Het Effect van de toepassing van essentiële tijmolie op microbiële laden tijdens het drogen van vlees

Het algemene doel van dit experiment is om te evalueren of essentiële tijmolië, toegepast in dampvorm, kan dienen als effectief conserveermiddel tijdens het vleesdrogingsproces. Deze methode kan helpen om vragen te beantwoorden op het gebied van voedselverwerking en -veiligheid, zoals hoe natuurlijke conserveermiddelen effectief kunnen worden toegepast in plaats van synthetische. De belangrijkste voordelen van deze techniek zijn dat het een snelle en gelijkmatige verdeling van essentiële tijmolië mogelijk maakt terwijl het vlees droogt en dat alle damp in lagere volumes kan worden gebruikt dan in het geval van vloeibare oliëtoepassing.

Het gebruik van deze methode kan inzicht geven in het verbeteren van de veiligheid en kwaliteit van gedroogd vlees en kan ook worden toegepast voor de behandeling van andere voedingsproducten tegen andere ongewenste micro-organismen. Over het algemeen zullen personen die nieuw zijn in deze methode worstelen omdat de druppelplaatmethoden die worden gebruikt om het aantal bacteriën te tellen, goed voorbereide platen en oefening vereisen. Verkrijg een korte lende van rundvlees bij een lokale slager en breng deze binnen 20 minuten na aankoop in een verzegelde zak op kamertemperatuur over naar het laboratorium.

In een laminaire veiligheidskast steriliseert u het buitenoppervlak van het rundvlees door 70% ethanol gedurende 10 seconden te sproeien vanuit een spuitfles. Gebruik vervolgens steriele techniek om het buitenoppervlak van het spierweefsel uit te snijden, zodat er geen ethanol op de voorbereiding achterblijft. Verpak vervolgens de spier in een verzegelde zak en bevries deze één dag bij min 18 graden Celsius.

De volgende dag ontdooit u het bevroren spierweefsel gedurende zes uur bij vier graden Celsius. Gebruik vervolgens in een laminaire veiligheidskast een vleessnijder om plakjes van 0,5 centimeter dik te maken. En verkleinde vervolgens het formaat van de plakjes tot rechthoekige monsters van 5x2,5 vierkante centimeter.

Voor opslag verpakt u de monsters in plastic zakken en bewaart u ze in de vriezer. Bereid in een laminaire veiligheidskast een gestandaardiseerd inoculum van E.coli ATCC 25922 voor om de vleesmonsters te inoculeren. Voor de inoculatie, rangschikt u ten minste vier monsters op een aluinfolieblad.

Laad vervolgens evenzoveel monsters op een tweede folieblad om als niet-geïncubeerde controles te dienen. Incubeer vervolgens elk monster door 400 microliter inoculum op één kant aan te brengen en het voorzichtig met een steriele celverspreider over het oppervlak te verspreiden. Laat de monsters vervolgens 10 minuten drogen.

Keer de monsters vervolgens om met pincetten en herhaal de procedure voor een totaal van 800 microliter inoculum per monster. Controleer hierna de inoculatie-efficiëntie van twee van de geïncubeerde rauw vleesmonsters en twee niet-geïncubeerde controles. Wikkel de rest van de monsters in folie.

Was de rauwe monsters gedurende 10 minuten bij kamertemperatuur met 140 tpm schudden in peptonwater. Na het wassen maakt u op een Microtiterplaat vijf 10-voudige seriële verdunningen van het badwater dat nu bacteriën bevat. Breng vervolgens vijf microliter druppels van elke verdunning aan met behulp van een meerkanaalspipet op platen met MacConkey-agar en plaattellingagar met behulp van de 6x6-druppelmethode.

De druppels moeten snel in het agar worden opgenomen. Zorg ervoor dat de plaattellingagar en MacConkey-agar platen goed zijn gedroogd om de druppels snel in het agar te laten opnemen voor het kweken van de verdunning door de 6x6 druppelmethode. Cultiveer vervolgens de geïncubeerde platen gedurende 24 uur bij 37 graden Celsius.

Bereid een vleesdroger voor voor de toepassing van essentiële tijmolië door damp. Week een 12x20 centimeter filterpapier met het gewenste volume TEO dat 79% thymol bevat. Neem nu de monsters die in de folie zijn achtergebleven en breng ze samen met het filterpapier over naar de voorbereide droogoven met TEO om zes uur te drogen.

Behandel parallel daaraan een controleset monsters in een vleesdroger zonder TEO. Na het drogen, om de overleving van E.coli op de met bacteriën behandelde monsters te beoordelen, herhaalt u dezelfde procedure van het wassen van de monsters in peptonwater met één alternering. In dit geval, na de 10 minuten schudden, brengt u de monsters in het bad over naar een incubator bij 37 graden Celsius voor een pre-verrijkingsbewerking van zes uur.

Na de pre-verrijking maakt u net als eerder vijf 10-voudige verdunningen van het badwater. Gebruik vervolgens de 6x6 druppelmethode om de verdunning op de detectieplaten te planten en incubeer de platen gedurende 24 uur. De volgende dag bepaalt u de kolonievormende eenheden per gram vlees.

Bekijk de platen op de aanwezigheid van mesofiele aërobe bacteriën die verschijnen als witte vlekken op plaattellingagar en tel de typische E.coli koloniën op de MacConkey-agar die verschijnen als rood tot donkerroze. Om de microbiologische gegevens te analyseren, converteert u de tellingen naar de logaritme van de CFU per gram en gebruikt u een variantenanalyse om de belangrijkste effecten van de behandeling te bepalen. Tijdens het droogproces wordt niet alle E.coli geëlimineerd.

Sommige bacteriën gaan een levensvatbare maar niet-cultuurbare toestand in. Dus wanneer vlees onjuist wordt bewaard bij hoge temperatuur en/of vochtigheid, kunnen deze bacteriën weer levensvatbaar worden en mogelijk consumenten schaden. Behandeling van het vlees met verschillende doses TEO tijdens het drogen zou E.coli volledig of gedeeltelijk kunnen elimineren.

Het aantal mesofiele aërobe bacteriën en enterische bacillen op vleesmonsters werd bepaald op PCA- en MCA-platen. Toen 1,5 milliliter TEO werd aangebracht, werd geen bacteriegroei waargenomen, zelfs niet na een zes uur durende pre-verrijkingsfase. Deze dosis komt overeen met 0,028 milliliter TEO-damp per liter lucht.

Na het bekijken van deze video, zou u een goed begrip moeten hebben van hoe u vlees kun