Name: Methodologie voor biomimetische chemische neuromodulatie van Rat netvlies met de Neurotransmitter glutamaat In Vitro (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-12-19T14:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 56 s
Description: Leer biomimetische chemische neuromodulatie van het rattennetvlies met glutamaat in vitro. Deze methode biedt een natuurlijker alternatief voor elektrische stimulatie bij de behandeling van blindheid door fotoreceptordegeneratie.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Het werk gepresenteerd in het papier werd gesteund door de National Science Foundation, opkomende grenzen in onderzoek en innovatie (NSF-Emergency First Response Instructor) programma verlenen nummer 0938072. De inhoud van dit document zijn uitsluitend de verantwoordelijkheid van de auteurs en vertegenwoordigen niet noodzakelijk de officiële standpunten van de NSF. De auteurs wil ook Dr. Samsoon Inayat bedanken voor zijn werk ontwerpen en testen van de eerste experimentele opstelling voor chemische stimulatie en Mr. Ashwin Raghunathan voor zijn werk ontwerpen, fabriceren en het evalueren van de MPS microfluidic apparaat dat wordt gebruikt in Deze studie.

<ol><li>Pascolini, D., Mariotti, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+estimates+of+visual+impairment%3A+2010%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Global estimates of visual impairment: 2010.</a> Br J Ophthalmol. , (2011).</li>
<li>Fritsche, L. G., Fariss, R. N., Stambolian, D., Abecasis, G. R., Curcio, C. A., Swaroop, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-Related+Macular+Degeneration%3A+Genetics+and+Biology+Coming+Together%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Genomics+Hum+Genet%22%5BJournal%5D)">Age-Related Macular Degeneration: Genetics and Biology Coming Together.</a> Annu Rev Genomics Hum Genet. 15, 151-171 (2014).</li>
<li>Marc, R. E., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/17591910">Neural reprogramming in retinal degeneration.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 48, 3364-3371 (2007).</li>
<li>Jones, B. W., Kondo, M., Terasaki, H., Lin, Y., McCall, M., Marc, R. E. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/22644448">Retinal remodeling.</a> Jpn J Ophthalmol. 56, 289-306 (2012).</li>
<li>Soto, F., Kerschensteiner, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synaptic+remodeling+of+neuronal+circuits+in+early+retinal+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Synaptic remodeling of neuronal circuits in early retinal degeneration.</a> Front Cell Neurosci. 9, (2015).</li>
<li>Trenholm, S., Awatramani, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Origins+of+spontaneous+activity+in+the+degenerating+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Origins of spontaneous activity in the degenerating retina.</a> Front Cell Neurosci. 9, (2015).</li>
<li>Euler, T., Schubert, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+Independent+Oscillatory+Networks+in+the+Degenerating+Retina%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Multiple Independent Oscillatory Networks in the Degenerating Retina.</a> Front Cell Neurosci. 9, (2015).</li>
<li>Boye, S. E., Boye, S. L., Lewin, A. S., Hauswirth, W. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Comprehensive+Review+of+Retinal+Gene+Therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">A Comprehensive Review of Retinal Gene Therapy.</a> Mol Ther. 21, 509-519 (2013).</li>
<li>Schwartz, S. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+embryonic+stem+cell-derived+retinal+pigment+epithelium+in+patients+with+age-related+macular+degeneration+and+Stargardt%27s+macular+dystrophy%3A+follow-up+of+two+open-label+phase+1%2F2+studies%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet%22%5BJournal%5D)">Human embryonic stem cell-derived retinal pigment epithelium in patients with age-related macular degeneration and Stargardt's macular dystrophy: follow-up of two open-label phase 1/2 studies.</a> The Lancet. 385, 509-516 (2015).</li>
<li>Reh, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photoreceptor+Transplantation+in+Late+Stage+Retinal+Degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Photoreceptor Transplantation in Late Stage Retinal Degeneration.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 57, (2016).</li>
<li>Zrenner, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fighting+blindness+with+microelectronics%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Fighting blindness with microelectronics.</a> Sci Transl Med. 5, (2013).</li>
<li>Humayun, M. S., de Juan, E. Jr, Dagnelie, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Bionic+Eye%3A+A+Quarter+Century+of+Retinal+Prosthesis+Research+and+Development%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">The Bionic Eye: A Quarter Century of Retinal Prosthesis Research and Development.</a> Ophthalmol. 123, S89-S97 (2016).</li>
<li>Cruz, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Argus+II+epiretinal+prosthesis+system+allows+letter+and+word+reading+and+long-term+function+in+patients+with+profound+vision+loss%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">The Argus II epiretinal prosthesis system allows letter and word reading and long-term function in patients with profound vision loss.</a> Br J Ophthalmol. 97, 632-636 (2013).</li>
<li>Zrenner, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subretinal+electronic+chips+allow+blind+patients+to+read+letters+and+combine+them+to+words%5BTitle%5D)+AND+%22P+R+Soc+B%22%5BJournal%5D)">Subretinal electronic chips allow blind patients to read letters and combine them to words.</a> P R Soc B. 278, 1489-1497 (2011).</li>
<li>Stronks, H. C., Dagnelie, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+functional+performance+of+the+Argus+II+retinal+prosthesis%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Rev+Med+Devices%22%5BJournal%5D)">The functional performance of the Argus II retinal prosthesis.</a> Expert Rev Med Devices. 11, 23-30 (2014).</li>
<li>Stingl, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Artificial+vision+with+wirelessly+powered+subretinal+electronic+implant+alpha-IMS%5BTitle%5D)+AND+%22P+R+Soc+B%22%5BJournal%5D)">Artificial vision with wirelessly powered subretinal electronic implant alpha-IMS.</a> P R Soc B. 280, (2013).</li>
<li>Rizzo, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Update+on+retinal+prosthetic+research%3A+the+Boston+Retinal+Implant+Project%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuroophthalmol%22%5BJournal%5D)">Update on retinal prosthetic research: the Boston Retinal Implant Project.</a> J Neuroophthalmol. 31, 160-168 (2011).</li>
<li>Ayton, L. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((First-in-Human+Trial+of+a+Novel+Suprachoroidal+Retinal+Prosthesis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">First-in-Human Trial of a Novel Suprachoroidal Retinal Prosthesis.</a> PLoS ONE. 9, e115239(2014).</li>
<li>Chuang, A. T., Margo, C. E., Greenberg, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+implants%3A+a+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Retinal implants: a systematic review.</a> Br J Ophthalmol. 98, 852-856 (2014).</li>
<li>Cai, C., Twyford, P., Fried, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+response+of+retinal+neurons+to+high-frequency+stimulation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neural+Eng%22%5BJournal%5D)">The response of retinal neurons to high-frequency stimulation.</a> J Neural Eng. 10, 036009(2013).</li>
<li>Eiber, C. D., Lovell, N. H., Suaning, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Attaining+higher+resolution+visual+prosthetics%3A+a+review+of+the+factors+and+limitations%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neural+Eng%22%5BJournal%5D)">Attaining higher resolution visual prosthetics: a review of the factors and limitations.</a> J Neural Eng. 10, 011002(2013).</li>
<li>Humayun, M., Propst, R., de Juan, E., McCormick, K., Hickingbotham, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bipolar+surface+electrical+stimulation+of+the+vertebrate+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Bipolar surface electrical stimulation of the vertebrate retina.</a> Arch Ophthalmol. 112, 110-116 (1994).</li>
<li>Zrenner, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Can+subretinal+microphotodiodes+successfully+replace+degenerated+photoreceptors%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Vision+Res%22%5BJournal%5D)">Can subretinal microphotodiodes successfully replace degenerated photoreceptors?</a> Vision Res. 39, 2555-2567 (1999).</li>
<li>Majji, A. B., Humayun, M. S., Weiland, J. D., Suzuki, S., D'Anna, S. A., de Juan, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-Term+Histological+and+Electrophysiological+Results+of+an+Inactive+Epiretinal+Electrode+Array+Implantation+in+Dogs%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Long-Term Histological and Electrophysiological Results of an Inactive Epiretinal Electrode Array Implantation in Dogs.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 40, 2073-2081 (1999).</li>
<li>Peterman, M. C., Noolandi, J., Blumenkranz, M. S., Fishman, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Localized+chemical+release+from+an+artificial+synapse+chip%5BTitle%5D)+AND+%22PNAS%22%5BJournal%5D)">Localized chemical release from an artificial synapse chip.</a> PNAS. 101, 9951-9954 (2004).</li>
<li>Finlayson, P. G., Iezzi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glutamate+stimulation+of+retinal+ganglion+cells+in+normal+and+s334ter-4+rat+retinas%3A+a+candidate+for+a+neurotransmitter-based+retinal+prosthesis%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Glutamate stimulation of retinal ganglion cells in normal and s334ter-4 rat retinas: a candidate for a neurotransmitter-based retinal prosthesis.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 51, 3619-3628 (2010).</li>
<li>Inayat, S., Rountree, C. M., Troy, J. B., Saggere, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+stimulation+of+rat+retinal+neurons%3A+feasibility+of+an+epiretinal+neurotransmitter-based+prosthesis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neural+Eng%22%5BJournal%5D)">Chemical stimulation of rat retinal neurons: feasibility of an epiretinal neurotransmitter-based prosthesis.</a> J Neural Eng. 12, 016010(2015).</li>
<li>Rountree, C. M., Inayat, S., Troy, J. B., Saggere, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+stimulation+of+the+retina+with+subretinally+injected+exogenous+neurotransmitter%3A+A+biomimetic+alternative+to+electrical+stimulation%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Differential stimulation of the retina with subretinally injected exogenous neurotransmitter: A biomimetic alternative to electrical stimulation.</a> Sci Rep. 6, 38505(2016).</li>
<li>Ray, A., Sun, G. J., Chan, L., Grzywacz, N. M., Weiland, J., Lee, E. -J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphological+alterations+in+retinal+neurons+in+the+S334ter-line3+transgenic+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Tissue+Res%22%5BJournal%5D)">Morphological alterations in retinal neurons in the S334ter-line3 transgenic rat.</a> Cell Tissue Res. 339, 481-491 (2010).</li>
<li>Martinez-Navarrete, G., Seiler, M. J., Aramant, R. B., Fernandez-Sanchez, L., Pinilla, I., Cuenca, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+degeneration+in+two+lines+of+transgenic+S334ter+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Retinal degeneration in two lines of transgenic S334ter rats.</a> Exp Eye Res. 92, 227-237 (2011).</li>
<li>Sigma Aldrich. Sigma Aldrich Ames Medium Product Information Sheet. , Available from:
 <a target="_blank" href="https://www.sigmaaldrich.com/content/dam/sigma-aldrich/docs/Sigma/Product_Information_Sheet/1/a1420pis.pdf">https://www.sigmaaldrich.com/content/dam/sigma-aldrich/docs/Sigma/Product_Information_Sheet/1/a1420pis.pdf</a> (2017).</li>
<li>Reinhard, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Step-By-Step+instructions+for+retina+recordings+with+perforated+multi+electrode+arrays%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Step-By-Step instructions for retina recordings with perforated multi electrode arrays.</a> PLoS ONE. 9, e106148(2014).</li>
<li>Izumi, Y., Kirby, C. O., Benz, A. M., Olney, J. W., Zorumski, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((M%C3%BCller+cell+swelling%2C+glutamate+uptake%2C+and+excitotoxic+neurodegeneration+in+the+isolated+rat+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Müller cell swelling, glutamate uptake, and excitotoxic neurodegeneration in the isolated rat retina.</a> Glia. 25, 379-389 (1999).</li>
<li>Tunnicliff, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glutamate+uptake+by+chick+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+J%22%5BJournal%5D)">Glutamate uptake by chick retina.</a> Biochem J. 150, 297-299 (1975).</li>
<li>Schwartz, E. A., Tachibana, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrophysiology+of+glutamate+and+sodium+co-transport+in+a+glial+cell+of+the+salamander+retina%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol+%28Lond%29%22%5BJournal%5D)">Electrophysiology of glutamate and sodium co-transport in a glial cell of the salamander retina.</a> J Physiol (Lond). 426, 43-80 (1990).</li>
<li>Muller, A., Maurin, L., Bonne, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Free+radicals+and+glutamate+uptake+in+the+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Gen+Pharmacol-+Vasc+S%22%5BJournal%5D)">Free radicals and glutamate uptake in the retina.</a> Gen Pharmacol- Vasc S. 30, 315-318 (1998).</li>
<li>Dhingra, N. K., Kao, Y. -H., Sterling, P., Smith, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contrast+threshold+of+a+brisk-transient+ganglion+cell+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22J+of+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Contrast threshold of a brisk-transient ganglion cell in vitro.</a> J of Neurophysiol. 89, 2360-2369 (2003).</li>
<li>Ahlers, M. T., Ammermüller, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+system+for+precise+temperature+control+of+isolated+nervous+tissue+under+optical+access%3A+Application+to+multi-electrode+recordings%5BTitle%5D)+AND+%22J+of+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">A system for precise temperature control of isolated nervous tissue under optical access: Application to multi-electrode recordings.</a> J of Neurosci Methods. 219, 83-91 (2013).</li>
<li>Feke, G. T., Tagawa, H., Deupree, D. M., Goger, D. G., Sebag, J., Weiter, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+flow+in+the+normal+human+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Blood flow in the normal human retina.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 30, 58-65 (1989).</li>
<li>The Retina. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Neuroscience%22">Neuroscience</a>. Purves, D., et al. , 2nd edition, Sinauer Associates. (2001).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

De methode die hier gepresenteerd demonstreert een unieke neurale stimulatie paradigma, waarin retinale neuronen chemisch worden gestimuleerd door het injecteren van inheemse neurotransmitter chemische stoffen in de ondergrond van het netvlies in vitro. Deze techniek van chemische stimulatie biedt verschillende ten opzichte van de conventionele elektrische stimulatie techniek, met inbegrip van selectiviteit en hoge focal specificiteit van doel neuronen. Het protocol bovenstaande gegevens hoe klein volume pneumat...

Fotoreceptor degeneratieve ziekten, zoals retinitis pigmentosa en leeftijdsgebonden maculadegeneratie, zijn belangrijkste overneembare oorzaken van verlies van de visie en zijn momenteel ongeneeslijke1,2. Hoewel deze ziekten ontstaan uit een aantal specifieke genetische mutaties, worden fotoreceptor degeneratieve ziekten gekenmerkt als een groep door het progressieve verlies van de fotoreceptor cellen in het netvlies, waardoor uiteindelijk blindheid. Het verlies van researchdieren triggers wijdverspreid in het netvlies het remodelleren maar overleven retinale neuronen, met inbegrip van de bipolaire cellen en RGCs, blijven intact en relatief functioneel zelfs in gevorderde stadia van fotoreceptor degeneratie3 ,4,5,6,7.
De mechanismen en de pathologie van deze ziekten zijn goed gekarakteriseerd3,4,5,6,7 , maar een effectieve behandeling blijft ongrijpbaar. In de afgelopen drie decennia, hebben de onderzoekers wereldwijd een scala aan therapeutische behandelingen voor het herstel van de visie aan de betrokkenen met fotoreceptor degeneratieve ziekten met inbegrip van gene therapie8, stamcel behandeling9, onderzocht netvlies transplantatie10, en kunstmatige stimulatie11,12 van de overlevende retinale neuronen. Van deze zijn de meest klinisch beschikbare netvlies prothesen, die kunstmatige neurostimulatie-apparaten die een matrix van elektroden elektrisch bipolaire cellen of de RGCs stimuleren in specifieke patronen met het doel van oudsher hebben gebruikt het creëren van kunstmatige visuele waarnemingen in patiënten11. Huidige generatie elektrische prothesen, zoals de Argus II13 en Alpha-IMS14 apparaten, klinische goedkeuring hebben bereikt en voorbereidende studies hebben aangegeven dat ze verbeteren van de levenskwaliteit voor patiënten door het herstel van kunnen een maatregel van visie met behulp van zowel Epiretinaal (voorkant van de retina) en subretinal (achterkant van het netvlies) geïmplanteerd apparaten15,16. Onderzoeksgroepen over de hele wereld zijn bezig met het bevorderen van de retinale prothesen buiten de successen van deze eerste generatie apparaten17,18,19,20 , maar hebben te kampen moeilijkheden ontwerpen een elektrische prothese kunnen herstellen van hoge gezichtsscherpte visie onder het niveau van juridische blindheid aan patiënten. Recente studies hebben aangetoond dat het bereiken van hogere ruimtelijke resolutie dan de huidige generatie gegevensgestuurd elektrische gebaseerde prothesen is uitdagend vanwege deze beperking tot gratis injectie, die noodzaakt het gebruik van grote elektroden veilig stimuleren netvlies neuronen ten koste van ruimtelijke resolutie, dwz gezichtsscherpte11,21. Bovendien elektrische stimulatie is verder beperkt omdat het meestal alle nabijgelegen cellen stimuleert en daarom onnatuurlijk en verwarrend waarnemingen bij patiënten lokt, vooral omdat er een inherent onnatuurlijke stimulatie paradigma21. De vroege successen van elektrische stimulatie hebben echter aangetoond dat kunstmatige neurostimulatie kunnen een effectieve behandeling voor fotoreceptor degeneratieve ziekten. Dit doet veronderstellen dat een nog doeltreffender behandeling haalbaar wellicht door het stimuleren van het netvlies met neurotransmitter chemicaliën, de natuurlijke agentia communicatiemiddel op chemische synapsen. Het doel van de methode die in dit document gepresenteerd is aan de therapeutische haalbaarheid onderzoeken van chemische stimulatie, die tot doel heeft na te bootsen de natuurlijke systeem van synaptic communicatie tussen retinale neuronen, als een alternatief voor elektrische stimulatie van biomimetische voor een retinale prothese.
Vertaling van het concept van therapeutische chemische stimulatie tot een chemische retinale prothese is gebaseerd op chemisch activeren doel retinale neuronen met kleine hoeveelheden van inheemse neurotransmitters, zoals glutamaat, uitgebracht door middel van een microfluidic apparaat bestaande uit een groot scala aan microports in reactie op visuele stimulatie. Op deze manier zou een chemische retinale prothese in wezen een biomimetische kunstmatige fotoreceptor laag waarmee fotonen natuurlijk het bereiken van het netvlies naar chemische signalen worden omgezet. Aangezien deze chemische signalen dezelfde neurotransmitters gebruikt gebruiken in normale netvlies signalering en de overlevende retinale neuronen van een ontaarde netvlies door de dezelfde synaptic trajecten gebruikt door normaal gezichtsvermogen trajecten, de resulterende visuele stimuleren perceptie bereikt door middel van een chemische retinale prothese zou meer natuurlijke en begrijpelijke t.o.v. een opgeroepen door middel van een elektrische prothese. Bovendien, aangezien de microports via welke neurotransmitters worden uitgebracht kan worden gemaakt zeer kleine en gekleed in hoge dichtheid, in tegenstelling tot de elektroden, een potentiële chemische prothetische zou kunnen bereiken meer focale stimulatie en hogere ruimtelijke resolutie dan een elektrische prothese. Dus, op basis van deze potentiële voordelen, een chemische retinale prothese biedt een zeer veelbelovend alternatief voor elektrische prothesen.
Chemische stimulatie van het netvlies, echter is relatief weinig onderzocht tot voor kort. Terwijl elektrische stimulatie van het netvlies goed decennia van werk door middel van klinische studies13,2322, in vitroen in vivo23,24 gekenmerkt ,14, studies over chemische stimulatie geweest beperkt uitsluitend tot een paar in vitro werken25,26,27,28. Iezzi en Finlayson26 en Inayat et al. 27 aangetoond Epiretinaal chemische stimulatie van het netvlies in vitro met behulp van een enkele indicatorelektrode en een multielectrode matrix (MEA), respectievelijk, de glutamaat opgeroepen reacties van retinale neuronen opnemen. Meer recentelijk Rountree et al. 28 aangetoond de differentiële stimulatie van de OFF and ON retinale trajecten met behulp van glutamaat uit de subretinal kant en een MEA opnemen van de neuronale reacties van meerdere sites op het netvlies.Hoewel deze werken de haalbaarheid van chemische stimulatie preliminair opgericht hebben, verdere studies zijn essentieel voor de onderzoeken veel aspecten van deze aanpak die verder gaan dan gericht tot nu toe25,26,27 , 28, en fine-tunen van de therapeutische stimulatie parameters in zowel in vitro als in vivo dierlijke modellen voor het vertalen van dit concept naar een chemische retinale prothese zoals hierboven besproken. Echter op dit moment is er geen vastgelegde methode voor het uitvoeren van chemische stimulatie van het netvlies in de literatuur en de methoden die worden gebruikt in de eerdere werken niet zijn beschreven in zo gedetailleerd als essentieel voor Dr. studies zou zijn. De reden voor deze methoden papier daarom een duidelijk afgebakende kader te bieden voor het uitvoeren van in vitro chemische stimulatie van het netvlies voor deze onderzoekers ook geïnteresseerd bij het repliceren van onze vorige studies27, 28 of verder bevorderen dit ontluikende concept van chemische neurostimulatie.
Hier tonen we een methode voor het uitvoeren van in vitro chemische stimulatie van het netvlies neuronen in wholemount netvlies van wild-type ratten en een fotoreceptor gedegenereerd rat model dat nauw samen van de Nabootsers van de progressie van fotoreceptor degeneratieve aandoeningen bij de mens. De grondgedachte achter deze stimulatie-methode in in vitro modellen ontwikkelen is om te evalueren van de therapeutische bereiken van verschillende parameters van de stimulatie en bestuderen van de neurale reactie kenmerken dat zou onmogelijk of moeilijk te observeren in in vivo modellen, vooral tijdens de eerste studies gericht op een beoordeling van de haalbaarheid van deze aanpak. In deze procedure tonen we zowel één site en gelijktijdige multi-site chemische stimulaties van netvlies door het leveren van kleine hoeveelheden van 1 mM glutamaat in de buurt van de retinale neuronen doel via verkrijgbare één poort glas micropipetten en een op maat micromachined Multi-port microfluidic apparaat, respectievelijk. Terwijl zowel één site en meerdere sites stimulaties de fundamentele doelstelling bereiken van het onderzoek naar de therapeutische haalbaarheid van chemische neuromodulatie, dient elk een specifiek doel met een uniek voordeel. De stimulatie van één site, die kan worden bereikt met verkrijgbare vooraf getrokken glas micropipetten, kan worden gebruikt voor het injecteren van chemicaliën direct in de ondergrond van het netvlies op één site en dient om te onderzoeken of de regering van Cambodja waarneembare spike tarief reacties die vergelijkbaar met visueel evoked lichte reacties zijn kunnen focally worden ontlokte onder de injectieplaats. Aan de andere kant, multi-site stimulatie, waarvoor een speciaal gefabriceerde multipoort microfluidic apparaat, kan worden gebruikt voor het injecteren van chemicaliën ruimtelijk op meerdere locaties over het oppervlak van het netvlies en dient om te onderzoeken hoe goed glutamaat-opgeroepen RCG reactie patronen komen overeen met de glutamaat injectie patronen in patroon stimulatie studies.

<table><tbody><tr><td>Microelectrode array, perforated layout</td><td>Multi Channel Systems, GmbH</td><td>60pMEA200/30iR-Ti-pr</td><td>http://www.multichannelsystems.com/products/microelectrode-arrays/60pmea20030ir-ti</td></tr><tr><td>MEA amplifier</td><td>Multi Channel Systems, GmbH</td><td>MEA1060-Inv</td><td>http://www.multichannelsystems.com/products/mea1060-inv</td></tr><tr><td>Bottom perfusion groundplate for pMEA</td><td>Multi Channel Systems, GmbH</td><td>MEA1060-Inv-(BC)-PGP</td><td>http://www.multichannelsystems.com/products/mea1060-inv-bc-pgp</td></tr><tr><td>3-axis Motorized Micromanipulator</td><td>Sutter Instruments, Novato, CA</td><td>MP-285</td><td>https://www.sutter.com/MICROMANIPULATION/mp285.html</td></tr><tr><td>Micromanipulator Control System</td><td>Sutter Instruments, Novato, CA</td><td>MPC-200</td><td>https://www.sutter.com/MICROMANIPULATION/mpc200.html</td></tr><tr><td>Gantry style micromanipulator stand with linear slide</td><td>Sutter Instruments, Novato, CA</td><td>MT-75/LS</td><td>https://www.sutter.com/STAGES/mt75.html</td></tr><tr><td>8-channel Programmable Multichannel Pressure Injector</td><td>OEM: MicroData Instrument, S. Plainfield, NJ Vendor: Harvard Apparatus UK</td><td>PM-8000 or PM-8</td><td>OEM: http://www.microdatamdi.com/pm8000.htm Vendor: https://www.harvardapparatus.co.uk/webapp/wcs/stores/servlet/product_11555_10001_39808_-1 _HAUK_ProductDetail</td></tr><tr><td>Axopatch 200A Integrating Patch Clamp Amplifier</td><td>Molecular Devices, Sunnyvale, CA</td><td>Axopatch 200A</td><td>Axopatch 200A is vervangen door een nieuwer model Axopatch 200B: https://www.moleculardevices.com/systems/axon-conventional-patch-clamp/axopatch-200b-amplifier</td></tr><tr><td>Patch clamp headstage</td><td>Molecular Devices, Sunnyvale, CA</td><td>CV 201A</td><td>http://mdc.custhelp.com/app/answers/detail/a_id/16554/~/axopatch-200a%3A-selection-cv-headstage</td></tr><tr><td>Vacuum waste kit</td><td>ALA Scientific Instruments, Farmingdale, NY</td><td>VMK</td><td>http://alascience.com/product/vacuum-waste-kit/</td></tr><tr><td>Pipette holder</td><td>Warner Instruments, Hamden, CT</td><td>QSW-A10P</td><td>https://www.warneronline.com/product_info.cfm?id=915</td></tr><tr><td>Pre-pulled 10 μm tip diameter glass micropipettes</td><td>World Precision Instruments, Sarasota, FL</td><td>TIP10TW1</td><td>https://www.wpiinc.com/products/laboratory-supplies/make-selection-pre-pulled-glass-pipettes-plain/</td></tr><tr><td>Zoom stereomicroscope</td><td>Nikon, Tokyo, Japan</td><td>SMZ-745T</td><td>https://www.nikoninstruments.com/Products/Stereomicroscopes-and-Macroscopes/Stereomicroscopes/SMZ745</td></tr><tr><td>Microscope boom stand with dual linear ball bearing arm</td><td>Old School Industries, Inc., Dacono, CO</td><td>OS1010H-16BB</td><td>http://www.osi-incorp.com/productdisplay/dual-linear-ball-bearing-arm</td></tr><tr><td>Zoom Stereo Microscope with C-LEDS Hybrid LED Stand</td><td>Nikon, Tokyo, Japan</td><td>SMZ-445</td><td>https://www.nikoninstruments.com/Products/Stereomicroscopes-and-Macroscopes/Stereomicroscopes/SMZ445</td></tr><tr><td>Inverted microscope system</td><td>Nikon, Tokyo, Japan</td><td>Eclipse Ti-E</td><td>https://www.nikoninstruments.com/Products/Inverted-Microscopes/Eclipse-Ti-E</td></tr><tr><td>Ames medium</td><td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO</td><td>A1420</td><td>http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/a1420</td></tr><tr><td>L-Glutamic Acid (Glutamate)</td><td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO</td><td>G5667</td><td>http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/mm/100291</td></tr><tr><td>Sodium bicarbonate</td><td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO</td><td>S8761</td><td>http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/s8761</td></tr><tr><td>60 mm Petri dish (10 mm tall)</td><td>Fischer Scientific, Waltham, MA</td><td>FB0875713A</td><td>60 mm clear petri dish; https://www.fishersci.com/shop/products/fisherbrand-petri-dishes-clear-lid-12/fb0875713a</td></tr><tr><td>Jewelers #5 Forceps</td><td>World Precision Instruments, Sarasota, FL</td><td>555227F</td><td>https://www.wpiinc.com/products/laboratory-supplies/555227f-jewelers-5-forceps-11cm-straight-titanium/</td></tr><tr><td>Standard Scalpel Blad #24</td><td>World Precision Instruments, Sarasota, FL</td><td>500247</td><td>https://www.wpiinc.com/products/laboratory-supplies/500247-standard-scalpel-blade-24/</td></tr><tr><td>Scalpel Handle #4</td><td>World Precision Instruments, Sarasota, FL</td><td>500237</td><td>https://www.wpiinc.com/products/laboratory-supplies/500237-scalpel-handle-4-14cm/</td></tr><tr><td>Vannas Tubingen Dissection Scissors</td><td>World Precision Instruments, Sarasota, FL</td><td>503378</td><td>https://www.wpiinc.com/products/laboratory-supplies/503378-vannas-tubingen-scissors-8cm-straight-german-steel/</td></tr><tr><td>Nylon mesh kit</td><td>Warner Instruments, Hamden, CT</td><td>NYL/MESH</td><td>https://www.warneronline.com/product_info.cfm?id=1173</td></tr><tr><td>Harp slice grid</td><td>ALA Scientific Instruments, Farmingdale, NY</td><td>HSG-5AD</td><td>http://alascience.com/product/standard-harp-slice-grids/</td></tr><tr><td>Ag/AgCl reference electrode pellet</td><td>Multi Channel Systems, GmbH</td><td>P1060</td><td>http://www.multichannelsystems.com/products/p1060</td></tr><tr><td>4 Channel Valve Controlled Gravity Perfusion System</td><td>ALA Scientific Instruments, Farmingdale, NY</td><td>VC3-4xG</td><td>http://alascience.com/product/4-channel-valve-controlled-gravity-perfusion-system/</td></tr><tr><td>Zyla 5.5 sCMOS microscope camera</td><td>Andor Technology, Belfast, UK</td><td>Zyla 5.5 sCMOS</td><td>http://www.andor.com/scientific-cameras/neo-and-zyla-scmos-cameras/zyla-55-scmos</td></tr><tr><td>Silver wire (50 μm diameter)</td><td>Fischer Scientific, Waltham, MA</td><td>AA44461G5</td><td>https://www.fishersci.com/shop/products/silver-wire-0-05mm-0-002-in-dia-annealed-99-99-metals-basis-3/aa44461g5</td></tr><tr><td>Tygon microbore tubing (1.6 mm diameter)</td><td>Cole Parmer, Vernon Hills, IL</td><td>EW-06419-01</td><td>https://www.coleparmer.com/i/tygon-microbore-tubing-0-020-x-0-060-od-100-ft-roll/064

methodologie voor biomimetische chemische neuromodulatie van rat netvlies met de neurotransmitter glutamaat in vitro

Methodology for Biomimetic Chemical Neuromodulation of Rat Retinas with the Neurotransmitter Glutamate In Vitro

Fotoreceptor degeneratieve ziekten veroorzaken onherstelbare blindheid door het progressieve verlies van fotoreceptor cellen in het netvlies. Netvlies prothesen zijn een opkomende behandeling voor fotoreceptor degeneratieve ziekten die herstellen visie willen door kunstmatig de overlevende retinale neuronen in de hoop tot begrijpelijke visuele perceptie bij patiënten te stimuleren. Huidige retinale prothesen hebben bewezen succes in het herstellen van beperkte visie aan patiënten met behulp van een matrix van elektroden aan elektrisch stimuleren van het netvlies, maar geconfronteerd met aanzienlijke fysieke barrières in het herstellen van hoge gezichtsscherpte, natuurlijke visie aan patiënten. Chemische neurostimulatie met behulp van inheemse neurotransmitters is een biomimetische alternatief voor elektrische stimulatie en kon negeren de fundamentele beperkingen retinale prothesen met behulp van elektrische neurostimulatie is gekoppeld. In het bijzonder heeft chemische neurostimulatie het potentieel om te herstellen meer natuurlijke visie met vergelijkbaar of beter visual acuities patiënten door het injecteren van zeer kleine hoeveelheden van neurotransmitters, de dezelfde natuurlijke agenten van communicatie gebruikt door retinale chemische synapses, bij veel fijnere resolutie dan de huidige elektrische prothesen. Echter, als een relatief onontgonnen stimulatie paradigma, er is geen gangbaar protocol voor de verwezenlijking van chemische stimulatie van het netvlies in vitro. Het doel van dit werk is een kader te bieden gedetailleerde voor het uitvoeren van chemische stimulatie van het netvlies voor onderzoekers die willen studeren het potentieel van chemische neuromodulatie van het netvlies of soortgelijke zenuwweefsel in vitro. In dit werk, beschrijven we de experimentele opzet en methodologie voor het opwekken van retinale ganglion cel (regering van Cambodja) spike reacties vergelijkbaar met visuele lichte reacties bij wild-type en wholemount fotoreceptor-verworden rat netvlies door het injecteren van volumes van gecontroleerde de neurotransmitter glutamaat in de subretinal ruimte met behulp van glas micropipetten en een aangepaste multipoort microfluidic apparaat. Deze methodologie en protocol zijn algemeen genoeg om te worden aangepast voor neuromodulatie met behulp van andere neurotransmitters of zelfs andere zenuwweefsel.

Dit protocol kan worden gebruikt voor chemisch stimuleren zowel normale, wild-type netvlies evenals fotoreceptor verworden netvlies, ondanks de aanzienlijke cellulaire remodelleren veroorzaakt door het verlies van de researchdieren. Voordat beginnen experimenten met beide fotoreceptor gedegenereerd of wild-type netvlies, opname- en stimulatie-apparatuur (Figuur 1 en Figuur 2) moet worden klaargemaakt en de pMEA (<strong class="xf...

Dit protocol beschrijft een nieuwe methode voor het onderzoeken van een vorm van chemische neurostimulatie van wholemount rat netvlies in vitro met de neurotransmitter glutamaat. Chemische neurostimulatie is een veelbelovend alternatief voor de conventionele elektrische neurostimulatie van retinale neuronen voor de behandeling van onomkeerbare blindheid veroorzaakt door fotoreceptor degeneratieve ziekten.

Methodologie voor biomimetische chemische neuromodulatie van Rat netvlies met de Neurotransmitter glutamaat In Vitro

Photoreceptor degenerative diseases cause irreparable blindness through the progressive loss of photoreceptor cells in the retina. Retinal prostheses are ...

Het algemene doel van deze methodologie is om een nieuwe chemisch gebaseerde neuromodulatie van retinale neuronen mogelijk te maken met behulp van neurotransmitters, die mogelijk de functionaliteit van defecte retinale cellen bij patiënten met neurodegeneratieve blindheid kunnen vervangen om het zicht te herstellen. Deze methode kan helpen om belangrijke vragen op het gebied van kunstmatige visie te beantwoorden. Bijvoorbeeld, kan glutamaat, een primaire retinale neurotransmitter, therapeutisch worden gebruikt om een gedegenereerde fotoreceptorretina te stimuleren?Het belangrijkste voordeel van onze techniek is dat het biomimetisch is, het stimuleren van de retina op deze manier biedt de potentie voor hogere visuele scherpte en meer natuurlijke visie dan mogelijk is met elektrische stimulatie. De implicaties van deze techniek strekken zich uit naar de behandeling van blindheid, vanwege fotoreceptor degeneratieve ziekten omdat vroege therapeutische interventie van een gedegenereerde retina de glutamaat gevoeligheid in retinale neuronen kan herstellen. Om deze procedure te starten, plaats beide geënuleerde ogen in een petrischaal met een diameter van 60 millimeter met verse zuurstofr

methodology-for-biomimetic-chemical-neuromodulation-rat-retinas-with

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Bio-engineering

Immunohistochemie protocollen worden gebruikt voor de lokalisatie van een specifiek eiwit in het netvlies te bestuderen. Calcium beeldvormende technieken worden gebruikt om calcium dynamiek in retinale ganglioncellen en hun axonen te bestuderen.

Immunohistochemische en Calcium Imaging Methods in Wholemount Rat Retina

Met deze studie, introduceren we een gestandaardiseerde spanning model voor de geïsoleerde superfused runderen netvlies voor toekomstige preklinische therapeutische testen. Het effect van beide hypoxie (zuiver N2) of glutamaat stress (250 uM glutamaat) op retinale vertegenwoordigd door de a- en b-wave amplitudes geëvalueerd.

Glutamaat en hypoxie als Stress Model voor de geïsoleerde perfusie gewervelde Retina

De postembedding immunogold-methode is een van de meest effectieve manieren om hoogwaardige analyses van de subcellulaire lokalisatie van specifieke moleculen te leveren. Hier beschrijven we een protocol om glutamaatreceptoren bij retinale lintsynapsen kwantitatief te analyseren.

High-Resolution Kwantitatieve immunogoud Analyse van membraanreceptoren op het netvlies Ribbon Synapses

Dit artikel illustreert hoe de expressie van neurotransmitterreceptoren kan worden gekwantificeerd en het patroon geanalyseerd op synapsen met geïdentificeerde pre- en postsynaptische elementen door een combinatie van virale transductie van optogenetische hulpmiddelen en de freeze-fracture replica immunolabeling techniek.

Gecombineerde optogenetische en Freeze-fractuur Replica immunokleuring Input-specifieke Regeling van glutamaatreceptoren in de Mouse amygdala Onderzoek

Hier beschrijven we de setup, softwarenavigatie en gegevensanalyse voor een ruimte en tijd nauwkeurige werkwijze voor het meten tonische en fasische extracellulair glutamaat veranderingen in vivo middels enzymgekoppelde micro-elektrode arrays (MEA).

Met behulp van Enzyme-gebaseerde biosensoren te meten Tonic en Fasische glutamaat in de ziekte van Alzheimer muismodellen

Hier presenteren we een protocol om in vitro Ca2+ fluxen in midbrain neuronen en hun downstream effecten op caspase-3 met behulp van primaire muis midbrain culturen te meten. Dit model kan worden gebruikt om pathofysiologische veranderingen in verband met abnormale Ca2 + activiteit in midbrain neuronen te bestuderen, en om nieuwe therapieën voor anti-apoptotische eigenschappen te screenen.

Quantifying Spontaneous Ca2+ Fluxes en hun downstream effecten in primaire muis midbrain neuronen

We presenteren een in vitro model om olfactorisch verwarmend glia (OEG) neuroregeneratief vermogen te beoordelen, na neuraal letsel. Het is gebaseerd op een cocultuur van axotomized volwassen retinale ganglion neuronen (RGN) op OEG monolagen en daaropvolgende studie van axonale regeneratie, door het analyseren van RGN axonale en somatodendritische markers.

Cocultuur van Axotomized Rat Retinal Ganglion Neurons met Olfactory Ensheathing Glia, als een In Vitro Model van Volwassen Axonale Regeneratie

In vivo beeldvorming is een krachtig hulpmiddel voor de studie van biologie in gezondheid en ziekte. Dit protocol beschrijft transpupillaire beeldvorming van het netvlies van de muis met een standaard microscoop met twee fotonen. Het demonstreert ook verschillende in vivoimaging-methoden om fluorescerend meerdere cellulaire cohorten van het netvlies te labelen.

Transpupillaire twee-fotonen in vivo beeldvorming van het netvlies van de muis

Modificatie van bestaande multi-elektrode array of patch clamp apparatuur maakt het ex vivo elektroretinogram breder toegankelijk. Verbeterde methoden om ex vivo lichtresponsen te registreren en te onderhouden vergemakkelijken de studie van fotoreceptor en ON-bipolaire celfunctie in het gezonde netvlies, diermodellen van oogziekten en menselijke donorvliezen.

Optimalisatie van de instellingen en voorwaarden voor ex vivo elektroretinogram om de retinafunctie in kleine en grote ogen te bestuderen

Het protocol toont aan dat door microtransplantatie van synaptische membranen in Xenopus laevis-eicellen uit te voeren, het mogelijk is om consistente en betrouwbare reacties van α-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazolpropionzuur en γ-aminoboterzuurreceptoren vast te leggen.

Microtransplantatie van synaptische membranen om menselijke synaptische receptoren voor functionele studies te reactiveren

Netvliesprothesen hebben het vermogen om visuele waarnemingen te genereren. Om de ontwikkeling van nieuwe prothesen te bevorderen, zijn ex vivo-methoden nodig om apparaten te testen voordat ze worden geïmplanteerd. Dit artikel biedt een uitgebreid protocol voor het bestuderen van calciumactiviteit in de retinale ganglioncellaag bij blootstelling aan elektrische stimulatie.

Calciumbeeldvorming in elektrisch gestimuleerde plat gemonteerde netvliezen

Leer biomimetische chemische neuromodulatie van het rattennetvlies met glutamaat in vitro. Deze methode biedt een natuurlijker alternatief voor elektrische stimulatie bij de behandeling van blindheid door fotoreceptordegeneratie.

Methodologie voor biomimetische chemische neuromodulatie van Rat netvlies met de Neurotransmitter glutamaat In Vitro

Meer video's verkennen