Name: Routine Screening Method voor microdeeltjes in bloedplaatjes transfusies (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-01-31T13:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 49 s
Description: Leer een routine-screeningmethode voor microdeeltjes in bloedplaatjestransfusies met Dynamic Light Scattering. Deze techniek optimaliseert het gebruik van bloedproducten voor hematologie-oncologiepatiënten.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Wij danken de bloeddonors en het personeel op Canadese bloed diensten netwerk centrum voor ontwikkeling toegepast voor collectie en productie van de eenheden van de bloedplaatjes die worden gebruikt in deze studie. Wij erkennen de Canada-Stichting voor innovatie en de Stichting Michael Smith voor gezondheidsonderzoek voor de financiering van de infrastructuur op het UBC centrum voor bloed onderzoek. Financiering voor de publicatie werd verzorgd door LightIntegra Technology Inc., fabrikant van ThromboLUX.

Het volgende protocol is uitgevoerd met inachtneming van alle Canadese bloed Services (CBS) richtsnoeren. Vrijwilligers gaf toestemming dat hun donaties kunnen worden gebruikt voor het verrichten van deze studies. Bloedplaatjes concentraten opgesteld volgens CBS operationele standaardprocedures. Alle prestatie-en functietesten hier beschreven werd uitgevoerd op het centrum voor bloed onderzoek aan de University of British Columbia, Vancouver, Canada met institutionele Research Ethics Board goedkeuring.
1. kwaliteit controle Check
<ol><li>Een kwaliteitscontrole controle ten minste eenmaal per dag om te controleren of de goede werking van het systeem DLS testen uitvoeren. Het meten van de geleverde controle kralen (50 nm radius) na de instructies van de fabrikant voor gebruik.</li>
	<li>De flacon besturingselement ophalen uit koude opslag en laat 15 minuten opwarmen tot kamertemperatuur. De kralen moeten equilibreer aan kamertemperatuur vóór gebruik.</li>
	<li>De DLS-systeem inschakelen voordat het monster voorbereid, zodat de warme periode 15 min-laser tegen de tijd dat het eerste monster klaar voor het testen is is voltooid.</li>
	<li>Zodra de console heeft opgestart, volg de instructies op het scherm van de aanraking aan te melden en selecteer de optie System Test voor het meten van de controlemonster.</li>
	<li>Vortex Meng de flacon voor 10 s om een representatieve steekproef.</li>
	<li>Vul een capillair met de kralen van de controle met behulp van een 100 µL vast volume Pipet, pipette uiteinde en capillaire van de testkit.</li>
	<li>Volg de instructies op het scherm van de DLS-systeem wanneer de test is voltooid. Opmerking: De controle kraal testresultaten worden automatisch vergeleken met de gegevens in het besturingselement kraal barcode label en een PASS of FAIL kennisgeving alsook voorbeeldgegevens worden weergegeven op het scherm DLS systeem aan het eind van de test.</li>
</ol>2. het verkrijgen van een steekproef uit een concentraat van de bloedplaatjes
Opmerking: Deze stappen beschrijven het proces voor niet-invasieve bemonstering van de transfusie met bloedplaatjes in de DLS testen capillair voor routinematige bloedplaatjes voorraadbeheer. Een overzicht is weergegeven in Figuur 1. Accessoires nodig: tube sealer, handmatige buis stripper, schaar en splash schild.
<ol><li>Verwijder de bloedplaatjes concentraat uit de onbeproefd inventaris.</li>
	<li>Verkrijgen van het monster van het product van de bloedplaatjes hetzij uit een zakje ongebruikte bemonstering (gaat u verder met stap 2.3) of een buis-segment (Ga verder met stap 2.4 indien leeg of stap 2.5 als niet leeg). Als u wilt verbreken het zakje buizen of slangen segment gebruiken een buis sealer. Volg de instructies van de fabrikant om de buis sealer. Kort, klem de buis te worden verzegeld in een exacte positie tussen twee verwarmde kaken. Druk de gesmolten buizen samen in een handbediend apparaat, en koel af onder hoge druk terwijl u de hendel (de duur wordt aangegeven door het groene licht) wat resulteert in een permanente, lekvrije zegel.</li>
	<li>
Bemonstering van een zakje
	<ol>
<li>Meng de inhoud van de bloedplaatjes zak goed door zachte horizontale beweging voor 5 s (vijf keer storten van begin tot eind).</li>
		<li>Open de klem op het zakje. Het zakje is geëvacueerd en vanzelf zal vullen. Het is niet noodzakelijk volledig te vullen het zakje zoals slechts 100 µL monster zal nodig zijn voor het testen van Distributielijsten.</li>
		<li>Het zakje verbreken door de zak door warmte verzegelen de verbinding buizen met een buis sealer. Ga verder met stap 3.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Bemonstering van lege buizen
	<ol>
<li>Verifiëren dat de bloedplaatjes bag leidingen leeg is opgeslagen en het blok van de buis is nog op zijn plaats. Inspecteer visueel of de buis om te controleren dat er niet sprake is van een aanzienlijke hoeveelheid bloedplaatjes concentraat in de buis. Als de slang niet leeg Ga verder met stap 2.5.</li>
		<li>Sluit de stripper buis over de buis als dicht bij de buis blok mogelijk door de handgrepen om de buis tussen de rollen squeeze te comprimeren.</li>
		<li>Hang de zak verticaal en houden de stripper grepen comprimeren.</li>
		<li>Terwijl het houden van de stripteaseuse gesloten, laat u het blok van de buis.</li>
		<li>Trek langzaam de stripper beneden de lege slang om de slang te langzaam vullen achter de stripper. Blijven totdat de hieronder de stripper heeft volledig opgeblazen of totdat de stripper op 1 inch van het einde van de buis ligt.</li>
		<li>Zodra de stopplaats is bereikt met de stripper, gebruik de buis sealer aan hitte verzegelen de buis 1 inch boven de stripper.</li>
		<li>Laat de handgrepen van de stripteaseuse handmatige buis.</li>
		<li>Heat seal weer 1 tot 2 inch boven het vorige zegel om de testen segment te maken.</li>
		<li>Het testen segment afgesneden van de eenheid van de bloedplaatjes. Dit segment zal worden gebruikt voor DLS testen.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Bemonstering van buizen die niet leeg
	<ol>
<li>Hang de zak verticaal en laat de slang blok als in plaats.</li>
		<li>Inspecteer visueel of de buis om te bepalen als er significante effen bosjes. Als effen bosjes bestaan, zegel boven hen zodanig dat ze in de zak kunnen niet worden verwijderd.</li>
		<li>Sluit de stripper buis over de buis als buurt van het gesloten einde van de buis mogelijk.</li>
		<li>Strip van de inhoud van de buis in de zak door het comprimeren van de handgrepen om de buis tussen de rollen en met behoud van de klemkracht, squeeze, wordt de buis stripper langs de buis richting door de zak.</li>
		<li>Verwijderen van de bloedplaatjes tas uit de haak hangen en zachtjes Meng de zak voor 5 s door het kantelen van het van begin tot eind vijfmaal terwijl de stripper gesloten.</li>
		<li>Hang de zak verticaal terwijl de stripper gesloten.</li>
		<li>Trek langzaam de stripper beneden de lege buis, waardoor de slang te langzaam vullen achter de stripper. Blijven totdat de hieronder de stripper heeft volledig opgeblazen of totdat de stripper op 1 inch van het einde van de buis ligt.</li>
		<li>Zodra de stopplaats is bereikt met de stripper, gebruik de buis sealer aan hitte verzegelen de buis 1 inch boven de stripper.</li>
		<li>Laat de stripper.</li>
		<li>Heat seal weer 1 tot 2 inch boven het vorige zegel om de testen segment te maken.</li>
		<li>Afgesneden en werp het laatste gedeelte van de buis.</li>
		<li>Het testen segment afgesneden van de eenheid van de bloedplaatjes. Dit segment zal worden gebruikt voor DLS testen.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. vullen het monster in het capillair testen DLS
<ol><li>Met behulp van een splash schild en de schone, droge schaar, Knip één uiteinde van het zakje buizen of segment testen. Opmerking: Het capillair gebruikt voor DLS testen moet onmiddellijk worden gevuld.</li>
	<li>Vul het capillair met behulp van de bemonsterings-tool (geassembleerde 100 µL vast volume Pipet, pipette uiteinde en capillaire) te trekken van het monster rechtstreeks vanuit het geopende zakje of buis segment in het capillair.</li>
	<li>Het zegel van de onderkant van het gevulde capillaire door zachtjes duwen het gevulde capillaire in het capillair afdichtmiddel tijdens het toepassen van een zachte twist en enige druk tegen de lade.</li>
	<li>Ontkoppel de 100 µL vaste volume pipet en tip van het capillair, ervoor te zorgen het capillair blijft stevig verankerd in het capillair afdichtmiddel.</li>
	<li>Verwijder het capillair uit de capillair Afdichtmiddelen lade, veeg met een zeem isopropyl alcohol en zorgen dat er geen luchtbellen zijn gevangen door zachtjes flicking de onderkant van het capillair.</li>
	<li>Plaats het capillair in het DLS-systeem.</li>
</ol>4. uitvoeren de DLS-test
<ol><li>Selecteer de optie test MP te starten een nieuwe DLS-test voor het meten van de microparticle inhoud van een steekproef van de bloedplaatjes.</li>
	<li>Voer de gegevens van de steekproef (donatie identificatie nummer (ISBT) collectie/productie vervaldatum en Product Code) met behulp van de barcodescanner of handmatig.</li>
	<li>Als geen productcode is beschikbaar waaruit de DLS-systeem kan de vloeistof middellange informatie extraheren, handmatig selecteren van de juiste vloeibaar medium (voor de meeste bloedplaatjes concentraten Selecteer plasma maar voor monsters met bloedplaatjes additief oplossing (BK), voert u de percentage van de resterende plasma). Opmerking: Een kleine afwijking in het percentage van de PAS van de nominale 65% veroorzaakt een kleine fout in de viscositeit (automatisch berekend door het DLS-systeem) die minimaal is van invloed op de berekende MP RADIUS- maar niet % MP.</li>
	<li>Plaats het capillair in het DLS-systeem wanneer geïnstrueerd en start de test.</li>
	<li>Wanneer de test is voltooid, verwijdert u het monster van de capillaire houder en de afzet van de verbruiksartikelen op de juiste manier volgens de richtlijnen van de faciliteit. Verwijder het monster uit de capillaire houder en de afzet van de verbruiksartikelen op de juiste manier volgens de richtlijnen van de faciliteit.</li>
	<li>Label de bloedplaatjes zak met de kleur die overeenkomt met het resultaat, bijvoorbeeld oranje voor niet-geactiveerde (homogeen) met % MP gelijk zijn aan of minder dan 15% en roze voor geactiveerd (heterogeen) met % MP boven de 15%.</li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56893/56893fig1.jpg"> Figuur 1 : Methode overzicht. Overzicht van de stappen te worden uitgevoerd voor het beheer van de inventaris van de routine bloedplaatjes in een ziekenhuisbloedbank: verkrijgen van een steekproef van een bloedplaatjes concentraat, laden van het monster in het capillair voor DLS meting, uitvoeren van de DLS testen om te identificeren microdeeltjes en met behulp van de gerapporteerde microparticle inhoud te identificeren van geactiveerde bloedplaatjes. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56893/56893fig1large.jpg" target="_blank">Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.</a>

EMS is de oprichter van LightIntegra Technology Inc., een medisch hulpmiddel bedrijf het ThromboLUX systeem voor microparticle en testen van de kwaliteit van de bloedplaatjes te ontwikkelen. Alle andere auteurs zijn werknemers van LightIntegra technologie. Productie en gratis toegang tot dit artikel worden gesponsord door LightIntegra Technology Inc.

Dit protocol beschrijft een dynamische lichtverstrooiing methode voor microparticle screening geoptimaliseerd voor de hoge deeltje concentraties gevonden in biologische monsters zoals bloedplaatjes concentreert. De methode van DLS is inherent gestandaardiseerd voor het nauwkeurig meten van grootte. De relatieve concentratie van deeltjes kan worden omgezet in een absolute concentratie als de concentratie van de bloedplaatjes is bekend en de bloedplaatjes piekoppervlakte wordt gebruikt als de referentie piek19. Als bloedplaatjes concentraties worden meestal verkregen met hematologie analyzers of flow cytometers deze methoden kunnen worden beschouwd als metgezel technologieën naar Distributielijsten.
De functionaliteit van het systeem DLS is verzekerd door het regelmatig uitvoeren van controle kralen. Gedestilleerd water kan worden gemeten om te verifiëren dat de achtergrondgeluiden minimaal is. Verkrijgbare bloedplaatjes normen kunnen worden geanalyseerd als MP-negatieve controles en, na toevoeging van 125 nm RADIUS-kralen, als MP-positieve controles. De concentraties van het biologische assortiment van MP van belang zijn de procedures praktisch en snel uit te voeren als onderdeel van de routine van de bloedbank.
In tegenstelling tot stroom cytometry, is deze methode niet gebaseerd op het vergelijken van de intensiteiten van de verstrooiing van de deeltjes, maar eerder de snelheid van hun Brownse beweging. Dus, exosomes kan ook worden gedetecteerd ondanks hun kleine formaat en afzonderlijk worden gerapporteerd van MP.
Ontworpen als een screening tool, zijn de beperkingen van deze methode gerelateerd aan haar onvermogen om te differentiëren tussen verschillende soorten deeltjes. Er is potentiële ruimte voor verbetering, als extra isolatie stappen worden gebruikt; monsters kunnen worden getest voordat en nadat de specifieke verwijdering van microdeeltjes door antilichaam gekoppeld magnetische kraal vastleggen. Bovendien, kan niet er worden verondersteld dat alle gedetecteerd microdeeltjes zijn cel afgeleid omdat chylomicrons gevormd in hyperlipidemie47,48 en kleine bacteriën of virussen6 zal eveneens worden gerapporteerd in het microparticle bereik. Er bestaan echter andere waarborgen binnen de bloedtoevoer naar het vermijden zeer lipemic of verontreinigde bloedplaatjes in te voeren van de inventaris van de bloedbank van het ziekenhuis.
De keuze van antistollingsmiddel in de steekproef is van invloed op de omvang van de activering van de bloedplaatjes en dus de MP inhoud49. Voor de vergelijkingen van verschillende producten moet deze factor beschouwd. Verder, uitwisseling van plasma met MP gratis schorsing media zoals PAS zal afbreuk doen aan de inhoud van MP en de drempel voor het bepalen van heterogeniteit-als slechts ongeveer eenderde van de oorspronkelijke inhoud van de MP wordt overgelaten binnen de resterende plasma in het concentraat een dienovereenkomstig geeft lagere MP inhoud drempel hetzelfde niveau van de activering van de bloedplaatjes in plasma van 100%. Percentage MP is de MP-inhoud ten opzichte van de bloedplaatjes. Voorheen werd gerapporteerd dat de gemiddelde bloedplaatjes van PAS product lager was, zodat de gemiddelde % MP nog 9,5%19 was. De drempel van de % MP voor PAS bloedplaatjes vergunning in de VS is momenteel ingesteld op 10%.
Terwijl de primaire bron van MP in bloedplaatjes concentraten de donor is, processen die leiden stress aan bloedplaatjes tot zal verhogen de MP afhankelijk van de gevoeligheid van de bloedplaatjes te benadrukken-als bloedplaatjes zijn al sterk geactiveerd, minor stressoren, zoals uitgebreid houdbaarheid, inactivatie van pathogenen, wassen, kan bestraling of vervoer over lange afstanden leiden tot een aanzienlijke toename van de MP-inhoud. Geen van deze stressoren hebben aangetoond dat aanmerkelijke gevolgen hebben voor homogene, niet-geactiveerde bloedplaatjes19. Daarnaast moet aandacht worden besteed aan het potentieel voor veranderingen in de samenstelling van het monster in het capillair als niet getest onmiddellijk na de bereiding (voltooiing van stap 3 van dit protocol).
De focus van dit protocol is op de bepaling van de samenstelling van deeltjes aanwezig in bloedplaatjes transfusies en microdeeltjes gebruiken als biomarkers voor activering van de bloedplaatjes. De bloedplaatjes bloedtransfusies zijn gelabeld als een niet-geactiveerde (oranje) of geactiveerd (roze) gebaseerd op een drempel microparticle percentage van 15%. De drempel van 15% MP voor bloedplaatjes in plasma van 100% werd empirisch bepaald alshet gemiddelde 66-percentiel van meerdere sites .
Het doel van bloedplaatjes voorraadbeheer gebaseerd op routine microparticle screening met DLS is om patiënten zorg en station kosten-efficiëntie te verhogen door te voorkomen dat niet-immuun bloedplaatjes refractoriness. De uitvoering van het systeem van de Distributielijsten voor screening van bloedplaatjes zakken zal kunnen gebruikers niet-geactiveerde bloedplaatjes patiënt populaties meest directe risico voor het ontwikkelen van bloedplaatjes refractoriness.

De belangstelling voor microdeeltjes heeft draaide meestal rond hun betrokkenheid bij cel-cel communicatie en biologische processen. 1 , 2 , 3 meer recentelijk microdeeltjes hebben ook belangstelling als potentiële vroege diagnostische markers van auto-immuunziekten en cardiovasculaire ziekten. 4 , 5 microdeeltjes, ook bekend als extracellulaire blaasjes of exosomes, zijn grote schaal onderzocht door stroom cytometry. Helaas, ondanks pogingen om het standaardiseren van conventionele stroom cytometry protocollen bestaat geen consensus over de optimale protocol moet worden gebruikt. 6 , 7 , 8 , 9 , 10
Hoewel conventionele stroom cytometry specifieke MP subpopulaties karakteriseren kan, gemeld11 het heeft een aantal beperkingen. 11 , 12 , 13 , 14 sommige van deze beperkingen zijn behandeld met behulp van hogere vermogen lasers en detectoren in een zogenaamde "kleine deeltjes optie",15,16 , alsmede detectie op 15 ° - 25 ° naar voren verstrooien hoek en bewerkt schede druk . 17 , 18 niettemin, snel en easy-to-use screeningsmethode waarmee dat kan worden gecombineerd met deze geavanceerde methoden is nog steeds nodig om microdeeltjes als vroege diagnose markeringen gebruiken. Verhoogde concentraties microdeeltjes in ongeveer eenderde van de normale bloed donoren19 worden opgespoord en kunnen wijzen op subklinische voorwaarden. Bijgevolg, hoge microparticle niveaus in donorbloed producten mogelijk niet compatibel met kwetsbare ontvangers. 20
Bij het verstrekken van bloedplaatjes transfusies, bestaat het risico van niet-immune refractoriness - een aandoening waarbij het lichaam van een patiënt verwerpt opeenvolgende transfusies en niet toestaan dat een aanzienlijk deel van de trombocyten te laten circuleren. 21 , 22 niet-immune refractoriness kan resulteren in verspilde transfusies, gezondheidscomplicaties voor patiënten en uitgebreide ziekenhuis blijft. 23 bloedplaatjes transfusies met hoge nummers van microdeeltjes kunnen zijn een bijdragende factor voor de ontwikkeling van niet-immune refractoriness in kwetsbare hematologie-oncologie patiënten. 20 het is mogelijk voor het beheer van de inventaris van de bloedplaatjes volgens de samenstelling van bloedplaatjes transfusies door screening voor microdeeltjes waardoor het risico voor kwetsbare patiënten. Echter de meeste microparticle tests vereisen Isolatievan microdeeltjes van bloedplaatjes5,12 of die anderszins zeer arbeid intensief24,25 en kan daarom niet worden uitgevoerd regelmatig in het ziekenhuis bloedbanken.
De techniek beschreven hier gebruikt dynamische lichtverstrooiing (DLS) - ook bekend als foton correlatie spectroscopie of quasi-elastische verstrooiing van licht. Voor decennia, is Dynamische lichtverstrooiing uitgebreid gebruikt in de farmaceutische industrie te karakteriseren Liposomale drugs formuleringen of emulsies waar deeltje maten zijn in de range van sub micron. 26 , 27 echter hulpmiddelen ontwikkeld voor deze toepassingen zijn niet geoptimaliseerd voor scherm bloedproducten. Een nieuw DLS-systeem werd ontwikkeld om technische beperkingen te overwinnen en Maak dynamische licht verstrooiing nuttig voor screening van bloedplaatjes transfusies. 28
Dynamische lichtverstrooiing metingen worden uitgevoerd door het verlichten van de zwevende deeltjes met laserlicht en analyseren van de variatie van de tijd van de verspreide lichtintensiteit, die een gevolg is van deeltjes in suspensie verplaatsen. Verder is deze methode gebruikt de inverse relatie tussen deeltjesgrootte snelheid en grootte - kleine deeltjes bewegen snel en grote deeltjes langzaam hebben - informatie te verstrekken over de grootte distributies en de relatieve concentraties van de componenten van de steekproef. Met behulp van Distributielijsten, de gemiddelde microparticle kan inhoud en gemiddelde straal van de microparticle component worden gekwantificeerd. Het gehalte aan microdeeltjes in de bloedproduct is uitgedrukt als % MP op basis van het gebied in het gemeten histogram voor deeltjes stralen van 50-550 nm. Terwijl deeltjes met stralen minder dan 50 nm zijn gedetecteerd door DLS en gemeld door het DLS-systeem, ze zijn niet opgenomen in % MP. In plaats van isoleren microdeeltjes van bloedplaatjes, wordt de heterogeniteit van bloedplaatjes transfusies bepaald op basis van de relatieve inhoud van microdeeltjes en bloedplaatjes in een monster. In feite, kan de verhouding van de bloedplaatjes en microparticle pieken worden gebruikt voor het berekenen van de absolute MP concentratie wanneer de bloedplaatjes is bekend. 19
De DLS-systeem biedt zorgverleners met kwalitatieve en kwantitatieve informatie over microdeeltjes gevonden in specimens afgeleid van menselijk bloed of bloedproducten. Het belangrijkste voordeel van de beschreven DLS techniek over alternatieve technieken zoals stroom cytometry, elektronenmicroscopie,29 nanoparticle bijhouden analyse30 of afstembare resistieve pulse sensing31 is de bereiding van de monsters: aliquots van bloedplaatjes concentraten kunnen rechtstreeks worden gemeten zonder de noodzaak om te isoleren MP van bloedplaatjes, monsterverdunning of andere wijzigingen. 9 , 17 bovendien DLS is een methode van de absolute grootte en geen last van het ontbreken van kalibratie kralen met juiste brekingsindex. 14 , 32
Een correlatie tussen de activering van de bloedplaatjes en MP inhoud is eerder aangetoond door microscopie33,20 en kan worden afgeleid uit de toename van de MP inhoud in pathologische condities15,34, 35 , 36 en de omstandigheden in vitro bekend te activeren van de bloedplaatjes. 19 , 37 , 38 echter verdere studies zijn nodig om volledig te begrijpen de relatie van DLS-gemeten microparticle inhoud en bloedplaatjes activering. Op basis van onze huidige kennis geactiveerde bloedplaatjes bevatten hoge aantallen microdeeltjes, ze zijn best gebruikt voor therapeutische behandeling van patiënten39, actief bloeden terwijl hematologie-oncologie patiënten baat bij het niet-geactiveerde hebben bloedplaatjes met geen of lage niveaus van microdeeltjes20. Er werd onlangs gemeld dat in vitro reactievermogen van trombocyten van de donor niet aanzienlijk het herstel en het voortbestaan van deze bloedplaatjes in één transfusies aan stabiele, meestal niet-bloeden hematologie-oncologie patiënten40 beïnvloeden deed . Uit deze vaststelling, kan geconcludeerd worden dat de bloedplaatjes activering geïdentificeerd door hoge MP inhoud ook geen belangrijke rol in de profylactische behandeling van patiënten speelt. Echter, als gevolg van de smalle selectie van patiënten, deze studie niet ingegaan op de invloed van donor factoren voor complexe patiënten die koorts (uitgesloten uit de studie), niet stabiel en ontvangen van veel meer dan alleen een transfusie van de bloedplaatjes. De vraag hoe de complexiteit van deze patiënt gevallen kan worden verminderd - die houdt de belofte om de refractoriness - blijft onbeantwoord.
Microdeeltjes zijn vroege markers van ontsteking41,42,43,44 en bloedplaatjes activering45 en dus in vele normale donoren zijn aangetroffen. 19 daarom, geactiveerde bloedplaatjes en microdeeltjes aanwezig zijn in de schenkingen van de bloedplaatjes. Het is redelijk te veronderstellen dat patiënten met koorts, dat wil zeggen, een volledig geactiveerde ingeboren immune systeem, de extra uitdaging van een transfusie van geactiveerde bloedplaatjes niet tolereren. Maar zijn studies nodig om te bewijzen deze hypothese. Microparticle screening kan verlichten van de huidige onzekerheid over de inhoud van bloedplaatjes transfusies en verminderen de complexiteit van de behandeling van de patiënt.
De verhouding van geactiveerde aan niet-geactiveerde bloedplaatjes in een ziekenhuisbloedbank is afhankelijk van vooral de bevolking van de donor en in veel mindere mate op transport, bestraling, inactivatie van pathogenen en andere processen die kunnen verhogen de activering van de bloedplaatjes in concentraten. 19 in gegevens van grote ziekenhuisbloedbanken in de Verenigde Staten, is gebleken dat de gemiddelde samenstelling van de inventaris van de bloedplaatjes is 49% geactiveerd en 51% niet-geactiveerde (bereik voor geactiveerde bloedplaatjes: 38-62%, persoonlijke communicatie). Als bloed product providers of ziekenhuisbloedbanken wilt weten hoeveel geactiveerd en niet-geactiveerde bloedplaatjes concentraten ze produceren of ontvangen, en willen hun voorraad beheren op basis van bloedplaatjes activering als aangegeven door microparticle inhoud, dit protocol zou voor hen aangewezen.
Op basis van de samenstelling van de bloedplaatjes een ziekenhuisbloedbank kundig voor directe niet-geactiveerde, homogene bloedplaatjes voor profylactische gebruik en geactiveerd zitten zal, heterogene bloedplaatjes voor therapeutisch gebruik. Bloedplaatjes screening kan ziekenhuizen te maximaliseren van het gebruik van de beschikbare voorraad die verbetert patiëntenzorg en vermindert kosten. Dit protocol is bedoeld voor laboratoriumpersoneel die vertrouwd met elementaire behandeling en manipulatie van bloedproducten zijn.
Hier gepresenteerd is een screeningsmethode voor microdeeltjes in bloedplaatjes transfusies die routinematig toegepast kunnen worden om het ziekenhuis bloedbank voorraad beheren waar het product op basis van microparticle inhoud selecteren wenselijk is. Het doel van dit protocol is te schetsen van de uitvoering en evaluatie van Distributielijsten voor screening van gedoneerde bloedplaatjes. De beschreven protocol adressen de veelgestelde vragen van niet-invasieve toegang tot monsters, integratie van het testen in de bloedbank werk flow, en prestatie-eigenschappen.

<table><tbody><tr><td>ThromboLUX-M</td><td>LightIntegra Technology Inc.&nbsp;</td><td>LPN120</td><td>DLS System</td></tr><tr><td>ThromboSight Software</td><td>LightIntegra Technology Inc.&nbsp;</td><td>LPN124</td><td>DLS-analysesoftware</td></tr><tr><td>Capillaries</td><td>LightIntegra Technology Inc. (included in test kit, vendor Optinova MLE)</td><td>LPN065</td><td>Aangepaste geëxtrudeerde niet-activerende, niet-bireflecterende kunststof buis, geïnspecteerd en bestraald</td></tr><tr><td>MiniPet&nbsp;</td><td>LightIntegra Technology Inc. (included in test kit, vendor TriContinent Scientific)</td><td>LPN082</td><td>100 &micro;L vast volume pipet voor bemonstering&nbsp;&nbsp;</td></tr><tr><td>MicroFlex 1-200 &micro;L Pipette tips</td><td>LightIntegra Technology Inc. (included in test kit, vendor ESBE Scientific)</td><td>LPN080</td><td>Pipettips voor bemonstering</td></tr><tr><td>Critoseal&nbsp;</td><td>LightIntegra Technology Inc. (included in test kit, vendor Fisher Scientific)</td><td>LPN075</td><td>Capillairbuisdichting</td></tr><tr><td>Dukal Alcohol Pad of equivalent</td><td>LightIntegra Technology Inc. (included in test kit, vendor Dukal Corp.)</td><td>LPN085</td><td>Isopropylpad (verzadigd met 70% isopropylalcohol)</td></tr><tr><td>Control beads, 50 nm radius</td><td>LightIntegra Technology Inc. (included in test kit, vendor PolySciences Inc.)</td><td>LPN128</td><td>Controlebeadjes</td></tr><tr><td>Microbead NIST Traceable Particle Size Standard, 3 &micro;m</td><td>PolySciences Inc.</td><td>64060</td><td>Standaard microbeadjes: 1,5 &micro;m radius Polystyreenkralen; bereik 1,43-1,58 &micro;m; 1% vaste stof suspensies in gedeïoniseerd water</td></tr><tr><td>Nanobead NIST Traceable Particle Size Standard, 250 nm</td><td>PolySciences Inc.</td><td>64014-15</td><td>Standaard nanobeadjes: 125 nm radius Polystyreenkralen; bereik 120 - 130 nm; 1% vaste stof suspensies in gedeïoniseerd water</td></tr><tr><td>Genesis BPS RapidSeal II of equivalent</td><td>Genesis BPS</td><td>428-SE640</td><td>Buisdichting</td></tr><tr><td>Fresenius Kabi Tube Stripper of equivalent</td><td>Fresenius Kabi</td><td>6R4452</td><td>Handmatige buisstripper</td></tr><tr><td>Biohazard Shield - Cell Counter of equivalent</td><td>CardinalHealth</td><td>S1389-75</td><td>Spatbescherming</td></tr><tr><td>Corning LSE Vortex Mixer of equivalent</td><td>Corning Incorporated</td><td>6775</td><td>Vortex mixer</td></tr><tr><td>FACSCanto II Flow cytometer&nbsp; met FACSDiva software versie 6.1.3 of equivalent</td><td>BD Biosciences</td><td>338960</td><td>Flow cytometer</td></tr></tbody></table>

routine screening method voor microdeeltjes in bloedplaatjes transfusies

Routine Screening Method for Microparticles in Platelet Transfusions

Bloedplaatjes voorraadbeheer gebaseerd op screening microparticle inhoud in bloedplaatjes concentraten is een nieuw initiatief van de verbetering van de kwaliteit voor ziekenhuisbloedbanken. Cellen fragment uit microdeeltjes (MP) wanneer ze worden benadrukt. Bloed en bloedbestanddelen kunnen cellulaire fragmenten uit een aantal cellen, met name uit geactiveerde bloedplaatjes bevatten. Bij het uitvoeren van hun rollen als aangeboren immuun cellen en grote spelers in de stolling en hemostase, trombocyten vorm wijzigen en microdeeltjes genereren. Met Dynamische lichtverstrooiing (DLS)-gebaseerd microparticle detectie, is het mogelijk geactiveerd (hoog microparticle) onderscheiden van niet-geactiveerde (lage microparticle) bloedplaatjes in transfusies en optimaliseren van het gebruik van dit schaarse bloedproduct. Eerder onderzoek suggereert dat het verstrekken van niet-geactiveerde bloedplaatjes voor profylactische gebruik in hematologie-oncologie patiënten kan verminderen hun risico om vuurvaste en verbetering van patiëntenzorg. Het doel van deze screeningmethode is routinematig onderscheiden vanuit niet-geactiveerde bloedplaatjes geactiveerd. De hier beschreven methode beschrijft de stappen te worden uitgevoerd voor het beheer van de inventaris van de routine bloedplaatjes in een ziekenhuisbloedbank: te verkrijgen van een steekproef van een transfusie van bloedplaatjes, laden van het monster in het capillair voor DLS meting, uitvoeren van de DLS testen identificeren microdeeltjes en de inhoud van de gerapporteerde microparticle gebruikt voor het identificeren van geactiveerde bloedplaatjes.

Gemiddelde bereidingstijd De bloedplaatjes screening proces met behulp van een systeem van DLS is samengevat in Figuur 1. Bloedplaatjes zijn getest met de DLS-systeem op het moment van ontvangst van de leverancier van het bloed. Zoals aangegeven in tabel 1 , is de gemiddelde voorbereidingstijd voor opgeleide gebruikers 2 min 23 s terwijl de clean-up en na de test werktijden zijn 14 s en 46 s, respectievelijk. In totaal duurt de gemiddelde gebruiker 3 min en 23 s van hands-on tijd per test.
<table fo:keep-together.within-page="1"><tbody>
<tr>
<td>Activiteit</td>
			<td>Actieve tijd</td>
			<td>Wandeling-away beproeving tijd</td>
			<td>TOTAAL</td>
		</tr>
<tr>
<td>Bereiden DLS systeem</td>
			<td>14 s</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td>Monteren van bemonstering instrument</td>
			<td>28 s</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td>Verkrijgen van segment</td>
			<td>52 s</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td>Vul capillair en de test te starten</td>
			<td>49 s</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td></td>
			<td>5 min</td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td>Opruimen</td>
			<td>14 s</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td>Tag en inventaris bloedplaatjes tas</td>
			<td>46 s</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td>Totale tijd die nodig is per monster</td>
			<td>3 min 23 s</td>
			<td>5 min</td>
			<td>8 min 23 s</td>
		</tr>
</tbody></table>Tabel 1: actieve testen tijd uitsplitsing. De test zelf is een test lopen weg met een gemiddelde duur van 5 min. De gemiddelde gebruiker neemt 3 min 23 s tot de DLS systeem voorbereiden op een test, verkrijgen een steekproef volgens dit protocol en label van de zak van de bloedplaatjes.
Precisie De precisie van de DLS-systeem werd beoordeeld op drie niveaus microparticle, 0-7%, 12-25% en 28-75%. Het klinisch relevante bereik van % MP is 3-75%. Twee operators getest lage, gemiddelde en hoge controlemonsters 16 operationele dagenlang op twee DLS systemen parallel. Monsters werden getest in tweevoud, maar in willekeurige volgorde op elke test dag.
Tabel 2 geeft een overzicht van de binnen-apparaat precisie van de metingen van de Distributielijsten voor procent microdeeltjes (% MP) ten opzichte van de bloedplaatjes.
<table fo:keep-together.within-page="1"><tbody>
<tr>
<td></td>
			<td colspan="3">Microparticle inhoud</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td>Lage</td>
			<td>Medium</td>
			<td>Hoge</td>
		</tr>
<tr>
<td>Bedoel % MP (%)</td>
			<td>4.4</td>
			<td>19,5</td>
			<td>53.8</td>
		</tr>
<tr>
<td>Standaardafwijking (%)</td>
			<td>1.8</td>
			<td>2.6</td>
			<td>5.8</td>
		</tr>
<tr>
<td>CV (%)</td>
			<td>40,4</td>
			<td>13.2</td>
			<td>10.6</td>
		</tr>
</tbody></table>Tabel 2: binnen-apparaat precisie van procent microdeeltjes (% MP). Bij zeer lage microparticle inhoud kleine bloedplaatjes kunnen bijdragen aan % verhoogd MP resulterend in variabiliteit voor lage microparticle inhoud monsters.
Tabel 3 toont de binnen-apparaat precisie van de metingen van de Distributielijsten voor gemiddelde microparticle radius tussen 50-550 nm.
<table fo:keep-together.within-page="1"><tbody>
<tr>
<td></td>
			<td colspan="3">Microparticle inhoud</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td>Lage</td>
			<td>Medium</td>
			<td>Hoge</td>
		</tr>
<tr>
<td>Bedoel Radius (nm)</td>
			<td>331</td>
			<td>161</td>
			<td>188</td>
		</tr>
<tr>
<td>Standaardafwijking (mm)</td>
			<td>133</td>
			<td>41</td>
			<td>25</td>
		</tr>
<tr>
<td>CV (%)</td>
			<td>40.1</td>
			<td>25.2</td>
			<td>13,5</td>
		</tr>
</tbody></table>Tabel 3: binnen-apparaat precisie van microparticle RADIUS-. Bij zeer lage microparticle inhoud kleine bloedplaatjes kunnen bijdragen aan procent microdeeltjes (% MP) wat resulteert in verhoogde variabiliteit voor lage microparticle inhoud monsters.
Tabel 4 toont de reproduceerbaarheid van de metingen van de Distributielijsten voor procent microdeeltjes (% MP).
<table fo:keep-together.within-page="1"><tbody>
<tr>
<td></td>
			<td colspan="3">Microparticle inhoud</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td>Lage</td>
			<td>Medium</td>
			<td>Hoge</td>
		</tr>
<tr>
<td>Bedoel % MP (%)</td>
			<td>4.4</td>
			<td>29.2</td>
			<td>53,6</td>
		</tr>
<tr>
<td>Reproduceerbaarheid (%)</td>
			<td>1.5</td>
			<td>2.3</td>
			<td>5</td>
		</tr>
<tr>
<td>CV (%)</td>
			<td>35</td>
			<td>11,8</td>
			<td>9.4</td>
		</tr>
</tbody></table>Tabel 4: Reproduceerbaarheid van de metingen van de dynamische licht verstrooiing (DLS) &AMP; voor procent microdeeltjes (% MP).
Lineariteit Figuur 2 laat zien dat DLS resultaten zijn lineaire, past dat wil zeggen, een rechte lijn met betrekking tot de toegewezen waarden van de monsters. Zeven monsters werden voorbereid met verschillende microparticle inhoud. Monsters met een hoog (MP7) en lage (MP1) microparticle inhoud en bijpassende bloedplaatjes concentratie waren voorbereid en gemixt in verschillende verhoudingen maken tussenliggende monsters (MPx). Monsters werden getest met stroom cytometry zoals eerder beschreven19 en Distributielijsten en % MP resultaten elke concentratie werden uitgezet als input en output. De determinatiecoëfficiënt bleek te zijn van 0.985. Voorbeelden van DLS histogrammen voor lage en hoge microparticle inhoud worden weergegeven in Figuur 3A. De DLS resultaten werden bevestigd door stroom cytometry (Figuur 3B).
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56893/56893fig2.jpg"> Figuur 2 : Vergelijking van stroom cytometry en DLS resultaten. Lineaire relatie tussen % MP bepaald door Stroom Cytometry (input) en DLS (uitgang), de oorspronkelijke DLS-gegevens uit de twee monsters gekenmerkt door de open symbool ○ zijn afgebeeld in Figuur 3. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56893/56893fig2large.jpg" target="_blank">Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56893/56893fig3.jpg"> Figuur 3 : Microparticle inhoud om te differentiëren tussen geactiveerd en niet-geactiveerde bloedplaatjes. (A) DLS resultaten van MP inhoud in geactiveerde bloedplaatjes (gestippelde lijn) was 57% in vergelijking met 4% in niet-geactiveerde bloedplaatjes (vaste lijn). Tests werden uitgevoerd bij een meting temperatuur van 37 ° C, plasma viscositeit instelling voor 1.06 x10-3 Pa·s en totale intensiteitinstellingen tussen 200-600 kHz. (B) stroom cytometry resultaten (zoals eerder beschreven19) van de zelfde monsters zoals in (A); in de voorwaartse scatter histogrammen P1 en P2 vertegenwoordigen de MP en bloedplaatjes poorten, respectievelijk; voor geactiveerde bloedplaatjes vielen (links) 76% van de evenementen de MP-poort in vergelijking met 6% voor niet-geactiveerde bloedplaatjes (rechts). De lineaire regressielijn suggereert een constante relatieve bijdrage van achtergrondgeluiden % MP door stroom cytometry leidt tot de consequent betere resultaten. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56893/56893fig3large.jpg" target="_blank">Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.</a>
Specificiteit/storing De International Organization for Standardization (ISO) definieert analytische specificiteit als de mogelijkheid van een meting procedure om te sporen of alleen de te meten grootheid meten terwijl er andere hoeveelheden aanwezig in het monster. De analytische specificiteit van microparticle screening kan worden beïnvloed door de rode bloedcellen (RBC). DLS meet MP inhoud ten opzichte van de inhoud van de bloedplaatjes. RBC kan interfereren omdat de bijdrage van de verstrooiing van RBC is opgenomen in de bijdrage van de verstrooiing van Trombocyten, vermindering van de relatieve bijdrage van MP. Regelgevende grenswaarden voor de toegestane inhoud van de RBC in bloedproducten bestaan; een conservatieve conversie van de drempel aanbevolen door AABB voor toegestane RBC concentratie in bloedplaatjes concentraten-2 mL RBC verpakt in één eenheid van trombocyten-resulteerde in 8.0 x1010 cellen/L (veronderstellingen: RBC volume is 8,5 x10-14L, Hematocriet van verpakte RBC is 68%, hoeveelheid bloedplaatjes eenheid is 200 mL). De gerapporteerde residuele RBC concentraties in verschillende producten zijn ruim onder deze drempel46.
Drie verschillende donoren gedoneerd bloedplaatjes en rode bloedcellen (RBC) op twee verschillende dagen, in aanmerking komen, voor drie onafhankelijke experimenten. De oorspronkelijke inhoud van de RBC in de bloedplaatjes concentraten (referentiemonster) was 0,05 - 0,15 x109 cellen/L zoals bepaald met een hemocytometer. Vijf extra monsters werden gemaakt door stekelige-in bekende hoeveelheden van RBC in aliquots van het concentraat bloedplaatjes; RBC streefwaarden in deze monsters waren 1.0, 5.0, 10, 40 en 80 x109 cellen/L.
De drempel van de interferentie van rode bloedcellen was ongeveer 1.0 x1010 cellen/L (Figuur 4), die ook gecorreleerd met het niveau waarop de aanwezigheid van rode bloedcellen visueel duidelijk (Figuur 5 was). Boven dit niveau was % MP onderschat wat betekent dat in visueel monsters-die rood bevatten RBC in plaats van hemoglobine-de gerapporteerde microparticle inhoud zal te laag zijn.
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56893/56893fig4.jpg"> Figuur 4 : Lineaire relatie tussen % MP (DLS) en RBC concentratie (cellen/L). Toenemende RBC concentraties van 0,1 x109, 1.0 x109, 5.0 x109, 1.0 x1010, 4.0 x1010, en 8.0 x1010 cellen/L (van links naar rechts) uit 3 onafhankelijke experimenten (○ experiment 1 ● experiment 2, □ experiment 3, lineaire regressielijnen worden weergegeven voor elk experiment). Boven 1.0 x1010 RBC/L leidt tot een onderwaardering van de % MP. Visuele weergave van RBC met monsters is afgebeeld in Figuur 5. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56893/56893fig4large.jpg" target="_blank">Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56893/56893fig5.jpg"> Figuur 5 : Visuele weergave van RBC met monsters. Roodheid van bloedplaatjes monsters met RBC concentraties van 0,1 x109, 1.0 x109, 5.0 x109, 1.0 x1010, 4.0 x1010, en 8.0 x1010 cellen/L van links naar rechts. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56893/56893fig5large.jpg" target="_blank">Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.</a>
Nauwkeurigheid Nauwkeurigheid is gedefinieerd als het verschil tussen een interne meetresultaat en een waarde van de werkelijke hoeveelheid toegewezen aan het monster. Deze meetfout bevat een systematische component geschat door meting bias en een willekeurige component geschat door een standaarddeviatie. De nauwkeurigheid van een meetresultaat is dus een combinatie van juistheid en precisie.
Een kraal standaard werd gebruikt voor het bepalen van de nauwkeurigheid van de test van Distributielijsten. Nauwkeurigheid werd geëvalueerd in twee concentraties binnen het klinisch relevante bereik van de bepaling van MP 3-75%. Referentie kraal mengsels werden gebruikt voor het bereiden van monsters van bekende concentraties omdat referentie kralen een bekende grootte en concentratie hebben. Bijgevolg kunnen verwijzing kralen gemengd worden om te verkrijgen van de monsters met de gewenste deeltjesgrootte en concentraties.
Standaard polystyreen kralen met een 125 nm straal werden gebruikt voor het vertegenwoordigen van microdeeltjes en kralen met 1,5 µm straal werden gebruikt voor het vertegenwoordigen van de bloedplaatjes. De nauwkeurigheid van de test microparticle evalueerden met kraal mengsels van ongeveer 20% en 50% MP inhoud. De nauwkeurigheid van de kromtestralen gemeten deeltje werd vergeleken met de straal van het deeltje gedocumenteerd op de certificaten van de analyse van de parels van de verwijzing zoals aangegeven in tabel 5.
<table fo:keep-together.within-page="1"><tbody>
<tr>
<td></td>
			<td colspan="3">125 nm kralen</td>
			<td colspan="3">1,5 µm kralen</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="2"></td>
			<td>Certificaat van analyse</td>
			<td colspan="2"></td>
			<td>Certificaat van analyse</td>
			<td colspan="2"></td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td>20% MP</td>
			<td>50% MP</td>
			<td></td>
			<td>20% MP</td>
			<td>50% MP</td>
		</tr>
<tr>
<td>Bedoel Radius</td>
			<td>122.0</td>
			<td>113.8</td>
			<td>124,4</td>
			<td>1.5</td>
			<td>1.6</td>
			<td>1,60</td>
		</tr>
<tr>
<td>Std-Dev</td>
			<td>4.5</td>
			<td>2.83</td>
			<td>3.6</td>
			<td>0,035</td>
			<td>0,06</td>
			<td>0,07</td>
		</tr>
<tr>
<td>CV</td>
			<td>3,60%</td>
			<td>2,48%</td>
			<td>2,89%</td>
			<td>2,20%</td>
			<td>3,74%</td>
			<td>4,05%</td>
		</tr>
<tr>
<td>Nauwkeurigheid</td>
			<td></td>
			<td>6,70%</td>
			<td>2,00%</td>
			<td></td>
			<td>6,50%</td>
			<td>6,30%</td>
		</tr>
</tbody></table>Tabel 5: nauwkeurigheid van de metingen van de dynamische licht verstrooiing (DLS) &AMP;. Grootte vergelijking voor Distributielijsten resulteert tegen certificaat van analyse voor kralen met 125 nm straal en 1,5 µm straal in mengsels.

Bloedplaatjes voorraadbeheer gebaseerd op screening microparticle inhoud in bloedplaatjes concentraten is een nieuw initiatief van de verbetering van de kwaliteit in ziekenhuisbloedbanken. Het doel is om te onderscheiden van niet-geactiveerde bloedplaatjes aan optimaal gebruik van de bloedplaatjes geactiveerd. Verstrekken van niet-geactiveerde bloedplaatjes aan hematologie-oncologie patiënten kan hun hoge risico tot vuurvaste.

Routine Screening Method voor microdeeltjes in bloedplaatjes transfusies

Platelet inventory management based on screening microparticle content in platelet concentrates is a new quality improvement initiative for hospital blood ...

Het algemene doel van deze methode is om trombocytentransfusies te karakteriseren door middel van routinetesten die kunnen worden uitgevoerd in donorcentra of ziekenhuisbloedbanken om het gebruik van deze bloedproducten voor bloedende of bloedkankerpatiënten te optimaliseren. Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van belangrijke vragen in de transfusiegeneeskunde, zoals of een trombocytentransfusie geactiveerde of niet-geactiveerde trombocyten bevat. Het grote voordeel van deze techniek is dat het een snelle en nauwkeurige screening biedt voor het microdeeltjesgehalte als een bewezen indicator van trombocytenactivatie.Personen die nieuw zijn met deze methode, zullen moeten leren hoe ze monsters moeten nemen van segmenten van slangen uit zakjes, omdat dit momenteel niet routinematig wordt gedaan. We hadden voor het eerst het idee voor deze methode toen we zagen dat trombocyten van verschillende donoren een hoge variabiliteit in de activeringsstatus hadden en dit leek een impact te hebben op de patiënt. Er zijn drie methoden om een monster te verkrijgen van een trombocytenconcentraat.Om te bemonsteren vanuit een zakje, meng de inhoud van het trombocytenzakje goed door middel van zachte horizontale beweging gedurende vijf seconden, kantelen van het ene uiteinde naar het andere, vijf keer. Open de klem naar de zak, de zak wordt leeggepompt en zal zichzelf vullen. Het is niet nodig om de zak volledig te vullen, omdat er slechts een monster van 100 microliter nodig is voor dynamisch lichtverstrooiing of DLS-testen.Ontkoppel de zak van de zak door de verbindingsslang met een slangverbinding af te dicht. Bij het bemonsteren van lege slangen, controleer of de slang van het trombocytenzakje leeg is opgeslagen en dat de slangblok nog op zijn plaats zit. Inspecteer de slang visueel om te controleren of er geen trombocytenconcentraat in de slang zit.Sluit de slangstripper op de slang, zo dicht mogelijk bij de slangblok, door de handvatten te comprimeren om de slang tussen de rollen te knijpen terwijl de stripper gesloten blijft, laat de slangblok los. Trek de stripper langzaam door de lege slang, waardoor de slang langzaam achter de stripper kan vullen. Ga door totdat het gedeelte onder de stripper volledig is opgeblazen of totdat de stripper binnen een centimeter van het uiteinde van de slang is.Het is van cruciaal belang om de handvatten van de slangstripper stevig te comprimeren en langzaam de stripper door de slang te trekken. Zodra het stoppunt met de stripper is bereikt, gebruik de slangverbinding om de slang een centimeter boven de stripper te verhitten. Laat nu de handvatten van de handmatige slangstripper los.Verhit opnieuw, één tot twee centimeter boven de vorige verbinding om het testsegment te creëren. Snijd vervolgens het testsegment van de trombocyteneenheid. Dit segment zal worden gebruikt voor DLS-testen.Bij het bemonsteren van slangen die niet leeg zijn, hang de zak verticaal en laat de slangblok los, indien aanwezig. Inspecteer de slang visueel om te bepalen of er significante vaste klonten zijn. Als er vaste klonten zijn, sluit boven deze, zodat ze niet in de zak kunnen worden verwijderd.Sluit vervolgens de slangstripper op de slang, zo dicht mogelijk bij het verzegelde uiteinde van de slang. Strip de inhoud van de slang in de zak, door de handvatten te knijpen om de slang tussen de rollen te knijpen. Terwijl u de klemkracht handhaaft, beweegt u de slangstripper langs de slang naar de zak.Verwijder de trombocytenzak van de hangende haak en meng de zak voorzichtig gedurende vijf seconden, door hem vijf keer van het ene uiteinde naar het andere te kantelen, terwijl de stripper gesloten blijft. Hang de zak verticaal, terwijl de stripper gesloten blijft. Trek de stripper langzaam door de lege slang, waardoor de slang langzaam achter de stripper kan vullen.Ga door totdat het gedeelte onder de stripper volledig is opgeblazen, of totdat de stripper binnen een centimeter van het uiteinde van de slang is. Zodra het stoppunt met de stripper is bereikt, gebruik de slangverbinding om de slang te verhitten, een centimeter boven de stripper. Na het loslaten van de stripper, verhit opnieuw één tot twee centimeter boven de vorige verbinding om het testsegment te creëren.Snijd het laatste gedeelte van de slang af en gooi het weg. Snijd vervolgens het testsegment van de trombocyteneenheid. Dit segment zal worden gebruikt voor DLS-testen.Gebruik een spatscherm en schone, droge schaar om een einde van de zakslang of het testsegment af te snijden. Vul onmiddellijk de capillair door het bemonsteringsgereedschap te gebruiken om het monster rechtstreeks uit de geopende zak of het slangsegment in de capillair te trekken. Sluit de bodem van de gevulde capillair door deze voorzichtig in de capillairbuisverbinding te duwen, terwijl u een zachte draai en wat druk tegen de lade aanbrengt.Ontkoppel vervolgens de 100 microliter vaste volumepipet en punt van de capillair, en zorg ervoor dat de capillair stevig ingebed blijft in de capillairbuisverbinding. Verwijder de capillair uit de capillairbuisverbindinglade en veeg af met een isopropylalcoholpad. Zorg ervoor dat er geen luchtbellen vastzitten door voorzichtig te schudden met de bodem van de capillair.Plaats ten slotte de capillair in het DLS-systeem. Om te beginnen, start de console, volg de instructies op het aanraakscherm om in te loggen en selecteer de microdeeltjes of MP-testoptie om een nieuwe DLS-test te starten voor het meten van het microdeeltjesgehalte van een trombocytenmonster. Voer de monsterinformatie in met een streepjescodescanner of voer deze handmatig in.Plaats de capillair in het DLS-systeem wanneer dit wordt aangegeven en start de test. Wanneer de test is voltooid, verwijdert u het monster uit de capillairhouder en gooit u de verbruiksartikelen op de juiste manier weg volgens de richtlijnen van de faciliteit. Markeer de trombocytenzak met de kleur die overeenkomt met het resultaat.Bijvoorbeeld, oranje voor niet-geactiveerd en roze voor geactiveerd. Dynamische lichtverstrooiing meet de snelheid van deeltjes die in suspensie bewegen door bruine beweging. Op basis van de verschillende snelheden bewegen kleine deeltjes snel en grote deeltjes langzaam.Deze technologie bepaalt de grootteverdeling van een monster. DLS bepaalt dat deze transfusie niet-geactiveerde trombocyten

routine-screening-method-for-microparticles-in-platelet-transfusions

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Deze werkwijze onderzoekt de bloedplaatjes-gemedieerde samenklontering...

A Simple Protocol voor bloedplaatjes-gemedieerde Klontvormende van<em&gt; Plasmodium falciparum</em&gt;-Geïnfecteerde erytrocyten in een Slechte Setting Resource

This video demonstrates a technique for the differentiation of megakaryocytes and the formation of platelets. Hematopoietic stem progenitor cells — isolated from human umbilical cord blood — differentiate into mature megakaryocytes in the presence of thrombopoietin. The mature megakaryocytes produce cytoplasmic extensions termed proplatelets, which give rise to individual platelets.

An In Vitro Method for the Differentiation of Megakaryocytes and Platelet Formation

Trombocyttransfusie en hemostase werden gemodelleerd met behulp van bloedreconstitutie en microfluïdische stroomkamers om de functie van bloedbanktrombocyt te onderzoeken. De gegevens tonen de gevolgen van trombocyt-opslageffect op hemostase, in vitro aan.

Microfluïdische Flow Chambers behulp Gereconstitueerde Blood voor Model hemostase en bloedplaatjestransfusie<em&gt; In Vitro</em

Dit artikel beschrijft een experimenteel model van hemostase die gelijktijdig meet bloedplaatjesfunctie en coagulatie. Bloedplaatjes en fibrine fluorescentie wordt gemeten in real-time en bloedplaatjesadhesie rate, coagulatie snelheid, en het begin van coagulatie bepaald. Het model wordt gebruikt voor bloedplaatjes stollingsbevorderende eigenschappen bepalen onder stroom concentraten voor transfusie.

Een microfluïdische Flow Kamer Model voor trombocytentransfusie en hemostase Maatregelen afzetting van trombocyten en fibrine Formation in real-time

In deze paper beschrijven we een methode om te beoordelen endothelial von Willebrand factor release en de daaropvolgende bloedplaatjes vangen onder vloeistof shear stress in reactie op inflammatoire stimuli met behulp van een in vitro kamer-stroomsysteem.

Onderzoeken van von Willebrand Factor pathofysiologie met behulp van een Flow kamer Model van von Willebrand Factor-bloedplaatjes String vorming

We beschrijven een in-oplossing methode om uniforme shear toe te passen op bloedplaatjes oppervlak receptoren met behulp van Cone-plate viscosimeter. Deze methode kan ook breder worden gebruikt om shear toe te passen op andere cel types en cel-fragmenten en hoeft niet te richten op een specifieke ligand-receptor paar.

Een uniform shear assay voor menselijke bloedplaatjes en cel oppervlakte receptoren via Cone-plate viscosimeter

Hier, muis bloed werd verzameld in de aanwezigheid van een anti-coagulant. De bloedplaatjes werden gezuiverd door iohexol gradiënt medium met behulp van lage snelheid centrifugeren. De bloedplaatjes werden geactiveerd met trombine om te onderzoeken of ze levensvatbaar waren. De kwaliteit van de gezuiverde bloedplaatjes werd geanalyseerd door stromings Cytometry en microscopie.

Zuivering van bloedplaatjes van muis Blood

De vorming van superoxide-anionen is essentieel voor de stimulatie van bloedplaatjes en, indien ontregeld, van cruciaal belang voor trombotische aandoeningen. Hier presenteren we drie protocollen voor de selectieve detectie van superoxide-anionen en de studie van redox-afhankelijke bloedplaatjesregulatie.

Alternatieve methoden voor de detectie van superoxide-anionvorming in bloedplaatjes 

De vorming van procoagulerende bloedplaatjes is gecorreleerd met een verhoogd risico op trombose. Hier wordt een nauwkeurig protocol gepresenteerd voor het isoleren van gewassen bloedplaatjes uit menselijk bloed, bedoeld om de blootstelling aan fosfatidylserine en de afgifte van microvesikels te kwantificeren, die onderscheidende kenmerken zijn van procoagulerende bloedplaatjes.

Karakterisering van procoagulerende bloedplaatjes door meting van de blootstelling aan fosfatidylserine en de afgifte van microblaasjes uit menselijke gezuiverde bloedplaatjes

De bloedplaatjesfunctie onder stroom kan worden beoordeeld en gesimuleerde hemostatische reanimatie kan worden gemodelleerd met behulp van een microfluïdisch apparaat, dat toepassingen heeft in de trauma- en transfusiegeneeskunde.

Microfluïdica bij het beoordelen van de bloedplaatjesfunctie

Meerkleurige flowcytometrie voor bloedplaatjes kan nieuwe subtypes van bloedplaatjes identificeren binnen klassieke subpopulaties van bloedplaatjes, zoals rust-, aggregatoire, procoagulerende en apoptotische bloedplaatjes. Dit maakt het mogelijk om verschillende subpopulatiepatronen te vergelijken die worden geïnduceerd door verschillende bloedplaatjestagonisten. Hier wordt een procedure voor het opstellen van een meerkleurig flowcytometriepaneel in detail beschreven.

Analyse van subpopulaties van bloedplaatjes door middel van meerkleurige flowcytometrie

Leer een routine-screeningmethode voor microdeeltjes in bloedplaatjestransfusies met Dynamic Light Scattering. Deze techniek optimaliseert het gebruik van bloedproducten voor hematologie-oncologiepatiënten.

Routine Screening Method voor microdeeltjes in bloedplaatjes transfusies

Meer video's verkennen