>PG2-DSNS-10K</td><td>voor conjugatie met Cy5</td></tr><tr><td>Dulbecco's gemodificeerd adelaarsmedium-hoge glucose</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D5796-500ML</td><td>voor celkweek</td></tr><tr><td>Foetaal bovien serum, gekwalificeerd, hitte-geïnactiveerd</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>10438026</td><td>voor celkweek</td></tr><tr><td>Fmoc-L-Ala-OH /HBTU</td><td>Protein Technologies</td><td>PS3-H5-A</td><td>voor peptide synthese</td></tr><tr><td>Fmoc-L-Arg(Pbf)-OH /HBTU</td><td>Protein Technologies</td><td>PS3-H5-RBF</td><td>voor peptide synthese</td></tr><tr><td>Fmoc-L-Asn(Trt)-OH /HBTU</td><td>Protein Technologies</td><td>PS3-H5-NT</td><td>voor peptide synthese</td></tr><tr><td>Fmoc-L-Cys(Trt)-OH /HBTU</td><td>Protein Technologies</td><td>PS3-H5-CT</td><td>voor peptide synthese</td></tr><tr><td>Fmoc-L-Gln(Trt)-OH /HBTU</td><td>Protein Technologies</td><td>PS3-H5-QT</td><td>voor peptide synthese</td></tr><tr><td>Fmoc-L-Ile-OH /HBTU</td><td>Protein Technologies</td><td>PS3-H5-I</td><td>voor peptide synthese</td></tr><tr><td>Fmoc-L-Leu-OH /HBTU</td><td>Protein Technologies</td><td>PS3-H5-L</td><td>voor peptide synthese</td></tr><tr><td>Fmoc-L-Lys(Boc)-OH /HBTU</td><td>Protein Technologies</td><td>PS3-H5-KBC</td><td>voor peptide synthese</td></tr><tr><td>Fmoc-L-Phe-OH /HBTU</td><td>Protein Technologies</td><td>PS3-H5-F</td><td>voor peptide synthese</td></tr><tr><td>Fmoc-L-Ser(tBu)-OH /HBTU</td><td>Protein Technologies</td><td>PS3-H5-SB</td><td>voor peptide synthese</td></tr><tr><td>Fmoc-L-Thr(tBu)-OH /HBTU</td><td>Protein Technologies</td><td>PS3-H5-TB</td><td>voor peptide synthese</td></tr><tr><td>Fmoc-L-Tyr(tBu)-OH /HBTU</td><td>Protein Technologies</td><td>PS3-H5-YB</td><td>voor peptide synthese</td></tr><tr><td>Fmoc-L-Val-OH /HBTU</td><td>Protein Technologies</td><td>PS3-H5-V</td><td>voor peptide synthese</td></tr><tr><td>Fmoc-Lys(Boc)-wanghars, 100-200 mesh</td><td>Novabiochem</td><td>856013</td><td>voor peptide synthese</td></tr><tr><td>Mierenzuur, optima LC/MS-kwaliteit</td><td>Fisher Scientific</td><td>A117-50</td><td>voor HPLC-zuivering</td></tr><tr><td>Glycerol</td><td>VWR</td><td>M152-1L</td><td>voor confocale microscopie</td></tr><tr><td>Handtellingteller</td><td>Fisher Scientific</td><td>S90189</td><td>voor celtelling</td></tr><tr><td>Magneetscheerstaven, eivormig</td><td>VWR</td><td>58949-006</td><td>voor peptide conjugatie</td></tr><tr><td>Methanol, ACS gecertificeerd</td><td>Fisher Scientific</td><td>A412-4</td><td>voor PAM-synthese</td></tr><tr><td>MTS celproliferatie colorimetrische assay kit</td><td>VWR</td><td>10191-104</td><td>voor MTS assay</td></tr><tr><td>N,N-Dimethylformamide, sequencing-kwaliteit</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP1160-4</td><td>voor peptide synthese</td></tr><tr><td>N-Methylmorpholine</td><td>Protein Technologies</td><td>S-1L-NMM</td><td>voor peptide synthese</td></tr><tr><td>Paraformaldehyde</td><td>Fisher Scientific</td><td>AC416780250</td><td>voor het fixeren van cellen</td></tr><tr><td>PBS, pH 7.4</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>10010049</td><td>voor verschillende toepassingen</td></tr><tr><td>Penicilline/streptomycine, 10.000 U/mL</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>15140122</td><td>voor celkweek</td></tr><tr><td>Peptidesynthesevat, 25 mL&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>CG186011</td><td>voor peptide synthese</td></tr><tr><td>Fosforwolfraamzuur&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>A248-25</td><td>voor TEM</td></tr><tr><td>Piperidine</td><td>Spectrum</td><td>P1146-2.5LTGL</td><td>voor peptide synthese</td></tr><tr><td>Glad glazen microscoopglaasje 75 x 25 mm</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-550-A3</td><td>voor confocale microscopie</td></tr><tr><td>Reagensbekkens, steriele&nbsp;</td><td>VWR</td><td>95128093</td><td>voor celkweek</td></tr><tr><td>Zelfsluitende pincet</td><td>TedPella</td><td>5

synthese van monocyt-targeting peptide amfifiel micellen voor beeldvorming van atherosclerose

Synthesis of Monocyte-targeting Peptide Amphiphile Micelles for Imaging of Atherosclerosis

Atherosclerose is een belangrijke bijdrage aan hart-en vaatziekten, de belangrijkste oorzaak van overlijden wereldwijd, die 17,3 miljoen doden per jaar beweert. Atherosclerose is ook de belangrijkste oorzaak van plotselinge dood en myocardinfarct, aangespoord door unstable plaques die scheuren en occlude van het bloedvat zonder waarschuwing. Huidige imaging modaliteiten kan niet differentiëren tussen stabiele en de instabiele plaques die scheuren. Peptide amfifielen micellen (PAMs) kunnen dit nadeel overwinnen als ze kunnen worden gewijzigd met een verscheidenheid van targeting wordt die specifiek aan zieke weefsels binden. Monocyten zijn gebleken te zijn van vroege markers van atherosclerose, terwijl grote opeenstapeling van monocyten geassocieerd met plaques vatbaar wordt voor scheuren. Vandaar, nanodeeltjes die zijn op monocyten gericht kan kan worden gebruikt om te discrimineren verschillende stadia van atherosclerose. Te dien einde, hier, beschrijven we een protocol voor de bereiding van monocyt-targeting PAMs (monocyte chemoattractant protein-1 (MCP-1) PAMs). MCP-1 PAMs zelf worden geassembleerd door synthese onder milde voorwaarden aan formulier nanodeeltjes van 15 nm in diameter met in de buurt van neutrale oppervlakte lading. In vitro, PAMs bleken te zijn biocompatibel en had een hoge bindende affiniteit voor monocyten. De hierin beschreven methoden tonen belofte voor een brede waaier van toepassingen in atherosclerose, alsmede andere ontstekingsziekten.

Voorbereiding voor MCP-1 PAM Het motief van de CCR2-bindende (residuen 13-35) van het MCP-1 eiwit [YNFTNRKISVQRLASYRRITSSK] of gecodeerde peptide [YNSLVFRIRNSTQRKYRASIST] werd gewijzigd door het toevoegen van een cysteine residu op de N-terminus. De peptide MCP-1 werd gesynthetiseerd door een Fmoc-gemedieerde solid-phase methode met behulp van een geautomatiseerde peptide synthesizer. De ruwe peptide werd gezuiverd door omgekeerde-fase HPLC op een C8 kolom bij 50 ° C m...

Dit document stelt een methode waarbij de synthese en de karakterisering van monocyt-targeting peptide Amfifiel micellen en de corresponderende testen om te testen voor biocompatibiliteit en het vermogen van de micel binden aan monocyten.

Synthese van monocyt-targeting Peptide Amfifiel micellen voor beeldvorming van atherosclerose

Atherosclerosis is a major contributor to cardiovascular disease, the leading cause of death worldwide, which claims 17.3 million lives annually. ...

Het algemene doel van dit protocol is om monocyte-targeterende peptide-amfifiele micellen te synthetiseren voor atherosclerose-beeldvorming. Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van een belangrijke vraag in het cardiovasculaire veld over diagnostische beeldvorming van atherosclerotische plaque. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat de incorporatie van peptide-amfifiele micellen met MCP-1 een grotere targeting-specificiteit en differentiatie tussen vroege en late stadia van atherosclerotische laesies mogelijk maakt.De implicaties van deze techniek strekten zich uit tot de diagnose van plaque in verschillende stadia van atherosclerose, aangezien patiënten met ruptuurgevoelige, late stadia van plaques een hoger aantal monocyten bevatten. Hoewel deze methode inzicht kan bieden in atherosclerose, kan deze ook worden toegepast op andere ziekten, zoals kanker. Het demonstreren van de procedure met mij zal Jonathan Wang zijn, een afgestudeerde student uit ons laboratorium.Begin door 0,25 millimol fmach-L-lysine-bach-wong-hars in een reactievat af te wegen. Breng het vat over naar een chemische afzuigkap en spoel de zijden van het vat af met vijf milliliter dimethylformamide. Laad het reactievat en voorverpakte aminozuurbuisjes van de C-naar-N-terminus, op een geautomatiseerde tafelpeptidesynthesizer, inclusief een lege buis aan het einde voor de laatste deprotectiestap.Na het uitvoeren van de synthese, breng je de peptiden en hars over van het reactievat naar een scintillatiebuisje met twee tot drie milliliter methanol totdat alle hars is overgebracht. Wanneer de hars naar de bodem van het buisje is gezonken, verwijder je het supernaat en laat je de hars aan de lucht drogen, gevolgd door vacuümdrogen gedurende ten minste twee uur bij kamertemperatuur. Wanneer het buisje volledig droog is, gebruik je een klem om de onderste helft van een synthesevat op een arm shaker te bevestigen en voeg je twee milliliter splitsingsoplossing toe aan de scintillatiebuis.Breng het volledige volume van het peptidehars over naar het synthesevat en was de zijden van het vat met drie milliliter verse splitsingsoplossing. Schud het vat dan, afgedekt, gedurende vier uur bij 300 oscillaties per minuut. Aan het einde van de schudincubatie, giet je de gesplitste peptideoplossing in een gebalanceerd gewogen 50 milliliter kegelbuis en spoel je het synthesevat meerdere keren met de resterende splitsingsoplossing.Verdampen je de gesplitste peptideoplossing met stikstof totdat er minder dan vier milliliter oplossing overblijft in de centrifugeerbuis en voeg je 36 milliliter ijskoud ether toe aan de gesplitste peptideoplossing. Vortex de resulterende oplossing. Wanneer de suspensie volledig wit of geel wordt, pellet de peptiden door centrifugatie.Resuspendeer het peptide in 40 milliliter ijskoud ether en vortex en soniceer het peptide opnieuw. Na een tweede centrifugatie en supernatant decanteren, droog je de ruwe peptide-amfifiele pellet met stikstofgas purgering. Wanneer het ether zichtbaar is verdampt, voeg je 20 milliliter tweemaal gedestilleerd water toe aan de buis en vortex en soniceer de buis tot het peptide volledig in oplossing is opgelost.Vries de oplossing in en lifelize tot droog. Weeg dan de buis weer en los het ruwe peptide op in vijf milligram per milliliter water. Injecteer vervolgens het volledige volume van ruw MCP-1-peptide in een hoogwaardige vloeistofchromatografie of HPLC-instrument.Analyseer elke fractie met behulp van matrix-geassisteerde laserdesorptionsionisatie-massaspectrometrie voor de verwachte productmassa-lading bij 2.890. Combineer vervolgens de productfracties. Blaas het acetonitriel weg en vries en lifelize de gezuiverde peptiden tot droog.Om de MCP-1-peptide-amfifielen of PA's voor te bereiden, lost u eerst het lifelized-peptide op in 15 milligram per milliliter water en combineert u de peptide-oplossing met 15 milligram per milliliter DSPE PEG 2000-millimide-oplossing. Voeg een mol natriumhydroxide druppelsgewijs toe tot de pH van de oplossing gelijk is aan zeven. Vervolgens vijf minuten stikstof purgering, gevolgd door overnacht roeren.De volgende ochtend vries en lifelize je de oplossing. Wanneer het ruwe product droog is, lost u het vaste stof op in vijf milligram per milliliter water en zuivert u het peptide door HPLC, zoals zojuist is gedemonstreerd. Om de PA-membranen te assembleren, lost u 1,75 milligram van de MCP-1 PA's op in drie milliliter methanol in een one dram-buisje en soniceer tot de MCP-1 PA volledig is opgelost.Verdampen je het methanol onder stikstof terwijl je het buisje in een cirkelvorkige beweging beweegt en het resterende methanol van de zijden van het buisje spoelt, totdat een uniforme film aan de bodem is gevormd. Droog de film 's nachts onder vacuüm. De volgende ochtend hydrateer je de film met drie milliliter water om een 100 micromolair MCP-1 PAM-oplossing te maken en vortex en soniceer de oplossing voorzichtig tot het helder is.Incubeer de oplossing gedurende 30 minuten bij 80 graden Celsius en koel vervolgens de resulterende dispersie. In het volgende representatieve experiment werden MCP-1 en verscrambeld peptide gezuiverd door omgekeerde fase HPLC op een CA-kolom bij 50 graden Celsius met behulp van 0,1% trifluorazijnzuur in acetonitrielwatermengsels. En gekenmerkt door matrix-geassisteerde laserdesorptionsionisatie-massaspectrometrie, zoals zojuist is gedemonstreerd.Peptiden bevattende peptiden werden geconjugeerd aan DSPE PEG 2000-millamide om DSPE PEG 2000-peptideconjugaten via een thioether-binding te verkrijgen en gezuiverd door HPLC met behulp van een C4-kolom. Dynamische lichtverstrooiingsanalyse en transmissie-elektronenmicroscopiebeeldvorming van de monocyte-targeting PAM's onthulden goed gedispergeerde sferische nanodeeltjes met licht positieve zeta-potentialen. Circulaire dicroïsmespectroscopie-analyse bevestigde dat de incorporatie van het MCP-1-peptide binnen de micel de secundaire structuur verbeterde.De incubatie van monocyten met concentraties MCP-1-peptide, MCP-1 PAM, verscrambeld peptide en verscrambeld PAM tot 100

synthesis-monocyte-targeting-peptide-amphiphile-micelles-for-imaging

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Bio-engineering

MR kanker moleculaire beeldvorming aantonen met een kleine peptide gerichte MRI-contrastmiddel specifiek voor clotted plasma-eiwitten in tumor stroma in een muizen prostaatkanker model.

MR Molecular imaging van prostaatkanker met een kleine moleculaire CLT1 Peptide Gerichte contrastmiddel

Een voorbeeld van een nano geneesmiddel op basis polymalic zuur gepresenteerd naar het rationele ontwerp van gepersonaliseerde geneeskunde die voor kanker. Het beschrijft de synthese van een nano geneesmiddel Her2-positieve menselijke borst kanker in naakt muizen.

Polymalic Acid-gebaseerde Nano Biopolymeren voor Targeting van Multiple Tumor Markers: een kans voor Gepersonaliseerde Geneeskunde?

We tonen de voorbereiding en bespreken de haalbaarheid van cellulaire voertuigen die gouden nanostaven bevatten voor de foto-akoestische beeldvorming van kanker.

Voorbereiding en Fotoakoestisch Analyse van Cellular Voertuigen die goud nanorods

Microwave technologie maakt extreem snelle synthese van ijzeroxide nanodeeltjes voor atherosclerose plaque karakterisering. Het gebruik van een aminobisphosphonate in de buitenzijde van de nanodeeltjes verschaft een snelle accumulatie in de atherosclerotische gebied.

-Magnetron gedreven Synthese van ijzeroxide nanopartikels voor snelle detectie van atherosclerose

Om kankermedicijnen met hoge specificiteit en verminderde bijwerkingen naar tumorlocaties te brengen, zijn nieuwe methoden op basis van nanodeeltjes vereist. Hier beschrijven we disulfide-gekruiste micellen die gemakkelijk kunnen worden bereid door waterstofperoxide-gemedieerde oxidatie en die zich efficiënt kunnen dissociëren in een reducerende tumoromgeving om ladingen vrij te geven.

Een Facile en efficiënte aanpak voor de productie van omkeerbare Disulfide Cross-linked micellen

Viral afkomstige peptiden gekoppeld aan antilichaam-geconjugeerde (ACs) is een aanpak die wint dynamiek als gevolg van het potentieel van het leveren van moleculaire payloads met verhoogde tumor cel accumulatie. Gebruik makend van gemeenschappelijke methoden voor evaluatie van peptide conjugatie, AC en lading intracellulaire accumulatie en tumor gericht op, helpt dit protocol onderzoekers tijdens de cruciale eerste ontwikkelingsfasen.

Eerste beoordeling van antilichaam-geconjugeerde bewerkt met virale afkomstige peptiden voor verhoging van cellulaire accumulatie en verbetering van de Tumor gericht op

Monocyten zijn belangrijke bemiddelaars/mediators van arteriogenesis in het kader van perifere arteriële ziekte. Met behulp van een kelder membraan-achtige matrix en intravital microscopie, onderzoekt dit protocol monocyt homing en tumor-gerelateerde angiogenese na monocyt injectie in de femorale slagader afbinding lymfkliertest model.

Intravital microscopie van monocyt Homing en Tumor-gerelateerde angiogenese in een lymfkliertest Model van perifere arteriële ziekte

Beschrijven we een protocol voor het meten van transmigratie door monocyten over menselijke endothelial monolayers en hun daaropvolgende rijping in schuim cellen. Dit biedt een veelzijdige methode te beoordelen van de atherogene eigenschappen van monocyten geïsoleerd uit mensen met verschillende ziekten en te evalueren van factoren in het bloed die deze neiging kunnen versterken.

Kwantificering van monocyt zielsverhuizing en schuim celvorming van personen met chronische inflammatoire aandoeningen

Hier presenteren we een protocol om de Chemotactische activiteit van bloed monocyten in muizen modellen te kwantificeren, om de effecten van nutritionele, farmacologische en genetische interventies op bloed monocyten te beoordelen en om de in het bloed geafgeleide macrofagen te karakteriseren in Muismodellen met behulp van monocyte-chemoaantretant proteïne-1 (MCP-1)-geladen in de kelder membraan-afgeleide gel stekkers.

Kwantificering van monocyten Chemotactische activiteit in vivo en karakterisering van bloed monocyten afgeleide macrofagen

Hier beschrijven we het gebruik van een zelf-assemblage drie-dimensionale steiger aan de cultuur menselijke neurale stamcellen. We presenteren een protocol bij de cellen van de steigers vrij te worden geanalyseerd vervolgens bijvoorbeeld door flowcytometrie. Dit protocol kan worden aangepast aan andere soorten cellen om gedetailleerde mechanistisch studies uit te voeren.

Teelt van menselijke neurale progenitorcellen in een 3-dimensionale Zelf-assemblage Peptide Hydrogel

Leer de synthese van monocyt-targeting peptide-amfifiele micellen voor beeldvorming van atherosclerose. Deze methode verbetert de specificiteit voor het onderscheiden van vroege en late stadia van atherosclerotische laesies.

Synthese van monocyt-targeting Peptide Amfifiel micellen voor beeldvorming van atherosclerose

Meer video's verkennen