Name: Synthese en analyse van de Spectrometrie van de massa van Oligo-peptoids (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-02-21T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 44 s
Description: Leer de handmatige synthese van oligo-peptoiden en hun sequentieanalyse met massaspectrometrie. Deze methode helpt beginners peptoiden te maken en te karakteriseren in standaard laboratoria.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

De auteurs bedank Mr. Michael Connolly en Dr. Ronald Zuckermann (The moleculaire Foundry, Lawrence Berkeley National Laboratory) voor ondersteuning van de techniek in de synthese van peptoid. Wij erkennen de steun van de National Science Foundation (CHE-1301505). Alle massaspectrometrie experimenten werden uitgevoerd in de scheikunde aan de Universiteit van de Stille Oceaan aan de massaspectrometrie faciliteit.

1. synthese van Peptoid
Opmerking: De synthese begint bij het activeren van de hars door zwelling van de hars en de bescherming van de groep te verwijderen. Dit wordt gevolgd door het groeien van de keten van de peptoid op de hars door herhalende monomeer toevoeging cycli. Het eerste monomeer gekoppeld aan de hars is de C-terminal residu. De peptoid is van de C-terminus langwerpige aan de N-terminus. Zodra de volgorde van de gewenste peptoid is bereikt, gekloofd de hars is uit en het peptoid product is gezuiverd.
<ol><li>Bereiding van reagentia Opmerking: De vloeibare reagentia worden gemeten met behulp van een micropipet en de solide reagentia worden gemeten met behulp van een analytische balans.<ol>
<li>Meng 6.2 mL N, N'-diisopropylcarbodiimide (DIC) en 43.8 mL N, N-dimethylformamide (DMF) ter voorbereiding van een 0.8 M van DIC/DMF oplossing.</li>
		<li>Los 5.56 g BMA in 50.0 mL DMF te bereiden een 0.8 M BMA/DMF-oplossing.</li>
		<li>Meng 2 mL piperidine (Pip) en 8 mL DMF 20% Pip/DMF oplossing te bereiken.</li>
		<li>Ontbinden 1.9 mL NFE in 13,1 mL DMF tot 1.0 M NFE/DMF.</li>
		<li>Ontbinden van Nme in 13,7 mL DMF tot 1.0 1.3 mL M Nme/DMF.</li>
		<li>Los op in 2 mL DMF tot 1.0 0.32 mL van de Nae Nae/DMF M. Let op: De meeste van de chemicaliën die worden gebruikt in de synthese zijn gevaarlijk. Trifluorazijnzuur (TFA), DIC, Pip en BMA zijn gevaarlijk voor de huid, ogen en luchtwegen. DMF en dichloormethaan (DCM) wordt vermoed dat kankerverwekkende stoffen. Alle reacties moeten worden uitgevoerd in een zuurkast en passende persoonlijke beschermingsmiddelen moet worden gebruikt. Controleer het veiligheidsinformatieblad (MSDS) van alle chemicaliën die worden gebruikt in de synthese.</li>
	</ol></li>
	<li>Hars activering
	<ol>
<li>Afmeten van 84 mg Rink amide hars (hars, 0.047 mmol, laden van 0.56 mmol/g) en toevoegen aan een 10 mL polypropyleen solid-phase reactievat. Steek de zuiger in het schip.</li>
		<li>Voeg 2 mL DMF tot het reactievat en kap van het vaartuig met een druk-cap. Plaats van het vaartuig op een shaker, en het schip bij kamertemperatuur onder een hoek van verkeer van ongeveer 12 graden en 385 oscillaties/min voor 30 min. Drain de oplossing met een afval container door het verwijderen van het GLB en duwt de zuiger van het reactievat doorroeren.</li>
		<li>Voeg toe 2 mL 20% Pip/DMF oplossing aan het vaartuig en het schip cap. Het op het schudapparaat gedurende 2 minuten doorroeren en afvoer van de oplossing aan de afval container.</li>
		<li>Voeg toe 2 mL 20% Pip/DMF oplossing aan het vaartuig, het vaartuig, cap en doorroeren het bij kamertemperatuur voor 12 min. verwijderen het GLB en afvoer van de oplossing aan de afval container.</li>
		<li>Wassen van de hars door toevoeging van 1 mL DMF, aftopping van het vaartuig, en schudden van het vaartuig voor 1 min. Verwijder de dop en afvoer van de oplossing door te drukken op de plunjer. De hars met DMF voor 4 extra keer wassen.</li>
	</ol></li>
	<li>Monomeer toevoeging en N-terminal acetylation Opmerking: Elke monomeer toevoeging cyclus omvat twee reactie stappen, bromoacetylation en verplaatsing.<ol>
<li>Uitvoeren van de eerste cyclus van de toevoeging van de monomeer aan formulier Nme-hars.</li>
		<li>Het uitvoeren van een bromoacetylation reactie. Meng 1 mL 0.8 M BMA/DMF oplossing en 0.8 M DIC/DMF oplossing in een bekerglas van 1 mL. Het mengsel overbrengen in een reactievat met hars en het schip cap. Plaats van het vaartuig op het schudapparaat en doorroeren het bij kamertemperatuur gedurende 20 minuten verwijderen het GLB en afvoer van de oplossing aan de afval container.</li>
		<li>Het wassen van de hars door toevoeging van 1 mL DMF, aftopping van het vaartuig, het schudden voor 1 min en drainage van de oplossing door te drukken van de zuiger. Het wassen van de hars door toevoeging van 1 mL DCM, schudden van het vaartuig voor 1 min en drainage van de oplossing. De hars met DCM nogmaals wassen en dan wassen met DMF tweemaal.</li>
		<li>De reactie van een verplaatsing uit te voeren. Voeg 1 mL 1.0 M Nme/DMF oplossing, het schip cap, doorroeren het vaartuig bij kamertemperatuur voor 60 min. verwijderen het GLB en afvoer van de oplossing door te drukken van de zuiger.</li>
		<li>Het wassen van de hars door toevoeging van 1 mL DMF, schudden van het vaartuig voor 1 min en drainage van de oplossing door te drukken op de plunjer. Het wassen van de hars door tekening in 1 mL DCM, schudden voor 1 min, en zuig de oplossing. DCM nogmaals, gevolgd door wassen met DMF tweemaal wassen.</li>
		<li>Herhaal monomeer toevoeging cycli van stappen 1.3.2 te 1.3.5 vormen Nae-(Npe-Nme)4-hars. Wanneer herhalende de stap van de reactie van de verplaatsing (1.3.4), gebruik van een specifieke amine oplossing volgens de volgorde van de peptoid. Opmerking: De peptoid keten is langwerpig van de C-terminus aan de N-terminus met het residu van de C-terminal gebonden aan de hars.</li>
		<li>Uitvoeren van N-terminal acetylation tot Ac-Nae-(Npe-Nme)4-hars.</li>
		<li>Mix 92 µL van azijnzuuranhydride, 43,5 µL van N, N-diisopropylethylamine (DIPEA) en 2 mL DMF in een bekerglas van ongeveer 2 mL acetylation cocktail te maken.</li>
		<li>Voeg 2 mL acetylation cocktail aan het vaartuig met hars, cap van het vaartuig en het doorroeren bij kamertemperatuur voor 60 min. Verwijder de dop en afvoer van de oplossing door te drukken op de plunjer.</li>
		<li>Het wassen van de hars door toevoeging van 1 mL DMF, schudden van het vaartuig voor 1 min en drainage van de oplossing door te drukken op de plunjer. Het wassen van de hars door toevoeging van 1 mL DCM, schudden van het vaartuig voor 1 min en drainage van de oplossing. Herhaal de hars met DCM nogmaals, dan wassen met DMF tweemaal meer wassen.</li>
		<li>Het wassen van de hars door toevoeging van 1 mL DCM, schudden van het vaartuig voor 1 min en drainage van de oplossing door te drukken op de plunjer. Wassen met DCM tweemaal herhalen Verwijder de dop en laat het hars drogen in het reactievat voor 10 min.</li>
	</ol></li>
	<li>Decolleté en zuivering
	<ol>
<li>Meng 3,8 mL TFA 100 µL triisopropylsilane (TIPS) en 100 µL van HPLC-grade H2O in een bekerglas van 4 mL decollete cocktail te maken.</li>
		<li>Voeg 4 mL vers gemaakte decollete cocktail aan het vaartuig met hars, cap van het vaartuig en het doorroeren bij kamertemperatuur gedurende 2 uur.</li>
		<li>Verwijder de dop en de oplossing van het filtraat in een tube van 50 mL polypropyleen centrifuge verzamelen. Voeg 1 mL TFA tot het schip, het kapje en doorroeren voor 1 min. Verzamel het filtraat oplossing in de centrifugebuis dezelfde.</li>
		<li>Verdampen TFA door te blazen in een stroom van stikstofgas zachtjes tot ongeveer 1 mL viskeuze oplossing wordt overgelaten.</li>
		<li>Voeg toe 15 mL diethylether aan de resterende oplossing, cap de centrifugebuis en Incubeer het in een vriezer van-20 ° C gedurende 2 uur om te overnachten. De ruwe peptoid precipitaten als witte, vaste stof.</li>
		<li>De vaste stof met behulp van een centrifuge op 4427 x g voor 10 min. verwijderen het GLB van de centrifugebuis pellet en diethylether decanteren in een bekerglas van zorgvuldig zonder verlies van de vaste stof. Let op: diethylether is een brandbaar organisch oplosmiddel. Gebruik een veilige centrifuge diethylether.</li>
		<li>Wash de solid door het toevoegen van 10 mL diethylether ijskoud in de centrifuge buis waarin de solid, aftopping van de buis en plaatsen van het in de centrifuge. Centrifugeren bij 4427 x g voor 10 min. verwijderen de centrifuge buis van de centrifuge en diethylether decanteren in een bekerglas van zorgvuldig zonder verlies van de vaste stof uitvoeren.</li>
		<li>Droog de solid door zachtjes blazen in een stroom van stikstofgas.</li>
		<li>Voeg 10 mL van HPLC-grade H2O te ontbinden de gedroogde solid. Laat de oplossing door een nylon spuit filter met poriegrootte van 0,45 µm en vang het filtraat op in een vooraf gewogen 50 mL polypropyleen centrifugebuis.</li>
		<li>Shell bevriezen de oplossing door te plaatsen en draaien de centrifuge buis waarin de oplossing van de peptoid in een 12-ounce, dubbel-gestapeld uitgebreide polystyreen beker 1/3 gevuld met vloeibare stikstof. Lyophilize de bevroren oplossing 's nachts om de opbrengst van vaste peptoid.</li>
		<li>Lyofilisatie nog een keer herhalen door de stevige peptoid oplossen in 10 mL van HPLC-grade H2O, ingevroren in vloeibare stikstof, en 's nachts lyofilisering shell. De resulterende peptoid is voldoende zuiver voor sequentieanalyse door massaspectrometrie.</li>
	</ol></li>
</ol>2. mevrouw metingen en sequentieanalyse
Opmerking: De MS/MS-experiment is uitgevoerd in een triple-vierpolige massaspectrometer gekoppeld aan een bron electrospray ionisatie (ESI). Gegevensverzameling wordt beheerd met behulp van de data acquisitie software vergezeld met het instrument. De algemene procedure omvat 1) het uitvoeren van de volledige scan massaspectrometrie experiment en de massaspectrum opnemen, 2) het uitvoeren van de CID MS/MS experimenteren en opname van het MS/MS-spectrum, en 3) vergelijken de MS/MS spectrale gegevens met theoretische fragmentatie regeling voorspeld op basis van de structurele functie van de peptoid.
<ol><li>Bereiding van de monsteroplossing
	<ol>
<li>Weeg de solide peptoid 1.0-2.0 mg in een 3-5 mL glazen ampul. Voeg 1 mL gemengd oplosmiddel van acetonitril en water (ACN/H2O, 1:1, v/v) te ontbinden van de peptoid. Dit geeft de voorraad monsteroplossing met een concentratie van ongeveer 10-3 M.</li>
		<li>Pipetteer 20 µL van stockoplossing in een centrifugebuis 1,5 mL en voeg 1 mL gemengd oplosmiddel van ACN/H2O opleveren van een van de verdunde monsteroplossing van ongeveer 10-5 M.</li>
		<li>Verwijder eventuele mogelijke onoplosbare deeltjes in de verdunde monsteroplossing door het uitvoeren van centrifugeren bij 4427 x g voor 3 min. Breng ongeveer 700 µL van het bovenste gedeelte van de oplossing in een ander 1,5 mL centrifuge buis te maken van de peptoid MS werkoplossing met concentratie van ongeveer 10-5 M.</li>
		<li>Aanpassen van de concentratie van de MS-werkoplossing die op basis van de waargenomen signaal intensiteit tijdens de metingen van de Spectrometrie van de massa.</li>
		<li>Een alternatieve manier om het verwijderen van eventuele mogelijke onoplosbare deeltjes in de verdunde monsteroplossing is om de oplossing van het monster door een 0,20 µm spuit filter en vang het filtraat in een centrifugebuis 1,5 mL te maken van de peptoid MS werkoplossing van ongeveer 10-5 M.</li>
	</ol></li>
	<li>Opname van massaspectra
	<ol>
<li>Gemengde oplosmiddel van ACN/H2O (1:1, v/v) doorlopen de electrospray ionisatie (ESI) bron en instellen van het instrument in een standaard positief ion, volledige scan massaspectrometrie modus met een verhouding van de massa-naar-charge (m/z)-bereik van 100-1500. Opmerking: Typische bedrijfsparameters: ESI naald spanning, 5 kV Capillaire spanning, 40 V Drogen van (stikstofgas) gastemperatuur, 200 ° C.</li>
		<li>Voeg ongeveer 300 µL van de peptoid MS werkoplossing (ongeveer 10-5 M) in een 500 µL of een spuit van 1 mL en sluit de spuit aan de inlaat van de ESI met behulp van capillaire polyether ether keton (PEEK) leidingen. Plaats de injectiespuit op de spuitpomp en het debiet vastgesteldop 10 µL/min naar de monsteroplossing inblazen in de inlaat van de ESI.</li>
		<li>Zet de ESI naald spanning te activeren van het ESI-proces, en klik vervolgens op de detector. Stel het beeldscherm in profiel modus en de m/z-bereik van 100-1500. Een massaspectrum-profiel weergegeven in het profielvenster bekijken. De piek op m/z 1.265 (weergegeven als m/z van 1,264.6) komt overeen met de peptoid-ion- of geprotoneerd peptoid.</li>
		<li>Record de MS spectrum gedurende 2 minuten. In de "methode Window", 2 min te gebruiken als de "bewerkingstijd." Open het Opnamevenster en vullen in de juiste bestandsnaam opgeeft, en beginnen met opnemen van het spectrum. Opmerking: De resulterende massaspectrum is afgebeeld in Figuur 3.</li>
		<li>De intensiteit van de piek op m/z van 1.265 optimaliseren. De reeks m/z te 1150-1350 en capillaire kruisspanning tijdens het bekijken van de piek intensiteit in mV weergegeven in het profielvenster. Bijvoorbeeld, verhogen de capillaire spanning tot 50 V of hoger en de verandering van de piek intensiteit te bekijken. De optimale piek intensiteit is ongeveer 150-200 mV. Opmerking: De capillaire spanning aan te passen aanzienlijk kunt wijzigen de overvloed van bepaalde ionen. Verhogen de capillaire spanning kan de intensiteit van het ion peptoid verbeteren. Echter kan een capillaire hoogspanning ook veroorzaken dissociatie van het peptoid-ion in de ion-bron, en de waargenomen intensiteit afnemen. Aanpassing van de temperatuur van het gas drogen de intensiteit van de piek op m/z 1.265 kan verbeteren, maar het is minder effectief dan de capillaire spanning aan te passen. Als de piek op m/z 1.265 niet de optimale intensiteit komt, past het monster concentratie (of bijvoorbeeld dubbele de concentratie van de werkoplossing MS).</li>
		<li>Overschakelen van het instrument naar de MS/MS-modus. De voorloper van ion vastgesteldop m/z 1.265 en de MS/MS massa bereik op van 100-1.400 m/z. In de "methode venster" gebruik m/z 1.265 als de "Q1 eerste massa" en de "Q1 laatste massa" leeg laat. 100 m/z als "Q3 eerste massa" en 1.400 m/z gebruiken als de "Q3 laatste mis." Opmerking: In de MS/MS-modus, de eerste vierpolige eenheid (Q1) functies als een massa filter te isoleren van de peptoid-ion als de voorloper van ion, de tweede vierpolige eenheid (Q2) is een botsing cel, en de derde vierpolige eenheid (Q3) functies als een massa analyzer.</li>
		<li>Set de energie van de botsing op 40 eV en de botsing gas (argon, in dit geval) druk op 1,5 mTorr.</li>
		<li>Een massaspectrum-profiel weergegeven in het profielvenster bekijken. De piek op m/z van 1.265 komt overeen met de peptoid-ion en de bergtoppen met lagere m/z-waarden vertegenwoordigen de fragmenten uit het peptoid ion.</li>
		<li>Aanpassen van de energie van de botsing voor het optimaliseren van de weergave van de fragmentatie spectrum. Bijvoorbeeld, verhogen van de energie van de botsing tot 45 eV en de verandering van het spectrum-profiel bekijken. Opmerking: In het algemeen, verhoging van de energie van de botsing zal verbeteren de overvloed van het fragment-ionen en verminderen de overvloed van het peptoid-ion. Verhoging van de gasdruk van de botsing zal de overvloed van het fragment ionen ook verbeteren. Let op: De botsing gasdruk dan 2 mTorr geen verhoging.</li>
		<li>Record het spectrum van de MS/MS gedurende 2 minuten. In het "methode venster" 2 min te gebruiken als de "bewerkingstijd." Open het Opnamevenster en vullen in de juiste bestandsnaam opgeeft, en beginnen met opnemen van het spectrum.</li>
		<li>Herhaal opnametijden 1 - 2.</li>
	</ol></li>
	<li>Peptoid sequentieanalyse Opmerking: Onder de voorwaarde van de CID, zou het peptoid ion fragment op de amide-bindingen langs de ruggengraat van de peptoid voor de productie van een reeks van N-terminale fragmenten genaamd B-ionen, en een reeks van C-terminal fragmenten genoemd Y-ionen<ol>
<li>Trekken uit de chemische structuur van de geacetyleerd peptoid door het plaatsen van de N-terminus op de linker- en de C-terminus aan de rechterkant en een onderbroken lijn aan elke amide binding voor het genereren van een versnippering regeling zoals weergegeven in Figuur 2atekenen. Tekenen van een proton met een gestippelde cirkel om aan te geven van de vervoerder van de lading. Vanaf de linkerkant van de structuur, plaats labels op de onderbroken lijnen om aan te geven van de N-terminale fragmenten als B1, B2, B-8. Vanaf de rechterkant, etiketten op de onderbroken lijnen om aan te geven van de C-terminal fragmenten als Y1, Y2, Y8plaatsen. Opmerking: Een chemische tekening software kan worden gebruikt om de structuur van peptoid tekenen.</li>
		<li>Stel je fragmentatie op de 4th amide binding van de linker kant, en tekenen van de structuren van het N-terminaal fragment en het fragment van de C-terminal met goede formele kosten, zoals afgebeeld in Figuur 2b. Plaats het label van B4 op de N-terminale fragment, en plaats het label van de Y-5 op het C-terminal fragment. De m/z-waarde van B4 berekend door optelling van de nominale massa van de elementen in de structuur voor de opbrengst van een waarde van 580 en m/z 580 plaats op het N-terminaal fragment. Berekenen van de m/z-waarde van Y5 en m/z 685 plaats op het C-terminal fragment.</li>
		<li>Berekenen van de m/z-waarden voor alle acht B-ionen en alle acht Y ionen en samenvoegen in een tabel, zoals aangegeven in tabel 1. Opmerking: De m/z-waarden van de fragmenten kunnen worden berekend met behulp van een chemische stof tekening software.</li>
		<li>Open de opgenomen MS/MS-spectrum van de peptoid met behulp van de gegevens review software vergezeld met het instrument. Stel de voorkeuren in Labeling "Toon Ion etiketten" en Label drempel tot 3%. Dit genereert een MS/MS spectrum met m/z-waarden met het label op de bergtoppen.</li>
		<li>Exporteer de MS/MS spectrale gegevens als een tekstbestand in het CSV-formaat en reconstrueren van het spectrum met behulp van data processing software. Plaats m/z-waarden op de bergtoppen. Het resulterende MS/MS spectrum wordt weergegeven in Figuur 4. Opmerking: Sommige massaspectrometers zijn uitgerust met data processing software staat voor het genereren van het MS/MS-spectrum. In dit geval is het niet nodig de MS/MS spectrale gegevens exporteren.</li>
		<li>Toewijzen van de m/z-waarden vermeld op het MS/MS spectrum aan die worden weergegeven in tabel 1 te identificeren van de overeenkomstige B - en Y-ionen. Bijvoorbeeld, de piek op 580 m/z wordt geïdentificeerd als de B4-ion en m/z 685 wordt geïdentificeerd als de Y5-ion. Label de toppen met bijbehorende B en Y symbolen op het spectrum, zoals weergegeven in Figuur 4.</li>
	</ol></li>
</ol>

<ol><li>Sun, J., Zuckermann, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peptoid+Polymers%3A+A+Highly+Designable+Bioinspired+Material%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Nano%22%5BJournal%5D)">Peptoid Polymers: A Highly Designable Bioinspired Material.</a> ACS Nano. 7 (6), 4715-4732 (2013).</li>
<li>Fowler, S. A., Blackwell, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structure-function+relationships+in+peptoids%3A+Recent+advances+toward+deciphering+the+structural+requirements+for+biological+function%5BTitle%5D)+AND+%22Org.+Biomol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Structure-function relationships in peptoids: Recent advances toward deciphering the structural requirements for biological function.</a> Org. Biomol. Chem. 7 (8), 1508-1524 (2009).</li>
<li>Chongsiriwatana, N. P., Patch, J. A., Czyzewski, A. M., Dohm, M. T., Ivankin, A., Gidalevitz, D., Zuckermann, R. N., Barron, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peptoids+that+mimic+the+structure%2C+function%2C+and+mechanism+of+helical+antimicrobial+peptides%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.+S.+A%22%5BJournal%5D)">Peptoids that mimic the structure, function, and mechanism of helical antimicrobial peptides.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 105 (8), 2794-2799 (2008).</li>
<li>Kruijtzer, J. A., Nijenhuis, W. A., Wanders, N., Gispen, W. H., Liskamp, R. M., Adan, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peptoid-Peptide+Hybrids+as+Potent+Novel+Melanocortin+Receptor%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Med.+Chem%22%5BJournal%5D)">Peptoid-Peptide Hybrids as Potent Novel Melanocortin Receptor.</a> J. Med. Chem. 48 (13), 4224-4230 (2005).</li>
<li>Liu, B., Alluri, P. G., Yu, P., Kodadek, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Potent+Transactivation+Domain+Mimic+with+Activity+in+Living+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Chem.+Soc%22%5BJournal%5D)">A Potent Transactivation Domain Mimic with Activity in Living Cells.</a> J. Am. Chem. Soc. 127 (23), 8254-8255 (2005).</li>
<li>Patch, J. A., Barron, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Helical+Peptoid+Mimics+of+Magainin-2+Amide%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Chem.+Soc%22%5BJournal%5D)">Helical Peptoid Mimics of Magainin-2 Amide.</a> J. Am. Chem. Soc. 125 (40), 12092-12093 (2003).</li>
<li>Ham, H. O., Park, S. H., Kurutz, J. W., Szleifer, I. G., Messersmith, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antifouling+Glycocalyx-Mimetic+Peptoids%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Chem.+Soc%22%5BJournal%5D)">Antifouling Glycocalyx-Mimetic Peptoids.</a> J. Am. Chem. Soc. 135 (35), 13015-13022 (2013).</li>
<li>Olivier, G. K., Cho, A., Sanii, B., Connolly, M. D., Tran, H., Zuckermann, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibody-Mimetic+Peptoid+Nanosheets+for+Molecular+Recognition%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Nano%22%5BJournal%5D)">Antibody-Mimetic Peptoid Nanosheets for Molecular Recognition.</a> ACS Nano. 7 (10), 9276-9286 (2013).</li>
<li>Olsen, C. A., Ziegler, H. L., Nielsen, H. M., Frimodt-Moeller, N., Jaroszewski, J. W., Franzyk, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antimicrobial%2C+Hemolytic%2C+and+Cytotoxic+Activities+of+%CE%B2-Peptoid-Peptide+Hybrid+Oligomers%3A+Improved+Properties+Compared+to+Natural+AMPs%5BTitle%5D)+AND+%22ChemBioChem%22%5BJournal%5D)">Antimicrobial, Hemolytic, and Cytotoxic Activities of β-Peptoid-Peptide Hybrid Oligomers: Improved Properties Compared to Natural AMPs.</a> ChemBioChem. 11 (10), 1356-1360 (2010).</li>
<li>Lutz, J. -F., Ouchi, M., Liu, D. R., Sawamoto, M. <a target="_blank" href="http://science.sciencemag.org/content/341/6146/1238149.full">Sequence-Controlled Polymers.</a> Science. 341 (6146), Washington, DC. 628(2013).</li>
<li>Altuntas, E., Schubert, U. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%22Polymeromics%22%3A+Mass+spectrometry+based+strategies+in+polymer+science+toward+complete+sequencing+approaches%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chim.+Acta%22%5BJournal%5D)">"Polymeromics": Mass spectrometry based strategies in polymer science toward complete sequencing approaches: A review.</a> Anal. Chim. Acta. 808, 56-69 (2014).</li>
<li>Paulick, M. G., Hart, K. M., Brinner, K. M., Tjandra, M., Charych, D. H., Zuckermann, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cleavable+Hydrophilic+Linker+for+One-Bead-One-Compound+Sequencing+of+Oligomer+Libraries+by+Tandem+Mass+Spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comb.+Chem%22%5BJournal%5D)">Cleavable Hydrophilic Linker for One-Bead-One-Compound Sequencing of Oligomer Libraries by Tandem Mass Spectrometry.</a> J. Comb. Chem. 8 (3), 417-426 (2006).</li>
<li>Thakkar, A., Cohen, A. S., Connolly, M. D., Zuckermann, R. N., Pei, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-Throughput+Sequencing+of+Peptoids+and+Peptide-Peptoid+Hybrids+by+Partial+Edman+Degradation+and+Mass+Spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comb.+Chem%22%5BJournal%5D)">High-Throughput Sequencing of Peptoids and Peptide-Peptoid Hybrids by Partial Edman Degradation and Mass Spectrometry.</a> J. Comb. Chem. 11 (2), 294-302 (2009).</li>
<li>Sarma, B. K., Kodadek, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Submonomer+Synthesis+of+A+Hybrid+Peptoid-Azapeptoid+Library%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Comb+Sci%22%5BJournal%5D)">Submonomer Synthesis of A Hybrid Peptoid-Azapeptoid Library.</a> ACS Comb Sci. 14 (10), 558-564 (2012).</li>
<li>Li, X., Guo, L., Casiano-Maldonado, M., Zhang, D., Wesdemiotis, C. <a target="_blank" href="http://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/ma200542p">Top-Down Multidimensional Mass Spectrometry Methods for Synthetic Polymer Analysis.</a> Macromolecules. 44 (12), 4555-4564 (2011).</li>
<li>Figliozzi, G. M., Goldsmith, R., Ng, S. C., Banville, S. C., Zuckermann, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthesis+of+N-substituted+glycine+peptoid+libraries%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Enzymol%22%5BJournal%5D)">Synthesis of N-substituted glycine peptoid libraries.</a> Methods Enzymol. 267, 437-447 (1996).</li>
<li>Zuckermann, R. N., Kerr, J. M., Kent, S. B. H., Moos, W. H. <a target="_blank" href="http://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/ja00052a076">Efficient method for the preparation of peptoids [oligo(N-substituted glycines)] by submonomer solid-phase synthesis.</a> J. Am. Chem. Soc. 114 (26), 10646-10647 (1992).</li>
<li>Utku, Y., Rohatgi, A., Yoo, B., Kirshenbaum, K., Zuckermann, R. N., Pohl, N. L. <a target="_blank" href="http://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/ed100202f">Rapid Multistep Synthesis of a Bioactive Peptidomimetic Oligomer for the Undergraduate Laboratory.</a> J. Chem. Educ. 87 (6), 637-639 (2010).</li>
<li>Tran, H., Gael, S. L., Connolly, M. D., Zuckermann, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Solid-phase+submonomer+synthesis+of+peptoid+Polymers+and+their+self-assembly+into+highly-ordered+nanosheets%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Visualized+Exp%22%5BJournal%5D)">Solid-phase submonomer synthesis of peptoid Polymers and their self-assembly into highly-ordered nanosheets.</a> J. Visualized Exp. (57), e3373(2011).</li>
<li>Bolt, H. L., Cobb, S. L., Denny, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Efficient+Method+for+the+Synthesis+of+Peptoids+with+Mixed+Lysine-type%2FArginine-type+Monomers+and+Evaluation+of+Their+Anti-leishmanial+Activity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">An Efficient Method for the Synthesis of Peptoids with Mixed Lysine-type/Arginine-type Monomers and Evaluation of Their Anti-leishmanial Activity.</a> J Vis Exp. (117), (2016).</li>
<li>Morishetti, K. K., Russell, S. C., Zhao, X., Robinson, D. B., Ren, J. <a target="_blank" href="http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1387380611003071">Tandem mass spectrometry studies of protonated and alkali metalated peptoids: Enhanced sequence coverage by metal cation addition.</a> Int. J. Mass Spectrom. 308 (1), 98-108 (2011).</li>
<li>Bogdanov, B., Zhao, X., Robinson, D. B., Ren, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electron+Capture+Dissociation+Studies+of+the+Fragmentation+Patterns+of+Doubly+Protonated+and+Mixed+Protonated-Sodiated+Peptoids%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Soc.+Mass+Spectrom%22%5BJournal%5D)">Electron Capture Dissociation Studies of the Fragmentation Patterns of Doubly Protonated and Mixed Protonated-Sodiated Peptoids.</a> J. Am. Soc. Mass Spectrom. 25 (7), 1202-1216 (2014).</li>
<li>Ren, J., Tian, Y., Hossain, E., Connolly, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fragmentation+Patterns+and+Mechanisms+of+Singly+and+Doubly+Protonated+Peptoids+Studied+by+Collision+Induced+Dissociation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Soc.+Mass+Spectrom%22%5BJournal%5D)">Fragmentation Patterns and Mechanisms of Singly and Doubly Protonated Peptoids Studied by Collision Induced Dissociation.</a> J. Am. Soc. Mass Spectrom. 27 (4), 646-661 (2016).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Een nonamer peptoid, Ac-Nae-(Npe-Nme)4-NH2, heeft zijn gesynthetiseerd met behulp van het protocol gepresenteerd. De synthese apparatuur omvat een reactievat spuit-achtige polypropyleen solid-fase en een mechanisch schudapparaat. De schepen van de reactie zijn commercieel beschikbaar en lage kosten. Een mechanisch schudapparaat is een gemeenschappelijk apparaat in chemie laboratoria. Met het gebruik van een spuit-achtige reactievat, kunnen oplossingen worden getrokken in en uit het schip geduwd door...

Peptoids vormen een klasse van sequentie-gecontroleerde polymeren met een ruggengraat structuren nabootsen van de structuur van peptiden. Peptoids kunnen gesynthetiseerd worden uit verschillende amines, waarmee peptoids vertonen zeer afstembare eigenschappen1,2. Peptoids zijn gebruikt als moleculaire modellen voor biofysische onderzoek, beschouwd als therapeutische agenten en ontworpen als liganden voor eiwitten3,,4,,5,6. Peptoids hebben ontwikkeld tot een verscheidenheid van biologisch actieve stoffen, zoals anti-fouling en antilichaam-mimetische materialen, antimicrobiële stoffen en enzym remmers7,8,9. Met een zeer geordende en afstembare aard, hebben peptoids ook gedacht als een soort van moleculaire informatie-opslag10. De ontdekking van deze uiteenlopende toepassingen wordt aangedrongen op de ontwikkeling van efficiënte analytische methoden te karakteriseren van de volgorde en structuur van peptoids. Tandem massa spectrometrie gebaseerde technieken gebleken belofte als de methode van keuze voor het analyseren van de eigenschappen van de reeks van sequentie-gecontroleerde polymeren, peptoids11,12,13, waaronder 14,,15. Echter, systematische studies correleren de peptoid ion fragmentatie patronen als gevolg van massa spectrometrie studies en de structuurgegevens van peptoids zijn zeer beperkt.
Peptoids kan gemakkelijk worden gesynthetiseerd met een vaste fase-methode. De goed ontwikkelde methode houdt een herhaling van een tweestaps monomeer toevoeging cyclus16,17. In elke cyclus van toevoeging, een hars-gebonden amine is geacetyleerd door een haloacetic zuur (meestal Broomazijnzuur, BMA) en dit wordt gevolgd door een reactie van de verplaatsing met een primair amine. Hoewel geautomatiseerde synthese protocollen routinematig voor peptoid synthese toegepast zijn, kan peptoids handmatig worden gesynthetiseerd met een uitstekende opbrengst in een standaard chemie laboratorium16,18,19, 20.
Onze lab heeft de methode voor handmatige peptoid synthese en de apparatuur die wordt gebruikt in de bestaande methoden vereenvoudigd. Wij hebben eerder de patronen van de fragmentatie van een reeks peptoids met behulp van MS/MS technieken21,22,23bestudeerd. Onze resultaten tonen aan dat peptoids karakteristieke breukpatroon produceren wanneer ze worden onderworpen aan botsing-geïnduceerde dissociatie (CID)21,23 of elektron-vangst dissociatie (ECD)22 experimenten. In dit artikel tonen we hoe oligo-peptoids kan worden gesynthetiseerd in een standaard chemie laboratorium, het uitvoeren van de CID-experimenten met behulp van een triple-vierpolige massaspectrometer en hoe om de spectrale gegevens te analyseren. De peptoid worden gesynthetiseerd en gekenmerkt is een nonamer met N-terminal acetylation en C-terminal amidation, Ac-Nae-(Npe-Nme)4-NH2. De structuur van de peptoid is afgebeeld in Figuur 1.

<table><tbody><tr><td>ESI-triple quadrupole massaspectrometer, Varian 320L</td><td>Agilent Technologies Inc.</td><td></td><td>Het massaspectrometer is verworven van Varian, Inc.</td></tr><tr><td>Varian MS werkstation, versie 6.9.2, een gegevensverzameling en gegevenscontrole software</td><td>Varian Inc.</td><td></td><td>De software maakt deel uit van het Varian 320L pakket</td></tr><tr><td>Burrell Scientific Wrist-action shaker, model 75 DD</td><td>Fisher Scientific International Inc.</td><td>14-400-126</td><td></td></tr><tr><td>Hermle Centrifuge, model Z 206 A</td><td>Hermle Labortechnik GmbH</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vaste fase reactievat, 10 mL</td><td>Torviq</td><td>SF-1000</td><td></td></tr><tr><td>Drukdoppen voor reactievaten</td><td>Torviq</td><td>PC-SF</td><td></td></tr><tr><td>Spuitfilters, poriegrootte 0.2 &mu;m</td><td>Fisher Scientific Inc.</td><td>03-391-3B</td><td></td></tr><tr><td>Spuitfilters, poriegrootte 0.45 &mu;m</td><td>Fisher Scientific Inc.</td><td>03-391-3A</td><td></td></tr><tr><td>Polypropyleen centrifuge buizen, 50 mL</td><td>VWR International, LLC.</td><td>490001-626</td><td></td></tr><tr><td>Polypropyleen centrifuge buizen, 15 mL</td><td>VWR International, LLC.</td><td>490001-620</td><td></td></tr><tr><td>ChemBioDraw, Ultra, versie 12.0</td><td>CambridgeSoft Corporation</td><td></td><td>CambridgeSoft maakt nu deel uit van PerkinElmer Inc.</td></tr><tr><td>Styrofoam beker, 12 Oz</td><td>Common Supermarket</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Rink amide hars</td><td>Chem-Impex International, Inc.</td><td>10619</td><td></td></tr><tr><td>Piperidine</td><td>Chem-Impex International, Inc.</td><td>02351</td><td>Zeer giftig</td></tr><tr><td>N, N&rsquo;-diisopropylcarbodiimide</td><td>Chem-Impex International, Inc.</td><td>00110</td><td>Zeer giftig</td></tr><tr><td>Broomazijnzuur</td><td>Chem-Impex International, Inc.</td><td>26843</td><td>Zeer giftig</td></tr><tr><td>2-Phenylethylamine</td><td>VWR International, LLC.</td><td>EM8.07334.0250</td><td></td></tr><tr><td>2-Methoxyethylamine</td><td>Sigma-Aldrich Co. LLC.</td><td>241067</td><td></td></tr><tr><td>N-Boc-ethyleendiamine</td><td>VWR International, LLC.</td><td>AAAL19947-06</td><td></td></tr><tr><td>Azijnzuuranhydride</td><td>Sigma-Aldrich Co. LLC.</td><td>252845</td><td></td></tr><tr><td>N, N-dimethylformamide</td><td>VWR International, LLC.</td><td>BDH1117-4LG</td><td>Verder destilleren voor gebruik</td></tr><tr><td>N, N-diisopropylethylamine</td><td>Chem-Impex International, Inc.</td><td>00141</td><td></td></tr><tr><td>Triisopropylsilaan</td><td>Chem-Impex International, Inc.</td><td>01966</td><td></td></tr><tr><td>Trifluorazijnzuur</td><td>Chem-Impex International, Inc.</td><td>00289</td><td>Zeer giftig</td></tr><tr><td>Millipore MILLI-Q Academic Water Purification System</td><td>Millipore Corporation</td><td>ZMQP60001</td><td>Voor het genereren van HPLC-kwaliteit water</td></tr><tr><td>HPLC-kwaliteit water</td><td></td><td></td><td>Geproduceerd vanuit Millipore MILLI-Q&reg; Academic Water Purification System</td></tr><tr><td>Methanol</td><td>Pharmco-Aaper</td><td>339USP/NF</td><td>HPLC-kwaliteit</td></tr><tr><td>Acetonitrile</td><td>Fisher Scientific International, Inc.</td><td>A998-4</td><td>HPLC-kwaliteit</td></tr><tr><td>Di-ethylether</td><td>VWR International, LLC.</td><td>BDH1121-19L</td><td>Verder destilleren voor gebruik</td></tr><tr><td>Dichloormethaan</td><td>VWR International, LLC.</td><td>BDH1113-19L</td><td>Verder destilleren voor gebruik</td></tr><tr><td>Stikstofgas</td><td>Fresno Oxygen/Barnes Supply</td><td>NIT 50-C-F</td><td>Ultra hoge zuiverheid, 99,9995%</td></tr><tr><td>Argon gas</td><td>Fresno Oxygen/Barnes Supply</td><td>ARG 50-C-F</td><td>Ultra hoge zuiverheid, 99,9995%</td></tr></tbody></table>

synthese en analyse van de spectrometrie van de massa van oligo-peptoids

Synthesis and Mass Spectrometry Analysis of Oligo-peptoids

Peptoids zijn reeks bestuurde peptide-nabootsen oligomeren bestaande uit N-Gealkyleerde glycine eenheden. Onder de vele mogelijke toepassingen, hebben peptoids is gedacht als een soort van moleculaire informatieopslag. Analyse van de Spectrometrie van de massa is beschouwd als de methode van keuze voor sequencing peptoids. Peptoids kan worden gesynthetiseerd via vaste fase chemie met behulp van een herhalende cyclus van twee stappen reactie. Hier presenteren we een methode voor het handmatig het synthetiseren van oligo-peptoids en voor het analyseren van de volgorde van de peptoids met behulp van tandem massaspectrometrie (MS/MS) technieken. De peptoid van het monster is een nonamer die bestaat uit afwisselende N-(2-methyloxyethyl) glycine (Nme) en N-(2-phenylethyl) glycine (NFE), evenals een N-(2-aminoethyl) glycine (Nae) op de N-terminus. De formule van de volgorde van de peptoid is Ac-Nae-(Npe-Nme)4-NH2, waar Ac de acetyl groep. De synthese plaatsvindt in een commercieel beschikbare solid-phase reactievat. De ijsbaan amide hars wordt gebruikt als de solide steun opleveren van de peptoid met een amide-groep op het C-terminus. Het resulterende peptoid product is onderworpen aan sequentieanalyse met behulp van een triple-vierpolige massaspectrometer gekoppeld aan een bron electrospray ionisatie. De meting van de MS/MS produceert een spectrum van fragment ionen als gevolg van de dissociatie van geladen peptoid. De fragment-ionen worden geregeld op basis van de waarden van hun massa-naar-charge ratio (m/z). De m/z-waarden van het fragment-ionen zijn vergeleken met de nominale massa van theoretisch voorspelde fragment ionen, volgens het stelsel van versnippering van de peptoid. De analyse genereert een patroon van de versnippering van de geladen peptoid. Het patroon van fragmentatie is gecorreleerd aan de monomeer opeenvolging van de neutrale peptoid. In dit verband leest MS analyse de gegevens van de volgorde van de peptoids.

De structuur van een 9-mer peptoid met N-terminal acetylation, Ac-Nae-(Npe-Nme)4-NH2, is afgebeeld in Figuur 1. De peptoid werd handmatig gesynthetiseerd in een fritted polypropyleen reactievat via vaste fase aanpak. Ijsbaan amide hars (0.047 mmol, 84 mg met het laden van 0.56 mmol/g) wordt gebruikt als de solide steun opleveren van de peptoid met een amidated C-terminus. De peptoid keten is gebouwd door meerdere cycli van monomeer toevo...

Een protocol wordt beschreven voor de handmatige synthese van oligo-peptoids gevolgd door sequentieanalyse door massaspectrometrie.

Synthese en analyse van de Spectrometrie van de massa van Oligo-peptoids

Peptoids are sequence-controlled peptide-mimicking oligomers consisting of N-alkylated glycine units. Among many potential applications, peptoids have ...

Het algemene doel van deze procedure is om te demonstreren hoe oligo-peptoïden handmatig kunnen worden gesynthetiseerd en hoe hun monomeersequentie kan worden geanalyseerd door gebruik te maken van massaspectrometrietechnieken. De methode kan beginners helpen om belangrijke vragen in een peptoidveld te beantwoorden, zoals hoe peptoïden te maken en hoe hun monomeersequentie te karakteriseren. Het grote voordeel van deze techniek is dat peptoïden met speciale monomeerresiduen kunnen worden gesynthetiseerd en geanalyseerd in het standaard analytisch chemielab.Hoewel deze methode zich richt op oligo-peptoïden, kan deze ook worden toegepast op andere systemen zoals peptiden en oligonucleotiden. Over het algemeen zullen personen die nieuw zijn in deze techniek worstelen omdat het bereiken van optimale massaspectrometriecondities moeilijk is zonder visuele demonstratie. We hadden het idee voor deze methode toen we de structurele kenmerken van peptoïden wilden karakteriseren met behulp van tandemmassaspectrometriemethoden.Weeg eerst 84 milligram Rink-amidehars af en voeg het toe aan een 10 milliliter polypropyleen vaste phaseven reactorvat. Breng vervolgens een zuiger in het vat. Voeg verv

synthesis-and-mass-spectrometry-analysis-of-oligo-peptoids

Research

JoVE Journal

Chemistry

Scheikunde

Een snelle manier is beschreven om inzicht te krijgen in de structuur van de polysacchariden in een extracellulaire matrix. De methode maakt gebruik van de specificiteit van glycosylhydrolases en de gevoeligheid van massaspectrometrie waarmee minieme hoeveelheden van de materialen worden geanalyseerd. Deze techniek is aan te passen aan direct worden gebruikt op weefsel zelf.

Oligo Mass Profiling (Olimp) van extracellulaire polysacchariden

Stabiele Isotopen Normen en Capture door Anti-peptide antilichamen (SISCAPA) paren affiniteit verrijking van peptiden met stabiele isotoop verdunning massaspectrometrie (MRM-MS) voor kwantitatieve meting van peptiden te bieden als surrogaat voor hun respectievelijke eiwitten. Hier beschrijven we het protocol met behulp van magnetische deeltjes in een deels geautomatiseerde formaat.

Kwantificering van eiwitten met behulp van immuno-peptide Verrijking gekoppeld aan massaspectrometrie

Een eenvoudige en algemene handleiding peptoïde synthese methode waarbij basisuitrusting en de handel verkrijgbare reagentia wordt geschetst, zodat peptoids gemakkelijk worden gesynthetiseerd in de meeste laboratoria. De synthese, zuivering en karakterisatie van een amfifiele peptoïde 36mer wordt beschreven, evenals de zelf-assemblage in zeer geordende nanosheets.

Vaste-fase-Submonomer Synthese van peptoïde polymeren en hun zelf-assemblage in zeer geordende nanosheets

Peptide tertiaire amides (PTA) zijn een superfamilie van peptidomimetica die omvatten maar zijn niet beperkt tot, peptiden, peptoïden en N-gemethyleerd peptiden. Hier beschrijven we een synthetische methode die zowel split-en-zwembad en sub-monomeer strategieën combineert tot een kraal een-verbinding bibliotheek van PTA synthetiseren.

Split-en-zwembad Synthese en karakterisatie van peptide Tertiaire amide Bibliotheek

Hier presenteren we gedetailleerde protocollen voor solid-state amide waterstof/deuterium uitwisseling massaspectrometrie (ssHDX-MS) en solid-state fotolytische labelen massaspectrometrie (ssPL-MS) voor eiwitten in vaste poeders. De methoden leveren hoge resolutie informatie over eiwitconformatie en interacties in de amorfe vaste toestand, wat nuttig kan zijn in formuleringsontwerp.

Massaspectrometrische benaderingen tot Protein Structure en interacties te bestuderen in gevriesdroogde Poeders

Dit protocol beschrijft de specifieke technieken die worden gebruikt voor de structurele karakterisering van het reducerende einde (RE) en de interne glycosylsequenties van heteroxylanen door het RE te labelen met 2-aminobenzamide voorafgaand aan enzymatische (endoxylanase) hydrolyse en vervolgens analyse van de resulterende oligosacchariden met behulp van massaspectrometrie (MS) en nucleaire magnetische resonantie (NMR).

Sequencing van Plant Muur Heteroxylans Met behulp van Enzymatische, Chemical (Methylering) en fysieke (Mass Spectrometry, Nuclear Magnetic Resonance) Technieken

Dit artikel geeft een gedetailleerde procedure voor de solide fase synthese, zuivering en karakterisering van dodecamers van RNA gemodificeerd op de C2'- O- positie. UV-vis en cirkelvormige dichroïstische fotometrische analyses worden gebruikt om structurele aspecten te kwantificeren en karakteriseren, dwz enkelstrengen of dubbelstrengen.

Protocol voor de vaste fase synthese van oligomeren van RNA die een 2&#39;-<em&gt; O</em&gt; -thiophenylmethylmodificatie en karakterisering via cirkelvormige dichroïsme

Een protocol wordt gepresenteerd voor de synthese van informatie-gecodeerde peptoid oligomeren en voor de sequentie-gerichte zelfassemblage van deze peptoids in moleculaire ladders met behulp van amines en aldehyden als dynamische covalente reactant paren en Lewis zure zeldzame aarde metalen triflates als multi-role reagentia.

Synthese van informatiedragende Peptoids en hun reeks-geleide Dynamische Covalent Zelfassemblage

Dit protocol omvat een gedetailleerde analyse van de peptidoglycaansamenstelling met behulp van vloeistofchromatografie massaspectrometrie in combinatie met geavanceerde functie-extractie en bio-informatica-analysesoftware.

Semi-kwantitatieve analyse van peptidoglycaan door vloeistofchromatografie, massaspectrometrie en bio-informatica

Dit protocol beschrijft een iSCAT-gebaseerde beeldverwerking en single-particle tracking-benadering die het gelijktijdige onderzoek van de moleculaire massa en het diffusieve gedrag van macromoleculen die interageren met lipidemembranen mogelijk maakt. Stapsgewijze instructies voor monstervoorbereiding, massa-naar-contrastconversie, filmacquisitie en nabewerking worden gegeven naast aanwijzingen om mogelijke valkuilen te voorkomen.

Massagevoelige deeltjestracking om membraangeassocieerde macromolecuuldynamica te karakteriseren

Oligonucleotide 5′-trifosfaten zijn alomtegenwoordige componenten in essentiële biologische routes en worden steeds vaker gebruikt in biotechnologische toepassingen. Hier beschrijven we technieken voor de routinematige synthese en zuivering van oligonucleotide-5′-trifosfaten, uitgaande van oligonucleotiden bereid door standaard geautomatiseerde synthesetechnieken.

Chemische trifosforylering van oligonucleotiden

Leer de handmatige synthese van oligo-peptoiden en hun sequentieanalyse met massaspectrometrie. Deze methode helpt beginners peptoiden te maken en te karakteriseren in standaard laboratoria.

Synthese en analyse van de Spectrometrie van de massa van Oligo-peptoids

Meer video's verkennen