Name: Een Protocol voor het laboratorium huisvesting van Turquoise Killifish (Nothobranchius furzeri) (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-04-11T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 58 s
Description: Leer het kweken van turquoise killifish (Nothobranchius furzeri) in het laboratorium voor verouderingsonderzoek. Dit protocol omvat broedtankopzet, embryo-incubatie en voedingsprotocollen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Wij danken Alessandro Cellerino, Tyrone Genade, Anne Brunet, Sabrina Sharp, Mickie Powell, Simone Keil, Yumi Kim, Patrick Smith, Kai Mathar en alle leden van de lab Valenzano aan het Max Planck Instituut voor de biologie van de vergrijzing voor zijn bijdrage aan de verschillende aspecten van het huidige poolfish veehouderij protocol door de jaren heen.

<ol><li>Valenzano, D. R., Aboobaker, A., Seluanov, A., Gorbunova, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-canonical+aging+model+systems+and+why+we+need+them%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+J%22%5BJournal%5D)">Non-canonical aging model systems and why we need them.</a> EMBO J. 36 (8), 959-963 (2017).</li>
<li>Harel, I., Brunet, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+African+Turquoise+Killifish%3A+A+Model+for+Exploring+Vertebrate+Aging+and+Diseases+in+the+Fast+Lane%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Symp+Quant+Biol%22%5BJournal%5D)">The African Turquoise Killifish: A Model for Exploring Vertebrate Aging and Diseases in the Fast Lane.</a> Cold Spring Harb Symp Quant Biol. 80, 275-279 (2015).</li>
<li>Smith, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+life+span+by+the+gut+microbiota+in+the+short-lived+African+turquoise+killifish%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Regulation of life span by the gut microbiota in the short-lived African turquoise killifish.</a> Elife. 6, (2017).</li>
<li>Cellerino, A., Valenzano, D. R., Reichard, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+the+bush+to+the+bench%3A+the+annual+Nothobranchius+fishes+as+a+new+model+system+in+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Rev+Camb+Philos+Soc%22%5BJournal%5D)">From the bush to the bench: the annual Nothobranchius fishes as a new model system in biology.</a> Biol Rev Camb Philos Soc. 91 (2), 511-533 (2016).</li>
<li>Kim, Y., Nam, H. G., Valenzano, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+short-lived+African+turquoise+killifish%3A+an+emerging+experimental+model+for+ageing%5BTitle%5D)+AND+%22Dis+Model+Mech%22%5BJournal%5D)">The short-lived African turquoise killifish: an emerging experimental model for ageing.</a> Dis Model Mech. 9 (2), 115-129 (2016).</li>
<li>Blazek, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repeated+intraspecific+divergence+in+life+span+and+aging+of+African+annual+fishes+along+an+aridity+gradient%5BTitle%5D)+AND+%22Evolution%22%5BJournal%5D)">Repeated intraspecific divergence in life span and aging of African annual fishes along an aridity gradient.</a> Evolution. 71 (2), 386-402 (2017).</li>
<li>Terzibasi, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Large+differences+in+aging+phenotype+between+strains+of+the+short-lived+annual+fish+Nothobranchius+furzeri%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Large differences in aging phenotype between strains of the short-lived annual fish Nothobranchius furzeri.</a> PLoS One. 3 (12), e3866(2008).</li>
<li>Kirschner, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mapping+of+quantitative+trait+loci+controlling+lifespan+in+the+short-lived+fish+Nothobranchius+furzeri--a+new+vertebrate+model+for+age+research%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+Cell%22%5BJournal%5D)">Mapping of quantitative trait loci controlling lifespan in the short-lived fish Nothobranchius furzeri--a new vertebrate model for age research.</a> Aging Cell. 11 (2), 252-261 (2012).</li>
<li>Valenzano, D. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mapping+loci+associated+with+tail+color+and+sex+determination+in+the+short-lived+fish+Nothobranchius+furzeri%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Mapping loci associated with tail color and sex determination in the short-lived fish Nothobranchius furzeri.</a> Genetics. 183 (4), 1385-1395 (2009).</li>
<li>Reichwald, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insights+into+Sex+Chromosome+Evolution+and+Aging+from+the+Genome+of+a+Short-Lived+Fish%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Insights into Sex Chromosome Evolution and Aging from the Genome of a Short-Lived Fish.</a> Cell. 163 (6), 1527-1538 (2015).</li>
<li>Valenzano, D. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+African+Turquoise+Killifish+Genome+Provides+Insights+into+Evolution+and+Genetic+Architecture+of+Lifespan%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">The African Turquoise Killifish Genome Provides Insights into Evolution and Genetic Architecture of Lifespan.</a> Cell. 163 (6), 1539-1554 (2015).</li>
<li>Harel, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+platform+for+rapid+exploration+of+aging+and+diseases+in+a+naturally+short-lived+vertebrate%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">A platform for rapid exploration of aging and diseases in a naturally short-lived vertebrate.</a> Cell. 160 (5), 1013-1026 (2015).</li>
<li>Valenzano, D. R., Sharp, S., Brunet, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transposon-Mediated+Transgenesis+in+the+Short-Lived+African+Killifish+Nothobranchius+furzeri%2C+a+Vertebrate+Model+for+Aging%5BTitle%5D)+AND+%22G3%22%5BJournal%5D)">Transposon-Mediated Transgenesis in the Short-Lived African Killifish Nothobranchius furzeri, a Vertebrate Model for Aging.</a> G3. 1 (7), Bethesda. 531-538 (2011).</li>
<li>Harel, I., Valenzano, D. R., Brunet, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+genome+engineering+approaches+for+the+short-lived+African+turquoise+killifish%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Efficient genome engineering approaches for the short-lived African turquoise killifish.</a> Nat Protoc. 11 (10), 2010-2028 (2016).</li>
<li>Polacik, M., Blazek, R., Reichard, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laboratory+breeding+of+the+short-lived+annual+killifish+Nothobranchius+furzeri%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Laboratory breeding of the short-lived annual killifish Nothobranchius furzeri.</a> Nat Protoc. 11 (8), 1396-1413 (2016).</li>
<li>Avdesh, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regular+care+and+maintenance+of+a+zebrafish+%28Danio+rerio%29+laboratory%3A+an+introduction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Regular care and maintenance of a zebrafish (Danio rerio) laboratory: an introduction.</a> J Vis Exp. (69), e4196(2012).</li>
</ol>

Alle auteurs verklaren geen concurrerende financiële en niet-financiële belangen.

We beschrijven een protocol voor het laboratorium kweken van turquoise killifish, met inbegrip van de embryo's worden verzameld, incubatie, evenals volwassen vis huisvesting, fokken, en voeding. Ons protocol is specifiek gericht op de laboratoria die onderzoek gericht op de volwassen vis, in het bijzonder voor experimentele onderzoek naar veroudering en levensduur. Turquoise poolfish kan worden verhoogd op een standaard zebrafish faciliteit; belangrijke aspecten van poolfish veehouderij is echter afwijken van standaard zebrafish zorg16. Deze aanpassingen zijn vroege overgang van een Artemia enige voeding naar een dieet aangevuld met eiwitrijke bloed worm, evenals de specifieke stappen voor het embryo incubatie, bestaande uit een vloeibare en droge incubatie-fase.
Kritische stappen binnen het protocol bevatten scheepvaart embryo's binnen 8-30 ° C temperatuurbereik. In het geval van fok, vruchtbaarheid is afhankelijk van voeding van de frequentie en de kwaliteit van de levensmiddelen; Daarom raden we ten minste twee voedingen per dag per fokken tank te verhogen van de opbrengst van de embryo's (zie punt 5.6.). Tijdens het embryo bleken, embryo incubatie in de bleken oplossing niet te verlengen. Dit kan schade aan de ei chorion en verhoogde embryo sterfte veroorzaken. Wanneer het broeden van embryo's met methyleenblauw, niet verlengen incubatie van klaar-aan-hatch embryo's voor meer dan 2 weken als hun levensvatbaarheid drastisch zal worden verminderd. Broedeieren turquoise killifish, lage temperatuur van humic zuuroplossing verbetert broedeieren en volledige onderdompeling van de embryo's in de oplossing kunt gesynchroniseerde broedeieren. Onvoldoende beluchting tijdens de incubatie resultaten in hoge tarieven van FRJ niet kundig voor vullen van de blaas gas ("buik-slider" fenotype, zie opmerkingen in punt 5.1).
Beperking van het protocol voor de fokkerij omvat ook het gebruik van het zand substraat welke uitdagingen vormt voor gecentraliseerde filtratiesystemen en moeten worden vervangen door alternatieve methoden in de toekomst. Mogelijke alternatieven zou het gebruik van zebravis fokken van tanks. Embryo bleken kan grote fysisch-chemische veranderingen veroorzaken in het ei chorion die kan resulteren in gewijzigde chorion fysiologie en broedeieren van succes. Constante Gasbedwelming met behulp van embryo's methyleenblauw veroorzaken op lange termijn veranderingen in de Fysiologie van de volwassen vis. Verhogen van volwassen vis in individuele tanks voor overleving cohortstudies kan negatief beïnvloeden vis gedrag en gezondheid. Groepshuisvesting voor overleving cohortstudies voegt echter belangrijke storende factoren als gevolg van de invoering van sociale dominantie en mannelijke gebieden, wat leidt tot strikte sociale hiërarchieën. Daarom beoordelen we dat isolement van mannelijke vis voor overleving studies een redelijk compromis is. Voeding laboratorium poolfish kolonies met levend voer uit niet-gecontroleerde bronnen toevoegen een risico voor externe verontreinigingen van parasieten en potentieel pathogene microbiële gemeenschappen. In de toekomst moet een ad hoc-steriele visvoer worden ontwikkeld.
Toekomstige verbeteringen aan dit protocol zal zich richten op een gecontroleerde, niet-live dieet, dat nog steeds leidt tot voltooiing van de seksuele rijping binnen 3-4 weken. Kortom biedt ons protocol toegankelijkheid van turquoise poolfish laboratorium kweken voor een brede wetenschappelijke gemeenschap.

Gezien hun korte levensduur en snelle levenscyclus, groeien turquoise poolfish snel als een veelbelovende nieuwe model-organisme in biologie1,2,3. Deze soort wordt gekenmerkt door een unieke life cycle voor een teleost, bestaande uit embryonale diapauze, snelle seksuele rijping en een langere levensduur van de post-reproductive fase4,5. Recent werk heeft bijgedragen aan het ophelderen van de biologie van deze soorten in gevangenschap zowel in het wild6,-7. Turquoise poolfish leven in seizoensgebonden verse waterlichamen die vorm tijdens het regenseizoen in de Afrikaanse savanne in Zimbabwe en Mozambique. Tijdens het droge seizoen overleven embryo's in de droge modder in de afwezigheid van water op grond van een stress-bestendig leven stadium genoemd diapauze.
Genetische kaarten voor deze soort geweest gegenereerde8,9, en onlangs hun genoom geweest gesequenceerd en gemonteerd10,11. Verschillende ingeteelde laboratorium vis stammen zijn ontwikkeld, en Transgenese en genoom bewerken via CRISPR/Cas9 zijn beschikbaar in deze soort, feitelijke bevordering van turquoise poolfish als een concurrerende laboratorium gewervelde modelorganisme geworden 12,13,14.
Hoewel een laboratorium protocol reeds gepubliceerd voor deze soorten15, in het huidige protocol ontwikkelen we een uitgebreide lijst van experimenteel laboratorium richtlijnen die specifiek gericht zijn op studies die veroudering en overleving onderzoeken. Dit protocol kan onderzoekers al vertrouwd met de zebravis en medaka veeteelt worden berijmd in turquoise poolfish veehouderij door vaststelling van een minimum aantal belangrijke aanpassingen. Op hetzelfde moment biedt dit protocol onderzoekers zonder voorafgaande ervaring in vis veehouderij met de essentiële instrumenten te verhogen van een bloeiende turquoise poolfish kolonie.

```html
<table><tbody><tr><td>Probe calibration buffer solution pH=7.0</td><td>Roth</td><td>A518.1</td><td>1L buffer solution pH=7.0 to calibrate water system pH-electrode</td></tr><tr><td>Probe calibration buffer solution pH=4.0</td><td>Roth</td><td>P712.1</td><td>1L buffer solution pH=4.0 to calibrate water system pH-electrode</td></tr><tr><td>Conductivity standard</td><td>VWR</td><td>83607.260</td><td>500 mL Conductivity standard 1,413 uS/cm to calibrate water system conductivity-electrode</td></tr><tr><td>Easy Strips Test 6in1</td><td>JBL</td><td>2533900</td><td>Test strips for determination chlorine values of system water</td></tr><tr><td>Ammonia Test</td><td>JBL</td><td>2536500</td><td>Test to determine ammonia content of system water</td></tr><tr><td>Red Sea Salt</td><td>Red Sea</td><td></td><td>22 kg bucket</td></tr><tr><td>Sodium hydrogen carbonate</td><td>VWR</td><td>27780.360</td><td></td></tr><tr><td>Humic acid</td><td>Sigma- Aldrich</td><td>53680-50G</td><td></td></tr><tr><td>New HUFA Artemia enrichment</td><td>ZM Systems UK</td><td></td><td>75g bottle</td></tr><tr><td>Methylene blue</td><td>Roth</td><td>AE64.1</td><td></td></tr><tr><td>Hydrogen peroxide solution</td><td>Sigma- Aldrich</td><td>31642-1L</td><td>30% (w/w)</td></tr><tr><td>Coconut fiber</td><td>Dragon</td><td>ZCS010</td><td></td></tr><tr><td>Whatman paper</td><td>GE healthcare</td><td>3030-690</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol pure</td><td>VWR</td><td>20821.467</td><td>100%</td></tr><tr><td>Silica sand</td><td>local pet shop</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Artemia Eggs Premium Grade</td><td>Sanders</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Bloodworm</td><td>local distributor</td><td></td><td>Poseidon Aquakultur Germany</td></tr><tr><td>dNTPs solution mix</td><td>Biolabs</td><td>N04472</td><td>10mM</td></tr><tr><td>Taq DNA polymerase</td><td>Invitrogen</td><td>18038-042</td><td>5U/uL</td></tr><tr><td>PCR 10x Buffer</td><td>Invitrogen</td><td>18038-042</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2</td><td>Invitrogen</td><td>18038-042</td><td>50mM</td></tr><tr><td>NaOH</td><td>Sigma- Aldrich</td><td>S8045-500g</td><td>50mM</td></tr><tr><td>Tris-HCl, pH=8.0 solution</td><td>Sigma- Aldrich</td><td>T2694-1L</td><td>1M</td></tr><tr><td>HCl 37%</td><td>Sigma- Aldrich</td><td>H1758-500mL</td><td></td></tr><tr><td>Fish tanks</td><td>Aquaneering</td><td></td><td>volume: 0.8L, 2.8L, 9.5L; equipped with baffles, fry mesh and lids</td></tr><tr><td>Orbital shaker</td><td>VWR</td><td>89032-100</td><td>model 5000</td></tr><tr><td>Microbiological incubator</td><td>Thermo Scientific, Heratherm</td><td>50125882</td><td>model IMC18; for storage embryos in the liquid phase, set to t=27-28&deg;C</td></tr><tr><td>Cooling Incubator</td><td>Binder</td><td>9020-0209</td><td>model KT115; for storage embryos in the solid phase, set to t=27-28&deg;C</td></tr><tr><td>Hatching incubator</td><td>Thermo Scientific, Heratherm</td><td>51028114</td><td>model OGS180; for embryos hatching, set to t=27-28&deg;C</td></tr><tr><td>Stereomicroscope</td><td>Leica</td><td></td><td>model M80</td></tr><tr><td>Breeding sand/hatching boxes</td><td>Roth</td><td>1598.1</td><td>1000mL</td></tr><tr><td>Petri dish</td><td>Sarstedt</td><td>82.1473</td><td>92x16mm</td></tr><tr><td>50 mL Conical tube</td><td>Sarstedt</td><td>62.547.254</td><td></td></tr><tr><td>15 mL Conical tube</td><td>Sarstedt</td><td>62.554.002</td><td></td></tr><tr><td>Disposable Plastic Pasteur pipette</td><td>Roth</td><td>EA71.1</td><td>2mL; For fish feeding with bloodworms, or embryos selection cut off the tip to open 3-4mm diameter</td></tr><tr><td>Serological pipette</td><td>Sarstedt</td><td>86.1689.001</td><td>50mL</td></tr><tr><td>Syringe</td><td>Henke Sass Wolf</td><td>4100-000V0</td><td>10mL</td></tr><tr><td>Metal strainer</td><td></td><td></td><td>fineness &lt;1mm; for embryos collection</td></tr><tr><td>Tweezers</td><td>Dumont</td><td>0508-5/45-PO</td><td>type5/45; for embryos transfer</td></tr><tr><td>25 L Brine shrimp hatcher</td><td>Aquaneering</td><td>ZHBS25</td><td>main hatcher</td></tr><tr><td>500 mL Brine shrimp hatcher</td><td>JBL</td><td>6106100</td><td>model Artemio 1; backup hatcher</td></tr><tr><td>Narrow-mesh fish nets</td><td>JBL</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sand beaker</td><td>VWR</td><td>BURK7102-5000</td><td>5000mL</td></tr><tr><td>Brine shrimp separation beaker</td><td>VWR</td><td>BURK7102-2000</td><td>2000mL</td></tr><tr><td>Plastic zipper bag</td><td>Roth</td><td>P279.2</td><td>for dead fish storage</td></tr><tr><td>Pipetboy</td><td>Integra</td><td>155000</td><td>model Pipetboy acu2</td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>P-Lab</td><td>P701605</td><td></td></tr><tr><td>Air tubing</td><td>www.zajac.de</td><td>AQ380</td><td>4-6 mm diameter</td></tr><tr><td>1 L Glass bottle</td><td>VWR</td><td>215-1595</td><td></td></tr><tr><td>2 L Glass bottle</td><td>VWR</td><td>215-1596</td><td></td></tr><tr><td>500 mL Squeeze bottle</td><td>Roth</td><td>K665.1</td><td>for fish feeding with brine shrimp</td></tr><tr><td>120-&#956;m brine shrimp strainer</td><td>Florida Aqua Farms</td><td>BB-PC2</td><td>for brine shrimp/bloodworm collection</td></tr><tr><td>Finish filter socks</td><td>Aquaneering</td><td>MFVB025C</td><td>25-&#956;m</td></tr><tr><td>Central filtration fish housing system</td><td></td><td></td><td>Aquaneering, Techniplast, Aquatic Habitats, Aqua Schwarz</td></tr></tbody></table>
```

een protocol voor het laboratorium huisvesting van turquoise killifish (nothobranchius furzeri)

A Protocol for Laboratory Housing of Turquoise Killifish (Nothobranchius furzeri)

De ontwikkeling van veehouderijpraktijken in niet-model laboratorium vis voor experimentele doeleinden gebruikte heeft sterk geprofiteerd van de oprichting van referentie vis modelsystemen, zoals zebravis en medaka. In de afgelopen jaren is een opkomende vis – de turquoise poolfish (Nothobranchius furzeri)-goedgekeurd door een groeiend aantal onderzoeksgroepen op het gebied van biologie van veroudering en ecologie. Met een captive levensduur van 4-8 maanden, deze soort is de massiever gewervelde opgegroeid in gevangenschap en maakt van de wetenschappelijke gemeenschap test – in een korte tijd – experimentele interventies die tot wijzigingen van het groeitempo van de veroudering en levensverwachting leiden kunnen. Gezien de unieke biologie van deze soort, gekenmerkt door embryonale diapauze, explosieve seksuele rijping, gemarkeerd morfologische en gedragsmatige seksueel dimorfisme- en hun volwassen relatief korte levensduur - ad hoc veehouderij praktijken in dringende zijn vraag. Dit protocol rapporteert een reeks belangrijke veehouderij maatregelen waarmee optimale turquoise poolfish laboratorium zorg, waardoor de wetenschappelijke gemeenschap te nemen van deze soort als een dierlijk model van krachtige laboratorium.

Turquoise poolfish goede veehouderij resulteert in mediane overleving variërend tussen 12-18 weken in de GRZ stam (bijvoorbeeld figuur 4A). Variaties van de mediane overleving is afhankelijk van dieet, voeding van de frequentie, en woonomstandigheden van de temperatuur. Arme veehouderij resultaten in overleving curven presenteren gestegen vervroegde sterfte en repetitieve, plotselinge druppels overleving doorheen de tijd, gekenmerkt door meerdere buigpunten (figuur 4B).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57073/57073fig1.jpg"> Figuur 1: vertegenwoordiger embryonale ontwikkelingsstadia met respectieve incubatie-substraat. (A) vers verzamelde embryo's, geïncubeerd in methyleenblauwoplossing in de incubator bij 28 ° C. (B) embryo's klaar om te worden overgebracht naar solide medium, filteren of papier of kokos vezel. (C) embryo's klaar om te worden uitgebroed, typische gouden irissen weergeven. De schaal bar bedraagt tot 1 mm. <a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/57073/57073fig1large.jpg" target="_blank">Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57073/57073fig2.jpg"> Figuur 2: stadia van turquoise poolfish post broedeieren ontwikkeling. <a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/57073/57073fig2large.jpg" target="_blank">Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57073/57073fig3.jpg"> Figuur 3: vertegenwoordiger vis ID tag voor vis uit vanaf fase 3. <a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/57073/57073fig3large.jpg" target="_blank">Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57073/57073fig4.jpg"> Figuur 4: vertegenwoordiger overleving curve voor 70 mannelijke turquoise poolfish. (A) typische overleving curve voor turquoise poolfish laboratorium-aan de orde gesteld. (B) vergelijking voor overleving curves verkregen vis verhoogd onder omstandigheden van de optimale veehouderij (zwart) en slechte veehouderij (rood en blauw). De rode horizontale stippellijn geeft 50% overleving, snijdende overleving curve op gemiddelde levensduur (aangegeven op de x-as). <a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/57073/57073fig4large.jpg" target="_blank">Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>ID</td>
			<td colspan="2">Voorwaartse primer</td>
			<td colspan="2">Omgekeerde primer</td>
			<td>Groottewaaier (bp)</td>
		</tr>
<tr>
<td>* NfuSU0007</td>
			<td colspan="2">GGCTAAGCCTTGCTGACAGA</td>
			<td colspan="2">CAGGGAGCTGAAAACCTCAG</td>
			<td>166 - 214</td>
		</tr>
<tr>
<td>* NfuSU0010</td>
			<td colspan="2">CGCAGTCTGATCAAATCGTGT</td>
			<td colspan="2">TGTTTGAAGGTTCACATTCATTATC</td>
			<td>220 - 272</td>
		</tr>
<tr>
<td>NfuSU0016</td>
			<td colspan="2">CATGGCTAAACCGTGATGAA</td>
			<td colspan="2">GAAGGACGCCAGCTATGAAG</td>
			<td>209 - 240</td>
		</tr>
<tr>
<td>NfuSU0022</td>
			<td colspan="2">AACACAGCTCTCGTAAGGAGGTA</td>
			<td colspan="2">TTCAGACTTGTCTTACTACCATGTTT</td>
			<td>198 - 238</td>
		</tr>
<tr>
<td>NfuSU0027</td>
			<td colspan="2">TCCAGCTGAATCGGTAATGA</td>
			<td colspan="2">AAACTCGAGGGTGCAATCTG</td>
			<td>164 - 226</td>
		</tr>
<tr>
<td>NfuSU0049</td>
			<td colspan="2">CTGGACAAAGTGCCAATCAC</td>
			<td colspan="2">CTCCCACAGTCCCAAAACAT</td>
			<td>196 - 197</td>
		</tr>
<tr>
<td>NfuSU0050</td>
			<td colspan="2">CCAGAATGAACAATACTCAGATCAA</td>
			<td colspan="2">GCAGCTTAGTTTAATGATATCACAATG</td>
			<td>252 - 295</td>
		</tr>
<tr>
<td>NfuSU0060</td>
			<td colspan="2">CTAGCCACTCCCCTGGTTTA</td>
			<td colspan="2">CCGTCACGATGTGCTGATAC</td>
			<td>216 - 248</td>
		</tr>
<tr>
<td>NfuFLI0030</td>
			<td colspan="2">CAGAAGCTAAAGGCCAGACG</td>
			<td colspan="2">GGGAAACAATAGGGAACCAC</td>
			<td>174 - 205</td>
		</tr>
<tr>
<td>* NfuFLI0091</td>
			<td colspan="2">ACGCTGACTCTACCCAGTC</td>
			<td colspan="2">CTGCCTGCTACTGACAATG</td>
			<td>355 - 373</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="6">* - sex bepaling markeringen</td>
		</tr>
</tbody></table>Tabel 1: Genotypering inleidingen voor identificatie van de stam.

Laboratorium behuizing van turkoois poolfish kan worden opgeschaald naar huis en duizenden afzonderlijke vissen efficiënt te verhogen in een gecentraliseerde water filtratie-systeem, met dezelfde infrastructuur gebruikt voor standaard zebrafish faciliteiten. Hier detail we een aantal gestandaardiseerde procedures waarmee efficiënte poolfish onderhoud.

Een Protocol voor het laboratorium huisvesting van Turquoise Killifish (Nothobranchius furzeri)

The development of husbandry practices in non-model laboratory fish used for experimental purposes has greatly benefited from the establishment of ...

Het algemene doel van dit protocol is om met succes een laboratoriumkolonie van turkoois killivisjes op te voeden om veroudering en leeftijdsgebonden ziekten op een snelle en snel doorvoerende manier te bestuderen. Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van belangrijke vragen op het gebied van veroudering, zoals of enkele genmutaties of omgevingsinterventies het verouderingsproces bij gewervelde soorten kunnen moduleren. Het grote voordeel van deze techniek is dat door het volgen van onze basisprotocollen, verschillende laboratoria nu experimenten kunnen uitvoeren met turkoois killivisjes.Over het algemeen zullen personen die nieuw zijn met deze methode worstelen, aangezien het houden van killivisjes enkele unieke kenmerken heeft. Bijvoorbeeld, embryo's worden op een droog substraat grootgebracht voorafgaand aan het uitkomen, wat heel anders is dan canonieke vismodellen zoals zebravissen. Om te beginnen, zet 9,5 liter foktanks op met elk een vijf weken oude mannetje en twee zes tot zeven weken oude vrouwtjes.Vul vervolgens een plastic bak met geautoclaveerde zand ongeveer twee tot drie centimeter diep en plaats de zandbak in het midden van de foktank. Laat de turkoois killivisjes continu paren en oogst embryo's eens per week voor embryo-incubatie. Om eencellig stadium embryo's te oogsten voor injectie en het genereren van transgene lijnen, zet een foktank op met één mannetje en twee vrouwtjes zoals net gedemonstreerd.Twee dagen voorafgaand aan de embryo-verzameling, zet het mannetje in een individuele tank en houd het in zichtcontact met de volwassen vrouwtjes. Op de dag van verzameling, voeg het mannetje en een zandbak toe aan de foktank en laat de vissen twee uur paaien. Na het paaien en het verwijderen van de zandbak uit de tank, leeg de zandbak in een zeef en spoel het met systeemwater.Dompel vervolgens de zeef gedeeltelijk in systeemwater en slinger het zachtjes zodat de embryo's zich in het midden groeperen. Gebruik een twee milliliter Pasteur-pipet om de embryo's te verzamelen en breng ze over in een 90 millimeter petrischaal met ongeveer 40 milliliter systeemwater. Inspecteer de embryo's in de petrischaal onder een lichtmicroscoop en verwijder degenen met een gescheurde chorion en tekenen van schade.Na het bleken van de embryo's volgens het tekstprotocol, inspecteer en verwijder eventuele dode embryo's die blauw zouden worden gekleurd. Zodra de embryo's zijn toegestaan om te incuberen in verse methyleenblauw oplossing, controleer of de ontwikkelde embryo's zichtbare zwarte ogen hebben. Gebruik vervolgens een wegwerp Pasteur-pipet of fijne gebogen pincet om embryo's over te brengen naar een filterpapierplaat.Bewaar onontwikkelde embryo's in methyleenblauw en monitor ze dagelijks. Zodra zwarte ogen zijn ontwikkeld, breng ze over naar vast substraat medium. Verspreid de embryo's met pincet ongeveer vijf millimeter uit elkaar tot 100 embryo's per 90 millimeter plaat.Gebruik vervolgens paraffine om de schaal te verzegelen en incubeer de embryo's bij 28 graden Celsius gedurende twee tot drie weken totdat ze volledig ontwikkelde gouden irissen hebben en klaar zijn voor het uitkomen. Voor langdurige opslag tot één jaar, volgend op incubatie in methyleenblauw oplossing gedurende drie dagen, zet embryo's over naar vast substraat medium platen zoals zojuist gedemonstreerd en incubeer ze bij 17 graden Celsius. Om de vissen uit te komen, gebruik fijne gebogen pincet om voorzichtig 50 tot 100 ontwikkelde embryo's over te brengen naar de uitkomstbox en dompel ze volledig onder in humuszuur oplossing niet dieper dan twee centimeter bij vier graden Celsius.Een kritieke stap in dit protocol is het uitkomen van killivisjes embryo's, wat wordt bereikt door embryo's die zijn geïncubeerd op een droog substraat over te brengen naar een uitkomoplossing die humuszuur bevat, voorzien van voldoende beluchting. Bedek de uitkomstbox met een deksel en incubeer deze bij 28 graden Celsius in een uitkomst incubator. Om voldoende beluchting te leveren, sluit de box aan op een luchttoevoer met slangen.Om adequate waterkwaliteit in de uitkomstbox te behouden, eenmaal per dag vanaf de dag na het uitkomen, vul de box aan met een een-op-een verhouding van geautoclaveerd systeemwater waarbij een einddiepte van twee centimeter wordt gehandhaafd. Breng onuitgekomen embryo's terug naar het vast substraat en probeer een week later te laten uitkomen. Om juveniele en volwassen vissen te kweken vijf dagen na het uitkomen, verplaats de juvenielen naar het waterrecirculatiesysteem door wegwerp plastic pipetten of een plastic lepel te gebruiken om voorzichtig vijf juvenielen per 0,8 liter tank uitgerust met een 400 micrometer kuitgaas over te brengen.Op 14 dagen leeftijd, breng juveniele vissen over naar een 2,8 liter tank uitgerust met een 850 micrometer kuitgaas. Vanaf dit punt verder, label elke tank met een vis ID. Voor overlevingsonderzoek, huisvest elke vis individueel in een enkele tank. Vissen die worden grootgebracht voor overlevingsonderzoek worden ook individueel gehuisvest in een 2,8 liter tank.Voor de volgende zeven dagen, voer juvenielen twee keer per dag met vijf milliliter pekelkreeftjes aangevuld met een tot drie levende bloedwormen. Op vier weken leeftijd, voer elke vis twee keer per dag pekelkreeftjes en een milliliter bloedwormen. In dit stadium, zorg ervoor dat de vis volledige seksuele rijpheid bereikt door te controleren op de aanwezigheid van grote dorsale, anale en caudale vinnen met tekenen van kleuring bij mannetjes en ronde buiken vol eieren bij vrouwtjes.Hier getoond is een representatieve overlevingscurve voor 70 mannelijke turkoois killivisjes. Goede huisvesting resulteert in mediane overleving variërend van 12 tot 28 weken in de GRZ-stam. Variaties in mediane overleving zijn afhankelijk van dieet, voerfrequentie en huisvestingstemperatuursomstandigheden.De overlevingscurve voor vissen die onder slechte huisvesting zijn grootgebracht, toont een toename van vroege sterfte en herha

a-protocol-for-laboratory-housing-turquoise-killifish-nothobranchius

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Dit protocol beschrijft regelmatig onderhoud en zorg aan optimale omstandigheden voor zebravis veeteelt te behouden. De video illustreert het protocol dat voor systeem onderhoud, regelmatige huisvesting, voeding, fokkerij, en het verhogen van de zebravis larven.

Regelmatige verzorging en onderhoud van een zebravis (<em&gt; Danio rerio</em&gt;) Laboratorium: Een inleiding

Een Zebrafish-faciliteit die geschikt is voor fokken en in vivo onderzoek wordt op een eenvoudige en betaalbare manier gebouwd. Onderhoud is minimaal. Deze faciliteit is ideaal voor betrokkenheid van studenten en onafhankelijk onderzoek.

Bouw van een betaalbare en makkelijk te bouwen zebravis Facility

Deze studie omvat werkwijzen effecten op een modelvis gastheer na verandering van de huid en darmen microbiome gemeenschappen compositie van een antibioticum onthullen.

Onderzoek van Host Phenotypes in<em&gt; Gambusia affinis</em&gt; Na een behandeling met antibiotica

Dit protocol beschrijft het gebruik van sump swabs en slib analyse van zebravis systemen, die tot verhoogde detectie in vergelijking met het exclusieve gebruik van sentinels leidt te detecteren ziekteverwekkers zoals Aeromonas hydrophila, Mycobacterium spp. en  Pseudocapillaria tomentosa. Een systeem om te controleren van P. tomentosa eieren in quarantaine wordt ook voorgesteld.

Milieu Screening van Aeromonas hydrophila, Mycobacterium spp. en Pseudocapillaria tomentosa in Zebrafish systemen

In dit protocol, fluorescently geëtiketteerde T. cruzi werden ingespoten in transparante zebrafish larven en de beweeglijkheid van de parasiet werd waargenomen in vivo met licht blad fluorescentie microscopie.

Oprichting van larvale zebravis als Model van een dier te onderzoeken Trypanosoma cruzi Motility In Vivo

In dit werk beschrijven we een acute, chronische en multigeneratie bioassay om te bestuderen van de effecten van gemeenschappelijke en gecombineerde stressoren op de Turquoise poolfish Nothobranchius furzeri. Dit protocol is ontworpen om te bestuderen levensgeschiedenis eigenschappen (sterfte, groei, vruchtbaarheid, gewicht) en kritieke thermische maximum.

Protocol voor Acute en chronische ecotoxiciteit testen van de Turquoise Killifish Nothobranchius furzeri

In dit protocol, we laten zien hoe fokken Astyanax mexicanus volwassenen, verhogen van de larven en geheel-mount immunohistochemistry op post larvale vissen te vergelijken van de fenotypen van oppervlak en grot morphotypes uitvoeren.

De Mexicaanse Tetra Astyanax mexicanus in te zamelen voor de analyse van de fenotypen van de Post-larval en geheel-mount Immunohistochemistry

Een fundamenteel aspect van de beoordeling van het welzijn van dieren in gevangenschap is de vraag of de dieren hebben wat ze willen. Hier presenteren we een protocol om de voorkeur van de behuizing in de zebravis(Danio rerio)te bepalen met betrekking tot de aanwezigheid/afwezigheid van milieuverrijking en toegang tot het stromen van water.

Een gestandaardiseerd protocol voor preferentietesten om het welzijn van vissen te beoordelen

Hier presenteren we een protocol om kernen te isoleren uit de hersenen van het kortlevende gewervelde model Nothobranchius furzeri voor downstream toepassingen zoals single-nucleus RNA sequencing of single-nucleus assay voor transposase-toegankelijk chromatine met sequencing (ATAC-seq).

Zachte isolatie van kernen uit het hersenweefsel van volwassen Afrikaanse turquoise killivissen, een natuurlijk kortlevend model voor verouderingsonderzoek

Hier presenteren we een nieuw, eenvoudig te bouwen en goedkope protocol voor het recirculeren van zebravishuizen.

Een speciaal gebouwd recirculerend zebravishuissysteem

Leer het kweken van turquoise killifish (Nothobranchius furzeri) in het laboratorium voor verouderingsonderzoek. Dit protocol omvat broedtankopzet, embryo-incubatie en voedingsprotocollen.

Een Protocol voor het laboratorium huisvesting van Turquoise Killifish (Nothobranchius furzeri)

Meer video's verkennen