Name: Stenose van de Vena Cava Inferior: een lymfkliertest Model van diep-veneuze trombose (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-12-22T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 37 s
Description: Leer een chirurgische methode voor diep-veneuze tromboseonderzoek bij muizen door stenose van de vena cava inferior te creëren. Dit model simuleert bloedstroomverstoring en helpt bij het bestuderen van trombusvorming.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd gesteund door de Britse Hartstichting (PG/13/60/30406) en de Universiteit van Birmingham.

Alle dierlijke procedures zijn door Animal Welfare beroepsinstantie ethische en het UK Home Office (UK, Project License 40/3745) goedgekeurd. Muizen op C57BL/6 achtergrond, 8-12 weken oud, 19-25 g lichaamsgewicht, zowel mannen als vrouwen worden gebruikt.
1. dierlijke anesthesie
<ol>
	<li>Plaats van een muis in de kamer van een inductie en anesthesie veroorzaken door een mengsel van 5% Isofluraan met 100% zuurstof. Gebruik een debiet van 0.5 L/min. wachten totdat de muis helemaal niet meer beweegt en de frequentie van de ademhaling wordt zeldzaam.</li>
	<li>Verwijder de muis uit de zaal en scheren van de buik met een elektrische clipper. Verwijderen van haren uit de buik zo goed mogelijk om te voorkomen dat besmetting van de buikholte.</li>
	<li>Plaatst u de muisaanwijzer in de liggende positie en plaats van de muis de neus in een kegel verbonden met het systeem van de verdoving. Verminderen van het percentage van Isofluraan tot 2-3% (het exacte percentage kan enigszins afwijken van dier op dier). Zorg ervoor dat het dier slaapt met haar luchtwegen tarief lager dan gebruikelijk maar vermijden hijgend. Als hijgend optreedt, verlaagt u het percentage van Isofluraan met 0,5%.
	<ol>
		<li>Controleer de pedaal reflex om te bevestigen goede afstomping en chirurgie alleen starten als het negatief is. Dierenarts zalf toepassen op de ogen om te voorkomen dat droogte.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Breng een anti-bactericide oplossing (1% Hibitane) op van de muis buik en veeg het gebied met behulp van een steriel katoenen bud op een manier die met uitzondering van potentiële nieuwe verontreiniging van de chirurgische site (bijvoorbeeld, binnen naar buiten in een circulaire mode). Herhaal dit 3 keer.</li>
</ol>
2. toepassing van de IVC stenose en het herstel van de muis
Opmerking: Alle instrumenten zo goed als materialen (wattenstaafjes, gaas, zout etc.) moet komen in contact met het gebied van chirurgie steriel. De exploitant moet schrobben van vóór de operatie en steriele handschoenen en toga dragen tijdens de procedure. Microscoop handgrepen moeten worden verpakt in een steriele folie.
<ol>
	<li>Muizen een anti-pijn behandeling geven vóór de ingreep en tijdens de gehele looptijd van het experiment. Bijvoorbeeld, het gebruik van buprenorfine 0,1 mg/kg subcutaan 30 min vóór chirurgie en vervolgens elke 12 uur totdat het dier is euthanized. Zoals trombose in deze methode ook steriele ontsteking ontwikkelt, Vermijd het gebruik van anti-inflammatoire geneesmiddelen als een premedication.</li>
	<li>Bedek de muis met een steriele draperen en maak een gat in de gordijn aan het blootstellen van de site van chirurgie. Met behulp van schaar, maken een sneetje langs de buik middellijn, 1,5 cm naar beneden vanaf het borstbeen. Met behulp van wattenstaafjes exteriorize de darmen aan de linker kant van de muis en bestrijk ze met steriel gaas gedrenkt in warm (37 ° C) zoutoplossing om uitdrogen.</li>
	<li>Het identificeren van de IVC en zijn takken van de kant (daar kunnen er 0, 1 of 2 van hen) in de caudal richting vanaf de site van de fusie van het IVC met de linker nier ader. Alle takken van de zichtbare kant met 7-0 inert Prolene hechtingen als dichtbij het IVC mogelijk afbinden.
	<ol>
		<li>Probeer niet te houden van de takken van de kant met de verlostang rechtstreeks maar eerder trek ze omhoog houden het vet weefsel eromheen met pincet in de ene hand en het maken van een tunnel onder de tak met pincet in de andere hand. Sluit niet terug takken.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Houd de omliggende weefsels met een tang en trek de IVC omhoog en de productie van spanning in het kleine gebied tussen het IVC en de aorta precies op de hoek tussen het IVC en de linker nier ader links. Rekening dat het vrijwel onmogelijk om te scheiden van de aorta van het IVC zelfs 2-3 mm onder (Richtung caudal) is.</li>
	<li>Met behulp van afwijkende bewegingen met pincet tips in je rechterhand Maak een gat tussen de aorta en de IVC. Houd er rekening mee dat de meer bewegingen gemaakt, hoe hoger de kans op beschadiging van het schip. In het ideale geval proberen om te minimaliseren van het aantal verplaatsingen naar 3-5.</li>
	<li>Bereiden van een stuk van 7-0 inert Prolene hechtdraad van ongeveer 2 cm lang. Plaats het in de peritoneale holte van de muis aan de linker kant van de exploitant in de omgeving van de IVC.</li>
	<li>Trek het IVC boven en links weer. Steek uw juiste pincet tips in het gat tussen de aorta en de IVC zodat de tips worden weergegeven aan de andere kant van de IVC. Neem de hechtdraad en trek het terug door het gat (Figuur 3A).</li>
	<li>Maak een voorlopige knoop met de hechtdraad, maar sluit het niet. 30G naald ("een spacer") in de knoop als een haak gebogen en nu sluit het (Figuur 3B).</li>
	<li>Verwijder het tussenstuk (Figuur 3C).</li>
	<li>De darmen terug naar de peritoneale holte met een katoenen bud en ze gelijkmatig moeten verdelen in het resultaat.</li>
	<li>Sluit buikvlies met 6-0 vicryl hechtdraad met continue lussen. Sluit de eerste en laatste lussen als een knoop.</li>
	<li>Nauwe huid met behulp van metalen nietjes.</li>
	<li>Injecteer de muis met 0,5 mL warm (37 ° C) glucose saline subcutaan te herstellen van het beschikbare saldo van het organisme.</li>
	<li>Plaatst u de muisaanwijzer in een individuele kooi in een warm (25 ° C) kamer of ruimte en zet eten en gel van water binnen de kooi. Observeren totdat de muis volledig is hersteld (in het algemeen ongeveer 1 h).</li>
</ol>

<ol><li>Heit, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+epidemiology+of+venous+thromboembolism+in+the+community%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">The epidemiology of venous thromboembolism in the community.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 28 (3), 370-372 (2008).</li>
<li>Huang, W., Goldberg, R. J., Anderson, F. A., Kiefe, C. I., Spencer, F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Secular+trends+in+occurrence+of+acute+venous+thromboembolism%3A+the+Worcester+VTE+study+%281985-2009%29%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Med%22%5BJournal%5D)">Secular trends in occurrence of acute venous thromboembolism: the Worcester VTE study (1985-2009).</a> Am J Med. 127 (9), 829-839 (2014).</li>
<li>House of Commons Health Care Committee. <a target="_blank" href="https://publications.parliament.uk/pa/cm200405/cmselect/cmhealth/99/99.pdf">The Prevention of Venous Thromboembolism in Hospitalised patients.</a> The House of Commons. , (2005).</li>
<li>Kuipers, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Travel+and+venous+thrombosis%3A+a+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22J+Intern+Med%22%5BJournal%5D)">Travel and venous thrombosis: a systematic review.</a> J Intern Med. 262 (6), 615-634 (2007).</li>
<li>Lopez, J. A., Chen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathophysiology+of+venous+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Res%22%5BJournal%5D)">Pathophysiology of venous thrombosis.</a> Thromb Res. 123, Suppl 4 30-34 (2009).</li>
<li>Brill, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((von+Willebrand+factor-mediated+platelet+adhesion+is+critical+for+deep+vein+thrombosis+in+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">von Willebrand factor-mediated platelet adhesion is critical for deep vein thrombosis in mouse models.</a> Blood. 117 (4), 1400-1407 (2011).</li>
<li>Payne, H., Ponomaryov, T., Watson, S. P., Brill, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mice+with+a+deficiency+in+CLEC-2+are+protected+against+deep+vein+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Mice with a deficiency in CLEC-2 are protected against deep vein thrombosis.</a> Blood. 129 (14), 2013-2020 (2017).</li>
<li>Brill, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil+extracellular+traps+promote+deep+vein+thrombosis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Neutrophil extracellular traps promote deep vein thrombosis in mice.</a> J Thromb Haemost. 10 (1), 136-144 (2012).</li>
<li>von Bruhl, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monocytes%2C+neutrophils%2C+and+platelets+cooperate+to+initiate+and+propagate+venous+thrombosis+in+mice+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Monocytes, neutrophils, and platelets cooperate to initiate and propagate venous thrombosis in mice in vivo.</a> J Exp Med. 209 (4), 819-835 (2012).</li>
<li>Sevitt, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+structure+and+growth+of+valve-pocket+thrombi+in+femoral+veins%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Pathol%22%5BJournal%5D)">The structure and growth of valve-pocket thrombi in femoral veins.</a> J Clin Pathol. 27 (7), 517-528 (1974).</li>
<li>Witsch, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+hollow+and+perforated+flexible+wire+allows+the+safe+and+effective+local+application+of+thrombolytic+therapy+in+a+mouse+model+of+deep+vein+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Thrombolysis%22%5BJournal%5D)">A novel hollow and perforated flexible wire allows the safe and effective local application of thrombolytic therapy in a mouse model of deep vein thrombosis.</a> J Thromb Thrombolysis. 37 (4), 450-454 (2014).</li>
<li>Shaya, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+the+effect+of+dabigatran+and+dalteparin+on+thrombus+stability+in+a+murine+model+of+venous+thromboembolism%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Comparison of the effect of dabigatran and dalteparin on thrombus stability in a murine model of venous thromboembolism.</a> J Thromb Haemost. 14 (1), 143-152 (2016).</li>
<li>Ni, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Persistence+of+platelet+thrombus+formation+in+arterioles+of+mice+lacking+both+von+Willebrand+factor+and+fibrinogen%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Persistence of platelet thrombus formation in arterioles of mice lacking both von Willebrand factor and fibrinogen.</a> J Clin Invest. 106 (3), 385-392 (2000).</li>
<li>Wrobleski, S. K., Farris, D. M., Diaz, J. A., Myers, D. D., Wakefield, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+complete+stasis+model+of+inferior+vena+cava+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Mouse complete stasis model of inferior vena cava thrombosis.</a> J Vis Exp. (52), (2011).</li>
<li>Diaz, J. A., Farris, D. M., Wrobleski, S. K., Myers, D. D., Wakefield, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inferior+vena+cava+branch+variations+in+C57BL%2F6+mice+have+an+impact+on+thrombus+size+in+an+IVC+ligation+%28stasis%29+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Inferior vena cava branch variations in C57BL/6 mice have an impact on thrombus size in an IVC ligation (stasis) model.</a> J Thromb Haemost. 13 (4), 660-664 (2015).</li>
<li>Siefert, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+venous+thrombus+resolution+in+plasminogen+activator+inhibitor+type-2+deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Enhanced venous thrombus resolution in plasminogen activator inhibitor type-2 deficient mice.</a> J Thromb Haemost. 12 (10), 1706-1716 (2014).</li>
<li>Schulz, C., Engelmann, B., Massberg, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crossroads+of+coagulation+and+innate+immunity%3A+the+case+of+deep+vein+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Crossroads of coagulation and innate immunity: the case of deep vein thrombosis.</a> J Thromb Haemost. 11, Suppl 1 233-241 (2013).</li>
<li>Day, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrovascular+thrombosis+is+driven+by+tissue+factor+derived+primarily+from+the+blood+vessel+wall%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Macrovascular thrombosis is driven by tissue factor derived primarily from the blood vessel wall.</a> Blood. 105 (1), 192-198 (2005).</li>
<li>Diaz, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impaired+fibrinolytic+system+in+ApoE+gene-deleted+mice+with+hyperlipidemia+augments+deep+vein+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vasc+Surg%22%5BJournal%5D)">Impaired fibrinolytic system in ApoE gene-deleted mice with hyperlipidemia augments deep vein thrombosis.</a> J Vasc Surg. 55 (3), 815-822 (2012).</li>
<li>Zhou, J., May, L., Liao, P., Gross, P. L., Weitz, J. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inferior+vena+cava+ligation+rapidly+induces+tissue+factor+expression+and+venous+thrombosis+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Inferior vena cava ligation rapidly induces tissue factor expression and venous thrombosis in rats.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 29 (6), 863-869 (2009).</li>
<li>Diaz, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrolytic+inferior+vena+cava+model+%28EIM%29+of+venous+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Electrolytic inferior vena cava model (EIM) of venous thrombosis.</a> J Vis Exp. (53), e2737(2011).</li>
<li>Diaz, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+electrolytic+inferior+vena+cava+model+%28EIM%29+to+study+thrombogenesis+and+thrombus+resolution+with+continuous+blood+flow+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">The electrolytic inferior vena cava model (EIM) to study thrombogenesis and thrombus resolution with continuous blood flow in the mouse.</a> Thromb Haemost. 109 (6), 1158-1169 (2013).</li>
<li>Brill, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extrahepatic+high-density+lipoprotein+receptor+SR-BI+and+apoA-I+protect+against+deep+vein+thrombosis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Extrahepatic high-density lipoprotein receptor SR-BI and apoA-I protect against deep vein thrombosis in mice.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 32 (8), 1841-1847 (2012).</li>
<li>Diaz, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Critical+review+of+mouse+models+of+venous+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Critical review of mouse models of venous thrombosis.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 32 (3), 556-562 (2012).</li>
<li>Brandt, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deep+vein+thrombus+formation+induced+by+flow+reduction+in+mice+is+determined+by+venous+side+branches%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Hemorheol+Microcirc%22%5BJournal%5D)">Deep vein thrombus formation induced by flow reduction in mice is determined by venous side branches.</a> Clin Hemorheol Microcirc. 56 (2), 145-152 (2014).</li>
<li>Geddings, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strengths+and+weaknesses+of+a+new+mouse+model+of+thrombosis+induced+by+inferior+vena+cava+stenosis%3A+communication+from+the+SSC+of+the+ISTH%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Strengths and weaknesses of a new mouse model of thrombosis induced by inferior vena cava stenosis: communication from the SSC of the ISTH.</a> J Thromb Haemost. 12 (4), 571-573 (2014).</li>
<li>Alvarado, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Male+mice+have+increased+thrombotic+potential%3A+sex+differences+in+a+mouse+model+of+venous+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Res%22%5BJournal%5D)">Male mice have increased thrombotic potential: sex differences in a mouse model of venous thrombosis.</a> Thromb Res. 127 (5), 478-486 (2011).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Hier, wordt een protocol van de IVC stenose, die bloed stroom vervorming, een belangrijke activerende factor voor DVT bootst, gepresenteerd. Stenose van de IVC induceert ontwikkeling van stolseltjes in 65-100% van C57BL/6 muizen binnen 48 uur en 25-50% van de muizen binnen 2-6-h6,8,23 (Brill A, ongepubliceerde gegevens, 2016). Een belangrijke beperking van de methode is de variabiliteit in trombose grootte24 (Figuur 4), die wordt waargenomen na zowel op korte termijn (6 h) als op lange termijn (48u) IVC stenose. De redenen voor dergelijke variabiliteit (gezien het feit dat dezelfde voorwaarden, zoals de spacer, verdoving enz., worden) blijven obscure, maar men kan speculeren dat anatomische verschillen tussen de muizen (b.v., breedte van het IVC, het aantal en de locatie van zowel kant en terug takken) ten grondslag liggen aan dit verschijnsel. De variabiliteit in trombose grootte maakt trombose prevalentie (procent van muizen met een trombus) het belangrijkste resultaat. Prevalentie van trombose kan worden vergeleken met behulp van een contingentie tabel en the Fisher's exacte test. Een van de experimenten was een uitzondering toen verminderde trombose grootte met de dezelfde trombose prevalentie na injectie van podoplanin-remmende antilichamen 7werd waargenomen.
Deze methode is vooral handig wanneer veneuze trombose initiatie wordt bestudeerd. Het staat voor het onderzoek naar vroege gebeurtenissen in de vaatwand, zoals werving van cellen, wat uiteindelijk leidt tot trombose. Pro - of anti - thrombotic gevolgen van drugs kunnen worden geëvalueerd met behulp van dit model met trombose prevalentie wordt een primaire uitlezing. Stenose gedurende 48 uur is van toepassing op het onthullen van een anti-trombotische fenotype, dat 6 h stenose kan worden gebruikt als een prothrombotic fenotype wordt verwacht. Histologische analyse van de trombose en omliggende IVC muur kan ook worden uitgevoerd.
De vraag of kant takken moet worden afgebonden of links octrooi blijft open. Één groep heeft aangetoond dat Afbinding van zij takken wordt trombus formaat niet groter en locatie van een zijaansluiting dichter dan 1.5 mm naar de site van de afbinding IVC dramatisch trombose ontwikkeling25 schaadt. Sluiting van zij takken kan induceren endothelial letsel in hen en ook het verhogen van de tijd van operatie26. In onze handen daalt gebrek aan kant tak sluiting aanzienlijk trombose prevalentie (tot 10-30% na 48u stenose; Brill, ongepubliceerd) en dus we alle takken van de zichtbare kant afbinden.
In het ideale geval moeten littermate controles worden gebruikt, zoals muizen, zelfs op de zelfde achtergrond maar uit verschillende bronnen, iets anders trombose prevalentie wellicht. Als het effect van DVT zelf op eventuele parameters (bijvoorbeeld biochemische) is bestudeerd, moeten veinzerij bediende dieren worden gebruikt. Sham bediende muizen ondergaan dezelfde procedure, maar de ligatuur rond het IVC is gesloten losjes en vertrokken er zonder produceren stenose.
De meest voorkomende fout (een kritieke stap) in dit protocol is een poging om te scheiden van de aorta en de IVC niet precies op de hoek tussen de schepen maar iets lager, wat meestal in het bloeden resulteert. Wanneer een massale bloeding optreedt, goed herstel van de muis wordt onwaarschijnlijk en wordt u geadviseerd te stoppen met het experiment en het dier euthanaseren. Normaal, muizen herstel goed verplaatsen in de kooi en doen niet aanzienlijk gewicht te verliezen. Wij adviseren met behulp van muizen boven 20 g voor zowel mannen als vrouwen en houden van dieren (met name mannen) in afzonderlijke kooien na de operatie tot het einde van het experiment vechten en letsel te voorkomen. Men heeft gerapporteerd in een ander (elektrolytisch) model van DVT dat mannelijke muizen grotere stolseltjes dan vrouwtjes27 produceren. Analyse van onze gegevens is niet gebleken aanzienlijke verschil in trombose prevalentie tussen mannelijke en vrouwelijke muizen (Brill, onuitgegeven). Daarom, onderzoekers worden aangemoedigd om het uitvoeren van experimenten met behulp van het IVC stenose model op muizen van beide geslachten.
Ontrafelen van hechtingen of nietjes kan niet worden uitgesloten met name in lange experimenten (per week en langer). Dus muizen moeten worden gecontroleerd ten minste tweemaal per dag speciaal voor hechtdraad integriteit en een bijzondere aandacht moet uitgaan naar het uiterlijk van bloed sporen op de kooi beddengoed.
Opgemerkt moet worden dat, net als ieder ander dierlijk model, stenose van de IVC zijn beperkingen op het gebied van vertaling in mensen heeft. Bijvoorbeeld hebben lymfkliertest IVCs geen kleppen, overwegende dat menselijke DVT binnen veneuze kleppen ontwikkelt. Mensen hebben ook verticale spinale richting met de pomp van de spier wordt een belangrijk mechanisme versnelde bloedstroom in de aders. Muizen hebben daarentegen horizontale spinale oriëntatie met geen rol van de spier pomp in het bloed terug naar het hart te ondersteunen. Deze beperkingen moeten worden overwogen bij het vertalen van gegevens van de muis aan de ziekte bij de mens.

Diep-veneuze trombose (DVT) is de ontwikkeling van stolseltjes in diepe aderen, meestal (maar niet alleen) in de benen. In voegwoorden met longembolie (PE; aangewezen samen als veneuze Thromboembolism, VTE) het ontwikkelt zich in ongeveer 900.000 Amerikanen jaarlijks en vertegenwoordigt een ernstig gezondheidsprobleem en economische probleem1,2. PE, een complicatie van DVT, treedt op wanneer een trombose vrijstaand vanaf de oorspronkelijke locatie krijgt en de longen, die leiden respiratoire insufficiëntie en dood tot kunnen bereikt. Het dodental van VTE overschrijdt sterfte van AIDS, borst kanker en verkeersongevallen, gecombineerde3.
De belangrijkste factor waardoor DVT naast is bekend redenen, zoals kanker of trauma's, het gebrek aan mobiliteit 4,5. Dit kan voortvloeien uit chirurgie (vooral orthopedische), verlamming, long-haul vluchten of om andere redenen. Bloedstroom in de aders is afhankelijk van de spier pomp en daarom ledemaat immobilisatie resultaten in stagnerende bloed stromen in veneuze kleppen, wat leidt tot trombose. Het doel van de hier beschreven methode is om te recapituleren dergelijke bloed stroom vervorming6,7. Partiële-beperking in de vena cava (IVC), inferior bootst voorwaarden gemaakt in menselijke veneuze kleppen en resulteert in de vorming van een trombose in de structuur vergelijkbaar met menselijke stolseltjes6. Het grote deel van een trombose is rood en bestaat uit rode bloedcellen, fibrine en opneming van de bloedplaatjes. Stolseltjes hebben een kleine "witte deel" verrijkt met bloedplaatjes (Figuur 1), die lijken op "lijnen van Zahn" in menselijke veneuze stolseltjes beschreven. Beide delen van de trombose bevatten ook neutrofielen8, die behoren tot de eerste cellen worden aangeworven op de site van toekomstige trombose6,9. Neutrofielen in het rode gedeelte verdrijven neutrofiele extracellulaire vallen (netten), overwegende dat de neutrofielen in het witte deel lijken te zijn verstoken van netten8. Ook om menselijke DVT, gaat trombose in muizen gepaard met verhoogde plasma D-dimeer niveaus (Figuur 2). Laag moleculair gewicht heparine (Enoxaparine), gebruikt voor DVT profylaxe bij patiënten, voorkomt ook trombose in muizen. Een belangrijk voordeel van deze methode is gebrek aan endothelial denudatie9, karakteristiek van menselijke DVT10. Deze functie maakt IVC stenose een meer klinisch relevante model van DVT dan, bijvoorbeeld, inductie van trombose door ferrichloride, die induceert endothelial denudatie en waarin stolseltjes bestaan voornamelijk uit bloedplaatjes11, 12,,13. Een model van volledige stase in het IVC heeft de voorkeur van de verschillende teams14,15,16. In tegenstelling tot de stenose, waarin residuele stroom onderhouden in het schip worden, toepassing van stase volledig stopt de stroom en dus beperkt de toegankelijkheid van systemisch toegediende stoffen naar de site van de trombose. Ook lijkt het dat de mechanismen die ten grondslag liggen aan de trombose geïnduceerd door stenose en stase verschillend zijn: stenose resulteert in de ontwikkeling van lokale ontsteking (activering van het endotheel, vrijlating van Weibel-Palade lichaamsinhoud, werving van immune cellen en bloedplaatjes aan de vaatwand) veroorzaakt "immunothrombosis"6,9,17, terwijl stase lijkt te veroorzaken eerder trombose gebaseerd, in het bijzonder op weefsel factor en andere stolling en Fibrinolyse-gerelateerde mechanismen18,19,20. Dus, weerspiegelen de stenose en stase modellen lichtjes verschillende aspecten van de ontwikkeling van de veneuze trombose, hoewel hun mechanismen kunnen zeker overlappen. Elektrolytische IVC model (EIM) van DVT21,22 induceert een trombose slechts gedeeltelijk occluding de vaatwand. Daarom is het handig voor het testen van de effecten van systemische toediening van verschillende drugs op trombose groei. Dit model, echter, wordt ervan uitgegaan dat verstoring van de IVC muur integriteit (invoeging van een naald) en inductie van trombose door elektrische stroom maken de pathofysiologische relevantie van dit mechanisme ten minste aanvechtbaar.

<table><tbody><tr><td>C57BL/6 muizen</td><td>Charles River</td><td></td><td>8 - 10 weken oud, beide geslachten</td></tr><tr><td>Schaar</td><td>WPI</td><td>15922</td><td></td></tr><tr><td>Schaar</td><td>WPI</td><td>14003</td><td></td></tr><tr><td>Dumont 5/45 tang</td><td>FST</td><td>11251-35</td><td></td></tr><tr><td>7-0 Prolene naald</td><td>Ethicon</td><td>W8725</td><td></td></tr><tr><td>6-0 Vicryl naald</td><td>Ethicon</td><td>W9981</td><td></td></tr><tr><td>Wattenstaafjes</td><td>Spar</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Millswabs steriel</td><td>Millpledge veterinary</td><td>611950</td><td></td></tr><tr><td>Doeken</td><td>Kruuse</td><td>141765</td><td></td></tr><tr><td>Glucose Saline-Aqupharm3</td><td>Animal Care</td><td>XVD589</td><td></td></tr><tr><td>Clear H20 HydroGel 98% steriel water</td><td>Clearh2o</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Buprenorfine</td><td>National Veterinary Supplies</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Isofluraannevelizer</td><td>General Anaesthetic Services</td><td></td><td></td></tr><tr><td>IsoFlo 100% W/W inhalatievloeistof, vloeibaar</td><td>National Veterinary Supplies</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sterilisator Steri350</td><td>Inotech</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microscoop Olympus SZX10</td><td>Olympus</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

stenose van de vena cava inferior: een lymfkliertest model van diep-veneuze trombose

Stenosis of the Inferior Vena Cava: A Murine Model of Deep Vein Thrombosis

Diepe veneuze trombose (DVT) en zijn verwoestende complicatie, longembolie, zijn van een ernstig gezondheidsprobleem met hoge sterfte. Mechanismen voor de vorming van trombose in aderen blijven onduidelijk. Gebrek aan mobiliteit (b.v.na chirurgie of long-haul vluchten) is één van de belangrijkste factoren die leiden tot DVT. De pathofysiologische gevolg van het gebrek aan mobiliteit is bloed stroom stagnatie in veneuze kleppen. Hier is een model beschreven dat dergelijke verstoring van de stroom als een factor van trombose-rijden nabootst. In dit model, wordt partiële-beperking (stenose) in de vena cava (IVC), inferior gemaakt. Sluiting van ongeveer 90% van de IVC lumen gedurende 48 h resulteert in de ontwikkeling van stolseltjes structureel vergelijkbaar met die bij de mens. De gelijkenissen zijn: i) allermeest naar de volume van trombose is rood, dat wil zeggen, bestaat uit rode bloedcellen en fibrine, ii) de aanwezigheid van een witte gedeelte (lijnen van Zahn), iii) niet-kale endothelial enkelgelaagde, iv) verhoogde plasma D-dimeer niveaus en v) de mogelijkheid om te voorkomen dat trombose door laag moleculair gewicht heparine. Beperkingen omvatten variabele grootte van stolseltjes en het feit dat een bepaald percentage van de wild-type muizen (0 - 35%) kan niet leiden tot een trombose. Naast visuele waarneming en meting, kunnen stolseltjes worden gevisualiseerd door niet-invasieve technologieën, zoals Ultrasonografie, dat voorziet in toezicht op de dynamiek van trombose ontwikkeling. Op kortere tijd punten (1-6 h), intravital microscopie kan worden toegepast om te observeren direct evenementen (bijvoorbeeld, werving van cellen aan de vaatwand) voorafgaand aan de vorming van trombose. Gebruik van deze methode door verschillende teams over de hele wereld heeft het mogelijk gemaakt te ontdekken van de basismechanismen van DVT inleiding en identificeren van potentiële doelen, die misschien wel gunstig zijn voor de preventie.

Een model van DVT geïnduceerd door verstoring van de stroom van het IVC wordt hierin beschreven. Inductie van stenose in het IVC initieert vervorming en stagnatie van de bloedstroom en na een tijdje (in dit geval, 48 h) resulteert in de ontwikkeling van een trombus, structureel vergelijkbaar met menselijke DVT stolseltjes (Figuur 1A). De aanwezigheid van een trombose binnen het IVC is gemakkelijk aantoonbaar visueel (Figuur 1B). Een belangrijke gelijkenis tussen het model en de menselijke DVT is verhoogde plasma D-dimeer niveaus (Figuur 2). D-dimeer is een product van de aantasting van het fibrine en haar aanwezigheid in het bloed suggereert dat een actief trombotische proces gaande is.
Het model wordt weergegeven in Figuur 3A-Cstapsgewijze. Het IVC zorgvuldig wordt blootgesteld, een gat tussen het IVC en de aorta is gemaakt en een hechtdraad (Prolene 7-0) wordt getrokken door het gat onder de IVC. Vervolgens is het IVC afgebonden door de hechtdraad over een spacer (30G naald, Figuur 3D), na die de spacer is verwijderd. Deze procedure voorziet in ongeveer 90% sluiting van de IVC lumen verlaten de resterende 10% patent. Hierdoor is bloed stroom stagnatie uiteindelijk zal leiden tot trombose.
Figuur 4 toont de belangrijkste nadeel van het model, de grootte van de variabele trombose. Alle deze stolseltjes werden verkregen in hetzelfde experiment uitgevoerd op wild type mannelijke muizen van dezelfde oorsprong, leeftijd en soortgelijke lichaamsgewicht. Hoewel alle van de muizen geproduceerd stolseltjes (trombose prevalentie van 100%), varieert hun grootte duidelijk in een breed scala.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56697/56697fig1.jpg"> 
Figuur 1: Vertegenwoordiger trombose na 48u beperking/stenose. (A) een typische trombose na 48u IVC stenose. Opmerking rode (rode bloedcel-verrijkt) en wit (bloedplaatjes-verrijkt) delen. (B) IVC met (links) of zonder (rechts) een trombose. Schaal bars = 2 mm. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56697/56697fig1large.jpg" target="_blank">Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56697/56697fig2.jpg"> 
Figuur 2 : Verhoogde plasma D-dimeer niveaus na IVC stenose toepassing. Muizen werden onderworpen aan stenose van de IVC. Bloed werd genomen op de aangegeven tijdstippen, gestabiliseerde 1:9 met 3,8% Natriumcitraat, plasma bereid was door middel van centrifugeren (2300 x g, 5 min) en D-dimeer niveaus werden bepaald door een ELISA-kit volgens de instructies van de fabrikant. Cirkels wijzen sham bediende muizen, kruizen wijzen IVC stenose. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56697/56697fig2large.jpg" target="_blank">Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56697/56697fig3.jpg"> 
Figuur 3: Flow beperking/stenose in het Inferior Vena Cava (IVC) model van DVT bij muizen. Opeenvolgende stadia van het model worden gepresenteerd. (A) een gat tussen het IVC en de aorta wordt gemaakt en een hechtdraad wordt getrokken doorheen rond het IVC. (B) een knoop is gesloten over een spacer (30 G naald). (C) de spacer wordt verwijderd: het definitieve standpunt dat de chirurg ziet voor het sluiten van de muis. De gele stippellijn kadert de IVC. LRV staat voor linker nier ader. Schaal bars = 0,2 mm. (D) het tussenstuk (30 G naald). Schaal bars = 2 mm. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56697/56697fig3large.jpg" target="_blank">Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56697/56697fig4.jpg"> 
Figuur 4 . Variabiliteit van de grootte van de trombose. Muizen werden onderworpen aan 48u IVC stenose. Gepresenteerd worden stolseltjes verkregen in hetzelfde experiment. Schaal balken van 2 mm. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56697/56697fig4large.jpg" target="_blank">Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.</a>

We beschrijven hier stenose in de vena cava inferior als lymfkliertest model van diep-veneuze trombose. Dit model recapituleert bloed stroom beperking, een van de grote trekkers van veneuze trombose bij de mens.

Stenose van de Vena Cava Inferior: een lymfkliertest Model van diep-veneuze trombose

Deep vein thrombosis (DVT) and its devastating complication, pulmonary embolism, are a severe health problem with high mortality. Mechanisms of thrombus ...

Het algemene doel van deze chirurgische procedure is om een stenose van de inferieure vena cava te creëren om bloedstroomvervorming na te bootsen voor het begin van diepe veneuze trombose. Deze methode kan helpen om belangrijke vragen in het veld van veneuze trombose te beantwoorden over de mechanismen van het begin van diepe veneuze trombose. Het grote voordeel van deze techniek is dat het bloedstroomverstoring simuleert, een sleutelmechanisme van trombose-initiatie in de aderen.Visuele demonstratie van deze methode is cruciaal, omdat het scheiden van de inferieure vena cava van de aorta en het maken van het gat tussen deze weefsels moeilijk uit te leggen zijn met alleen woorden. Begin met het scheren van de buik van een anesthetische muis van acht tot 12 weken oud en 19 tot 25 gram en plaats de muis in de rugligging op een verwarmingskussen. Gebruik een steriele wattenstaafje om de blootgestelde huid driemaal te desinfecteren met antibacteriële oplossing.Bevestig het juiste niveau van sedatie door gebrek aan reactie op teenprik en bedek de muis met een steriele doek met een gat boven de operatieplaats. Onder een dissectief microscoop, maak een incisie langs de buikmiddellijn, beginnend 1,5 centimeter onder het borstbeen en gebruik wattenstaafjes om de darmen naar de linkerkant van het dier te exterioriseren. Bedek het darmweefsel met steriele gaas gedrenkt in 37 graden Celsius zoutoplossing.Plaats weefselretractoren om de incisie te vergroten en lokaliseer de inferieure vena cava, of IVC, en zijn zijtakken caudaal aan de linkernierader. Gebruik pincetten om het vetweefsel rond de zijtakken omhoog te trekken en gebruik vervolgens een tweede pincet om onder de tak te tunnelen. En liggeer alle zijtakken zo dicht mogelijk bij de IVC met 7-0 inerte proleennaalden.Houd de omringende weefsels met pincetten vast, trek de IVC omhoog en naar links om spanning in het kleine gebied tussen de IVC en de aorta te produceren, precies tussen de IVC en de linkernierader. Plaats een tweede stel pincetten tussen de aorta en de IVC en open en sluit de pincetten niet meer dan drie tot vijf keer om een gat te maken. Het is erg belangrijk om het gat precies op het punt te maken waar de IVC samenkomt met de linkernierader.Gebruik de linkerhand om een twee centimeter lang stukje 7-0 inerte proleennaald in de linkerkant van de buikholte te plaatsen, dicht bij de IVC, en trek de IVC weer omhoog en naar links. Plaats het tweede pincet in het gat tussen de aorta en de IVC zodat de uiteinden aan de andere kant van de IVC verschijnen en trek de naald terug door het gat. Maak een losse voorlopige knoop en plaats een 30 gauge naaldafstandhouder, gebogen in een haak, in de knoop.Na het vastdraaien van de knoop, verwijder de afstandhouder en gebruik een wattenstaafje om de darmen terug te brengen in de buikholte. Gebruik continue lussen om het buikvlies te sluiten met een 6-0 VICRYL-naald en sluit de huid met metalen haken. Injecteer de muis subcutaan met 0,5 milliliter 37 graden Celsius glucosaline.Plaats vervolgens de muis in een individuele kooi in een kamer van 25 graden Celsius met voedsel en gelwater en monitor tot volledige herstel. De inductie van stenose in de IVC initieert een vervorming en stagnatie van de bloedstroom die resulteert in de ontwikkeling van een trombus die structureel vergelijkbaar is met de diepe veneuze trombi die bij mensen worden waargenomen en die macroscopisch gemakkelijk zichtbaar zijn. Bovendien wordt verhoogd D-dimer, een product van fibrine-afbraak, waargenomen in het plasma in dit IVC-stenosemodel, wat wijst op de aanwezigheid van een actieve trombotische proces vergelijkbaar met dat bij mensen wordt gezien.Hoewel de meeste van de experimentele dieren trombi produceerden in dit model, is een groot nadeel de variabiliteit in de grootte van de trombi die tussen dieren wordt waargenomen. Eenmaal beheerst, kan deze techniek in 15 minuten worden voltooid als deze goed wordt uitgevoerd. Na de ontwikkeling ervan, heeft deze techniek de weg gebaand voor onderzoekers op het gebied van veneuze trombose om de mechanismen van DVT in een muismodel te verkennen.

stenosis-inferior-vena-cava-murine-model-deep-vein

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

De elektrolytische inductie van endotheel activatie aan het interne oppervlak van de vena cava inferior resulteert in een veneuze soort trombusvorming te wijten aan endotheel activatie en gedeeltelijke bloed stasis, twee componenten van de triade Virchow's.

Elektrolytische Inferior Vena Cava Model (EIM) van veneuze trombose

De muis volledige stase model van de vena cava inferior trombose levert kwantificeerbare hoeveelheden aderwand weefsel en trombus. Het is nuttig gebleken voor het evalueren van interacties tussen de ader muur en de occlusieve trombus en bij de beoordeling van de progressie van acute naar chronische ontsteking.

Muis Compleet Stasis Model van Inferior Vena Cava trombose

Om onze kennis van cellulaire en moleculaire neotissue vorming te verbeteren, werd een muizenmodel van het TEVG recent ontwikkelde. De transplantaten werden geïmplanteerd infrarenale vena cava tussenvoeging enten in C57BL / 6 muizen. Dit model behaalt dezelfde resultaten als die bereikt bij onze klinische onderzoek, maar over een veel kortere tijd-cursus.

Implantatie van de vena cava inferior Interpositie Graft in muismodel

Dit protocol beschrijft de stappen voor het verkrijgen van veneuze trombose met behulp van een stase-model. Daarnaast zijn we met behulp van een niet-invasieve methode voor het meten van de vorming van trombose en resolutie na verloop van tijd.

Diep-veneuze trombose geïnduceerd door Stasis in muizen gecontroleerd door hoge frequentie Ultrasonografie

Een aortocaval fistel werd gecreëerd door het prikken van de Murine infra-nieraorta door beide muren in de inferieure Vena Cava en werd gevolgd door het creëren van een stenose in zijn uitstroom via gedeeltelijke ligatie van de inferieure vena cava. Dit reproduceerbare model kan worden gebruikt om centraal veneuze stenose te bestuderen.

Murine model van centraal veneuze stenose met behulp van Aortocaval fistel met een uitstroom stenose

Dit artikel heeft tot doel een geoptimaliseerde methode te presenteren voor het beoordelen van veneuze trombose in een muiskankermodel, met behulp van vasculaire clips om veneuze ligatie te bereiken. Optimalisatie minimaliseert de variabiliteit in trombosegerelateerde metingen en verbetert de relevantie voor bij de mens kankergerelateerde veneuze trombose.

Veneuze trombosetest in een muismodel van kanker

Het protocol presenteert een overlevingsmodel voor knaagdieren om interventies met een venoplastiekballon (VB) te testen in niet-trombotische, trombotische en posttrombotische diepe aders.

Knaagdier Inferieure Vena Cava Venoplastiek Ballon Model

Murine beenmergtransplantatie is een veel gebruikte techniek om immunologische mechanismen voor graft-versus-host ziekte bij mensen bestuderen. De mogelijkheid om T-cel mensenhandel patronen te...

Inductie van Graft-versus-host ziekte en<em&gt; In Vivo</em&gt; T-cel monitoren door gebruik van een MHC-matched muizenmodel

Experimentele muismodellen van allergische astma bieden nieuwe mogelijkheden voor het bestuderen van de ziekte van pathogenese en het ontwikkelen van nieuwe therapeutica. Deze modellen zijn zeer geschikt voor het meten factoren die de allergische immuunrespons, ontsteking van de luchtwegen en longen pathofysiologie.

Muizenmodel van Allergen Induced Astma

Infectie van de prostaat kan een bijdragende factor in het bemiddelen bekken pijn bij chronische prostatitis zijn. We beschrijven de procedure voor het bereiden van gestandaardiseerde bacterieel inoculum, instillatie van bacteriën in de urethra van mannelijke muizen en methode voor het meten tactiele allodynie bij muizen in de tijd.

Meting van Tactiele allodynie in een muizenmodel van bacteriële prostatitis

Leer een chirurgische methode voor diep-veneuze tromboseonderzoek bij muizen door stenose van de vena cava inferior te creëren. Dit model simuleert bloedstroomverstoring en helpt bij het bestuderen van trombusvorming.

Stenose van de Vena Cava Inferior: een lymfkliertest Model van diep-veneuze trombose

Meer video's verkennen