Name: Intraperitoneaal Glucose tolerantie Test, meting van de longfunctie, en fixatie van de longen om te bestuderen van de gevolgen van obesitas en verminderde stofwisseling op pulmonaire resultaten (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-03-15T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 30 s
Description: Leer intraperitoneale glucosetolerantietesten en longfunctiemetingen om de impact van obesitas op pulmonale uitkomsten te onderzoeken. Deze methoden helpen bij het begrijpen van metabole stoornissen in ademhalingsziekten.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De experimenten werden ondersteund door de Marga en Walter Boll-Stiftung, Kerpen, Duitsland; Project 210-02-16 (MAAA), Project 210-03-15 (MAAA) en door de Duitse Research Foundation (DFG; AL1632-02; MAAA), Bonn, Duitsland; Centrum voor moleculaire geneeskunde Keulen (CMMC; Universitair ziekenhuis Keulen; Carrière Advancement programma; MAAA), Köln Fortune (faculteit geneeskunde, Universiteit van Keulen; KD).

Alle dierlijke procedures werden uitgevoerd met inachtneming van de protocollen aangenomen door lokale overheden (Land NRW, AZ: 2012.A424), en werden overeenkomstig de Duitse dierenwelzijn-wet en de verordeningen inzake het welzijn van dieren die voor experimenten of voor andere wetenschappelijke doeleinden worden gebruikt. Aangezien Long functie analyse van invloed kan zijn op de structuur van de longen en dus latere histologische analyseert, moet de meting van Res en Cdyn en de voorbereidings- en fixatie van de longen voor histomorphometry in verschillende dieren worden uitgevoerd. Meting van Res en Cdyn na ipGTT is echter mogelijk. Omdat stress tijdens de ipGTT zou kunnen met interfereren de narcose die nodig zijn voor de longfunctie test, een herstelperiode van ongeveer 2 weken na ipGTT is aanbevolen dat muizen om te herstellen van lichaam gewichtsverlies en veranderingen in bloed parameters12.
1. voorbereiding voor intraperitoneaal Glucose tolerantie Test (ipGTT)
Opmerking: Na 12 uur vasten, gaat de volledige ipGTT ongeveer 2 h.
<ol><li>Omdat stress invloeden bloedglucose aanzienlijk, opdat beide adaptie van muizen, alsmede opleiding van de wetenschapper, worden uitgevoerd.</li>
	<li>De dieren overbrengen in het experimentele gebied rustig en stress-vrij voorwaarden.</li>
	<li>Overweeg de toepassing van een hypercaloric dieet voor het opwekken van obesitas in muizen. Zie de sectie discussie voor verder advies.</li>
	<li>Snelle dieren voor 12u 's nachts, zonder toegang tot water te beperken. De volgende dag, de na 12 uur vasten, bereiden de bloedglucosemeter volgens de fabrikant protocol (Zie tabel van materialen) door het invoegen van een nieuwe test strip in de test strip poort.</li>
	<li>Incise het uiteinde van de staart met behulp van steriele schaar, zachtjes behoud van de muis bij de staart, en onmiddellijk de snelste bloedglucose meten door een druppel bloed vrijstromend (minimaal een steekproef grootte 0,5 µL) toe te passen op de strook van de test van de bloedglucosemeter. Opmerking: Een countdown timer begint op het scherm na voldoende toepassing van het bloedmonster. Na 4 s, het testresultaat op het scherm verschijnt.</li>
	<li>Daarna, wegen en label van de dieren die individueel met kleur markeren.</li>
	<li>Beheren van 2 g glucose/kg lichaam gewicht via intraperitoneale injectie. Zorg ervoor dat het geïnjecteerde volume 0,1 mL/10 g lichaamsgewicht (27 G naald en injectiespuit van 1 cc).</li>
	<li>Vervolgens meten van bloedglucose na 15, 30, 60 en 120 min door een druppel bloed vrijstromend op een nieuwe test strip toe te passen. Opmerking: Bloedstroom kan worden verhoogd door het zachte masseren van de staart tip-wijken. Als de wond staart encrusts, schoon te maken met behulp van een steriel doekje gedrenkt met 0,9% natriumchlorideoplossing.</li>
	<li>Toestaan dat de dieren kunnen rusten in hun huis kooien met onbeperkte toegang tot het water tussen de metingen.</li>
</ol>2. Long functie analyse maatregel Res en cDyn
Opmerking: Voor ongestoord meting van Res en cDyn, muizen moeten worden geventileerd onder diepe verdoving. Stressvrij dier behandeling en goede controle van de verdoving zijn essentieel. Voor algemene instructies met behulp van steriele technieken, door Hoogstraten-Miller et al. het artikel Lees 15
<ol><li>Kalibreren van het plethysmograph vóór elke set van experimenten en voorbereiden van de instellingen van de studie binnen de software (Zie Tabel van materialen).</li>
	<li>Voorafgaand aan de operatie, diep anesthetize dieren via intraperitoneale injectie van Xylazine (10 mg/kg lichaamsgewicht) en Ketamine (100 mg/kg lichaamsgewicht) (27 G naald en injectiespuit van 1 cc). Zorg ervoor dat het geïnjecteerde volume 0,1 mL/10 g per lichaamsgewicht. Opmerking: Aangezien ketamine een goede pijnstillende effect bij muizen heeft, geen extra pijnbehandeling nodig is. De invasieve tracheale katheter/plethysmograph procedure duurt ongeveer 5-7 minuten, dan u kunt beginnen met data-acquisitie.</li>
	<li>Plaats de muis op de liggende positie van een verwarming pad te handhaven van de lichaamstemperatuur.</li>
	<li>Dekking van de ogen met zalf om te voorkomen dat droogte onder verdoving.</li>
	<li>De diepte van de verdoving met behulp van de teen snuifje-reactie voortdurend te controleren. Opmerking: Extra toediening van verdoving mogelijk noodzakelijk zijn voor een chirurgische vliegtuig van de verdoving.</li>
	<li>Bevochtig de vacht van het chirurgische gebied in de regio van de schildklier met 70% ethanol.</li>
	<li>Zorgvuldig incise de huid in de schouderstreek voor ongeveer 1 cm tussen de jugular inkeping van het borstbeen en de tuber symphyses van de mentum door tillen met een tang en knippen van de huid onder de visuele inspectie met behulp van botte schaar (figuur 1A).</li>
	<li>Visualiseer de onderliggende onderhuids vetweefsel en de schildklier.</li>
	<li>Bloot in de luchtpijp door het zorgvuldig botte scheiden beide lobben van de schildklier bij de landengte en dissectie van de sternothyroid en de sternothyroid spieren (figuur 1B). Wees voorzichtig niet te schaden geen schepen en bloeden, omdat dit leiden nadelige effecten op het cardiovasculaire systeem tot kan en uiteindelijk op de metingen.</li>
	<li>Vervolgens passeren een 4-0 gevlochten chirurgische hechtdraad tussen de luchtpijp en de slokdarm met behulp van botte pincet. Zorgvuldig incise de luchtpijp dichtbij het strottenhoofd tussen de tracheale kraakbeen met micro schaar.</li>
	<li>Intubate met een tracheale buis (0,04 inch/1,02 mm doorsnede) onder visuele controle (Figuur 1 c). De buis via afbinding met de chirurgische hechtdraad om te voorkomen dat een lek in het systeem vast te stellen.</li>
	<li>Vervolgens verplaatst het dier aan het verwarmd bed van de kamer van het lichaam en de tracheale buis verbinden met de voorplaat (Figuur 1 d) en zet de ventilatie door op de ventilatie-knop op het voorpaneel van de controller (figuur 1E).</li>
	<li>Enquête de ventilatie door het observeren van de beweging van de borstkas gelijktijdig met het tarief van de ventilatie. Om te bevestigen de juiste plaatsing van de trachea buis, zien erop toe dat beide zijden van de thorax tegelijk verplaatsen.</li>
	<li>Bekijk de druk signaal op het scherm (figuur 1F). Ervoor zorgen dat de ventilatie-curven uniform. Als dit niet het geval, los van het dier en controleren van de kant van de chirurgie. Beware van bloed of slijm blokkeren de tracheale buis. Opmerking: Voor volwassen dieren met een lichaamsgewicht van 20-25 g, de ventilator instellingen zoals afgebeeld in Figuur 2 worden voorgesteld overeenkomstig de aanbevelingen van de fabrikant.</li>
	<li>Om wijzigingen in de trans-pulmonaire druk tijdens ventilatie, plaatst u een oesofageale buis (0,04 inch/1,02 mm doorsnede) in de slokdarm op de diepte die het niveau van de longen benadert. Let op het scherm terwijl het plaatsen van de buis. Plaats de buis waar maximale druk doorbuiging en minimale hart artefacten op het scherm kunnen worden gezien.</li>
	<li>Na de operatie, door het dier te voorbereiden door de meting. Terug verdoving via intraperitoneale injectie van Ketamine (100 mg/kg lichaamsgewicht) met behulp van een naald 27-G en 1 cc spuiten. Zorg ervoor dat het geïnjecteerde volume 0,1 mL/10 g per lichaamsgewicht. Opmerking: Om te beoordelen bronchiale hyperreagibility, inhalatie methacholine, een niet-selectieve muscarinerge receptor agonist van het parasympatisch zenuwstelsel, die bronchoconstrictie induceert. Data-acquisitie wordt uitgevoerd in vier verschillende fasen (Figuur 3).</li>
	<li>Start data-acquisitie volgens het manufacturer´s-protocol. Opmerking: De software automatisch begeleidt gebruikers door de acquisitie proces.</li>
	<li>10 µL van PBS (voertuig) toepast op de vernevelaar en beginnen nebulization na 5 min van de acclimatisering. Vervolgens volgt u van een fase van de reactie van 3 min, waar Res (cmH2O/mL/s) en cDyn (mL/cmH2van O) worden gemeten. Aan het eind, door een herstelfase van 3 min te geven door het dier vóór de volgende nebulization.</li>
	<li>Volg de software door stapsgewijze toepassing van 10 µL van toenemende concentraties van methacholine (2,5 µg/10 µL 6,25 µg/10 µL en 12,5 µg/10 µL) op de ventilator.</li>
	<li>Zodra alle metingen zijn uitgevoerd en geregistreerd, het dier te door cervicale dislocatie offeren.</li>
</ol>3. lung isolatie voor de kwantitatieve analyse van de Histomorphometric van volwassen muizen
<ol><li>Diep anesthetize de dierlijke via intraperitoneale injectie van Xylazine (10 mg/kg lichaamsgewicht) en Ketamine (100 mg/kg lichaamsgewicht) (27 G naald en injectiespuit van 1 cc). Het geïnjecteerde volume moet 0,1 mL/10 g per lichaamsgewicht. Opmerking: Na het bereiken van de staat van chirurgische tolerantie, de voorbereiding neemt ongeveer 5 min gevolgd door orgel perfusie en 30 min. voor fixatie.</li>
	<li>Zodra het dier bereikt de status van chirurgische tolerantie (negatieve teen snuifje-reactie), desinfecteren van het dier met 70% ethanol en monteren van het dier op een pad met chirurgische tape.</li>
	<li>Offeren het dier door cardiale punctie en bloeden. Kort, open de buik met een mediale incisie door de huid en het buikvlies met behulp van botte schaar.</li>
	<li>Zoek de middenrif hoofd wijken van de lever en zorgvuldig de lever te scheiden van het middenrif.</li>
	<li>Maak een kleine snede in het middenrif met behulp van botte schaar en punctate het linkerventrikel van het hart met een naald van 20 G gekoppeld aan een 2-mL spuit. Langzaam exsanguinate het dier. Opmerking: Langzaam en voorzichtig exsanguination is belangrijk om te voorkomen dat de ventrikels instorten als gevolg van de negatieve druk, remming van een ongestoorde bloedstroom.</li>
	<li>Ontleden de longen door het openen van de thorax zachtjes via een snede van de parasternal langs de gehele lengte van de ribbenkast gebogen, botte schaar gebruikt.</li>
	<li>Daarna til de ribbenkast blootstellen de pleurale Holte (Figuur 3 c). Verwijder de zwezerik om te zien van het hart en de longen. Opmerking: Optionele injectie van het rechterventrikel, gevolgd door perfusie van het vaatstelsel van longkanker met ijskoude PBS en vervolgens met een kleefpoeders oplossing [b.v.4% (massa/volume) paraformaldehyde (PFA)] is mogelijk. Wees ervan bewust dat er een verhoogd risico op scheuren alveolaire septum en negatieve invloed hebben op de structuur van de longen met behulp van deze methode.</li>
	<li>Ontleden van de longen door eerste zorgvuldig verwijderen van het hart.</li>
	<li>Vervolgens passeren een 4-0 gevlochten chirurgische hechtdraad tussen de luchtpijp en de slokdarm met behulp van botte pincet.</li>
	<li>Vervolgens zorgvuldig de luchtpijp dichtbij het strottenhoofd tussen de tracheale kraakbeen incise, intubate met een intraveneuze canule (26 G) en de longen blazen door druk fixatie bij een constante druk van 20 cm H2O met behulp van kleefpoeders agent [b.v.4% (massa /volume) van PFA].</li>
	<li>PFA fixatie, laat de fixeerspray gedurende 30 minuten bij kamertemperatuur. Daarna het afbinden van de luchtpijp en verwijder de canule. Vervolgens, de Long zorgvuldig accijnzen zonder nadelige gevolgen voor het weefsel, en sla het in kleefpoeders agent bij 4 ° C's nachts. Opmerking: U kunt ook volgens de ATS/ETS consensus papier 2,5% GA gebufferd OsO4, Uracil oplossing wordt gebruikt voor de stabilisatie van het juiste weefsel. Zie voor verdere voorbereiding van weefsel, de consensus papier door Hsia et al. 14
</li>
</ol>

<ol><li>Kelly, T., Yang, W., Chen, C. S., Reynolds, K., He, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+burden+of+obesity+in+2005+and+projections+to+2030%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Obes+%28Lond%29%22%5BJournal%5D)">Global burden of obesity in 2005 and projections to 2030.</a> Int J Obes (Lond). 32, 1431-1437 (2008).</li>
<li>Freemantle, N., Holmes, J., Hockey, A., Kumar, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+strong+is+the+association+between+abdominal+obesity+and+the+incidence+of+type+2+diabetes%3F%5BTitle%5D)+AND+%22International+journal+of+clinical+practice%22%5BJournal%5D)">How strong is the association between abdominal obesity and the incidence of type 2 diabetes?</a> International journal of clinical practice. 62, 1391-1396 (2008).</li>
<li>Wassink, A. M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Waist+circumference+and+metabolic+risk+factors+have+separate+and+additive+effects+on+the+risk+of+future+Type+2+diabetes+in+patients+with+vascular+diseases.+A+cohort+study%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetic+Medicine%22%5BJournal%5D)">Waist circumference and metabolic risk factors have separate and additive effects on the risk of future Type 2 diabetes in patients with vascular diseases. A cohort study.</a> Diabetic Medicine. 28, 932-940 (2011).</li>
<li>Oktay, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Interaction+of+Cardiorespiratory+Fitness+with+Obesity+and+the+Obesity+Paradox+in+Cardiovascular+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+cardiovascular+diseases%22%5BJournal%5D)">The Interaction of Cardiorespiratory Fitness with Obesity and the Obesity Paradox in Cardiovascular Disease.</a> Progress in cardiovascular diseases. , (2017).</li>
<li>Azamar-Llamas, D., Hernandez-Molina, G., Ramos-Avalos, B., Furuzawa-Carballeda, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipokine+Contribution+to+the+Pathogenesis+of+Osteoarthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Mediators+Inflamm%22%5BJournal%5D)">Adipokine Contribution to the Pathogenesis of Osteoarthritis.</a> Mediators Inflamm. 2017, 5468023(2017).</li>
<li>Koenig, S. M. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/11307867">Pulmonary complications of obesity.</a> The American journal of the medical sciences. 321, 249-279 (2001).</li>
<li>Stunkard, A. J. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/8629660">Current views on obesity.</a> The American journal of medicine. 100, 230-236 (1996).</li>
<li>Murugan, A. T., Sharma, G. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19029235">Obesity and respiratory diseases.</a> Chron Respir Dis. 5, 233-242 (2008).</li>
<li>Zammit, C., Liddicoat, H., Moonsie, I., Makker, H. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2990395/">Obesity and respiratory diseases.</a> International journal of general medicine. 3, 335-343 (2010).</li>
<li>Ouchi, N., Parker, J. L., Lugus, J. J., Walsh, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipokines+in+inflammation+and+metabolic+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Adipokines in inflammation and metabolic disease.</a> Nat Rev Immunol. 11, 85-97 (2011).</li>
<li>McArdle, M. A., Finucane, O. M., Connaughton, R. M., McMorrow, A. M., Roche, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+obesity-induced+inflammation+and+insulin+resistance%3A+insights+into+the+emerging+role+of+nutritional+strategies%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Endocrinol+%28Lausanne%29%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of obesity-induced inflammation and insulin resistance: insights into the emerging role of nutritional strategies.</a> Front Endocrinol (Lausanne). 4, 52(2013).</li>
<li>Ayala, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Standard+operating+procedures+for+describing+and+performing+metabolic+tests+of+glucose+homeostasis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Disease+models+%26+mechanisms%22%5BJournal%5D)">Standard operating procedures for describing and performing metabolic tests of glucose homeostasis in mice.</a> Disease models & mechanisms. 3, 525-534 (2010).</li>
<li>Bates, J. H., Irvin, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+lung+function+in+mice%3A+the+phenotyping+uncertainty+principle%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">Measuring lung function in mice: the phenotyping uncertainty principle.</a> J Appl Physiol. 94 (1985), 1297-1306 (2003).</li>
<li>Hsia, C. C., Hyde, D. M., Ochs, M., Weibel, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+official+research+policy+statement+of+the+American+Thoracic+Society%2FEuropean+Respiratory+Society%3A+standards+for+quantitative+assessment+of+lung+structure%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Respir+Crit+Care+Med%22%5BJournal%5D)">An official research policy statement of the American Thoracic Society/European Respiratory Society: standards for quantitative assessment of lung structure.</a> Am J Respir Crit Care Med. 181, 394-418 (2010).</li>
<li>Hoogstraten-Miller, S. L., Brown, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Techniques+in+aseptic+rodent+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Immunol%22%5BJournal%5D)">Techniques in aseptic rodent surgery.</a> Curr Protoc Immunol. Chapter 1, Unit 1 12 11-11 12-14 (2008).</li>
<li>Heydemann, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Overview+of+Murine+High+Fat+Diet+as+a+Model+for+Type+2+Diabetes+Mellitus%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+diabetes+research%22%5BJournal%5D)">An Overview of Murine High Fat Diet as a Model for Type 2 Diabetes Mellitus.</a> Journal of diabetes research. 2016, 2902351(2016).</li>
<li>Asha, G. V., Raja Gopal Reddy, M., Mahesh, M., Vajreswari, A., Jeyakumar, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Male+mice+are+susceptible+to+high+fat+diet-induced+hyperglycaemia+and+display+increased+circulatory+retinol+binding+protein+4+%28RBP4%29+levels+and+its+expression+in+visceral+adipose+depots%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+physiology+and+biochemistry%22%5BJournal%5D)">Male mice are susceptible to high fat diet-induced hyperglycaemia and display increased circulatory retinol binding protein 4 (RBP4) levels and its expression in visceral adipose depots.</a> Archives of physiology and biochemistry. 122, 19-26 (2016).</li>
<li>Jovicic, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+Immunometabolic+Phenotype+in+Th1+and+Th2+Dominant+Mouse+Strains+in+Response+to+High-Fat+Feeding%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Differential Immunometabolic Phenotype in Th1 and Th2 Dominant Mouse Strains in Response to High-Fat Feeding.</a> PLoS One. 10, e0134089(2015).</li>
<li>Fontaine, D. A., Davis, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Attention+to+Background+Strain+Is+Essential+for+Metabolic+Research%3A+C57BL%2F6+and+the+International+Knockout+Mouse+Consortium%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Attention to Background Strain Is Essential for Metabolic Research: C57BL/6 and the International Knockout Mouse Consortium.</a> Diabetes. 65, 25-33 (2016).</li>
<li>Muniyappa, R., Lee, S., Chen, H., Quon, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+approaches+for+assessing+insulin+sensitivity+and+resistance+in+vivo%3A+advantages%2C+limitations%2C+and+appropriate+usage%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Endocrinol+Metab%22%5BJournal%5D)">Current approaches for assessing insulin sensitivity and resistance in vivo: advantages, limitations, and appropriate usage.</a> Am J Physiol Endocrinol Metab. 294, E15-E26 (2008).</li>
<li>Heijboer, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sixteen+hours+of+fasting+differentially+affects+hepatic+and+muscle+insulin+sensitivity+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+lipid+research%22%5BJournal%5D)">Sixteen hours of fasting differentially affects hepatic and muscle insulin sensitivity in mice.</a> Journal of lipid research. 46, 582-588 (2005).</li>
<li>Heikkinen, S., Argmann, C. A., Champy, M. F., Auwerx, J. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/18265403">Evaluation of glucose homeostasis.</a> Current protocols in molecular biology. Chapter 29, Unit 29B.23 (2007).</li>
<li>McGuinness, O. P., Ayala, J. E., Laughlin, M. R., Wasserman, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NIH+experiment+in+centralized+mouse+phenotyping%3A+the+Vanderbilt+experience+and+recommendations+for+evaluating+glucose+homeostasis+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Endocrinol+Metab%22%5BJournal%5D)">NIH experiment in centralized mouse phenotyping: the Vanderbilt experience and recommendations for evaluating glucose homeostasis in the mouse.</a> Am J Physiol Endocrinol Metab. 297, E849-E855 (2009).</li>
<li>Ayala, J. E., Bracy, D. P., McGuinness, O. P., Wasserman, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Considerations+in+the+design+of+hyperinsulinemic-euglycemic+clamps+in+the+conscious+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Considerations in the design of hyperinsulinemic-euglycemic clamps in the conscious mouse.</a> Diabetes. 55, 390-397 (2006).</li>
<li>Lodhi, I. J., Semenkovich, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Why+we+should+put+clothes+on+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metab%22%5BJournal%5D)">Why we should put clothes on mice.</a> Cell Metab. 9, 111-112 (2009).</li>
<li>Swoap, S. J., Gutilla, M. J., Liles, L. C., Smith, R. O., Weinshenker, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+full+expression+of+fasting-induced+torpor+requires+beta+3-adrenergic+receptor+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">The full expression of fasting-induced torpor requires beta 3-adrenergic receptor signaling.</a> J Neurosci. 26, 241-245 (2006).</li>
<li>Geiser, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolic+rate+and+body+temperature+reduction+during+hibernation+and+daily+torpor%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Physiol%22%5BJournal%5D)">Metabolic rate and body temperature reduction during hibernation and daily torpor.</a> Annu Rev Physiol. 66, 239-274 (2004).</li>
<li>Mead, J. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/13768766">Mechanical properties of lungs.</a> Physiological reviews. 41, 281-330 (1961).</li>
<li>Lundblad, L. K., Irvin, C. G., Adler, A., Bates, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+reevaluation+of+the+validity+of+unrestrained+plethysmography+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">A reevaluation of the validity of unrestrained plethysmography in mice.</a> J Appl Physiol. 93, 1198-1207 (2002).</li>
<li>Lundblad, L. K., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/17906089">Penh is not a measure of airway resistance!</a> Eur Respir J. 30, 805(2007).</li>
<li>Adler, A., Cieslewicz, G., Irvin, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unrestrained+plethysmography+is+an+unreliable+measure+of+airway+responsiveness+in+BALB%2Fc+and+C57BL%2F6+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">Unrestrained plethysmography is an unreliable measure of airway responsiveness in BALB/c and C57BL/6 mice.</a> J Appl Physiol. 97, 286-292 (2004).</li>
<li>Fairchild, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+respiratory+volume+for+virus+retention+studies+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+microbiology%22%5BJournal%5D)">Measurement of respiratory volume for virus retention studies in mice.</a> Applied microbiology. 24, 812-818 (1972).</li>
<li>Brown, R. H., Wagner, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+bronchoprotection+by+anesthetic+induction+agents%3A+propofol+versus+ketamine%5BTitle%5D)+AND+%22Anesthesiology%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of bronchoprotection by anesthetic induction agents: propofol versus ketamine.</a> Anesthesiology. 90, 822-828 (1999).</li>
<li>Goyal, S., Agrawal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ketamine+in+status+asthmaticus%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22Indian+journal+of+critical+care+medicine%3A+peer-reviewed%2C+official+publication+of+Indian+Society+of+Critical+Care+Medicine%22%5BJournal%5D)">Ketamine in status asthmaticus: A review.</a> Indian journal of critical care medicine: peer-reviewed, official publication of Indian Society of Critical Care Medicine. 17, 154-161 (2013).</li>
<li>Doi, M., Ikeda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Airway+irritation+produced+by+volatile+anaesthetics+during+brief+inhalation%3A+comparison+of+halothane%2C+enflurane%2C+isoflurane+and+sevoflurane%5BTitle%5D)+AND+%22Canadian+journal+of+anaesthesia+%3D+Journal+canadien+d%27anesthesie%22%5BJournal%5D)">Airway irritation produced by volatile anaesthetics during brief inhalation: comparison of halothane, enflurane, isoflurane and sevoflurane.</a> Canadian journal of anaesthesia = Journal canadien d'anesthesie. 40, 122-126 (1993).</li>
<li>Braber, S., Verheijden, K. A., Henricks, P. A., Kraneveld, A. D., Folkerts, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparison+of+fixation+methods+on+lung+morphology+in+a+murine+model+of+emphysema%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Lung+Cell+Mol+Physiol%22%5BJournal%5D)">A comparison of fixation methods on lung morphology in a murine model of emphysema.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 299, L843-L851 (2010).</li>
<li>Weibel, E. R., Limacher, W., Bachofen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electron+microscopy+of+rapidly+frozen+lungs%3A+evaluation+on+the+basis+of+standard+criteria%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+applied+physiology%3A+respiratory%2C+environmental+and+exercise+physiology%22%5BJournal%5D)">Electron microscopy of rapidly frozen lungs: evaluation on the basis of standard criteria.</a> Journal of applied physiology: respiratory, environmental and exercise physiology. 53, 516-527 (1982).</li>
<li>Rolls, G. <a target="_blank" href="http://www.leicabiosystems.com/pathologyleaders/fixation-and-fixatives-1-the-process-of-fixation-and-the-nature-of-fixatives/">Process of Fixation and the Nature of Fixatives</a>. , (2017).</li>
<li>Winsor, L. Tissue processing. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWinsor%2C+L+%22Laboratory+histopathology%22">Laboratory histopathology</a>. Woods, A., Ellis, R. , 4.2-1-4.2-39 (1994).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Histochemistry%2C+theoretical+and+applied%22">Histochemistry, theoretical and applied</a>. Pearse, A. , Churchill Livingstone. London. (1980).</li>
<li>Weibel, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphological+basis+of+alveolar-capillary+gas+exchange%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+reviews%22%5BJournal%5D)">Morphological basis of alveolar-capillary gas exchange.</a> Physiological reviews. 53, 419-495 (1973).</li>
<li>Bur, S., Bachofen, H., Gehr, P., Weibel, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lung+fixation+by+airway+instillation%3A+effects+on+capillary+hematocrit%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+lung+research%22%5BJournal%5D)">Lung fixation by airway instillation: effects on capillary hematocrit.</a> Experimental lung research. 9, 57-66 (1985).</li>
<li>Bachofen, H., Ammann, A., Wangensteen, D., Weibel, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perfusion+fixation+of+lungs+for+structure-function+analysis%3A+credits+and+limitations%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+applied+physiology%3A+respiratory%2C+environmental+and+exercise+physiology%22%5BJournal%5D)">Perfusion fixation of lungs for structure-function analysis: credits and limitations.</a> Journal of applied physiology: respiratory, environmental and exercise physiology. 53, 528-533 (1982).</li>
<li>Balcombe, J. P., Barnard, N. D., Sandusky, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laboratory+routines+cause+animal+stress%5BTitle%5D)+AND+%22Contemporary+topics+in+laboratory+animal+science%22%5BJournal%5D)">Laboratory routines cause animal stress.</a> Contemporary topics in laboratory animal science. 43, 42-51 (2004).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Dit rapport bevat drie protocollen voor drie verschillende methoden voor het analyseren van de gevolgen van obesitas op glucose metabolisme en pulmonaire resultaten. Eerst de glucose tolerantie test biedt de mogelijkheid om het analyseren van intracellulaire glucose-opname en kan worden indicatie van insulineresistentie. Ten tweede, hele lichaam plethysmography is een techniek voor het meten van de longfunctie en is daarmee handig voor het testen van de werkzaamheid van nieuwe behandelingen. Ten derde, een gestandaardise...

Volgens de World Health Organization (WHO) in 2008, waren meer dan 1,4 miljard volwassenen, leeftijd 20 en ouder, overgewicht met een index van de lichaamsmassa (BMI) groter is dan of gelijk aan 25; verder, meer dan 200 miljoen mannen en bijna 300 miljoen vrouwen waren zwaarlijvig (BMI≥30)1. Obesitas en het metabool syndroom zijn belangrijke risicofactoren voor een veelheid aan ziekten. Terwijl de zwaarlijvigheid en de daarmee gepaard gaande verhoogde witte vetweefsel massa is nauw gekoppeld om type 2 diabetes2,3, cardio-vasculaire ziekten, met inbegrip van coronaire hartziekte (CHZ), hartfalen (HF), boezemfibrilleren4 en artrose5, hun functionele rol in de pathogenese van respiratoire aandoeningen blijven slecht begrepen. Echter, de epidemiologische studies hebben aangetoond dat obesitas sterk geassocieerd met chronische respiratoire aandoeningen is, met inbegrip van inspanningsdyspnoe kortademigheid, obstructieve slaap apneu syndroom (OSAS), obesitas Ademdepressie syndroom (OHS), chronische obstructieve longziekte (COPD), longembolie, aspiratie pneumonie en bronchiale astma6,,7,,8,9. Potentiële mechanismen tussen obesitas en metabolisme verstoord, bijvoorbeeld, insulineresistentie en diabetes type II, aan de pathogenese van chronische longziekte niet alleen bestaan uit mechanische en fysieke gevolgen van gewicht maar ook winst op ventilatie veroorzaken een chronische subacute inflammatoire staat10,11. De opkomst van obesitas en longziekten tijdens het afgelopen decennium, in combinatie met het gebrek aan effectieve preventieve strategieën en therapeutische benaderingen, wijst op de noodzaak te onderzoeken van de moleculaire mechanismen voor het definiëren van nieuwe wegen voor het beheer van obesitas Long ziekten.
Hier beschrijven we drie standaard tests, die belangrijke basisprincipes om obesitas en het effect ervan op longkanker structuur en functie in muismodellen te onderzoeken: (1) intraperitoneaal glucose tolerantie (ipGTT) (2) meting van de weerstand van de luchtwegen (Res) en respiratoire naleving van het systeem (Cdyn); en (3) voorbereiding en fixatie van de longen voor verdere kwantitatieve histologische beoordeling. De ipGTT is een robuuste screeningtest voor maatregel glucose-opname, en dus het effect van obesitas op metabolisme. De eenvoud van de methode kan goede normalisatie, en daarom de vergelijkbaarheid van de resultaten tussen laboratoria. Meer verfijnde methoden, zoals hyperglycemic klemmen of studies van geïsoleerde eilandjes, kunnen worden gebruikt voor gedetailleerde analyse van de metabole fenotype12. Hier beoordelen we glucosetolerantie als u wilt definiëren een obesitas-geassocieerde staat van systemische en metabolische wanorde als basis voor verdere studies over een pulmonaire resultaten. Om te beoordelen van het effect van obesitas en stofwisselingsziekte op de longfunctie, gemeten we airway weerstand (Res) en ademhalingswegen compliance (Cdyn). Karakteriseren longziekte, zijn ongebreidelde evenals ingetogen methoden voor de beoordeling van de longfunctie beschikbaar. Ongebreidelde plethysmography in vrij bewegende dieren bootst een natuurlijke staat, als gevolg van ademhaling patronen; daarentegen zijn invasieve methoden, zoals ingangsimpedantie meting van Res en cDyn in diep narcose muizen te beoordelen van dynamische Long mechanica, nauwkeuriger13. Omdat chronische respiratoire aandoeningen worden weerspiegeld door histologische wijzigingen van het longweefsel, staat voor de deur goede longen fixatie voor verdere analyse. De keuze van de methode van weefsel fixatie en voorbereiding is afhankelijk van het compartiment van de longen, die zal worden bestudeerd, bijvoorbeeld airways of Long parenchym14. Hier beschrijven we een methode die het mogelijk kwalitatieve en kwantitatieve beoordeling van de dirigent luchtwegen maakt te bestuderen van het effect van obesitas op ontwikkeling van astma.

<table><tbody><tr><td>GlucoMen LX</td><td>A.Menarini diagnostics, Firneze, Italy</td><td>38969</td><td>bloedglucosemeter</td></tr><tr><td>GlucoMen LX Sensor</td><td>A.Menarini diagnostics, Firneze, Italy</td><td>39765</td><td>Teststrips</td></tr><tr><td>Glucose 20%</td><td>B. Braun, Melsungen, Germany</td><td>2356746</td><td></td></tr><tr><td>FinePointe Software</td><td>DSI, MC s&acute;Hertogenbosch, Netherlands</td><td>601-1831-002</td><td></td></tr><tr><td>FinePointe RC Single Site Mouse Table</td><td>DSI, MC s&acute;Hertogenbosch, Netherlands</td><td>601-1831-001</td><td></td></tr><tr><td>FPRC Controller</td><td>DSI, MC s&acute;Hertogenbosch, Netherlands</td><td>601-1075-001</td><td></td></tr><tr><td>FPRC Aerosol Block</td><td>DSI, MC s&acute;Hertogenbosch, Netherlands</td><td>601-1106-001</td><td></td></tr><tr><td>Aerogen neb head-5.2-4um</td><td>DSI, MC s&acute;Hertogenbosch, Netherlands</td><td>601-2306-001</td><td></td></tr><tr><td>Forceps</td><td>FST, British Columbia, Canada</td><td>11065-07</td><td></td></tr><tr><td>Blunt scissors</td><td>FST, British Columbia, Canada</td><td>14105-12</td><td></td></tr><tr><td>Micro scissors</td><td>FST, British Columbia, Canada</td><td>15000-00</td><td></td></tr><tr><td>Perma-Hand 4-0</td><td>Ethicon, Puerto Rico, USA</td><td>736H</td><td>Chirurgische hechtdraad</td></tr><tr><td>Roti-Histofix 4%</td><td>Roth</td><td>P087.1</td><td>4% Paraformaldehyd</td></tr><tr><td>Ketaset</td><td>Zoetis, Berlijn, Germany</td><td>10013389</td><td>Ketamine</td></tr><tr><td>Rompun 2%</td><td>Bayer, Leverkusen, Germany</td><td>770081</td><td>Xylazine</td></tr></tbody></table>

intraperitoneaal glucose tolerantie test, meting van de longfunctie, en fixatie van de longen om te bestuderen van de gevolgen van obesitas en verminderde stofwisseling op pulmonaire resultaten

Intraperitoneal Glucose Tolerance Test, Measurement of Lung Function, and Fixation of the Lung to Study the Impact of Obesity and Impaired Metabolism on Pulmonary Outcomes

Obesitas en respiratoire aandoeningen zijn grote gezondheidsproblemen. Obesitas is steeds een opkomende epidemie met een verwachte aantal zwaarlijvige individuen van meer dan 1 miljard wereldwijd in 2030, dus vertegenwoordigen een groeiende sociaal-economische last. Gelijktijdig, zijn obesitas-gerelateerde comorbidities, met inbegrip van diabetes, alsmede hart en chronische longziekten, voortdurend op de stijging. Hoewel obesitas is geassocieerd met verhoogd risico op astma exacerbaties, wordt verslechtering van de respiratoire symptomen, en slechte controle, de functionele rol van obesitas en verontrust metabolisme in de pathogenese van chronische longziekte vaak onderschat, en moleculaire mechanismen blijven elusive. Dit artikel beoogt te presenteren van de methoden voor de beoordeling van het effect van obesitas op metabolisme, evenals Long structuur en functie. Hier beschrijven we drie technieken voor muizen studies: (1) beoordeling van intraperitoneaal glucosetolerantie (ipGTT) voor analyseren het effect van obesitas op glucose metabolisme; (2) meting van de weerstand van de luchtwegen (Res) en ademhalingswegen compliance (Cdyn) voor het analyseren van de invloed van obesitas op de longfunctie; en (3) voorbereiding en fixatie van de longen voor verdere kwantitatieve histologische beoordeling. Obesitas longziekten zijn waarschijnlijk multifactoriële, die voortvloeien uit de systemische inflammatoire en metabole disregulatie die potentieel ongunstig beïnvloeden longfunctie en de respons op therapie. Daarom is een gestandaardiseerde methode voor het bestuderen van de moleculaire mechanismen en het effect van nieuwe behandelingen essentieel.

Representatieve resultaten van intraperitoneaal glucose tolerantie test (ipGTT) (Figuur 4), Long functie test (Figuur 5), en de vertegenwoordiger beelden ter illustratie van de haematoxyline en eosine gekleurd longen (Figuur 6).
De ipGTT werd uitgevoerd in zwaarlijvige muizen (blauw) na 7 weken van hoog-vet-dieet (HFD). Standaard dieet-gevo...

De incidentie van obesitas stijgt en verhoogt het risico van chronische longziekten. De onderliggende mechanismen en preventieve strategieën, welomschreven dier vast te stellen modellen nodig zijn. Hier bieden wij drie methoden (glucose-tolerantie-test, lichaam plethysmography en fixatie van de Long) te bestuderen van het effect van obesitas op pulmonaire resultaten in muizen.

Intraperitoneaal Glucose tolerantie Test, meting van de longfunctie, en fixatie van de longen om te bestuderen van de gevolgen van obesitas en verminderde stofwisseling op pulmonaire resultaten

Obesity and respiratory disorders are major health problems. Obesity is becoming an emerging epidemic with an expected number of over 1 billion obese ...

Het algemene doel van de volgende drie methoden is om de impact van obesitas en metabole stoornissen op de longstructuur en -functie te bestuderen. Deze methoden kunnen helpen om belangrijke vragen in het ademhalingsonderzoeksveld te beantwoorden over de impact van metabole stoornissen op longstructuur en longfunctie. Het voordeel van deze technieken is dat ze kunnen worden gecombineerd om de functionele rol van metabolisme op de pathogenese van chronische longziekten te beoordelen en om verschillende therapeutische benaderingen te testen.De implicaties van deze technieken strekken zich uit van fenotypering tot wat de specifieke functionele rol van metabole doelen in de pathogenese van longziekten verduidelijkt. Deze methoden kunnen ook worden toegepast op de studie van structuur en functie bij zowel gezonde dieren met genetische modificaties, maar ook bij diermodellen van COPD en astma. Over het algemeen zullen personen die nieuw zijn met deze methoden worstelen, omdat het inbrengen van de tracheaalbuis, de insufflatie van de long en de toediening van de diepe anesthesie allemaal ervaring en training vereisen.We hadden eerst het idee voor deze methoden toen we ontdekten dat vroeg beginnende obesitas bij muizen maar ook bij mensen nauw verbonden was met de invloed op metabolisme en op chronische longziekten buiten de kindertijd. Om de intraperitoneale glucosetolerantie te meten, beperk dan voorzichtig een 12 uur vastende volwassen muis door de staart en gebruik steriele schaar om de staartpunt in te snijden. Breng onmiddellijk een vrij vloeiende druppel bloed aan op de teststrip van de bloedglucosemeter om het vastenbloedglucoseniveau te meten.Het testresultaat verschijnt na vier seconden op het glucometerscherm. Na het meten van de glucose voor elk dier, label ze afzonderlijk met gekleurde markeerstiften en weeg de dieren. Gebruik vervolgens een naald van 27 gauge verbonden aan een spuit van één milliliter om 100 microliters glucose per ton gram lichaamsgewicht toe te dienen aan elk dier via intraperitoneale injectie en meet de bloedglucosewaarden 15, 30, 60 en 120 minuten later met nieuwe teststrips zoals zojuist is gedemonstreerd.Om de longfunctie te beoordelen, plaats een volwassen muis in de rugligging op een kussen en breng zalf aan op de ogen van het dier. Nadat u een gebrek aan reactie op teenprik hebt bevestigd, maakt u het haar in de schildklierstreek nat met 70% ethanol en gebruikt u een pincet om de huid op te tillen in het midden tussen de jukbeensnede bij het borstbeen en het tuber symphysis van het mentum. Gebruik stompe schaar om voorzichtig een huidsnede van één centimeter te maken in de gespannen huid om het onderliggende subcutane vetweefsel en de schildklier te visualiseren en de luchtpijp bloot te leggen met zorgvuldige stompe scheiding van beide schildklierkwabben bij het isthmus en dissectie van de sternothyroid en sternothyroid spieren.Gebruik scherpe pincetten om een ​​4-0 gevlochten chirurgische naald tussen de luchtpijp en de slokdarm te passeren en snij voorzichtig de luchtpijp dicht bij het strottenhoofd tussen de tracheakraakbeen met microschaar. Intubeer met een tracheaalbuis en bevestig de buis met een chirurgische naald en verplaats het dier naar het verwarmde bed van een lichaamskamer. Verbind de tracheaalbuis met de gezichtsplaat en zet de ventilator aan.Bevestig de beweging van de borstkas tegelijkertijd met de ventilatiesnelheid om de juiste plaatsing van de tracheaalbuis te bevestigen en observeer het druksignal op het computerscherm. Om veranderingen in de transpulmonale druk tijdens ventilatie te beheersen, steekt u een slokdarmsonde in tot op het niveau van de longen en bekijkt u het scherm om de plaatsing van de sonde te vergemakkelijken waar maximale drukdeflectie en minimale hartslag kunnen worden waargenomen. Begin de gegevensverzameling volgens de instructies van de fabrikant en breng 10 microliters PBS aan op de vernevelaar.Begin met vernevelen na vijf minuten acclimatisatie gevolgd door een responsfase van drie minuten waarin de luchtwegweerstand en de compliantie van het ademhalingssysteem worden gemeten. Laat het dier drie minuten herstellen voordat u begint met de volgende vernevelen en volg de software-instructies voor stapsgewijze toepassing van toenemende 10-microliterconcentraties van methacholin op de ventilator. Voor een kwantitatieve histomorphometrische analyse van het longweefsel, maakt u een kleine incisie in het diafragma van een volwassen muis met stompe schaar en gebruikt u gekromde stompe schaar om een ​​peristernaalincisie te maken over de gehele lengte van de ribbenkast om de borstholte voorzichtig te openen.Til de ribbenkast op om de pleuraholte bloot te leggen en verwijder de thymus. Nadat u het hart hebt verwijderd, gebruikt u scherpe pincetten om de luchtpijp voor te bereiden en bloot te leggen om een ​​4-0 gevlochten chirurgische naald tussen de luchtpijp en de slokdarm te passeren, gevolgd door een zorgvuldige incisie van de luchtpijp dicht bij het strottenhoofd tussen de tracheakraakbeen. Intubeer met een intraveneuze canule van 26 gauge en gebruik een fixeermiddel om de longen op te blazen door drukfixatie bij een constante druk van 20 centimeter water.Na 30 minuten bij kamertemperatuur, bind de luchtpijp en verwijder de canule tegelijkertijd. Vervolgens snijdt u de longen voorzichtig uit zonder het weefsel te beschadigen en bewaart u de longen in vers fixeermiddel bij vier graden Celsius een nacht. Obese muizen vertonen een verhoging van serumglucosewaarden 15 en 30 minuten na intraperitoneale glucose-injectie, wat wijst op een verminderde cellulaire glucoseopname in vergelijking met muizen die een standaarddieet krijgen.Invasieve longfunctieanalyse toont een tot 1,5 keer hogere luchtwegweerstand bij obese muizen die een vetrijk dieet krijgen na stimulatie met methacholin in vergelijking met controledieren. Hematoxyline en eosinekleuring van longparenchymsecties na intratracheale installatie toont meerdere niet opgeblazen gebieden, dikke alveolaire septa en veelhoekige alveoli in longen die met te weinig druk zijn geïnstilleerd. Daarentegen leidt te veel instillatiedruk tot overgeblazen gebieden met vernietigde alveolaire septa.Toepassing van de juiste hoeveelheid druk tijdens longfixatie leidt echter tot een volledig opgeblazen long met rondvormige alve

intraperitoneal-glucose-tolerance-test-measurement-lung-function

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

This video introduces how to perform an oral glucose tolerance test on a laboratory mouse.

Oral Glucose Tolerance Test (OGTT): Measuring Glucose Metabolism in Mice

Het doel van dit protocol is om een ​​standaard methode te presenteren aan intraveneuze glucose tolerantie testen (IVGTTs) uit te voeren om de glykemische controle van niet-menselijke primaten te evalueren en hun metabolische status dysmetabolic beoordelen van gezonde.

Karakterisering van Metabolic Status in niet-humane primaten met de intraveneuze glucosetolerantietest

Deze studie beschrijft een protocol dat 18F-FDG en positronemissietomografie/computertomografie (PET/CT) beeldvorming, samen met kinetiekmodellering, gebruikt om de in vivo, real-time opname van 18F-FDG in weefsels te kwantificeren.

Het bepalen van glucosemetabolisme Kinetics Met behulp<sup&gt; 18</sup&gt; F-FDG Micro-PET / CT

Interne longoppervlakte (ISA) is een kritisch criterium voor de beoordeling van longmorfologie en fysiologie bij longziekten en schade-geïnduceerde alveolaire regeneratie. We beschrijven hier een gestandaardiseerde methode die de metafora voor ISA kan minimaliseren in zowel longpneumonectomy als protes implantatie muis modellen.

Een gestandaardiseerde methode voor het meten van het interne longoppervlak door middel van muizenpneumonectomy en prothese implantatie

Het huidige artikel beschrijft het genereren en metabole karakterisering van vetrijke dieet-gevoed muizen als een model van dieet-geïnduceerde insulineresistentie en overgewicht. Het beschikt verder over gedetailleerde protocollen voor het uitvoeren van de orale glucose tolerantie test en de insuline tolerantie test, toezicht op de gehele lichaam wijzigingen van het glucose metabolisme in vivo.

Studie van In Vivo Glucose metabolisme in High-fat dieet-gevoed muizen met behulp van orale Glucose tolerantie Test (OGTT) en insuline tolerantie Test (ITT)

Dit protocol beschrijft het gebruik van een lichaam samenstelling analyzer en metabole dierlijke controlesysteem te karakteriseren lichaamssamenstelling en metabole parameters in muizen. Een model van de obesitas geïnduceerd door vetrijke voeding wordt gebruikt als een voorbeeld voor de toepassing van deze technieken.

Lichaamssamenstelling en metabole kooien analyse in hoge vet Fed muizen

Extracellulaire depletie van fluorescerend gelabelde glucose correleert met glucoseopname en kan worden gebruikt voor high-throughput screening van glucoseopname in weggesneden organen en celculturen.

Extracellulaire glucosedepletie als een indirecte maat voor glucoseopname in cellen en weefsels Ex Vivo

Dit protocol presenteert een methode om de pulmonale alveolaire-capillaire reserve te beoordelen, gemeten door gecombineerde meting met één ademhaling van het diffuse vermogen tot koolmonoxide (DL, CO) en stikstofmonoxide (DL, NO) tijdens inspanning. Aannames en aanbevelingen voor het gebruik van de techniek tijdens het sporten vormen de basis van dit artikel.

Meting van de longverspreidingscapaciteit met dubbel testgas tijdens inspanning bij mensen met behulp van de methode met één ademhaling

Elektrische impedantietomografie is een niet-invasieve, stralingsvrije, real-time tool voor het monitoren van longventilatie. Door impedantieveranderingen in de thorax te meten, kan het de verdeling van lucht adem voor adem visualiseren. Elektrische impedantietomografie was oorspronkelijk bedoeld voor ventilatiebewaking, maar kan ook de perfusie meten via intraveneuze injectie van een zoutoplossing.

Monitoring van de longfunctie met elektrische impedantietomografie op de intensive care

De huidige diagnostische antimicrobiële gevoeligheid testen is gebaseerd op de groei van plankton isolaten in voedselrijk, aërobe omstandigheden. Hier maken we gebruik van een alternatieve kunstmatige sputum medium om antimicrobiële gevoeligheid van Pseudomonas aeruginosa biofilms te bestuderen onder zowel aërobe en Microaërofiele voorwaarden meer representatief zijn voor de cystic fibrosis long.

Het gebruik van kunstmatige Sputum Middelgrote tot antibiotica werkzaamheid te testen tegen<em&gt; Pseudomonas aeruginosa</em&gt; In Voorwaarden relevanter voor de Cystic Fibrosis Lung

Leer intraperitoneale glucosetolerantietesten en longfunctiemetingen om de impact van obesitas op pulmonale uitkomsten te onderzoeken. Deze methoden helpen bij het begrijpen van metabole stoornissen in ademhalingsziekten.

Intraperitoneaal Glucose tolerantie Test, meting van de longfunctie, en fixatie van de longen om te bestuderen van de gevolgen van obesitas en verminderde stofwisseling op pulmonaire resultaten (Video) | JoVE Journal

Intraperitoneaal Glucose tolerantie Test, meting van de longfunctie, en fixatie van de longen om te bestuderen van de gevolgen van obesitas en verminderde stofwisseling op pulmonaire resultaten

Meer video's verkennen