Name: Fabricage Procedures en dubbele breking metingen voor het ontwerpen van magnetisch responsieve Lanthanide Ion chelaat fosfolipide Assemblies (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-01-03T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 38 s
Description: Leer de fabricage van magnetisch responsieve lanthanide-ionchelaatfosfolipide-assemblages met dubbele brekingsmetingen. Deze methode optimaliseert het ontwerp van responsieve systemen voor biomedische toepassingen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De auteurs erkennen de Zwitserse National Science Foundation voor de financiering van SMhardBi (project nummer 200021_150088/1). De SANS experimenten werden uitgevoerd bij de Zwitserse spallation neutron bron SINQ, Paul Scherrer Instute, Villigen, Zwitserland. Dr. Joachim Kohlbrecher danken de auteurs hartelijk voor zijn leiding met de SANS-experimenten. De dubbele breking meting setup onder hoge magneetvelden is geïnspireerd vanuit de bestaande installatie op het Hoogveld magnetische laboratorium HFML, Nijmegen, Nederland. Wij danken Bruno Pfister voor zijn hulp bij de ontwikkeling van de elektronica van de dubbele breking setup, Jan Corsano en Daniel Kiechl voor de bouw van de kaders mooi fijn en facile uitlijning van de laser en Dr. Bernhard Koller voor lopende technische ondersteuning.

<ol><li>Sanders, C. R., Hare, B. J., Howard, K. P., Prestegard, J. H. <a target="_blank" href="http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/007965659480012X">Magnetically-oriented phospholipid micelles as a tool for the study of membrane-associated molecules.</a> Prog. Nucl. Magn. Reson. Spectrosc. 26, 421-444 (1994).</li>
<li>Glover, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+evaluation+of+phospholipid+bicelles+for+solution-state+studies+of+membrane-associated+biomolecules%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys.+J%22%5BJournal%5D)">Structural evaluation of phospholipid bicelles for solution-state studies of membrane-associated biomolecules.</a> Biophys. J. 81 (4), 2163-2171 (2001).</li>
<li>Katsaras, J. H. T. A., Pencer, J., Nieh, M. -P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%22Bicellar%22+lipid+mixtures+as+used+in+biochemical+and+biophysical+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Naturwissenschaften%22%5BJournal%5D)">"Bicellar" lipid mixtures as used in biochemical and biophysical studies.</a> Naturwissenschaften. 92 (8), 355-366 (2005).</li>
<li>Sanders, C. R., Prosser, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bicelles%3A+a+model+membrane+system+for+all+seasons%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Structure%22%5BJournal%5D)">Bicelles: a model membrane system for all seasons?</a> Structure. 6 (10), 1227-1234 (1998).</li>
<li>Dürr, U. H. N., Soong, R., Ramamoorthy, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((When+detergent+meets+bilayer%3A+birth+and+coming+of+age+of+lipid+bicelles%5BTitle%5D)+AND+%22Prog.+Nucl.+Magn.+Reson.+Spectrosc%22%5BJournal%5D)">When detergent meets bilayer: birth and coming of age of lipid bicelles.</a> Prog. Nucl. Magn. Reson. Spectrosc. 69, 1-22 (2013).</li>
<li>Dürr, U. H. N., Gildenberg, M., Ramamoorthy, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+magic+of+bicelles+lights+up+membrane+protein+structure%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Rev%22%5BJournal%5D)">The magic of bicelles lights up membrane protein structure.</a> Chem. Rev. 112, 6054-6074 (2012).</li>
<li>Ujwal, R., Abramson, J. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/22257923">High-throughput crystallization of membrane proteins using the lepidic bicelle method.</a> J. Vis. Exp. (59), (2012).</li>
<li>Barbosa-Barros, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bicelles%3A+lipid+nanostructured+platforms+with+potential+dermal+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Small%22%5BJournal%5D)">Bicelles: lipid nanostructured platforms with potential dermal applications.</a> Small. 6, 807-818 (2012).</li>
<li>Lin, L., et al. <a target="_blank" href="http://pubs.rsc.org/is/content/articlelanding/2016/ra/c6ra18112k">Hybrid bicelles as a pH-sensitive nanocarrier for hydrophobic drug delivery.</a> RSC Adv. 6, 79811-79821 (2016).</li>
<li>Beck, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+type+of+bicellar+disks+from+a+mixture+of+DMPC+and+DMPE-DTPA+with+complexed+lanthanides%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Novel type of bicellar disks from a mixture of DMPC and DMPE-DTPA with complexed lanthanides.</a> Langmuir. 26 (8), 5382-5387 (2010).</li>
<li>Liebi, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Tailored+phospholipid+bicelles+to+generate+magnetically+switchable+material%22">Tailored phospholipid bicelles to generate magnetically switchable material</a>. , ETH Zürich. Switzerland. PhD Thesis n° 21048, ISBN 978-3-905609-55-4 (2013).</li>
<li>Liebi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Magnetically+enhanced+bicelles+delivering+switchable+anisotropy+in+optical+gels%5BTitle%5D)+AND+%22ACS.+Appl.+Mater.+Interfaces%22%5BJournal%5D)">Magnetically enhanced bicelles delivering switchable anisotropy in optical gels.</a> ACS. Appl. Mater. Interfaces. 6 (2), 1100-1105 (2014).</li>
<li>Liebi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alignment+of+bicelles+studied+with+high-field+magnetic+birefringence+and+small-angle+neutron+scattering+measurements%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Alignment of bicelles studied with high-field magnetic birefringence and small-angle neutron scattering measurements.</a> Langmuir. 29, 3467-3473 (2013).</li>
<li>Prosser, R. S., Hwang, J. S., Vold, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Magnetically+aligned+phospholipid+bilayers+with+positive+ordering%3A+a+new+model+membrane+system%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys+J%22%5BJournal%5D)">Magnetically aligned phospholipid bilayers with positive ordering: a new model membrane system.</a> Biophys J. 74, 2405-2418 (1998).</li>
<li>Prosser, R. S., Bryant, H., Bryant, R. G., Vold, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lanthanide+chelates+as+bilayer+alignment+tools+in+NMR+studies+of+membrane-associated+peptides%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Magn.+Reson%22%5BJournal%5D)">Lanthanide chelates as bilayer alignment tools in NMR studies of membrane-associated peptides.</a> J. Magn. Reson. 141, 256-260 (1999).</li>
<li>Liebi, M., Kohlbrecher, J., Ishikawa, T., Fischer, P., Walde, P., Windhab, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cholesterol+increases+the+magnetic+aligning+of+bicellar+disks+from+an+aqueous+mixture+of+DMPC+and+DMPE-DTPA+with+complexed+thulium+ions%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Cholesterol increases the magnetic aligning of bicellar disks from an aqueous mixture of DMPC and DMPE-DTPA with complexed thulium ions.</a> Langmuir. 28 (29), 10905-10915 (2012).</li>
<li>Liebi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cholesterol-diethylenetriaminepentaacetate+complexed+with+thulium+ions+integrated+into+bicelles+to+increase+their+magnetic+alignability%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Phys.+Chem.+B%22%5BJournal%5D)">Cholesterol-diethylenetriaminepentaacetate complexed with thulium ions integrated into bicelles to increase their magnetic alignability.</a> J. Phys. Chem. B. 117 (47), 14743-14748 (2013).</li>
<li>Isabettini, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tailoring+bicelle+morphology+and+thermal+stability+with+lanthanide-chelating+cholesterol+conjugates%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Tailoring bicelle morphology and thermal stability with lanthanide-chelating cholesterol conjugates.</a> Langmuir. 32, 9005-9014 (2016).</li>
<li>Isabettini, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mastering+the+magnetic+susceptibility+of+magnetically+responsive+bicelles+with+3%CE%B2-Amino-5-Cholestene+and+complexed+lanthanide+ions%5BTitle%5D)+AND+%22Phys.+Chem.+Chem.+Phys%22%5BJournal%5D)">Mastering the magnetic susceptibility of magnetically responsive bicelles with 3β-Amino-5-Cholestene and complexed lanthanide ions.</a> Phys. Chem. Chem. Phys. 19, 10820-10824 (2017).</li>
<li>De Angelis, A. A., Opella, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bicelle+samples+for+solid-state+NMR+of+membrane+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Protoc%22%5BJournal%5D)">Bicelle samples for solid-state NMR of membrane proteins.</a> Nat. Protoc. 2 (10), 2332-2338 (2007).</li>
<li>Son, W. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%22Q-Titration%22+of+long-chain+and+short-chain+lipids+differentiates+between+structured+and+mobile+residues+of+membrane+proteins+studied+in+bicelles+by+solution+NMR+spectroscopy%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Magn.+Reson%22%5BJournal%5D)">"Q-Titration" of long-chain and short-chain lipids differentiates between structured and mobile residues of membrane proteins studied in bicelles by solution NMR spectroscopy.</a> J. Magn. Reson. 214, 111-118 (2012).</li>
<li>Avanti Polar Lipids Inc. Bicelle Preparation. , Available from:
 <a target="_blank" href="https://avantilipids.com/tech-support/liposome-preparation/bicelle-preparation">https://avantilipids.com/tech-support/liposome-preparation/bicelle-preparation</a> (2017).</li>
<li>Isabettini, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+for+Generating+Highly+Magnetically+Responsive+Lanthanide-Chelating+Phospholipid+Polymolecular+Assemblies%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Methods for Generating Highly Magnetically Responsive Lanthanide-Chelating Phospholipid Polymolecular Assemblies.</a> Langmuir. 33, 6363-6371 (2017).</li>
<li>Nieh, M. -P., Glinka, C. J., Krueger, S., Prosser, R. S., Katsaras, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SANS+study+on+the+effect+of+lanthanide+ions+and+charged+lipids+on+the+morphology+of+phospholipid+mixtures%5BTitle%5D)+AND+%22Biophysical+Journal%22%5BJournal%5D)">SANS study on the effect of lanthanide ions and charged lipids on the morphology of phospholipid mixtures.</a> Biophysical Journal. 82 (5), 2487-2498 (2002).</li>
<li>Watts, A., Spooner, P. J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phospholipid+phase+transitions+as+revealed+by+NMR%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Phys.+Lip%22%5BJournal%5D)">Phospholipid phase transitions as revealed by NMR.</a> Chem. Phys. Lip. 57, 195-211 (1991).</li>
<li>Bleaney, B. <a target="_blank" href="http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/0022236472900273">Nuclear magnetic-resonance shifts in solution due to lanthanide ions.</a> J. Magn. Reson. 8, 91-100 (1972).</li>
<li>Prosser, R. S., Volkov, V. B., Shiyanovskaya, I. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Solid-state+NMR+studies+of+magnetically+aligned+phospholipid+membranes%3A+taming+lanthanides+for+membrane+protein+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Solid-state NMR studies of magnetically aligned phospholipid membranes: taming lanthanides for membrane protein studies.</a> Biochem. Cell Biol. 76, 443-451 (1998).</li>
<li>Prosser, R. S., Volkov, V. B., Shiyanovskaya, I. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+chelate-induced+magnetic+alignment+of+biological+membranes%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys.+J%22%5BJournal%5D)">Novel chelate-induced magnetic alignment of biological membranes.</a> Biophys. J. 75, 2163-2169 (1998).</li>
<li>Shklyarevskiy, I. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Magnetic+alignment+of+self-assembled+anthracene+organogel+fibers%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Magnetic alignment of self-assembled anthracene organogel fibers.</a> Langmuir. 21, 2108-2112 (2005).</li>
<li>Christianen, P. C. M., Shklyarevskiy, I. O., Boamfa, M. I., Maan, J. C. <a target="_blank" href="http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0921452604000766">Alignment of molecular materials in high magnetic fields.</a> Physica B: Condens. Matter. 346, 255-261 (2004).</li>
<li>Maret, G., Dransfeld, K. <a target="_blank" href="https://link.springer.com/chapter/10.1007%2F3-540-13504-9_10">Biomolecules and polymers in high steady magnetic fields.</a> Top. App. Phys. 57, 143-204 (1985).</li>
<li>Gielen, J. C., Shklyarevskiy, I. O., Schenning, A. P. H. J., Christianen, P. C. M., Maan, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+magnetic+birefringence+to+determine+the+molecular+arrangement+of+supramolecular+nanostructures%5BTitle%5D)+AND+%22Sci.+Tech.+Adv.+Mater%22%5BJournal%5D)">Using magnetic birefringence to determine the molecular arrangement of supramolecular nanostructures.</a> Sci. Tech. Adv. Mater. 10 (1), 014601(2009).</li>
<li>Shklyarevskiy, I. O. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Deformation+and+ordering+of+molecular+assemblies+in+high+magnetic+fields%22">Deformation and ordering of molecular assemblies in high magnetic fields</a>. , Nijmegen University. The Netherlands. PhD Thesis, ISBN 90-9018956-4 (2005).</li>
<li>Fuller, G. G. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aFuller%2C+GG+%22Optical+rheometry+of+complex+fluids%22">Optical rheometry of complex fluids</a>. , Oxford University Press. NY. (1995).</li>
<li>Walde, P., Cosentino, K., Engel, H., Stano, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Giant+vesicles%3A+preparations+and+applications%5BTitle%5D)+AND+%22ChemBioChem%22%5BJournal%5D)">Giant vesicles: preparations and applications.</a> ChemBioChem. 11, 848-865 (2010).</li>
<li>Avanti Polar Lipids Inc. Liposome Preparation. , Available from:
 <a target="_blank" href="https://avantilipids.com/tech-support/liposome-preparation">https://avantilipids.com/tech-support/liposome-preparation</a> (2017).</li>
<li>Avanti Polar Lipids Inc. Preparing Large, Unilamellar Vesicles by Extrusion (LUVET). , Available from:
 <a target="_blank" href="https://avantilipids.com/tech-support/liposome-preparation/luvet">https://avantilipids.com/tech-support/liposome-preparation/luvet</a> (2017).</li>
<li>Isabettini, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+engineering+of+lanthanide+ion+chelating+phospholipids+generating+assemblies+with+a+switched+magnetic+susceptibility%5BTitle%5D)+AND+%22Phys.+Chem.+Chem.+Phys%22%5BJournal%5D)">Molecular engineering of lanthanide ion chelating phospholipids generating assemblies with a switched magnetic susceptibility.</a> Phys. Chem. Chem. Phys. 19, 20991-21002 (2017).</li>
<li>Battaglia, M. R., Ritchie, G. L. D. <a target="_blank" href="http://pubs.rsc.org/en/content/articlelanding/1977/f2/f29777300209">Molecular magnetic anisotropies from the Cotton-Mouton effect.</a> J. Chem. Soc., Faraday Trans. 2. 73 (2), 209-221 (1977).</li>
<li>Sprunt, S., Nounesis, G., Litster, J. D., Ratna, B., Shashidhar, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-field+magnetic+birefringence+study+of+the+phase+behavior+of+concentrated+solutions+of+phospholipid+tubules%5BTitle%5D)+AND+%22Phys.+Rev.+E%22%5BJournal%5D)">High-field magnetic birefringence study of the phase behavior of concentrated solutions of phospholipid tubules.</a> Phys. Rev. E. 48 (1), 328-339 (1993).</li>
<li>Zhao, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Continuous+paranematic+ordering+of+rigid+and+semiflexible+amyloid-Fe3O4+hybrid+fibrils+in+an+external+magnetic+field%5BTitle%5D)+AND+%22Biomacromolecules%22%5BJournal%5D)">Continuous paranematic ordering of rigid and semiflexible amyloid-Fe3O4 hybrid fibrils in an external magnetic field.</a> Biomacromolecules. 17 (8), 2555-2561 (2016).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Een gedetailleerd overzicht van hoe de dubbele breking metingen werden gebruikt in combinatie met SANS experimenten voor de evaluatie van methoden voor het genereren van zeer magnetisch responsieve Ln3 + chelaat fosfolipiden assemblages is in Isabettini et al. 23 de voorgestelde fabricage-protocollen zijn ook van toepassing voor assembly's die zijn samengesteld uit de langere DPPC en DPPE-DTPA fosfolipiden of voor degenen met chemisch gemodificeerde steroïde derivaten in hun du...

Bicelles zijn polymolecular schijf-achtige assemblages verkregen uit talrijke lipide-mengsels. 1 , 2 , 3 , 4 , 5 zijn ze veel gebruikt voor de structurele karakterisering van membraan biomoleculen door NMR spectroscopie. 6 , 7 echter, recente inspanningen willen uitbreiden op het gebied van mogelijke toepassingen. 5 , 8 , 9 de meest bestudeerde bicelle systeem bestaat uit een mengsel van 1,2-dimyristoyl -sn- glycero-3-fosfocholine (DMPC), die deel uitmaken van het vlakke deel van de vergadering en 1,2-dihexanoyl -sn- glycero-3-fosfocholine (DHPC) Fosfolipide die betrekking hebben op de rand. 1 , 2 , 3 de moleculaire geometrie van de fosfolipiden componeren het dubbelgelaagde dicteren de architectuur van de structuur van zelf geassembleerde polymolecular. 4 , 5 ter vervanging van DHPC met DMPE-DTPA genereert zeer magnetisch responsieve en afstembare bicelle systemen. 10 , 11 DMPC/DMPE-DTPA/Ln3 + (molaire verhouding 4:1:1) bicelles koppelen met veel meer paramagnetisch lanthanide ionen (Ln3 +) op van de dubbelgelaagde oppervlak, wat resulteert in een verbeterde magnetische reactie. 10 voorts, ter vervanging van de in water oplosbare DHPC moleculen met DMPE-DTPA/Ln3 + maakt de vorming van verdunning-resistente bicelles. 11
De magnetische alignability van vlakke polymolecular assembly's wordt gedicteerd door hun algemeen magnetische energie,
<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/56812/56812eq1v2.jpg">(1)
Indien B de magnetische veldsterkte is, <img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/56812/56812eq2.jpg"> de magnetische constant, n het nummer van de aggregatie en <img alt="Equation 3" src="/files/ftp_upload/56812/56812eq3.jpg"> de anisotropie van de moleculaire diamagnetisch gevoeligheid van het samenstellen van de dubbelgelaagde lipiden. Daarom is de reactie van DMPC/DMPE-DTPA/Ln3 + bicelles op magnetische velden op maat door hun grootte (totale getal n) en de moleculaire diamagnetisch gevoeligheid anisotropie Δχ. De laatste wordt gemakkelijk bereikt door het veranderen van de aard van de chelaat Ln3 +. 12 , 13 , 14 , 15 Introducing cholesterol (Chol-OH) of andere steroïde derivaten in de dubbelgelaagde biedt de mogelijkheid van tuning van zowel de statistische getal n en de Δχ van de magnetische gevoeligheid van de vergaderingen. 11 , 16 , 17 , 18 , 19 voor de samenstelling van een bepaald lipide, grotere assemblages bevatten meer lipiden die kunnen bijdragen aan de E-mag (grotere statistische getal n), wat resulteert in meer alignable soorten. De grootte van DMPC/DHPC bicelles, bijvoorbeeld, wordt conventioneel gecontroleerd door optimalisatie van het componeren vetgehalte voor verhouding of totaal. 20 , 21 , 22 maar dit mogelijk in DMPC/DMPE-DTPA/Ln3 + bicelles is, hun thermo-omkeerbare transformatie van bicelle naar blaasjes op verwarming aanbiedingen toegevoegd spastische opties. Mechanische betekent zoals extrusie via membraanfilters kunt vormgeven van de blaasjes. Het magnetisch alignable bicelles op koeling tot 5 ° C worden geregenereerd en hun afmetingen van het vesikel precursors worden gedicteerd. 11 Herein, richten we ons op het potentieel van mechanische fabricage procedures met DMPC/DMPE-DTPA/Tm3 + (molaire verhouding 4:1:1) of DMPC/Chol-OH/DMPE-DTPA/Tm3 + (molaire verhouding 16:4:5:5) als referentiesystemen. Het proces werkt naar analogie bij het werken met andere Ln3 + dan Tm3 +. Het brede scala van mogelijkheden die worden geboden door deze technieken zijn gemarkeerd in Figuur 1 en elders uitvoerig besproken. 23
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56812/56812fig1.jpg"> 
Figuur 1: Schematisch overzicht van de mogelijke fabricage procedures. De bestudeerde magnetisch alignable Ln3 + chelaatvormers polymolecular assembly's zijn samengesteld uit beide DMPC/DMPE-DTPA/Tm3 + (molaire verhouding 4:1:1) of DMPC/Chol-OH/DMPE-DTPA/Tm3 + (molaire verhouding 16:4:5:5). De droge lipide-film is met een 50 mM fosfaatbuffer op een pH van 7,4 gehydrateerd en het totale vetgehalte is 15 mM. Een effectieve hydratatie van de lipide-film vereist bevriezen of ontdooien cycli (FT) of verwarming en koeling cycli (H &#38; C). H &#38; C cycli zijn nodig om te regenereren monsters na de laatste vorst ontdooien stap, of te regenereren monsters bevroren gehouden over een langere periode van tijd als ze moeten worden gebruikt zonder verdere extrusie. Deze stappen worden uitvoerig besproken door Isabettini et al. 23 maximaal alignable polymolecular assemblages resultaat wordt bereikt, het leveren van de vergadering van de verschillende platforms gebaseerd op de samenstelling van lipide. De grootte van de bicelle en de magnetische alignability is afstembare door extrusie (Ext) via nanopore membraanfilters. De gepresenteerde uitlijning factoren Af werden berekend op basis van 2D kleine hoek neutronen verstrooiing (SANS) patronen van een DMPC/Chol-OH/DMPE-DTPA/Tm3 + (molaire verhouding 16:4:5:5) monster geëxtrudeerd via 800, 400, 200 of 100 nm poriën. SANS metingen zijn een complementaire middelen van het kwantificeren van de uitlijning van de bicelle die niet aan bod komt in meer detail hierin. 11 , 16 de Af varieert van -1 (parallelle neutronen verstrooiing of loodrecht uitlijning van de bicelles met betrekking tot de richting van het magnetisch veld) op 0 voor isotrope verstrooiing.<a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56812/56812fig1large.jpg" target="_blank">Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.</a>
De structuur van bicelles is uitgebreid bestudeerd door een breed scala van karakterisering technieken. 13 de uitlijning van de bicelles blootgesteld aan een magnetisch veld heeft gekwantificeerd met behulp van NMR-spectroscopie of kleine hoek neutronen verstrooiing (SANS) experimenten. 5 , 10 , 11 , 12 , 13 , 16 , 17 , 18 , 19 , 24 , 25 de verschuiving en de verbreding van de pieken van de NMR voordoet in aanwezigheid van Ln3 + zijn echter ernstige beperkingen aan de methode. 15 , 26 , 27 , 28 hoewel SANS experimenten lijden niet onder deze beperking, alternatieve en toegankelijker technieken zijn wenselijk voor routinematige kwantificering van magnetisch geïnduceerde uitlijning van assemblages in oplossing. Dubbele breking metingen zijn een levensvatbare en relatief eenvoudig alternatief. Analoog aan NMR experimenten onthullen dubbele breking metingen waardevolle informatie over lipide herschikkingen en lipide fasen die zich voordoen in de dubbelgelaagde. Bovendien, meetkundige transformaties die zich voordoen in de vergadering van de polymolecular met veranderlijke omgevingsomstandigheden zoals temperatuur worden gecontroleerd. 11 , 12 , 13 , 16 magnetisch geïnduceerde dubbele breking Δn′ is gebruikt voor het bestuderen van verschillende soorten fosfolipide systemen. 13 , 29 , 30 dubbele breking metingen gebaseerd op de techniek van de fase modulatie in een magnetisch veld is een haalbare methode om de oriëntatie van bicelles detecteren. 12 , 16 , 18 , 29 , 31 , 32 de mogelijkheid onderzoeken van bicelles met dubbele breking in hoge magnetische velden tot 35 T werd ook aangetoond door M. Liebi et al. 13
Als gepolariseerd licht een anisotrope materiaal binnenkomt, zal het worden gebroken in een gewone en buitengewone golf. 11 de twee golven hebben verschillende snelheden en in fase door een δ retardatie worden verschoven. De mate van vertraging δ wordt gemeten en omgezet in een dubbele breking signaal <img alt="Equation 5" src="/files/ftp_upload/56812/56812eq5.jpg"> te kwantificeren van de mate van anisotropie in het materiaal met
<img alt="Equation 6" src="/files/ftp_upload/56812/56812eq6.jpg">(2)
waar is λ de golflengte van de laser en d de dikte van het monster. Fosfolipiden zijn optisch anisotrope en hun optische as samenvalt met hun lange moleculaire assen, parallel aan de staarten van koolwaterstof. 11 , 12 geen vertraging wordt gemeten als de fosfolipiden willekeurig in oplossing georiënteerde zijn. Vertraging wordt gemeten als fosfolipiden, parallel met elkaar worden uitgelijnd. Het magnetisch geïnduceerde dubbele breking <img alt="Equation 5" src="/files/ftp_upload/56812/56812eq5.jpg"> kan hebben een positief of negatief teken afhankelijk van de oriëntatie van de moleculen in het magnetisch veld; Zie Figuur 2. Fosfolipiden parallel uitgelijnd met de x-as zal resulteren in een negatieve <img alt="Equation 5" src="/files/ftp_upload/56812/56812eq5.jpg"> </img>, terwijl die uitgelijnd langs de z-as in een positieve resulteren <img alt="Equation 5" src="/files/ftp_upload/56812/56812eq5.jpg"> </img>. Geen dubbele breking is waargenomen wanneer de optische as samenvalt met de richting van licht propagatie zoals de fosfolipide uitgelijnd evenwijdig aan de y-as.
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56812/56812fig2.jpg"> 
Figuur 2: Aanpassing van de fosfolipiden en het bijbehorende teken van het magnetisch geïnduceerde dubbele breking <img alt="Equation 12" src="/files/ftp_upload/56812/56812eq12.jpg"> </img> . Het teken van de gemeten <img alt="Equation 12" src="/files/ftp_upload/56812/56812eq12.jpg"> is afhankelijk van de oriëntatie van de fosfolipide in het magnetisch veld. Onderbroken lijnen geven de optische as van het molecuul. Het licht is gepolariseerd op 45° en zich voortplant in de y-richting. Het magnetisch veld B is in de z-richting. Dit cijfer is gewijzigd van M. Liebi. 11 <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56812/56812fig2large.jpg" target="_blank">Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.</a>
In het geval van een isotroop colloïdale suspensie van bicelles zullen de oriëntatie geïnduceerd door de rangschikking van de fosfolipiden in de dubbelgelaagde verloren gaan, de retardatie δ zeroing. De bicelles moet ook uitlijnen om te oriënteren de optisch actieve fosfolipiden in hun bilayers, waardoor een retardatie δ van de gepolariseerd licht. Dubbele breking is derhalve een gevoelig instrument te kwantificeren van de magnetische alignability van de polymolecular-assembly's. Bicelles uitgelijnd loodrecht op het magnetisch veld resulteert in een positieve <img alt="Equation 5" src="/files/ftp_upload/56812/56812eq5.jpg"> </img>, terwijl die parallel uitgelijnd in een negatieve resulteert <img alt="Equation 5" src="/files/ftp_upload/56812/56812eq5.jpg"> </img>. Het bord hangt af van de uitlijning van de setup en kan worden gecontroleerd met een referentiemonster.

<table><tbody><tr><td>1,2-dimyristoyl-sn-glycero-3-fosfocholine (DMPC)</td><td>Avanti Polar Lipids</td><td>850345P</td><td>>99%</td></tr><tr><td>1,2-dimyristoyl-sn-glycero-3-fosfo-ethanolamine-diethyleentreaminepentaacetaatzuur hexammoniumzout (DMPE-DTPA)</td><td>Avanti Polar Lipids</td><td>790535P</td><td>>99%</td></tr><tr><td>Thulium(III) chloride</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>439649</td><td>watervrij, poeder, 99,9% trace metalen basis</td></tr><tr><td>Dysprosium(III) chloride</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>325546</td><td>watervrij, poeder, 99,9% trace metalen basis</td></tr><tr><td>Ytterbium(III) chloride</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>439614</td><td>watervrij, poeder, 99,9% trace metalen basis</td></tr><tr><td>Chloroform</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>319988</td><td>bevat ethanol als stabilisator, ACS reagens, &ge;99,8%</td></tr><tr><td>Methanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>34860</td><td>&ge;99,9%</td></tr><tr><td>Cholesterol</td><td>Amresco</td><td>433</td><td>Ultra pure grade</td></tr><tr><td>D2O</td><td>ARMAR chemicals</td><td>1410</td><td>99,8 atom % D</td></tr><tr><td>Ultrazuiver water</td><td>Millipore</td><td></td><td>Synergy pak2 (SYPK0SIX2), Millipack GP (MPGP02001)</td></tr><tr><td>elektronische pH meter</td><td>Metrohm</td><td>17440010</td><td></td></tr><tr><td>Whatmann Nuclepore 25 mm 100nm membraanfilter</td><td>VWR</td><td>515-2028</td><td></td></tr><tr><td>Whatmann Nuclepore 25 mm 200nm membraanfilter</td><td>VWR</td><td>515-2029</td><td></td></tr><tr><td>Whatmann Nuclepore 25 mm 400nm membraanfilter</td><td>VWR</td><td>515-2030</td><td></td></tr><tr><td>Whatmann Nuclepore 25 mm 800nm membraanfilter</td><td>VWR</td><td>515-2032</td><td></td></tr><tr><td>Whatmann Filterpapier</td><td>VWR</td><td>230600</td><td></td></tr><tr><td>25 ml rondbodemfles</td><td>VWR</td><td>201-1352</td><td>14/23 NS</td></tr><tr><td>3 ml glazen snap-cup</td><td>VWR</td><td>548-0554</td><td>ND18, 18x30mm</td></tr><tr><td>2,5 ml glazen spuit</td><td>Hamilton</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Natriumdiwaterstoffosfaatdihydraat</td><td>Merk</td><td>1.06342</td><td>Zout gebruikt om fosfaatbuffer te maken</td></tr><tr><td>di-Natriumwaterstoffosfaat</td><td>Merk</td><td>1.06586</td><td>Zout gebruikt om fosfaatbuffer te maken</td></tr><tr><td>Vloeibare stikstof</td><td>Carbagas</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Geperst stikstofgas</td><td>Carbagas</td><td>-</td><td>200 bar fles</td></tr><tr><td>Lipid Extruder 10 ml</td><td>Lipex</td><td>-</td><td>Volledig uitgerust met thermobarrel</td></tr><tr><td>Hogedruk PVC-buis</td><td>GR NETUM</td><td>-</td><td>moet meer dan 4 MPa weerstaan</td></tr><tr><td>Serto adapters</td><td>Sertot</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Nitril handschoenen</td><td>VWR</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>2 ml glazen pipetten</td><td>VWR</td><td>612-1702</td><td>230 mm lang</td></tr><tr><td>Diode Laser</td><td>Newport</td><td>LPM635-25C</td><td></td></tr><tr><td>DSP Dual Phase Lock-in Versterker</td><td>SRS</td><td>SR830</td><td></td></tr><tr><td>Fotodiode Detector</td><td>Silonex Inc.</td><td>SLSD-71N5</td><td>5mm2, Silicon, foto-geleidend</td></tr><tr><td>5.5 T Cryogenic Magnetic</td><td>Cryogenic/Oerlikon AG</td><td>-</td><td>12 bar He-gekoeld. RW4000/6000 compressor, RGD 5/100 TA cryo-head</td></tr><tr><td>Tweede orde laagdoorlaatfilter</td><td>zelfgebouwd</td><td>-</td><td>Lineaire voeding 24V DC, tweede orde, Sallen Key, afsluitfrequentie 360 Hz, +/- 12V, max 10 mA</td></tr><tr><td>Fotoelastisch modulator</td><td>Hinds instruments</td><td>PEM-90</td><td></td></tr><tr><td>Glan-Thompson Calcite Polarisator</td><td>Newport</td><td>10GT04</td><td>25,4mm diameter</td></tr><tr><td>Kwarts monstercuvet</td><td>Hellma</td><td>165-10-40</td><td>temperatuurgestuurde cel, 0,8 ml, 10mm padlengte</td></tr><tr><td>Temperatuursonde</td><td>Thermocontrol</td><td>-</td><td>Type K, 0,5mm diameter, Thermocoax</td></tr><tr><td>Niet-polariserende spiegels</td><td>Newport</td><td>50326-1002</td><td>25,4mm</td></tr><tr><td>RS 232 kabels</td><td>National Instruments</td><td>189284-02</td><td>Voor aansluiting op de RS-232 poort aan de voorkant van Compact FieldPoint Controllers</td></tr><tr><td>BNC 50 &Omega; kabel en connectoren</td><td>National Instruments</td><td>763389-01</td><td></td></tr><tr><td>cFP-AI-110</td><td>National Instruments</td><td>777318-110</td><td>8-kanaals analoog spanning en stroom ingangsmodule voor Compact FieldPoint</td></tr><tr><td>cFP-CB-1</td><td>National Instruments</td><td>778618-01</td><td>Geïntegreerde Connector Blok voor bedrading naar Compact FieldPoint I/O</td></tr><tr><td>cFP-CB-3</td><td>National Instruments</td><td>778618-03</td><td>Geïntegreerde Isothermische Connector Blok voor bedrading van Thermokoppels naar de cFP-TC-120 Module</td></tr><tr><td>cFP-TC-120</td><td>National Instruments</td><td>777318-120</td><td>8-kanaals Thermokoppel ingangsmodule voor Compact FieldPoint</td></tr><tr><td>cFP-1804</td><td>National Instruments</td><td>779490-01</td><td>Ethernet/Seriele Interface voor NI Compact FieldPoint</td></tr><tr><td>LabView 2010</td><td>National Instruments</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Industriële voeding</td><td>Traco Power</td><td>TCL 060-124</td><td>100-240V AC</td></tr><tr><td>Waterbad</td><td>Julabo</td><td>FP40-HE</td><td>gekoelde/verwarming circulator</td></tr></tbody></table>

fabricage procedures en dubbele breking metingen voor het ontwerpen van magnetisch responsieve lanthanide ion chelaat fosfolipide assemblies

Fabrication Procedures and Birefringence Measurements for Designing Magnetically Responsive Lanthanide Ion Chelating Phospholipid Assemblies

Bicelles zijn afstembare schijf-achtige polymolecular assembly's gevormd uit een grote verscheidenheid van lipide mengsels. Toepassingen variëren van membraan eiwit structurele studies door nucleaire magnetische resonantie (NMR) tot nanotechnologische ontwikkelingen, met inbegrip van de vorming van optisch actieve en magnetisch schakelbare gels. Dergelijke technologieën vereisen hoge controle van de grootte van de vergadering, de magnetische reactie en de warmteweerstand. Mengsels van 1,2-dimyristoyl -sn- glycero-3-fosfocholine (DMPC) en haar lanthanide-ion (Ln3 +) chelaat fosfolipide conjugaat, 1,2-dimyristoyl -sn- glycero-3-phospho-ethanolamine-diethyleenglycol triaminepentaacetate () DMPE-DTPA), assembleren in zeer magnetisch responsieve assemblages zoals DMPC/DMPE-DTPA/Ln3 + (molaire verhouding 4:1:1) bicelles. Invoering van cholesterol (Chol-OH) en steroïde derivaten in de dubbelgelaagde resultaten in een andere set van assembly's bieden unieke fysisch-chemische eigenschappen. Voor een bepaald lipide-samenstelling is de magnetische alignability evenredig aan de grootte van de bicelle. De kleurverandering van Ln3 + resulteert in ongekende magnetische reacties in termen van zowel de omvang als de uitlijning richting. De thermo-omkeerbare ineenstorting van de schijf-achtige structuren in blaasjes op verwarming kunt afstemming van de vergaderingen afmetingen door extrusie via membraanfilters met gedefinieerde porie maten. Het magnetisch alignable bicelles worden geregenereerd door afkoeling tot 5 ° C, wat resulteert in vergadering afmetingen gedefinieerd door het blaasje precursoren. Hierin, deze procedure fabricage wordt uitgelegd en de magnetische alignability van de assembly's wordt gekwantificeerd door dubbele breking metingen onder een 5.5 T magnetisch veld. Het signaal van de dubbele breking, afkomstig uit de fosfolipide dubbelgelaagde, verder kan polymolecular veranderingen in de dubbelgelaagde. Deze eenvoudige techniek is complementair aan NMR experimenten die algemeen werkzaam zijn te karakteriseren van bicelles.

Het signaal van de dubbele breking van een niet-geëxtrudeerde DMPC/DMPE-DTPA/Tm3 + (molaire verhouding 4:1:1) monster werd gecontroleerd in het kader een 5.5 T magnetisch veld tijdens een verwarming en koeling van de cyclus van 5 tot 40 ° C en terug met een snelheid van 1 ° C/min (Figuur 6). De dubbele breking resultaten bevestigd hoge magnetische uitlijning bij 5 ° C met een waarde van 1,5 x 10-5, twee keer zo sterk wat betreft de gemel...

Fabricage procedures voor zeer magnetisch responsieve lanthanide ion chelaat polymolecular assembly's worden gepresenteerd. De magnetische reactie wordt bepaald door de grootte van de vergadering, die is afgestemd door extrusie via nanopore membranen. De assemblages magnetische alignability en temperatuur-geïnduceerde structurele veranderingen worden gecontroleerd door de dubbele breking metingen, een gratis techniek om nucleaire magnetische resonantie en kleine hoek neutronen verstrooiing.

Fabricage Procedures en dubbele breking metingen voor het ontwerpen van magnetisch responsieve Lanthanide Ion chelaat fosfolipide Assemblies

Bicelles are tunable disk-like polymolecular assemblies formed from a large variety of lipid mixtures. Applications range from membrane protein structural ...

Het algemene doel van deze procedure is om hoog magnetisch responsieve lanthanide-ion chelatie polymoleculaire assemblages te fabriceren, en om de magnetische respons gemakkelijk te monitoren met birefringentiemetingen. Birefringentiemetingen kunnen helpen bij het beantwoorden van belangrijke vragen in het ontwerp van magnetisch responsieve polymoleculaire assemblages, zoals bicelles, door een alternatieve en relatief eenvoudige manier te bieden om de uitlijning te controleren. Het grote voordeel van deze polymoleculaire assemblages is de mogelijkheid om een ongeraffineerd en afstembaar magnetisch antwoord te leveren bij veldsterktes zo laag als één of twee tesla door te associëren met aantallen per magnetisch lanthanide-ion.Hoewel het monitoren van de birefringentiezoeker belangrijke informatie biedt voor het ontwerp van bicelles, kan het ook van toepassing zijn op de studie van andere magnetisch responsieve systemen, zoals neurokristallijne sedolos of amyoïde vezels gedoteerd met ijzeroxide nanodeeltjes. Om de procedure te beginnen, gebruik een glas spuit van 2,5 milliliter en drie milliliter snap-cap vials om de benodigde hoeveelheden DMPC, DMPE-DTPA, Cholesterol en Thulium(III)chloride stockoplossingen te meten. Combineer de stockoplossingen in een 25 milliliter ronde bodemfles.Spoel elke vial in de fles met 2,5 milliliter van het oplosmiddel dat gebruikt is in de corresponderende stockoplossing. Klem de fles op een rotatie-vaporisator. Verwijder oplosmiddel van het mengsel bij 40 graden Celsius onder 30.000 Pascal, tot er alleen nog een viskeuze transparante film overblijft.Verlaag de druk tot 100 Pascal en blijf minimaal twee uur het monster trekken om een droge lipidefilm te verkrijgen. Spoel vervolgens de fles gedurende één minuut met argon. Sluit de fles af met paraffinefolie en bewaar het monster bij 18 graden Celsius.Wanneer u klaar bent om het lipide te rehydreren, voegt u drie milliliter van 15 millimolair pH 7,4 fosfaatbuffer toe aan de fles. Roteer de fles in een vloeibare stikstofbad tot het monster volledig bevroren is, zoals aangegeven door de vloeibare stikstof niet meer te koken. Roteer vervolgens de fles gedurende 5 minuten in een waterbad ingesteld op 60 graden Celsius.Zodra het monster volledig vloeibaar is, vortex het monster gedurende 30 seconden. Stabiliseer het monster na de laatste bevriezingsstap met twee verwarmings-koelcycli. Verkrijg eerst spoor-geëtste polycarbonaatmembraanfilters met de gewenste poriëngrootte voor de extrusie.Begin met het samenstellen van een 10 milliliter lipide-extruder met een ommantelde monstervat, geholpen door siliconen-tipped pincetten. Gebruik een paar druppels fosfaatbuffer om het ondersteunende gaas en de polyester afvoerdisk voor optimale plaatsing van het membraanfilter nat te maken. Leg de O-ring voorzichtig op het membraanfilter.Zorg ervoor dat er geen plooien of vouwen op het membraan zitten. Maak de assemblage van de lipide-extruder af en verbind het ommantelde monstervat met een temperatuur gecontroleerde watercirculator. Verwarm het circulator waterbad tot 60 graden Celsius en start de circulatie.Verbind de extruder met een geperste stikstofgasfles met behulp van hoogdruk PVC-buis en snelkoppelingen. Stel de extrusiedruk in op de juiste waarde voor de membraanporiëngrootte. Gebruik een glaspipet van twee milliliter om het monster toe te voegen aan het ommantelde vat.Sluit het vat en laat het monster gedurende 30 tot 60 seconden gelijkmatig verdelen. Plaats het uiteinde van de monsteruitlaatbuis in de monsterfles. Open vervolgens de stroom van stikstof naar de extruder terwijl u de monsteruitlaatbuis vasthoudt.Zodra de monsterextrusie voltooid is, ventileer de extruder en gebruik dezelfde glaspipet van twee milliliter om het geëxtrudeerd monster over te brengen naar het ommantelde vat. Voer op deze manier 10 extrusiecycli uit. Vervang het membraanfilter wanneer het begint te verstoppen.Herhaal de extrusie door kleinere poriëngrootten zoals gewenst. Schakel het birefringentiemeetapparaat in en stel het in. Plaats vervolgens het monster in een temperatuur gecontroleerde kwarts cuvet met een padlengte van 10 millimeter.Verbind de cuvet met een externe waterbad ingesteld op vijf graden Celsius. Breng een k-type thermokoppel van 0,5 millimeter dik door een opening in de dop in het monster. Pas de temperatuur van het waterbad aan op basis van de thermokoppellezing tot het monster vijf graden Celsius bereikt.Plaats de cuvet in de opening van de magneet. Controleer of de thermokoppel niet in het pad van de laser staat door een vel papier in het pad van de laser achter de cuvet te houden en te zoeken naar schaduwen geworpen door de thermokoppel. Het is belangrijk om de temperatuur van het monster direct te monitoren, maar de sonde mag niet in de weg zitten van het laserlicht.Dit kan gemakkelijk worden gecontroleerd door het witte papier in het pad van de laser na de cuvet te plaatsen en te zoeken naar schaduwen. Breng een gelijkmatige stroom van droog gecomprimeerde lucht op kamertemperatuur bij 10.000 Pascal aan op de cuvet om de vorming van condensatie te voorkomen. Selecteer de versterkergevoeligheidsvermenigers, zorg ervoor dat de versterker niet overbelast is en dat er niet meer dan vier rode balken op het display verschijnen.Automatiseer vervolgens beide lock-in versterkers. De troebelheid van het monster kan tijdens een temperatuurcyclus drastisch veranderen als gevolg van polymoleculaire herschikkingen. De hoogste troebelheid treedt meestal op bij lage temperaturen en om een signaaloverbelasting bij verwarming te voorkomen, mag de gevoeligheid niet te hoog worden ingesteld bij vijf graden Celsius.Vul de naam van het monster en de gevoeligheden van de lock-in versterkers in. Voer een bestandsnaam in voor de meting en begin met het loggen van de gegevens. Vervolgens, ramp het magnetische veld tot 5,5 Tesla's met behulp van het meetprogramma.Verzamel birefringentie signaalgegevens bij verschillende monstertemperaturen en magnetische veldsterktes zoals gewenst. Het birefringentiesignaal van cholesterol gedopte bicelles geëxtrudeerd door membranen met 800 nanometer por

fabrication-procedures-birefringence-measurements-for-designing

Research

JoVE Journal

Engineering

Techniek

Om de interactie van een proteïne test met haar doel lipide gebruikten we MACS en Annexine V-geconjugeerde magnetische kralen en lipide vesicles gesynthetiseerd uit het doel lipiden en Annexine V-bindend fosfatidylserine. Eiwitten gebonden aan de doelgroep lipide zijn co-gezuiverd en geanalyseerd na elutie van de kralen.

Lipide bolletjes-gemedieerde affiniteitschromatografie met behulp van Magnetic Activated Cell Sorting (LIMACS): een nieuwe methode om eiwit-lipide Interactie Analyze

We tonen de metalation, zuivering en karakterisering van lanthanide-complexen. De complexen hier beschreven kunnen worden geconjugeerd aan macromoleculen om het volgen van deze moleculen met behulp van magnetische resonantie beeldvorming.

Voorbereiding, Zuivering en karakterisering van lanthanide-complexen voor gebruik als contraststoffen voor Magnetic Resonance Imaging

Ondersteunde lipide dubbellagen en natuurlijke membraan deeltjes zijn handig systemen die de eigenschappen van celmembranen kunnen benaderen en diverse analytische strategieën worden opgenomen. Hier laten we een werkwijze voor het bereiden microarrays samengesteld ondersteunde lipide-bilaag beklede SiO2 parels, fosfolipide vesicula of natuurlijke membraan deeltjes.

Vorming van biomembraan Microarrays met een zuigmond-gebaseerde Vergadering Methode

We presenteren een experimenteel protocol naar een ondersteunde lipidebilaag op vaste substraten te vormen zonder gebruik van lipide blaasjes. We tonen een eenstaps werkwijze op een lipide dubbellaag op siliciumdioxide en goud en ondersteunde membranen met cholesterol verrijkte domein voor verschillende biologische toepassingen te vormen.

Biomembraan Fabrication door de Solvent-geassisteerde lipidedubbellaag (SALB) Methode

Dit artikel beschrijft methoden voor door de gebruiker bepaalde spinlabeling en reconstituur van pentamere ligand-gebonden kanalen voor studies met Elektronen Paramagnetische Resonantie. Dit protocol kan worden aangepast voor elk membraaneiwit. De hier beschreven reconstituurmethode kan ook worden gebruikt voor patch-clamp metingen van macroscopische en enkele-kanaalstromen in een gedefinieerd lipidensysteem.

Site Gericht spin labeling en EPR spectroscopische Studies van pentamere Ligand-ionkanalen

We tonen een opgeslagen of vervoerd lipidedubbellaag formatie systeem. Een lipide dubbellaag membraan kan worden gevormd binnen 1 uur meer dan 80% succes als een bevroren membraan precursor tot omgevingstemperatuur wordt gebracht. Dit systeem tijdrovend proces en deskundigheid geassocieerd met ionkanalen verminderen.

Geautomatiseerde lipidebilaagmembraan Vorming Met behulp van een Polydimethylsiloxane Thin Film

Wij presenteren een protocol glas functionaliseren met nanometrische eiwit pleisters omgeven door een vloeibare lipide dubbellaag. Deze substraten zijn compatibel met geavanceerde optische microscopie en zullen naar verwachting om te dienen als platform voor celadhesie en migratie studies.

Ligand Nano-cluster Arrays in een ondersteunde lipide dubbellaag

Hier presenteren we een protocol om te isoleren fucoxanthin chlorofyl a/c bindende proteïnen (FCP) van diatomeeën en in liposomen met natuurlijke lipide composities aan het bestuderen van excitatie energieoverdracht op ion samenstelling veranderingen te integreren.

Isoleren en de integratie van licht-oogst antennes van Diatomee Cyclotella Meneghiniana in liposomen met thylakoïde lipiden

Zacht, low-power, biomoleculaire memristors hefboomwerking dezelfde samenstelling, structuur en omschakeling van de mechanismen van de bio-synapsen. Hier gepresenteerd is een protocol te monteren en karakteriseren van biomoleculaire memristors verkregen isolerende lipide bilayers gevormd tussen waterdruppeltjes in olie. De opneming van spanning-geactiveerde alamethicin peptiden resultaten in de Ionische huidgeleiding memristive over het membraan.

Vergadering en karakterisering van biomoleculaire Memristors bestaande uit ionkanaal-doped lipide membranen

Hier beschrijven we protocollen met behulp van fluorescerende lipidesensoren en liposomen om te bepalen of een eiwit fosfatidylserine of fosfatidylinositol 4-fosfaat in vitroextraheert en transporteert .

Fluorescentie-gebaseerde metingen van fosfatidylserine / fosfatidylinositol 4-fosfaatuitwisseling tussen membranen

Hier wordt een nanobar-ondersteund lipide bilayer-systeem ontwikkeld om een synthetisch membraan te bieden met een gedefinieerde kromming die de karakterisering van eiwitten met krommingsdetectievermogen in vitro mogelijk maakt.

Een nanobar-ondersteund lipide bilayer-systeem voor de studie van membraankrommingsgevoelige eiwitten in vitro

Leer de fabricage van magnetisch responsieve lanthanide-ionchelaatfosfolipide-assemblages met dubbele brekingsmetingen. Deze methode optimaliseert het ontwerp van responsieve systemen voor biomedische toepassingen.

Fabricage Procedures en dubbele breking metingen voor het ontwerpen van magnetisch responsieve Lanthanide Ion chelaat fosfolipide Assemblies (Video) | JoVE Journal

Fabricage Procedures en dubbele breking metingen voor het ontwerpen van magnetisch responsieve Lanthanide Ion chelaat fosfolipide Assemblies

Meer video's verkennen