Name: Een verbeterde methode voor de verzameling van de cerebrospinale vloeistof van narcose muizen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-03-19T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 40 s
Description: Leer een verbeterde methode voor het verzamelen van cerebrospinale vloeistof bij muizen met minimale bloedcontaminatie. Deze techniek met een micromanipulator verhoogt de zuiverheid en het volume van het monster voor nauwkeurige biomarkeranalyse.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Dit werk werd gesteund door de National Natural Science Foundation of China (81650110527, 81371400) en nationale sleutel Basic Research programma van China (2013CB530900).

Alle dierproeven werden uitgevoerd overeenkomstig het beleid van de vereniging voor Neurowetenschappen (USA) en ethische commissies van de Fudan Universiteit (Shanghai, China). Deze procedure is voor een niet-survival-chirurgie.
1. installatie van CB collectie apparatuur
<ol><li>Trek de glazen capillaire (binnendiameter 0,75 mm, buitendiameter 1,0 mm) met een trekker van de micropipet (zoals in Liu et al. 10; scherp capillair is afgebeeld in Figuur 1).</li>
	<li>Plaats een aangescherpte glazen capillaire in de capillaire houder stevig gemonteerd op een micromanipulator (figuur 1A).</li>
	<li>Breken van de tip van het aangescherpte capillair met een rechte Tang onder een Microscoop ontleden, zodat de binnendiameter van de gebroken tip gaat over 10-20 µm (Figuur 1 c).</li>
	<li>Een dunne buis en een spuit koppelen aan het andere uiteinde van de capillaire houder en sluit de dunne buis en de spuit met een drie-weg klep.</li>
	<li>Verschuiving van de drie-weg klep om te openen en duik de spuit te blazen lucht uit de spuit via de buis aan het glas capillaire te verdrijven van eventuele verontreinigingen en creëren positieve druk in het capillair.</li>
	<li>Herhaal dit een paar keer door DIS sluiten en opnieuw aansluiten van de injectiespuit op de drie-weg klep, en opstelling van de spuit van ~ 100-200 µL voordat de laatste opnieuw verbinding van de spuit met de drie-weg klep (figuur 1B).</li>
	<li>De micromanipulator met de glazen capillaire verplaatsen naar de kant om schade te voorkomen tijdens de dissectie van de muis.</li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56774/56774fig1.jpg"> Figuur 1. Microscoop, micromanipulator en capillaire setup. (A) Microscoop en micromanipulator met capillaire aangesloten setup, alsmede een nauwere beeld van (B) de aangesloten spuit en drie-weg ventiel te openen (zie hier) of sluit de leidingen, en (C) een ongebroken (rechts) en gebroken (links) capillaire tip klaar voor CSF-collectie. Zodra gebroken, de tip van het capillair moeten een inwendige diameter van 0,75 mm, buitendiameter van 1,0 mm. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56774/56774fig1large.jpg" target="_blank">Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.</a>
2. muis dissectie
<ol><li>Anesthetize de muis. Opmerking: voor dit protocol, C57BL/6 en amyloid precursor eiwit/presenilin 1 (APP/PS1) transgene muizen (model van de muis van de ziekte van Alzheimer) werden gebruikt en verdoofd met 4% Chloraalhydraat (in dH20) bij 10 µL/g van muis gewicht via intraperitoneaal injectie.</li>
	<li>Wanneer volledig verdoofd, ervoor zorgen dat de muis voldoende is verdoofd. De reactie van de terugtrekking tot teen snuifje, door iets uit te breiden van de achterste ledematen en knijpen van de tenen en kijken voor een terugtrekking reactie, is uitgevoerd om te verzekeren van voldoende verdoving. Controleren door te knijpen alle vier ledematen; Als er geen reactie is de muis goed verdoofd. Snijden en knippen van de haren op de achterkant van het hoofd van de muis boven de ogen, tussen de oren aan de onderkant van de nek met behulp van ontleden schaar (figuur 2A). Als alternatief, tondeuse of ontharende room kan worden gebruikt om te helpen bij de verwijdering van het haar.</li>
	<li>Het hoofd van de muis met een muis adapter veilig (achterkant van het hoofd naar boven met de neus wees neer op ~ 45 °, figuur 2A). Oor balken tussen de oren en de ogen van de muis los en draai. Zorg ervoor dat het hoofd niet verplaatsen en strak in de adapter is beveiligd door zachtjes duwen naar beneden aan het hoofd van de muis.</li>
	<li>Gecontroleerd of er terugtrekking antwoord teen snuifje alvorens chirurgische incisies en op gezette tijden daarna te verzekeren van chirurgische vliegtuig van de verdoving. Visueel Opmerking eventuele wijzigingen in de ademhaling tijdens de procedure om aan te geven van de veranderingen in de vliegtuigen van de verdoving. Een schone, niet-aseptische, techniek kan worden gebruikt voor deze korte niet-survival-chirurgie. Met behulp van schaar en pincet gebogen, doorsnijden de huid en de eerste laag van spier totdat de onderkant van de schedel met slechts een dun laagje van de spier wordt blootgesteld. Opmerking: Via de huid van de muis dwars door de achterkant van de nek en dan snijd de huid in het midden van de schedel tussen de oren en de ogen van de muis. Huid en weefsel kunnen dan worden getrokken uit elkaar en uit het gebied over de cisterna magna.</li>
	<li>Terwijl bekijken door het ontleden Microscoop, ontleden zorgvuldig weg de laatste dunne lagen van spier over de basis van de schedel met pincet en verplaatsen van deze lagen van de spier aan de zijkant en uit het gebied van belang. Als er is bloeden, wattenstaafjes gebruiken verwijderen te helpen stoppen met het bloeden.</li>
	<li>Zodra de dura over de cisterna magna is blootgesteld (driehoekige vorm met meestal 1-2 grote bloedvaten loopt door het gebied; beide zijden of tussen de bloedvaten is optimaal voor de capillaire inbrengen en CSF collectie, figuur 2B), gebruik maken van een NAT wattenstaafje aan veeg het membraan schoon en droog het gebied met een droge wattenstaafje.</li>
</ol><img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56774/56774fig2.jpg"> Figuur 2. Muis en dissectie setup met representatieve beelden van capillaire plaatsingskosten voor CSF collectie. Installatie van muis klaar voor CSF extractie met (A) geschoren hoofd geklemd in plaats voor dissectie en (B) gedetailleerde foto (10 x weergave) van een ontleed muis dura die betrekking hebben op de cisterna magna (onderbroken pijl toont een bloedvat loopt door het gebied en gevulde pijl geeft gebied optimaal voor capillaire invoegpositie). Gedetailleerde beelden (10 x weergave) van (C) geslepen tip van glazen capillaire uitgelijnd tegen dura van cisterna magna, (D) het punt waarop het capillair puncties bijna de dura, met enige weerstand van dura en (E) de capillaire tip getikt via de dura voor het verzamelen van CSF. CSF moet een heldere vloeistof verzameld in de glazen capillaire (gestippelde pijl). Alle schaal staven op de rechterbenedenhoek van elke afbeelding Microscoop geven 100 µm. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56774/56774fig2large.jpg" target="_blank">Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.</a>
3. CB collectie van narcose muis
<ol><li>De glazen viscometerbuizen aan de achterkant van het hoofd van de muis uitlijnen zodat het scherp punt is net achter het membraan op een ~ 30-45 ° hoek (figuur 2C).</li>
	<li>Duik de spuit eens of een paar keer en het opstellen van de spuit ~ 100-200 µL (zodat zeker dat er geen verontreinigingen en er is negatieve druk in de glazen capillaire).</li>
	<li>Met behulp van de micromanipulator, het verplaatsen van het capillair tip dichter bij het membraan tot weerstand kan worden gezien, maar niet prikken het (figuur 2D).</li>
	<li>Zodra weerstand wordt gezien tussen het uiteinde van het capillair en de membraan, zachtjes het capillair via het membraan te onttrekken door het kloppen op de micromanipulator-besturingselementen. Gebruik de Microscoop te zien het scherp punt van de capillaire punctie in de cisterna magna. CSF moet automatisch worden getrokken in het capillair zodra de opening heeft zijn doorboord (figuur 2E).</li>
	<li>Laat het capillair langzaam verzamelen CSF. Als het CB heeft gestopt tekening uit, trekken de injectiespuit omhoog een weinig langzaam (~ 50 µL) maken meer negatieve druk in het capillair uitpakken uit het CB. Opmerking: U kunt ook de capillaire kan worden voorzichtig en langzaam getrokken uit de hersenen met de fijne micromanipulator besturingselementen toe CSF te stromen in het capillair opnieuw. Een totaalbedrag van ~ 10-15 µL van CB (~ 3-4 cm in het capillair) duurt ~ 10-30 min, en af en toe 20 µL of meer kunnen worden verzameld. Hoewel niet strikt noodzakelijk is, is het aanbevolen om het gebruik van een warmte-pad tijdens CSF-collectie. CSF collectie werd uitgevoerd bij kamertemperatuur (~ 23 ° C).</li>
	<li>Zodra het bedrag van gewenste CB wordt verzameld, sluit u de slang door een verschuiving van de drie-weg klep te sluiten (als u wilt stoppen met tekenen uit het CB).</li>
	<li>Neem de spuit aangesloten op de buis, en opent en sluit de slang (als u wilt maken genivelleerde druk in de capillaire buis en het gebied buiten het capillair). Sluit de spuit met de drie-weg klep, maar niet de spuit storten.</li>
	<li>Verwijder voorzichtig de glazen viscometerbuizen uit de muis met behulp van de micromanipulator.</li>
	<li>Plaats de collectie buis (1,5 mL slangen met 1 µL van 20 x proteaseinhibitor) onder het scherp punt van de glazen capillaire.</li>
	<li>Open de buis en zachtjes duik de spuit: het CB moet vloeien uit het capillair en in de buis van de collectie.</li>
	<li>Na het verzamelen, snel centrifugeren (pulse spin voor 5 s met maximale snelheid met behulp van een mini centrifuge) het CB om te mengen van het monster met de proteaseinhibitor aan de onderkant van de buis van de collectie. Opmerking: CSF monsters kunnen worden aliquoted en vervolgens opgeslagen voor verdere analyse bij-80 ° C. De rest van de muis kan worden ontleed voor andere weefsels, zoals de hersenen en het ruggenmerg. De muis in dit stadium nog in leven is en dus bloed kan ook worden verzameld, indien nodig.</li>
</ol>

<ol><li>Anoop, A., Singh, P. K., Jacob, R. S., Maji, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CSF+Biomarkers+for+Alzheimer%27s+Disease+Diagnosis%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Alzheimers.+Dis%22%5BJournal%5D)">CSF Biomarkers for Alzheimer's Disease Diagnosis.</a> Int. J. Alzheimers. Dis. 2010, 1-12 (2010).</li>
<li>Blennow, K., Hampel, H., Weiner, M., Zetterberg, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebrospinal+fluid+and+plasma+biomarkers+in+Alzheimer+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Cerebrospinal fluid and plasma biomarkers in Alzheimer disease.</a> Nat. Rev. Neurol. 6 (3), 131-144 (2010).</li>
<li>Schoonenboom, N. S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebrospinal+fluid+markers+for+differential+dementia+diagnosis+in+a+large+memory+clinic+cohort%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Cerebrospinal fluid markers for differential dementia diagnosis in a large memory clinic cohort.</a> Neurology. 78 (1), 47-54 (2012).</li>
<li>Molinuevo, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+clinical+use+of+cerebrospinal+fluid+biomarker+testing+for+Alzheimer%27s+disease+diagnosis%3A+A+consensus+paper+from+the+Alzheimer%27s+Biomarkers+Standardization+Initiative%5BTitle%5D)+AND+%22Alzheimer%27s+Dement%22%5BJournal%5D)">The clinical use of cerebrospinal fluid biomarker testing for Alzheimer's disease diagnosis: A consensus paper from the Alzheimer's Biomarkers Standardization Initiative.</a> Alzheimer's Dement. 10 (6), 808-817 (2014).</li>
<li>Fagan, A. M. <a target="_blank" href="https://www.hindawi.com/archive/2014/302712/">CSF biomarkers of Alzheimer's disease: impact on disease concept, diagnosis, and clinical trial design.</a> Adv. Geriatr. 2014, 1-14 (2014).</li>
<li>Ramautar, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolic+profiling+of+mouse+cerebrospinal+fluid+by+sheathless+CE-MS%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Bioanal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Metabolic profiling of mouse cerebrospinal fluid by sheathless CE-MS.</a> Anal. Bioanal. Chem. 404 (10), 2895-2900 (2012).</li>
<li>Liu, L., Herukka, S., Minkeviciene, R., Vangreon, T., Tanila, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Longitudinal+observation+on+CSF+A%CE%B242+levels+in+young+to+middle-aged+amyloid+precursor+protein%2Fpresenilin-1+doubly+transgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol.+Dis%22%5BJournal%5D)">Longitudinal observation on CSF Aβ42 levels in young to middle-aged amyloid precursor protein/presenilin-1 doubly transgenic mice.</a> Neurobiol. Dis. 17 (3), 516-523 (2004).</li>
<li>Schelle, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevention+of+tau+increase+in+cerebrospinal+fluid+of+APP+transgenic+mice+suggests+downstream+effect+of+BACE1+inhibition%5BTitle%5D)+AND+%22Alzheimer%27s+Dement%22%5BJournal%5D)">Prevention of tau increase in cerebrospinal fluid of APP transgenic mice suggests downstream effect of BACE1 inhibition.</a> Alzheimer's Dement. , (2016).</li>
<li>You, J. -S., Gelfanova, V., Knierman, M. D., Witzmann, F. A., Wang, M., Hale, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+impact+of+blood+contamination+on+the+proteome+of+cerebrospinal+fluid%5BTitle%5D)+AND+%22Proteomics%22%5BJournal%5D)">The impact of blood contamination on the proteome of cerebrospinal fluid.</a> Proteomics. 5 (1), 290-296 (2005).</li>
<li>Liu, L., Duff, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Technique+for+Serial+Collection+of+Cerebrospinal+Fluid+from+the+Cisterna+Magna+in+Mouse%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">A Technique for Serial Collection of Cerebrospinal Fluid from the Cisterna Magna in Mouse.</a> J. Vis. Exp. (21), (2008).</li>
<li>Maia, L. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+amyloid-%CE%B2+and+Tau+in+the+cerebrospinal+fluid+of+transgenic+mice+overexpressing+amyloid+precursor+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Sci.+Transl.+Med%22%5BJournal%5D)">Changes in amyloid-β and Tau in the cerebrospinal fluid of transgenic mice overexpressing amyloid precursor protein.</a> Sci. Transl. Med. 5 (194), 194re2(2013).</li>
<li>Oshio, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduced+cerebrospinal+fluid+production+and+intracranial+pressure+in+mice+lacking+choroid+plexus+water+channel+Aquaporin-1%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">Reduced cerebrospinal fluid production and intracranial pressure in mice lacking choroid plexus water channel Aquaporin-1.</a> FASEB J. , (2004).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Dit protocol beschrijft in detail een techniek die verbetert op huidige methoden10 van CSF collectie Minimaliseer verontreiniging van bloed te voorzien in de overvloedige collectie van CB (gemiddeld ~ 10-15 µL kan worden verkregen) van muizen. Bij het afbreken van de capillaire tip, de tip van het capillair mag niet te klein (als toen het CB worden uitgepakt heel langzaam) of te groot (zal niet fijn genoeg om te verzamelen van het CB en het weefsel kan worden ingediend in het capillair). Zorg moet...

Het CB is een waardevolle lichaamsvloeistof p.a. in onderzoek neurowetenschap. Het CB bestaat voornamelijk uit bloedplasma, met enkele cellen (geen rode bloedcellen en slechts een paar witte bloedcellen) en is bijna op eiwit-vrij. Het is een van de vloeistoffen in nauw contact met het centrale zenuwstelsel (CNS) en het vele elektrolyten uit vanuit de hersenen en het ruggenmerg aan de perifere systeem kan doorgeven. Bij de mens, CSF monsters kan worden verzameld om te helpen bij de diagnose van de ziekte of voor onderzoeksdoeleinden in klinische proeven, als een spinal tap (of de Lumbaalpunctie) is een kleine, invasieve procedure: de CSF vloeistof kan wijzigingen in het VNV zonder voor directe toegang tot deze weefsels. Dus, in de afgelopen jaren, voor onderzoeksdoeleinden in de kliniek, CSF monsters zijn verkregen van patiënten van neurodegeneratieve ziekten zoals de ziekte van Alzheimer en andere dementie1,2,3. Er zijn vele biomerker-tests die zijn ontwikkeld met behulp van CSF monsters te kunnen helpen bij de diagnose van de ziekten in de kliniek2,3. Er is echter veel discussie over de betrouwbaarheid van deze tests te produceren consistente, gevoelige resultaten specifiek diagnose ziekte4,5. Dus, is er een grote behoefte aan de ontwikkeling van betere tests en doelstellingen, die kunnen worden gevonden in het CB, steun bij het opstellen van een standaard techniek aan het diagnosticeren van neurodegeneratieve ziekten met grotere gevoeligheid en specificiteit. Vanwege het potentiële belang van menselijke CSF monsters in ziekte is de collectie van CB van knaagdieren in onderzoek neurowetenschap ook van belang.
Muizen zijn belangrijke dieren in biologische en medisch onderzoek en zorgen voor het testen van potentiële therapeutische stoffen en proof-of-concept studies voor menselijke klinische proeven. Bij muizen is het echter moeilijk te verkrijgen van CSF monsters als gevolg van de nabijheid van de hersenen in een klein dier, zoals de gebruikelijke methode van CSF collectie in muizen is te verkrijgen via de cisterna magna, een opening tussen het cerebellum en de dorsale oppervlak van het verlengde merg. Dit veroorzaakt problemen in het verzamelen van CSF monsters zoals dit gebied moeilijk is te ontleden om en in de directe nabijheid van bloedvaten, waardoor het risico van besmetting van bloedcellen. Als gevolg van deze moeilijkheden, de meeste onderzoekers kunnen uitsluitend worden verkregen door een kleine hoeveelheid van CB p.a. (meestal vermeld als 5-7 µL) en de besmetting van CSF monsters door bloedcellen is een primaire zorg voor analyses6,7,8 , 9. bloed besmetting kan obscure resultaten en niet echt overeen met de staat van het centraal zenuwstelsel. Bovendien beperkt monster kan invloed hebben op onderzoek zoals het gebruikelijke bedrag verzameld van muizen voldoende voor slechts één meting (in tweevoud of drievoud is) met behulp van de enzym-verbonden immunosorbent analyse (ELISA). Dus, CSF monsters meestal uit meerdere muizen zijn samengevoegd om genoeg monster meerdere tests uitvoeren. Ontwikkeling van een protocol voor de overvloedige, onbesmette collectie van CB van muizen is zeer gewenst en bij het verbeteren van de neurowetenschappen onderzoek met behulp van knaagdieren gunstig zal zijn.
In dit protocol, een techniek voor het overvloedige (gemiddeld 10-15 µL) collectie van CB van narcose muizen wordt in detail beschreven en verbetert op een op dit moment bekende methode van CSF-collectie om te minimaliseren van verontreiniging van bloed10. Een robuust protocol voor CSF collectie zal helpen in de ontwikkeling van CSF gebaseerde biomerker tests, die kan worden gebruikt om steun in de diagnose van de ziekte, evenals het verbeteren van onderzoek in de mechanismen die ten grondslag liggen aan ziekten van de CNS.

<table><tbody><tr><td>Chloral hydrate (gebruikt als anestheticum)</td><td>Sinopharm Chemicals Reagen Co. Ltd.</td><td>30037517</td><td>CAS-nummer 302-17-0.</td></tr><tr><td>Dissectie schaar</td><td>66 vision technology</td><td>54002</td><td></td></tr><tr><td>Gebogen dissectietang</td><td>66 vision technology</td><td>53072</td><td></td></tr><tr><td>Rechte dissectietang</td><td>66 vision technology</td><td>53070</td><td></td></tr><tr><td>Muisadapter (met oorpennen)</td><td>Gemaakt in huis.</td><td>N/A</td><td>Vergelijkbare apparatuur verkrijgbaar bij World Precision Instruments.</td></tr><tr><td>Dissectiemicroscoop</td><td>Meiji Labax</td><td>Model 15381</td><td></td></tr><tr><td>Micromanipulator</td><td>World Precision Instruments</td><td>M3301</td><td></td></tr><tr><td>Magneetbasis voor micromanipulator</td><td>Kanetec</td><td>MB-K</td><td></td></tr><tr><td>Glazen capillairen</td><td>World Precision Instruments</td><td>1B100-4</td><td></td></tr><tr><td>Micropipet aanzuiger</td><td>Sutter Instruments</td><td>Model P-1000</td><td></td></tr><tr><td>Spuiten (1ml)</td><td>Tansoole</td><td>02024692</td><td>Voor 1ml.</td></tr><tr><td>Microbuisjes (1,5ml)</td><td>Axygen</td><td>MCT-150-C</td><td></td></tr><tr><td>Protease inhibitor Cocktail Set III EDTA-vrij</td><td>Calbiochem</td><td>539134</td><td></td></tr><tr><td>Human A&beta;42 ELISA kit</td><td>Invitrogen</td><td>KHB3441</td><td></td></tr><tr><td>Pijpleidingen (teflon buis)</td><td>World Precision Instruments</td><td>MMP-KIT</td><td>Verkregen uit een micro-injectiekit en bevestigd aan de capillairhouder en spuit.</td></tr><tr><td>Mini centrifuge</td><td>Tiangen Biotech</td><td>OSE-MC8</td><td></td></tr><tr><td>Wattenstaafjes</td><td>Verkrijgbaar bij elke huishoudwinkel/apotheek.</td><td>N/A</td><td></td></tr></tbody></table>

een verbeterde methode voor de verzameling van de cerebrospinale vloeistof van narcose muizen

An Improved Method for Collection of Cerebrospinal Fluid from Anesthetized Mice

De cerebrospinale vloeistof (CSF) is een waardevolle lichaamsvloeistof p.a. in onderzoek neurowetenschap. Het is een van de vloeistoffen in de dichtstbijzijnde contact met het centrale zenuwstelsel en zo kan worden gebruikt voor het analyseren van de zieke staat van de hersenen of ruggenmerg zonder direct toegang tot deze weefsels. Echter bij muizen is het moeilijk te verkrijgen van de cisterna magna als gevolg van de nabijheid van bloedvaten, besmetten die vaak monsters. Het gebied voor CSF collectie in muizen is ook moeilijk te ontleden en vaak alleen kleine steekproeven worden verkregen (maximaal 5-7 µL of minder). Dit protocol beschrijft in detail een techniek die verbetert op de huidige methoden van collectie Minimaliseer verontreiniging van bloed te voorzien in de overvloedige collectie van CB (gemiddeld die 10-15 µL kan worden geïnd). Deze techniek kan worden gebruikt met andere methoden van de dissectie voor weefsel collectie van muizen, zoals het geen voor alle weefsels tijdens de CSF extractie gevolgen heeft. Dus, de hersenen en het ruggenmerg ondervinden geen problemen met deze techniek en intact blijven. Met grotere CSF sample collectie en zuiverheid, meer analyses kunnen worden gebruikt met dit onderzoek van de neurowetenschappen vloeistof verder steun en ziekten van de hersenen en het ruggenmerg beter te begrijpen.

Met behulp van de procedure die hier beschreven (Figuur 1 en Figuur 2), moet het CB onmiddellijk verzameld in het capillair duidelijk (figuur 2E), niet roze of rood. Als er een roze tot rode tint aan de vloeistof in het capillair verzameld, dan was er verontreiniging met bloed.
Een voorbeeld van de toepassing van het CSF-monster verzameld m...

Dit protocol beschrijft een verbeterde techniek voor de overvloedige hoeveelheid cerebrospinale vloeistof (CSF) met geen besmetting uit bloed. Met grotere sample collectie en zuiverheid, kunnen meer analyses worden uitgevoerd met behulp van CSF om ons begrip van ziekten die de hersenen en het ruggenmerg beïnvloeden.

Een verbeterde methode voor de verzameling van de cerebrospinale vloeistof van narcose muizen

The cerebrospinal fluid (CSF) is a valuable body fluid for analysis in neuroscience research. It is one of the fluids in closest contact with the central ...

Het algemene doel van deze procedure is om de verzameling van hersenvocht uit muizen te verbeteren zonder besmetting van bloed. Deze methode biedt een eenvoudige en betrouwbare manier om CSF te verzamelen voor het monitoren van biomarkers van neurale ziekten. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat de toevoeging van de micromanipulator om te helpen bij de verzameling van CSF uit muizen de besmetting van bloed tijdens de verzameling vermindert.Begin door een getrokken glazen capillair in een capillairhouder te plaatsen die stevig is gemonteerd op een micromanipulator. Gebruik vervolgens, terwijl je door een dissectiemicroscoop kijkt, rechte pincetten om de punt van de aangescherpte capillair te breken, zodat de binnendiameter van de gebroken punt ongeveer 10 tot 20 micron is. Bevestig vervolgens een dunne buis en een spuit aan het andere uiteinde van de capillairhouder, verbind de dunne buis en de spuit met een driewegklep en schuif de driewegklep open.Duik vervolgens de spuit in om eventuele verontreinigingen te verdrijven en creëer een positieve druk in de capillaire buis. Herhaal dit een paar keer door de spuit los te koppelen en weer aan te sluiten op de driewegklep.

an-improved-method-for-collection-cerebrospinal-fluid-from

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowetenschap

Transgene (Tg) muismodellen van AD bieden een uitstekende gelegenheid om te onderzoeken hoe en waarom Aß of tau niveaus in CSF veranderen naarmate de ziekte vordert in menselijke patiënten. Hier tonen we een verfijnd cisterna magna prikken techniek voor serie-CSF bemonstering van de muis.

Een techniek voor seriële verzamelen van hersenvocht uit de Cisterna Magna in de muis

Source: Sweeney, A. M., et al. In Vivo Imaging of Cerebrospinal Fluid Transport through the Intact Mouse Skull using Fluorescence Macroscopy. J. Vis. Exp. (2019)This video demonstrates the process of visualizing cerebrospinal fluid (CSF) flow in a mouse brain using fluorescence imaging. A fluorescent tracer is injected into the cisterna magna (CM), allowing its movement with CSF to be tracked through the subarachnoid and perivascular spaces. Time-lapse imaging captures the tracer's journey,...

In Vivo Imaging of Cerebrospinal Fluid Transport in a Mouse Brain Using Fluorescence Macroscopy

De ventriculaire cerebrospinale vloeistof (CSF) baadt de neuro-epitheliale en cerebrale corticale progenitorcellen tijdens de vroege ontwikkeling van de hersenen in het embryo. Hier beschrijven we de methode ontwikkeld om ventriculaire CSF isoleren van knaagdieren embryo's van verschillende leeftijden om zijn biologische functie onderzoeken. Daarnaast tonen wij onze cerebrale corticale explantatie dissectie en cultuur techniek die voor explantatie groei mogelijk maakt met een minimale...

Isolatie van de cerebrospinale vloeistof uit Knaagdieren Embryo&#39;s voor gebruik met Ontleed cerebrale corticale Explantaten

Transcraniële optische beeldvorming maakt het mogelijk om het transport van cerebrospinale vloeistof in de cortex van levende muizen door middel van een intacte schedel te Imaging.

In vivo beeldvorming van cerebrospinale vloeistof transport door de intact Mouse schedel met behulp van fluorescentie Macroscopie

Verhoogde ruggenmergvloeistof eiwit niveaus kunnen ofwel het resultaat van diffusie van plasma eiwit over een veranderde bloed-hersen barrière of intrathecale synthese. Een geoptimaliseerd testprotocol wordt in dit artikel gepresenteerd dat helpt om beide gevallen te discrimineren en kwantitatieve metingen van intrathecaal gesynthetiseerde eiwitten verschaft.

Kwantitatieve meting van Intrathecaal gesynthetiseerde eiwitten bij muizen

Dit artikel beschrijft een gedetailleerd protocol om de glucoseconcentratie in het hersenvocht (CSF) van muizen te verhogen. Deze aanpak kan nuttig zijn voor het bestuderen van de effecten van hoge CSF-glucose op neurodegeneratie, cognitie en perifeer glucosemetabolisme bij muizen.

Osmotische minipompimplantatie voor het verhogen van de glucoseconcentratie in hersenvocht van muizen

We beschrijven een protocol voor het beoordelen van dosis-responscurves voor extracraniële stimulatie in termen van elektrische veldmetingen van de hersenen en een relevante biomarker-cerebrale bloedstroom. Aangezien dit protocol invasieve elektroden in de hersenen plaatst, is algemene anesthesie nodig, waarbij spontane ademhaling de voorkeur heeft boven gecontroleerde ademhaling.

Plaatsing van extracraniële stimulerende elektroden en meting van cerebrale bloedstroom en intracraniële elektrische velden bij verdoofde muizen

Het protocol toont herhaalde cerebrospinale vocht- en bloedafname van epileptische ratten die parallel worden uitgevoerd met continue video-elektro-encefalogram (EEG)-monitoring. Deze zijn van groot belang voor het onderzoeken van mogelijke verbanden tussen veranderingen in verschillende lichaamsvloeistofmoleculen en epileptische activiteit.

Bemonstering van hersenvocht en bloed uit laterale staartader bij ratten tijdens EEG-opnames

Om de cerebrale bloedstroomregulatie in vivo te bestuderen, zijn traditionele farmacologische methoden invasief en beschadigen ze vaak de schedel, dura en leptomeninges. In dit werk hebben we een minimaal invasieve techniek ontwikkeld die nano-injectorgeleide intracisternale magna (ICM) injectie combineert met beeldvorming met laserspikkelcontrast, waardoor de integriteit van de schedel en leptomeninges behouden blijft.

Gepaarde Cisterna Magna-nano-injectie en laserspikkelcontrastbeeldvormingstest om cerebrale bloedstroomregulatie in vivo te bestuderen

Hier wordt een protocol gepresenteerd om muis meningeale lymfevaten (MLV's) te beoordelen, die een belangrijke rol spelen bij meerdere neurologische aandoeningen. Het doel van dit protocol is het bieden van een geïntegreerde methode die zowel functionele evaluatie van tracerdrainage als gedetailleerde morfologische karakterisering van het dorsale MLV-netwerk mogelijk maakt.

Geïntegreerd protocol voor het beoordelen van meningeale lymfekatica: Cisterna magna-injectie, lymfeklierbeeldvorming, meningeale dissectie en whole-mount kleuring

Leer een verbeterde methode voor het verzamelen van cerebrospinale vloeistof bij muizen met minimale bloedcontaminatie. Deze techniek met een micromanipulator verhoogt de zuiverheid en het volume van het monster voor nauwkeurige biomarkeranalyse.

Een verbeterde methode voor de verzameling van de cerebrospinale vloeistof van narcose muizen

Meer video's verkennen