Gestroomlijnde 3D cerebellaire differentiatie Protocol met optionele 2D wijziging
December 9th, 2017
We beschrijven een vereenvoudigde 3D differentiatie protocol voor hPSCs, met behulp van gedefinieerd medium en verminderd van groeifactoren, geschikt voor het genereren van cel aggregaten met vroege neuroepithelial structuren en gunstig zijn voor de cerebellaire-geassocieerde markeringen, evenals een optionele 2D modificatie voor differentiatie van cellen als een enkelgelaagde voor het genereren van functionele neuronen.
The overall goal of these differentiation cultures is to generate cerebellar cell lineages in 2D or 3D environments.These methods can help to answer basic questions regarding new developments or disease mechanisms underlying childhood brain disorders using patient derived stem cells.The main advantage of this technique is that it has a simple startup and maintenance with few factors and that it can be used as a base for testing more complex neural protocols.Demonstrating the procedure will be Lisa a technician from my laboratory.To set up the differentiation with modified method G-method of passing of hPSC's transfer the required volume of neural maintenance medium to a sterile tube and supplement with 4 nanograms per milliliter FGF2 and ten micromolar rock inhibitor.Then, keep the medium tube at room temperature or in water bath at 37
Overzicht
Dit artikel presenteert een vereenvoudigd 3D-differentiatieprotocol voor humane pluripotente stamcellen (hPSC's) dat een gedefinieerd medium en verminderde groeifactoren gebruikt. Het protocol is in staat om celaggregaten te genereren met vroege neuroepitheliale structuren en markers geassocieerd met cerebellaire ontwikkeling.
Belangrijke studiecomponenten
Wetenschapsgebied
- Neurowetenschappen
- Stamcellenbiologie
- Celdifferentiatie
Achtergrond
- Het begrijpen van cerebellaire cellijnen is cruciaal voor het bestuderen van hersenaandoeningen bij kinderen.
- Uit patiënten afgeleide stamcellen kunnen inzichten bieden in ziektemechanismen.
- Het protocol beoogt het differentiatieproces te vereenvoudigen.
- Het staat zowel 2D- als 3D-kweekomgevingen toe.
Doel van het onderzoek
- Om een eenvoudige methode te ontwikkelen voor het genereren van cerebellaire celtypen.
- Om onderzoek naar hersenaandoeningen bij kinderen te vergemakkelijken.
- Om een basis te bieden voor meer complexe neurale differentiatieprotocollen.
Gebruikte methoden
- Gebruik van een gedefinieerd neurologisch onderhoudsmedium.
- Supplementatie met FGF2 en ROCK-remmer.
- Kweek van hPSC's in zowel 2D- als 3D-formaten.
- Bewaking van de differentiatie naar cerebellaire lijnen.
Belangrijkste resultaten
- Succesvolle generatie van celaggregaten met neuroepitheliale structuren.
- Expressie van cerebellaire geassocieerde markers in gedifferentieerde cellen.
- Demonstratie van de eenvoudigheid en effectiviteit van het protocol.
- Mogelijkheid voor verdere toepassing in complexe neurale studies.
Conclusies
- Het protocol biedt een betrouwbare methode voor cerebellaire differentiatie.
- Het kan worden aangepast voor verschillende onderzoekstoepassingen in de neurowetenschappen.
- Toekomstige studies kunnen op deze basis bouwen voor geavanceerd neurologisch onderzoek.
Veelgestelde vragen
Chapters in this video
0:05
Title
0:44
3D "Organoid" Differentiation
4:32
Alternative 2D Differentiation Culture
8:28
Results: 3D Products Exhibit Markers and Structures of Early Neuroepithelium, and 2D Products Exhibit Cerebellar Markers and Functional Neuronal Activity
9:48
Conclusion
